sop full

Wawasan

Kementerian kesihatan Malaysia

Malaysia akan menjadi sebuah negara terdiri daripada individu,keluarga dan masyarakat yang

sihat melalui kesihatan yang adil dan saksama, cekap, mampu disedia dan

diperolehi,berteknologi sesuai, serasi pelenggan dan bersesuaian dengan persekitaran. Sistem

ini juga akan mengutamakan kualiti, inovasi, promosi kesihatan, hormat kepada individu dan

penyertaan masyarakat ke arah peningkatan mutu kehidupan.

Misi

Kementerian Kesihatan Malaysia

Mewujudkan penglibatan dan penyertaan masyarakat untuk kesihatan bagi merangsang dan

memudahkan rakyat untuk :

Mencapai sepenuhnya kemampuan kesihatan mereka

Menghargai kesihatan sebagai asset yang bernilai

Mengambil langkah positif meningkatkan lagi dan mengekalkan status kesihatan bagi

menikmati kehidupan yang lebih bermutu.

Objektif

Kementerian Kesihatan Malaysia

Untuk membantu seseorang individu itu mencapai dan mengekalkan suatu taraf

kesihatan bagi membolehkannya menjalankan kehidupan ekonomi dan sosial yang

produktif dan dengan memberikan tumpuan kepada golongan yang kurang bernasib

baik. Menyediakan perkhidmatan kesihatan asas untuk rakyat bagi mewujudkan

kehidupan yang sihat dan bersih.

Wawasan

3

Jabatan Kesihatan Wilayah Persekutuan Labuan

Kami akan menjadi pusat penggalakkan kesihatan dan perawatan perubatan yang

utama melalui sistem penjagaan dan pencegahan yang adil dan saksama, cekap dan

tersedia dalam teknologi yang serasi pelanggan mempratikkan sistem yang

mengutamakan kualiti dan hormat kepada kemuliaan insan ke arah peningkatan mutu

kehidupan.

Misi


Merangsang dan memudahakan rakyat mengekalkan status kesihatan mereka untuk

menikmati kehidupan yang lebih bermutu dan produktif dari segi sosio-ekonomi mereka.

Objektif


Menyokong objektif kementerian kesihatan Malaysia dengan menyediakan

perkhidmatan berbentuk penggalakkan, pencegahan, perawatan dan pemulihan yang

cekap, berkesan dan serasi pelanggan.

Wawasan

Hospital Wilayah Persekutuan Labuan

Hospital Labuan akan menjadi perawatan perubatan yang utama melalui sistem

perubatan dan kesihatan yang adil dan saksam, cekap dan tersedia dengan teknologi

yang serasi pelanggan mempraktikkan system yang mengutamakan kualiti dan hormat

kepada kemuliaan insan ke arah peningkatan mutu kehidupan.

Misi

4


Merangsang dan memudahkan rakyat mengekalkan status kesihatan mereka untuk

menikmati kehidupan yang lebih bermutu dan produktif dari segi sosio-ekonomi mereka.

Objektif


Menyediakan kemudahan rawatan perubatan yang cekap, cepat dan berkesan serta

berfokuskan pelanggan supaya pelanggan dapat pulih dengan segera dan dapat

menjalankan aktiviti kehidupan seharian dengan sempurna.

Visi

Unit Makmal

Menyediakan perkhidmatan Patologi yang cekap, tepat dan berinovasi berlandaskan

system kualiti yang memenuhi kepuasan pelanggan.

Misi

Unit Makmal

Perkhidmatan Patologi akan menjadi satu perkhidmatan yang cemerlang menggunakan

teknologi yang sesuai, terkini dengan anggota yang berilmu, berjiwa murni, peka

terhadap keperluan pelanggan berteraskan budaya kualiti dan kerja berpasukan serta

profesionalisme demi kecemerlangan rawatan pesakit.

5

PENGENALAN HOSPITAL

Hospital Labuan mula dibina pada 10 Oktober 1991. Ianya terletak di Pulau Labuan

berhampiran dengan Negeri Sabah dengan keluasan 12.047 hektar persegi dan keluasan tapak

bangunan kira-kira 31,969 meter persegi. Ciri-ciri binaan tidak seperti hospital-hospital lain

kerana bangunannya berkonsep nukleus seperti rajah 1.0. Kedudukannya adalah 6 km dari

pusat bandar Wilayah Persekutuan Labuan dan lokasinya betul-betul ditengah Pulau Labuan.

6

Mula beroperasi pada 10 Jun 1995 dan telah dirasmikan oleh Bekas Perdana Menteri Tun Dr.

Mahathir bin Mohamad pada 29 Ogos 1996 dengan mempunyai kapasiti 109 katil. Hospital

Labuan merupakan hospital dengan pakar iaitu Pakar Perubatan, Pakar Bedah Am dan Pakar

Bius. Pakar-pakar untuk disiplin seperti ENT,Paediatrik, Psikiatrik dan sebagainya adalah dari

Hospital Queen Elizabeth, Hospital Likas atau Hospital Mesra Bukit Padang, Kota Kinabalu,

Sabah. Kesemua pakar menjalankan klinik di Klinik Pakar. (Klinik Pakar 1,2,3 dan 4).

7

SEJARAH AWAL PENUBUHAN INDUSTRI

Latarbelakang

Labuan adalah sebuah pulau yang indah terletak di Malaysia Timur dibawah pentadbiran

Wilayah Persekutuan. Kedudukannya berhampiran Negeri Sabah kira-kira 17 kilometer dari

daerah Menumbok, tempat perhubungan yang paling hampir serta berhampiran dengan Negara

Brunei Darussalam di sebelah barat laut Mempunyai keluasan 87.52 km persegi. Keadaan

permukaan buminya adalah rata tetapi sedikit sebanyak berbukit-bukit di sebelah utara dan

barat serta mempunyai pantai yang landai. Jarak bibir pantai Labuan dengan tanah besar

Borneo.

Sejarah Hospital Lama

Dalam tahun 1940-an Labuan masih lagi dibawah pemerintahan "The Straits Settlement".

Purata bilangan penduduknya hanya seramai kira-kira 8,000 orang sahaja. Pada mulanya

perkhidmatan perubatan cuma mempunyai empat buah khemah iaitu Kampung kerupang,

Kampung Layang-layangan, Hospital Lama dan Kampung Lajau yang mana di masa tersebut

kategori rawatannya adalah lebih merupakan bersifat ketenteraan. Perkhidmatan digelar

sebagai" North borneo Nursing Services"(NBNS).

Hospital lama kemudiannya didirikan selepas Perang Dunia Kedua iaitu dalam tahun 1946 oleh

kontraktor yang bernama Chin Kontraktor dengan jumlah katil (9Bed Strength) sebanyak 60

buah sahaja. Jumlah kakitangannya pula di antara 40 hingga 45 orang sahaja.

Rumah Sakit Labuan – 1947

8

Kategori kakitangan pada waktu itu diantaranya adalah terdiri daripada Pegawai Perubatan,

ketua Jururawat, Ketua Pembantu Hospital, pembantu Hospital Kanan Pembantu Hospital,

Jururawat Perbidanan,Tukang masak, Pemandu dan Atendan.

Mulai dari tarikh tersebut, Pentadbiran Hospital Lama mengalami berbagai-bagai perubahan

pengurusan di antaranya ialah British Borneo Corporation, British Military Administration dan

Colonial North Borneo sehinggalah diserahkan kepada pusat pentadbiran pusat selepas

kemerdekaan.

Sebilangan Kakitangan Hospital Labuan

Pegawai Perubatan "Pre-War" yang berakhir pada masa itu ialah Dr.On Kok Voo, Bahagian

Jururawat pula ialah Ketua Jururawat Yolander Sia, manakala Ketua Pembantu Perubatanialah

Dr.Abu Bakar diikuti oleh Mr.Lim See Loh dan Mr. Tan Kim Lee.

Latar Belakang

Unit Makmal & Tabung Darah

Unit makmal terbahagi kepada enam seksyen utama iaitu :

Patologi Kimia

9

Hematologi

Mikrobiologi Am

Tibi

Parasitologi

Kaunter

Setiap seksyen diselia oleh seorang Pegawai Sains (kecuali seksyen Hematologi dan

Parasitologi).

Seksyen Patologi Kimia Berfungsi menjalankan semua ujian-ujian kimia rutin seperti Liver

Function Test (LFT) dan ujian khas seperti ujian hormone dan tumor marker. Seksyen

Hematologi juga terbahagi kepada dua fungsi utama iaitu ujian rutin seperti Full Blood Count

(FBC) dan ujian tidak rutin seperti Peripheral Blood Film (PBF).

Seksyen Mikrobiologi merupakan seksyen terbesar di Makmal kerana mempunyai pelbagai sub-

pengkhususan yang berbeza. Mikrobiologi Am menjalankan Culture and Sensitivity Test (C&S)

bagi berbagai-bagai jenis smapel klinikal. Seksyen TB dan Parasitologi digabungkan buat masa

ini sebagai Mikroskopi dan mengkhusus kepada ujian-ujian Acid-fast Bacteria (AFB), parasit

darah terutamanya Malaria dan parasit usus. Hasil daripada polisi perkongsian hasil

kerja,Mikrobiologi juga dipertanggungjawabkan untuk menjalankan ujian-ujian klinikal STAT

seperti Urine FEME,Stool OB,Urine Pregnant Test dan sebagainya.

Seksyen kaunter merupakan satu usaha penambahbaikkan kepada perkhidmatan kaunter

Makmal sejak tahun 2009. Sebelum tahun 2009, kaunter Makmal hanya menyediakan

perkhidmatan pengambilan sampel pesakit luar. Dengan adanya kaunter dalaman, proses

penerimaan sampel pesakit dan pengedaran laporan makmal dapat dijalankan dengan lebih

sistemik.

Unit Tabung Darah yang menyediakan Perkhidmatan Transfusi merupakan unit yang baru

ditubuhkan di Hospital Labuan. Sungguhpun begitu,Perkhidmatan Transfusi telah lama wujud di

Hospital Labuan dimana ia ditawarkan melalui Seksyen Tabung Darah dibawah Unit Makmal.

Selaras dengan arahan penstrukutran semula (keputusan Mesyuarat JPPKK Bil 1/1997 dan

Kertas Dasar Mesyuarat Perancangan dan Pembangunan Kementerian kesihatan Bil 6/1997),

Unit Tabung Darah telah ditubuhkan pada tahun 2010. Walaubagaimanapun,Unit Tabung

Darah tidak terpisah sepenuhnya daripada Unit Makmal.

10

Perkhidmatan Transfusi diselaraskan diperingkat Hospital melalui Jawatankuasa Transfusi

darah. Jawatankuasa bertanggungjawab memastikan amalan transfuse yang selamat dan

bersesuaian di Hospital Labuan. Jawatankuasa diberi kuasa menetapkan polisi dan amalan

transfuse di Hospital Labuan.

Pengurusan dan operasi harian Unit Tabung Darah dijalankan oleh anggota Unit dan diketuai

oleh seorang Pegawai Y/M. Unit Tabung Darah terbahagi lagi kepada 3 seksyen utama iaitu

Seksyen Perolehan, Seksyen Saringan Dan Seksyen Bekalan.

Seksyen Perolehan Darah menjalankan 2 fungsi utama iaitu rekrutmen dan pengurusan

penderna. Seksyen ini bertanggungjawab memastikan bekalan darah yang mencukupi untuk

keperluan Hospital disamping menjaga keselamatan dan kebajikan penderma.

Seksyen Saringan turut dikenali sebagai Transfusion Microbiology Laboratory (TML). TML

bertanggungjawab menyaring semua darah penderma untuk memastikan bekalan daah bebas

bebas daripada penyakit berjangkit bawaan darah iaitu HIV, Hepatitis B, Hepatitis C dan Sifilis.

TML Hospital Labuan merupakan satu-satunya pusat saringan darah untuk Wilayah Persekutan

Labuan.

Seksyen Bekalan menjalankan operasi utama Perkhidmatan Transfusi iaitu pembekalan darah

dan komponen darah yang telah disaring untuk kegunaan wad pesakit dalam Hospital. Bekalan

darah yang disediakan termasuklah Whole Blood,Packed RBC,Platelet Concentrate (Whole

Blood / Apheresis). Fresh Frozen Plasma dan Cryoprecipitate.

11

MAKMAL TABUNG DARAH

12

PENGENALAN

Makmal tabung merupakan makmal yang terlibat dalam menguruskan beg darah bagi tujuan penyimpanan dan pengeluaran stok darah untuk pesakit.

Unit Tabung Darah yang menyediakan Perkhidmatan Transfusi merupakan unit yang

baru ditubuhkan di Hospital Labuan. Sungguhpun begitu,Perkhidmatan Transfusi telah lama

wujud di Hospital Labuan dimana ia ditawarkan melalui Seksyen Tabung Darah dibawah Unit

Makmal. Selaras dengan arahan penstrukutran semula (keputusan Mesyuarat JPPKK Bil

1/1997 dan Kertas Dasar Mesyuarat Perancangan dan Pembangunan Kementerian kesihatan

Bil 6/1997), Unit Tabung Darah telah ditubuhkan pada tahun 2010. Walaubagaimanapun,Unit

Tabung Darah tidak terpisah sepenuhnya daripada Unit Makmal.

Perkhidmatan Transfusi diselaraskan diperingkat Hospital melalui Jawatankuasa Transfusi

darah. Jawatankuasa bertanggungjawab memastikan amalan transfuse yang selamat dan

bersesuaian di Hospital Labuan. Jawatankuasa diberi kuasa menetapkan polisi dan amalan

transfuse di Hospital Labuan.

Pengurusan dan operasi harian Unit Tabung Darah dijalankan oleh anggota Unit dan diketuai

oleh seorang Pegawai Y/M. Unit Tabung Darah terbahagi lagi kepada 3 seksyen utama iaitu

Seksyen Perolehan, Seksyen Saringan Dan Seksyen Bekalan.

Seksyen Perolehan Darah menjalankan 2 fungsi utama iaitu rekrutmen dan pengurusan

penderna. Seksyen ini bertanggungjawab memastikan bekalan darah yang mencukupi untuk

keperluan Hospital disamping menjaga keselamatan dan kebajikan penderma.

Seksyen Saringan turut dikenali sebagai Transfusion Microbiology Laboratory (TML). TML

bertanggungjawab menyaring semua darah penderma untuk memastikan bekalan daah bebas

bebas daripada penyakit berjangkit bawaan darah iaitu HIV, Hepatitis B, Hepatitis C dan Sifilis.

TML Hospital Labuan merupakan satu-satunya pusat saringan darah untuk Wilayah Persekutan

Labuan.

Seksyen Bekalan menjalankan operasi utama Perkhidmatan Transfusi iaitu pembekalan darah

dan komponen darah yang telah disaring untuk kegunaan wad pesakit dalam Hospital. Bekalan

darah yang disediakan termasuklah Whole Blood,Packed RBC,Platelet Concentrate (Whole

Blood / Apheresis). Fresh Frozen Plasma dan Cryoprecipitate.

13

CARTA ORGANISASI

MAKMAL BLOOD BANK

14

Raiman LobunganJTMP U36

Siti Noor Aisyah Md Hussin Pegawai Sains C41

Abdul Azis Ag. Basar

JTMP U29

Rosnani PeliminJTMP U29

PENAKSIRAN HEMOGLOBIN

Penaksiran Hemoglobin Menggunakan Kuprum Sulfat

Peralatan yang diperlukan:

A. Radas : lanset pakai buang, swab alkohol, mikropipet, tips

B. Reagen : larutan kuprum sulfat

Objektif:

Menganggar paras hemoglobin penderma secara semikuantitatif, iaitu melebihi 12.5 g/dl atau

kurang dari 12.5 g/dl.

Prosedur:

1. Jari manis penderma dibersihkan dengan swab alkohol dan jari manis penderma dicucuk

dengan menggunakan lancet pakai buang.

2. Titisan darah pertama yang keluar dari jari yang dicucuk dilap.

3. Dengan menggunakan mikropipet dan tips, 50μL darah kapilari penderma diambil dan

darah tersebut dimasukkan ke dalam bekas berisi larutan kuprum sulfat.

4. Titisan darah yang dimasukkan ke dalam larutan kuprum sulfat diperhatikan.

Keputusan:

Sekiranya titisan darah penderma tenggelam di dasar bekas larutan kuprum sulfat dalam masa

kurang dari 10 saat, paras hemoglobin dianggarkan melebihi 12.5 g/dl. Namun sekiranya titisan

darah timbul atau berada di pertengahan larutan, maka paras hemoglobin dianggarkan kurang

dari 12.5 g/dl.

PENYEDIAAN AMPAIAN SEL A, B DAN O UNTUK PENGUMPULAN ABO SERUM

Penyediaan Ampaian Sel A, B, Dan O Untuk Pengumpulan ABO Serum

Peralatan atau bahan yang diperlukan:

A. Radas : serofuge, tabung uji 10x75mm, pipet pasteur

15

B. Reagen : sel A, B dan O yang diketahui, salin normal

Objektif:

Memastikan penyediaan ampaian sel A, B dan O boleh dipercayai dan mengurangkan

kesilapan.

Prosedur:

1. Pilih sel A, B dan O yang diketahui di mana tiada hemolisis atau kekeruhan pada

supernatan melalui pemerhatian secara kasar dan negatif bagi semua penyaringan

virologi.

2. Tiga tabung uji dilabel sebagai A, B dan O dan 1 ml sel padat ditambah.

3. Sel dicuci dalam setiap tiub dengan salin normal sebanyak tiga kali. Cara mencuci sel

adalah dengan sebatikan sel padat dengan salin normal dan diempar pada kelajuan 3000

selama 50 saat.

4. Tiga tabung uji baru dilabelkan dan labelkan dengan A, B dan O dan tambahkan setitik sel

darah padat dengan 19 titik salin normal untuk menghasilkan ampaian sel 5%.

MENGUJI ANTISERA ABO & RH (D) DENGAN ‘KNOWN CELLS’

Menguji antisera ABO & Rh (D) dengan ‘Known Cells’

Bahan dan Radas

1. Jubin

2. Kayu aplikator

3. Tiub

4. Pipet

5. pengempar

16

Reagen

1. Darah ‘Known Cells’

2. Antisera A

3. Antisera B

4. Antisera AB

5. Antigen D

Prinsip ujian

Prosedur ini telah dicadangkan bagi kegunaan reagen tersebut yang bertujuan untuk mengesan

agglutinasi langsung yang terhasil daripada sel darah merah dimana sel ini membawa antigen

yang spesifik dan juga kehadiran antibodi yang spesifik.

Kaedah ujian(Teknik Jubin)

1. Sediakan darah( known cells ) yang telah dikenalpasti kumpulan darahnya.

2. Titiskan 1 titik darah ‘known cells’ keatas jubin mengikut ruangan kumpulan iaitu A, B,

AB dan Anti-D.

3. Keluarkan antisera A, B, AB dan Anti-D.

4. Titiskan 1 titik bagi setiap antisera dan antigen D pada ruangan kumpulan tersebut.

5. Calitkan darah tersebut menggunakan kayu aplikator serta goyangkan jubin.

6. Perhatikan agglutinasi yang terhasil.

7. Catatkan pemerhatian.

Kaedah ujian(Teknik Tiub)

1. Sediakan darah(known cells) yang telah dikenalpasti kumpulan darahnya.

2. Sediakan 3 tiub yang berlabel darah A,B,AB dan anti-D.

3. Titiskan 1 titik darah ke dalam tiub yang berlabel dengan menggunakan pipet.

17

4. Keluarkan antisera A, B AB dan Antigen D.

5. Titiskan 1 titik antisera kedalam tiub tersebut dengan menggunakan pipet.

6. Empar pada 3000rpm dalam masa 15 saat.

7. Perhatikan angglutinasi yang terhasil.

8. Catatkan pemerhatian.

Interpretasi ujian

Antisera

Kump.

Darah

Antisera A Antisera B Antisera AB Antigen D

A + - - +

B - + - +

O - - - +

AB + + + +

PENGUMPULAN ABO PENUH DAN RHESUS-D MENGGUNAKAN KAEDAH JUBIN

Pengumpulan ABO Penuh Dan Rhesus-D Menggunakan Kaedah Jubin


A. Radas : jubin, kayu aplikator, pipet pasteur

B. Reagen : anti-A, anti-B, anti-AB, anti-D, sel A, sel B, sel O

Prinsip:

18

Bagi pengumpulan ABO dan Rhesus D langsung, kehadiran aglutinasi sel darah merah dengan

antisera yang diketahui menentukan kehadiran antigen yang melekat pada permukaan sel

darah merah. Sekiranya terdapat aglutinasi pada sel darah yang diuji ini menunjukkan

kehadiran antigen tertentu dan menentukan kumpulan ABO dan Rhesus D sel darah tersebut,

sama ada A+, B+, AB+ atau O+. Kehadiran aglutinasi ini dikesan dengan menggunakan kaedah

jubin.

Manakala bagi pengumpulan ABO tidak langsung pula, tindak balas serum pesakit dengan

reagen sel yang diketahui akan menghasilkan aglutinasi yang akan menentukan kehadiran

antibodi di dalam serum. Ini kerana badan manusia menghasilkan antibodi terhadap antigen

yang tidak dimiliki oleh individu. Oleh itu kumpulan darah ABO ditentukan berdasarkan

kehadiran antibodi yang menunjukkan jenis antigen yang tiada dalam badan manusia.

Objektif:

Menentukan kumpulan darah ABO dan Rhesus D bagi sampel darah pesakit.

Prosedur:

1. Bahagian jubin yang telah dilabelkan dengan ANTI-A, ANTI-B, ANTI-AB, CELL A, CELL

B, CELL O dan ANTI- D digunakan.

2. Satu titik antisera (anti-A, anti-B, anti-AB dan anti-D) dititiskan ke atas jubin mengikut

labelnya.

3. Satu titik ampaian sel (sel A, sel B dan sel O) dititiskan ke atas jubin berdasarkan label.

4. Satu titik darah pesakit dititiskan bagi pengumpulan ABO langsung dan Rhesus D, dan

satu titis serum pesakit (pastikan sel darah dan serum adalah dari pesakit yang sama)

dititiskan bagi pengumpulan ABO tidak langsung.

5. Campuran sel dan antisera serta campuran serum dan reagen sel disebatikan dengan

kayu aplikator sehingga membentuk syiling 5 sen.

6. Aglutinasi yang terbentuk diperhatikan dan direkodkan.

Keputusan:

Kehadiran aglutinasi : positif

Tiada aglutinasi : negatif

19

Keputusan pengumpulan ABO dan Rhesus D (pengumpulan langsung sahaja) adalah

berdasarkan jadual berikut :

Anti A Anti B Anti AB Anti-D Sel A Sel B Sel O Kumpulan

darah

+ 0 + + 0 + 0 A+

0 + + + + 0 0 B+

0 0 0 + + + 0 O+

+ + + + 0 0 0 AB+

PENGUMPULAN ABO DAN RHESUS-D PENUH DENGAN KAEDAH TIUB

Pengumpulan ABO Dan Rhesus-D Kaedah Tiub


A. Radas : serofuge, tiub kaca (10 x 75mm), pipet pasteur, bikar, rak tabung uji.

B. Reagen : anti-A, anti-B, anti-D, sel A, B dan O yang diketahui, salin normal.

Spesimen:

Sampel darah yang telah beku atau darah yang disimpan dalam tiub EDTA.

Prinsip:

Aglutinasi langsung sel darah merah dengan reagen tertentu menentukan kehadiran antigen

tertentu. secara umumnya, tiada aglutinasi menunjukkan ketidakhadiran antigen tersebut.

Kumpulan ABO dan rhesus D ditentukan dari corak reaksi dengan reagen yang diuji (anti-A,

anti-B dan anti-AB serta anti-D). Serum kebanyakan individu berusia lebih dari enam bulan

menghasilkan antibodi terhadap antigen ABO yang tidak dimiliki oleh individu berkenaan.

Pengumpulan serum, menggunakan sel A1, B dan O digunakan untuk mengesahkan keputusan

pengumpulan ABO sel.

Skop ujian:

20

Prosedur ini digunakan untuk semua protokol ujian yang memerlukan pengumpulan ABO dan

rhesus D.

Keadaan berjaga-jaga:

1. Tindak balas negatif palsu atau lemah di luar jangkaan mungkin berlaku apabila sampel

darah dengan subkumpulan A atau B ataupun sel kord merah daripada bayi baru lahir.

Tindak balas seperti ini juga boleh berlaku dengan sel yang telah disimpan dalam jangka

masa lama.

2. Pemboleh ubah ujian seperti teknik yang tidak betul, pengemparan atau pengemparan

yang salah, alat radas kaca yang tidak dibersihkan dengan betul dan bahan

terkontaminasi boleh mengakibatkan keputusan negative palsu atau positif palsu.

3. Anomaliti serological boleh berlaku seterusnya menyebabkan tindak balas di luar

jangkaan atau kepincangan pengumpulan ABO langsung dan tidak langsung.

Prosedur:

A. Pengumpulan ABO dan Rhesus D langsung

1. Ampaian sel 3 hingga 5% disediakan dalam salin normal.

2. Satu titik anti-A, anti-B, anti-AB dan anti-D ditambah ke tiub yang telah dilabelkan.

3. Setitik ampaian sel ditambah ke dalam tiub dan disebatikan.

4. Dimparkan pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat. Setiap tiub digoncang untuk

diperiksa aglutinasi. Agglutinasi diredkan dan keputusan dilaporkan.

B. Pengumpulan ABO serum/tidak langsung

1. Setitik serum atau plasma dimasukkan ke dalam tiub yang telah dilabelkan.

2. Setitik ampaian 2% sel A1, B dan O ditambah ke dalam tiub berdasarkan label.

3. Disebatikan dan diempar pada 3400 rpm selama 15 saat. Setiap tiub untuk digoncang

dan diperiksa aglutinasi. Agglutinasi digredkan dan keputusan dilapor.

Keputusan:

Kehadiran aglutinasi : positif

Tiada aglutinasi : negatif

Keputusan pengumpulan ABO dan Rhesus D (pengumpulan langsung sahaja) adalah

berdasarkan jadual berikut :

21

Anti A Anti B Anti AB Anti-D Sel A Sel B Sel O Kumpulan

darah

+ 0 + + 0 + 0 A+

0 + + + + 0 0 B+

0 0 0 + + + 0 O+

+ + + + 0 0 0 AB+

PENYEDIAAN COOMB’S CONTROL CELL (CCC)

Penyediaan Coomb’s Control Cell (CCC)

Peralatan yang diperlukan :

A. Radas : Tiub, Pipet, Inkubator, Pengempar

B. Reagen : Normal Saline, AHG

Spesimen :

Sel darah merah O yang kuat

Prinsip :

Sel darah merah yang tersensitasi dengan serum globulin adalah digunakan sebagai kontrol

positif untuk menguji fungsi AHG. Ia mengandungi IgG yang mana akan bertindak balas dengan

22

AHG(mengandungi Anti-IgG). Anti-IgG di dalam AHG akan mengikat molekul IgG seterusnya

membentuk agglutinasi.

Prosedur :

1. Tandakan 1 tabung uji (10x75mm) ‘CCC’ dan masukkan 19 titik larutan salin.

2. Masukkan 1 titik Anti-D (cairan 1/20) dan sebatikan.

3. Tambahkan 4 titik SDM padat dari kumpulan O Rh(D) positif ke dalam tabung uji dan

sebatikan dengan sempurna.

4. Eramkan tabung uji pada suhu 37°C selama 15 – 30 minit.

5. Basuh sel-sel 3 – 4 kali dengan larutan salin. Pastikan setiap pembasuhan dilakukan

dengan sempurna.

6. Buangkan semua larutan saline dengan sempurna pada pembasuhan yang terakhir.

7. Sediakan cairan 1/10 ‘CCC’ dengan memasukkan 36 titik larutan salin ke dalam tabung uji.

(Sebanyak 4 titik SDM padat telah dimasukkan ke dalam tabung uji ini semasa permulaan

ujian).

8. Uji ‘CCC’ yang disediakan dengan reagen AHG. Ia seharusnya memberikan reaksi

agglutinasi positif 2+.

9. ‘Coomb’s Control Cell’ ini boleh digunakan untuk beberapa hari jika ia disimpan pada 4°C.

(Jika sel-sel diampaikan di dalam larutan ‘Alserver’s ia boleh disimpan hampir sebulan pada

suhu 4°C.)

Interpretasi ujian

A. 4+ = agglutinasi yang sangat banyak

B. 3+ = agglutinasi yang banyak

C. 2+ = agglutinasi sederhana banyak

D. 1+ = agglutinasi sedekit

E. 0+ = tiada pembentukan agglutinasi

23

UJIAN KESERASIAN DARAH (CROSSMATCHING)

Ujian Keserasian Darah

Pengenalan:

Ujian keserasian darah terbahagi kepada dua jenis berdasarkan prinsipnya, iaitu :

1. Ujian keserasian darah major : serum pesakit diuji dengan sel darah penderma bagi

menentukan keserasiannya. Ujian keserasian major merupakan jenis ujian keserasian

darah yang dijalankan di Unit Tabung Darah Hospital Queen Elizabeth.

2. Ujian keserasian darah minor : sel darah pesakit diuji dengan serum penderma bagi

menentukan keserasiannya.


1. Radas : tabung uji, pipet pasteur, pengempar, mesin pengeraman 37NC

2. Reagen : LISS, AHG, saline normal, CCC (Coomb’s Control Cell)

Prinsip:

Ujian keserasian darah dilakukan berdasarkan prinsip aglutinasi. Serum pesakit ditambah

kepada sel darah penderma. LISS (low ionic strength solution) ditambah untuk mempercepat

tindak balas antigen-antibodi. Selepas pengeraman antibodi yang tidak terikat akan disingkirkan

melalui proses pencucian sel dan reagen AHG (anti human globulin) ditambah. Kehadiran

hemolisis atau aglutinasi menunjukkan kehadiran antibodi terhadap antigen tertentu pada sel

darah merah penderma.

Prosedur:

1. Data pesakit pada borang permohonan bersama-sama spesimen yang dihantar diperiksa

bagi mengesan sebarang kepincangan maklumat. Serum pesakit dipisahkan ke dalam

tabung uji berlainan dan dilabelkan dengan nama dan nombor kad pengenalan pesakit

beserta tarikh ujian dijalankan.

2. Pek darah dikeluarkan dari kumpulan ABO yang sama dengan pesakit mengikut bilangan

yang diminta dari peti simpanan darah.

24

3. Tabung uji disediakan mengikut bilangan yang dikehendaki (2 tiub bagi setiap unit darah

untuk kegunaan ampaian sel dan ujian keserasian darah) dan dilabelkan.

4. segmen dari tiub pek darah dipotong dan ampaian sel darah penderma 2 hingga 5%

disediakan.

5. Dua titk serum pesakit ditambah ke dalam setiap tabung uji (satu tabung uji bagi setiap

pek darah yang diminta).

6. Pengumpulan ABO dan Rhesus D (teknik langsung) menggunakan anti-A, anti-B, anti-AB

dan anti-D dijalankan.

7. Setitik ampaian sel darah penderma 2 hingga 5% ditambah ke dalam tiub yang

mengandungi serum pesakit.

8. Sel darah penderma diuji dengan anti-A dan anti-B (pengumpulan semula darah

penderma).

9. Campuran serum pesakit-sel darah penderma disebatikan dan diemparkan pada kelajuan

3000 selama 15 saat.

10. Tabung uji diperiksa secara makroskopik untuk mengesan kehadiran aglutinasi dengan

menggoncangkan tabung uji perlahan-lahan. Tindak balas positif boleh digredkan dari 4+

sehingga 1+. Rekodkan “0” untuk tindak balas sekiranya tiada aglutinasi dikesan.

11. Dua titik LISS ditambah. Disebatikan dan dieram pada suhu 37 NC selama 15 hingga 30

minit.

12. Selepas pengeraman, tabung uji diempar pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat.

13. Kehadiran aglutinasi atau hemolisis diperiksa secara makroskopik.

14. Sekiranya keputusan adalah negatif, sel dicuci sebanyak tiga kali dengan saline normal.

Saline normal dibuang selengkapnya selepas cucian ketiga.

15. Dua titik AHG ditambah pada setiap tabung uji.

16. Disebatikan dan diemparkan pada kelajuan 3000 rpm selama 15 saat.

17. Kehadiran aglutinasi diperiksa secara makroskopik dengan menggoncangkan tabung uji

perlahan-lahan. Ketiadaan aglutinasi diinterpretasikan sebagai “serasi” dan kehadiran

aglutinasi sebagai “tidak serasi”.

18. Semua keputusan (suhu bilik, 37 NC dan AHG) direkod pada borang permohonan.

19. Sekiranya ujian keserasian darah menunjukkan ketidakserasian antara darah pesakit

dengan darah penderma sebelum darah dikeluarkan, permohonan darah tersebut

dibatalkan dan dapatkan beg darah lain untuk diuji keserasiannya.

20. Nombor beg darah, tarikh dan masa ditulis pada borang permohonan.

21. Data dimasukkan ke dalam sistem komputer dan label dicetak untuk transfusi darah.

25

22. Label tersebut dilekat pada beg darah yang diminta.

23. Beg darah yang telah diuji keserasiannya dengan darah pesakit disimpan ke dalam peti

sejuk.

Keputusan:

1. Sekiranya tiada tindak balas (aglutinasi atau hemolisis) antara darah pesakit dan darah

penderma, darah penderma adalah serasi untuk pesakit berkenaan dan boleh digunakan

bagi tujuan pemindahan darah.

2. Namun jika terdapat tindak balas (aglutinasi atau hemolisis) antara darah pesakit dan

darah penderma, ini bermakna darah penderma adalah tidak serasi dan darah penderma

lain hendaklah diuji keserasiannya dengan pesakit berkenaan.

UJIAN KESERASIAN DARAH ( GEL CARD)

Ujian keserasian darah(Gel Card)

Peralatan yan diperlukan:

Pipet, gel card, tiub kaca

Spesimen :

Serum pesakit, ampaian sel darah merah 5% dari penderma

Kaedah ujian

1. Terima sampel daripada kaunter

2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar

kembali ke kaunter

3. Rekodkan maklumat pesakit ke dalam buku daftar harian ujian keserasian &

pembekalan darah/komponen darah.

26

4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit

5. Tentukan kumpulan darah pesakit. (Rujuk proses kerja ujian kumpulan darah ABO dan

Rhesus)

6. Sediakan ampaian sel 5 % sel darah merah penderma yang mempunyai kumpulan

darah ABO dan Rhesus yang sama dengan pesakit.

7. Labelkan mikrotiub (Gel Card) dengan nama pesakit dan no beg darah

8. Masukkan 50 ul ampaian sel darah merah penderma di langkah 5, kepada mikrotiub di

langkah 6.

9. Tambahkan 25 ul serum pesakit ke mikrotiub di langkah 7. Sebatikan.

10. Eramkan mikrotiub selama 15 minit pada suhu 37°C dalam incubator 37SI

11. Kemudian, emparkan mikrotiub di langkah 9, selama 10 minit pada 1030 rpm

menggunakan ID Centrifuge 6S

12. Semak keputusan (rujuk pengendalian ujian unit tabung darah & kawalan kualiti). Jika

keputusan meragukan, ulangi ujian.

13. Rekodkan keputusan pada borang ujian keserasian dan buku daftar harian ujian

keserasian & pembekalan darah/komponen darah.

14. Hantarkan borang ujian keserasian ke kaunter

Interpretasi ujian

Interpratasi

4+ to 1+ Reaktif(incompatible)

Neg Tidak reaktif(Compatible)

UJIAN COOMB’S (Ab Screening)

Ujian Coomb’s-Direct

27


A. Radas : pengempar, tabung uji, pipet

B. Reagen : 0.9 natrium klorida (NaCl), AHG, CCC

Spesimen :

1. Sel darah merah

Prinsip:

Reagen antihuman globulin polispesifik (AHG) digunakan untuk pengesanan aloantibodi rutin,

ujian keserasian dan ujian antiglobulin langsung (Direct Antiglobulin Test, DAT). HAG

polispesifik mengandungi antibody terhadap IgG manusia dan komplemen C3d dan turut

bertindak balas terhadap molekul IgA dan IgM. Keputusan DAT positif menunjukkan bahawa sel

darah merah tersensitasi secara in vivo dengan immunoglobulin atau komplemen.

Kaedah ujian

1. Masukkan o.5ml cell(EDTA) ke dalam tiub dan emparkan pada kelajuan 2000rpm dalam

masa 15saat.

2. Basuhkan 3-4 kali dengan larutan saline.

3. Sediakan 2-3% suspensi sel.

4. Masukkan 1 titik 2-3% sel yang telah dibasuh ke dalam tiub.

5. Masukkan 1 titik AHG dan sebatikan.

6. Empar pada kelajuan 1000rpm dalam masa 60 saat.

7. Baca secara makroskopik dan mikroskopik.

8. Tambahkan reagen CCC

9. Emparkan pada kelajuan 2000rpm dalam masa 60 saat.

10. Baca secara makroskopik dan mikroskopik.

11. Catatkan keputusan samada negative atau positif.

28

Interpretasi ujian

Negatif – Agglutinasi

Positif – Tidak beragglutinasi

Ujian Coomb’s-Indirect


A. Radas : pengempar, tabung uji,pipet

B. Reagen : 0.9 natrium klorida (NaCl), AHG, CCC, Screening Cell

Spesimen :

Serum pesakit.

Kaedah ujian



kembali ke kaunter

3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di buku daftar harian ujian

AHG/GSH/Ab identification.

4. Labelkan 3 tiub dengan SI, SII, SIII ( bergantung bilangan Screening Cell yang

digunakan)

5. Masukkan 2 titik serum yang hendak diuji ke dalam setiap tiub ujian di langkah 4 ( SI,

SII, SIII)

6. Tambahkan 2 titik Screening Cell bagi setiap tiub di langkah 5. Sebatikan.

7. Emparkan tiub di langkah 6, pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat.

29

8. Periksa sampel daripada langkah 7, secara makroskopik & mikroskopik.



10. Masukan 2 titik LISS ke tiub di langkah 8.

11. Eramkan selama 15 minit pada suhu 37°C

12. Kemudian, emparkan pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat




15. Lakukan cucian berulang ke tiub di langkah 13, sebanyak 3 kali dengan saline.

16. Seterusnya, tambahkan 2 titik AHG . Sebatikan

17. Emparkan pada kelajuan 1000 rpm selama 15 saat




20. Jika keputusan negatif, tambahkan 1 titik Coombs Control Cell (CCC) dan keputusan

mesti positif.

21. Rekodkan keputusan pada borang dan buku daftar harian ujian AHG/GSH/Ab

identification.

22. Hantarkan keputusan bersama borang ke kaunter

Interpretasi ujian

Negatif – Agglutinasi

Positif – Tidak beragglutinasi

UJIAN D =

Ujian D =

30

Pengenalan :

Ujian D R adalah untuk pengesanan antigen D yang lemah pada darah pesakit. Antigen rhesus

utama boleh hadir dalam pelbagai kombinasi dimana ia terdiri daripada 417 asid amino yang

merentasi membrane sel darah merah sebanyak 12x. Lekuk kecil berada atas membran

selebihnya terbenam dalam kript membran sel.

Peralatan yang digunakan :

A. Radas : Tabung uji, pipet, mesin pengempar dan inkubator

B. Reagen : Normal salin, AHG dan CCC

Spesimen :

Sel dara merah

Prosedur :

1. Cuci sel sebanyak 3 kali dengan saline dan sediakan 5% suspensi.

2. Tambah 2 titik Anti-D dan 1 titik suspensi 5% ke dalam tabung uji yang dilabelkan

3. Emparkan tiub tersebut dan perhatikan agglutinasi.

4. Eram pada suhu 37°C selama 15 minit.

5. Keluarkan tabung uji dan cuci sel sebanyak 3 kali.

6. Tambahkan 2 titik AHG.

7. Empar pada 1000rpm selama 1 minit.

8. Periksa sekiranya terdapat agglutinasi secara makroskopik.

9. Sekiranya negatif, tambahkan 1 titis CCC untuk mengesahkan ujian dan reagen AHG

31

adalah berkeadaan baik.

Interpretasi keputusan :

Terdapat agglutinasi – Darah adalah rhesus positif, terdapat kehadiran antigen D yang kuat.

Tiada agglutinasi – Darah adalah rhesus negatif, tidak terdapat kehadiran antigen D yang

lemah.

PENYEDIAAN KOMPONEN-KOMPONEN DARAH

Penyediaan Komponen-komponen Darah

Peralatan yang digunakan:

A. Radas : Beg darah, mesin pengempar beg darah

B. Reagen : CPD, CPDA

Spesimen :

Darah penuh.

Packed cell

1. Biarkan darah penuh mendap pada 4°C atau emparkan pada 4100 rpm/5°C selama 5 minit.

32

2. Plasma dipindahkan pada beg kedua (packed cell dan plasma diasingkan)

3. Packed cell boleh disimpan pada 2-6°C selama 21 hari.

Platelete concentrate & Freeze Frozen Plasma

1. Blood pack digunakan (triple bag/satellite bag)

2. Biarkan darah penuh mendap pada 4°C atau emparkan pada 4100 rpm/5°C selama 5 minit.

3. Plasma dipindahkan pada beg kedua (packed cell dan plasma diasingkan).

4. Plasma diempar pada 4100 rpm selama 5 minit.

5. Supernatan plasma akan dibekukan dan dijadikan sebagai freeze frozen plasma.

6. Mendapan (kira-kira 50ml plasma) akan dibiarkan pada suhu bilik di atas ‘slow rotater’ bagi

mengelakkan platelet berkelompok.

7. Tempoh penyimpanan adalah selama 5-7 hari.

Cryoprecipitate

1. Whole blood diempar pada 4000 rpm selama10 minit dengan suhu 8°C.

2. Pindahkan 2/3 plasma ke beg kedua.

3. Tutup tiub dan asingkan Packed Cell (simpan pada 2.- 6°C)

4. Dalam 2 jam selepas SDM dipisahkan, plasma dibekukan pada -30°C

5. Biarkan kandungan cair pada 2 – 6°C selama 16 – 18 jam.

6. Emparkan dengan suhu 2 - 4°C pada 4100rpm selama 5 minit.

7. Terbalikkan beg dan biarkan supernatant mengalir masuk ke beg ketiga (Cryoprecipitate)

dalam 10 – 15 ml plasma.

8. Simpan pada -18°C selama 12 bulan atau pada -30°C untuk mengekalkan faktor VIII.

33

MAKMAL HEMATOLOGI

MAKMAL HEMATOLOGI

PENGENALAN

Makmal Hematologi di Hospital Nukleus Labuan menjalankan beberapa jenis ujian iaitu

ujian Full Blood Count (FBC), ujian Prothrombin Time (PT), ujian Partial Thrombopastin Time

35

(PTT), ujian Eritrosit Sedimen Retikulosit (ESR), ujian Pencelupan Vital Supra (RETIC COUNT,

ujian penyedian Filem Darah Nipis (FDN), dan ujian G6PD. Ujian FBC dijalankan bagi

mengesan jumlah sel darah merah dan sel darah putih serta platelet samada dalam julat normal

ataupun abnormal. ujian PT, PTT dijalankan bagi mengesan untuk memastikan samada pesakit

tersebut mempunyai haemostasis yang normal ataupun abnormal. Disamping itu, terdapat

beberapa ujian lain yang dilakukan di dalam Makmal Hematologi salah satunya adalah ujian

G6PD. Ujian G6PD dilakukan biasanya pada bayi yang baru lahir. Terdapat juga ujian D–Dimer

yang dilakukan dalam Makmal Hematologi, iaitu merupakan ujian khas dan hanya dilakukan

oleh kaki tangan makmal sahaja. Dalam Makmal ini mempunyai dua kaunter penerimaan

spesimen iaitu kaunter luar terutamanya untuk pesakit luar seperti KP1 (Klinik Pakar 1), KP2

(Klinik Pakar 2) dan KP3 (Klinik Pakar 3). Manakala kaunter dalam penerimaan spesimen dari

semua wad yang berada dalam Hospital ini dan penerimaan spesimen dari OPD (Out Patent

Department).

MAKMAL HEMATOLOGI

36

Raja Saidatul NadiaPSKH (Kimia Hayat) C41

Tajuk Ujian : Ujian Full Blood Count (FBC).

FBC adalah sel-sel yang beredar dalam aliran darah pada amnya terbahagi kepada tiga jenis

iaitu sel-sel-sel darah putih (Leukosit), sel-sel darah merah (Eritrosit), dan platelet (Trombosit).

37

Christina NuriJTMP U29

Pengiraan yang yang tinggi atau rendah mungkin menunjukkan kehadiran pelbagai bentuk

penyakit, dan seterusnya pengiraan jumlah darah adalah yang paling kerap dilakukan dalam

bidang perubatabn, kerana pengiraan jumlah darah ini dapat menggambarkan keseluruhan

status kesihatan am pesakit.

Bahan dan radas:

I. Mesin analyzer CELL – DYN Ruby

Reagen :

I. WBC lyse

II. HGB lyse

III. Diluent/sheath

Sampel :

I. Sel darah merah

Prinsip :

SEL – DYN Ruby merupakan sistem penganalisa dalam makmal hematologi yang mempunyai

pelbagai parameter automatik yang direka khas untuk mendiagnos sel secara klinikal di dalam

makmal yang digunakan secara in vitro. Instrumen ini menggunakan teknologi MAPSS (Multi –

Angle Polarized Scatter Separation) untuk mendiagnos, menganalisis, mengira dan

membezakan sel – sel (sel darah putih, sel darah merah dan platelet) pada sampel darah

pesakit. Selain itu, instrumen ini menggunakan laser dan memancarkan cahaya optik untuk

menganalis tanpa memerlukan refleks kepada mod ujian yang lain. Tahap hemoglobin akan

ditentukan dengan kaedah kolorimetri dan pembilangan sel – sel adalah tertakluk kepada saiz

dan ukuran setiap sel darah pesakit.

Kaedah ujian :

I. Sampel yang diterima mestilah bersesuaian dengan pemohonan ujian.

II. Sampel yang diterima mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap

pada borang dan tiub sampel.

38

III. Borang dan sampel yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan akan dilakukan

kepada wad atau klinik berkenaan.

IV. Sampel yang mengandungi label dan borang yang lengkap akan diambil dan

pendaftaran pesakit serta pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.

V. Bagi ujian FBC, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.

Prosedur :

I. Sampel yang diterima akan disebatikan dengan menggunakan mesin ‘mixer’ sebelum

ujian dijalankan.

II. Nama dan kad pengenalan pesakit akan ditaip pada skrin mesin.

III. Letakan tiub yang mengandungi spesimen darah menyentuh ‘ probe’.

IV. Tekan panel dibelakang ‘ probe ‘ untuk memulakan sedutan spesimen.

V. Biarkan spesimen disedut sehingga ‘probe’ naik keatas yang menandakan proses

sedutan telah tamat.

VI. Letakan spesimen di rak yang disediakan.

VII. Spesimen tadi akan melalui proses pencairan dan pengiraan sel- sel darah putih, sel

darah merah dan platelet.

VIII. Setelah pengiraan selesai keputusan akan keluar di skrin dan direkod dalam borang

permintaan ujian.

IX. Keputusan akan dikaji, sekiranya memuaskan laporan akan direkod dan dikeluarkan.

Tetapi jika keputusan tidak memuaskan, ujian akan diulangi.

Interpretasi ujian :

Julat Normal

Total White Blood Cell ( TWBC)

Dewasa 4.00 – 11.0 x 10 9/L

Bayi 10.00 – 26.0 x 10 9/ L

Kanak – kanak 1tahun

Haemoglobin ( HB%)

Lelaki 13.5 – 18.0 g/dl

39

Perempuan 11.5 – 16.5 g/ dl

Bayi ( darah tali pusat ) 13.6 – 19.6 g/dl

Bayi kurang 3 bulan 9.5 – 12. 5 g/dl

Budak 1 tahun 11.0 – 13.0 g/dl

Budak 10 – 12 tahun 11.5 – 14.8 g/dl

Packed cell Volume ( PVC ) 37.7 – 53.7

Total Red Blood Cell ( TRBC ) 4.06 – 4.69

Mean Cell Volume ( MCV ) 81.1 – 96.0

Mean Cell Haemoglobin ( MCH) 27.0 – 31.2 picogram

Mean Cell Haemoglobin Concentration ( MCHC ) 31.8 – 35.4

Neutrofil (NEU) 39.3 – 73.7 %

Lymposyte (LYM) 18.0 – 48.3 %

Monosyte (MONO) 4.40 – 12.7 %

Eosinofilik (EOS) 0.600 – 7.30 %

Basofilik (BASO) 0.00 – 1.70 %

Tajuk Ujian : Ujian Prothombine Time (PT)

Ujian PT dijalankan bersama- sama dengan ujian PTT bagi mengesan pesakit tersebut telah

mengalami pendarahan atau lebam yang tidak dapat dijelaskan,tromboemlism,keadaan akut

seperti pembekuan sebagai faktor yang digunakan pada kadar normal yang atau dengan

40

keadaan yang kronik seperti penyakit hati. Apabila seseorang mempunyai kes trombotik atau

keguguran labih dari satu kali,PTT merupakan sebahagian daripada penilaian untuk

antikoagulan pecah atau antikardiolipin antibodi.

Bahan dan Alat Radas :

I. Kuvet

II. Bering

III. Mikropipet

IV. Finnipipette

Reagen :

I. Neoplastine

Sampel :

II. Serum

Prinsip :

Prinsip ujian ini terdiri daripada penggunaan Tromboplastin kalsium untuk mengukur masa

pembekuan plasma atau serum pesakit dan untuk membandingkan dengan julat normal.

Secara keseluruhannya, aktiviti pembekuan faktor II (protrombin), faktor V (proaccelerin), faktor

VII (proconvertin), faktor X (stuart faktor) dan faktor I (fibrinogen).

Kaedah Ujian :

I. Sampel yang diterima mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap.

II. Pemohonan ujian yang diminta mestilah bersesuaian dengan sampel yang diterima.

III. Bagi ujian PT dan PTT, sampel yang diterima mestilah didalam tiub yang bewarna biru

kerana tiub ini mengandungi antikoagulan sodium sitrat.

IV. Setelah itu, sampel yang diterima mestilah diempar terlebih dahulu untuk memisahkan

sel darah merah dengan serum.

V. Sampel disimpan pada rak berdekatan dengan mesin incubate PT dan PTT.

VI. Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang

lengkap.

41

VII. Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan

akan dilakukan pada wad atau klinik yang berkenaan.

Prosedur :

I. Masukkan baring di dalam kuvet dan di simpan pada incubate.

II. 50ul plasma atau serum di masukkan ke dalam kuvet tadi.

III. Tekan ‘1’ ‘test mode’ dan tekan ( ).

IV. Tekan ‘1’ untuk ujian PT dan tekan ( ).

V. Tekan ‘1’ untuk kedudukan kuvet pada incubate dan tekan ( ) sebanyak dua kali.

VI. Incubate dilakukan selama 60 saat.

VII. Kuvet tadi di pindahkan setelah berbunyi dan finnpipette – positif ‘4’, Neoplastine Cl plus

‘100ul’ di masukkan kedalam kuvet tadi.

VIII. Tekan ( ) untuk incubate.

IX. Tunggu sehingga result keluar dan rekod.


Julat Normal

Prothrombin Time 11.5 – 14.5 sec

Tajuk Ujian : Ujian Partial Thrombopastin Time (PTT)

Ujian Partial Thrombopastin Time (PTT) adalah ujian darah yang dijalankan pada beberapa

masa diambil untuk darah membeku. Ia boleh membantu mengesan jika pesakit mempunyai

masalah pendarahan atau pembekuan.


I. Kuvet

II. Bering

III. Mikropipet

IV. Finnipipette

42

Reagen :

I. CK Prest

II. CaCl2

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Ujian Partial Thrombopastin Time melibatkan recalcification plasma dalam kehadiran jumlah

cephalin yang standad (pengantian platelet) dan faktor XII pengaktif (kaolin). Ujian PTT

melibatkan laluan pembekuan intrinsik (faktor XII, XI, IX, VIII, X, V, II dan I) kecuali platelet.

Kaedah Ujian :



III. Bagi ujian PT dan PTT, sampel yang diterima mestilah didalam tiub yang bewarna biru

kerana tiub ini mengandungi antikoagulan sodium sitrat.

IV. Setelah itu, sampel yang diterima mestilah diempar terlebih dahulu untuk memisahkan

sel darah merah dengan serum.

V. Sampel disimpan pada rak berdekatan dengan mesin incubate PT dan PTT.

VI. Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang

lengkap.

VII. Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan


Prosedur :

I. Masukkan baring di dalam kuvet dan di simpan pada incubate.

II. 50ul plasma atau serum di masukkan ke dalam kuvet tadi.

III. Masukkan CK prest ‘50ul’ pada kuvet tadi.

IV. Tekan ‘1’ “test mode” dan tekan ( ).

V. Tekan ‘2’ untuk ujian APTT dan tekan ( ).

VI. Tekan ‘1’ untuk kedudukan kuvet pada incubate dan tekan ( ) sebanyak dua kali.

VII. Incubate dilakukan selama 180 saat.

43

VIII. Kuvet tadi di pindahkan apabila berbunyi dan finnpipette – positif ‘2’, CaCl2 0.025 ‘50ul’

di masukkan ke dalam kuvet tadi.

IX. Tekan ( ) untuk incubate.

X. Tunggu sehingga result keluar dan rekod.


Julat Normal

Partial Thromboplastine Time 28.0 – 45.0 sec

Tajuk Ujian : Eritrosit Sedimen Rate (ESR), Kadar Pemendapan Eritrosit.

ESR berdiri untuk kadar pemendapan eritrosit. Ia juga dikenali sebagai ‘kadar sed’. Ia adalah

ujian yagn secara tidak langsung mengukur berapa banyak keradangan ada di dalam badan.


I. Tiub Westergent

II. Mesin ESR

Sampel :

I. Sel Darah Merah

Prinsip :

Kadar pemendapan eritrosit (ESR), ialah kadar di mana sel – sel darah merah mendap

dalam tempoh 1 jam. Ia adalah ujian hematologi umum dan untuk menjalankan ujian, darah

anticougulate diletakkan dalam tiub yang tegak, yang dikenali sebagai tiub Westergent dan

kadar pemendapan sel – sel darah marah diukur dan dilaporkan dalam mm/h. Sejak di

perkenalkan penganalis automatik ke dalam makmal klinikal, ujian ESR telah dilakukan secara

automatik.

Kaedah Ujian :

I. Tekan ‘ON’.

44

II. Masukkan empat ‘SENSOR TEST CUVETTES’.

III. Tekan ( ) tiga kali sehingga ‘SENSOR TEST’ kelihatan.

IV. Tekan (RUN) sehingga ‘SENSOR TEST RUN’ kelihatan.

V. Tunggu sehingga ‘SENSOR TEST OK’.

VI. Tekan ( ) untuk sambungkan ujian.

Prosedur :

I. Pindahkan sampel darah ke dalam kuvate.

II. Masukkan kuvate ke dalam ‘MINI VES’.

III. Tekan ( ) sehingga ‘WESTERGENT 1H’kelihatan.

IV. Tekan (RUN).

V. Tekan ( ) untuk tengok result.


Julat Normal

Kaedah Westergen (ESR) : mm/hr

Lelaki : 0.15 mm/hr

Perempuan : 0.20 mm/hr

Tajuk Ujian : Ujian Pencelupan Vital Supra (Reticulocyte Count).

Ujian pengiraan jumlah retikulosit adalah ujian yang dijalankan apabila RBC yang menurun atau

hemoglobin menurun dan hematokrit bagi mengesan fungsi sumsum tulang. Jika pengesanan

yang kurang pasti,kaedah ini boleh memastikan lagi jika pesakit tersebut mempunyai

keabnormalan pada sumsum tulang nya. Ujian ini juga dapat dijalankan andainya pesakit

disyaki mempunyai gejala atau simptom seperti pucat,keletihan,kelemahan,sesak nafas atau

najis berdarah. Pengiraan retikulosit dilakukan bersama-sama dengan mengira 1 RBC,

hematokrit, hemoglobin untuk memantau bagi fungsi sumsum dan tindakbalas kepada rawatan.


45

I. Tabung uji

II. Maker

III. Mikropipet

IV. Incubater

V. Slaid

VI. Sisip kaca

VII. Mikroskop

Reagen :

I. Larutan ‘Supra-Vitral’

Sampel :

I. Sel Darah Merah

Prinsip :

Reticulocyte adalah sel – sel darah merah muda yang mengandungi baki ‘basophilic

ribonucleoprotin’ dalam struktur nukleusnya. Bahan ‘Basophilic’ ini akan bergantung dengan

pewarna seperti Brilliant Cresyl Blue atau New Methylene Blue untuk membentuk mendapan

biru yang berbintik – bintik atau berantai – rantai.

Kaedah Ujian :


II. Sampel mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap pada borang

dan tiub sampel.




pendaftaran dan pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.

V. Bagi ujian Reticulocyte, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.

Prosedur :

46

I. 1 tabung uji diambil dan dilabelkan nama pesakit atau nombor bagi pemohonan ujian

yang banyak.

II. 50ml sampel darah dan 50ml reagen retic akan di pipetkan kedalam tabung uji tadi.

III. Sebatikan tabung uji yang berisi sampel dan reagen tadi.

IV. Masukkan kedalam incubater selama 30 minit.

V. Buat smear, smear yang dibuat mestilah mengandungi ciri – ciri yang betul (mempunyai

kepala, badan dan ekor).

VI. Keringkan pada udara.

VII. Lihat bawah mikroskop.

VIII. Hasil keputusan akhir diambil dan direkodkan.


Julat Normal

Dewasa : 0.2-2 %

Bayi : 2.5-6 %

Tajuk Ujian : Ujian Penyediaan Filem Darah Nipis (PBF).

Filem darah nipis biasanya dilakukan untuk menilai populasi sel darah apabila FBC mempunyai

perbezaan yang dilakukan dengan pembilang sel darah secara automatic,menunjukkan

kehadiran sel-sel abnormal atau belum matang. Ia juga boleh dilakukan apabila pesakit disyaki

terdapat gangguan atau penyakit yang menjejaskan pengeluaran sel darah seperti anemia

1,berkurangan atau pengeluaran abnormal sel di dalam sumsum tulang serta pemusnahan sel

peningkatan.

Bahan dan radas :

I. Slaid

II. Sisip kaca

III. Mikropipet

47

IV. Mikroskop

Sampel :

I. Darah

Reagen :

I. Alkohol

Prinsip :

PBF (Peripheral Blood Film) atau film daran nipis yang diwarnakan dengan pewarna

tertentu dan diperiksan dibawah mikroskop. SDM normal digambarkan sebagai normochromic

(warna yang normal) dan norocytic (saiz yang normal). Nilai MCV seolah – olah memberi

pertunjuk kepada saiz SDM. Nilai MCV yang rendah selalu berhubungkait dengan saiz SDM

yang lebih kecil daripada normal (microcytosis) sebaliknya nilai MCV yang tinggi berhubungkait

dengan saiz SDM yang lebih besar (macrocytosis). SDP (Sel Darah Putuh) digamberkan

sebagai ‘morphologically normal’ pada individu yang sihat. Kehadiran sel – sel atypical

lymphocytes, atypical mononuclear dan toxic granulation selalunya berhubungkait dengan

infeksi. Impression yang diberikan adalah berdasarkan smear darah dan keputusan ujian darah

yang lain.

Kaedah :


II. Sampel mestilah mempunyai label dan maklumat pesakit yang lengkap pada borang

dan tiub sampel.




pendaftaran dan pemohonan ujian pesakit akan dilakukan.

V. Bagi ujian Filem Darah Nipis, tiub yang digunakan adalah tiub EDTA bewarna ungu.

Prosedur :

I. Sampel yang mengandungi label dan borang yang di isi dengan lengkap akan di ambil.

II. Slaid dan sisip kaca di ambil dan sampel darah pesakit di ambil.

48

III. Dengan menggunakan mikropipet, sampel darah di ambil dan dititiskan ke atas slaid.

IV. Sisip kaca digunakan untuk membuat filem darah nipis.

V. Filem darah nipis yang baik menggandungi kepala, badan dan ekor.

VI. Smear di keringkan pada udara dan di fiksasi menggunakan alkohol.

VII. Biarkan smear kering pada udara sebelum dilihat dibawah mikroskop.

VIII. Keputusan yang dilihat akan diambil dan direkodkan ke dalam keputusan pesakit.


Julat normal

Peripheral Blood Film : 7.5 µm.

Tajuk Ujian : Ujian Glucose- 6 – phosphate – Dehydrogenase (G6PD).

Ujian G6PD adalah yang dijalankan terhadap kanak-kanak yang mengalami jaundis berterusan

sebagai bayi yang baru lahir yang tidak boleh dijelaskan oleh sebab lain. Ia juga boleh

dilakukan terhadap pesakit yang telah mempunyai lebih dari satu kes yang tidak dapat

dipastikan anemia hemolitik. Pengulangan ujian G6PD adalah dilakukan mungkin sekali sekala

bagi mengesahkan penemuan awal atau jika keputsan adalah normal dalam sebuah kes

hemolisis.


I. Tabung uji

II. Penebuk kertas

III. Kertas G6PD

IV. Mikropipet

V. Maker

VI. Jam

Reagen :

I. Glucose – 6 – Phosphate Dehydrogenase (G6PD)

49

Sampel :

I. Darah

Prinsip :

Haemolysate dieramkan bersama dengan glucose – 6 – phosphate sebagai substrate

dan triphosphopyridine nuclestide (TPN) sebagai co – enzyme bersama-sama dengan Brilliant

Cresyle Blue Dye. Pengurangan hydrogen daripada glucose – 6 – phosphate dari hasil adanya

G6PD di dalam campuran tindakbalas dan melibatkan pengurangan TPN kepada TPNH. Dye

yang dicampurkan di kurangkan kepada sebatian yang tidak berwarna yang sama anggaran

banyaknya dengan TPNH yang didapati. Ketiadaan atau kekurangan enzyme akan melibatkan

timbulnya warna itu.

Kaedah Ujian :



III. Bagi ujian G6PD, biasanya sampel diterima pada kertas kecil yang mempunyai darah

pesakit dan di kelipkan sekali dengan borang pesakit.

IV. Pendaftaran dan pemohonan ujian akan dilakukan bagi sampel dan borang yang

lengkap.

V. Manakala bagi sampel atau borang yang tidak lengkap akan ditolak dan pemberitahuan


Prosedur :

I. 1 Tabung uji di ambil dan di labelkan bersesuaian dengan nama pesakit atau nombor

bagi sampel yang banyak.

II. Kertas yang mengandungi sampel darah pesakit di ambil dan ditebuk dan diletakkan di

dalam tabung uji tadi.

III. Reagen G6PD akan diletakkan kedalam tabung uji tadi sebanyak 50ml menggunakan

mikropipet.

IV. Jam akan digunakan untuk menetapkan masa selama 15 minit.

50

V. Kertas G6PD diambil dan sampel tadi diletakkan ke atas kertas itu dan di keringkan.

VI. Masukkan kertas itu kedalam kotak khas untuk ujian G6PD ‘sinaran UV’ dan tekan suiz

‘ON’ serta lihat keputusannya.

VII. Hasil akhir keputusan akan di rekodkan.


I. G6PD NORMAL

II. G6PD DEFICIENT

III. G6PD INTERMEDIATE

LEISHMAN

Pewarnaan Leishman

Prinsip:

Pewarnaan Leisman merupakan campuran Methylene Blue dan Eosin. Larutan pewarna

Leishman mewarnakan filem darah dengan kandungan alkohol metilnya. Sebagai pewarna

neutral dalam medium beralkohol, pewarna Leishman hanya menunjukkan tindak balas

pewarnaan setelah ditambah larutan penimbal.

Tujuan:

Untuk menghasilkan tindak balas warna pada sel-sel darah yang terbahagi kepada tiga

komponen utama : nukleus, sitoplasma dan granul.

Prosedur:

1. Letakkan filem darah nipis di atas rak, banjirkan slaid dengan pewarna Leishman dan

biarkan selama 30 saat hingga 1 minit.

2. Tambahkan 2 ml larutan penimbal pH 6.8 dan biarka selama 10 minit.

3. Bersihkan slaid filem darah dengan air mengalir untuk membersihkan sisa metalik pada

filem darah.

51

4. Biarkan filem darah nipis kering.

Keputusan:

Komponen sel Warna

Nukleus Ungu-merah jambu

Sitoplasma limfosit Biru ke kelabu kebiruan

Granul neutrofil Merah jambu keunguan

Granul eosinofil Oren kemerahan

Granul basofil Ungu gelap

Platelet Keunguan

Eritrosit Kemerahan

52

MAKMAL SEROLOGI

MAKMAL SEROLOGI

PENGENALAN

53

Di dalam makmal serologi di Hospital Nukleus Labuan, ujian yang dilakukan adalah

seperti ujian saringan HIV, HCV, denggi dan beberapa ujian lagi. Makmal serologi ini berkait

rapat dengan makmal blood bank kerana di makma inilah ujian lanjutan bagi beg pendermaan

darah dilakukan iaitu ujian penyaringan. Darah yang diterima daripada kempen derma darah

akan disaring mengikut ujian seperti Ujian HIV, HCV dan bermacam lagi.

CARTA ORGANISASI MAKMAL SEROLOGI

54

MAKMAL SEROLOGI

Tajuk Ujian : Ujian Saringan Anti-HIV

55

Siti Noor Aisyah Bt. Md. HussinPSMP C41

Ivy Emily John JinalJTMP U29

Ujian saringan Anti-HIV adalah kit enzim imunoasai untuk mengesan antigen p24 HIV dan

antibodi HIV-1(kumpulan M dan O) serta serum atau plasma pesakit dalam HIV-2. Kit ini boleh

digunakan untuk kedua-dua saringan antigen HIV dan HIV antibodi.

Bahan & Radas :

Penyediaan reagen.

NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).

1. Penyediaaan reagen untuk digunakan.

Reagen 1 (R1) : Mikroplat

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting

atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas

pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan

semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada

+2-8°c.

Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif

Reagen 4 (R4) : Kawalan positif Ab HIV

Reagen 5 (R5) : Kawalan positif Ag HIV

Reagen 6 (R6) : Konjugat 1

Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir

2. Menyusun semula reagen

56

Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)

Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan untuk

membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.

Larutan kerja konjugat 2 : Reagen 7a (R7a) + Reagen 7b (R7b)

Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat 2 (R7a) secara perlahan-perlahan bagi

mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati

memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R7b) kepada pencair Konjugat

Lyophilised (R7a). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan perlahan-lahan

serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan penyelenggaraan.

Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)

Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10 ml

reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja

disediakan.

Prinsip :

Ujian saringan HIV Ag-Ab adalah enzim imunoasai berasaskan prinsip jenis ‘sandwich’ untuk

mengesan antigen HIV dan untuk pelbagai antibodi berkaitan dengan virus HIV-1 serta HIV-2

dalam serum atau plasma pesakit.

Fasa pepejal dilapis dengan:

1. Monoklonal terhadap antibodi p24 antigen HIV-1.

2. Antigen dtulenkan: gp160 protein rekombinan, peptida sintetik menyerupai sepenuhnya

(seperti dikodkan oleh virus yang tidak sedia ada).

1. HIV-1 kumpulan O-spesifik epitop dan peptida yang menyerupai immunodominan

kandungan HIV 2.

Konjugat berdasarkan penggunaan:

57

Biotinilated antibodi poliklonal Ag HIV (Konjugat 1)

Streptavidin dan antigen HIV- Konjugat peroksidase (gp41 dan gp36 peptides menyerupai

kandungan glikoprotein epitop immunodominan HIV- 1 dan HIV.

1. Kandungan glikoprotein dan peptida sintetik yang menyerupai kumpulan O- spesifik HIV

2. epitop digunakan untuk fasa pepejal) (Konjugat 2)

Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:

3. Konjugat 1 (biotinilat antibodi poliklonal p24 Ag HIV- 1) ditambah ke dalam petak kolum

mikroplat.

4. Sampel serum dan kontrol asai akan dipipet ke dalam petak kolum.

1. Jika hadir,antigen HIV akan mengikat dengan antibodi monoklonal yang terikat

pada fasa pepejal dan konjugat 1.

2. Jika ada antibodi HIV- 1 atau HIV- 2 mengikat pada antigen dan berubah kepada

fasa pepejal konjugat 1.

3. Pemendapan konjugat 1 dan sampel akan berubah warna daripada kuning hijau

kepada biru.

4. Selepas pengeraman pada suhu 37°c dan dibasuh, ditambahkan dengan konjugat 2:

1. Streptividin bertindak balas bersama biotinilated Ab-Ag-Ab kompleks.

2. Peroksidase dilabel,antigen HIV- 1 dan HIV-2 ditulenkan mengikat dalam bentuk

antibodi IgG,IgM atau IgA untuk pada fasa pepejal.

5. Selepas pengeraman pada suhu 18-30°c,pecahan konjugat 2 diasingkan dengan teknik

membasuh. Selepas pengeraman dalam kehadiran substrat pada suhu bilik (18-

13°c),kehadiran kompleks konjugat akan menunjukkan perubahan warna.

6. Tindak balas akan berhenti dan serapan akan dibaca oleh spektrofotometer pada

450/620-700 nm.Penyerapan diukur pada sampel untuk menentukan kehadiran samada

ada atau tidak Ag HIV atau HIV- 1 dan antibodi HIV- 2.

Kaedah Ujian :

58



kembali ke kaunter

3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.


5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.

6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.

7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan

menggunakan 'marker'.

8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.

9. Titiskan 3 titik (75 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang

kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat dengan

menggunakan penitik.

10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.

1. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.

2. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) 'HIV-1

sensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) 'HIV-2 sensitized particles' ke

'well' yang keempat.

3. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.

4. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.

5. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika


6. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian Anti HIV 1/2

dan borang Per. Pat 301.

7. Sahkan keputusan.

59

8. Hantar keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.

Interpretasi Ujian :

Sampel dengan kehadiran nilai kurang daripada nilai yang ditolak pada mulanya dianggap

negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.

Keputusan hanya nilai dibawah yang ditolak (C.O – 10% < OD <

C.O).Walaubagaimanapun,perlu ditafsirkan dengan berhati-hati (ini adalah untuk

pengulanganujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan jika sistem dan prosedur makmal

dapat melakukannya). Sampel dengan kehadiran nilai sama dengan atau lebih besar daripada

nilai yang ditolak dianggap positif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Ia perlu diuji dalam 2

salinan sebelum interpretasi keputusan akhir. Jika selepas sampel diuji, kehadiran nilai 2

salinan kurang daripada nilai yang ditolak,keputusan awal adalah tidak berulang dan sampel

disahkan negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.

Tindak balas yang tidak diulang sering disebabkan oleh:

1. Mikroplat tidak dibasuh dengan baik.

2. Terkontaminasi oleh sampel serum atau plasma negatif dengan antibodi titre tinggi.

3. Terkontaminasi larutan subsrat oleh agen pengoksidaan ( peluntur,ion logam dan lain-

lain).

4. Terkontaminasi pemberhentian larutan.

Jika selepas pengulang ujian,kehadiran 1 salinan sama dengan atau lebih besar daripada nilai

yang ditolak,keputusan yang pertama diulang dan sampel disahkan positif oleh ujian saringan

Ag-Ab ULTRA HIV,tertakluk kepada had prosedur.

Tajuk ujian : Ujian Saringan HBs Ag ULTRA

60

Ujian saringan Ag HBs ULTRA merupakan satu enzim imunoasai dengan menggunakan teknik

jenis ‘sandwich’ untuk mengesan kehadiran antigen Hepatittis virus B (Ag HBs) dalam serum

atau plasma.

Bahan & Radas :

Penyediaan reagen.

NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).

1. Penyediaan reagen untuk digunakan.

Reagen 1 (R1) : Mikroplat

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut.

Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm

di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak

digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula

penyimpanan pada +2-8°c.

Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif

Reagen 4 (R4) : Kawalan positif

Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir

2. Menyusun semula reagen

Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)

Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan

untuk membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.

Larutan kerja konjugat (R6 + R7)

61

Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat (R7) secara perlahan-perlahan bagi

mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati

memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R6) kepada pencair

Konjugat Lyophilised (R7). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan

perlahan-lahan serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan

penyelenggaraan.

Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)

Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10

ml reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja

disediakan.

Prinsip :

Ujian saringan HBs Ag adalah enzim imunoasai berdasarkan prinsip jenis ‘sandwich’ iaitu

menggunakan antibodi monoklonal dan antibodi poliklonal yang dipilih untuk kebolehan

mereka mengikat kepada subjenis pelbagai HBs Ag. Diiktiraf oleh Pertubuhan Kesihtan

Sedunia (WHO) dan perkara yang paling HBV strain yang variasi.

HBs Ag fasa pepejal dilapisi dengan antibodi monoklonal.

Konjugat HBs Ag berdasarkan antibodi monoklonal yang digunakan daripada tikus dan

antibodi poliklonal daripada kambing terhadap HBs Ag. Antibodi ini terikat untuk

peroksidase.

Kaedah :

1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)

2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak

sama, hantar kembali ke UTD.

3. Isikan borang saringan ujian.




7. Pipetkan 100 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian.

62

8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'conjugate (R6 + R7)' ke strip ujian di langkah 7.

9. Eramkan selama 1 jam 30 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.

10. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).

11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.

12. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.

13. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.

14. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur

penggunaan mesin PR3100).

15. Sahkan keputusan

16. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.

Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:

1. Pengagihan kawalan sera dan sampel dilakukan ke dalam petak kolum mikroplat.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas

berbanding petak kolum yang kosong antara petak kolum yang ada sampel.

Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk membaca pada 490/620-

700 nm (pilihan).

2. Pengagihan konjugat berwarna merah ke dalam petak kolum.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Selepas penambahan larutan

konjugat,warna pada petak kolum akan berwarna merah. Kawalan secara automatik ini

mungkin untuk bacaan spektrofotometer pada 490/620-700 nm (pilihan). Pemendapan

sampel ini juga boleh menjadi kawalan pada langkah ini untuk memanipulasikan

bacaan automatik pada 490/620-700 nm.

3. Selepas pengeraman pada 37°c semasa satu jam dan separuh konjugat dipindah

secara membasuh.

4. Pengagihan larutan substrat bewarna.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas

berbanding petak kolum yang kosong dan petak kolum larutan substart merah jambu.

Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk bacaan pada 490 nm

(pilihan).

63

5. Selepas 30 minit pengeraman dalam kehadiran substrat yang gelap dan suhu bilik (18-

30°c),kehadiran kompleks konjugat menunjukkan perubahan warna.

6. Pengagihan larutan terakhir.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Larutan substrat pada mulanya bewarna

merah jambu akan berubah kepada jernih untuk petak kolum sampel yang tidak reaktif

dan berubah dari biru kepada kuning untuk petak kolum sampel yang posoitif.

7. Bacaan untuk ketumpatan optikal pada 490/620-700 nm dan interpretasi keputusan.

Interpretasi Ujian :

HBs Ag ULTRA. Keputusan dibawah hanya ditolak nilai (nisbah sampel antara 0.9 hingga 1).

Walaubagaimanapun, interpretasi keputusan hendaklah dilakukan dengan berhati-hati.

Pengulangan ujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan adalah lebih baik jika sistem dan

prosedur makmal dapat melakukannya. Selepas sampel diulang semula,nilai nisbah 2 salinan

sampel kurang daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan sampel disahkan

negatif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA. Untuk reaktif awal atau sampel meragukan (0.9 <

nisbah <1),jika selepas pengulangan nilai nisbah sekurang-kurangnya satu daripada 2 salinan

adalah sama atau lebih besar daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan

sampel disahkan positif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA,tertakluk kepada had prosedur.

Tajuk ujian : Ujian Saringan HCV Ag-Ab ULTRA

Ujian saringan HCV ag-Ab ULTRA adalah enzim imunoasai untuk mengesan infeksi HCV

berdasarkan pengesanan kapsid antigen dan antibodi yang berkaitan dengan infeksi oleh virus

Hepatitis C di dalam serum atau plasma pesakit.

Bahan dan Radas :

64

Sebelum menggunakan reagen kit ujian saringan HCV Ag-Ab ULTRA,pastikan reagen dalam

kedaan baik pada suhu bilik selama 30 minit.

1. Penyediaan reagen untuk diguna.

Mikroplat (R1)

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting

atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas

pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan

semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada

+2-8°c.

Konjugat 1 : Sediakan untuk digunakan (R6)

Songsangkan untuk mensebatikan sebelum diguna.

Konjugat 2 : sediakan untuk digunakan (R7)

2. Reagen yang digunakan semula

Konsentrasi larutan pembasuh untuk mencairkan R2 1:20 dalam air suling. Sediakan 800 ml

untuk 1 plat 12 petak kolum.

Larutan substrat untuk dicairkan (R8 + R9)

Reagen (R9) dicairkan menggunakan reagen R8 (contoh : 1 ml reagen R9 dalam 10 ml reagen

8ml). 10 ml mesti cukup untuk 1 hingga 12 petak kolum bagi mensebatikan.

Kawalan positif antigen (R5a + Rb)

Tuangkan kandungan R5 yang dicairkan ke dalam botol Ag R5 liopilised. Senaraikan botol dan

biarkan 10 minit dan goncang perlahan-lahan secara songsang dari semasa ke semasa untuk

memudahkan sebatian.

Prinsip :

65

Mikroplat fasa pepejal ujian saringan HCV Ag-Ab berlapis dengan :

1. Antibodi monoklonal terhadap kapsid protein virus Hepatitis C.

2. 2 produk protein rekombinan oleh E.coli daripada bahagian NS3 : genotip 1 dan 3a.

3. 1 antigen rekombinan daripada bukan struktural bahagian NS4.

4. Peptida bermutasi daripada bahagian strukutral kapsid genom virus hepatitis C.

Konjugat digunakan untuk :

1. Konjugat 1 (R6) : Antibodi monoklonal biotinilet tikus terhadap kapsid Hepatitis C.

Monoklonal ini tidak ada reaksi terhadap peptida bermutasi hepatitis C yang berlapis

pada mikroplat.

2. Konjugat 2 (R7) : Antibodi berlabel peroksidase tikus kepada IgG manusia dan

peroksidase berlabel streptividin.

3. Prestasi ujian termasuk langkah-langkah reaksi berikut :

4. Konjugat 1 dan sampel ditambahkan dengan kawalan sera untuk di uji pada petak

kolum. Jika antibodi HCV hadir,mereka akan terikat sebagai antigen tetap pada fasa

pepejal dan jika antigen kapsid hepatitis C hadir,antigen ini akan terikat oleh antibodi

monoklonal berlapis pada mikroplat oleh antibodi monoklonal biotinilet terhadap antigen

kapsid hepatitis C (konjugat 1).

5. Selepas pengeraman pada suhu 37°c selama 90 minit dan kaedah

pembasuhan,antibodi peroksidase berlabel IgG manusia dan peroksidase streptividin

(konjugat 2) ditambahkan. Konjugat streptividin peroksidase dengan antibodi

monoklonal biotinilet bertindak balas terhadap antigen hepatits C jika hadir. Konjugat

Anti-IgG manusia bertindak balas kepada peroksidase dan antibodi anti HCV jika hadir.

6. Selepas 30 minit pengeraman pada 37°c,enzim konjugat diasingkan melalui kaedah

pembasuhan dan menunjukkan kompleks antigen-antibodi oleh penambahan substrat.

7. Selepas 30 minit tindak balas akan berhenti,nilai serapannya dibaca dengan

menggunakan spektrofotometer pada 450/620-700nm. Serapan sampel diukur untuk

membolehkan mengesan kehadiran atau tidak hadir antibodi dan kapsid antigen HCV.

66

Warna intensiti berkadar pada kuantitti antibodi atau antigen HCV yang terikat pada fasa

pepejal.

Kaedah :

1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)

2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak

sama, hantar kembali ke UTD.

3. Isikan borang saringan ujian.




7. Pipetkan 100 µl 'conjugate 1 (R6)' ke strip ujian.

8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian di langkah 7.

9. Eramkan selama 90 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.


11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'conjugate 2 (R7)'.

12. Eramkan selama 30 minit pada suhu 37 °C.


14. Selepas cucian, tambahkan 80 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.

15. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.

16. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.

17. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur

penggunaan mesin PR3100).


19. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.


Sampel dengan ketumpatan optik kurang daripada nilai yang ditolak dianggap negatif oleh

ujian anti-HCV Ag-Ab. Keputusan nilai yang ditolak dibawah hanya (C.O -10% < OD < C.O)

walaubagaimanapun,interpretasi dilakukan dengan berhati-hati (ini kerana adalah lebih baik

67

untuk pengulangan ujian dalam dua salinan sampel yang sepadan apabila sistem serta

prosedur makmal membenarkan. Manakala sampel dengan ketumpatan optik tinggi

daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak dianggap pada mulanya positif dan diuji dalam

dua salinan sebelum tafsiran terakhir.

Selepas diuji semula,sampel dianggap positif oleh ujian anti-HCV Ag-Ab jika pengukuran

kedua atau ketiga adalah positif. Tinggi daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak,sampel

dianggap negatif jika nilai kedua-dua kurang daripada nilai yang ditolak.

Tajuk ujian : Ujian SD denggi IgG / IgM (BIOLINE)

Ujian cepat SD Bioline Denggi IgG/IgM bentuk pepejal imunokromatografik asai untuk

cepat,kualitatif dan pembezaan mengesan antibodi IgG/IgM kepada virus denggi dalam serum

manusia,plasma atau darah penuh. Ujian ini bertujuan untuk membantu secara profesional

dalam diagnosis andaian antara infeksi denggi primer atau sekunder. Ujian ini hanya

memberikan keputusan pada awal ujian. Oleh itu,penyelesaian untuk virus,antigen dikesan

dalam tissu tetap,RT-PCR dan ujian serologi seperti ujian hemagglutinasi-perencatan,kaedah

diagnosis lebih spesifik hanya digunakan dalam mengesahkan bagi infeksi virus denggi.

Bahan dan radas :

1. Pemungutan sampel.

2. Serum,plasma atau sampel darah penuh mesti digunakan dengan ujian ini.

Darah penuh.

(Pengambilan melalui salur vena).

1. Ambil darah penuh dan simpan dalam tiub (mengandungi tiub berantikoagulan seperti

heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena.

2. Jika spesimen darah tidak diuji segera,spesimen disimpan di dalam peti sejuk pada

suhu 2-8°C.

68

3. Apabila disimpan pada suhu 2-8°C,spesimen darah penuh boleh digunakan dalam masa

3 hari.

4. Untuk masa penyimpanan lebih daripada 3 hari,pembekuan adalah digalakkan.

Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum hendak digunakan.

5. Penggunaan spesimen darah menyimpan dalam jangka masa panjang lebih daripada 3

hari boleh menyebabkan reaksi tidak spesifik.

(Pemungutan menggunakan jarum lanset).

1. Bersihkan kawasan yang hendak ditusuk dengan lanset dengan swab kapas beralkohol.

2. Picit pada hujung jari dan tusukkan dengan lanset steril yang disediakan.

3. Ambil 10µl pipet kapilari yang disediakan,celupkan pada hujungdalm setitik darah

kemudian tekan darah pada pipet kapilari kepada garisan hitam.

serum atau plasma.

(Serum) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (TIDAK mengandungi

antikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena,biarkan

selama 30 minit untuk koagulasi darah kemudian emparkan darah untuk

mendapatkan spesimen supernatan serum.

(Plasma) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (mengandungi tiub

berantikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena

kemudian empar darah untuk mendapatkan spesimen plasma.

1. Jika spesimen serum atau plasma tidak diuji segera,spesimen boleh diletakkan dalam

peti sejuk pada suhu 2-8°C. Untuk penyimpanan jangka masa panjang lebih daripada 2

minggu,pembekuan digalakkan. Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum

digunakan.

69

2. Spesimen serum atau plasma mengandungi mendakan mungkin boleh tidak konsisten

pada hasil ujian.

Prinsip :

Ujian cepat SD Denggi IgG/IgM adalah direka secara serentak mengesan dan membezakan

antibodi IgG dan IgM pada virus denggi dalam serum manusia,plasma atau darah penuh. Ujian

ini juga boleh mengesan semua 4 jenis denggi dengan menggunakan rekombinan protein

denggi. Ujian SD BIOLINE Denggi IgG/IgM terdiri daripada 3 anti garisan,”G” (garisan Ujian

denggi IgG),”M” (garisan Ujian denggi IgM),dan “C”(garisan kawalan) pada atas permukaan

membran. Keputusan boleh dilihat melalui semua ketiga-tiga garisan sebelum memohon mana-

man sampel. “Garisan kawalan” ini digunakan untuk kaedah kontrol. Garisan kawalan selalunya

muncul jika kaedah prosedur ini dilakuan betul dan reagen ujian garisan kawalan berfungsi. “G”

berwarna ungu dan garisan “M” akan dapat dilihat keputusannya jika antibodi IgG dan IgM

dalam sampel cukup untuk virus denggi. Jika antibodi IgG dan IgM tidak hadir di dalam sampel

untuk virus denggi,tidak ada perubahan warna yang akan berlaku dalam “G” atau “M”. Apabila

spesimen ditambahkan ke dalam kolum sampel,anti-denggi IgG dan IgM dalam spesimen akan

bertindak balas dengan rekombinan koloid-protein konjugat emas virus denggi dan bentuk

kompleks antigen-antibodi. Kompleks bertukar panjang dan peranti ujian oleh tindakan capilari.

Anti IgG atau anti IgM manusia akan menjadi relevan dalam dua garisan ujian serta

menghasilkan garisan berwarna.

Kaedah :



kembali ke kaunter





7. Tambahkan 10 µl serum/plasma ke ruang sampel bertanda "S" di kit ujian.

8. Titiskan 3-4 titik 'diluent' ke ruang bulat di kit ujian.

9. Tafsirkan keputusan ujian dalam 15-20 minit

10. Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika

keputusan meragukan, ulangi ujian

70

11. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.


13. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.


Negatif (Tidak ada infeksi denggi).

Satu garisan merah jambu “C”.

Positif

1. IgM positif (Infeksi denggi primer).

Dua garisan merah jambu “C” dan “M”.

Jika positif walaupun pada “M” ia adalah lemah.

2. IgG positif (Infeksi denggi sekunder).

Dua garisan merah jambu “C” dan “G”.

Jika positif walaupun pada “G” ia adalah lemah.

3. IgG dan IgM positif (Infeksi denggi primer akhir atau sekunder awal).

Tiga garisan “C”,”M” dan “G”.

Tidak sah.

1. Tidak ada garisan “C” untuk keputsan.

2. Sampel digalakkan untuk diulang dan diuji semula.

71

Tajuk ujian : Ujian RPR Kit.

Antigen karbon RPR digunakan dalam ujian bukan treponemal untuk kualitatif dan separuh

kualitatif mengesan siphilis menggunakan serum (dipanaskan atau tidak dipanaskan) dan

plasma.

Bahan dan radas :

Komposisi kit.

Kandungan piawai kit mungkin berbeza-beza bergantung dengan format yang dibekalkan.

Antigen (2 ml untuk 100 ujian kit,10 ml untuk 500 ujian kit)

Reagen ini sedia untuk digunakan dan dibekalkan dalam 2 ml/10 ml botol yang dihadkan. Masa

hanya dibenarkan untuk antigen mencecah suhu bilik sebelum ujian dan perlu digoncang untuk

memastikan kehomogenan.

Positif/negatif kawalan sera.

Kawalan yang dibekalkan boleh disemak secara berkala untuk kesahihan.

Kawalan yang dibekalkan sedia untuk digunakan.

Penbahagian botol (3ml) dan jarum.

Rekaan kompenen untuk pembahagian ujian antigen RPR. Untuk kegunaan,kepilkan jarum

pada hujung botol dan lakarkan serta GONCANGKAN antigen ke dalam botol. Keluarkan setitis

atau dua titis antigen bagi menyingkirkan kebarangkalian yang tidak mencukupi dalam sampel

kerana kehadiran udara dalam jarum. Ia adalah sangat penting untuk mengekalkan botol dan

jarum dalam kedudukan menegak apabila pendispensan antigen. Pada akhir ujian,jarum yang

telah digunakan mestilah dibuang,dibilas dengan air suling dan dbiarkan kering. Jarum

pendispensan tidak perlu dihapuskan kerana ia boleh mengeluarkan lapisan silikon yang

menyebabkan terdapat sestengah antigen mengikut jarum yang boleh mengakibatkan pada

antigen yang dihantar tidak mencukupi.

72

Kad ujian

Kad ujian ini digunakan dengan suspensi antigen RPR terutamanya penyediaan kad berlapis

plastik. Bulatan kad ujian ini mestilah tidak pernah tersentuh dengan jari,kerana ini mungkin

boleh menyebabkan keputusan ujian tidak sah. Ujian ini hanya boleh digunakan sekali sahaja

dan kad ujian mestilah dibuang.

Pipet stirrers (100 atau 500)

Titis demi titisan serum atau plasma dipindahkan pada permukaan kad ujian dan satu titis

bersamaan kira-kira 50µl. Dalam kualitatif ujian,titisan baru mesti digunakan untuk spesimen

ujian.

Prinsip :

Sifilis adalah penyakit kelamin yang disebabkan oleh mikorganisma spiroket Treponema

pallidum. Organisma ini tidak boleh dikultur pada media tiruan,diagnosis sifilis bergantung pada

kolerasi data klinikal dengan mengesan antibodi spesifik oleh ujian serologi. Ujian VDRL

antigen “Bukan Treponemal” dimana bermaksud antibodi mengesan bukan spesifik T.

Pallidum,walaupun kehadiran kuat menunjukkan infeksi oleh organisma. Langkah-langkah

antibodi (IgG dan IgM) dihasilkan dalam respon material lipoidal yang dibebaskan daripada sel-

sel perumah yang rosak serta lipoprotein seperti material yang dilepaskan oleh spiroket.

Selepas rawatan berjaya antibodi titre akan cepat jatuh.

Ujian penyaringan serologi bagi sifilis menggunakan kardiolipin dan lesitin iaitu antigen

merupakan sampel untuk melakukan tetapi untuk menjalankan boleh membawa sebahagian

kecil keputusan positif palsu kerana seperti yang dinyatakan di atas,ujian menggunakan “Bukan

Treponema” antigen. VDRL Antigen Partikel Karbon yang telah ditukarkan VDRL Antigen

mengandungi mikro-partikular karbon1. Ini adalah rekaan yang digunakan dalam ujian

pengelompokan untuk sero-diagnosis sifilis. Patikel karbon membantu bacaan keputusan

makrokospik. Keputusan reaktif lemah lebih mudah dan senang dikenal untuk corak bukan

reaktif dimana kehadiran makroskopik yang licin dan walaupun antigen ini sesuai untuk kedua-

dua ujian slaid manual serta Ujian Reagen Automasi2.

73

Kaedah :



kembali ke kaunter





7. Tambahkan 1 titik (gunakan 'dropper') RPR Carbon Antigen pada 50 µl serum/plasma di

kad ujian

8. Putarkan sampel pada kelajuan 100 rpm selama 8 minit

9. Semak keputusan(rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika


10. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.


12. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat 301 ke kaunter.


Pada masa 8 minit pusingan terakhir keputusan positif akan menunjukkan ciri-ciri beragglutinasi

bermula dari sedikit (reaktif lemah) kepada kuat (reaktif kuat). Keputusan reaktif sangat lemah

ciri-cirinya adalah beragglutinasi kecil sekeliiling ujian periferi. Keputusan negatif tidak dapat

menunjukkan reaksi dan menunjukkan kehadiran makroskopik licin. Spesimen positif ujian

mestilah menjadi subjek kepada kajian serologi (seperti TPHA,FTA,dan ABS) setelah prosedur

kajian serologi banyak,diagnosis bagi sifilis mestilah tidak menjadi berubah kepada keputusan

satu reaktif. Untuk kaedah separuh kuantitatif,bacaan keputusan muktamad ujian akhir adalah

positif. Jika larutan ujian meningkat (1:32) ia masih menunjukkan reaktiviti kuat,pelarutan untuk

kali kedua hendaklah diteruskan sehinggalah titik akhir titre dapat ditentukan.

74

Tajuk ujian :ujian TPPA Kit.

Ujian TPPA digunakan untuk mengesahkan jangkitan sifilis setelah didapati positif bagi bakteria

sifilis dengan kaedah lain. Ujian ini mengesan antibodi untuk bakteria yang menyebabkan sifilis

dan boleh digunakan untuk mengesan sifilis disemua peringkat,kecuali pada 3 hingga 4 minggu

pertama.

Bahan dan radas :

Sel ujian : Eritrosit burung dilapisi dengan antigen T.pallidum diawet.

Sel kawalan : Eritrosit burung yang tidak dilapisi dengan antigen yang diawet.

Serum kawaln positif : (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati. Ini akan memberi titre

iaitu bersamaan 1/640:/2560 dalam ujian kuantitatif.

Serum kawalan bukan reaktif: (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati.

Masukkan kit.

Semua reagen yang dibekalkan sedia untu digunakan.

Prinsip :

Ujian treponemal adalah ujian Kromosom Treponema Pallidum zarah (TPPA),(ujian

pengesahan) untuk mengesan serologi antibodi kepada pelbagai spesies dan subspesies

Treponema patogenik,agen penyebab sifilis,puru,pintal,bejel,sifilis endemik. Ujian ini adalah

satu prosedur kromosom pasif yang berasaskan atas menunjukkan pengagglutinasian zarah gel

yang peka dengan antigen T.Pallidum oleh antibodi yang ditemui dalam serum pesakit (1-3).

Ujian ini dicadangkan sebagai ujian pengesahan untuk menggantikan asai mikroagglutinasi bagi

antibodi T.Pallidum (MHA-TP).

75

Kaedah :


2. Pastikan nama pada tiub dan borang permohonan adalah sama. Jika tidak sama, hantar

kembali ke kaunter





7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan

menggunakan 'marker'.

8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.

9. Titiskan 4 titik (100 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang

kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat

dengan menggunakan penitik.

10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.

11. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.

12. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl)

'sensitized particles' ke 'well' yang keempat.

13. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.

14. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.

15. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika


16. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian TPPA dan

borang Per. Pat 301.


18. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.

76


Interpretasi kekerapan agglutinasi.

Kekerapan partikel Bacaaan Interpretasi

Partikel konsentrasi dalam bentuk seperti ‘button’

pada tengah bekas dengan sekeliling tepi yang

lembut atau licin. _ Tidak reaktif

Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat

dengan ‘lubang’ dalam sangat kecil pada tengah

bekas dengan sekeliling tepi yang lembut atau licin. _ Tidak reaktif

Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat

dengan ‘lubang’ pada tengah dan licin disekeliling

tepi. ± Tiada

kesimpulan

Partikel cecincin besar dengan bentuk multi kasar

diluar tepi dan agglutinasi periperal,dikelilingi oleh

bulatan merah kecil. 1+ Reaktif

Partikel agglutinasi merebak keluar menyeluruh

menyelaputi bawah bekas,dikelilingi oleh bulatan

merah kecil. 2+ Reaktif

Partikel yang licin menutupi atau menyelaputi kurang

daripada seluruh bawah bekas dan mungkin

dikelilingi oleh cecincin warna pucat. 3+ Reaktif

Partikel yang licin menyelaputi seluruh bawah bekas.

4+ Reaktif

77

MAKMAL

IMUNOKIMIA

78

PENGENALAN

Makmal immunoassay di dalam unit patologi ini biasanya digunakan untuk menentukan

fungsi tiroid dan ujian-ujian biokimia yang selain daripada yang di lakukan di dalam makmal

biokimia. Ianya kerana ujian ini memerlukan mesin yang mampu beroperasi terhadap zarah-

zarah yang kecil daripada ujian biokimia yang biasa. Oleh itu, mesin yang lebih spesifik

digunakan bagi menjalankan ujian ini.

Apa yang dimaksudkan ialah ujian pengesanan hormon yang dilakukan untuk

menentukan samada pesakit berada dalam keadaan normal atau tidak

Oleh kerana ujian ini jarang menerima sampel setiap hari, ianya dilakukan secara berkala iaitu

pada hari Isnin, Rabu dan Jumaat sahaja.

Antaranya ujian-ujian yang dilakukan dalam makmal ini ialah ujian AFP, CEA, ESTROGEN,

FERRITIN, FT4, FSH, BHCG, LH, PRL, PROGESTERONE, TOTAL PSA, dan TSH

79

MAKMAL IMMUNOASSAY

80

Jalpa LojuinJTMP U32


Freda JustinJTMP U29

Hjh. NoriahJTMP U32

Siti Norlia SaihinJTMP U29

TAJUK UJIAN :

Ujian pengesan tahap AFP, CEA, ESTROGEN, FERRITIN, FT4, FSH, BHCG, LH, PRL, PROGESTERONE, TOTAL PSA, dan TSH

PROSEDUR MAKMAL

1. Terima dan semak borang permintaan ujian. Pastikan sampel dan borang yang diterima memenuhi kriteria. Tolak permohonan ujian jika sampel tidak memenuhi kriteria.

2. Rekodkan pendaftaran pada sistem LabNet.3. Empar sampel pada 4000rpm selama 5 minit4. ‘Order Sample’ pada mesin dilakukan seperti tatacara berikut

a. Pergi ke ‘Workplace’ dan pilih ‘Test Selection’b. Masukkan nombor rak, nombor posisi dan sampel IDc. Sila pilih ujian yang dipohon dan klik ‘Save’d. Masukkan sampel di bahagian ‘Rack Sampler’ dan klik perkataan ‘Start’e. Tunggu sehingga bacaan keputusan dipaparkan

5. Periksa keputusan ujian dan jika didapati keputusannya melebihi julat normal, ulang semula ujian dengan pencairan yang ditetapkan(seperti ujian BHCG, TPSA, Ferritin, dan CEA)

6. Cetak keputusan pada borang7. Rekodkan keputusan pada sistem LabNet dan buku rekod8. Semak keputusan ujian9. Pastikan ujain dijalankan dengan bacaan kawalan kualiti terbaik10. Pastikan keputusan ujian yang dihasilkan dapat menepati diagnosis yang diberikan

doktor11. Rujuk semula doktor yang memohon ujian jika diagnosis yang diberi meragukan dan

tidak menyokong keputusan ujian yang diperolehi12. Ulang semula ujian jika perlu13. Sahkan keputusan dengan menurunkan tandatangan dan cop rasmi pegawai yang

bertanggungjawab.

81

PRINSIP UJIAN

UJIAN TSH

- Thyroid-stimulating hormone (juga dikenali sebagai TSH atau thyrotropin) yang merupakan hormon yang menyebabkan kelenjar tiroid untuk merembeskan thyroxine(T4) dan triiodothyronine(T3). Dimana ianya akan menstimulasikan metabolism hampir setiap tisu yang terdapat di dalam badan.

Sumber patolog5TSH

level

Level

hormon

tiroid

Penyakit yang disebabkan oleh keadaan

Hypothalamus/pituitary Tinggi Tinggi Adenoma atau thyroid hormone resistance

Hypothalamus/pituitary Rendah Rendah Hypopituitarism

Thyroid Rendah Tinggi Hyperthyroidism atau Graves' disease

Thyroid Tinggi Rendah

Congenital

hypothyroidism (cretinism), hypothyroidism atau Hashimoto's

thyroiditis

UJIAN AFP

- Alpha-Fetal Protein, merupakan aprotein yang terdapat dalam badan manusia yang dikodkan

oleh gen AFP. AFP juga merupakan major plasma protein yang dihasilkan di kantung yolka dan

hati ketika pembesaran fetal.

UJIAN CEA

- Carcinoembryonic antigen (CEA) merupakan glikoprotein yang terlibat dalam pelekatan sel. Ianya biasa dihasilkan semasa tumbesaran fetal, akan tetapi penghasilannya akan berhenti sebelum kelahiran bayi.

82

UJIAN IRON FERRITIN

- Ferritin merupakan protein intrasellular yang menyimpan iron dan melepaskannya dalam keadaan terkawal. Jumlah ferritin yang disimpan adalah bersamaan dengan jumlah iron yang disimpan. Protein ini dihasilkan oleh semua organisma hidup.

UJIAN PROLACTIN

- Merupakan sejenis hormon peptida yang berfungsi sebagai sitokin dan memainkan peranan penting dalam tindak balas imun.

UJIAN PROGESTERONE

- Merupakan hormon steroid yang terlibat dalam kitaran haid, pregnansi dan pembentukan embryo bayi manusia dan juga spesies-spesies lain.

UJIAN ESTROGEN

- Merupakan hormon seksual yang terlibat dalam menghasilkan sel-sel gamet di dalam sistem reproduktif. Berikut merupakan tahap estrogen :

-

I

UJIAN TOTAL PSA

83

Reference ranges for serum estradiol

Patient type Lower limit Upper limit Unit

Adult male

50 200 pmol/L

14 55 pg/mL

Adult female ( follicular phase , day 5)

7095% PI (standard )

50095% PI

pmol/L

11090% PI (used in diagram )

22090% PI

19 (95% PI) 140 (95% PI)

pg/mL

30 (90% PI) 60 (90% PI)

Adult female ( preovulatory peak)

400 1500 pmol/L

110 410 pg/mL

Adult female( luteal phase )

70 600 pmol/L

19 160 pg/mL

Adult female - free(not protein bound)

0.5 9 pg/mL

1.7 33 pmol/L

Post-menopausal female

N/A < 130 pmol/L

N/A < 35 pg/mL

http://en.wikipedia.org/wiki/Luteal_phase

http://en.wikipedia.org/wiki/Preovulatory

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Estradiol_during_menstrual_cycle.png

http://en.wikipedia.org/wiki/Prediction_interval

http://en.wikipedia.org/wiki/Prediction_interval

http://en.wikipedia.org/wiki/Follicular_phase

http://en.wikipedia.org/wiki/Follicular_phase

http://en.wikipedia.org/wiki/Reference_ranges_for_blood_tests

- Merupakan glikoprotein didalam badan manusia yang dikodkan oleh gen kallikrein-3 (KLK3). KLK3 ialah salah satu bahagian kallikrein yang berkait dengan peptidase yang dirembeskan oleh sel epithelial di dalam kelenjar prostat.

ALAT RADAS

- Cobas e 411

84

MAKMAL

BIOKIMIA

PENGENALAN

Dalam makmal biokimia di Hospital Nukleus Labuan terbahagi kepada dua iaitu makmal

biokimia dan makmal immunoassay. Kaunter penerimaan spesimen di makmal ini terbahagi

kepada dua iaitu kaunter wad dan kaunter untuk pesakit luar terutamanya dari KP1 (Klinik

Pakar 1), KP2 (Klinik Pakar 2) dan KP3 (Klinik Pakar 3). Di kaunter wad, spesimen yang

diterima adalah dari semua bahagian wad yang terdapat di dalam Hospital Nukleus Labuan dan

dari OPD (Out Patent Department) serta beberapa lagi dari Klinik lain. Spesimen yang telah

diterma dari kaunter akan diasingkan mengikut bahagian – bahagian tertentu. Dalam makmal

biokimia ia menjalankan beberapa jenis ujian seperti ujian Alanine Transferase (ALT), ujian

Alkaline Phosphate (ALP), ujian Aspartate Transferase (AST), ujian Amylase, ujian Creatinine

Kinase (CK), ujian Lactate Dehydrogenase (LDH), ujian total protein, ujian Albumin, ujian

Globulin, ujian Bilirubin, ujian Kalcium, ujian Kolesterol, ujian Elektrolit (Na+, K+, Cl-), ujian

85

Glukosa, ujian Iron, ujian Fosfat, ujian Urea, ujian Urik asid,ujian Lipid Profil, ujian Liver

Function Test (LFT), ujian High Density Lipoprotein (HDL), ujian Low Density Lipoprotein (LDL),

ujian Serum Trigliserida dan ujian Magnesium. Semua ujian ini dijalankan dalam satu mesin

iaitu menggunakan mesin ARCHITECTplus c4000. Ujian HbA1C juga dijalankan dalam makmal

ini dan menggunakan mesin yang sama tetapi hanya kaki tangan makmal saja yang melakukan

ujian HbA1C kerana ia memerlukan proses kerja yang lama dan berhati – hati. Selain ujian di

atas, terdapat juga ujian Baby’s Bilirubin yang dijalankan pada mesin bilirubinometer khas bagi

baby yang baru lahir. Terdapat juga ujian Blood Gases (ABG) yang dilakukan dalam makmal

biokimia menggunakan mesin Cobas b221 yang dilakukan oleh kaki tangan makmal sahaja.

MAKMAL BIOKIMIA KLINIKAL

86

Jalpa LojuinJTMP U32


Freda JustinJTMP U29

Hjh. NoriahJTMP U29

Siti Norlia SaihinJTMP U29

Tajuk Ujian : Ujian Alanine Transferase (ALT).

Alanine Transferase merupakan satu ujian yang mengukur jumlah enzim di dalam darah. ALT

banyak terdapat terutamanya di dalam hati,dan jumlah kecil juga boleh di dapati dalam buah

pinggang,jantung,otot serta pankreas. Sebelum ini,ALT disebut sebagai serum glutamik piruvik

transaminase (SGPT). ALT diukur untuk memastikan samada fungsi hati telah rosak atau

berpenyakit. Tahap rendah ukuran ALT biasanya diketahui di dalam darah. Tetapi,apabila

fungsi hati rosak atau berpenyakit,ia akan membebaskan ALT ke dalam aliran darah yang

menjadikan tahap ukuran bagi ALT meningkat. Kebanyakkan penigkatan dalam tahap ALT

adalah disebabkan oleh berlakunya kerosakkan pada hati. Ujian ALT yang dilakukan beserta

dengan ujian-ujian lain yang memeriksa kerosakkan hati,termasuklah Aspartat

Aminotransferase (AST),Fosfatase alkali,Laktat dehidrogenase (LDH),dan bilirubin. Tahap

kedua-dua ALT dan AST adalah ujian yang boleh dipercayai untuk kerosakn hati.

87

Bahan dan Radas :

I. Pengempar.

II. Mikropipet.

III. Mesin ARCHITECT c4000.

IV. Rek.

V. Cup ARCHITECT.

Reagen :

I. B – NADH.

II. Laktat Dehidrogenase.

III. L – Alanin.

IV. a – Ketoglutarik Asid.

Sampel :

I. Serum .

Prinsip :

ALT merupakan enzim yang dijumpai terutamanya pada sel hati dan dalam kuantiti yang sedikit

dalam buah pinggang, jantung dan otot rangka. Ia selalunya digunakan bersama – sama AST

bagi mengukur fungsi hati dan mendiagnos penyakit yang berkaitan dengan hati.

Kaedah ujian :

I. Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan disertakan borang

yang mempunyai maklumat pesakit yang lengkap.

II. Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik

berkenaan akan diberitahu.

III. Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran

pesakit akan dilakukan.

IV. Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.

88

Prosedur :

I. Serum pesakit di ambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.

II. Cup di masukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.

III. Borang pesakit diambil, dan kemasukan data pesakit dilakukan pada mesin

ARCHITECT c4000.

IV. Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek

contonnya ‘Y101’ dan masukkan nombor kedudukan sampel contonnya ‘1’.

V. Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama

pesakit dan tekan ‘DONE’.

VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya ALT, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.

VII. Tunggu sehingga keputusan keluar.

VIII. Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan ke dalam ‘LabNet’ sebelum keputusan

pesakit dikeluarkan.


Julat Normal :

ALT : 0 – 55

Tajuk Ujian : Alkaline Phosphatase (ALP).

Fosfatase alkalin manusia terdiri daripada sekurang-kurangnya 5 kumpulan isoenzim

khusus,tisu yang menjadi pemangkin hidrolisis fosfat mono-ester pada pH alkali. Pelbagai

proses penyakit boleh menyebabkan pengeluaran kuantiti yang meningkatkan fosfatase alkali

ke dalam darah.

Bahan dan Radas :

89

I. Pengempar

II. Mikropipet

III. Mesin ARCHITECT c4000

IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. 2 – Amino – 2 – methilpropanal

II. Magnesium

III. Zink Sulfat

IV. HEDTA

V. 4 – Nitrophenil Fosfat

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Alkalin Fosfatase merupakan enzim yang terdapat dalam hati, salur hempedu dan tulang. Paras

ALP yang tinggi ditemui pada kanak – kanak, penyakit hati, penyumbatan hempedu dan

kegagalan tulang.

Kaedah ujian :

I. Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang






90


Prosedur :


II. Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya ALP, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.


VIII. Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan

pesakit di keluarkan.


Julat Normal :

ALP : 40 – 150 U/L

Tajuk ujian : Aspartat Transferase (AST).

Aspartat transferase (AST) juga dikenali sebagai aspartat aminotransferase

(AspAT/asat/Appeals) atau serum glutamik oxaloasetik transaminase (SGOT),fosofat piridoxal

(PLP) yang bergantung kepada transaminise enzim. AST menjadi pemangkin pemindahan

berbalik kumpulan α-amino antara aspartat dan glutamat serta merupakan enzim penting dalam

metabolisme asid amino. AST terdapat di dalam hati,jantung,otak rangka,buah pinggang,otak

dan sel-sel darah merah. Biasanya diukur secara klinikal sebagia penanda untuk kesihatan hati.

91

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. B – NADH

II. Malate Dehydrogenase

III. Lactate Dehydrogenase

IV. L – Aspartate

V. a – Ketoglutarate

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

AST merupakan enzim yang boleh ditemui terutamanya pada hati, jantung dan otot

rangka. Enzim ini terhasil apabila sel – sel tercedera dan meningkat mengikut tahap

kerosakkan.

Kaedah ujian :





92




Prosedur :


II. Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya AST, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

AST : 5 – 40 U/L

Tajuk Ujian : Amilase.

Amilase merupakan satu enzim yang membantu dalam pencernaan karbohidrat. Ia dihasilkan di

dalam pankreas dan kelenjar yang menghasilkan air liur. Apabila pankreas dijangkiti atau

terdapat inflamasi,enzim amilase akan dirembes masuk ke dalam darah. Ujian ini juga boleh

dilakukan untuk mengukur tahap enzim di dalam darah serta boleh diukur dengan

menggunakan ujian urin.

93

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. 2 – Chloro – 4 – Nitrophenyl – a – D – Maltotrioside

II. Sodium Chloride

III. Calcium Acetate

IV. Potassium Thiocyanate

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Amilase merupakan enzim yang dihasilkan terutamanya oleh kelenjar air liur dan pancreas

(satu organ yang terletak di belakang perut) yang membantu dalam memecahkan karbohidrat

dan kanji yang kita makan kepada gula ringkas. Ini adalah penting kerana gula ringkas akhirnya

ditukar kepada glukosa. Ujian amilase bertujuan untuk mengukur amilase dalam darah. Amilase

biasanya hadir dalam darah dengan jumlah yang kecil. Walaubagaimanapun jumlah

peningkatan boleh dilepaskan ke dalam darah apabila pancreas mengalami kecederaan atau

disekat.

Kaedah ujian :





94




Prosedur :


II. Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Amy (amylase), setelah itu tekan

‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Amilase : 20 – 160 U/L

Tajuk Ujian : Kreatinin Kinase (CK).

Kreatinin Kinase (CK,CPK) adalah satu enzim yang dijumpai terutamanya di dalam hati dan oto-

otot rangka dan sehingga ke tahap yang lebih rendah di dalam otak. Kecederaan yang ketara

95

kepada mana-mana struktur-struktur ini akan membawa kepada peningkatan yang diukur dalam

tahap CK.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. CK (Creatinine Kinase)

II. CPK (Creatine Phosphoskinase)

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Kreatinin merupakan bahan buangan yang dihasilkan di otot rangka dan dikumuhkan melalui

ginjal. Ia merupakan ujian yang khusus bagi fungsi ginjal dan selalunya diukur bersama – sama

urea untuk menentukan fungsi ginjal. Arasnya akan meningkat apabila terdapat kerosakan pada

tisu – tisu ginjal.

Kaedah ujian :





96




Prosedur :


II. Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya CK, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Kreatinin Kinase (CK) : Lelaki 30 – 200 U/L

Perempuan 29 – 168 U/

Tajuk Ujian : Laktat dehidrogenase (LDH).

Dehidrogenase laktat juga dipanggil sebagai laktik dehidrogenase,atau LDH. Merupakan enzim

yang terdapat dalam hampir semua tisu dalam tubuh. Ia memainkan peranan penting dalam

respirasi sel,proses glukosa (gula) daripada makanan yang ditukarkan kepada tenaga

digunakan untuk sel-sel kita. Walaupun LDH banyak terdapat dalam sel-sel tisu,tahap enzim

97

darah biasanya adalah rendah. Apabila tisu rosak oleh kecederaan atau penyakit,ia akan

mengeluarkan peningkatan LDH dalam darah termasuk penyakit hati,serangan

jantung,anemia,trauma otot,keretakkan tulang,barah dan jangkitan seperti meningitis,ensefalitis

serta HIV.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Diethanolamin

II. L - Litium Laktat

III. B – NAD

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Dehidrogenase laktat adalah enzim hidrogen pemindahan yang katales pengoksidaan L-

laktat piruvat dengan pengantaraan NAD+ sebagai hidrogen.

Kaedah ujian :





III. Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan permohonan ujian dan pendaftaran


98


Prosedur :

I. Serum pesakit diambil dan dimasukkan ke dalam cup menggunakan mikropipet 350ml.

II. Cup di masukkan ke dalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LDH, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.




Interpretasi ujian:

Julat Normal :

LDH : 125 – 243 U/L

Tajuk Ujian : Protein (Albumin & Globulin).

Ujian total protein adalah mengukur jumlah dua jenis protein yang terdapat dalam bahagian

cecair darah iaitu albumin dan globulin. Protein adalah bahagian penting dalam semua sel-sel

dan tisu. Sebagai contoh,albumin membantu mencegah cecair dari dirembeskan keluar dari

saluran darah. Globulin merupakan sebahagian penting dalam sistem imun tubuh.

Bahan dan radas :

I. Pengempar

99

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Sodium Potassium Tartrat

II. Sodium Hidrosida

III. Potassium Iodid

IV. Copper Sulfate

V. Bromcresol Purple

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Albumin dan globulin merupakan protein utama dalam darah. Albumin dibentuk di hati dan 50 –

60% secara keseluruhan protin di dalam serum. Kedua – dua albumin dan globulin berguna

untuk mengukur status pemakanan seseorang individu. Kedua – duanya juga berguna untuk

mendiagnos penyakit hati, gastrointestinal, buah pinggang, ketaknormalan protein, kanser dan

kegagalan sel darah. Peningkatan paras globulin boleh disebabkan inflamasi dan infeksi yang

kronik.

Kaedah ujian :







IV. Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.

100

Prosedur :


II. Cup di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya pro (protein), Alb (albumin) dan Glo

(globulin), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Total protein : 64 – 87 g/L

Albumin dan Globulin : 35 – 50 g/L

Tajuk Ujian : Bilirubin (Total bilirubin dan Direct Bilirubin).

Pigmen yang dihasilkan oleh hati yang akan dikeluarkan dalam hempedu yang menyebabkan

perubahan warna kuning kulit dan mata apabila ia terkumpul di dalam organ-organ. Tahap

bilirubin boleh diukur oleh ujian darah dan paling kerap tinggi pada pesakit yang menghidap

penyakit hati atau tersumbat aliran hempedu.

101

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Surfaktan

II. HCI

III. 2, 4 – dikloroanilin

IV. Sodium Nitrit

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Bilirubin merupakan pigmen kekuningan dalam hempedu. Ianya dibentuk hasil daripada

pemecahan haemoglobin dalam sel darah merah dan diubah secara kimia oleh hati seterusnya

dirembes sebagai hempedu. Peningkatan paras bilirubin boleh diakibatkan oleh hati, hempedu

atau kegagalan SDM dan secara klinikal mengakibatkan jaundice.

Kaedah ujian :



102






Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya TBIL (total bilirubin) dan DBIL (direct

bilirubin), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Total Bilirubin : 3.4 – 20.5 umol/L

Direct Bilirubin : 0 – 8.6 umol/L

Tajuk Ujian : Bilirubin bayi (Baby’s bilirubin).

103

Satu ujian bilirubin mengukur jumlah bilirubin dalam sampel darah. Bilirubin adalah bahan yang

berwarna kuning keperangan yang dijumpai dalam hempedu. Ia dihasilkan apabila hati

rosak,sel-sel darah merah yang lama. Bilirubin kemudian dikeluarkan daripada badan melalui

feses (najis) dan memberikan feses warna coklat yang biasa.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet

III. Mesin ‘REICHERT UNISTAT’ BILIRUBINOMETER’

IV. Kuvet

Reagen :

I. Kontrol mesin ‘352’

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Bilirubin meter diagnostik dilakukan secara in vitro digunakan untuk menentukan jumlah

kepekatan bilirubin pada bayi yang baru lahir dengan ciri – ciri optik.

Kaedah ujian :







104


Prosedur :

I. Buka penutup dan masukkan kontrol mesin ‘352’.

II. Tekan ‘START’

III. Tunggu sehingga bacaan keluar pada skrin ‘352’, sekiranya bacaan yang keluar tidak

sama, keluarkan kontrol mesin dan ulang semula sehinggalah bacaan kontrol mesin

sama dengan kontrol ‘352’ keluar.

IV. Ambil sampel serum bayi dan masukkan ke dalam kuvet baru menggunakan mikropipet.

V. Masukkan kuvet sampel tadi ke dalam mesin.

VI. Tekan ‘START’

VII. Tunggu sehingga bacaan keluar pada skrin mesin.

VIII. Bacaan diambil dan keputusan di ambil dan direkodkan kedalam ‘LabNet’.

Interpretasi ujian:

Julat Normal :

Baby’s bilirubin : <256.5 umol/L

Tajuk Ujian : Kalsium dan Fosfatase.

Kalsium adalah mineral yang paling banyak di dalam badan. Ia adalah penting untuk

pemmbangunan dan penyelenggaraan tulang dan gigi yang kuat. Kalsium juga membantu

jantung,saraf,otot dan lain-lain system badan berfungsi dengan betul. Ia mungkin lebih dikenali

untuk membantu mencegah osteoporosis. Lasium diserap dan digunakan dengan

betul,termasuk magnesium,fosforus dan terutamanya vitamin D dan K.

105

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Calcium Phosphatase

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Kalsium dan Phosphorus merupakan ujian yang berguna bagi mendiagnos ginjal dan

penyakit tulang (skeletal diseases). Arasnya bertentangan antara satu sama lain dan dikawal

oleh hormone paratirod.

Kaedah ujian :








106

Prosedur :


II. Cup dimasukkan ke dalam rek dan nombor rek diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Cac (calcium) dan po4 (phosphate),

setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.




Interpretasi ujian:

Julat Normal :

Calcium : 2.10 – 2.55 mmol/L

Phosphate : 0.74 – 1.52 mmol/L

Tajuk Ujian : Kolesterol (Total)

Ujian kolestrol juga dikenali sebagai profil lipid iaitu ujian darah yang boleh mengukur jumlah

kolesterol dan trigliserida dalam darah. Satu ujian kolesterol boleh membantu menentukan

risiko aterosklerosis,penumpukan plak dalam arteri yang boleh membawa kepada arteri yang

sempit atau terhalang di dalam seluruh tubuh. Paras kolesterol yang tinggi biasanya tidak

menyebabkan tanda-tanda atau gejala tetapi adalah risiko untuk penyakit jantung yang ketara.

107

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. 4-Aminoantipirin

II. Sodium kolat

III. Kolesterol esterase

IV. Kolesterol osidase

V. Horseradish peroksidase

VI. ρ-Hidroxybenzene sulfonate

VII. Surfaktan

VIII. Buffer

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Kolesterol darah diangkut dalam bentuk protein kompleks terutamanya oleh LDL, VLDL dan

HDL –Kolesterol. Aras kolesterol darah menentukan kebarangkalian seseorang itu menghidap

‘cardiovascular diasease’ dan juga berguna untuk menilai fungsi hati dan thyroid. Total

kolesterol merupakan komponen penting struktur sel membran, hormon steroid dan garam

hempedu. Walaubagaimanapun, peningkatannya boleh mengakibatkan penimbunan pada

dinding salur darah arteri yang boleh menyebabkan penyempitan dan penyumbatan pada salur

darah (artherosclerosis).

108

Kaedah ujian :







IV. Sampel (plan tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.

Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Chol (kolesterol), setelah itu tekan

‘ADD ORDER’.




Interpretasi ujian:

Julat Normal :

Kolesterol : 0 – 5.7 mmol/L

109

Tajuk Ujian : Elektrolit (Na + ,K + ,CI)

Elektrolit adalah bahan yang menjadi ion dalam larutan dan memperoleh keupayaan untuk

mengalir elektrik. Elektrolit hadir di dalam tubuh manusia,dan kesimbangan elektrolit di dalam

badan kita adalah penting untuk fungsi normal sel-sel dan organ-organ kita. Elektrolit biasanya

diukur melalui ujian darah termasuk natrium,kalium,klorida,dan bikarbonat. Fungsi dan nilai julat

normal bagi elektrolit-elektrolit ini adalah seperti yang dinyatakan dibawah.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Sodium

II. Potassium

III. Klorida

IV. Buffer

V. Clearning fluid

VI. Sodium Azide

VII. Lyophilized cleaning solution

VIII. Prozymo 10

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

110

Aras elektrolit darah mempengaruhi penyerapan dan keseimbangan air dalam tubuh. Berbagai-

bagai keadaan klinikal yang dapat mempengaruhi arasnya dalam tubuh seperti penyakit buah

pinggang, cirit-birit (diarrhoea), kegagalan gastrointestinal, ubat-ubat tertentu contohnya dadah

hipertensi, infeksi yang teruk atau kecederaan dan juga sesetengah ketaknormalan horman.

Elektrolit merupakan komponen yang penting dalam cecair tubuh dan keseimbangannya

membolehkan berbagai sel dan organ berfungsi dengan normal.

Kaedah ujian :







IV. Sampel (plan tube) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit

Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Na (sodium), K (potassium) dan Cl

(creatinine), setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.




111


Julat Normal :

Sodium : 138 – 145 mmol/L

Potassium : 3.5 – 5.1 mmol/L

Kreatinin : Lelaki 63.6 – 110.5 mmol/L

Perempuan 50.4 – 98.1 mmol/L

Tajuk Ujian : Glukosa.

Glukosa adalah sejenis gula yang mudah (monosakarida 1). Badan mengeluarkan daripada

protein,lemak dan karbohidrat dimana ia merupakan sebahagian yang terbesar,glukosa diserap

terus ke dalam darah dari usus dan menyebabkan peningkatan yang cepat dalam glukosa

darah. Glukosa juga dikenali sebagai dextrose. Glukosa dibawa melalui saluran darah untuk

member tenaga kepada semua sel-sel badan. Sel-sel tidak boleh menggunakan glukosa tanpa

bantuan insulin.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. NAD

II. G – 6 – PDH

112

III. Heksokinase

IV. ATP – 2Na

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Aras glukos dalam darah mengesan perubahan dalam metabolisma glukosa. Kebiasaannya

digunakan untuk mengdiagnos diabetes mellitus atau bagi menilai tahap pengawalan glukosa.

Perubahan arasnya dalam darah bergantung kepada aktiviti individu dan juga jangkamasa

selepas makan. Aras glukos (dalam keadaan puasa) digunakan sebagai pengukuran baseline.

Aras postprandial (pengukuran selepas 2 jam pengambilan makanan), ujian penyaringan untuk

diabetes dan kerapkali digunakan bagi menilai keberkesanan rerapi insulin.

Kaedah ujian :








Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.

113





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Gluc (glucose), setelah itu tekan

‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Fasting (FBS) : 3.80 – 5.90 mmol/L

Random (RBS) : 5.0 – 10.0 mmol/L

2HPP : 6.7 – 8.0 mmol/L

Tajuk Ujian : Urea.

Urea jugs dipanggil sebagai karbamida,sebatian kimia organik dan pada dasarnya adalah sisa

yang dihasilkan oleh tubuh selepas metabolisme protein. Secara am nya,sebatian yang terhasil

apabila hati rosak protein atau asid amino dan ammonia,buah pinggang kemudian akan

memindahkan urea daripada darah air kencing. Nitrogen tambahan dibuang dari badan melalui

urea dan kerana ia adalah sangat larut maka ia merupakan satu proses yang sangat cepat.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

114

Reagen :

I. NADH

II. α-Ketoglutaric Acid

III. urease (jack bean)

IV. GLD (Beef liver)

V. Adenosine Diphosphate

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Urea merupakan hasil akhir metabolisme protein dan asid amino. Ia mengukur fungsi ginjal dan

hidrasi. Walaubagaimanapun, ianya tidak boleh digunakan secara bersendirian bagi penentuan

fungsi ginjal (hanya untuk ujian penyaringan sahaja). Peningkatan aras urea boleh berlaku pada

individu yang mengambil diet kaya protein.

Kaedah ujian :








115

Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya urea, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.





Julat Normal :

Urea : 1.7 – 8.3 mmol/L

Tajuk Ujian : Urik Asid.

Serum asid uric adalah ukuran berapa banyak asid urik yang hadir dalam darah. Ini biasanya

dinilai semasa ‘bloodwork’ rutin,dimana beberapa nilai-nilai untuk pelbagai sebatian dalam

darah ditentukan untuk member penerangan tentang keadaan kesihatan pesakit. Sebatian ini

dihasilkan sebagai hasil sampingan pemecahan sebatian yang dikenali sebagai purin. Purin

didapati dalam produk haiwan seperti daging,makanan laut,hati dan ia adalah sebahagian diet

biasa. Asid uric yang dihasilkan oleh metabolisme makanan yang dinyatakan dalam air kencing

116

melalui buah pinggang. Paras yang sangat rendah dikenali sebagai hipouriksemia serta

peringkat paras tinggi dikenali sebagai hiperuriksemia.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. 4 – Aminoantipyrine

II. TBHB

III. Urikase

IV. Perosidase

V. TRIS Buffer

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Urik asid merupakan hasil akhir metabolisma urin pada manusia. Ianya disentisisdi hati dan

diangkut melalui darah ke ginjal untuk dituras, sebahagiannya akan diserap, dirembes dan

akhirnya di keluarkan melalui urin. Asid urik larut sedikit di dalam air dan kristal urea terbentuk

secara semulajadi dalam urin yang mempunyai kepekatan urea yang tinggi bagi membentuk

batu karang dalam ginjal (urea kidney stone). Gout merupakan sindrom klinikal bagi pesakit

yang menghidap asid urik yang tinggi dalam darah dan mengakibatkan penimbunan kristal urea

pada tisu lembut, terutamanya pada sendi mengakibatkan respon inflamasi. Arasnya dalam

serum darah juga dipengaruhi oleh jumlah asid urik yang dihasilkan dan kecekapan eksresi

117

ginjal. Pesakit yang mengalami paras asid urik yang tinggi. hendaklah mengambil diet rendah

purina. Makanan yang tinggi kandungan purina ialah organ dalaman, ligmen, anchovies,

cendawan dan yis.

Kaedah ujian :








Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya uric, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

118

Urik Asid : Lelaki 210 – 420 umol/L

Perempuan 150 – 350 umol/L

Tajuk Ujian : High Density Lipid (HDL).

HDL atau lipoprotein berketumpatan tinggi,biasanya dikenali sebagai ‘kolesterol yang baik’.

Tahap HDL di dalam badan sepatutnya menjadi agak tinggi dan diperolehi dengan menjalankan

ujian darah yang mudah. HDL membantu kolesterol yang berlebihan masuk semula ke dalam

hati untuk perkumuhan melalui sistem gastrousus. HDL dikenali sebagai kolesterol baik kerana

ia membantu dalam penyingkiran kolesterol yang boleh menyekat arteri dan mengurangkan

aliran darah.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Kolesterol Oksidase (E.Coli)

II. Peroksidase (Horseradish)

III. N,N-bis (4-sulphobutyl)-m-toluidine-sodium (DsBmT)

IV. Accelerator

V. Ascorbic oxidase (Curabita Sp.)

Sampel :

I. Serum

119

Prinsip :

HDL kolesterol juga dikenali sebagai kolesterol yang baik yang berfungsi sebagai pengangkut

bagi mengeluarkan kolesterol yang berlebihan dari sel. Nilainya boleh meningkat dengan

melakukan senaman.

Kaedah ujian :








Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya HDL, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.


120




Julat Normal :

HDL : 0.9 – 1.7 mmol/L

Tajuk Ujian : Low Density Lipid (LDL).

LDL adalah kolesterol lipoprotein berkepadatan rendah biasanya dikenali sebagai kolesterol

‘jahat’. Ujian LDL adalah merupakan ujian yang pertama dalam menentukan samaada seorang

individu adalah berisiko untuk penyakit jantung atau tidak dan tahap LDL kerap menjadi punca

utama dalam diet merendahkan kolesterol serta tahap LDL tinggi juga sering dikaitkan dengan

peningkatan dalam risiko penyakit jantung.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Diethanolamine

II. L-Lactate,Lithium salt

121

III. Sodium Azide

IV. β-NAD

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

LDL kolesterol dikenali sebagai kolesterol yang tidak baik dimana kolesterol yang berlebihan

akan diangkut oleh LDL ke dinding arteri dan mengakibatkan (artherosclerosis).

Kaedah ujian :








Prosedur :



pesakit.


ARCHITECT c4000.



122



VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LDL, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

LDL : <2.9 ***invalid value if Trig >3.80 mmol/L

Tajuk Ujian : Triglyceride (TG).

Trigliserida adalah sejenis lemak dalam aliran darah dan tisu lemak. Lemak jenis ini boleh

menyumbang kepada pengerasan dan penyempitan arteri dan menyebabkan risiko untuk

serangan jantung serta strok adalah sangat tinggi. Penyakit yang boleh menyebabkan

trigliserida tinggi juga adalah penyakit seperti kencing manis,obesiti,kegagalan buah pinggang

untuk berfungsi dengan baik serta alkohol. Tahap kolesterol juga menjadi tinggi jika trigliserida

tinggi. Trigliserida diukur bersama-sama dengan kolesterol sebagau daripada ujian darah.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

123

Reagen :

I. ATP

II. Mg2+

III. 4-Chlorophenol

IV. 4-Aminoantipyrine

V. Peroxidase (Horseradish)

VI. GK (Microbial)

VII. GPO (Microbial)

VIII. Lipoprotein Lipase (Microbial)

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Trigliserides merupakan fatty asid yang ditemui dalam aliran darah. Aras yang meningkat atau

tinggi boleh mengakibatkan kebarangkalian yang tinggi untuk menghidap sakit jantung.

Pancreatitis juga boleh meningkatkan aras trigliserides.

Kaedah ujian :








Prosedur :

124



pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contphnya Trig (triglycerides), setelah itu tekan

‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Trigliserida : 0.5 – 2.3 mmol/L

Tajuk Ujian : Magnesium.

Ujian magnesium merupakan satu ujian yang digunakan untuk mengukur tahap magnesium

dalam darah. Tahap magnesium abnormal yang paling kerap dikesan iaitu dalam penyakit yang

menyebabkan proses penyahtinjaan keluar yang tidak baik atau magnesium yang berlebihan

oleh buah pinggang atau kerosakkan disebabkan penyerapan dalam usus. Tahap magnesium

boleh diukur sebagai sebahagian daripada penilaian keterukan masalah buah pinggang atau

diabetes yang tidak terkawal serta boleh membantu dalam diagnosis gangguan gastrousus.

125

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. TRIS Buffer

II. Arsenazo Dye

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Magnesium menggunakan kaedah pewarna arsenazo yang mengikat preferentially dengan

magnesium. Keserapan arsenazo magnesium kompleks diukur pada 572 nm dan adalah

berkadar dengan kepekatan magnesium yang hadir dalam sampel gangguan kalsium yang

dihalang oleh agen pengkelat kalsium.

Kaedah ujian :








126

Prosedur :


II. Cup dimasukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Mg (magnesium), setelah itu tekan

‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Magnesium : 0.66 – 1.07 mmol/L

Tajuk Ujian : Profil Lipid.

Profil lipid merupakan satu ujian yang kerap dilakukan untuk menentukan risiko penyakit

jantung koronari. Ini adalah ujian yang telah dilkakukan untuk mengesan samada seseorang itu

berkemungkinan telah mengalami serangan jantung atau strok yang disebabkan oleh

penyumbatan saluran darah atau pengerasan arteri (atherosclerois).

Bahan dan Radas :

127

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. 4-Aminoantipirin

II. Sodium kolat

III. Kolesterol esterase

IV. Kolesterol osidase

V. Horseradish peroksidase

VI. ρ-Hidroxybenzene sulfonate

VII. Surfaktan

VIII. Buffer

IX. ATP

X. Mg2+

XI. 4-Chlorophenol

XII. 4-Aminoantipyrine

XIII. Peroxidase (Horseradish)

XIV. GK (Microbial)

XV. GPO (Microbial)

XVI. Lipoprotein Lipase (Microbial)

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Trigliserida adalah sejenis lemak yang tedapat di dalam darah. Lemak adalah yang paling

dipengaruhi oleh makanan yang diambil seperti gula, lemak atau alkohol tetapi ia juga boleh

menjadi tinggi disebabkan kerana masalah berat badan, mempunyai tiroid atau penyakit hati

128

dan keadaan genetik. Tahap trigliserida yang tinggi berkaitan dengan risiko penyakit jantung

dan pembuluh darah yang lebih tinggi.

Kolesterol adalah sejenis lemak yang ditemui dalam darah yang dihasilkan oleh badan dan juga

datang daripada makanan yang dimakan. Kolesterol yang diperlukan oleh badan untuk

mengekalkan kesihatan sel – sel badan. Jika terlalu banyak kolesterol boleh membawa kepada

penyakit arteri kornoari.

LDL adalah lipoprotein (kombinasi lemak dan protein) yang dijumpai dalam darah. Ia dikenali

sebagai kolesterol jahat kerana ia mengambil kolesterol dari darah dan dibawa kepada sel –

sel. Tahap LDL yang tinggi boleh menyebabkan risiko penyakit jantung.

HDL adalah lipoprotein (kombinasi lemak dan protein) yang ditemui dalam darah. Ia dikenali

sebagai kolesterol baik kerana ia menghapuskan kolesterol yang berlebihan dalam darah.

Tahap HDL tinggi berkaitan dengan risiko yang rendah kepada penyakit jantung.

Kaedah ujian :

I. Untuk melakukan ujian lipid profile, pesakit hendaklah berpuasa bermula jam 12 tengah

malam sehingga hari keesoknya tanpa makan atau minum kecuali air putih sebelum

pengambilan darah dilakukan.

II. Sampel yang diterima mestilah mengandungi label yang lengkap dan besertakan borang


III. Bagi borang atau sampel yang tidak lengkap, akan ditolak dan wad atau klinik


IV. Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran


V. Sampel (plen tiub) yang diterima akan diempar pada 4000rpm selama 5 minit.

Prosedur :



pesakit.

129


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya lipid, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





Julat Normal :

Trigliserida : 0.5 – 2.3 mmol/L

Kolesterol : 0 – 5.7 mmol/L

HDL : 0.9 – 1.7 mmol/L

LDL : <2.9 ***invalid value if Trig >3.80 mmol/L

Tajuk Ujian : Fungsi Hati (Liver Function Test).

Ujian fungsi hati (LFT) merupakan satu kumpulan ujian darah yang mengesan keradangan dan

kerosakan pada hati. Ujian fungsi hati termasuklah ALT,AST,alkalin fosfat ,INR,albumin dan

bilirubin.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

130

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Sodium Potassium Tartrate

II. Sodium Hidrosida

III. Potassium Iodide

IV. Copper Sulfate

V. Bromcresol Purple

VI. Surfaktan

VII. HCI

VIII. 2, 4 – dichloroaniline

IX. Sodium Nitrit

X. Surfaktan

XI. B – NADH

XII. Laktate Dehidrogenase

XIII. L – Alanin

XIV. a – Ketoglutarik Asid

XV. 2 – Amino – 2 – methilpropanal

XVI. Magnesium

XVII. Zink Sulfat

XVIII. HEDTA

XIX. 4 – Nitropenil Fosfat

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

131

Ujian fungsi hati (LFT) merupakan satu kumpulan ujian darah yang mengesan keradangan dan

kerosakan pada hati. Ujian fungsi hati (LFT) juga termasukklah bilirubin, ALT, ALP, totol protein,

albumin dan globulin. Secara amnya LFT merujuk kepada satu kumpulan ujian darah bagi

mengukur enzim atau protein tertentu dalam darah manusia. Ujian ini digunakan untuk

membantu dalam pengesanan penyakit hati dan beberapa penyakit lain.

Kaedah ujian :








Prosedur :


II. Kuvet di masukkan kedalam rek dan nombor rak diambil dan dituliskan pada borang

pesakit.


ARCHITECT c4000.





VI. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya LFT, setelah itu tekan ‘ADD ORDER’.





132

Julat Normal :

Total Bilirubin : 3.4 – 20.5 umol/L

Direct Bilirubin : 0 – 8.6 umol/L

ALT : 0 – 55 U/L

ALP : 40 – 150 U/L

Total Protein : 64 – 87 g/L

Albumin dan Globulin : 35 – 50 g/L

Tajuk Ujian : Hemoglobin A1c (HbA1c).

Ujian Hemoglobin juga dikenali sebagai ujian HbA1c,haemoglobin glycated atau

glycohemoglobin adalah ujian darah yang penting dilakukan untuk menentukan bagaimana

diabetes dikawal. Hemoglobin adalah bahan dalam sel darah merah yang membawa oksigen ke

seluruh badan. Apabila diabetes tidak terkawal (gula dalam darah terlalu tinggi),gula akan

mengikat dalam darah dan bergabung dengan hemoglobin menjadi ‘glycated’. Jumlah purata

gula dalam darah boleh dtentukan dengan mengukur tahap hemaglobin A1c. Jika paras glukosa

tinggi,ujian hemoglobin A1c akan turut tinggi. Jumlah hemoglobin A1c akan menunjukkan

beberapa minggu selepas paras gula darah,biasanya merangkumi tempoh 120 hari.

Bahan dan Radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

VI. Jam randik.

133

Reagen :

I. HbA1c

II. THB (Total Hb)

Sampel :

I. Hemoglobin A1c darah penuh (whole blood).

Prinsip :

Hemoglobin A1c adalah satu ujian makmal yang digunakan untuk mendiagnosis pesakit dengan

diabetes mellitus. Diabetes mellitus adalah suatu keadaan yang dicrikan oleh hiperglisemia

akibat daripada ketidakupayaan untuk menggunakan glukosa darah utnuk tenaga badan.

Dalam diabetes jenis 1,pankreas tidak menghasilkan dan merembeskna insulin. Oleh yang

demikian,glukosa darah tidak dapat memasuki sel-sel. Dalam diabetes jenis 2,samada

pancreas tidak membuat insulin yang cukup atau sel-sel tidak dapat menggunakan insulin

dengan betul. Komplikasi kencing manis yang melibatkan mata,buah pinggang,saraf dan

saluran darah jantung,otak dan hujung kaki,adalah biasa untuk kedua-dua bentuk penyakit.

Tahap HbA1c adalah berkadar terus dengan kepekatan glukosa sederhana dan jangka hayat

sel darah merah dalam edaran. Oleh itu,ukuran HbA1c telah diterima untuk pengurusan klinikal

diabetes melalui pemantauan rutin. A1c akan dikesan menggunakan Bio-Rad 10,yang

merupakan penganalisis automatic sepenuhnya yang terdiri daripada modul tunggal yang

menyediakan satu kaedah bersepadu untuk penyediaan sampel,perpisahan,dan penentuan

peratus relative haemoglobin khusus (contohnya,A2,F,A1c) dalam darah keseluruhan.

Kaedah ujian :





134

III. Sampel bagi ujian HbA1c ini akan dikumpul sehinggalah hari ke empat pada waktu

pejabat dan diletakkan di dalam peti sejuk serta akan ‘run’ pada tiap hari khamis sahaja.

IV. Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran


V. Sampel (tiub EDTA) darah penuh yang diterima akan diambil untuk ujian ini dilakukan.

Prosedur :

I. Keluarkan sampel (whole blood) dari dalam peti sejuk. Biarkan pada suhu bilik selama

10 hingga 15 minit.

II. Sediakan sample cup.

III. Pipet 400µL bahan uji hemoglobin denaturant ke dalam sample cup. Sebatikan (‘mix’)

selama 5-10 saat secara perlahan.

IV. Biarkan whole blood tersebut dalam keadaan ‘hemolyse’ selama 5 minit pada suhu bilik.

V. Ujian dijalankan.

VI. Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek


VII. Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama


VIII. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya HbA1c, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.

IX. Tunggu sehingga keputusan keluar.

X. Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan


Interpertasi ujian :

Julat Normal :

HbA1c : 7.5 umol/L

Tajuk Ujian : Total Urin protein 24 jam.

135

Ujian jumlah urin protein dijalankan untuk mengesan protein yang berlebihan dalam urin dan

merupakan satu ujian susulan yang sebelumnya adalah positif. Ujian ini membantu dalam

menentukan fungsi buah pinggang seseorang individu. Ujian ini dijalankan untuk mengesan

sebagai sebahagian pemeriksaan dalaman fizikal atau untuk menentukan jenis penyakit atau

keadaan yang menjejaskan buah pinggang. Ujian urin jumlah 24 jam iaitu dimana kuantiti

protein diukur sebagai jumlah yang dikumuhkan lebih daripada tempoh 24 jam.

Bahan dan radas :

I. Dipstick urinalisis

II. Alat penimbang Digital

III. Botol urin (24 hours)

IV. Botol urin (yellow container)

V. Mikropipet

VI. Mesin ARCHITECT c4000

VII. Rek

VIII. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Carbonate buffer

II. Sodium chloride

III. Benzethonium chloride

Sampel :

I. Urin protein 24 jam

Prinsip :

Ujian ini merupakan untuk pemeriksaan metabolisme dan juga ujian susulan selepas urin

dilakukan dengan dipstik urinalisis. Biasanya,protein tidak dijumpai dalam urin apabila ujian

dengan mencelup stik rutin ini. Sesetengah protein akan muncul di dalam urin jika tahap protein

dalam darah menjadi tinggi,walaupun buah pinggang masih berfungsi dengan betul. Protein

akan hadir dalam urin apabila tahap protein dalam darah adalah normal.

136

Kaedah ujian :







IV. Sampel urin akan dipindahkan sedikit pada botol urin berwarna kuning (yellow

container). Ini adalah untuk memudahkan kerja mempipet sampel masuk ke dalam

sampel Cup.

Prosedur :

I. Botol sampel urin protein 24 jam diletakkan di atas alat penimbang untuk mendapatkan

nilai berat keseluruhan sampel tersebut.

II. Pindahkan sedikit sampel urin protein 24 jam ke dalam botol urin (yellow container).

III. Ujian dipstick dilakukan terlebih dahulu untuk mendapatkan tahap kepekatan protein

yang ada dalam urin.

IV. Kemudian,sampel dipipet masuk ke dalam (plan tube) sebanyak 400µL untuk

diemparkan selama 5 minit.

V. Sampel dipipet lagi sebanyak 300 µL dan dimasukkan ke dalam sampel cup.





VIII. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya uPRO, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.





137

Julat Normal :

Urin protein 24 jam : <30 Mg/ 24 jam

Tajuk Ujian : Urin elektrolit 24 jam.

Ujian urin elektrolit adalah untuk mengukur elektrolit urin. Kehadiran elektrolit yang banyak

adalah berpunca daripada mineral yang ada di dalam badan. Mineral tersebut adalah seperti

kalsium dan natrium dan yang paling banyak adalah magnesium dan kalium.

Bahan dan radas :

I. Urin dipstick

II. Alat penimbang

III. Botol urin elektrolit

IV. Botol urin (yellow container)

V. Mikropipet

VI. Mesin ARCHITECT c4000

VII. Rek

VIII. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Buffer

II. Potassium

III. Sodium

IV. Natrium

V. chloride

Sampel :

I. Urin elektrolit 24 jam

138

Prinsip :

Ujian urin elektrolit adalah untuk mengukur kadar atau kehadiran bahan kimi tertentu yang

dipanggil elektrolit dalam urin. Ia biasanya mengukur tahap kalsium klorida,kalium atau natrium.

Kaedah ujian :







IV. Sampel urin akan dipindahkan sedikit pada botol urin berwarna kuning (yellow

container). Ini adalah untuk memudahkan kerja mempipet sampel masuk ke dalam

sampel Cup.

Prosedur :

I. Botol sampel urin elektrolit diletakkan di atas alat penimbang untuk mendapatkan nilai

berat keseluruhan sampel tersebut.

II. Pindahkan sedikit sampel urin protein 24 jam ke dalam botol urin (yellow container).

III. Ujian dipstick dilakukan terlebih dahulu untuk mendapatkan tahap kepekatan protein

yang ada dalam urin.

IV. Kemudian,sampel dipipet masuk ke dalam (plan tube) sebanyak 400µL untuk

diemparkan selama 5 minit.

V. Sampel dipipet lagi sebanyak 300µL dan dimasukkan ke dalam sampel cup.





VIII. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya Elec, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.




139


Julat Normal :

Urin elektrolit : < 30Mg/mmoL

Tajuk Ujian : Total Iron Binding Capacity (TIBC).

Jumlah kapasiti besi mengikat (TIBC) adalah ujian darah yang menunjukkan jika terdapat besi

terlalu banyak atau terlalu sedikit dalam darah. Besi dibawa dalam darah yang ditukarkan

kepada trasnferrin protein. Ujian ini membantu mengukur kemampuan protein yang dinamakan

transferrin untuk menjalankan besi dalam darah.

Bahan dan radas :

I. Pengempar

II. Mikropipet


IV. Rek

V. Cup ARCHITECT

Reagen :

I. Ferric chloride

II. Citric Acid

Sampel :

I. Serum

Prinsip :

Ferric chloride saturating solution (reagen 1) akan dicampurkan bersama dengan sampel untuk

mengikat apotrasnferin dengan besi. Absorban alumina dalam TIBC akan menyingkirkan

lebihan besi daripada serum. Serum tersebut akan dianalisis untuk mengesan jumlah besi

dengan menggunakan asai besi.

140

Kaedah ujian :





III. Sampel bagi ujian TIBC ini akan dikumpul sehinggalah hari ke empat pada waktu

pejabat dan diletakkan di dalam peti sejuk serta akan ‘run’ pada tiap hari khamis sahaja.

VI. Sampel dan borang yang lengkap akan diambil dan pemohonan ujian dan pendaftaran


VII. Sampel (TIBC) serum yang diterima akan diambil untuk ujian ini dilakukan.

Prosedur :

XI. Keluarkan sampel (TIBC) dari dalam peti sejuk. Biarkan pada suhu bilik selama 10

hingga 15 minit.

XII. Sediakan sample cup.

XIII. Pipet 600µL bahan uji larutan TIBC ke dalam serum (plan tube) yang mengandungi

serum pesakit sebanyak 300µL. Sebatikan (‘mix’) selama 5-10 saat secara perlahan.

XIV. Tuangkan ke dalam cup khas untuk TIBC untuk penurasan dan biarkan selama 8 minit

pada suhu bilik.

XV. Ujian dijalankan.

XVI. Tekan skrin mesin ‘ORDERS’, tekan ‘PATIENT ORDER’ dan masukkan nombor rek


XVII. Masukkan nombor IC pesakit dan tekan ‘SAMPEL DETAILS’ dan masukkan nama


XVIII. Tekan nama ujian yang ingin dilakukan contohnya TIBC, setelah itu tekan ‘ADD

ORDER’.

XIX. Tunggu sehingga keputusan keluar.

XX. Bacaan diambil dan keputusan dimasukkan kedalam ‘LabNet’ sebelum keputusan


141


Julat Normal :

TIBC : 240-450 Mg /dL

Nota :

Peningkatan aras protein, albumin dan globulin serta ALT boleh menyebabkan penyakit

hati, buah pinggang, ketaknormalan protein boleh menyebabkan kanser, kegagalan sel

darah dan boleh menyebabkan inflamasi dan infeksi yang kronik.

Peningkatan paras bilirubin boleh diakibatkan oleh hati, pundi hempedu atau kegagalan

SDM dan secara klinikal mengakibatkan jaundis.

Peningkatan ALP boleh menyebabkan penyakit hati, penyumbatan hempedu dan

kegagalan tulang.

BLOOD GASES

Blood Gases dan Bicarbonate

Material yang diperuntukkan: Analyser Blood Gases Cobas b 211.

Prinsip ujian: Hemoglobin, merupakan iron yang mengandungi protein di dalam seldarah

merah, menngangkut oksigen dalam darah. Apabila tekanan partial (PO2) dalam paru-paru

adalah tinggi, hemoglobin mengambil oksigen dan membebaskannya apabila PO2 rendah.

Setiap gram hemoglobin bergabung dengan 1.34 ml oksigen. PO2 dalam tisu adalah lebih

rendah daripada yang terdapat dalam darah. Oleh itu, PO2 dalam darah berkurangan untuk

menyeimbangkan dengan PO2 dalam tisu. Hal ini menyebabkan oksigen dilepaskan daripada

hemoglobin dan melalui plasma daripada tisu lebih tinggi daripada PCO2 di dalam udara

alveolar pada paru-paru.

Kaedah: Blood Gases dan bikarbonat digunakan pada Cobas b 221 adalah ujian diagnostik

secara in vitro sebagai pembilangan kuantitatif Blood gases dan bikarbonat dalam darah

manusia.

Prosedur

142

Analiser Blood Gases Cobas b 211 yang menggunakan prinsip ion selective electrode (ISE).

Dilakukan secara automatic dan diprogramkan untuk menentukan paras PCO2, pH, HCO-3 dan

PO2 dalam specimen tunggal.

Bahan penghalang: Syringe yang mengandungi darah mestilah ditempatkan dalam bekas

yang sejuk untuk mengelakkan darah beku dan mengganggu keputusan ujian.

Nilai jangkaan:

pH: 7.37 – 7.45

PCO2: 34 – 45 mmHg (4.52 – 5.98 kPa) atau 1.02 – 1.35 mmol/L.

Bikarbonat piawai: 22.4 – 25.8 mmol/L

Bikarbonat asal: 24 – 33 mmol/L

PO2: 83 – 108 mmHg.

Modified Oral Glucose Tolerance Test (MOGTT)

Material yang diperuntukkan: Serbuk glukosa.

Prinsip ujian: Kadar penyerapan glukosa dan respon terhadap insulin adalah untuk

menentukan kebolehan glukosa bertolerasi sepertimana yang terlihat melalui paras glukosa

darah. Apabila terdapat peningkata gklukosa dalam darah, insulin akan dibebaskan dari

pankreas untuk menurunkan paras glukosa. Tindak balas tersebut boleh berkurangan bila

insulin tiada atau tidak mencukupi. Peningkatan nilai glukosa selalunya berlaku selepas

mengambil makanan yang mengandungi karbohidrat. Oleh sebab itu, tindak balas terhadap

paras karbohidrat bergantung pada pengambilan karbohidrat yang sebelumnya dan pada

bilangan yang telah diingesi. Kesan terhadap karbohidrat yang tidak diingesi adalah asas

terhadap ujian tindak balas glukosa. Ia mengesan keabnormaliti dalam metabolisme karbohidrat

dalam kes seperti glukosuria.

Kaedah: MOGTT dilakukan untuk mengukur tahap kebolehan badan bertindak balas terhadap

glukosa yang telah diukur dos yang diberikan.

Keadaan berjaga-jaga: Elakkan kontaminasi pada urin.

143

Prosedur:

1. Pesakit akan berpuasa untuk semalaman.

2. Darah dan urin pesakit akan diambil. Darah tersebut akan dilakukan ujian glukosa

darah. Urin, akan memeriksa glukosa menggunakan strip glukosa dan seterusnya

direkod.

3. Psakit akan diberikan minum air glukosa; 75g glukosa dilarutkan dalam 250 ml atau 350

ml air dan diminum.

4. Selepas satu jam, ulang prosedur nombor 2.

5. Selepas dua jam, darah dan urin diambil untuk terakhir kali dan prosedur nombor 2.

diulang.

Bahan penghalang: Masa pengambilan sampel perlulah tepat untuk memberikan keputusan

yang jitu. Ellakkan kontaminasi pada kontainer atu pada urin serta gunakan strip yang baik.

Keputusan:

Ketidakhadiran glukosa urin: Warna krim dalam masa 10 saat (negatif).

Kehadiran glukosa urin: Warna ungu dalam masa 10 saat (+, ++, +++).

UJIAN TROP-T

Ujian Trop-T

Material yang diperuntukan :

i. Mesin Cobas H 232 POC System

ii. Pasteur pipet

Spesimen :

Darah

Prinsip :

144

Jalur ujian mengandungi dua antibodi monoklonal khusus untuk jantung troponin T (cTnT) di

mana satu adalah label emas. Antibodi membentuk kompleks sandwic dengan cTnT dalam

darah. Apabila eritrosit disingkirkan, plasma melalui zon pengesanan kompleks sandwic cTnT

berlabel emas dan isyarat positif dipaparkan sebagai garis merah (garis isyarat). Lebihan

goldlabelled antibodi berkumpul di sepanjang garisan kawalan, memberi isyarat bahawa ujian

adalah sah. Keamatan garis isyarat meningkat berkadaran dengan kepekatan troponin T.

Sistem optik instrumen cobas 232 h mengesan dua baris dan mengukur keamatan garis isyarat.

Perisian bersepadu menukarkan tafsiran isyarat kepada hasil kuantitatif yang dipaparkan pada

skrin.

Prosedure :

1. Ambil spesimen menggunakan pipet sebanyak 150 mikrolit dan titiskan ke atas strip(Jalur).

2. Hidupkan instrument dengan menekan butang on selama 5 saat.

3. Masukkan ID pesakit pada paparan.

4. Masukkan strip (jalur) sebaik sahaja arahan ikon “INSERT” di paparkan.

5. Biarkan mesin selama 5 minit sebelum mengambil bacaan pada skrin.

Keputusan :

145

MAKMAL MIKROBIOLOGI/

KAJI KUMAN

147

MAKMAL MIKROBIOLOGI/BAKTEREOLOGI

PENGENALAN

Makmal mikrobologi/bakteriologi di Hospital Nukleus Labuan menjalankan ujian yang tidak

memerlukan keputusan yang segera seperti makmal- makmal lain kerana ujian-ujian yang

dilakukan dalam makmal ini memerlukan masa untuk mendapatkan hasil keputusan yang betul.

Antara ujian yang dilakukan di dalam makmal ini ialah pengkulturan urin,darah,sampel2 swab,

swab genital, dan stool c&s.

Bagi makmal mikrobiologi/baktereologi ini juga ada melakukan prosedur pembuatan

agar untuk tujuan pengkulturan bakteria-bakteria tertentu. Antara agar atau media yang

dilakukan adalah seperti media MH, media MacConkey,media CLED, media agar darah, agar

coklat dan agar sitrat.

148

CARTA ORGANISASI MAKMAL MIKROBIOLOGI

149

FAIZAL YUSOF

PEG.SAINS(KAJI KUMAN)C41

Masri Suhaimi

JTMP U29

Siti Rohaida Md Amen

JTMP U29

AGAR MacCONKEY

Penyediaan Agar MacConkey

Bahan yang diperlukan:

i) Gelatin

ii) Laktosa monohidrat

iii) Natrium klorida

iv) Pepton

v) Garam hempedu

vi) Neutral red

vii) Krystal violet

Prinsip

Agar MacConkey digunakan isolasi dan identifikasi Enterobacteriaeceae daripada sampel

feses, urin, dan sebagainya. Ia juga bertindak sebagai agar pemilih bagi bakteria gram negatif.

Gelatin dan pepton member sumber nitrogen, vitamin, mineral dan asid amino untuk

pertumbuhan bakteria. Natrium klorida membekalkan elektrolit untuk pengangkutan dan

kesimbangan osmotik manakala laktosa pula yang membekalkan karbon dan tenaga. Kristal

violet dan hempedu pula merupakan agen pemilih yang bertindak sebagai inhibitor kepada

bakteria gram positif. Neutral red bertindak sebagai indikator pH.

Prosedur:

1. Serbuk agar seberat 50 gram disediakan dan dimasukkan ke dalam satu liter air

suling.

2. Kemudiannya dipanaskan dan digaul sehingga sebati.

3. Agar dididihkan selama satu minit.

4. Didihan agar kemudiannya dimasukkan ke dalam botol dan disterilkan dalam

autoclave pada suhu 121°C selama 15 minit.

5. Setelah itu, botol disejukkan pada suhu 45 – 50 °C dan disebatikan.

6. Tuang kedalam piring petri yang steril dan digoncangkan sesekali untuk

mengelakkan agar mengeras.

7. Agar yang sudah siap disimpan pada suhu 8 - 15°C.

Keputusan:

150

Organisma Warna Ciri – ciri

Esherichia coli Merah ke merah jambu -Tidak mukoid

-Bulat

Klebsiella Merah -Mukoid

-Bersaiz besar

Serratia Merah ke merah jambu Mukoid

Proteus Tidak berwarna dan jernih ‘Swarming’

Salmonella Tidak berwarna dan jernih

Shigella Tidak berwarna dan jernih

atau merah pucat

AGAR HEKTOEN

Penyediaan Agar Hektoen

Bahan yang digunakan:

i) Enzim dari tisu haiwan

ii) Ekstrak yis

iii) Garam hempedu

iv) Laktosa, sukrosa, salicin

v) Natrium klorida

vi) Natrium thiosulfida

vii) Ferrik ammonium sitrat

viii)Asid fushin

ix) Agar.

Prinsip:

Agar Hektoen digunakan untuk isolasi dan membezakan Salmonella spp dan Shigella spp yang

mana kedua-dua bakteria ini menginfeksi salur gastrousus manusia. Kandungan agar hektoen

memberikan fungsi yang berbeza kepada agar. Enzim yang diekstrak dari tisu haiwan

membekalkan nitrogen, karbon, dan asid amino untuk pertumbuhan organism.

151

Manakala ekstrak yis bertindak sebagai sumber vitamin dan garam hempedu dan asid fushin

pula sebagai inhibitor kepada bakteria gram positif. Laktosa, sukrosa dan salicin adalah

karbohidrat fermenter. Natrium klorida mengekalkan kesimbangan osmotik bagi agar tersebut

dan ferrik ammonium sitrat menjadi sumber ferum dan membolehkan penghasilan hidrogen

sulfide daripada natrium thiosulfida.

Prosedur:

1. Serbuk agar seberat 50 gram disediakan dan masukkan ke dalam 1liter air

suling.

2. Kemudian dipanaskan dan digaul sehingga sebati.

3. Agar dididihkan selama satu minit.

4. Kemudian, disejukkan selama 10 minit dan disebatikan

5. Agar dituang ke dalam piring petri yang steril dansesekali digoncang untuk

mengelakkan agar menjadi solid.

6. Agar yang sudah siap disimpan pada suhu 8 - 15°C.

Keputusan:

Koloni berwarna merah ke oren: Esherichia coli

Koloni berwarna hijau: Shigella flexneri

THIOSULFATE CITRATE BILE SUCROSE SUGAR (TCBS)

Penyediaan Agar Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Sugar (TCBS)


i) Ekstrak yis

ii) Enzim kasein

iii) Enzim dari tisu haiwan

iv) Natrium sitrat

v) Natrium thiosulfat

vi) Oxbile

152

vii) Natrium klorida

viii) Sukrosa

ix) Ferrik sitrat.

Prinsip:

Agar TCBS digunakan sebagai agar pemilih bagi mengisolasi Vibrio cholerae. Ekstrak yis,

enzim kasein dan enzim dari tisu haiwan membekalkan nitrogen, vitamin, dan asid amino dalam

agar TCBS. Manakala natrium sitrat, natrium thiosulfat dan oxbile bertindak sebagai agen

pemilih yang membekalkan pH alkali untuk inhibitor organisma gram positif. Peningkatan pH

digunakan untuk menggalakkan pertumbuhan Vibrio cholera kerana bakteria ini sensitif kepada

asid. Sukrosa pula sebagai karbohidrat fermenter dan natrium klorida meransang pertumbuhan

organisma dan mengekalkan kesimbangan osmotik.

Prosedur:

1. Sediakan serbuk agar seberat 50 gram dan masukkan ke dalam 1liter air suling.

2. Panaskan dan gaulkan sehingga sebati.

3. Didihkan selama 1minit.

4. Biarkan selama 10 minit untuk sejukkannya dan sebatikannya.

5. Tuang kedalam piring petri yang steril.

6. Simpan agar yang sudah siap pada suhu 8 - 15°C.

Keputusan:

Koloni berwarna kuning: Vibrio alginolyticus.

Koloni berwarna kuning: Vibrio cholerae.

Koloni berwarna hijau: Vibrio paarhaemolyticus.

153

AGAR NUTRIENT

Penyediaan Agar Nutrient


i) 23 g serbuk agar nutrient.

ii) Air suling.

iii) Botol universal satu liter.

iv) Autoclave.

v) Piring petri.

Prinsip:

Nutrient agar merupakan medium asas bagi kebanyakan mikroorganisma. Ia juga merupakan

asas pengkulturan bagi kebanyakan mikroorganisma. Ia juga merupakan asas bagi kebanyakan

media seperti agar chocolate, dan media lain yang kompleks. Nutrien agar juga boleh disimpan

di dalam tube. Kegunaan nutrient agar adalah untuk subkultur dan kekalkan patogen bukan

fastidious.

Prosedur:

1. 23 g serbuk agar nutrient dimasukkan dalam bekas steril.

2. Kemudian air suling dimasukkan sehingga mencapai paras satu liter.

3. Campuran tersebut dipanaskan dengan kacauan yang kerap.

4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit.

5. Air agar dimasukkan dalam botol universal.

6. Botol tersebut diaotoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit.

7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam piring petri.

154

AGAR DARAH

Penyediaan Agar Darah


i) 42.5 g Columbia Base Agar.

ii) Air suling.

iii) Botol universal.

iv) Autoclave.

v) 5% darah.

vi) Piring petri.

Prinsip:

Agar darah merupakan agar diperkaya yang digunakan untuk membesarkan sejumlah besar

organisma yang sederhana memilih. Ia juga digunakan untuk mengesan perbezaan hemolisis

bakteria.

Darah yang digunakan untuk agar daras mestilah bebas lisis dan berantikougulasi dan

difibrinasi. Ia boleh jadi darah kuda, kambing biri-biri, atau darah arnab. Citrat darah manusia

yang luput turut boleh digunakan. Citrat boleh merencat pertumbuham beta hemolitik

streptococci. Sebelum digunakan, sejukkan dalam peti sejuk semalaman.

Prosedur:

1. Sediakan 42.5 g Columbia Base Agar.

2. Air suling dicampurkan ke dalam agar sehingga mencecah paras satu liter.

3. Campuran tersebut dipindahkan ke dalam botol universal.

4. Kemudian botol tersebut diautoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit.

5. Kemudian, botol tersebut dikeluarkan daripada autoclave dan dibiarkan pada suhu bilik

sehingga suhu 45ºC hingga 50ºC.

6. 5% darah yang steril kemudiannya dimasukkan ke dalam botol tersebut dan disebatikan.

7. Serta merta, agar dituangkan ke dalam piring petri sambil digoncang sekali-sekala untuk


Keputusan:

155

Streptococcus spp: α-hemolisis; bakteria sedikit pecahkan sel darah merah dan

ukuran lisis kecil.

β-hemolisis; bakteria sepenuhnya memecahkan sel darah merah.

Ukuran lisis yang besar.

Ƴ-hemolisis; tiada pemecahan sel darah merah. Tiada ukuran

lisis.

AGAR CHOCOLATE

Penyediaan Agar Chocolate


i) 42.5 g Columbia Base Agar.

ii) Air suling.

iii) Botol universal steril.

iv) Autoclave.

v) 5% sel darah merah.

vi) Piring petri.

Prinsip:

Agar chocolate merupakan agar bukan pemilih, diperkaya media tumbesaran. Ia mengandungi

sel darah merah yang telah dilisiskan dengan memanaskan secara perlahan sehingga 56ºC.

agar ini digunakan untuk tumbesaran bakteria fastidious bakteria respirasi seperti Haemophilus

influenza. Bakteria ini memerluka faktor tumbesaran seperti nicotinamide adenosine

dinucleotide (NAD) dan hematin yang terdapat pada sel darah merah. Oleh itu cara yang baik

untuk prtumbuhan adalah menggunakan sel darah merah yang lisis.

Prosedur:

1. Sediakan 42.5 g Columbia Base Agar.

156

2. Air suling dicampurkan ke dalam agar sehingga mencecah paras satu liter.

3. Campuran tersebut dipindahkan ke dalam botol universal.

4. Kemudian botol tersebut diautoclave pada suhu 121ºC selama 15 minit.

5. Kemudian, botol tersebut dikeluarkan daripada autoclave dan dibiarkan pada suhu bilik

seketika.

6. Setelah suhu botol mencecah 56ºC, 5% darah yang steril kemudiannya dimasukkan ke

dalam botol tersebut dan disebatikan. Ini untuk melisiskan sel darah merah.

7. Serta merta, agar dituangkan ke dalam piring petri sambil digoncang sekali-sekala untuk


Keputusan:

Media gelap dan bersih: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus,

Staphylococcus simulans, dan Streptococcus faecalis.

Media kekuningan: alpha-hemolytic spesis Streptococcus.

AGAR CYSTEINE-LACTOSE-ELECTROLYTE-DEFICIENT (CLED)

Penyediaan Agar CLED


i) 36 g serbuk CLED.

ii) Botol universal steril.

iii) Air suling.

iv) Autoclave.

v) Piring petri.

Prinsip:

Agar CLED ialah medium pembeza yang bukan selektif untuk tumbesaran dan enumerasi

mikroorganisma salur urinari. Kehadiran sodium klorida merencat perebakan Proteus dan

memberikan tumbesaran pada mikroorganisma salur urinari dan ia digunakan untuk membeza

dan mengenalpasti mereka. Kehadiran pengkontaminaan bakteria seperti Diphtheroids,

157

Lactobacilli dan mikroorganisma lain sebagai pengukur darjah penjagaan yang diambil dalam

melaksanakan spesimen urin.

Ekstrak dagine lembu dan pepton kasein membekalkan nitrogen, vitamin, mineral dan asid

amino untuk tumbesarah lebihan. Laktosa merupakan bahan fermentasi karbohidrat

memberikan karbon dan tenaga. L-Cystine ditambah sebaigai pembesaran tambahan untuk

cystine pembentukan coliform secara sendiri. Membezakan fermentasi laktosa dan bukan

fermentasi laktosa diperolehi dengan menggunakan Bromothymol biru sebagai indikasi pH.

Organisma yang menapaikan laktosa akan menurunkan pH dan mengubah warna medium

daripada hijau ke kuning.

Mikroorganisma yang sebabkan infeksi dalam salur urinari secara umumnya diabaikan dan

hanya satu spesis. E. coli ialah mikroorganisma yang paling kerap di isolasi. Pembilangan

100.000 (105)/ml atau banyak merupakan indikasi signifikan infeksi salur urinari.

Prosdur:

1. 26 g serbuk agar CLED dimasukkan dalam bekas steril.



4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit.




Keputusan:

Mikroorganisma Pembesaran Warna medium

Fermentasi atau

bukan fermentasi

laktosa

Enterobacter

aerogenes

Baik Kuning cerah - biru Bukan fermentasi

Escherichia coli Baik Merah jambu Fermentasi

Proteus vulgaris Baik (tiada swarming) Biru – biru hijau Bukan fermentasi

Staphylacoccus

aureus

Baik Kuning cerah Bukan fermentasi

Enterococcus faecalis Baik Kunig cerah Bukan fermentasi

158

Klebseila pneumonia Baik Merah jambu Fermentasi

Kleibseila spp Baik Merah jambu Fermentasi

Citrobacter freundii Baik Merah jambu Fermentasi

AGAR TRIPLE SUGAR IRON (TSI)

Penyediaan Agar TSI


i) 65 g serbuk TSI.

ii) Air suling.

iii) Botol universal.

iv) Autoclave.

v) Tabung uji.

Prinsip:

Pencernaan enzimatik kasein, pencernaan enzimatik tisu haiwan dan kulat diperkaya pepton

memberikan nitrogen, karbon, dan vitamin yang diperlukan untuk pembesaran organisma. TSI

mengandungi tiga karbohidrat, dekstros, laktosa, dan sukrosa. Apabila karbohidrat telah

ditapaikan, penghasilan asid akan dikesan oleh fenol merah indikasi pH. Sodium tiosulfat

dikurangkan kepada hidrogen sulfida, dan hidrogen sulfida bertindak balas dengan garam iron

membentuk iron sulfida hitam yang serupa. Ferik amonia sitrat adalah hidrogen sulfida (H2S)

indikasi. Sodium klorida berfungsi mengekalkan keseimbangan osmotik pada medium. Agar

ialah agen solidifikasi.

Prosedur:

1. 65 g serbuk agar TSI dimasukkan dalam bekas steril.



4. Sesudah mendidih, agar dibiarkan selama satu minit untuk larutan lengkap.


159


7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam tabung uji secara condong.

Keputusan:

Mikroorganisma

Approx.

Inoculum

(CFU)

Anggaran Keputusan

Baikpulih Slant Butt Gas H2S

Escherichia coli Berat Tumbuh A A + -

Proteus mirabilis Berat Tumbuh K A - +

Pseudomonas aeruginosa Berat Tumbuh K K - -

Salmonella typhimurium Berat Tumbuh K A +/- -

Shigella flexneri Berat Tumbuh K A - -

Kata kunci: A, asid.

K, alkali.

-, negatif.

+, positif.

+/-, pertumbuhan positif dan negatif.

Slant alkali - butt asid (merah/kuning): Fermentasi dekstros sahaja.

Slant asid - butt asid (kuning/kuning): Fermentasi dekstros, laktosa, dan atau

sukrosa.

Slant alkali-butt alkali (merah/merah): Dekstros dan laktosa tidak difermentasi.

Mediaum mekahan, pisahan atau buih: Penghasilan gas.

Butt warna kehitaman: Penghasilan hidrogen sulfida (H2S).

AGAR MORTILITY-INDOL-ORNITHIN (MIO)

160

Penyediaan agar MIO


i) 31 g serbuk agar MIO.

ii) Air suling.

iii) Botol universal steril.

iv) Autoclave.

v) Tabung uji.

Prinsip:

Mortiliti adalah untuk memerhatikan kekeruhan dalam medium. Pada organisma yang tidak

motil, pertumbuhan boleh dilihat melalui rekahan dalam medium disebabkan oleh penghasilan

gas, tetapi akan terdapat poket yang bersih tanpa pertumbuhan.

Dikarboksilasi ornitin adalah untuk memerhati di bahagian bawah 3/4 iaitu kawasan anaerobik

pada medium untuk perubahan dalam warna pada indikasi pH; pertumbuhan mesti hadir pada

bahagian tiub ini untuk analisa keputusan yang betul; warna kelabu, biru atau ungu merupakan

reaksi positif untuk ornitin dikarboksilasi iaitu pembentukan produk alkali yang sangat tinggi,

peneutralan asid yan melampau dihasilkan daripada penapaian glukosa. Warna kuning

merupakan reaksi negatif. Merupakan default penghasilan asid daripada penapaian glukosa.

Penghasilan indol berlaku apabila titisan reagen Kovacs ditambah pada medium. Gegelang

merah akan terhasil pada indol daripada pemecahan trytophan.

Prosedur:

1. 31 g serbuk agar MIO dimasukkan dalam bekas steril.






7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam tabung uji.

Keputusan:

161

No. tabung uji (sebelah kanan setiap tabung uji

telah ditambah dengan reagen Kovaks) 1 2 3

Kehadiran asid amino (aerobik alkali) + + +

Mortiliti (kekeruhan) - + +

Dikarboksilasi ornitin (anaerobik alkali) - + +

Penghasilan indol (gegelung merah selepas tambah

kovaks)

+ - +

Penapaian glukosa (asid) + + +

Contoh jenis mikroorganisma Klebseila

oxytoca

Enterobecte

r aerogenes

Escherichia

coli

MUELLER HINTON AGAR/BROTH

Penyediaan Mueller Hinton Agar/Broth

Bahan yang diperlukan :

I. Mueller hintonII. Air suling.

III. Botol universal steril.

IV. Autoclave.

V. Botol kaca.

162

Prinsip :

Muller Hinton broth digunakan bersama Muller-Hinton agar dalam ujian sensitiviti antibiotik.

Muller-Hinton agar adalah satu medium pertumbuhan mikrobiologi yang biasanya digunakan

untuk ujian kerentanan antibiotik. Ia juga digunakan untuk mengasingkan dan mengekalkan

spesies Neisseria dan Moraxella.

Prosedur:

Muller-Hinton Agar

1. 38 g serbuk agar Mueller hinton dimasukkan dalam bekas steril.







Muller-Hinton Broth

1. 21 g serbuk agar Mueller hinton dimasukkan dalam bekas steril.






7. Botol dibiarkan sekejap, dan kemudian dituangkan ke dalam botol.

163

Keputusan :

PENGKULTURAN BAKTERIA

SAMPEL URIN

Pemprosesan Sampel Urin

Bahan dan alat radas:

i) Agar darah

ii) Agar C.L.E.D ( Cystine Lactose Electrolyte Defision)

iii) Inkubator (37°C)

iv) Dawai loop

Prinsip:

Kebanyakkan infeksi saluran urin adalah disebabkan oleh bakteria tunggal. Tetapi bagi pesakit

yang menghidapi kronik UTI atau membuat pembedahan pada saluran urin,dua organisma

mungkin hadir. Sampel ‘midstream urin’ diproses dan dikultur dalam media agar untuk

mengesan kehadiran bakteria dan mengenalpasti bakteria yang hadir.

Prosedur:

i) Sampel urin yang diterima dilabel dan pastikan maklumat pada sampel adalah sama

pada borang permintaan.

ii) Sampel dikulturkan pada agar darah dan agar MacConkey.

iii) Selepas itu media agar diinkubasi secara aerobik pada suhu 37°C selama 18 – 24

jam.

164

iv) Agar media tersebut didiagnos dan ujian biokimia dilakukan untuk pengenalpastian

bakteria.

v) Ujian sensitiviti dilakukan.

Keputusan:

Tiada pertumbuhan bakteria: Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.

Pertumbuhan signifikant: >100,000/ml, ujian identifikasi dan sensitiviti dijalankan.

Pertumbuhan tidak signifikant: <100,000/ml, dilaporkan sebagai tiada patogen.

SAMPEL SPUTUM

Pemprosesan Sampel Sputum


i) Agar darah

ii) Agar MacConkey

iii) Agar coklat

iv) Slaid

v) Mikroskop

vi) Dawai loop

vii) Inkubator 37°C

Prinsip:

Batuk merupakan salah satu tanda atau simptom kepada jangkitan dalam sistem respiratori.

Batuk selalunya akan memyebabkan sputum terhasil dalam alveoli dan saluran udara.

Pemeriksaan sampel sputum adalah untuk mengenalpasti bakteria yang menginfeksi saluran

respiratori. Sampel sputum diambil dan dikultur dalam media agar dan pengenalpastian

bakteria.

Prosedur:

1. Sampel yang diterima dilabel dan pastikan sampel adalah sesuai untuk diproses.

165

2. Selepas itu, pemeriksaan makroskopik dilakukan.

3. Smear dan pemeriksaan mikroskopik dilakukan selepas itu.

4. Sampel kemudiaannya dikulturkan di atas agar darah, agar coklat dan agar Mac

Conkey.

5. Agar darah dan agar Mac Conkey dieram dalam incubator pada suhu 37°

semalaman manakala agar coklat pula dieram dalam balang karbon dioksida

selama 48 jam.

6. Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan pengenalpastian bakteria.

7. Ujian sensitiviti dijalankan.

Keputusan

Patogen diisolasi: Streptococcus pyogens, Streptococcus pneumonia.

- Ujian pengenalpastian.

- Ujian sensitiviti.

Tiada patogen diisolasi: Inkubat semula.

- Dilaporkan sebagai tiada patogen diisolasi.

SAMPEL FESES

Pemprosesan Sampel Feses


i) Dawai loop

ii) Agar Hektoen

iii) Broth Selenite

iv) Inkubator 37°C.

Prinsip:

Feses cair merupakan salah satu simptom bagi infeksi pada gasterusus. Infeksi ini berlaku

apabila patogen memasuki salur gasterusus dan membiak. Mikroorganisma boleh menembusi

166

mukosa intestinal dan membiak diusus ataupun merebak ke organ sistemik yang lain. Sampel

feses akan dikultur pada media agar, dikenalpasti dan ujian sensitivity dilakukan

Prosedur:

1. Sampel feses diterima dan dilabel.

2. Sampel dikultur pada agar Hektoen dan broth Selenite untuk pengkulturan

primary dan dibiarkan semalaman.

3. Subkultur dari broth Selenite dilakukan pada agar Hektoen untuk pengkulturan

sekunder dan dieram pada suhu 37°C dan dibiarkan 24jam.

4. Plat agar didiagnos dan ujian biokimia dilakukan untuk pengenalpastian bakteria.

5. Ujian sensitiviti dijalankan.

Keputusan:

Patogen diisolasi: Salmonella dan Shigella



Tiada patogen diisolasi: Dilaporkan sebagai tidak patogenik.

Tiada pertumbuhan: Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan

SAMPEL GENITAL, RESPIRATORY SPESIMEN DAN SPESIMEN STERIL

Pemprosesan Sampel Genital, respiratory spesimen dan Spesimen Steril


i) Agar darah

ii) Agar Mac Conkey

iii) Agar Coklat

iv) Dawai loop

v) Biggy Agar

167

vi) Inkubator 37 °C.

Prinsip:

Pemeriksaan bakteriologi bagi spesimen genital dari wanita adalah sukar kerana spesimen

terdedah pada normal flora pada vagina. Sampel diambil pada High Vaginal Swab (HVS) atau

swab endoservikal dan akan diperhatikan dibawah mikroskop setelah pewarnaan Gram

dilakukan. Setelah itu, pengkulturan pada media agar dilakukan untuk isolasi dan

mengenalpasti patogen yang hadir.

Prosedur:

1. Sampel diterima dan dilabel.

2. Sampel kemudiaannya dikultur pada agar darah, agar MacConkey dan agar

coklat serta biggy agar. Agar darah dan MacConkey serta biggy agar dieram

pada inkubator 37° semalaman dan agar coklat dieram secara anaerobik selama

48 jam.

3. Sekiranya tiada pertumbuhan bakteria yang diperhatikan selepas dieram

semalaman agar dieram semula selama 24jam.


5. Ujian sensitiviti dilakukan.

Keputusan:

Patogen diisolasi: N. Gonorrhoeae, Candida Albican




Tiada pertumbuhan: Dilaporkan sebagai tiada pertumbuhan.

168

SAMPEL PUS / NANAH

Pemprosesan Sampel Pus


i) Agar darah

ii) Agar Mac Conkey

iii) Dawai loop

iv) Inkubator 37 °C.

Prinsip:

Kecederaan kecil yang terjadi pada kulit boleh memusnahan intergritinya dan membolehkan

mikroorganisma yang terdapat pada permukaan kulit masuk ke dalam lapisan kulit. Kecederaan

yang dialami dapat dikelaskan sebagai kecederaan daripada pembedahan, trauma dan

kecederaan fisiologi.

Jka kecederaan tidak dirawat dengan segera, mikroorganisma akan menginfeksi kawasan luka

tersebut dan terjadilah nanah. Nanah yang terhasil adalah diakibatkan oleh infeksi bakteria

pada kulit dan kecederaan yang dialami. Sampel pus diambil daripada kawasan terinfeksi untuk

menentukan jenis organisma dan membuat pengkulturan pada media agar untuk mengisolasi

dan mengenalpasti patogen.

Prosedur:

1. Sampel diterima dan dilabel.

2. Sampel kemudiaannya dikultur pada agar darah dan agar MacConkey.. Agar

darah dan MacConkey dieram pada inkubator 37° semalaman. Sekiranya tiada

pertumbuhan bakteria yang diperhatikan selepas dieram semalaman agar

dieram semula selama 24jam.


4. Ujian sensitiviti dilakukan.

Keputusan:

Patogen diisolasi: S.aureus,acinetobacter


169




SAMPEL DARAH

Pemprosesan Sampel Darah


i) Agar darah

ii) Agar MacConkey

iii) Agar coklat

iv) Dawai loop

v) Inkubator khas.

Prosedur:

1. Spesimen yang diterima dalam media komersial.

2. Spesimen discan pada komputer dan dimasukkan kedalam inkubator khas.

3. Spesimen akan dieram selama 5hari bagi dan bagi spesimen fungus ia dieram

selama 2minggu.

4. Spesimen yang positif akan dikeluarkan dan perwarnaan gram dilakukan untuk

memerhatikan morfologi bakteria yang hadir.

5. Vial aerobik akan dikultur dalam agar darah, agar MacConkey dan agar coklat.ia

akan dieram dalam inkubator 37° selama 24jam

6. Vial anaerobik pula akan dieram dalam agar darah dan dieram secara anaerobic

selama 24jam.

7. Bagi spesimen negatif, ia akan terus dieram selama 5hari dan akan dikeluarkan

selepas itu.

Patogen diisolasi: S.aureus,Brucella sp

170

o Ujian pengenalpastian.

o Ujian sensitiviti.



UJIAN SENSITIVITI

Ujian Sensitiviti


i) Swab kapas

ii) Dawai loop

iii) Agar Muller Hinton

iv) bakteria dalam broth.

Prinsip:

Menentukan aktiviti perencatan agen antimikrobial terhadap strain tertentu bakteria. Inokulum

yang standard diswabkan pada permukaan agar dan disk yang mengandungi antibiotik

diletakkan atas agar. Plat agar tersebut kemudiannya dieramkan dalam inkubator semalaman.

Antibiotik tersebut kemudiannya akan menyerap masuk ke dalam agar bergantung kepada ciri –

ciri fizikal dan kimia. Zon perencatan organism diperhatikan dan diameter zon ini akan

ditentukan berdasarkan kebolehan organism berkembang, kadar pertumbuhan dan penyerapan

antibiotik. Diameter tersebut diukur dan ditukar kepada sensitive, intermediate & resistant

berdasarkan jadual.

Prosedur:

1. Broth bakteria dieram selama 2 jam.

2. Swab kapas dicelup ke dalam broth dan pastikan cecair yang diserap oleh swab kapas

tidak berlebihan.

3. Kemudian diswabkan di atas agar menutupi semua kawasan, plat agar diputar 60° dan

diswab dan kemudiaan plat agar diputar 60° lagi dan diswab.

171

4. Disk antibiotik diletakkan diatas agar dan tidak melebihi 6 disk dalam 1 plat agar.

5. Plat agar dieramkan agar selama 16-18 jam pada suhu 35oC.

6. Selepas 24 jam, zone perencatan diperhatikan dan diukur dalam unit mm.

Keputusan:

Optochin: Resistan ( streptococcus viridians).

Sensitif ( streptococcus pneumonia).

Novobiochin: Resistan (staphylococcus saprophyticus).

Sensitif( staphylococcus epidermis).

Bacitracin: Resistan ( streptococcus sp).

Sensitif ( streptococcus pyogenes).

Polymycin B: Resistan( bukholderia , pseudomallei B cepacia).

Sensitif (pseudomonas aeruginosa).

PEWARNAAN GRAM

Pewarnaan Gram

Prinsip:

Pewarnaan ini adalah untuk membezakan bakteria gram positif dan bakteria gram negatif.

Pembezaan ini berdasarkan tindak balas bakteria terhadap alkohol iaitu agen penyahwarnaan.

Bakteria gram positif tidak bertindakbalas dengan alkohol dan akan berwarna ungu gelap

manakala bakteria gram negatif akan bertindak balas dengan alkohol. Warna ungu gelap akan

pudar dan bakteria akan berwarna merah jambu disebabkan pewarna balas safranin.

Prosedur:

1. Apusan bakteria dilakukan ke atas slaid dan difiksasikan untuk melekatkan

bakteria pada slaid.

2. Slaid kemudiaannya diwarnakan dengan pewarna kristal violet selama satu minit

untuk mewarnakan dinding sel bakteria.

172

3. Bilas dengan air kemudian diwarnakan dengan pewarna iodin Lugol yang

bertindak sebagai mordan selama satu minit

4. Bilas dengan air selama dan kemudian dibilas dengan alkohol aseton selama 10

ke 15 saat.

5. Slaid dibilas dengan air.

6. Kemudian slaid diwarnakan dengan pewarna safranin selama satu minit.

7. Kemudian dibilas dengan air dan slaid dikeringkan.

8. Pemerhatian dibawah mikroskop dilakukan.

Keputusan:

Gram Positif: Berwarna biru.

Gram Negatif: Berwarna merah.

Tatacara Pelekapan Basah Bakteria

BAHAN

1. Kultur bakteria (dalam botol media broth atau plat kultur)

2. Slaid mikroskop

3. Penutup slaid

4. Botol larutan salin (steril)

TATACARA

1. Sterilkan gelung dawai melalui kaedah pembakaran dan biarkannya sehingga sejuk.

2. Letakkan setitis kecil salin steril di atas sekeping slaid mikroskop bersih.

3. Sentuhkan gelung dawai steril kepada 1 koloni bakteria pada plat kultur.

4. Buatkan suspensi bakteria dari gelung dawai di dalam titisan salin di atas.

5. Letakkan sekeping penutup slaid di atas suspensi bakteria seperti yang ditunjukkan

dalam Rajah 3.1.

6. Amati pergerakan bakteria dengan kanta objektif 40X.

173

Sekiranya menggunakan kultur broth tukarkan langkah 4 kepada berikut:

4a. Sterilkan gelung dawai melalui kaedah pembakaran dan biarkannya sehingga sejuk.

4b. Letakkan 1 gelung penuh kultur cecair bakteria (yang agak keruh atau tebal) ke atas slaid

mikroskop.

Tatacara Plat Garisan

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Piring Petri yang mengandungi media agar

3. Gelung dawai

4. Penunu Bunsen

TATACARA

1. Labelkan plat Petri yang mengandungi media pertumbuhan yang steril (pada bahagian

dasar atau bawahnya dan bukan di atas penutupnya).

2. Letakkan plat Petri tersebut dengan bahagian dasarnya di sebelah atas.

3. Sterilkan gelung dawai melalui pembakaran api penunu Bunsen dan setelah sejuk, ambil

specimen dengannya.

4. Pegang dan angkat bahagian dasar plat sehingga permukaan media yang terdedah

menghadap anda.

5. Letakkan gelung yang mengandungi specimen di atas permukaan media agar kira-kira 1

cm daripada dinding plat Petri tersebut.

6. Sebarkan inokulum seluas 1 cm garis pusat.

7. Bermula daripada sebaran di atas gariskan inokulum dengan menggerakkan gelung

bolak-balik supaya garisan meliputi satu kawasan seluas kira-kira sepertiga daripada

plat.

174

8. Garisan seterusnya bermula daripada kawasan di sekitar penghujung garisan-garisan

pertama.

9. Bakar semula gelung dawai dan biarkan sejuk. Putarkan plat ~90 darjah dan buatkan

pula beberapa garisan mengulangi prosedur di atas sehingga garisan meliputi

keseluruhan kawasan permukaan media.

10. Pastikan garisan yang terakhir tidak menyentuh sebaran inokulum yang pertama.

11. Piring Petri yang telah diinokulasi dieramkan pada suhu tertentu dalam keadaan terbalik.

NOTA

1. Gunakan penghujung gelung dawai sahaja untuk menyentuh permukaan media supaya

mendapatkan garisan yang halus dan tipis.

2. Dalam membuat garisan, yang penting ialah menyentuh gelung pada permukaan media

dan menggariskannya; usahakan menggaris perlahan-lahan supaya anda tidak sampai

mencungkil atau merobek media sehingga mengakibatkan media menjadi pecah-pecah.

3. Pastikan juga garisan yang dibuat tersebut rapi, berterusan tetapi terpisah serta tidak

saling memotong atau bersilang di antara garisan atas dengan yang di bawahnya

supaya mendapatkan koloni bakteria yang berasingan.

4. Gelung dawai dibakar semula selepas garisan dibuat pada bahagian pertama piring

Petri supaya inokulum (jumlah bakteria) dikurangkan, maka koloni bakteria yang

terpisah akan didapati.

5. Jangan bercakap semasa melakukan prosedur ini untuk mengelakkan semburan air liur

terjatuh ke atas permukaan media agar.

6. Piring petir yang telah diinokulasi dieramkan secara terbalik supaya sebarang

pemulapan yang berlaku pada penutupnya tidak akan menitis ke atas kultur.

UJIAN MAKMAL DALAM PENGENALPASTIAN BAKTERIA

Bakteria mempunyai kisaran aktiviti biokimia yang amat luas; yang merangkumi proses

kemusnahan dan proses pembinaan (atau sintesis). Aktiviti yang luas ini dikawal oleh factor

genetic serta alam sekelilingnya.Daripada segi genetik, sesuatu aktiviti biokimia ditentukan oleh

enzim-enzim yang dihasilkan oleh bakteria.Dalam pengenalpastian bakteria, faktor ini dengan

spesifisiti sesejenis enzim terhadap substrat tertentu membolehkan bakteria dikenal pasti dalam

keadaan sekeliling yang terkawal seperti di makmal.Misalnya, beberapa kumpulan bakteria

175

tertentu menghasilkan bahan pertengahan metabolisme yang spesifik seperti asetil-metil-

karbinol berikutan fermentasi glukos yang boleh digunakan untuk membezakan kumpulan

bakteria yang menghasilkannya daripada yang tidak.

Kehadiran sesejenis enzim dikenal pasti secara tidak langsung melalui tindakannya terhadap

sesuatu substrat.Hasilan aktiviti enzim ini boleh berupa gas atau terbitan bukan gas. Gas yang

dihasilkan dikesan secara langsung melalui pengamatan penghasilan gelembung gas atau

secara tidak langsung melalui penggantian cecair di dalam tiub Durham dengan gas, kehadiran

rekahan atau celah-celah di dalam agar atau melalui tindakan kimia yang menghasilkan terbitan

yang berwarna dan tidak larut (misalnya H2S). Hasilan bukan gas ditunjukkan oleh perubahan

warna indicator pH (sesuatu jenis pewarna) yang bergantung kepada jenis indicator yang

digunakan (contoh, Andrade: neutral – kuning pucat, asid – merah, alkalin – tanpa warna;

bromthymol blue: neutral – hijau, asid – kuning, alkali – biru). Enzim juga boleh ditunjukkan

dalam tindakan serologi yang menghasilkan kompleks enzim (sebagai antigen) – antibody yang

muncul sebagai presipitasi.

Ujian Tiga Gula-Besi

Media tiga gula-besi atau Triple Sugar Iron (TSI) merupakan sejenis media campuran yang

digunakan untuk membezakan spesies bakteria dalam famili Enterobacteriaceae dengan

berdasarkan kepada kemampuan spesies-spesies ini untuk memfermentasi gula dekstros,

laktos atau sukros atau kombinasi daripada ketiga-tiga tersebut; penghasilan gas dan

penghasilan hydrogen sulfid.

Media TSI disediakan dalam agar condong. Bahagian permukaan agar (agar condong) (slant)

adalah terdedah kepada udara maka wujud daladm keadaan aerobic. Sebaliknya, bahagian

punting agar (di bahagian dasar tabung) (butt) dilindungi dari udara dan wujud dalam keadaan

anaerobic (walaupun bukan 100%). Gula yang digunakan adalah glukosa (0.1%), laktosa

(1.0%) dan sukrosa (1.0%). Indicator pH, sebagai penunjuk fermentasi, adalah fenol merah

yang akan menjadi kuning pada pH 6.8 (keadaan asid). Media TSI ditampan pada pH 7.4 iaitu

pH alkali maka warna agar kelihatan oren-kemerahan atau merah.

Peptida dan asid amino yang berasal dari pepton di dalam media TSI didegradasikan melalui

proses dekarboksilasi oksidatif kepada amina, sejenis terbitan alkali. Proses ini dipercepatkan

oleh bakteria yang tumbuh di bahagian permukaan agar. Di bahagian puntung, oksigen di

176

dalam udara tidak dapat sampai maka proses dekarboksilasi oksidatif adalah pada tahap

minimum.

Jika bakteria yang diinokulasi tidak menfermentasi karbohidrat, asid tidak diihasilkan dan warna

merah akan kekal di seluruh media. Jika bakteria hanya boleh menfermentasi glukosa, kuantiti

asid yang dihasilkan adalah terhad kerana kuantiti glukosa yang digunakan adalah rendah

(0.1%). Walau bagaimanapun, kuantiti ini mencukupi untuk bahagian permukaan dan puntung

agar menjadi kuning. Tetapi di permukaan agar yang terdedah kepada oksigen udara, amina

dihasilkan dan lama kelamaan (18 – 24 jam selepas pengeraman) kuantitinya mencapai aras

yang mampu mengatasi kesan kuantiti rendah asid yang dihasilkan, pH asid di bahagian

permukaan agar akan berubah semula menjadi alkali (ungu – merah) manakala bahagian

puntung agar (bahagian dasar tabung) akan kekal asid (kuning) kerana di situ amina yang

dihasilkan tidak mencukupi untuk mengatasi kesan asid.Jika laktosa atau sukrosa, atau kedua-

duanya difermentasi kuantiti asid yang dihasilkan daripada salah satu di antara kedua gula ini

adalah besar kerana konsentrasi kedua-dua gula ini adalah tinggi iaitu masing-masing 1%. Jadi,

walaupun amina dihasilkan kuantiti asid yang dihasilkan terlalu besar untuk perubahan pH

kembali kepada keadaan alkali maka bahagian condong mahupun bahagian puntung agar akan

tetap berkeadaan asid (kuning). Sukrosa dicampurkan untuk menyaringkan spesies Salmonella

dan Shigella kerana kedua-dua bakteria ini tidak menfermentasi sukrosa atau laktosa.

Penghasilan gas ditunjukkan dengan kehadiran gelembung gas atau bahagian puntung agar

akan kelihatan pecah-pecah. Hydrogen sulfid yang dihasilkan akan bertindak balas dengan

ferrous sulfat dan suatu presipitasi hitam (ferik sulfid) akan terbentuk di dalam media.

Tatacara Ujian Tiga Gula Besi

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Cerun agar TSI di dalam tabung uji

3. Dawai inokulasi lurus (dawai lurus)

4. Penunu Bunsen

TATACARA

1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus melalui pembakaran dan biarkan supaya sejuk.

2. Sentuhkan penghujung dawai kepada koloni bakteria.

177

3. Tusukkan inokulum menembusi cerun agar TSI di dalam tabung sehingga ke dasarnya.

4. Tarik semula dawai dan gariskan organisma di atas permukaan agar yang condong.

5. Eramkan semalaman dan teruskan selama 48 jam (jika perlu).

NOTA

1. Tabung TSI harus ditutup secara longgar sahaja selepas diinokulsi supaya udara dapat

masuk ke dalam tiub kultur untuk membolehkan berlakunya oksidasi dan perubahan

balik condong agar daripada asid (kuning) ke alkali (ungu-kemerahan).

2. Oleh kerana sesetengah spesies Proteus dan beberapa spesies lainnya boleh

memberikan reaksi pada TSI yang serupa dengan Salmonella ataupun Shigella, maka

untuk membezakan spesies-spesies ini ujian urease dilakukan. (Salmonella dan Shigella

adalah urease-negatif, manakala Proteus, urease-positif).

Penggunaan Sitrat

Koser mencipta sejenis media broth asas yang mengandungi natrium ammonium fosfat sebagai

sumber tunggal nitrogen, dan natrium sitrat sebagai sumber tunggal karbon. Bakteria golongan

aerogen boleh menggunakan sitrat sebagai sumber karbon , manakala golongan koliform tidak.

Dalam ujian yang menggunakan media Koser, hasilnya ditafsir berdasarkan berlakunya

kekeruhan pada media broth akibat pertumbuhan bakteria. Seterusnya, Simmons

mengubahsuai media Koser tersebut dengan menambahkan agar dan indicator, bromthymol

blue, yang kelihatan hijau pada pH 6.8 dan biru pada pH lebih 7.6.

Pengubahsuaian ini membolehkan pertumbuhan bakteria dikesan dengan lebih mudah kerana

dalam metabolisme karbon pada sitrat (pertumbuhan positif), suatu tindak balas alkali berlaku

dan ini ditunjukkan dengan perubahan pada warna media daripada hijau kepada biru tua.

Kadangkala bacaan hasil ujian tidak semata-mata berdasarkan kepada perubahan warna, tetapi

sama ada terdapat atau tidaknya pertumbuhan bakteria pada garis inokulasi di atas media.

Kehadiran pertumbuhan bererti kemampuan bakteria mengurai sitrat sebagai sumber karbon,

dan hasil ujian dinyatakan sebagai positif untuk sitrat.Perubahan warna, dalam hal ini,

mempermudahkan lagi pembacaan hasil ujian.

178

Ujian Penggunaan Sitrat

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Dawai lurus

3. Cerun agar sitrat Simmons di dalam botol Bijou

(Agar sitrat Simmons: Dari sumber komersial)

TATACARA

1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus dan biarkan sehingga sejuk.

2. Sentuhkan pada koloni bakteria dengan penghujung dawai.

3. Buatkan 1 garisan tipis bakteria pada permukaan agar.

4. Eramkan pada 37®C selama semalaman atau 48 jam, jika perlu.

5. Amatilah perubahan warna pada media.

PENGAMATAN DAN PENTAFSIRAN

Ujian positif: Pertumbuhan dengan/tanpa media menjadi biru.

Ujian negative: Tiada pertumbuhan atau media tetap hijau.

Pentafsiran ujian positif: Kemampuan menggunakan sitrat sebagai sumber tunggal karbon.

NOTA

1. Gunakan sedikit sahaja inokulum supaya semasa penginokulasian inokulum ini tidak

kelihatan sama sekali pada garis inokulasi dan untuk mengelakkan reaksi positif palsu

akibat bakteria yang mati membebaskan karbon dan nitrogen dalam kuantiti yang boleh

menampung pertumbuhan.

2. Elakkan daripada mengambil sebarang bahan nutrient daripada media kultur di mana

inokulum diambil.

3. Kultur yang menunjukkan pertumbuhan tanpa perubahan pH (perubahan warna) juga

dianggap positif kerana pada sesetengah bakteria yang lambat tumbuh keadaan tindak

balas alkali tidak dapat dicapai dalam tempoh pengeraman yang ditetapkan.

179

Pengeraman selama 48 jam mungkin diperlukan untuk bakteria yang lambat tumbuh

supaya warna biru dapat muncul.

Ujian Oksidase

Ujian oksidase menentukan kehadiran sitokrom C, sejenis enzim respiratori.Oleh yang

demikian, ujian ini hanya positif untuk bakteria yang memiliki sitokrom C. sitokrom adalah

protein yang mengandungi heme dan merupakan enzim oksidatif dalam kitaran respiratori yang

terlibat dalam fosforilasi oksidatif.Dalam ujian oksidase tatacara Kovacs, reagen oksidase

adalah tetrametil-p-fenilena-diamina dihidroklorida 1%. Enzim oksidase sitokrom tidak bertindak

secara langsung dengan reagen oksidase,tetapi menyebabkan oksidase sitokrom C yang

kemudian menyebabkan oksidase tetrametil-p-fenilena-diamina dihidroklorida sehingga

membentuk sejenis bahan kimia berwarna biru yang disebut biru Wunster. Sitokrom C yang

direduksi (ditambah electron) dalam tindakan ini diubah secara tidak langsung kepada bentuk

yang teroksidasi oleh oksidase sitokrom yang menerima elektronnya.Enzim oksidase sitokrom

kemudian menggantikan electron tersebut kepada oksigen untuk menghasilkan air dengan ion

hydrogen.

Ujian ini digunakan untuk membezakan streptkokus (oksidase-negatif) daripada Neisseria

(oksidase-positifa).

Tatacara Ujian Oksidase

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Slaid mikroskop

3. Kepingan kecil kertas turas Whatman no.1

4. Reagen oksidase (tetrametil-p-fenilena-diamina dihidroklorida 1%)

5. Kayu aplikator

TATACARA

1. Letakkan sekeping kertas turas kecil di atas slaid mikroskop bersih.

2. Titiskan 2 hingga 3 titis reagen oksidase ke atas kertas turas.

180

3. Ambil koloni bakteria dengan kayu aplikator dan goreskan ke atas kertas turas pada

bahagian yang menyerap reagen oksidase.

4. Amati kemunculan warna dalam beberapa saat.


Ujian positif: Kemunculan warna Lavender (ungu pudar) yang cepat (dalam beberapa saat)

menjadi

biru/ungu.

Ujian negative: Tiada perubahan warna atau warna muncul hanya setelah beberapa minit.

Pentafsiran hasil positif: Perubahan segera ke warna biru/ungu menunjukkan bakteria

memilikim

sitokrom C.

NOTA

1. Reagen ini mesti disediakan segar kerana sifatnya yang tidak stabil. Auto-oksidasi oleh

oksigen bebas dari udara boleh berlaku dan oleh yang demikian reagen ini dengan

sendirinya akan berubah menjadi biru atau ungu jika dibiarkan di udara agak lama.

2. Reagen yang baru disediakan perlu dibiarkan selama 15 minit untuk menjadi “masak”

sebelum digunakan.

3. Pastikan dan patuhi tempoh masa yang ditetapkan untuk mentafsir hasil ujian ini kerana

pada ujian yang disimpan lama sebelum dibaca hasil positif palsu boleh berlaku kerana

warna biru atau ungu boleh muncul akibat auto-oksidasi yang berlaku ke atas reagen.

4. Gunakan kayu aplikator atau dawai platinum untul mengambil koloni. Dawai nikrom juga

boleh mempengaruhi hasil ujian dan memberikan hasil positif palsu.

5. Tatacara alternatif ujian oksidase ini adalah dengan membanjiri kultur pada piring petri

dengan reagen dan kemudian segera menyingkirkan bahan yang berlebihan ini dengan

pipet. Hasilnya ditunjukkan dengan perubahan warna koloni bakteria kepada warna

ungu (oksidase-positif) atau tiada perubahan warna (oksidase-negatif).

Ujian Koagulase

181

Ujian untuk menentukan penghasilan enzim koagulase oleh stafilokokus adalah suatu ujian

penting dalam mikrobiologi diagnostik.Ia membezakan stafilokokus patogenik kerana

berkemampuan untuk menghasilkan enzim ini, daripada yang tidak menghasilkannya atau tidak

patogenik. Terdapat dua jenis koagulase; yang satu terikat pada dinding sel bakteria (koagulase

terikat) dan tidak bebas, dan yang satu jenis lagi dirembeskan oleh sel ke dalam media atau

cairan (koagulase bebas).Ujian slaid di mana penggumpalan atau pengelompokan bakteria

dihasilkan dipercayai disebabkan oleh koagulase terikat yang terdapat pada dinding sel. Enzim

bentuk ini bertindak secara langsung ke atas fibrinogen haiwan-haiwan tertentu dan

menghasilkan fibrin yang memerangkap bakteria sehingga berlakunya

penggumpulan/pengelompokan tersebut.Sebaliknya, koagulase yang dihasilkan secara bebas

bertindak dengan protrombin untuk menghasilkan thrombin, yang seterusnya bertindak ke atas

fibrinogen untuk menghasilkan fibrin (pembekuan).

Tatacara Ujian Koagulase Slaid

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Larutan salin 0.85%

3. Slaid mikroskop

4. Gelung dawai

5. Plasma arnab

TATACARA

1. Letakkan setitis larutan salin steril di atas sebuah slaid mikroskop yang bersih dan

kering.

2. Ambil beberapa koloni bakteria dengan gelung dawai steril.

3. Buatkan suspensi bakteria ini di dalam titisan salin.

182

4. Tambahkan setitis plasma arnab kepada suspensi dan campurkan dengan gelung

dawai.

5. Goncangkan slaid dan amatilah penggumpalan (clumping) bakteria yang akan kelihatan

sebagai kelompok-kelompok putih dalam masa 15 saat.


Ujian positif: Pembentukan gumpalan bakteria.

Ujian negatif: Tiada penggumpalan dan suspensi bakteria kelihatan homogeny.

Pentafsiran hasil positif: Bakteria memiliki enzim koagulase.

NOTA

1. Mana-mana bakteria yang boleh menggunakan sitrat sebagai sumber tenaga boleh

membebaskan kalsium yang akan mengakibatkan pembekuan plasma jika plasma

tersebut diambil daripada darah yang bercampur sitrat. Oleh yang demikian, adalah

amat penting untuk mempastikan bahawa bakteria yang diuji adalah benar-benar kultur

murni stafilokokus, dan ujian ini digunakan semata-mata untuk membezakan antara

strain yang menghasilkan koagulase daripada yang tidak.

2. Gunakan plasma arnab atau manusia dan bukan spesies mamalia lain kerana

kebanyakan plasma daripada spesies lain tidak bertindak dengan koagulase

stafilokokus. Perlu juga diperhatikan bahawa kadangkala plasma manusia yang

digunakan mengandungi bahan perencat yang akan memberikan hasil negative palsu.

3. Plasma perlulah diuji terlebih dahulu dengan strain kawalan positif dan negative

sebelum digunakan. Seterusnya, supaya hasil ujian boleh dipercayai dan diterima tanpa

ragu-ragu, ujian haruslah dilakukan juga keatas beberapa jenis bakteria kawalan yang

memberikan hasil positif kuat, positif lemah dan kawalan negatif.

4. Pastikan koloni bakteria boleh diemulsifikasi di dalam salin supaya tidak menimbulkan

masalah dalam pembacaan hasilnya nanti.

5. Ujian positif palsu boleh berlaku jika penggumpalan yang berlaku lewat diambil kira.

6. Hasil positif yang berlaku lewat atau negative diuji semula dengan ujian koagulase

tabung kerana terdapat strain S.aureus yang menghasilkan hanya koagulase bebas

yang tidak bertindak dalam ujian koagulase slaid.

183

Ujian Katalase

Katalase adalah enzim dengan bahagian (moieti) yang mengandungi besi. Tindak balas kimia

yang berlaku dalam ujian katalase adalah : 2H2O2 AE 2H2O + O2. Penghasilan gelembung

gas (oksigen) adalah tanda bagi ujian yang positif.Ujian katalase digunakan khususnya untuk

membezakan antara stafilokokus (katalase positif) dengan streptokokus (katalase negative) dan

juga kadangkala digunakan dalam pengenalpastian pelbagai jenis bakteria.

Tatacara Ujian Katalase

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Slaid mikroskop

3. Kayu aplikator

4. Hydrogen peroksida 3%

TATACARA

1. Letakkan setitis larutan hydrogen peroksida dia atas sebuah slaid kaca bersih dan

kering.

2. Sentuhkan penghujung kayu aplikator kepada koloni bakteria.

3. Masukkan organisma ke dalam titisan reagen di atas slaid.

4. Amatilah kehadiran gelembung-gelembung gas yang dihasilkan dengan cepat, rancak

dan berterusan.


Ujian positif : Penghasilan dan pembebasan gas dengan cepat dicirikan dengan gelembung-

gelembung gas yang dibebaskan dengan rancak.

Ujian negative : Tiada sebarang tindak balas. Penghasilan segelintir gelembung kecil selepas

20 – 30

saat tidak dianggap positif.

Pentafsiran hasil positif : Bakteria memiliki enzim katalase.

NOTA

184

1. Jangan gunakan dawai gelung kerana positif palsu boleh berlaku.

2. Jangan gunakan kultur yang berusia lebih daripada 24 jam untuk mengelak daripada

memperolehi hasil negative palsu kerana enzim ini hanya dapat dikesan pada kultur

hidup yang masih segar dan mungkin tiada lagi pada kultur tua.

3. Pada kultur anaerobik, dedahkan kultur kepada udara selama setengah jam sebelum

ujian dilakukan untuk membolehkan oksidasi aerobic ke atas katalase yang tereduksi

berlaku.

4. Gunakan H2O2 pada kepekatan 3% untuk mendapatkan hasil ujian yang terbaik atau

optimum. Larutan H2O2 disimpan di dalam botol gelap di dalam peti beku.

5. Seboleh-bolehnya elakkan daripada mengambil koloni yang tumbuh pada permukaan

media agar darah. Ini untuk mengelakkan daripada terambil bersama sel darah dan

mendapatkan hasil yang positif palsu seperti di atas. Tetapi, sekiranya hal ini tidak dapat

dielakkan, berhati-hatilah dalam pengambilan tersebut untuk mempastikan hasil yang

tepat dan betul.

6. Ujian katalase plat : Ujian ini boleh dilakukan ke atas koloni di atas plat kultur dengan

menuangkan reagen ke atas koloni berkenaan KECUALI jika media kultur tersebut

adalah agar darah kerana ia boleh memberikan hasil positif palsu. Perlu ditekankan di

sini bahawa darah juga mengandungi enzim katalase yang dapat bertindak balas

dengan reagen. Ujikan juga sebahagian daripada plat agar yang belum diinokulsi

dengan bakteria dengan menuangkan sedikit reagen di atasnya sebelum meneruskan

dengan ujian katalase plat ini untuk mengelakkan hasil positif palsu. Ini adalah kerana

sesetengah media mungkin mengandungi sedikit katalase yang boleh memberikan

tindak balas yang lemah dan lambat serta boleh menyulitkan pembacaan hasil.

Ujian Motiliti dengan Menggunakan Agar Separuh Pejal

Media pertumbuhan dengan kepekatan agar yang rendah (0.4% atau <) merupakan suatu

media separuh pejal yang membolehkan bakteria bergerak dan menyebar ke pelbagai arah di

dalamnya. Jika bakteria mempunyai kemampuan untuk bergerak atau bersifat motil ia akan

185

menunjukkan penyebaran yang bermula dari garis inokulasi. Bakteria yang tak motil akan tetap

pada garis inokulasi dan sama sekali tidak akan tersebar.

Garam tetrazolium digunakan dalam ujian motility ini kerana ia memudahkan pengesanan

pertumbuhan serta penyebaran bakteria secara visual di dalam media. Garam tetrazolium

adalah tanpa warna dan akan diubah kepada formazan, kompleks tak larut berwarna merah

hasil pereduksian oleh bakteria yang tumbuh.

Tatacara Ujian Motilit (Pergerakan) pada Agar Separuh Pejal

BAHAN

1. Kultur bakteria

2. Agar nutrient (0.4% atau <) yang mengandungi indicator (garam tetrazolium) di dalam

tabung uji.

3. Dawai lurus

4. Inkubator

TATACARA

1. Sterilkan keseluruhan dawai lurus.

2. Sentuh koloni bakteria dengan penghujung dawai.

3. Tusukkan hujung dawai ke dalam agar separuh pejal sehingga ke dasar tabung.

4. Eramkan semalaman.

5. Amati pola pertumbuhan bakteria.


Ujian positif : Pertumbuhan bakteria (merah) tersebar daripada garis tusukan dawai lurus.

Ujian negative : Pertumbuhan bakteria terhad kepada garis tusukan.

Pentafsiran ujian : Ujian positif – bakteria motif, ujian negatif – bakteria tak motil.

NOTA

1. Beberapa bakteria seperti Pseudomonas adalah aerobik dan akan hanya menunjukkan

motility pada bahagian atas media ini.

2. Oleh kerana keseluruhan dawai lurus akan ditusuk ke dalam agar maka pastikan

keseluruhan dawai ini dibakar untuk mensterilkannya.

186

3. Pertumbuhan beberapa jenis bakteria tertentu mungkin dihalang oleh garam tetrazolium.

4. Dawai yang ditusuk ke dalam media dikeluarkan seboleh-bolehnya bertepatan dengan

garis kemasukannya. Elakkan daripada menggerakkan dawai ke kiri atau ke kanan

semasa dikeluarkan (dan juga semasa dawai ditusuk) kerana ini akan menyebabkan

pertumbuhan yang kelihatan tersebar dan memberi tafsiran positif palsu mengenai

mobiliti.

187

MAKMAL KLINIKAL & TIBI

MAKMAL KLINIKAL DAN TIBI

PENGENALAN

Makmal klinikal dan tibi di dalam Hospital Nukleus Labuan ini berkesinambungan dengan makmal mikrobiologi kerana sampel yang positif untuk dikulturkan akan dihantarkan ke

188

makmal tersebut. Antara ujian yang dilakukan di makmal ini ialah ujian mikroskopi sputum, ujian urin feme, ujian stool ob,ujian sputum afb dan beberapa ujian lagi.

Sampel yang dihantar kebanyakannya adalah dari Klinik Pakar 2(KP2) kerana kebanyakan sampel yang didapati adalah berkaitan dengan wanita. Namun terdapat juga sampel yang dihantar dari wad seperti sputum.

CARTA ORGANISASI MAKMAL MIKROBIOLOGI

189

FAIZAL YUSOF

PEG.SAINS(KAJI KUMAN)C41

Tajuk ujian: pemprosesan spesimen dalam makmal klinikal dan tibi

1. Sampel: sputum

Bahan dan radas

190

SALSIAWATI HADIR

JTMP U29

TAN AH GEK

JTMP U29

1. Botol sputum(kaca)2. Slaid kaca3. Kayu aplikator

Kaedah ujian

1. Terima sampel dan borang sputum dalam bekas yang steril. Lakukan penolakan jika borang tidak betul atau tidak lengkap.

2. Daftar pesakit dan buat permohonan ujian dalam Labnet.3. Sampel sputum akan dilakukan di dalam kebuk wasap.4. Ambil sputum menggunakan kayu aplikator dan calitkan pada slaid kaca yang bersih.5. Sebarkan smear sputum dengan rata dengan keluasan kira-kira 3x2 cm.6. Buang kayu aplikator ke dalam plastik kuning biohazard.7. Keringkan slaid di udara atau dalam kebuk wasap tersebut. Jangan keringkan

menggunakan api.8. Lakukan pewarnaan Gram setelah smear kering.9. Perhatikan dan baca keputusan dibawah mikroskop.

Keputusan ujian mikroskopi sputum

Cell/IpfPolymorphonuclear neutrophils 10

Squamous epithelial cells 40Gram positive cocci 50Gram positive rods 50

Gram negative cocci 0Gram positive rods 0

Yeast cells 0

Interpretasi ujian

Pengkulturan bakteria tidak akan diterima apabila sel skuamus >10. Terkontaminasi oleh normal flora.

2. Sampel: Swab Genital(HVS)

Bahan dan radas

1. Swab Emies(bekas steril)2. Slaid kaca

191

Kaedah ujian

1. Terima sampel dan borang HVS dalam bekas yang steril. Lakukan penolakan jika borang tidak betul atau tidak lengkap.

2. Daftar pesakit dan buat permohonan ujian dalam Labnet.3. Sampel ini akan dilakukan di dalam kebuk wasap.4. Buka bekas pada bahagian atas dan calitkan swab pada slaid kaca yang bersih.5. Sebarkan swab smear dengan rata.6. Keringkan slaid di udara atau dalam kebuk wasap tersebut. Jangan keringkan

menggunakan api.7. Lakukan pewarnaan Gram setelah smear kering.8. Perhatikan dan baca keputusan dibawah mikroskop.

Keputusan ujian mikroskopi HVS

Cell/IpfPolymorphonuclear neutrophils 10

Yeast Cells 0Squamous epithelial cells 40

Lactobacilli 0Gram variable rods/coccobacilli 20

Curved gram variable rods 0Gram negative diplococci 0

Interpretasi ujian

Consistent with vaginitis,culture N.ANormal 0-3

Intermediate 4-6Consistent with bacterial vaginosis 7-10

3. Sampel: kahak(AFB)

Bahan dan radas

1. Slaid kaca2. Bekas yang steril

192

3. Kayu aplikotar(khas)

Kaedah ujian

1. Label id pesakit pada hujung slaid mikroskopi yang baru dan bersih tanpa sebarang calar dengan menggunakan pensil.

2. Guna kayu aplikator untuk memindahkan specimen daripada botol specimen kepada slaid. Patahkan hujung kayu aplikator kira-kira 1 cm dan pastikan bahagian itu tidak tercabut.

3. Pindahkan specimen ke atas slaid dengan memilih specimen purulent dan kental (jika ada). Gunakan kayu aplikator yang lain untuk mengurangkan specimen yang terlalu kental dan banyak.

4. Sebar smear pada slaid dengan rata menggunakan kaedah coiling dengan keluasan kira-kira 3x2cm.

5. Buang kayu aplikator dalam plastik kuning dan guna kayu aplikator yang baru untuk setiap sampel yang berlainan.

6. Keringkan slaid di udara. Jangan keringkan slaid menggunakan api.7. Lakukan pewarnaan Ziehl’s Neelsen.

Interpretasi ujian

Gram negatif rod,latar belakang warna biru.

4. Sampel: Urin FEME

Bahan dan radas

1. Bekas urin yang steril2. Miditron Junior II(mesin)

193

3. Dipstick combo 10

Prinsip(Miditron Junior II )

Mesin miditron junior II ini merupakan mesin semi-automatic yang menganalisis urin dengan hanya menggunakan Dipstick Combo 10, ujian menganalisis urin ini sangat mudah dilakukan dengan menggunakan sistem operator yang dipaparkan pada skrin.

Kaedah ujian

1. Celupkan strip combur test 10 ke dalam air kecing selama 1 saat.2. Lapkan lebihan air kencing tersebut.3. Letakkan strip tersebut di atas tempat sampel Meditron Junior.4. Tekan butang start5. Tunggu hingga mesin Meditron Junior selesai memproses6. catatkan keputusan yang dicetak oleh mesin Meditron Junior ke dalam borang ujian7. Sekiranya Mesin Meditron Junior tidak berfungsi, bandingkan reaksi warna dalam

kawasan ujian di atas strip dengan skala warna di atas label botol Combur Test 10

Interpretasi ujian

5. Sampel: Cecair seminal

Bahan dan radas

1. Slaid kaca

194

ParameterSpecific gravitypHLeukocytesNitriteProteinGlucoseKetoneUrobilinogenBilirubinerythrocytes

2. Sisip kaca3. Pipet dan tips4. Bekas seminal yang steril5. Silinder penyukat6. Mikroskop7. Neuber Chamber8. Kayu aplikator9. Air suling

Kaedah ujian

1. Catat masa pengambilan sampel, penerimaan sampel dan masa ujian dijalankan.2. Sukat isipadu sampel dengan menggunakan kaedah secara tidak langsung iaitu dengan

menggunakan bekas yang sama. Ukur isipadu air suling yang telah disukat dengan menggunakan silinder penyukat 10ml. Catat bacaan pada laporan ujian (Normal >2ml)

3. Perhatikan kepekatan sample (viscosity), laporkan samaada slightly diluent, normal ataupun extreme.

4. Pipetkan sedikit sampel ke atas slaid yang bersih dan tutup dengan sisip kaca.5. Kira peratusan pergerakan sperma di bawah mikroskop cahaya (40X). (Normal >50%)6. Lakukan percairan spesimen dengan mencampurkan 10 µl sampel dan 190 µl air suling

ke dalam tiub.7. Campurkan dengan sekata dan pipetkan sampel yang telah dicairkan ke atas Neubeur

Chamber dan lekapkan sisip kaca.8. Lihat di bawah mikroskop cahaya (40x)9. Kira bilangan sperma di dalam kotak E (Erythrocyte) yang berasingan dengan

menggunakan formula ini:

Bil Sel / ml =( bil sel dalam 5 kotak E ) x 10^6 / ml

(Bil normal per ml ialah >20 million / ml)

10. Kira peratusan morfologi normal & abnormal sperma (Normal >60% morphology normal)11. Catatkan semua bentuk pemerhatian12. Rekod semua keputusan ujian di dalam Buku Seminal Analysis dan Labnet

6. Sampel: Stool O.B(Occult Blood)

Bahan dan radas

195

1. Bekas feses2. Botol penutup hijau3. strip oc-light

Prinsip

Darah di dalam feses adalah salah satu tanda kanser kolon atau rektum. Jika darah hadir dalam sampel feses, molekul hemoglobin boleh berfungsi secara pseudoenzimatik. Kertas ujian akan bertukar biru dalam masa 5 minit jika terdapat kehadiran lebih daripada 2 hemoglobin mg per gram najis.

kaedah ujian

1. Buka penutup hijau botol sampel2. Calitkan specimen najis dan masukkan ke dalam botol sampel.3. Tutup penutup botol, ketatkan dan goncang sepenuhnya4. Letakkan botol sampel dengan penutup hijau di bawah5. Alihkan kon nozzle putih6. Masukkan strip oc-light ke dalam botol sampel sehingga kedalaman paling bawah7. Baca keputusan ujian dalam masa 5 minit.8. Laporkan keputusan sebagai negative jika hanya satu garisan yang berwarna merah

jambu-ungu muncul pada kawasan bertanda ‘C’.9. Jika ada 2 garisan yang muncul, laporkan sebagai positif.

Interpretasi ujian

Terdapat 2 garis – Positif

Terdapat 1 garis - Negatif

7. Pewarnaan Gram

Reagen

196

1. Kristal violet2. Safranin3. Aseton alkohol4. Lugol’s Iodine

Prinsip ujian

Pewarnaan ini adalah untuk membezakan bakteria gram positif dan bakteria gram negatif.

Pembezaan ini berdasarkan tindak balas bakteria terhadap alkohol iaitu agen penyahwarnaan.

Bakteria gram positif tidak bertindakbalas dengan alkohol dan akan berwarna ungu gelap

manakala bakteria gram negatif akan bertindak balas dengan alkohol. Warna ungu gelap akan

pudar dan bakteria akan berwarna merah jambu disebabkan pewarna balas safranin.

Kaedah ujian

1. Lakukan palitan pada slaid yang bersih dan lakukan ‘fixation’ dengan menggunakan haba.

2. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan crystal violet dan biarkan selama 1 minit. 3. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 4. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan Lugol’s iodine. Biarkan 1 minit. 5. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 6. Basahkan slaid dengan menggunakan acetone dan biarkan selama 1/2 minit. 7. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 8. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan safranin. Biarkan selama 1 minit. 9. Basuh slaid menggunakan air paip yang bersih. 10. Keringkan slaid tersebut sebelum diperiksa di bawah microskop. 11. Periksa slaid di bawah mikroskop pada kanta berkuasa 100x 12. Perhatikan warna dan morfologi bacteria. Catatkan keputusan.

Interpretasi ujian

Gram Positif = Warna Biru

Gram Negatif = warna Merah

Gram Positif Gram NegatifStaphylococci EnterobacteriaceaeStreptococci SalmonellaMycobacterium Shigella

Haemophilus

8. Pewarnaan Ziehl’s Neelsen(AFB)

197

Reagen

1. Carbolfuschin2. Asid alkohol3. Metalina biru4. Api

Prinsip

Perwarnaan Zhiel Neelson adalah untuk mewarnakan bakteria tahan asid seperti Mycobacterium Tuberkulosis. Karbon fuschin yang digunakan adalah untuk mewarnakan bakteria berwarna merah. Tujuan pemanasan karbon fushin adalah untuk memusnahkan struktur keratin sel bakteria tersebut supaya warna dapat diserap dan sekiranya bakteria seperti Mycobacterium Tuberculosis hadir, ia akan berwarna merah.

Kaedah ujian

1. Fixkan smear menggunakan api secara berhati-hati dan perlahan-lahan sebanyak 3 hingga 4 kali kira-kira 1 hingga 2 saat pada belakang smear yang telah disediakan.

2. Letak slaid yang telah difix pada jambatan pencelupan di atas singki dengan kedudukan smear menghala ke atas. Pastikan jarak antara slaid adalah lebih kurang 1 hingga 2 cm.

3. Basahkan keseluruhan slaid dengan menggunakan larutan Carbolfuschin.4. Panaskan slaid yang telah dibasahkan tadi dengan menggunakan api yang perlahan

hingga mengeluarkan wap. Jangan biarkan slaid tersebut dipanaskan sehingga kering atau menggelegak. Biarkan selama 5 minit.

5. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan.6. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan 3% acid alcohol dan biarkan selama 2

hingga 3 minit.7. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan.8. Basahkan slaid dengan menggunakan larutan methylene blue dan biarkan selama 1

minit.9. Basuh slaid dengan menggunakan aliran air paip yang perlahan.10. Keringkan slaid tersebut sebelum diperiksa di bawah mikroskop.

Interpretasi ujian

AFB = Warna merah dan latar belakang biru

9. ujian UPT(WHPM)

198

Bahan dan radas

1. Bekas urin yang steril2. Kit ujian

Prinsip

Pada prinsipnya reaksi imunologi terjadi pada kertas kromatografi melalui aksi kapilaritas. Pada

sistem ini menggunakan dua jenis antibody-antigen spesifik. Salah satu antibody ditempatkan

pada kertas kromatografi (fase diam) dan lainnya dilabel dengan koloid emas (colloidal gold)

dan diinfiltrasi ke tempat sampel (sample pad). Ketika cairan sampel diteteskan pada tempat

sampel, maka akan terbentuk kompleks imun dengan antibodi yang dilabeli dengan koloid

emas. Kompleks tersebut akan bergerak bersama dengan cairan sampel dan akan berinteraksi

dengan antibodi yang ada pada kertas kromatografi dan menghasilkan garis berwarna merah

ungu.

Kaedah ujian

1. Terima sampel daripada kaunter 2. Pastikan nama pada bekas air kencing dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak

sama, hantar kembali ke kaunter 3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet. 4. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik. 5. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian. 6. Rendamkan strip ujian ke dalam bekas berisi sampel. 7. Keluarkan strip ujian daripada bekas sampel apabila sampel air kencing kelihatan

meresap naik melalui strip ujian. 8. Tafsirkan keputusan ujian dalam 5 minit 9. Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika

keputusan meragukan, ulangi ujian 10. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301. 11. Sahkan keputusan

Intertpretasi ujian

Satu garisan – Negatif

2 garisan – Positif

10. SMEAR DARAH PARASIT MALARIA

199

Apusan Darah Parasit Malaria


i) Mikroskop

ii) Slaid

iii) Pewarna Giemsa

Prinsip:

10% pewarna Giemsa memberikan warna biru kepada sitoplasma manakala kromatin

diwarnakan dengan warna merah. Filem darah tebal adalah untuk pembilangan parasit

manakala filem darah nipis adalah untuk pengenalpastian spesis parasit malaria.

Prosedur:

1. Spesimen diterima, diperiksa dan dilabel.

2. Filem darah dikeringkan sebelum fiksasi dilakukan.

3. Filem darah nipis difiksasi dalam methanol selama 1 minit.

4. Slaid diwarnakan dengan 10% Giemsa selama 10minit.

5. Selepas itu, slaid dicuci dan dikeringkan.

6. Slaid diperhatikan dibawah mikroskop pada kuasa 100x dan diletakkan minyak imersi

pada slaid.

7. Pemerhatian dilaporkan.

Keputusan:

1. 1-10 parasit dalam 10 field filem darah tebal - + ( Sederhana).

2. 11-100 parasit dalam 10 field filem darah tebal - ++ ( Sederhana teruk).

3. 1-10 parasit dalam 1 field filem darah tebal - +++ ( Teruk).

4. 1-100 parasit dalam 1 field filem darah tebal - ++++ (Sangat teruk).

11. OVA DAN SISTA FESES (STOOL OVA AND CYST)

200

Ujian Ova Dan Sista Feses

Prinsip:

Konsentrasi formalin-eter merupakan teknik sediment yang memerhatikan telur helmint, larva

dan sista protozoa. Teknik ini sangat cepat dan mempunyai kebaikan dimana lipid dan bahan

kolisidal dapat disingkirkan dan memberikan sediment yang jernih.


i) Mikroskop

ii) Pengempar

iii) Slaid

iv) Sisip kaca

v) 10% formalin

vi) Eter

vii) Kayu aplikator

viii) Tabung uji.

Prosedur:

1. Spesimen diterima, diperiksa dan dilabel.

2. Sedikit sampel feses diambil menggunakan kayu aplikator dan dimasukkan ke

dalam tabung uji.

3. Air dimasukkan sehingga 10-12 ml dan digaul.

4. Suspensi tersebut ditapis dengan kain kasa untuk menyingkirkan benda-benda

asing.

5. Suspensi tersebut kemudiaannya dicuci dua kali dengan mengemparnya pada

kelajuan pengempar 2000rpm selama 2 minit.

6. Selepas itu, supernatan dibuang dan sediment diambil. Sebanyak 10 ml 10%

formalin ditambah pada sediment tersebut dan digaulkan sehingga sebati.

7. 5ml eter ditambah dan tabung uji ditutup dan digoncang secara berterusan selama

30 saat.

8. Tabung uji diempar selama 2 minit pada kelajuan 2000rpm.

9. Supernatant dibuang dan setitik sediment diambil dan dititiskan pada slaid kaca

untuk pemerhatian bawah mikroskop.

10. Pemerhatian dilaporkan.

201

Keputusan:

1. Positif – telur, larva dan sista kelihatan.

2. Negatif – tiada telur, larva dan sista kelihatan

202

LAMPIRAN

203

Architect Plus C4000 Abbott Miditron Junior II

one step pregnancy test roche hitachi cobas c311

cobas h 232 poc system

BD Bactec 9050

sop full

Documents