hitungan cawan & teknik sampling
TRANSCRIPT
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
1/12
LEMBAR KERJA PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI UMUM
TEKNIK ENUMERASI MIKROBA
Teknik Sampling & Hitungan Caan
Nama ! Lingga" Pu"i Galu# A$eng
NIM ! %'%((%(%%%%(%)
Kel*mp*k ! A+
Kela, ! AA,i,ten !
Ju"u,an Tekn*l*gi Ha,il Pe"tanian
-akulta, Tekn*l*gi Pe"tanian
Uni.e",ita, B"ai$a/a
0(%'
1
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
2/12
PRELAB
Tanggal Praktikum 23 Maret 2015
Praktikum 3.1 TEKNIK SAMPLING
1. Bagaimana cara pengambilan sampel sayuran seperti bayam, sawi yang akan dianalisis total
E.coli !elaskan ta"apannya#
Metode $ %&araswati, 200'( )
• Menyiapkan wada" erlenmeyer yang tela" diaseptis.
• Pisau yang akan digunakan diaseptiskan terlebi" da"ulu, dengan disemprot alko"ol
'0* dan dibakar pada bunsen.
• Menyiapkan sayur bayam, sawi yang tela" ditimbang seberat 5 gram, kemudian
dipotong+potong.
• Memasukkan potongan sayuran kedalam 5 ml pepton.
Metode $$ %Pasalu, 200-( )
• Menyiapkan wada" erlenmeyer yang tela" diaseptis.
• Pisau yang akan digunakan diaseptiskan terlebi" da"ulu, dengan disemprot alko"ol
'0* dan dibakar pada bunsen.
• Memotong sayuran sawi dan bayam dengan ukuran sebesar 5 5 cm.
• Menyiapkan cotton wool swab yang dicelupkan dalam larutan pengencer pepton.
• Permukaan sayuran dioles dengan menggunakan cotton wool swab sebanyak 3 kali.
2. !elaskan peranan teknik sampling dalam pengu/ian mikrobiologi !elaskan#
Peranan teknik sampling dalam pengu/ian mikrobiologi adala" untuk mendapatkan
"asil yang mewakili sampel yang akan digunakan dan untuk memuda"kan dalam
melakukan analisis /umla" mikroba sampel yaitu dengan mendapatkan "asil yang
mewakili populasi sampel yang digunakan. Teknik sampling mempunyai peranan yang
besar dalam menentukan keber"asilan riset untuk meng"asilkan kemampuan prediksi
yang kuat, serta generalisasi "asil riset kedalam populasi %mar, 2005(.
3. !elaskan perbedaan ta"apan pengambilan sampel cair dan padat untuk pengu/ian mikrobiologi
!elaskan ta"apannya #
&el air ) sebelum diambil sampel "arus diaduk %di"omogenkan(. emudian sampel diambil
sebanyak 100+500 ml, ditempatkan pada botol steril. alu dibawa ke laboratorium %4ibowo, 200(.
&el Padat ) digunakan pisau, sendok atau alat lain untuk mengambil sampel. Pengambilan
dilakukan pada permukaan maupun bagian dalam. emudian diamati beberapa bagian dari tempat
yang berbeda kira+kira 100 gram. alu ditulis tanggal pengambilan, nama sampel, dan lokasi. alu
dibawa ke laboratorium %4ibowo, 200(.
2
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
3/12
DIAGRAM ALIR
Sampel Padat
Dipotong secara aseptis sebanyak 5 gram
Dihancurkan
Dilarutkan dalam pepton 45 ml
(pengenceran 10-1)
HS!"
Dihitung #umlah koloni yang tumbuh pada media
Diinokulasikan pada ca$an petri dengan metode pour dan spread
% pengenceran terakhir (P&' *)
Diinkubasi pada suhu %+o& selama ,4 #am
%1 Pengambilan sampel padat
01 Pengambilan sampel cair
+1 Pengambilan sampel permukaan
&el cair
%susu, sirup, dan es krim(
di"omogenisasikan
6iambil sampel sebanyak 100+500 ml
6itempatkan di botol steril
6ibawa ke laboratorium
78&$
&ur9ace &lice
6icuci dan dibilas
6iusap %swab( dengan menggunakan cotton+wool swab
3
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
4/12
1 Pengambilan sampel anaerob
'1 Transportasi dan penyimpanan sampel
21 Penanganan sampel di laboratorium
8d"esi:e tape %ditempel dan ditanam ke media(
$mpression plates
Ba"an %daging bagian dalam(
6iusap %swab( dengan menggunakan cotton+wool swab
6icuci dan dibilas
8d"esi:e tape %ditempel dan ditanam ke media(
$mpression plates
&el
6ipeli"ara "ingga dilakukan tes laboratorium
Makanan yang bisa dibekukan disimpan dalam 9ree;er menggunakan
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
5/12
5
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
6/12
3A-TAR PUSTAKA
Pasalu, 6e:iyanti, &ai9uddin &ira/uddin, l9a" >a/amuddin. 200-. Analisis Total Mikroba
Dan Jenis Mikroba Patogen Pada Jajanan Anak . Makasar ) ni:ersitas 7asanuddin
Makassar.
&araswati, =asti. 200'. Metode Analisa Biologi Tanah. Bogor ) Balai Besar Penelitian 6anPengembangan &umber 6aya Pertanian.
mar, 7usein. 2005. Teknik Sampling . !urnal Mikrobiologi. !akarta ) PT ?ramedia Pustaka
tama.
4ibowo, Marlia &inggi". 200. Prinsip Dan Pelaksanaan Pengambilan Sampel (Sampling).
Bandung ) $TB.
3A-TAR PUSTAKA TAMBAHAN
7armita. 200@. Bk Ajar !a"ati Ed # $. !akarta ) edokteran Agc
$rianto, oes. 200-. Mikrobiologi Jilid % . Bandung ) rama 4idya
Team Penyusun ab Biologi. 200@. Petnjk Praktikm Mikrobiologi Dasar . Cakultas
Matematika 6an $lmu Pengeta"uan 8lam ) ni:ersitas !endral &oedirman
-
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
7/12
PRELAB
Tanggal Praktikum 23 Maret 2015
Praktikum 3.3 HITUNGAN CA4AN
1. !elaskan prinsip dari metode "itungan cawan #
Prinsip dari metode "itungan cawan adala" /umla" mikroba yang masi" "idupditumbu"kan pada medium agar, mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk
koloni yang dapat dili"at langsung dan di"itung dengan mata tanpa menggunakan
mikroskop. Metode "itungan cawan merupakan cara yang paling sensiti9 untuk
meng"itung /umla" mikroba %8nggraini, 2010(.
2. 8paka" metode "itungan cawan dapat meng"itung /umla" sel Menurut anda mengapa demikian
!elaskan#
Tidak bisa, karena metode "itungan cawan merupakan cara yang paling sensiti9 untuk
menentukan /umla" mikroba, "al ini disebabkan ole" "al+"al berikut %$rianto, 200-( )1. 7anya sel yang masi" "idup sa/a yang dapat di"itung.
2. Bebebrapa /enis mikroba dapat di"itung sekaligus.
3. 6apat digunakan untuk isolasi dan identi9ikasi mikroba, karena koloni yang
terbentuk mungkin berasal dari suatu mikroba yang mempunyai penampakan
pertumbu"an secara spesi9ik.
3. 8paka" yang dimaksud dengan metode pour plate dan spread plate pada "itungan cawan
!elaskan#
Metode pour plate ) sampel yang suda" diencerkan dimasukkan ke dalam cawan petri,kemudian ditamba"kan agar cair steril yang tela" diinginkan %'+50o( sebanyak 15+20
ml dan digoyangkan supaya men/adi "omogen. Metode pour plate ini mempunyai
kekurangan yaitu membutu"kan waktu yang lama dan ba"an yang relati9 banyak tetapi
tidak memutu"kan keterampilan tinggi %Tim Penyusun ab Biologi, 200@(.
Metode spread plate ) dilakukan dengan menyemprotkan 0,1 ml suspensi yang tela"
diencerkan ke atas medium agar kemudian menyebarkannya secara merata dengan
spreader secara aseptis. 6engan ini di"arapkan bakteri terpisa" secara indi:idual,
kemudian dapat tumbu" men/adi koloni tunggal. eunggulan spread plate adala"memisa"kan mikroba yang aerob dengan mikrob yang lainnya dan mikroba yang tumbu"
dapat tersebar secara merata pada bagian permukaan media agar %4aluyo, 200'(.
. !elaskan prinsip pengu/ian biru metilen pada produk susu#
/i reduktase metilen biru pada produk susu digunakan untuk mengukur akti9itas bakteri
yang terdapat didalam susu, dan dapat pula digunakan untuk memperkirakan /umla"
bakteri dalam produk susu. /i reduktase ini didasarkan atas akti:itas mikroba dalam susu
se"ingga meng"asilkan senyawa pereduksi yang dapat menguba" warna biru pada metilen
biru men/adi warna puti" /erni". &emakin lama peruba"an warna dari biru men/adi puti" berarti akti:itas bakteri kecil atau /umla" bakteri sedikit dan susu mempunyai mutu yang
baik. &e"ingga dalam pengu/ian ini dikategorikan men/adi , yaitu )
'
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
8/12
1. Mutu sangat baik /ika lama reduktase lebi" dari @ /am dengan perkiraan /umla"
bakteri kurang dari 500 ribuDml.
2. Mutu susu baik /ika lama reduktase ter/adi antara - sampai @ /am dengan
perkiraan /umla" bakteri 1 sampai /utaDml.
3. Mutu susu cukup baik /ika lama reduktase ter/adi antara 2 sampai - /am dengan
perkiraan /umla" bakteri sampai 20 /utaDml.
. &usu bermutu renda" /ika lama reduktase kurang dari 2 /am dengan perkiraan
/umla" bakteri lebi" dari 2 /utaDml.
%>iemi, 200(.
Para9 8sisten
>ama)
@
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
9/12
DIAGRAM ALIR
1. &el 6agingD$kan
2. &el &ayuran
3. &el Telur
a. Perlakuan ba"an
Mikroba pada permukaan dagingDikan
6iswab sebanyak 3 kali
&wab direndam dalam pengencer
&wab diputar+putar dan diperas pada dinding tabung
6ilakukan pengenceran "ingga 10+5
6iinokulasikan pada cawan petri dengan metode pour dan spread
3 pengenceran terak"ir %&&8, >8(
6iinkubasi pada su"u 3'o selama 2 /am
6i"itung /umla" koloni yang tumbu" pada media
78&$
&ayuran
6ipotong secara aseptis seluas 2 2,5 cm
Potongan dicelupkan ke dalam erlenmeyer berisi 25 ml larutan
pengencer
6ikocok sebanyak 25 kali
6ilakukan pengenceran "ingga 10+
6iinokulasikan pada cawan petri dengan metode pour dan spread
3 pengenceran terak"ir %M=&8, >8(
6iinkubasi pada su"u 3'o selama 2 /am
6i"itung koloni yang tumbu" dan di"itung /umla" koloni mikroba per cm2 permukaan
sayur
78&$
Telur
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
10/12
Dilakukan penumbuhan duplo
Dituangkan media cair ke dalam ca$an dan digoyangkan supaya merata
gar memadat' diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu ,%-%,o& selama ,-% hari
Dihitung #umlah koloni yang tumbuh
Sampel Padat
Dipotong secara aseptis sebanyak 5 gram
Dihancurkan
Dilarutkan dalam pepton 45 ml
(pengenceran 10-1)
HS!"
Dihitung #umlah koloni yang tumbuh pada media
Diinokulasikan pada ca$an petri dengan metode pour dan spread
% pengenceran terakhir (P&' *)
Diinkubasi pada suhu %+o& selama ,4 #am
b. Pengenceran
c. Penumbu"an
. &el Padat
6icuci dengan air sabun sampai bersi", ditiriskan, dicelupkan ke dalam
alko"ol '0* selama 10 menit, ditiriskan lagi
6iletakkan diatas pinggan alumunium, dipi/arkan bagian u/ung yang runcing
6ilubangi bagian u/ung yang runcing, dilakukan diatas api sebentar, dan
dituangkan seluru" isinya ke dalam gelas piala steril
Telur
6ipeca"kan, dikocok dengan sendok atau spatula steril
Pipet 10 ml atau ditimbang 10 gram ke dalam 0 ml larutan pengencer berisi butiran
gelas, se"ingga diperole" pengenceran 10+1
6ikocok sebanyak 25 kali
6ibuat pengenceran 10+2
Telur
78&$
10
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
11/12
5. &el air %&usu, 8ir Mineral(
&el cair%susu, sirup, dan es krim(
6iencerkan "ingga 10+1
6imasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi ml akuadest yang tela"
disterilisasikan
6ikocok dengan :orte
6ibuat pengenceran 10+2, 10+3 dan dilakukan duplo
6iambil masing+masing 1 ml dan ditanam dalam cawan petri dengan media
P8 yang tela" disterilisasi
6iinkubasi pada su"u 30+32o selama 2+3 "ari
6i"itung koloni yang tumbu"
78&$
11
-
8/19/2019 Hitungan Cawan & Teknik Sampling
12/12
3A-TAR PUSTAKA
8nggraini, &ri. 2010. Poplasi dan Sampel . !urnal imia. !akarta ) Cakultas ese"atan
Masyarakat ni:ersitas $ndonesia. Eol ) 1.
$rianto, oes. 200-. Mikrobiologi Jilid % . Bandung ) rama 4idya.
>iemi, =.M dan &.$ >iemala. 200. Measrment &ncertaint" Microbiological 'ltiatin
Methods. Berlin ) ni:ersity Berlin.Tim Penyusun ab Biologi. 200@. Petnjk Praktikm Mikrobiologi Dasar . Purwokerto )
ni:ersitas !endral &oedirman.
4aluyo, . 200'. Mikrobiologi &mm. Malang ) MM Pers.
3A-TAR PUSTAKA TAMBAHAN
ay, Bibiana 4, 7astowo, &ugyo. 200-. Mikrobiologi Edisi % . !akarta ) =a/awali Press
Madigan, M. T, and Martinko, !. M. 200-. Biolog" o Microorganisms. >ew !ersey )
Prentice+7all,
Manurung, &oraya. 2011. Metode Perhitngan Mikrobiologi. ogyakarta ) ni:ersitas ?a/a"
Mada
Muk"lis. 200@. Mikrobiologi Pangan % . !akarta ) ?ramedia Pustaka tama.
Purwoko, T. 200'. *isiologi Mikroba. !akarta ) Penerbit PT Bumi 8ksara