pembahasan laporan fitokimia kromatografi kolom

27/4/2014 ARL Lawang blog: laporan fitokimia kromatografi kolom

http://lawangarl711.blogspot.com/2013/10/laporan-fitokimia-kromatografi-kolom.html 1/31

ARL Lawang blog

laporan fitokimia kromatografi kolom

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA II Isolasi dan Idendtifikasi Fraksi Aktif dari Ekstrak Daun Bunga Terompet (Mandevillae sanderi ) meng...

laporan isolasi dan inokulasi bakteri

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Didalam kehidupan kita sehari hari kita tidak pernah terlepas dari berbagaimacam organi...

laporan pemeriksaan SGPT dan SGOT

A. MAKSUD PRAKTIKUM Adapun maksud dari praktikum ini adalah menganalisa kadar SGOT ( Serum GlutamicOxaloacetic Transaminase) dan SG...

laporan trigliserida dan kolesterol

A. Maksud Praktikum Adapun maksud dari praktikum ini adalah menganalisis nilai normal triglesirida dan kolesteroldalam serum. B...

laporan pemeriksaan albumin dalam serum

A. Maksud Praktikum Adapun maksud dari praktikum ini adalah u ntuk mengetahui dan memahami cara pemeriksaanalbumin dalam serum. ...

laporan pemeriksaan urin

A. Maksud Percobaan Adapun maksud dari praktikum ini yaitu untuk melakukan pemeriksaan warna urin, bau urin, bobotjenis urin, PH...

laporan uji mic dan koefisien fenol

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Di dalam bidang ilmu mikrobiologi, untuk dapat menelaah bakteri khususnyadalam skala la...

laporan protein total dalam serum

A. Maksud Praktikum Adapun maksud dari praktikum ini adalah Untuk mengetahui dan memahami carapemeriksaan protein tot...

laporan pemeriksaan SGPT dan SGOT dalam darah

A. Maksud Praktikum Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengukur kadar AST dan ALT dalam serum darah .B. Tujuan pr...

laporan nitrobenzen

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Salah satu senyawa yang paling sering digunakan dalam bidang farmasi adalahnitro benzen, seh...

Minggu, 13 Oktober 2013

laporan fitokimia kromatografikolom

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA II

Isolasi dan Idendtifikasi Fraksi Aktif dari Ekstrak Daun Bunga

Terompet (Mandevillae sanderi) menggunakan Kromatografi Kolom

Konvensional,Kromatografi Cair Vakum dan

Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

OLEH :

NAMA : Murdianto Usi RL

STAMBUK : 150 2010 170

KELOMPOK : II (DUA)

KELAS : L 1

ASISTEN : IRAMAYASARI S.Farm,Apt

LABORATORIUM FARMAKOGNOSI - FITOKIMIA

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

MAKASSAR

2013

BAB I

PENDAHULUAN

Mimpi tidak hanya membantu Anda

berhadapan dengan kegagalan, tetapi mereka

juga memotivasi Anda secara konstan.

Sepenggal Bahasa ku

ARL Lawang Ikuti 4

Semua Orang Bebas

Untuk Memilih Tapi

Pilihlah Sesuatu

Yang Bisa

Menguntungkan

Semua Orang........

Lihat profil

lengkapku

Mengenai Saya

2014 (4)

2013 (30)

Desember (1)

November (2)

Oktober (27)

materi kuliahflavanoid

makalahanalisis kimia

laporanfermentasi

syair laguku

makalahspektrofotometri

makalah selhewan dantumbuhan

makalahelektrolitcairan dalamtubuh

makalahpenetapankadarbenzalkoniumklorida

MAKALAHISOLASIDANIDENTIFIKASISENYAWASTEROID ...

laporan

Arsip Blog

Bagikan 1 Lainnya Blog Berikut Buat Blog Masuk



I.1 Latar Belakang

Istilah kromatografi mula-mula ditemukan oleh Michael Tswett

(1908), seorang ahli botani Rusia. Nama kromatografi diambil dari

bahasa Yunani (chromato = penulisan dan grafe = warna).

Kromatografi berarti penulisan dengan warna. Kromatografi adalah

cara pemisahan campuran yang didasarkan atas perbedaan distribusi

dari komponen campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam

(stationary) dan fasa bergerak (mobile). Fasa diam dapat berupa zat

padat atau zat cair, sedangkan fasa bergerak dapat berupa zat cair

atau gas. Teknologi yang penting untuk analisis dan pemisahan

preparatif pada campuran bahan adalah prinsip dasar kromatografi.

Pemilihan teknik kromatografi sebagian besar bergantung

pada sifat kelarutan senyawa yang akan dipisahkan.Kromatografi

digunakan sebagai untuk memisahkan substansi campuran menjadi

komponen-komponennya, misalnya senyawa Flavonoida yang terdapat

pada tahu, tempe, bubuk isoflavon memiliki banyak manfaat.

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan

campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui

kuantitasnya yang menggunakan. Kromatografi juga merupakan

analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap

maupun cuplikannya.

KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa senyawa yang

sifatnya hidrofobik seperti lipida lipida dan hidrokarbon yang sukar

dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna

untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang

diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara

kromatografi, dan isolasi senyawa murni skala kecil.

Beberapa kelabihan senyawa isoflavon yang potensial bagi

kesehatan manusia, diantaranya adalah sebagai antioksidan,

antitumor / antikanker, antikolestrol, antivirus, antialergi, dan dapat

mencegah osteoporosis. Dan semua kromatografi bekerja berdasarkan

metode kromatografi.

I.2 Maksud dan Tujuan

I.2.1 Maksud

Adapun maksud dari praktikum ini adalah

1. Untuk mengetahui dan memahami cara pemisahan senyawa

pada ekstrak daun bunga terompet (Mandivella sanderi)

menggunakan kromatografi kolom konvensional.

2. Untuk mengetahui dan memahami cara memisahkan sampel

laporanfitokimiakromatografikolom

laporaninstrumen

laporan uji micdan koefisienfenol

laporan ujisterilisasiruangan

materi kuliahantidiabetikoral

materi kuliahantidiabetikoral

laporannitrobenzen

makalah sel danjaringan

laporan ujiaktivitaspengawet

laporan kapangdan khamir

laporan isolasidan inokulasibakteri

laporanaktivitasantimikroba

laporanpemeriksaanurin

laporanpemeriksaanSGPT danSGOT

laporantrigliseridadankolesterol

laporanpemeriksaanSGPT danSGOT dalamdarah

laporan proteintotal dalamserum

laporanpemeriksaanalbumindalam serum



ekstrak daun bunga terompet (Mandivella sanderi) dengan

menggunakan kromatografi kolom cair vakum.

3. Untuk mengetahui dan memahami metode penentuan

komponen kimia secara kromatografi lapis tipis preparatif

yang terdapat dalam fraksi kasar n-heksan daun bunga

terompet (Mandivella sanderi)

1.2.2 Tujuan

Adapun tujuan dilakukannya percobaan kali ini adalah

1. Untuk menentukan nilai Rf masing-masing noda

kromatogram dari sampel ekstrak daun bunga terompet

(Mandivella sanderi) dengan menggunakan meode

kromatografi kolom konvensional

2. Untuk menentukan nilai Rf masing-masing noda

kromatogram dari sampel ekstrak daun bunga terompet

(Mandivella sanderi) dengan menggunakan meode

kromatografi kolom cair vakum

3. untuk memisahkan campuran senyawa dalam fraksi kasar n-

heksan daun bunga terompet (Mandivella sanderi) dengan

metode kromatografi lapis tipis praparatif dan untuk

mengetahui nilai Rf.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Klasifikasi Ilmiah (http://www.plantamor.com/index.php?plant=1940)

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)



Kelas : Magnoliopsida (Berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas : Asteridae

Ordo : Gentianales

Famili : Apocynaceae

Genus : Mandevilla

Spesies : Mandevilla sanderi

Ciri - ciri Umum Bunga Terompet

Bunga terompet merupakan tumbuhan berkeping dua/ dikotil.

Berikut ini ciri-ciri dari bunga terompet, yaitu

(http://deztriya.blogspot.com/2012/04/tumbuhan-biji-terbuka-dan

tertutup.html) :

Ciri Umum Penjelasan

Biji Biji mempunyai lembaga dengan 2 lembaga

Lembaga/

kecambah

Akar lembaga tumbuh terus menjadi akar tungggang yang

bercabang-cabang dan akhirnya membentuk sistem akar

tunggang

Ujung akar lembaga dan ujung pucuk lembaga tidak

mempunyai pelindung khusus

Batang Batang dari pangkal ke ujung seperti kerucut panjang,

bercabang-cabang, buku-buku dan ruas tidak jelas

Daun Daun tunggal atau majemuk, seringkali disertai daun

penumpu, jarang mempunyai upih

Daun duduknya tersebar atau berkarang

Tulang daun menjari atau menyirip

Bunga Bagian-bagian bunga berjumlah 2, 4 atau 5

Anatomi Baik akar maupun batang mempunyai kambium, sehingga

dapat tumbuh membesar (pertumbuhan sekunder)

Letak berkas pembuluh melingkar

Mandevilla Sandersi tanaman rambat berbunga dengan banyak

pilihan warna.Tanaman rambat memang banyak digunakan untuk

menciptakan suasana rumah yang asri. Disitu memang tanaman rambat

akan lebih mendukung konsep tersebut karena mampu tumbuh rimbun dan

mempunyai bunga yang berwarna cerah. Kesan yang muncul selain teduh

juga mampu memberikan kombinsai warna yang menawan. Mandevilla

sendiri disebut juga sebagai bunga terompet karena bunga yang muncul

mirip seperti terompet. Tanaman ini diyakini berasal dari wilayah Florida,

Amerika Serikat dengan kombinasi warna yang beragam mulai dari merah,

putih, dan pink. Bentuk kelopak juga cukup beragam salah satunya mampu

tumbuh menumpuk seperti halnya adenium dokson atau bunga mawar.

Tanaman yang cukup melegenda di dunia landscape dan eksterior ini

mempunyai karakter membutuhkan sinar matahari penuh untuk tumbuh.

Kondisi ini tentu sangat cocok dengan fungsi tanaman sebagai naungan.

Apalagi bila lokasi rumah berada di daerah perkotaan yang punya suhu

udara sangat panas.



Menurut Badrun Sutiyuko dari Aghissa Florist Banjarmasin yang

menjual mandevilla, tanaman ini meski berasal dari wilayah yang dingin

namun bisa tumbuh baik dengan lingkungan yang panas. Bahkan semakin

banyak terkena sinar matahari warna yang muncul akan makin cerah.

Secara fisiologis tanaman ini hampir tidak berbeda dengan tanaman

merambat lainnya yaitu punya batang yang menjulur dan akar yang

menempel pada tempat naungan. Kelebihan yang paling menonjol pada

tanaman ini adalah bentuk bunga yang cukup besar. Meski disebut juga

sebagai bunga terompet namun bentuk kelopak bunga juga hampir mirip

dengan kembang sepatu (hibiscus rosa-sinensis L.)

Tanaman yang di luar negeri juga disebut sebagai brazilian jasmine

ini punya bentuk yang cukup menarik dimana untuk kelopak bunga akan

memutar dan menutup satu dengan lainnya. Bunga akan muncul diujung

tangkai sehingga semakin rimbun tanaman maka bunga akan muncul

makin banyak dan serempak (bunga kompak).

Pada bagian daun mandevilla punya karakter yang meruncing

dengan serat daun yang menonjol. Disini daun yang tumbuh tidak terlalu

mendominasi dibandingkan mekarnya bunga. Tidak seperti tanaman

rambat lainnya yang lebih mendominasi adalah daun sementara bunga

hanya muncul di beberapa bagian saja.

Tanaman yang masuk dalam keluarga apocynaceae ini memang

membutuhkan sinar matahari secara penuh untuk tumbuh. Sehingga saat

menanam mandevilla diusahakan menghadap ke arah timur atau barat

untuk mendapatkan sinar matahari yang bagus. Keunikan lain tanaman ini

adalah mampu berbunga terus tanpa henti dalam satu tahunnya.

Untuk kelangsungan hidup tanaman ini juga mampu tumbuh dengan

baik meski sudah berusia antara 3-4 tahun. Jelas kelebihan ini jauh dari

jenis tanaman lainnya yang mati setelah berbunga. Bahkan selain

merambat mendevilla juga bisa tumbuh secara menjuntai karena

mempunyai batang yang lemas.

Manfaat bunga terompat, biasanya digunakan akar,daun

dan bunga terompet untuk obat-obatan.Bunga terompet memiliki

getah berwarna putih, getah bunga terompet memilki manfaat untuk

pencegah kuman/bakteri dan juga obat penyakit kanker.

Bunga terompet mengandung Hyoscyamine, atropine,

scopolamine, sebagai zat anticholinergics (zat penghilang

kesadaran).Selain memilki warna kuning juga ada bunga terompet

berwarna putih, merah muda, ungu, orange melalui stek ataupun

penyilangan.

Ciri-ciri Bunga Terompet, Bunga terompet memiliki bentuk



bunga yang dapat mencapai ukuran diameter 5-7,5 cm, Bunga

terompet mampu tumbuh sampai lebih dari 2 meter, Bunga

terompet memilki tangkai bungaberwarna hijau muda dan mempunyai

daun agak kasar, Bunga terompet mekar setiap tahun.

Istilah kromatografi mula-mula ditemukan oleh Michael Tswett

(1908), seorang ahli botani Rusia. Nama kromatografi diambil dari bahasa

Yunani (chromato = penulisan dan grafe = warna). Kromatografi berarti

penulisan dengan warna. Kromatografi adalah cara pemisahan campuran

yang didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen campuran

tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam (stationary) dan fasa bergerak

(mobile). Fasa diam dapat berupa zat padat atau zat cair, sedangkan fasa

bergerak dapat berupa zat cair atau gas (Yazid, 2005).

Kromatografi adalah proses melewatkan sampel melalui suatu

kolom, perbedaan kemampuan adsorpsi terhadap zat-zat yang sangat mirip

mempengaruhi resolusi zat terlarut dan menghasilkan apa yang disebut

kromatogram (Khopkar, 2008)

1. Kromatografi Kolom Konvensional

Kromatografi kolom adalah suatu metode pemisahan yang di

dasarkan pada pemisahan daya adsorbsi suatu adsorben terhadap suatu

senyawa, baik pengotornya maupun hasil isolasinya. Sebelumnya

dilakukan percobaan tarhadap kromatografi lapis tipis sebagai pencari

kondisi eluen. Misalnya apsolsi yang cocok dengan pelarut yang baik

sehingga antara pengotor dan hasil isolasinya terpisah secara sempurna

(Kasiman, 2006).

Pada kromatografi kolom, campuran yang akan dipisahkan

diletakkan berupa pita pada bagian atas kolom, penjerap yang berada

dalam tabung kaca, tabung logam atau bahkan tabung plastik. Pelarut

(fase gerak0, dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang

disebabkan oleh gaya berat atau di dorong dengan tekanan. Pita

senyawa linarut bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda,

memisah dan dikumpulkan berupa fraksi ketika keluar dari atas kolom

(Sudjadi, 1986).

Kromatografi kolom dikemas kering dalam keadaan vakum

agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan,

pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penjerap

lalu divakumkan lagi dan siap di pakai. Cuplikan dilarutkan dalam

pelarut yang cocok, dimasukkan langsung pada bagian atas kolom atau

pada lapisan prapenjerap dan dihisap perlahan-lahan kedalam kemasan

dengan memvakumkannya. Kolom dielusi dengan campuran pelarut



yang cocok, kolom dihisap sampai kering pada setiap pengumpulam

fraksi (Sudjadi, 1986).

Kolom keromatografi atau tabung untuk pengaliran karena

gaya tarik bumi (gravitasi) atau sistem bertekanan rendah biasanya

terbuat dari kaca yang dilengkapi dengan kran. Ukuran keseluruhan

kolom beragam, tetapi biasanya panjangnya sekurang-kurangnya 10

kali garis tengah dalamnya dan mungkin juga sampai 100 kalinya.

Nisbah panjang terhadap lebar sebagian besar ditentukan oleh mudah

sukarnya pemisahan, nisbah lebih besar untuk pemisahan yang lebih

sukar. Ukuran kolom dan banyaknya penjerap ditentukan oleh bobot

campuran linarut yang akan dipisahkan. Sifat, derajat, atau tingkat

keaktifan penjerap, dan ukuran partikelnya betul-betul penting dalam

pengembangan sistem kromatografi. Ukuran penjerap biasanya lebih

besar daripada untuk KLT. Kemasan kolom biasanya 63-250 mikro

meter untuk kolom yang dijalankan oleh gaya gravitasi (Raymond,

2006).

Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi klasik

yang masih banyak digunakan. Kromatografi kolom digunakan untuk

memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan

adsorpsi dan partisi. Kemasan adsorben yang sering digunakan adalah

silika gel G-60, kieselgur, Al2O3, dan Diaion. Cara pembuatannya ada

dua macam (Hargono, 1986):

1. Cara kering yaitu silika gel dimasukkan ke dalam kolom yang telah

diberi kapaskemudian ditambahkan cairan pengelusi.

2. Cara basah yaitu silika gel terlebih dahulu disuspensikan dengan

cairan pengelusi yangakan digunakan kemudian dimasukkan ke

dalam kolom melalui dinding kolom secarakontinyu sedikit demi

sedikit hingga masuk semua, sambil kran kolom dibuka. Eluen

dialirkan hingga silika gel mapat, setelah silika gel mapat eluen

dibiarkan mengalir sampai batas adsorben kemudian kran ditutup

dan sampel dimasukkan yang terlebih dahulu dilarutkan dalam eluen

sampai diperoleh kelarutan yang spesifik. Kemudian sampel dipipet

dan dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom sedikit demi

sedikit hingga masuk semua, dan kran dibuka dan diatur tetesannya,

serta cairan pengelusi ditambahkan. Tetesan yang keluar ditampung

sebagai fraksi-fraksi.

Kolom dapat dibuat dari berbagai jenis material, seperti

stainless steel, aluminium, tembaga, gelas dan paduan silika. Sebagian

besar sistem kolom modern terbuat dari gelas atau paduan silika. Kolom



konvensional dibuat dari material pendukung yang dilapisi fase diam

dari berbagai pembebanan yang dikemas di dalam kolom. Kolom kapiler

terdiri dari tabung kapiler panjang yang didalamnya dilapisi dengan

fase diam (fase diam dapat juga direkatkan langsung pada permukaan

silika). Sebagian besar kolom kapiler terbuat dari paduan silika yang

dilapisi polimer di bagian luarnya. Paduan silika sangat mudah pecah

sedangkan lapisan polimer tersebut bertindak sebagai pelindungnya

(Seno, 1997).

Prinsip kerja kromatografi kolom adalah dengan adanya

perbedaan daya serap dari masing-masing komponen, campuran yang

akan diuji, dilarutkan dalam sedikit pelarut lalu di masukan lewat

puncak kolom dan dibiarkan mengalir kedalam zat menyerap. Senyawa

yang lebih polar akan terserap lebih kuat sehingga turun lebih lambat

dari senyawa non polar terserap lebih lemah dan turun lebih cepat. Zat

yang di serap dari larutan secara sempurna oleh bahan penyerap berupa

pita sempit pada kolom. Pelarut lebih lanjut / dengan tanpa tekanan

udara masin-masing zat akan bergerak turun dengan kecepatan khusus

sehingga terjadi pemisahan dalam kolom (Seno, 1997).

2. Kromatografi Cair Vakum

Kromatografi Suction Column and Vacuum liquid

chromatography (VLC) atau kromatografi cair vakum (KCV) adalah

bentuk kromatografi kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi

kasar yang cepat terhadap suatu ekstrak. Kondisi vakuma adalah

alternatif untuk mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah.

Metode ini sering digunakan untuk fraksinasi awal dari suatu ekstrak

non-polar atau ekstrak semipolar (Raymond, 2006).

Suction coloumn merupakan alat kromatografi yang merupakan

modifikasi kromatografi kolom serapan. Prinsip pemisahannya sama

dengan kromatografi kolom serapan. Bedanya terletak pada adanya

isapan pompa vakum di bagian bawah kolom ini. Alat ini dirancang

mengingat pada kromatografi kolom serapan yang pengerjaannya

memakan waktu yang cukup lama. Prinsip pemisahan komponen kimia

berdasarkan adsorpsi dan partisi serta dipercepat dengan isapan pompa

vakum. Seperti halnya kromatografi kolom serapan, senyawa yang akan

dipisahkan dilarutkan dengan pelarut yang cocok kemudian dimasukkan

dalam kolom isap, selanjutnya ditambahkan eluen, eluen yang mengalir

turun yang disebabkan oleh isapan pompa vakum. Hasil pemisahan

ditampung dalam setiap fraksi. Volume penampungan 25 ml/fraksi dan

untuk berat sampel q 10 - 30 gram volume penampungan 50 ml/fraksi.



Adsorben yang digunakan sedikit lebih berbeda yaitu 35 gram silica gel

7733 dan 10 gram silika gel 7731 (Gritter, 1991).

Manfaat dari kromatografi ini yaitu menentukan ciri senyawa

aktif penyebab efek racun atau efek yang bermanfaat, yang ditunjukkan

oleh ekstrak tumbuhan kasar bila diuji dengan sistem biologi. Dalam hal

ini kita harus memantau cara ekstraksi dan pemisahan pada setiap

tahap, yaitu untuk melacak senyawa aktif tersebut sewaktu

dimurnihkan. Kadang-kadang keaktifan hilang selama proses fraksinasi

akibat ketidakmantapan senyawa itu, dan akhirnya mungkin saja

diperoleh senyawa berupa kristal tetapi keaktifan seperti yang

ditunjukkan oleh ekstrak asal(Harborne, 1987).

Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang

digunakan dalam KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom

terbagi menjadi dua macam, yaitu(Sarker, 2006):

a) Cara Basah

Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan

melarutkan fasa diam dalam fase gerak yang akan digunakan.

Campuran kemudian dimasukkan ke dalam kolom dan dibuat

merata. Fase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan fase

diam yang tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan.

b) Cara kering

Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan

cara memasukkan fase diam yang digunakan ke dalam kolom

kromatografi. Fase diam tersebut selanjutnya dibasahi dengan

pelarut yang akan digunakan.

Preparasi sampel cara basah dilakukan dengan melarutkan

sampel dalam pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak

dalam KCV. Larutan dimasukkan dalam kolom kromatografi yang

telah terisi fasa diam. Bagian atas dari sampel ditutupi kembali

dengan fasa diam yang sama. Sedangkan cara kering dilakukan

dengan mencampurkan sampel dengan sebagian kecil fase diam yang

akan digunakan hingga terbentuk serbuk. Campuran tersebut

diletakkan dalam kolom yang telah terisi dengan fasa diam dan

ditutup kembali dengan fase diam yang sama (Sarker, 2006).

Kromatografi Vakum Cair mempunyai keuntungan yang

utama dibandingkan dengan kolom konvensional yaitu (Kasiman,

2006):



1. Konsumsi fase gerak KCV hanya 80% atau lebih kecil disbanding

dengan kolom konvensional karena pada kolom mikrobor

kecepatan alir fase gerak lebih lambat (10-100l/menit).

2. Adanya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor

lebih ideal jika digabung dengan spectrometer massa.

3. Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih

pekat karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah

sampel terbatas misal sampel klinis.

3. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Kromatografi dalam bidang kimia merupakan sebuah tehnik

analisis yang digunakan untuk memisahkan sebuah campuran ataupun

persenyawaan kimia. Tehnik ini ditemukan pada tahum 1906 oleh

Mikhail Tswett seorang ahli botani dari Italia yang lahir di Rusia. Tehnik

pemisahan ini dilakukan terhadap pigmen tumbuhan (klorofil), dengan

cara menuangkan ekstrak petroleum eter dari daun tumbuhan diatas

sebuah kolom kaca yang berisi serbuk kalsium karbonat dalam arah

yang tegak lurus (Najib, 2013).

Dalam perkembangan selanjutnya metode ini tidak hanya

digunakan untuk mengidentifikasi noda, akan tetapi juga untuk

mengisolasi ekstrak. Metode ini kemudian dikenal sebagai KLT

preparatif. Metode ini paling sederhana dan murah untuk mengisolasi

komponen kimia dari suatu bahan alam, dengan menggunakan lempeng

yang besar terbuat dari kaca dengan ukuran 20 x 20 cm (Najib, 2013).

Metode kerjanya meliputi penotolen ekstrak bahan alam dalam

bentuk pita pada lempeng. Hal ini memungkinkang sampel dalam

jumlah besar dapat muat pada lempeng KLT, lempeng dikembangkan

dalam pelarut yang telah diketahui mampu memisahkan komponen,

yang paling penting adalah harus digunakan metode deteksi yang tidak

merusak sampel (Najib, 2013).

Pada KLT preparatif, cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan

berupa garis pada salah satu sisi plat lapisan besar dan dikembangkan

secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga campuran akan

terpisah menjadi beberapa pita. Pita ditampakkan dengan cara yang

tidak merusak jika senyawa itu tahan warna, dan penjerap yang

mengandung pita dikerok dari plat kaca. Kemudian cuplikan dielusi dari

penjerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna untuk memisahkan

campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni untuk telaah

pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan analisis, untuk meneliti bahan



alam yang lazimnya berjumlah kecil dan campurannya rumit, dan untuk

memperoleh cuplikan yang murni untuk mengkalibrasi KLT kuantitatif

(Gritter, 1991).

Keuntungan KLTP adalah salah satu metode pemisahan yang

memerlukan pembiayaan paling murah dan memakai peralatan paling

dasar. Kerugian KLTP adalah pengambilan senyawa dari plat yang

dilanjutkan dengan pengekstraksian penjerap memerlukan waktu lama

dan jika senyawa beracun harus dikerok dari plat akan menimbulkan

banyak masalah serius. Serta adanya zat pencemar dan sisa dari plat

sendiri setelah pengsekstraksian pita yang mengandung senyawa yang

dipisahkan dengan pelarut (Hostettmann, 1995).

Metode kromatografi, karena pemanfaatannya yang leluasa,

dipakai secara luas untuk pemisahan analitik dan preparative. Hampir

setiap campuran kimia, mulai dari bobot molekul rendah sampai tinggi,

dapat dipisahkan menjadi komponen-komponennya dengan beberapa

metode kromatografi. Jenis pemisahan, apakah analitik atau preparatif,

tidak ditentukan oleh ukuran cuplikan, melainkan lebih oleh keperluan

khusus. Biasanya, kromatografi analitik dipakai pada tahap permulaan

untuk semua cuplikan, dan kromatografi hanya dilakukan jika

diperlukan fraksi murni dari campuran (Gritter, 1991).

Kadang-kadang kita berhasil memisahkan campuran tertentu

dengan beberapa kali pengembangan memakai sistem pelarut yang

sama yang nisbi nonpolar, padahal campuran itu tidak dapat dipisahkan

dengan sekali pengembangan yang memakai sistem pelarut yang lebih

polar. Jumlah cuplikan lebih banyak dapat dipisahkan dengan cara

pengembangan berganda sehingga hal ini sangat penting pada KLT

preparatif (Gritter, 1991).

Kromatografi pada lapisan berbentuk khusus. Kadang-kadang

lapisan KLT perlu diraut menjadi berbagai bentuk. Pada lapisan

belandas kaca, bentuk itu dapat dibuat dengan spatula atau alat yang

diruncing. Lapisan berlandas plastik dapat dipotong-potong memakai

gunting (Gritter, 1991).

Ketika pelarut muncul dari bagian lapisan yang sempit (tempat

menotolkan cuplikan), pelarut dipaksa bergerak menyamping dan

sekaligus menegak. Ini berarti cuplikan akan berbentuk pita, bukan

bercak bundar. Pita ini lebih tajam dan lebih mudah dilihat, dan kita

dapat menunjukkan komponen yang lebih banyak (Gritter, 1991).

Kristalisasi



Kristalisasi digunakan untuk mendapatkan bahan dalam

bentuk Kristal murni.Oleh karena itu pembentukan Kristal

menyebabkan zat terlarut memisah dari lelehan atau larutan dimana

yang tidak murni tetap tertinggal dalam larutan,maka kristalisasi

juga merupakan proses pemisahan (Harborne,1987).

Bila terdapat senyawa tunggal, beberapa senyawa dapat

mengkristal. Kristal dapat dimurnikan dengan pengkristalan kembali

(rekristalisasi). Teknik ini dilakukan pada produk yang kotor, mula-

mula dilarutkan dalam sejumlah pelarut ppanas (umumnya

digunakan solven dimana produk tersebut kurang larut dibandingkan

kotorannya). Jika larutan panas tersebut dibiarkan mendingin produk

yang murni memisah dari campuran, sehingga tersisa kotoran dalam

larutannya. Kristal-kristal yang terbentuk dari produkm disaring dan

dikeringkan (Najib, 2013).

Jika sebuah fraksi dipekatkan dan didinginkan serta

pelarutnya dibiarkan menguap lambat,Kristal dapat membentuk

senyawa yang murni Kristalisasi dapat dilakukan dengan sedikit

penggosokan pada bagian dalam dinding kaca selanjutnya

membiarkannya di tempat dingin,bahkan dalam lemari

pendingin.Beberapa deposit mungkin merupakan kristalin dan harus

di cek dengan bantuan lensa tangan untuk meyakinkan bahwa

deposit tersebut bukan bahan yang amorf yang berasal dari larutan

saat pendinginan terjadi (Harborne,1987).

Manfaat dari kromatografi ini yaitu menentukan ciri senyawa

aktif penyebab efek racun atau efek yang bermanfaat, yang

ditunjukkan oleh ekstrak tumbuhan kasar bila diuji dengan sistem

biologi. Dalam hal ini kita harus memantau cara ekstraksi dan

pemisahan pada setiap tahap, yaitu untuk melacak senyawa aktif

tersebut sewaktu dimurnihkan. Kadang-kadang keaktifan hilang

selama proses fraksinasi akibat ketidakmantapan senyawa itu, dan

akhirnya mungkin saja diperoleh senyawa berupa kristal tetapi

keaktifan seperti yang ditunjukkan oleh ekstrak asal (Harborne,

1987).

Uji Kemurnian

a. KLT 2 Dimensi

Merupakan salah satu metode untuk mengetahui

kemurnian suatu senyawa dari hasil isolat, yang di mana

bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel ketika komponen-



komponen solute mempunyai karakterisktik kimia yang hampir

sama. Karenanya nilai Rf juga hampir sama sebagaimana dalam

asam-asam amino, selain itu 2 sistem fase gerak yang sangat

berbeda dapat digunakan secara berurutan, sehingga

memungkinkan untuk melakukan pemisahan analilt yang

mempunyai tingkat polaritas yang berbeda (Sastrohamidjojo,

1985).

KLT dua arah adalah cara yang memungkinkan

pemakaian lapisan fase diam yang lebih luas untuk memisahkan

campuran yang mengandung banyak komponen. Selain itu, dua

sistem pelarut yang sangat berbeda dapat digunakan secara

berurutan pada campuran tertentu, jadi memungkinkan

pemisahan campuran yang mengandung komponen yang

kepolarannya sangat berbeda. Ekstrak ditotolkan dan dielusi

seperti pada KLT normal kemudian diputar 900 untuk

pengembangan kedua (Gibbons, 2006).

Penyerap umum yang digunakan adalah silica gel,

aluminium oksida, keiselgur, selullosa dan turunannya. Poliamida

dll. Silica gel adalh penyerap umum yang banyak digunakan

karena mempunyai daya pemisahan yang baik, hal ini telah

diseleksi oleh Stahl untuk pertama kali 1958 (Stahl, 1985).

Salah satu aplikasi untuk mengetahui kemurnian senyawa

hasil isolat dengan metode ini yaitu dengan mengelusi noda pada

2 arah yang berbeda dan menggunakan eluen yang berbeda,

isolate dikatakan murni apabila noda yang dinampakkan adalah

tunggal (Stahl, 1985).

b. Multi Eluen

Multi eluen merupakan penggunaan eluen atau fase gerak

yang berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan

berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda (Sastrohamidjojo,

1985).

Prinsipnya, like dissolve like yang dapat digunakan

untuk pemilihan pelarut dalam menentukan jenis senyawa kimia

yang mungkin terekstraksi dari organisme. Dimana pelarut non

polar akan mengestraksi senyawa-senyawa non polar akan

terekstraksi oleh pelarut polar, serta dapat juga digunakan untuk

menganalisis kemurnian suatu isolat/senyawa kimia yang

diperoleh dari hasil isolasi dari bahan alam (Sastrohamidjojo,

1985).



KLT Multi eluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak

yang berbeda yang memungkinkan pemisahan analit dengan

berdasarkan tingkat polaritas yang berbeda. Dalam multi eluen,

setelah pengembang tunggal menaik,kromatogram diangkat dari

chamber dan dikeringkan, biasanya selama 5-10 menit.

Kromatogram tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar

dari pelarut yang sama dalam arah yang sama untuk jarak yang

sama.Proses ini, yang dapat diulang berkali-kali, meningkatkan

resolusi komponen dengan nilai RF bawah 0,5. Beberapa

pengembang dilakukan dengan pelarut yang berbeda dalam arah

yang sama, masing-masing yang menjalankan jarak yang sama

atau berbeda, disebut elusi bertahap.Sebuah fase kurang polar

dapat digunakan pertama, diikuti oleh fase yang lebih polar, atau

sebaliknya. Pemindahan material nonpolar kebagian atas

lapisan,meninggalkan zat terlarut polar terganggu darimana dia

berasal. Setelahkering, zat terlarut polar dipisahkan

olehpengembang dengan eluen(Cazes, 2004).

Multieluen adalah untuk mendapatkan resolusi yang baik

dari hasil KLT.Memfokuskan zona pemisahan multi eluen, cocok

digunakan untuk sampel yang memiliki noda dengannilai Rf di

bawah 0.5. Sampel disentrifuge terlebih dahulu dengan

menggunakan methanol p.a, sebabuntuk menjamin kemurnian

senyawa. Sebab, methanol p.a merupakanpelarut yang khusus

digunakan untuk analisis dan bebas dari pengotor.Berbeda dengan

methanol teknis yang bisa saja mengandung pengotor seperti

plasticizer dari wadah yang digunakan untuk menampung pelarut.

agar seluruh area lempeng dapat digunakan sehingga senyawa

yang masih menumpuk dalam satu noda, dapat ter-elusi kembali

melalui sisi lempeng yang lain(Mary, 1996).

BAB III

PROSEDUR KERJA

III.1 Alat dan Bahan

III.1.1 Alat yang dipakai



Adapun alat yang digunakan yaitu batang pengaduk,

chamber, gunting, gelas ukur, kolom kaca, lampu UV 254 nm

dan 366 nm, lempeng KLT, mistar, pensil 2B, pinset, pipa

kapiler, sendok tanduk besi, statif, timbangan analitik, dan vial.

III.1.2 Bahan yang digunakan

Adapun bahan yang digunakan yaitu aluminium foil,

DPPH, ekstrak n-heksan daun bunga terompet (Mandivella

sanderi), eluen, n-heksan : EtoAC dengan perbandingan 7:3 ,

6:4 , 5:5 , 4:6 , 3:7 , 2:8 , 1:9 dan 0:10 , label, silica gel, tissue

III.2 Cara Kerja

Cara kerja kromatografi kolom konvensional :

1) Pengemasan Alat isolasi

Kolom dipasang tegak lurus pada statif,kemudian dibebas lemakkan

menggunakan metanol. Bagian bawah kolom dilapisi kapas kemudian silika

gel dimasukkan sampai terisi dari kolom.lalu diketuk ketuk sampai

tidak terbentuk gelembung gas.

2) Pemisahan/isolasi :

Silika gel ditimbang berdasarkan perbandingan 1 gram ekstrak : 100

gram silika gel (tergantung ketersediaan ektrak dan kapasitas kolom) .

Dalam praktikum ini digunakan metode basah dimana silika gel

disuspensikan menggunakan eluen n-hexan : EtoAC dengan perbandingan

10 : 0. Kemudian suspensi dari silika gel dimasukkan ke dalam kolom lalu

dimampatkan.

Ekstraksi ditimbang berdasarkan perbandingan 1 g ektrak : 100 g

silika gel dan dikemas menggunakan metode basah yaitu sampel

disuspensikan dengan eluen dengan perbandingan 9 : 1 selapis diatas

permukaan kertas saring, selanjutnya dielusi sampai menghasilkan fraksi

fraksi dan ditampung ke dalam vial. Eluen yang sebelumnya yang telah

habis diganti dengan eluen 8 : 2 , kemudian secara berturut turut

dilanjutkan dengan eluen perbandingan 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, dan

0:10. Hasil kromatografi kolom berupa fraksi. Fraksi fraksi digabung

dan dianggap satu fraksi berdasarkan warna atau profil KLT.

3) Pengujian fraksi aktif antioksidan dengan metode KLT (Gibbons, 2006)

Senyawa antioksidan adalah komponen penting dalam makanan dan

berkontribusi dalam kesehatan manusia. Sifat antioksidan dari suatu



senyawa bahan alam dapat diketahui dengan menggunakan metode uji

KLT (TLC Assay). Senyawa yang mempunyai kemampuan antioksidan

akan mampuh menstabilkan radikal 2,2-diphenyl-picrylhydrazyl (DPPH).

Indikasi ini terdeteksi beberapa menit setelah penyemprotan DPPH

menyebabkan terbentuknya warna kuning dengan latarbelakang ungu.

b. Kromatograsi Cair Vakum

c. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Fraksi aktif (dari KKK dan KCV) dilarutkan dengan n-heksan.

Dibuat perbandingan eluen (9:1 atau 8:2). Didisiapkan lempeng KLTP,

lempeng yang digunakan biasanya berukuran 20 x 20 cm. Setelah itu

fraksi ditotolkan pada lempeng berbentuk pita pada garis penotolan

yang telah dibuat sebelumnya. Setelah raksi ditotolkan pada lempeng,

kemudian dikembangkan dengan eluen yang sesuai dan dapat

memisahkan komonen kimia

Setelah pengembangan/elusi, pita-pita tersebut dideteksi dan

diberi tanda kemudian dikeruk yang selanjutnya disebut sebagai isolat.

Kemudian isolate tersebut dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge lalu

disentrifuge. Selanjutnya dilakukan pengujian antioksidan pada lempeng

KLT dengan metode DPPH.

1. Pengerjaan Kromatografi

1.Penyiapan lempeng silika gel

Dibuat lempeng dari silika gel dengan ukuran 7 cm x 1 cm

menggunakan mistar dan lempeng silika gel dipotong dengan cutter yang

sebelumnya telah diukur dan dilakukan penjenuhan chamber kemudian

disiapkan chamber yang bersih lengkap dengan penutupnya , chamber diisi

eluen n-heksan : etil dengan perbandingan 8 : 2 dengan kepolaran yang

berbeda kemudian dimasukkan potongan kertas saring yang panjangnya

lebih dari tinggi chamber dan kemudian ditutup dan dibiarkan hingga eluen

naik pada kertas saring hingga melewati penutup kaca (chamber telah

jenuh)

2. Penotolan sampel pada lempeng

Disiapkan alat dan bahan yang dibutuhkan dan fraksi-fraksi

hasil kromatografi kolom cair vakum dularutkan dengan n-heksan

kemudian masing-masing fraksi diambil dengan menggunakan pipa

kapiler, kemudian ditotolkan pada lempeng yang telah disiapkan

dan lempeng yang telah ditotol diangin-anginkan sebentar untuk

menguapkan pelarutnya lalu dimasukkan ke dalam chamber yang

telah dijenuhkan seelah itu Dilakukan pengelusian terhadap

lempeng yang telah ditotol dengan fraksi-fraksi n-heksan



menggunakan eluen n-heksan:etil (8:2) dan bila eluen telah

mencapai batas atas dari lempeng silica gel, maka lempeng tersebut

dapat dikeluarkan menggunakan pinset dan diamati secara

langsung dan dengan menggunakan penampak bercak UV 254, UV

366, dan menyemprot lempeng dengan menggunakan DPPH.

BAB IV

Hasil Pengamatan

IV. 1 Gambar Hasil Pengamatan

A. Kromatografi Kolom Konvensional

a. Fraksi 1

b. Fraksi 2 c. Fraksi 3

c. Fraksi 4

d. Fraksi 5



e. Fraksi 6 f. Fraksi 7

g. Fraksi 8

h. Fraksi 9

Keterangan gambar :

Fraksi 1 : Vial 1 - 17

Fraksi 2 : Vial 18


Fraksi 4 : Vial 22-29


Fraksi 6 : Vial 36

Fraksi 7 : Vial 37 40


Fraksi 9 : Vial 51- 60

Gambar Fraksi di Sinar UV

a. Sinar Tampak

b. Sinar UV 254



c. Sinar UV 366

Perhitungan Nilai Rf

Rf =

a. Sinar Tampak

Tidak ada noda yang tampak

b. Sinar UV 254


c. Sinar UV 366


B. Kromatografi Cair Vakum (KCV)

- Gambar Fraksi

a. Fraksi 1 b. Fraksi 2 c. Fraksi 3

IV. 2 Perhitungan

d. Fraksi 4 e. Fraksi 5

e.Fraksi 6

f. Fraksi 7 g. Fraksi 8



H. Fraksi 9

Keterangan gambar :

Fraksi 1 : Eluen n-Heksan : etil asetat (15 : 1)

Fraksi 2 :Eluen n-Heksan : etil asetat (10 : 1)



Fraksi 5 : Eluen n-Heksan : etil asetat (0 : 5)


Fraksi 7 : Pelarut Metanol 1

Fraksi 8 : Etil asetat : Metanol (1 : 1)

Fraksi 9 : Pelarut Metanol 2

Gambar di sinar UV

a. Sinar tampak

b. Sinar UV 254

c. Sinar UV 366



Perhitungan Nilai Rf

Rf =

a. Sinar Tampak

- Fraksi 4

Noda 1 : 4,1. Nilai Rf = = 0,745

Noda 2 : 4,6. Nilai Rf = = 0,836

Noda 3 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

- Fraksi 5

Noda 1 : 4,8. Nilai Rf = = 0,872

Noda 2 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

b. Sinar UV 254

- Fraksi 4

Noda 1 : 4,1. Nilai Rf = = 0,745

Noda 2 : 4,6. Nilai Rf = = 0,836

Noda 3 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

- Fraksi 5

Noda 1 : 4,8. Nilai Rf = = 0,872

Noda 2 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

c. Sinar UV 366

- Fraksi 4

Noda 1 : 4,1. Nilai Rf = = 0,745

Noda 2 : 4,6. Nilai Rf = = 0,836

Noda 3 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

- Fraksi 5

Noda 1 : 4,8. Nilai Rf = = 0,872

Noda 2 : 5,1. Nilai Rf = = 0,927

BAB V



PEMBAHASAN

Kromatografi merupakan suatu pemisahan zat berkhasiat dan

zat lain yang ada dalam bahan atau sediaan dengan jalan penyarian

berfraksi, penyerapan, atau penukaran ion pada zat berpori,

menggunakan cairan atau gas mengalir.

Pemisahan dan pemurnian kandungan tumbuhan terutama

dilakukan dengan menggunakan salah satu dari empat teknik

kromatografi atau gabungan teknik tersebut. Keempat teknik

kromatografi itu adalah : Kromatografi Kertas (KKt), Kromatografi

Lapis Tipis (KLT), Kromatografi Gas Cair (KGC) dan Kromatografi Cair

Kinerja Tinggi (KCKT).

Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan fisik dengan

unsur-unsur yang akan dipisahkan terdistribusikan antara dua fasa, satu

dari fasa ini membentuk lapisan stasioner dengan luas permukaan yang

besar dan fasa lainnya merembes melewati dan melalui lapisan stasioner

tersebut. Pemisahan secara kromatografi memanfaatkan sifat fisika umum

dari molekul. Sifat utama yang terlibat adalah kecenderungan molekul

untuk larut dalam cairan (kelarutan), kecenderungan molekul untuk

melekat dalam cairan (adsorpsi), dan kecenderungan molekul untuk

menguap (keatsirian)

Sampel yang digunakan dalam praktikum ini adalah daun bunga

terompet (Mandivella sanderi ). Dalam fitokimia dilakukan suatu proses

ekstraksi, isolasi dan identifikasi dari suatu komponen kimia dari tumbuhan

dan biota laut yang banyak digunakan dalam pengobatan tradisional yang

berkembang menjadi obat modern. Menggunakan cara yang bervariasi

tergantung dari sifat fisika dan kimia komponen tersebut. Kemudian

dilanjutkan dengan proses pemurnian dengan kristalisasi dengan tujuan

mendapatkan senyawa kimia yang penampakannya bagus dan kelihatan

lebih banyak. Metode fitokimia sangat penting artinya dalam bidang

farmasi sebagai salah satu cara meneliti senyawa aktif yang terdapat

dalam tumbuhan.

Dalam kromatografi,eluent adalah fasa gerak yang berperan p

enting pada proses elusi bagi larutan umpan (feed) untuk melewati fasa

diam (adsorbent). Interaksi antara adsorbent eluent sangat menentukan

terjadinya pemisahan komponen. Oleh sebab itu pemisahan komponen

secara kromatografi dipengaruhi oleh laju alir

eluent dan jumlah umpan.

Sebagian besar dasar teori kromatografi kolom juga dapat

diterapkan pada KLT. Konsep lempeng teori lebih sukar digambarkan,

tetapi pemisahan ini dilakukan oleh keseimbangan berturutan cuplikan



dalam dua fasa, satu diantaranya bergerak terhadap yang lainnya. Terjadi

proses penyebaran molekul cuplikan karena proses nonideal.

Sifat kromofor dari struktur senyawa ini mudah dikenali di bawah

lampu UV sehingga memudahkan identifikasi dalam kromatografi lapis

tipis. Pada metode isolasi senyawa -karoten dengan cara refluks yaitu

tejadi penarikan komponen kimia yang dilakukan dengan cara sampel

dimasukkan ke dalam labu alas bulat bersama-sama dengan zat

pelarut (kloroform) lalu dipanaskan dan diberikan batu didih agar

pemanasan berlangsung secara merata. Uap-uap pelarut terkondensasi

pada kondensor menjadi molekul-molekul pelarut yang akan turun kembali

menuju labu alas bulat, dan akan akan menyari kembali sampel yang

berada pada labu alas bulat. Demikian seterusnya berlangsung secara

berkesinambungan sampai penyarian sempurna, setelah itu filtrat yang

diperoleh dipekatkan dengan cara evaporasi. Evaporasi yaitu proses

pemisahan ekstrak dari cairan penyarinya dengan pemanasan yang

dipercepat oleh putaran dari labu alas bulat. Dengan bantuan pompa

vakum, uap larutan penyari akan menguap naik ke kondensor dan

mengalami kondensasi menjadi molekul-molekul cairan pelarut murni yang

ditampung dalam labu alas bulat.

a. Kromatografi Kolom Konvensional (KKK)

Pada metode ini, kolom diisikan dengan adsorben yang berupa

padatan dalam hal ini adalah silika gel yang dicampurkan dengan

pelarut n heksan hingga membentuk bubur silika (slurry). Slurry

dimasukkan dengan hati-hati kedalam kolom kromatografi yang

telah diisikan n-heksan yang sebelumnya telah disumbat dengan kapas

dan kertas saring yang berfungsi sebagai penahan adsorben agar tidak

keluar bersama eluen. Pengisian kolom harus dikerjakan secara

seragam dan sepadat mungkin untuk menghindari terjadinya

gelembung-gelembung udara. Jika terdapat gelembung-gelembung

udara dalam kolom maka akan berpotensi menyebabkan pecahnya

kolom.

Prinsip dari kromatografi kolom jenis ini adalah kecenderungan

komponen kimia untuk terdistribusi ke dalam fase diam atau fase gerak

dengan proses elusi berdasarkan gaya gravitasi. Kolom kromatografi

atau tabung untuk pengaloran karena gaya tarik bumi (gravitasi) atau

system bertekanan rendah biasanya terbuat dari kaca yang dilengkapi

dengan kran.

Hal lain yang dapat dilakukan agar tidak terjadi pemecahan

kolom adalah dengan menambahkan eluen secara kontinu agar udara



tidak masuk kedalam kolom. Kolom yang padat diindikasikan dengan

warna slurry yang semakin memutih dan kecepatan alir eluen yang

semakin lambat. Jika kolom sudah memadat, larutan sampel kemudian

diisikan kedalam kolom . Mekanisme yang terjadi pada kromatografi

kolom ialah sample akan terelusi oleh eluen (n-heksan) melalui fase

diam silika gel. Senyawa organik terelusi oleh eluen proses elusi terjadi

karena keseimbangan distribusi zat analit pada fase gerak n-heksan

dan fase diam selika gel. Elusi terus berlangsung hingga tidak ada lagi

yang tinggal dalam kolom. Proses elusi ini menghasilkan eluat yang

diharapkan mengandung banyak betakaroten.

Kelebihan kromatografi kolom :

1. Dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi preparative

2. Digunakan untuk menentukan jumlah komponen campuran

3. Digunakan untuk memisahkan dan purifikasi substansi

Kekurangan kromatografi kolom :

1. Untuk mempersiapkan kolom dibutuhkan kemampuan teknik dan

manual

2. Metode ini sangat membutuhkan waktu yang lama (time

consuming)

Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa daun

bunga terompet (Mandevillae folium) didapatlan hasil kromatografi

kolom dengan jumlah fraksi 9 dan menggunakan 7 eluen berdasarkan

tingkat kepolaran yang lebih tinggi yang selanjutnya akan diisolasi

kembali dengan metode yang cocok. Pada sinar UV tidak

menampakkan noda, hal tersebut dapat disebabkan adanya faktor

kesalahan

b. Kromatografi Cair Vakum

Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode

fraksinasi yaitu dengan memisahkan crude extract menjadi fraksi-

fraksinya yang lebih sederhana. Pemisahan tersebut memanfaatkan

kolom yang berisi fasa diam dan aliran fasa geraknya dibantu dengan

pompa vakum. Fasa diam yang digunakan dapat berupa silika gel atau

alumunium oksida

Setelah ekstrak dievaporasi kemudian dilanjutkan proses

pemisahan dengan menggunakan metode kromatografi kolom. Adapun

cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi dikemas

kering dengan penjerap silika gel KL 254 dalam keadaan vakum agar

diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut

yang kepolarannya rendah (n-heksana) dituangkan ke permukaan



penjerap lalu divakumkan lagi. Kolom dipisah sampai kering dan

sekarang siap dipakai. Sampel dilarutkan dalam pelarut yang cocok,

dimasukkan langsung pada bagian atas kolom dan dihisap perlahan-

lahan ke dalam kemasan dengan mengvakumkannya. Kolom, dielusi

dengan campuran pelarut yang cocok, mulai dengan pelarut yang

kepolarannya rendah (n-heksana) lalu kepolaran ditingkatkan

perlahan-lahan dengan cara elusi gradien antara n-heksana:etil

asetat:metanol, kolom dihisap sampai kering pada setiap pengumpulan

fraksi.

Pengaruh lebarnya kolom pada KVC mengakibatkan fraksi

sampel turun satu persatu, dan bila pelarutnya telah habis maka harus

dibuat pelarut dengan kosentrasi sama, dan diturunkan kembali

fraksinya. Sedangkan panjang kolom, mengakibatkan semakin panjang

kolom maka waktu atau cepat lambatnya turun fraksi senyawa.

Adapun keuntungan dan kerugian dari kromatografi kolom

adalahsebagai berikut :

a.Keuntungan

1.Konsumsi fase gerak KCV hanya 80% atau lebih kecil

disbandingdengan kolom konvensional karena pada kolom

mikrobor kecepatan alir fase gerak lebih lambat (10-100l/menit)

2.Adanya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih

ideal jika digabung dengan spectrometer massa.

3.Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih

pekatkarenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah

sampelterbatas missal sampel klinis

b.Kerugian KCV (Kromatografi Vakum Cair) :

1.Membutuhkan waktu yang cukup lama

2.Sampel yang dapat digunakan terbatas

Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa daun

bunga terompet (Mandevillae folium) didapatkan hasil kromatografi

kolom dengan jumlah fraksi 9 dan menggunakan 7 eluen. Berdasarkan

hasil noda yang tampak ada 2 fraksi yang menampakkan noda pada

fraksi 4, noda 1 : 4,1 cm memiliki nilai Rf = 0,745, noda 2 : 4,6 cm

memiliki nilai Rf = 0,836, noda 3 : 5,1 cm memiliki nilai Rf = 0,927.

Sedangkan pada fraksi 5, noda 1 : 4,8 cm memiliki nilai Rf = 0,872, dan

pada noda 2 : 5,1 cm memiliki nilai Rf = 0,927. Senyawa tersebut

selanjutnya akan diisolasi kembali dengan menggunakan metode

pemisahan yang cocok, seperti Kromatografi Preparatif.

C. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP)



Kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) adalah salah satu

metode yang memerlukan pembiayaan paling murah dan memakai

peralatan paling dasar. Walaupun KLTP dapat memisahkan bahan

dalam jumlah gram, sebagian besar pemakainya hanya dalam jumlah

miligram.KLTP bersama-sama dengan kromatografi kolom terbuka,

masih dijumpai dalam sebagian besar publikasi mengenai isolasi bahan

alam.

Cuplikan pada KLTP dilarutkan dalam sedikit pelarut sebelum

ditotolkan pada pelat KLTP. Pelarut yang baik adalah pelarut atsiri (

heksana, diklorometana, etil asetat), karena jika pelarut kurang atsiri

akan terjadi pelebaran pita. Konsentrasi cuplikan harus sekitar 5% -

10%. Cuplikan ditotolkan berupa pita yang harus sesempit mungkin

karena pemisahan tergantung pada lebar pita.

KLTP klasik mempunyai beberapa kekurangan, kekurangan

yang utama adalah pengambilan senyawa dari pelat yang dilanjutkan

dengan pengekstrasian dari penjerap. Jika senyawa beracun harus

dikerok dari pelat, dapat menimbulkan masalah yang serius (misalnya

Adolf dkk. 1982). Kekurangan yang lainya ialah jangka waktu yang

diperlukn untuk pemisahan dan adanya pencemar dan sisa dari pelat

sendiri setelah pengekstrasian pita yang mengandung senyawa yang

dipisahkan dengan pelarut (Szekely 1983).

Untuk mengatasi beberapa masalah tersebut, beberapa

pendekatan yang melibatkan kromatografi sentrifugal telah dicoba.

Pada prinsipnya kromatografi sentrifugal adalah kromatografi klasik

dengan aliran fase gerak yang dipercepat oleh gaya sentrifugal.

Adapun keuntungan dan kerugiaan KLTP yaitu :

keuntungan :

Salah satu pemisahan yang memerlukan pembiayaan paling murah

danmemakai peralatan paling dasar adalah kromatografi lapis tipis

preparatif.

Kerugian:

Ketebalan dari lempeng menyebabkan waktu yang dibutuhkan

menjadilebih lama dibadingkan dengan KLT pada umumnya.

Setelah fraksi senyawa didapatkan, selanjutnya dengan

menggunakan KLT kita menghitung Rf (retention fraksion), dimana bila

didapat senyawa yang Rfnya sama atau pola nodanya sama, maka

kemungkinan senyawa itu adalah sama. Dan terakhir, kita uji fitokimia

dari senyawa tersebut (ekstraks n- heksana kulit batang nangka).

Namun langkah ini tidak dapat dilakukan karena waktu yang tidak



mengizinkan lagi.

Adapun mekanisme dan prinsip penampakan noda pada pegujian

Kromatigrafi yaitu :

a. Pada UV 254 nm

Pada UV 254 nm, lempeng akan berflouresensi sedangkan sampel

akan tampak berwarna gelap.Penampakan noda pada lampu UV 254

nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan

indikator fluoresensi yang terdapat pada lempeng. Fluoresensi cahaya

yang tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen

tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke

tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula

sambil melepaskan energi.

b. Pada UV 366 nm

Pada UV 366 nm noda akan berflouresensi dan lempeng akan

berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu UV 366 nm adalah

karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor

yang terikat oleh auksokrom yang ada pada noda tersebut. Fluoresensi

cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh

komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi

dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan

semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang tampak pada

lampu UV 366 terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak

berfluororesensi pada sinar UV 366 nm.

c. Penyemprotan dengan DPPH

Salah satu metode yang digunakan untuk pengujian aktivitas

antioksidan adalah metode DPPH. Metode DPPH didasarkan pada

kemampuan antioksidan untuk menghambat radikal bebas dengan

mendonorkan atom hidrogen. Perubahan warna ungu DPPH menjadi

ungu kemerahan dimanfaatkan untuk mengetahui aktivitas senyawa

antioksidan. Metode ini menggunakan kontrol positif sebagai

pembanding untuk mengetahui aktivitas antioksidan sampel.

Noda-noda yang diperoleh biasanya berekor disebabkan karena :

1. Penotolan yang berulang-ulang dan letaknya tidak tepat

2. Kandungan senyawa yang terlalu asam atau basa

3. Lempeng yang tidak rata

BAB V



PENUTUP

V.1 Kesimpulan

A. Kromatografi Kolom Konvensional

Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa

daun bunga terompet (Mandevillae folium) didapatlan hasil

kromatografi kolom dengan jumlah fraksi 9 dan menggunakan 7

eluen berdasarkan tingkat kepolaran yang lebih tinggi yang

selanjutnya akan diisolasi kembali dengan metode yang cocok.

Pada sinar UV tidak menampakkan noda, hal tersebut dapat

disebabkan adanya faktor kesalahan.

B. Kromatografi Cair Vakum (KCV)

Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa

daun bunga terompet (Mandevillae folium) didapatkan hasil

kromatografi kolom dengan jumlah fraksi 9 dan menggunakan 7

eluen. Berdasarkan hasil noda yang tampak terdapat 2 fraksi yang

menampakkan noda yaitu pada fraksi 4 dan fraksi 5 .Pada Fraksi

4, noda 1 memiliki nilai Rf = 0,745, noda 2 memiliki nilai Rf =

0,836, dan noda 3 memiliki nilai Rf = 0,927. Sedangkan pada fraksi

5, noda 1 memiliki nilai Rf = 0,872, dan pada noda 2 memiliki nilai

Rf = 0,927. Senyawa tersebut selanjutnya akan diisolasi kembali

dengan menggunakan metode pemisahan yang cocok, seperti

Kromatografi Preparatif.

V.2 Saran

Diharapkan kebersihan dan bahan lebih dilengkapi

dilaboratorium agar praktikum lebih lancar.



Diposkan oleh ARL Lawang di 00.41

ARL Lawang

Semua Orang Bebas Untuk Memilih Tapi Pilihlah Sesuatu Yang

Bisa Menguntungkan Semua Orang........

DAFTAR PUSTAKA

Hayani, E., 2007. Pemisahan Komponen Rimpang Temu Kunci Secara

Kromatografi Kolom.Buletin Teknik Pertanian Vol. 12 No. 1.

Khopkar, S.M. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI-Press. Jakarta.

Sastrohamidjojo, Hardjono.1985. Kromatografi Edisi kedua, Liberty.

Yogyakarta

Soebagio, dkk. 2000. Kimia Analitik II. JICA. Malang

Sumar Hendayana. 2010. Kimia Pemisahan. PT Remaja Rosdakarya,.

Bandung.

Yazid, Estien. 2005. Kimia Fisika untuk Paramedis. Andi. Yogyakarta

+1 Rekomendasikan ini di Google



Posting Lebih Baru Posting Lama

3 komentar

Komentar teratas

ARL Lawang 6 bulan lalu - Dibagikan kepada publik

laporan fitokimia kromatografi kolom

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA II Isolasi

dan Idendtifikasi Fraksi Aktif dari Ekstrak Daun Bunga

Terompet ( Mandevillae

sanderi ) menggunakan Kromatografi

Kolom Konvensional,Kromatografi Cair Vakum dan

Kromatografi

Lapis Tipis Preparatif OLEH

: NAMA ...

1 Balas

ARL Lawang melalui Google+

6 bulan lalu - Dibagikan kepada publik

1 Balas

ARL Lawang melalui Google+

6 bulan lalu - Dibagikan kepada publik

1 Balas

Tambahkan komentar

Beranda

Langganan: Poskan Komentar (Atom)

istilah - istilah farmasi, farmakologi dan farmakognosi 1. Amara : penambah nafsu makan 2. Anhidrotika : Mengurangi keluarnya

keringat 3. Analgetika : Mengurangi rasa nyeri 4. Antelmintika : Membasmi cacing dari dalam tubuh manusia 5. Abses : Pengumpulan

nanah dalam rongga yang terbentuk akibat kerusakan jaringan. 6. Anoreksia : Hilangnya atau berkurangnya nafsu makan. 7.

Ansietas : Cemas,resah,rasa cemas yang berlebihan tidak sesuai dengan realitas. 8. Agranulositosis : Jumlah leukosit kurang dari

500 mm3 dengan gejala luka infeksi pada tekak, traktus intestinal dan kulit. 9. Artritis : Radang sendi terutama pada rheumatik

10. Anuria : Tidak terjadi eksin urin 11. Akromegali : Pembesaran disebabkan sekresi berlebihan somatotropin 12. Atonia : Relaksasi

otot 13. Ataksia : Gangguan koordinasi gerakan 14. Asites : Penimbunan cairan dalam rongga perut 15. Asidosis : Penurunan pH

darah dibawah 7,37 16. Anti fungi : Membasmi jamur 17. Anti hipertensi : Menurunkan tekanan darah 18. Anti piretika :

Menurunkan suhu badan 19. Anti Emetika : Mencegah atau menghilangkan mual atau muntah 20. Anti diare : Menghentikan BAB

yang bersifat diare 21. Anti Neuralgia : Menghilangka rasa sakit /nyeri 22. Anti reumatika : Menghilangkan sakit pada encok /

rematik 23. Anti spasmodika : Pereda / pelawan keadaan kejang pada tubuh (pereda kejang) 24. Anti septika : Membasmi kuman

(desinfekta) 25. Antidotum : Penawar racun 26. Antitusif : Pereda batuk tidak berdahak 27. Anti diabetika : Untuk mengobati

kencing manis 28. Anti hemoroida : Untuk mengobati wasir 29. Anti Iritansia : Mencegah perangsangan pada kulit dan selaput

lendir 30. Aprodisiaka : obat penguat syahwat 31. Astringensia : Menciutkan selaput lender atau pori / pengelat 32. Biopsi :

Pengambilan jaringan dari mahluk hidup untuk pemeriksaan mikroskopik 33. Cardiaka : Untuk jantung 34. Cardiotonika : Untuk

penguat kerja jantung 35. Cholagoga : Membantu fungsi dari empedu 36. Dismenorrhoe : Untuk menobati nyeri Haid 37. Dismenore

: Menstruasi yang disertai dengan rasa sakit 38. Diaforetika : Memperbanyak keluarnya keringat / peluruh keringat 39. Digestiva :

Merangsang pencernaan makanan 40. Diuretika : Melancarkan keluarnya air seni 41. Dilatator : Melebarkan pembuluh darah 42.

Depuratif : Pembersih darah 43. Ensefalitis : Radang otak 44. Ekspektoransia : Mengurangi batuk berdahak 45. Emenagoga :

Memperbanyak keluarnya haid / peluruh haid 46. Emetika : Menyebabkan muntah 47. Emoliensia :: menghaluskan, melembutkan, dan



melemaskan jaringan kulit. 48. Flatulensi : Terbentuknya banyak gas dalam usus 49. Gonorrhoe : Kencing nanah 50. Hair tonic :

Menguatkan atau menyuburkan rambut 51. Holitosis : Menyegarkan nafas 52. Hemostatika : Menghentikan pendarahan 53.

Hipotiroidisme : kekurangan aktivitas kelenjar gondok (Tiroksin) 54. Insektisida : Membasmi serangga 55. Ileus : penyumbatan

usus 56. Keratitis : Radang kornea mata 57. Konstipasi : Sembelit / Susah BAB 58. Karminativa : Mengeluarkan angin dari dalam

tubuh manusia 59. Laktasi : produksi susu pada kelenjar payudara wanita setelah melahirkan 60. Laktagoga : Memperlancar ASI

61. Laktifuga : Menghentikan atau mengurangi ASI 62. Litotriptika : Menghancurkan batu pada kandung kemih 63.

Laxantia/Laksativ : Melancarkan BAB / Pencahar 64. Meningitis : Radang selaput otak 65. Nephrolithiasis : Penyakit kencing batu

66. Neuropsikhiatrik :: gangguan saraf, kejiwaan. 67. Paralisis : Kelumpuhan total motorik 68. Parkinson : Penyakit dengan ciri

adanya gemetar pada tangan dan kaki 69. Parasimpatolitika : pelawan efek perangsang saraf parasimpatik. 70. Pertusis : Batuk

rejan / batuk 100 hari 71. Post partum : Setelah kelahiran 72. Roboransia/Tonikum : Obat kuat 73. Sedativa : Obat penenang 74.

Skabicida : Obat kudis 75. Skorbut : Sariawan, gusi berdarah karena kekurangngan Vit C 76. Stomakika : Memacu enzim-enzim

pencernaan 77. Trikhomoniasis : Penyakit kulit yang disebabkan jamur Trichofyton 78. Urolithiasis : adanya batu pada saluran

kemih 79. Udema : Penimbunan cairan tubuh akibat gangguan metabolisme elektrolit dan retensi 80. vasodilatansia : memperlebar

pembuluh darah

Template Watermark. Diberdayakan oleh Blogger.

pembahasan laporan fitokimia kromatografi kolom

Documents