i

LAPORAN PRAKTIKUM

PENGUKURAN KANDUNGAN KLOROFIL

Oleh:

Golongan D / Kelompok 3B

1. Risa Novita Sari (161510501099)

2. Muhammad Fachrur Ramadhandi (161510501107)

3. Sema Isnaeni Fitriana (161510501267)

LABORATORIUM FISIOLOGI TUMBUHAN

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS JEMBER

2017

1

BAB 1. PENDAHULUAN

Klorofil adalah pigmen berwarna hijau yang memberikan sebagian besar

warna pada tanaman dan membuat tanaman untuk dapat melakukan proses

fotosintesis. Klorofil juga memiliki beberapa bentuk yang terbilang sama, masing

– masing struktur cincin yang sangat kompleks dan mempunyai hidrokarbon yang

panjang. Struktur yang dimiliki molekul klorofil hampir mirip dengan bagaian

heme pada hemoglobin tetapi zat besi yang terakhir terkandung terdapat di tempat

magnesium.

Pada tumbuhan, karbon dioksida nantinya akan diubah menjadi oksigen

dan selanjutnya akan di keluarkan kembali ke lingkungan untuk diberikan kepada

makhluk hidup yang membutuhkan seperti hewan dan manusia. Saat klorofil di

ekstrak, pigmen hijau yang terdapat pada klorofil akan digunakan sebagai

pewarna makanan dan ada seuplemen makanan yang mengandung klorofil agar

dapat membuat kesehatan dapat terjaga.

Klorofil dapat ditemukan yaitu di dalam kloroplas, kloroplas adalah

pigmen aktif yang terdapat didalam fotosintesis. Klorofil juga termsuk tetra-spiral

yang dihubungkan oleh atom Mg, yang berbentuk oval dan terkandung

didalamnya. Penyerapan yang dilakukan dalam proses esensial oleh kloroplas

didalam membran tilakoid. Tiap – tiap foton dapat mengeluarkan electron yang

nantinya akan menuju kedalam klorofil. Penyerapan terhadap panjang gelombang

sangatlah bervariasi dan dapat dikukur dengan mengguakan spektrofometer.

Banyaknya penyerapan yang terjadi dari fungsi panjang gelombang dapat disebut

dengan spectrum penyerapan.

Tipe – tipe klorofil terdapat 6 tipe, diantaranya adalah klorofil a, b, dan c,

dorobium dan klorofil 650 sertda 660. Klorofil a dan b dapat ditemukan pada

semua organisme yang dapat melakukann proses fotosintesis. Ukuran kloroplas

sangatlah bervariasi pada setiap spesiesnya. Pada tanaman yang mempunyai

tingkat tinggi mempunyai diameter kloroplas antara 4-6 mm. Kloroplas yang

terdapat pada sel polipoid mempunyai ukuran yang lebih besar dibandingkan

2

tanaman yang selnya bukanlah polipoid. Perubahan yang terjadi pada bentuk dan

volume kloroplas dapat disebabkan oleh cahaya, dalam keadaaan yang gelap

kloroplas dapat direduksi dengan adanya penambahan ATP. Terdapat beberapa

faktor – faktor yang dapat mempengaruhi pembentukan klorofil, diantaranya

adalah faktor pembawaan, cahaya, oksigen, karbohidrat, nitrogen, air, temperatur

dan unsur – unsur lainnya.

1.2 Tujuan

1. untuk dapat mengetahui dan memahami tentang klorofil

2. untuk dapat mengetahui kandungan yang terdapat pada klorofil

3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

Tanaman merupakan salah satu yang memiliki kandungan klorofil yang

relatif banyak, Dimana hampir diseruluh permukaan tanaman mengandung

klorofil. Menurut Haryanti et all. (2015) Kandungan klorofil di dalam tanaman

banyak dikarenakan klorofil berperan langsung dalam penangkapan radiasi serta

mengubahnya menjadi energi kimia, sehingga jumlahnya tersebut sangat

berpengaruh terhadap kecepatan tanaman untuk terus tumbuh. Klorofil sangat

penting untuk proses fotosintesis pada tanaman karena dapat memberi pigmen

yang beragam pada tanaman. Energi kimia yang dihasilkan ada hubungan

terhadap proses respirasi tanaman yang menjadi sangat penting berlangsungnya

proses metabolisme dalam tanaman menurut (Toro et all. 2015).

Dalam proses pembentukan klorofil pada tanaman cahaya sangat

berpengaruh terhapat hasil akhir nantinya. Menurut Setyawati et all. (2015)

Cahaya sangat berpengaruh terhadap proses pembentukan klorofil sehingga

cahaya yang sedikit dapat menjadi pembatas pembentukan klorofil pada tanaman.

Pada tanaman Klorofil terbagi atas dua macam yaitu klorofiil a dan klorofil b

dimana kedua klorofil tersebut sangat penting bagi tanaman. Klorofi a dan klorofil

b merupakan komponen utama yang terdapat pada trikoid hal inilah menyebabkan

keberadaan klorofil a dan klorrofil b sangat penting pada tanaman khususnya

untuk proses fotosintesis pada tanaman Menurut (Rohmatul et all. 2012).

Dalam fotosintesis terdapat proses respirasi dimana ada dua macam

Respirasi diantaranya Respirasi aerob dan anaerob. Degradasi asimilasi CO2 di

jamur pada tanaman yang terjadi di stomata (Menurut Celeste et all.2012). Proses

respirasi pada tanaman yang hanya menggunakan air akan menyebabkan

berkurangnya konsentrasi oksigen yang terlarut dalam air sehingga berpengaruh

terhadap proses respirasi tanaman menurut (Puspitaningrum et all.2012).

Klorofil dapat ditemukan yaitu di dalam kloroplas, kloroplas adalah pigmen aktif

yang terdapat didalam fotosintesis. Klorofil juga termsuk tetra-spiral yang

4

dihubungkan oleh atom Mg, yang berbentuk oval dan terkandung didalamnya.

Terdapat beberapa faktor – faktor yang dapat mempengaruhi pembentukan

klorofil, diantaranya adalah faktor pembawaan, cahaya, oksigen, karbohidrat,

nitrogen, air, temperatur dan unsur – unsur lainnya.

5

BAB 3. METODE PRAKTIKUM

3.1 Waktu dan Tempat

Kegiatan praktikum agrobiosains mengenai “Pengukuran Kandungan

Klorofil” dilaksanakan pada hari sabtu 4 November 2017, pukul 12.30 - selesai di

laboratorium Fisiologi Tumbuhan.

3.2 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat

1. Mortar dan pestle (dinginkan sebelum digunakan)

2. Spektrofotometer

3. Alat sentrifugasi

4. Mikropipet

5. Kertas karbon

3.1.2

1. 10 mM Borate pH 8,0 yang telah didinginkan

2. Ethanol absolute (dingin 4oC)

3. Nitrogen cair

3.3 PelaksanaanPraktikum

1. Menimbang 0,5 gram jaringan daun segar dan memasukkan ke dalam mortar

yang telah didinginkan sebelumnya.

2. Menambahkan nitrogen cair (bila perlu) ke dalam mortar dan menggerus

dengan pestle sampai menjadi tepung.

3. Menambahkan 3 ml larutan 10 mM Borate pH 8,0 yang telah didinginkan dan

menggerus lagi sampai semua tepung daun tersuspensi.

4. Mengambil 40 μl suspense di atas dan memasukkan ke dalam tabung mikro

sentrifugasi(eppendorf).

6

5. Menambahkan 960 μl ethanol absolute dingin 4oC, kemudian divorteks.

6. Menginkubasikan selama 30 menit pada suhu 4oC dalam keadaan gelap.

7. Mensentrifugasi pada kecepatan 10.000 rpm suhu 4oC selama 5 menit.

8. Mengukur optical density (OD) menggunakan spektrofotometer pada panjang

gelombang 649 nm dan 665 nm.

9. Hitungan kandungan klorofil menggunakan rumus:

Klorofil a = (13,7 x Abs 665) – (5,76 x Abs 649)

= ………..μg ml-1

Klorofil b = (25,8 x Abs 649) – (7,60 x Abs 665)

= ……….. μg ml-1

Dari data di atas dapat dibuat rasio antara klorofil a : klorofil b

Rumus alternative untuk menghitung total klorofil a dan b dapat digunakan

rumus sebagai berikut:

Total klorofil (a+b) = (6,10 x Abs 665) + (20,04 x Abs 649)

= ………. μg ml-1

3.4 Variabel Pengamatan

3.5 Analisis Data

7

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

No Sampel

ABSORSI

A B

4.2 Pembahasan

Kandungan klorofil pada tanaman menunjukkan bahwa tanaman

melakukan proses fotosintesis yang nantinya menghasilkan pigmen atau biasa

dikenal sebagai klorofil pada tanaman. Umumnya pigmen pada tanaman berwarna

hijau tua lebih banyak kandungan klorofilnya dibandingkan pada daun yang

berwarna hijau muda. Hal ini ditujjukkan pada daun lamtoro yang memiliki

kandungan klorofil a terbanyak jika dibandingkan dengan daun yang lain.

Sedangkan untuk kandungan klorofil b daun cabai masih paling tinggi hal ini

dikarenakan warna daun cabai yang berwarna hijau tua jika dibandingkan dengan

yang lain. Menurut Rohmatul et all.(2012) kandungan klorofil pada daun yang

berwarna hijau tua 50 % lebih banyak dibandingkan daun yang berwarna merah

tua ini dikarenakan kandungan klorofil pada daun yang berwarna hijau tua lebih

dominan daripada daun warna merah tua.

Kandungan klorofil yang paling sedikit terdapat pada daun kelengkeng

dimana jumlah total klorofil a sebanyak 1,101146 μg ml-1 sedangkan klorofil b

1 Daun pepaya 3,6522 μg ml-1 1,975 μg ml-1

2 Daun kelengkeng 1,101146 μg

ml-1

0,4966 μg ml-1

3 Daun nangka 1,34744 μg ml-

1

0,6314 μg ml-1

4 Daun jati 1,2583 μg ml-1 1,246 μg ml-1

5 Daun lamtoro 6,07 μg ml-1 3,19 μg ml-1

6 Daun cabai 4,04 μg ml-1 2,5 μg ml-1

8

sebanyak 0,4966 μg ml-1. Hal ini disebabkan warna pada daun kelengkeng tidak

terlalu hijau pekat sehingga kandungan klorofil didalamnya kurang. Proses analisa

kandungan klorofil dimulai dari pemotongan daun hingga menjadi lebih kecil hal

ini untuk memudahkan dalam proses penghalusan daun.

Setelah itu daun ditimbang hingga 10 gram, lalu diletakankan di wadah

mortar dan di haluskan menggunakan pestle. Lalu di tambahkan Nitrogen cair hal

ini agar tektur dari daun menjadi keras dan memudahkan dalam proses

penghalusan. Setelah daun halus lalu diberi larutan borate sebanyak 3 ml diaduk

hingga merata menggunakan sendok. Setelah tercampur hingga rata lalu

dipindahkan kedalam tabung mikro selanjutnya di beri ethanol absolute dingin

dengan suhu 4oC sebanyak 960 μl. Tahapan selanjutnya ialah diikubasi selama 30

menit pada ruangan gelap dengan suhu 4oC. Mengukur (OD) menggunakan

spektrofometer pada panjang gelombang 649 nm dan 665 nm. Selanjutnya

menghitung jumlah klorofil a dan klorofil b yang kemudian dihitung keseluruhan

atau total dari klorofil a dan b menggunakan rumus. Hingga akan didapat total

klorofil a dan klorofil b pada masing-masing daun tanaman.

9

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1. Klorofil merupakan pigmen pada setiap tanaman, umumnya Klorofil berwarna

hijau yang memberikan sebagian besar warna pada tanaman dan membuat

tanaman untuk dapat melakukan proses fotosintesis. Klorofil banyak terdapat

pada daun yang berwarna hijau tua hal ini karna jumlah klorofilnya lebih

dominan jika dibandingkan dengan yang berwarna merah tua.

2. Dalam klorofil mengandung zat hijau yang berguna bagi tanaman untuk

fotosintesis. Klorofil terbagi atas klorofil a dan klorofil b, dimana pada daun

bagian bawah mengandung lebih banyak klorofil dibandingkan dengan daun

bagian atas.

5.2 Saran

Pada praktikum minggu lalu informasi tentang jadwal pengamatan terlalu

mendadak sehingga praktikan tidak mengetahui informasi tentang hasil

pengamatan dikarenakan keterbatasan lab yang hanya mewajibkan satu orang

dalam setiap kelompok.

10

DAFTAR PUSTAKA

Celeste M.D., 2012. Phytotoxicity: An Overview of the Physiological Responses

of Plants Exposed to Fungicides. 1(1):1-2

Haryanti S., Budhiastuti R. 2015. Morfoanatomi, Berat Basah Kotiledon dan

Ketebalan Daun Kecambah Kacang Hijau (Phaseolus vulgaris L.) pada

Naungan yang Berbeda. 1(23):47

Rohmatul M.R., Ainun N.L., 2012. Kadar Total Pigmen Klorofil dan Senyawa

Antosianin Ekstrak Kastuba (Euphorbia pulcherrima) Berdasarkan Umur

Daun. 1(2): 225-230

Puspitaningrum M. Munifatul I. Sri H., 2012. Produksi dan Konsumsi oksigen

Terlarut oleh beberapa Tumbuhan air. 1(1) : 47-52

Setyawati T.H., Answar S., dan Slamet W., 2013. Karakteristik Fotosintetik dan

serapan fosfor hijauan alfaalfa (mediccago sativa) pada tinggi pemotongan

dan pemupukan nitrogen yang berbeda. 1(2): 86-96

Toro G., Manuel P. 2015. Plant respiration under low oxygen. 1(1): 57-58

Tuhuteru S.M.L Hehanussa, S.H.T. Raharjo (2012) .Pertumbuhan Perkembangan

Anggrek Dendrobium anosmum pada Media Kultur In Vitro dengan

beberapa Konsentrasi Air kelapa. 1(1):1-10

LAMPIRAN ANALISA KANDUNGAN KLOROFIL

LAMPIRAN ANALISA TOTAL LIPID

Pemotongan daun

Penimbangan daun sebanyak 10 gram

Pemberian nitrogen cair

Penghalusan daun

Pemberian larutan borate sebanyak 3 ml

Diaduk hingga merata

Pemasukan ke tabung mikro

Pemberian ethanol

Diinkubasi selama 30 menit