kelompok 4b - analisis pct total dalam urin

8/10/2019 Kelompok 4B - Analisis PCT Total Dalam Urin

1/16

LAPORAN PRAKTIKUM

BIOFARMASETIKA DAN FARMAKOKINETIKA Analisis Parasetamol Total dalam Cuplikan Urin

Kelompok 4 B

Qadrina Sufy 1111102000030

Elsa Elfrida 1111102000032

Ida Ayu Purnama 1111102000036

Rosita Pracima 1111102000041

Arini Eka Pratiwi 1111102000051

Sumiati 1111102000124

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

2014


2/16

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Tujuan Praktikum

Untuk menganalisis kadar parasetamol total dalam cuplikan urin manusia.

1.2 Landasan Teori

Paracetamol

Parasetamol merupakan obat analgesik non narkotik dengan cara kerja

menghambat sintesis prostaglandin terutama di SSP . Parasetamol digunakan

secara luas di berbagai negara baik dalam bentuk sediaan tunggal sebagai

analgetik-antipiretik maupun kombinasi dengan obat lain dalam sediaan obat flu,

melalui resep dokter atau yang dijual bebas. Keracunan parasetamol terutama

menimbulkan nekrosis hati yang disebabkan oleh metabolitnya.

Parasetamol adalah paraaminofenol yang merupakan metabolit fenasetin

dan telah digunakan sejak tahun 1893. Parasetamol (asetaminofen) mempunyai

daya kerja analgetik, antipiretik, tidak mempunyai daya kerja anti radang dan

tidak menyebabkan iritasi serta peradangan lambung.

Hal ini disebabkan parasetamol bekerja pada tempat yang tidak terdapat

peroksid sedangkan pada tempat inflamasi terdapat lekosit yang melepaskan

peroksid sehingga efek anti inflamasinya tidak bermakna. Parasetamol berguna

untuk nyeri ringan sampai sedang, seperti nyeri kepala, mialgia, nyeri paska

melahirkan dan keadaan lain.


3/16

Farmakokinetik

Parasetamol cepat diabsorbsi dari saluran pencernaan, dengan kadar serum

puncak dicapai dalam 30-60 menit. Waktu paruh kira-kira 2 jam. Metabolisme di

hati, sekitar 3 % diekskresi dalam bentuk tidak berubah melalui urin dan 80-90 %

dikonjugasi dengan asam glukoronik atau asam sulfurik kemudian diekskresi

melalui urin dalam satu hari pertama; sebagian dihidroksilasi menjadi N asetil

benzokuinon yang sangat reaktif dan berpotensi menjadi metabolit berbahaya.

Pada dosis normal bereaksi dengan gugus sulfhidril dari glutation menjadi

substansi nontoksik. Pada dosis besar akan berikatan dengan sulfhidril dari protein

hati.

Parasetamol dimetabolisme terutama di hati, menjadi produk beracun dan

tidak beracun. Tiga jalur metabolik:

Glukuronidasi diyakini berkontribusi sebesar 40% untuk dua pertiga dari

metabolisme parasetamol

Sulfasi (sulfat konjugasi) dapat menjelaskan 20-40%. N-hidroksilasi dan penataan ulang, maka konjugasi GSH, menyumbang

kurang dari 15%. Hati ini sitokrom P450 sistem enzim memetabolisme

parasetamol, membentuk minor yang belum signifikan alkylating


4/16

metabolit yang dikenal sebagai NAPQI (N-asetil-p-benzo-kuinon imin).

NAPQI kemudian ireversibel terkonjugasi dengan kelompok sulfhidril

glutathione.

Semua tiga jalur menghasilkan produk akhir yang sudah tidak aktif, tidak

beracun, dan akhirnya diekskresikan oleh ginjal. Di jalur ketiga, bagaimanapun,

NAPQI produk setengah jadi adalah racun. NAPQI terutama bertanggung jawab

untuk efek racun parasetamol, ini merupakan contoh dari keracunan.

Produksi NAPQI terutama disebabkan dua isoenzim sitokrom P450:

CYP2E1 dan CYP1A2. Gen P450 sangat polimorfik dan perbedaan individu

dalam parasetamol toksisitas diyakini karena isoenzim ketiga, CYP2D6.

Polimorfisme genetik pada CYP2D6 dapat berkontribusi pada tingkat yang

berbeda secara signifikan dari produksi NAPQI. Pada dosis yang biasa, NAPQI

dengan cepat didetoksifikasi oleh. konjugasi dengan glutation. Setelah overdosis,

dan mungkin juga dalam metabolisme luas dan ultrarapid, detoksifikasi ini jalur

menjadi jenuh, dan, sebagai akibatnya, NAPQI terakumulasi menyebabkan

toksisitas hati dan ginjal.

FarmakodinamikEfek analgesik parasetamol dan fenasetin serupa dengan salisilat, yaitu

menghilangkan atau mengurangi nyeri ringan sampai sedang. Keduanya

menurunkan suhu tubuh dengan mekanisme yang diduga juga berdasarkan efek

sentral seperti salisilat.

Semua obat analgetik non opioid bekerja melalui penghambatan

siklooksigenase. Parasetamol menghambat siklooksigenase sehingga konversi

asam arakhidonat menjadi prostaglandin terganggu. Setiap obat menghambatsiklooksigenase secara berbeda. Parasetamol menghambat siklooksigenase pusat

lebih kuat dari pada aspirin, inilah yang menyebabkan parasetamol menjadi obat

antipiretik yang kuat melalui efek pada pusat pengaturan panas. Parasetamol

hanya mempunyai efek ringan pada siklooksigenase perifer. Inilah yang

menyebabkan parasetamol hanya menghilangkan atau mengurangi rasa nyeri

ringan sampai sedang. Parasetamol tidak mempengaruhi nyeri yang ditimbulkan


5/16

efek langsung prostaglandin, ini menunjukkan bahwa parasetamol menghambat

sintesa prostaglandin dan bukan blokade langsung prostaglandin.

Mekanisme toksisitas

Pada dosis terapi, salah satu metabolit parasetamol bersifat hepatotoksik,

didetoksifikasi oleh glutation membentuk asam merkapturi yang bersifat non

toksik dan diekskresikan melalui urin, tetapi pada dosis berlebih produksi

metabolit hepatotoksik meningkat melebihi kemampuan glutation untuk

mendetoksifikasi, sehingga metabolit tsb bereaksi dengan sel-sel hepar dan

timbulah nekrosis sentro-lobuler. Oleh karena itu pada penanggulangan keracunan

parasetamol terapi ditujukan untuk menstimulasi sintesa glutation. Dengan proses

yang sama parasetamol juga bersifat nefrotoksik.

Dosis Toksik

Parasetamol dosis 140 mg/kg pada anak-anak dan 6 gram pada orang

dewasa berpotensi hepatotoksik. Dosis 4g pada anak-anak dan 15 g pada dewasa

dapat menyebabkan hepatotoksitas berat sehingga terjadi nekrosis sentrolobuler

hati. Dosis lebih dari 20 g bersifat fatal. Pada alkoholisme, penderita yangmengkonsumsi obat-obat yang menginduksi enzim hati, kerusakan hati lebih

berat, hepatotoksik meningkat karena produksi metabolit meningkat.

Gambaran klinis

Gejala keracunan parasetamol dapat dibedakan atas 3 stadium :

1. Stadium I (0-24 jam)

Asimptomatis atau gangguan sistim pencernaan berupa mual, muntah, pucat, berkeringat. Pada anak-anak lebih sering terjadi muntah-muntah tanpa

berkeringat.

2. Stadium II (24-48 jam)

Peningkatan SGOT-SGPT. Gejala sistim pencernaan menghilang dan

muncul ikterus, nyeri perut kanan atas, meningkatnya bilirubin dan waktu

protombin. Terjadi pula gangguan faal ginjal berupa oliguria, disuria,

hematuria atau proteinuria.


6/16

3. Stadium III ( 72 - 96 jam )

Merupakan puncak gangguan faal hati, mual dan muntah muncul kembali,

ikterus dan terjadi penurunan kesadaran, ensefalopati hepatikum

4. Stadium IV ( 7- 10 hari)

Terjadi proses penyembuhan, tetapi jika kerusakan hati luas dan progresif

dapat terjadi sepsis, Disseminated Intravascular Coagulation (DIC) dan

kematian.


7/16

BAB II

METODOLOGI PRAKTIKUM

2.1 Tujuan Praktikum

Untuk menganalisis kadar parasetamol total dalam cuplikan urin manusia.

2.2 Tempat dan Tanggal Praktikum

Tempat : Laboratorium PBB dan PMC Fakultas Kedokteran dan Ilmu

Kesehatan (FKIK) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lantai 3

Tanggal : Selasa, 11 Desember 2014

2.3 Alat dan Bahan

Alat

- Gelas ukur

- Tabung reaksi

- Tube

- Spatula

- Kertas timbang- Timbangan analitik

- Pot

- Hotplate

- Gelas beaker

- Lemari asam

- Pipet tetes

- Spuit- Seperangkat alat

sentrifugasi

Bahan

- Urine manusia sehat (cuplikan 1 jam, 3 jam dan 6 jam)

- Naftoresorsinol

-

HCl pekat- Etil asetat

- BaCl

- pH universal

- FeCl 3

- Air


8/16

2.4 Cara Kerja

a. Uji Naftoresorsinol untuk Konjugat Glukoronat

0,5 mL urine (1 jam, 3 jam, dan 6 jam) + 2 mg naftoresorsinol padat +

1 mL HCl pekat

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan diberi label setiap jam cuplikan

Dididihkan selama 3 menit di dalam lemari asam

Didinginkan

Ditambahkan 3 mL etil asetat + dikocok hingga homogen

Positif menunjukkan adanya asam glukuronat jika terbentuk warna ungu

dilapisan organik

b. Uji Barium Klorida untuk Konjugat Sulfat

Cuplikan urine (1 jam, 3 jam dan 6 jam) dengan pH universal (pH= 4-6)

0,5 mL urine (1 jam, 3 jam dan 6 jam) + 2 mL BaCl 2%

Disentrifugasi dan diambil bagian supernatannya

Supernatan dimasukkan ke dalam tabung reaksi + 2 tetes HCl pekat

Dididihkan selama 3 mL di dalam lemari asam

Positif menunjukkan adanya konjugat sulfat jika terbentuk endapan

atau kekeruhan


9/16

c. Uji Besi (III) Klorida untuk Fenol

Cuplikan urine (1 jam, 3 jam dan 6 jam) dengan pH universal (pH= 7)

0,5 mL urine (1 jam, 3 jam, dan 6 jam) + FeCl3 2% beberapa teter pertama

Terbentuk endapan besi (III) fosfat + sentrifugasi (jika perlu)

Ditambahkan beberapa tetes FeCl3

Terbentuk warna ungu atau hijau jika mengandung fenol


10/16


11/16

3.2 Pembahasan

Pada praktikum ini telah dilakukan analisis kualitatif suatu senyawa obat

yang telah dimetabolisme oleh tubuh yang diekskresikan melalui urin untuk

mengetahui apakah senyawa obat tersebut masih tersisa di dalam urin setelah

rentang waktu tertentu. Obat yang digunakan sebagai bahan uji pada percobaan ini

adalah parasetamol. Parasetamol merupakan derivat p-aminofenol yang

mempunyai sifat antipiretik atau analgesik. Parasetamol terutama digunakan untuk

menurunkan panas badan yang disebabkan oleh infeksi atau sebab yang lainnya.

Di samping itu parasetamol juga dapat digunakan untuk meringkankan gejala

nyeri dengan intensitas ringan sampai sedang.

Parasetamol dipilih untuk digunakan sebagai bahan uji pada percobaan ini

adalah karena parasetamol dapat diabsorpsi dengan cepat dan sempurna melalui

saluran cerna. Konsentrasi tertinggi dalam plasma dicapai dalam waktu 30 menit

dan waktu paruh plasma antara 1-3 jam. Obat ini tersebar ke seluruh cairan tubuh

dalam plasma sekitar 25% parasetamol sehingga identifikasinya pun akan lebih

mudah. Paraetamol juga dimetabolisme oleh enzim mikrosom hati. Sebagian

parasetamol (80%) dikonjugasikan dengan asam glukoronat dan sebagian kecil

lainnya dengan asam sulfat. Selain itu parasetamol juga dapat mengalami

hidroksilasi. Metabolit hasil hidroksilasi dapat menimbulkan methemoglobinemia

dan hemolisis eritrosit. Parasetamol juga diekskresikan melalui ginjal, sebagian

kecil sebagai parasetamol (3%) dan sebagian besar dalam bentuk terkonjugasi.

Parasetamol berikatan dengan sulfat dan glukoronida yang terjadi di hati.

Metabolisme utamanya meliputi senyawa sulfat yang tidak aktif dan konjugat

glukoronida yang dikeluarkan melewati ginjal. Oleh karena itu, pada percobaan

kali ini dilakukan identifikasi senyawa parasetamol dalam bentuk konjugatnya,yaitu senyawa glukoronida, sulfat, dan fenol.

Hal pertama yang dilakukan adalah seorang probandus harus meminum

parasetamol 24 jam sebelum pengujian dilakukan dikarenakan parasetamol

mencapai waktu paruh plasma antara 1-3 jam yang selanjutnya akan

dieliminasikan. Selanjutnya dilakukan pengambilan cuplikan urin yang dilakukan

dengan interval waktu 1, 3, dan 6 jam setelah obat parasetamol diminum.


12/16

Kemudian setiap cuplikan dari interval waktu yang telah ditentukan diidentifikasi

lebih lanjut terhadap senyawa glukoronida, sulfat, dan fenol.

Pengujian pertama yang dilakukan adalah uji naftoresorsinol untuk konjugat

glukoronida yang dilakukan dengan cara memanaskan 0,5 mL cuplikan urin yang

sebelumnya telah ditambahan 2 mg naftoresorsinol padat serta 1 mL HCl pekat.

Tujuan penambahan HCl pekat adalah untuk membuat suasa menjadi asam dan

menghidrolisis parasetamol menjadi para amino fenol. Pemanasan dilakukan di

dalam lemari asam dan kemudian didinginkan. Setelah dingin kemudian

ditambahkan dengan etil asetat sebanyak 3 mL, kemudian dikocok hingga

homogen, dan akan terbentuk warna ungu dalam lapisan organik bila positif

menunjukkan adanya asam glukoronat.

Pengujian kedua adalah uji barium klorida untuk konjugat sulfat yang

dilakukan dengan cara mereaksikan urin sebanyak 0,5 mL di mana pH urin diatur

pada pH 4-6. Selanjutnya ditambahkan BaCl 2% sebanyak 1,5 mL maka akan

terbentuk endapan BaSO 4 yang terbentuk dari sulfat anorganik. Kemudian

campuran tersebut disentrifugasi, akan terpisah antara supernatan dan

presipitatnya. Bagian supernatan diambil dan ditambahkan 2 tetes HCl pekat yang

selanjutnya dididihkan selama 3 menit. Tujuan penambahan HCl pekat adalahuntuk mengkatalis reaksi yang terjadi BaCl 2 dengan sulfat. Pendidihan dilakukan

dalam lemari asam. Hasilnya akan terbentuk endapan atau perubahan warna

menjadi keruh apabila positif mengandung konjugat sulfat.

Pengujian ketiga yang dilakukan adalah uji besi (III) klorida untuk fenol

yang dilakukan dengan cara mereaksikan 0,5 mL cuplikan urin yang telah diatur

keasamannya pada pH 4-6 dengan beberapa tetes FeCl 3 2%. Beberapa tetes

pertama akan membentuk endapan besi (III) fosfat bila perlu dapat disentrifugasi bila tidak terbentuk endapan. Kemudian bagian supernatan diambil dan

ditambahkan FeCl 3 beberapa tetes yang selanjutnya akan menghasilkan warna

ungu atau hijau jika positif mengandung fenol.

Dari hasil pengamatan dapat diketahui bahwa pada pengujian konjugat

glukoronida pada jam ke-1, 3, dan 6 menjadi negatif dengan lapisan organik

berwarna coklat muda, sehingga tidak adanya asam glukoronat.


13/16

Pada pengujian konjugat sulfat menjadi positif dengan menunjukkan

kekeruhan baik pada urin jam ke-1, 3, dan 6. Hal ini menunjukkan hasil yang

positif dikarenakan terbentuk endapan atau kekeruhan setelah dilakukan pengujian

dengan BaCl 2 2% dan 2 tetes HCl pekat. Terbentuk endapan putih yang

menunjukkan adanya belerang anorganik reaksi yang terjadi adalah:

BaCl 2 + SO4 2- BaSO 4 + 2 Cl -

Pada pengujian fenol menjadi positif dengan menunjukkan warna ungu atau

hiijau setelah direaksikan dengan FeCl 3, baik pada urin jam ke-1, 3, dan 6. Hal ini,

menunjukkan adanya fenol dalam cuplikan sampel urine tersebut, sehingga dapat

disimpulkan metabolisme pada parasetamol dalam hati probandus berlangsung

sempurna. Reaksi yang terjadi adalah:

FeCl 3 + -OH Fe(OH) 3 + Cl -

Berdasarkan hasil yang didapatkan dari percobaan ini, diketahui bahwa

metabolisme parasetamol dalam tubuh probandus adalah melalui konjugasi sulfat

dan fenol. Pada pengujian pertama atau uji konjugasi glukoronat seharusnya

menunjukkan hasil yang positif namun pada percobaan ini hasil yang didapatkan

adalah negatif. Hal tersebut dapat disebabkan human error karena pemanasanyang dilakukan pada pengujian pertama kurang lama sehingga pembentukan

warna yang dihasilkan menjadi tidak maksimal. Hal ini dibuktikan dengan

pengujian yang dilakukan oleh kelompok 4D dengan menggunakan urin yang

sama mendapatkan hasil yang positif untuk semua percobaan yang menunjukkan

bahwa pada probandus parasetamol dimetabolime melalui semua jalur

metabolismenya seperti konjugasi glukoronat, sulfat, dan fenol.


14/16

BAB IV

PENUTUP

4.1 Kesimpulan

Kesimpulan dari praktikum ini adalah:

1. Pada pengujian konjugat glukoronida pada jam ke-1, 3, dan 6 hasilnya negatif

dengan lapisan organik berwarna coklat muda, sehingga menandakan tidak

adanya asam glukoronat.

2. Pada pengujian konjugat sulfat hasilnya positif dengan menunjukkan

kekeruhan baik pada urin jam ke-1, 3, dan 6.3. Pada pengujian fenol hasilnya positif dengan menunjukkan warna ungu atau

hiijau setelah direaksikan dengan FeCl 3, baik pada urin jam ke-1, 3, dan 6.

4.2 Saran

Praktikan harus lebih disiplin dan tertib saat praktikum berlangsung Praktikan harus menjaga situasi dalam laboratorium lebih kondusif


15/16

DAFTAR PUSTAKA

Depkes RI. 1995. Farmakope Indonsesia Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan

Republik Indonesia.

Goodman, A. dan Gilman, H. 2007. Dasar Farmakologi Terapi Edisi Kesepuluh Volume

1. Jakarta: EGC.

Katzung, B. 1997. Farmakologi Dasar dan Klinik Edisi Ke-8. Jakarta: Bagian

Farmakologi. FKUA.

Lusiana, Darsono. 2002. Diagnosis dan Terapi Intoksikasi Salisilat dan Parasetamol.

Bandung: Universitas Kristes Maranatha.


16/16

LAMPIRAN

Cuplikan urine (jam ke 1, 3 dan 6) Hasil Uji Konjugasi Glukuronat

kelompok 4b - analisis pct total dalam urin

Documents