laporan biofar-farkin modul 4 eksresi urin

8/10/2019 Laporan Biofar-farkin Modul 4 eksresi urin

1/15

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM

BIOFARMASI-FARMAKOKINETIK

MODUL 4

EKSRESI URIN

KELOMPOK A4

HENDI ARI PERDIAN (10060309020)

ANDRI RISWANTO (10060309041)

AKBAR SUHANDI (10060309047)

TSAMROTUL FUADAH A. (10060309048)

DADANG BAYU S. (10060309053)

SITI NUR AMALIA S. (10060309059)

HARI/TANGGAL PRAKTIKUM : Rabu/ 27 Nopember 2013

HARI/TANGGAL LAPORAN : Rabu/ 4 Desember 2013

ASISTEN : Marina Chaerianisa,. S.Farm.

LABORATORIUM TERPADU FARMASI

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG

2012


2/15

EKSRESI URIN

I. Tujuan Percobaan

Setelah percobaan ini mahasiswa diharapkan mampu:

1.

Mengukur konsentrasi obat dalam eksresi urin dan mengetahui parameter-

parameter lain yang dapat dihitung

2. Memahami cara mengukur konsentrasi obat dari sampel urin

II. Teori dasar

Sistem ekresi adalah proses pengeluaran zat-zat sisa hasil metabolisme yang

sudah tidak digunakan lagi oleh tubuh ataupun zat-zat yang membahayakan bagi

tubuh. Hasil sistem ekskresi dapat dibedakan menjadi : Zat cair yaitu berupa keringat,

urine dan cairan empedu, Zat padat yaitu berupa feces, Gas berupa CO 2dan Uap air

berupa H2O (Poedjadi, 2005).

Ekresi terutama berkaitan dengan pengeluaran-pengeluaran senyawa-senyawa

nitrogen. Selama proses pencernaan makanan, protein dicernakan menjadi asam

amino dan diabsorpsi oleh darah, kemudian diperlukan oleh sel-sel tubuh untuk

membentuk protein-protein baru. Mamalia memiliki sepasang ginjal yang terletak

dibagian pinggang (lumbar) dibawah peritonium. Urine yang dihasilkan oleh ginjalakan mengalir melewati saluran ureter menuju kantung kemih yang terletak

midventral dibawah rektum. Dinding kantung kemih akan berkontraksi secara

volunter mendorong urine keluar melalui uretra (Kurniati, 2009).

Makhluk hidup menghasilkan zat-zat sisa yang harus dikeluarkan. Zat ini

dapat menjadi racun jika tidak dikeluarkan oleh tubuh. Proses pengeluaran zat sisa

dari tubuh antara lain sekresi, ekresi, dan defekasi. Sekresi merupakan suatu proses

pengeluaran zat yang berbentuk cairan oleh sel-sel atau jaringan. Ekskresi

merupakan proses pengeluaran zat siasa metabolisme dari tubuh yang sudah tidak

dapat digunakan lagi seperti pengeluaran urine, keringat, dan CO2 dari tubuh.

Defekasi merupakan prses pengeluaran feses dari tubuh. Alat ekskresi manusia

adalah paru-paru, ginjal, kulit, dan hati (Karmana, 2007).

Setiap hari tubuh kita menghasilkan kotoran dan zat-zat sisa dari berbagai

proses tubuh. Agar tubuh kita tetap sehat dan terbebas dari penyakit, maka kotoran

dan zat-zat sisa dalam tubuh kita harus dibuang melalui alat-alat ekskresi.


3/15

Urin atau air seni atau air kencing adalah cairan sisa yang diekskresikan oleh

ginjal yang kemudian akan dikeluarkan dari dalam tubuh melalui proses urinasi.

Pengeluaran urin diperlukan untuk mem-buang molekul-molekul sisa dalam

darah yang disaring oleh ginjal dan untuk menjaga homeostasis cairan tubuh.

Secara umum urin berwarna kuning. Urin encer warna kuning pucat (kuning

jernih), urin kental ber-warna kuning pekat, dan urin baru/segar berwarna kuning

jernih. Urin yang didiamkan agak lama akan berwarna kuning keruh. Urin berbau

khas jika dibiarkan agak lama berbau ammonia. pH urin berkisar antara 4,87,5, urin

akan menjadi lebih asam jika mengkonsumsi banyak protein,dan urin akan menjadi

lebih basa jika mengkonsumsi banyak sayuran. Berat jenis urin 1,0021,035.

Secara kimiawi kandungan zat dalan urin diantaranya adalah sampah nitrogen

(ureum, kreatinin dan asam urat), asam hipurat zat sisa pencernaan sayuran dan buah,

badan keton zat sisa metabolism le-mak, ion-ion elektrolit (Na, Cl, K, Amonium,

sulfat, Ca dan Mg), hormone, zat toksin (obat, vitamin dan zat kimia asing), zat

abnormal (protein, glukosa, sel darah Kristal kapur dsb)

Volume urin normal per hari adalah 900 1200 ml, volume tersebut

dipengaruhi banyak faktor di antaranya suhu, zat-zat diuretika (teh, alcohol, dan

kopi), jumlah air minum, hormon ADH, dan emosi. Interpretasi warna urin dapat

menggambarkan kondisi kesehatan organ dalam seseorang.

Bersama-sama dengan urine dieksresikan juga air dan senyawa-senyawa yang

larut dalam air. Jumlah dan komposisi urine sangat berubah-ubah dan tergantungpemasukan bahan makanan, berat badan, usia, jenis kelamin, dan lingkungan hidp
http://2.bp.blogspot.com/-oIRM8csaSBg/TjkfwZ9pwdI/AAAAAAAAAOI/CtTUGZJilec/s1600/komposisi+urin.jpg


4/15

seperti temperature, kelembaban, aktivitas tubuh dan keadaan kesehatan. Karena

eksresi urin dan komposisinya kebanyakan dihubungkan dengan waktu 24 jam.

Seorang dewasa memproduksi 0,5-2,0 liter urine setiap hari, yang terdiri dari

90% air. Urine mempunyai suatu nilai pH yang asam (kira-kira 5,8). Tentu saja nilai

pH urine dipengaruhi oleh keadaan metabolisme. Setelah makan sejumlah besar

bahan makanan dari tumbuh-tumbuhan, nilai pH urine meningkat hingga di atas 7.

Urine memiliki komponen organic dan anorganik. Urea, asam urat dan

kreatinin merupakan beberapa komponen organic dari urine. Ion-ion seperti Na, K, Ca

serta anion Cl merupakan komponen anorganik dari urine. Warna kuning pada urine,

disebabkan oleh urokrom, yaitu family zat empedu, yang terbentuk dari pemecahan

hemoglobin. Bila dibiarkan dalam udara terbuka, urokrom dapat teroksidasi, sehingga

urine menjadi berwarna kuning tua. Pergeseran konsentrasi komponen-komponen

fisiologik urine dan munculnya komponen-komponen urine yang patologik dapat

membantu diagnose penyakit.

Dalam farmakokinetik, urin dapat digunakan sebagai salah satu objek

pemeriksaan selain plasma darah, untuk penentuan beberapa parameter

farmakokinetik.

Penyiapan sampel dalam matriks urin pada umumnya dilakukan dengan cara

pengenceran dengan air atau dapar pada Ph tertentu, adapun pada beberapa kondisi

khusus biasanya dilakukan hidrolisis asam atau basa untuk membuat senyawa yang

akan dianalisis terlarut sempurna dalam urin.

Ur ine dan Parameter F armakokinetik

Data eksresi obat lewat urine dapat dipakai untuk memperkirakan

bioavailabilitas. Agar dapat diperkirakan yang sahih, obat harus dieksresi dengan

jumlah yang bermakna di dalam urine dan cuplikan urine harus dikumpulkan secara

lengkap.

Jumlah kumulatif obat yang dieksresi dalam urine secara langsung

berhubungan dengan jumlah total obat yang terabsorbsi. Di dalam percobaan,

cuplikan urinedikumpulkan secara berkala setelah pemberian produk obat. Tiap

cuplikan ditetapkan kadar obat bebas dengan cara yang spesifik. Kemudian dibuat

grafik yang menghubungkan kumulatif obat yang dieksresi terhadap jarak waktu

pengumpulan.

Hubungan antara jumlah kumulatif obat yang diekseresi dalam urin dan kurva

kadar obat dalam plasma-waktu diperlihatkan dalam Gambar (1). Bila obat


5/15

dieliminasi secara sempurna (titik C) konsentrasi obat dalam plasma mendekati nol

dan diperoleh jumlah maksimum obat yang diekskresi dalam urin.

Gambar 1. Gambar yang menunjukan hubungan kurva plasma waktu dan

jumlah kumulatif obat yang diekresi dalam urin

dDu/dt oleh karena sebagian besar obat dieliminasi dengan proses laju orde kesatu,

maka laju eksresi obat bergantung pada tetapan laju eliminasi orde kesatu (K) dan

kadar obat dalam plasma (Cp). Dalam gambar (1) laju eksresi obat maksimum berada

pada titik B, sedangkan laju eksresi obat minimum berada pada titik A dan C. Jadi,

suatu grafik yang membandingkan laju eksresi obat dengan waktu akan identik

dengan kurva kadar dalam plasma-waktu untuk obat tersebut (Gambar 2).


6/15

Gambar 2. Gambar yang menunjukan hubungan kurva kadar obat dalam plasma

waktu dan laju eksresi obat dalam urin

Dalam gambar (1 dan 2) slop dari bagian kurva A-B dikaitkan dengan laju absorpsi

obat, sedangkan C dikaitkan dengan waktu total yang diperlukan untuk absorpsi dan

ekskresi obat secara sempurna (t = ) setelah pemberian obat. Dengan demikian t

merupakan suatu parameter yang berguna dalam studi bioekivalensi yang

membandingkan beberapa produk obat.

Tetapan laju eliminasi (K), dapat dihitung dari data eksresi urine. Dalam

penghitungan ini, laju eksresi obat dianggap sebagai orde kesatu. Ke adalah tetapan

laju eksresi ginjal. Oleh karena eliminasi suatu obat biasanya dipengaruhi oleh eksresi

ginjal atau metabolisme (biotransformasi), maka dapat digunakan persamaan :

dDu/dt = KeDB

setelah diturukan maka diperoleh:

K = Km + Ke

Km adalah laju proses metabolisme orde kesatu dan Keadalah laju proses eksresi orde

kesatu.


7/15

Laju eksresi obat lewat urine (dDu/dt) tidak dapat ditentukan melalui

percobaan segera setelah pemberian obat. Dalam praktek, urine dikumpulkan pada

jarak waktu tertentu dan konsentrasi obat di analisis. Kemudian laju eksresi urin rata-

rata dihitung untuk tiap waktu pengumpulan. Harga dDu/dt rata-rata digambar pada

suatu skala semilogaritmik terhadap waktu yang merupakan harga tengah (titik

tengah) waktu pengumpulan.

Faktor-faktor tertentu dapat mempersulit untuk mendapatkan data eksresi urin yang

sahih. Beberapa factor tersebut adalah :

1. Suatu fraksi yang bermakna dari obat titak berubah harus dieksresi dalam urin;

2. Teknik penetapan kadar harus spesifik untuk obat tidak berubah, dan harus tidak

dipengaruhi oleh metabolit-metabolit obat obat yang mempunyai struktur kimia

serupa;

3. Diperlukan pengambilan cuplikan yang sering untuk mendapatkan gambaran kurva

yang baik;

4.

Cuplikan data urin hendaknya dikumpulkan secara berkala sampai hampir semua obat

dieksresi. Suatu grafik dari kumulatif obat yang dieksresi vs waktu akan

menghasilkan kurva yang mendekati asimtot pada waktu tak terhingga. Dalam

praktek, diperlukan kurang lebih 7 X t eliminasi untuk mengeliminasi 99% obat.

5.

Perbedaan pH urine dan volume dapat menyebabkan perbedaan laju eksresi urin yang

bermakna.

Kromatografi Cair Tekanan Tinggi, HPLC merupakan bentuk kromatografi

kolom yang sering digunakan dalam biokimia dan analisis kimia untuk memisahkan,

mengidentifikasi, mengukur dan memanjang. HPLC memanfaatkan kolom yang

memegang chromatographic bahan kemasan (tahap tak berubah), sebuah pompa yang

bergerak selular fase (s) melalui kolom, dan detektor yang menunjukkan ingatan

waktu Molecules. Retensi waktu bervariasi tergantung pada interaksi antara keadilan

tahap, yang Molecules yang dianalisis, dan larutan (s) yang digunakan.

Kromatografi jenis ini menggunakan fase gerak berupa cairan yang dialirkan

dengan tekanan sangat tinggi sedangkan fase diamnya dapat berbagai macam,

tergantung mode kromatografi yang dipilih dalam proses pemisahan. Prinsip

pengukurannya berdasarkan kepolaran antara fase gerak dan sampel.


8/15

III.Alat dan Bahan

Alat

- Gelas kimia

- Gelas ukur

-

Pipet tetes

- Pipet volume

- Mikro pipet

- Labu takar

- pH meter

- Vial

-

HPLC

Bahan

-

Urin

- Siprofloksasin

- Dapar ammonium asetat

-

Asetonitril

- Aquabidest

- Trietanolamin

IV. Prosedur Percobaan

A. Pengambilan sampel

Urin sukarelawan di ambil sebelum obat di minum (blanko). Kemudian obat

siprofloksasin diminum sehari sebelum percobaan pada jam 08.00. Volume urin

yang terkumpul diukur. Diambil 10 ml lalu ditaruh dalam vial dan disimpan

dalam lemari pendingin. Urin dikumpulkan pada rentang waktu yang telah

ditentukan:

08.0011.00 17.0020.00

11.0014.00 20.0024.00

14.0017.00 05.00


9/15

B. Perlakuan sampel

Sampel urin diambil sebanyak 1 ml kemudian dimasukan ke dalam labu takar 10

ml. Setelah itu diencerkan dengan dapar ammonium asetat hingga 10 ml (1:10).

Sampel dimasukan ke dalam kolom HPLC dengan Fase balik oktadesil silne, fase

gerak asetonitril-air (25:75) dengan 0,1% trietanolamin dan pH disesuaikan

hingga 2,5 dengan asam sulfat 1 M, detector spektrofotometri UV 294 nm, laju

elusi 1,5 ml/menit. Luas area siprofloksasin dicatat.

C. Pengolahan data

Kurva kalibrasi dibuat, dan dibuat larutan siprofloksasin dalam urin blanko,

dengan konsentrasi siprofloksasin 1, 5, 10, 20, 50 g/ml. Kurva dibuat

berdasarkan rasio luas area antara siprofloksasin. Luas area dari tiap larutan

siprofloksasin dihitung dengan system HPLC yang sama. Dari kurva kalibrasi

yang didapat kemudian dihitung konsentrasi siprofloksasin dari sampel.

Dibuat kurva log dXuvs tmid, lalu ditentukan konstanta laju eliminasi dan waktu

paruh eliminasi.

V. Data Pengamatan dan Perhitungan

Data Blanko

Perhitungan Pengenceran Blanko

Siprofloksasin yang dibuat 1000 ppm sebanyak 10 ml. Lalu diambil 1 ml

dan diencerkan sebanyak 10 ml dengan konsentrasi 100 ppm.

Dari 100 ppm yang diencerkan sampai 10 ml, akan dibuat sampel dengan

konsentrasi 1, 5, 10, 20, 50 g/ml.

100 ppm = 100 g/ml

Konsentrasi 1 g/ml V1x M1 = V2x M2

V1x 100 g/ml = 10 ml x 1

V1=

= 0,1 ml


V1x 100 g/ml = 10 ml x 5

V1=

= 0,5 ml


10/15


V1x 100 g/ml = 10 ml x 10

V1=

= 1 ml


V1x 100 g/ml = 10 ml x 20

V1=

= 2 ml


V1x 100 g/ml = 10 ml x 50

V1=

= 5 ml

Data AUC Blanko

C (Konsentrasi)

g/mlAUC

1 464471

5 719912

10 3440018

20 636865150 13128867

RT (Waktu Retensi) = 2,42

Nilai Regresi : b = 263371,85 y = bx + a

a = 294388,02 y = 263371,85x + 294388,02

r = 0,9915

y = 263372x + 294388

R = 0.9832

0

2000000

4000000

6000000

8000000

10000000

12000000

14000000

16000000

0 10 20 30 40 50 60

AxisTitle

Axis Title

AUC

AUC

Linear (AUC)


11/15

Data Sampel

Sampel AUC C (g/ml)Pengenceran

(dikali 10)Cp (mg/ml)

1 1533853 4,7 47 0,0047

2 6404928 23,2 232 0,0232

3 2286644 7,5 75 0,0075

4 2258840 7,4 74 0,0074

5 500805 0,78 7,8 0,00078

6 348995 0,21 2,1 0,00021

Perhitungan konsentrasi (C) = x :

y = 263371,85x + 294388,02Ket : y = Nilai AUC sampel

x = Nilai kosnsentrasi yang dicari

Sampel 1 1533853 = 263371,85x1+ 294388,02

x1=

x1= 4,7 g/ml

Sampel 2 6404928 = 263371,85x2+ 294388,02

x2=

x2= 23,2 g/ml

Sampel 3 2286644 = 263371,85x3+ 294388,02

x3=

x3= 7,5 g/m

Sampel 4 2258840 = 263371,85x4+ 294388,02

x4=

x4= 7,4 g/ml

Sampel 5 500805 = 263371,85x5+ 294388,02

x5=

x5= 0,78 g/ml

Sampel 6 348995 = 263371,85x6+ 294388,02

x6=

x6= 0,21 g/ml


12/15

Waktu Pengambilan

Sampel (Jam)

Cp

(mg/ml)

Jumlah

Urin (ml)DU DU/t t*

08.00-11.00 (0-3) 0,0047 550 2,585

= 0,86 1,5

11.00-14.00 (3-6) 0,0232 400 9,28

= 3,09 5

14.00-17.00 (6-9) 0,0075 430 3,225

= 1,07 8

17.00-20.00 (9-12) 0,0074 510 3,774

= 1,25 11

20.00-24.00 (12-16) 0,00078 450 0,351

= 0,08 14,5

24.00-05.00 (16-21) 0,00021 500 0,105

= 0,02 19

05.00-08.00 (21-24) 0 0 0

= 0 23

Ket : t = rentang waktu pengambilan sampel

DU = Cp x Jumlah urin

t* = waktu tengah-tengah dari rentang waktu pengambilan sampel

y = 3.5357x - 2.4286

R = 0.9946

0

5

10

15

20

25

0 2 4 6 8

LogDU/t

t*

t*

t*

Linear (t*)

Log DU/t t*

Log 0,86 = - 0,06 1,5

Log 3,09 = 0,48 5

Log 1,07 = 0,03 8

Log 1,25 = 0,09 11

Log 0,08 = - 1,09 14,5

Log 0,02 = - 1,69 19

Log 0 = 0 23


13/15

y = bx+a

y = 3,5357x + 2,4286

b =

k = 3,5357 x 2,303 = 8,14

t =

= 0,08

VI. Pembahasan

Pada praktikum ini akan melakukan pengukur kadar obat siprofloksasin

dalam urin. Dimana dilakukan pengukuran konsentrasi obat siprofloksasin dalam

ekskresi urin. Langkah awal yang dikerjakan adalah mengambil sample urin

sesaat sebelum pemberian obat siprofloksasin (blanko) dan urin dikumpulkan

pada rentang waktu 08.0011.00, 11.0014.00, 14.0017.00, 17.0020.00,

20.0024.00 (tidur) setelah pemberian obat tersebut. Lalu pagi hari urin diambil

sesaat setelah bangun tidur (05.00). dimana data volume dari setiap urinasi

dicatat, karena volume dari urin tersebut akan mempengaruhi distribusi obat

dalam urin. Sampel urin yang telah diambil disimpan didalam lemari pendingin

untuk mencegah pengendapan matriks pada urin.

Perlakuan pertama adalah membuat kurva kalibrasi, yaitu dengan

membuat larutan siprofloksasin dalam urin blanko, dimana tahap pengerjaannya

yaitu, membuat larutan stok siprofloksasin dengan konsentrasi 1000 ppm

sebanyak 10 ml lalu diambil 1 ml dan diencerkan sebanyak 10 ml dengan

konsentrasi 100 ppm. Larutan ini akan dibuat menjadi larutan sampel uji dengan

konsentrasi 1, 5, 10, 20, 50 ppm. Setelah itu dilakukan pengukuran luas area

(AUC) pada sampel di HPLC dengan fase gerak (asetonitril:air) denganpenambahan trietanolamin 0,1 % untuk menjaga pH (derajat keasaman) larutan

agar tetap stabil pada pH 2,5. Dari data AUC didapat persamaan regresi linier

yang nantinya akan digunakan untuk mengukur konsentrasi obat siprofloksasin

dalam sampel urin.

Tahap selanjutnya adalah pengukuran kadar siprofloksasin pada urin

sampel yang telah diambil pada rentang waktu yang telah ditentukan. Setiap

sampel urin diencerkan dengan dapar ammonium asetat agar senyawa yang

terdapat dalam urin dapat terlarut sempurna. Setelah itu sampel diukur dengan


14/15

menggunakan HPLC dengan perlakuan yang sama pada pengukuran urin blanko.

Dari hasil pengukurn didapatkan nilai AUC sampel.

Nilai AUC sampel ini digunakan untuk mengukur konsentrasi obat

siprofloksasin dalam urin dengan menggunakan persamaan regresi linier yang

didapat pada pembuatan kurva kalibrasi. Setelah diketehui data konsentrasi

siprofloksasin dalam urin selanjutnya dihitung nilai distribusi obat siprofloksasin

dalam urin dengan cara mengalikan konsentrasi obat dalam urin dengan volume

urinasi yang didapat. Setelah itu dihitung nilai distribusi siprofloksasin dalam urin

per rentang waktu pengambilan sampel. Kemudian dibuat kurva DU/t yang

dibandingkan dengan t* (tmid).

Dari kurva tersebut didapatkan persamaan regresi linier yang akan

digunakan untuk menghitung konstanta laju eliminasi dan waktu paruh eliminasi.

Dan didapatkan nilai konstanta eliminasi sebesar 8,14, dimana konstanta

eliminasi merupakan nilai tetapan laju eksresi ginjal yang menunjukan bagaimana

obat dimetabolisme dalam ginjal. Selain konstanta eliminasi dihitung pula waktu

paruh yang didapat nilainya sebesar 0,08/jam, dimana waktu paruh itu adalah

jangka waktu sampai kadar obat dalam urin menurun menjadi separuh dari harga

asalnya. Dengan mengetahui data konstanta eliminasi dengan waktu paruh kita

mengtahui bagaimana onbat diekskresikan dalam urin dimana nilai konstanta

eliminasi seharusnya berbanding lurus dengan nilai waktu paruh, dan data yang

diperoleh dri sampel pengujian kelompok kami menunjukan nilai yang jauh

antara konstanta eliminasi dengan waktu paruh. Ini mungkin disebabkan karena

obat siprofloksasin banyak dimetabolisme oleh ginjal sehingga obat

siprofloksasin tidak terekskresikan dengan sempurna.

VII.

Kesimpulan

Dari serangkaian pengujian ekskresi urin didapatkan kesimpulan ternyata

jumlah obat yang diekskresikan dalam urin pada sukarelawan tidak sama dengan

jumlah obat yang diabsorpsi karena nilai yang didapat yaitu nilai konstanta

eliminasi dan nilai waktu paruh tidak memenuhi persyaratan yang ditentukan yaitu

harus berbanding lurus, dimana konstanta eliminasi dan waktu paruh merupakan

parameter yang biasa digunakan untuk menghitung jumlah eliminasi obat dalam

urin.


15/15

DAFTAR PUSTAKA

Karmana, Oman. 2007. Cerdas Belajar Biologi. Grafindo Media Pratama, Jakarta.

Kurniati, Tuti dkk. 2009.Zoologi Vertebrata. Universitas Islam Negeri Sunan Gunung Djati,

Bandung.

Leon Shargel, Andrew B. C. Yu, 1988,Biofarmasetika dan Farmakokinetika Terapan Edisi

Kedua, Alih bahasa; Fasich & Siti Sjamsiah, Airlangga University Press, Surabaya.

Poedjiadi, A., Suryati, FMT. 2005.Dasar-Dasar Biokimia. UI-Press. Jakarta.

laporan biofar-farkin modul 4 eksresi urin

Documents