isolasi&pemindahan kultur

8/18/2019 Isolasi&Pemindahan Kultur

1/14

1. PENDAHULUAN

1.1 Tinjauan pustaka

Isolasi adalah suatu cara untuk memisahkan satu mikroba dari mikrobia lainnya dengantujuan untuk mendapatkan spesies tunggal dengan sifat – sifat yang kita inginkan. Isolasi

dilakukan agar dapat mengidentifikasi suatu mikrobia spesies tunggal yang didasarkan

pada morfologi, sifat biakan dan sifat biokimiawinya. Dasar dari isolasi ini adalah bahwa

mikrobia yang berbeda sifat genetiknya akan membentuk koloni dengan karakter yang

berbeda ukuran, bentuk, tekstur, warna, dan sifat penampakan yang lain ( ay, 1!!" #.

Isolasi merupakan metoda untuk memisahkan mikroorganisme dalam medium menjadi

sel yang indi$idu yang disiapkan untuk mendapatkan spesies tunggal. Tujuan isolasi

untuk memisahkan suatu mikroba dengan mikroba lainnya dengan tujuan untuk

mendapatkan spesies tunggal dengan sifat%sifat yang diinginkan. Isolasi dapat dilakukan

dengan menggoreskan suspensi campuran sel pada suatu media padat dalam cawan petri

dan kemudian menginkubasikan (&tlas, 1!'"#.

rinsip percobaan isolasi dimulai dengan membuat suspensi bahan sebagai sumber

mikrobia. alu suspensi tersebut dituangkan atau digoreskan (dengan menggunakan

jarum ose steril# pada media yang sebelumnya telah disediakan terlebih dahulu

()adioetomo, 1!!*#. rinsip dasar dari isolasi yaitu mikrobia yang berbeda sifat

genetiknya akan membentuk koloni dengan karakter yang berbeda%beda pula, meliputi

ukuran, bentuk, warna, tekstur, bentuk koloni, permukaan, dan ele$asi (+anclea$e, 1!!1#.

Tujuan dari isolasi untuk memisahkan suatu mikroba dengan mikroba lainnya untuk

mendapatkan spesies tunggal dengan sifat%sifat yang diinginkan. Isolasi bertujuan untuk

memisahkan suatu mikroba dengan mikroba lainnya dengan tujuan untuk mendapatkan

spesies tunggal dengan sifat%sifat yang diinginkan. Isolasi dapat dilakukan dengan

menggoreskan suspensi campuran sel pada suatu media padat dalam cawan petri ,

kemudian menginkubasikannya ()adioetomo, 1!!*#.


2/14

engisolasi dan mengidentifikasi suatu jenis mikroorganisme dari suatu spesimen

tertentu merupakan masalah praktis dalam praktek teknis mikrobiologi. Dalam pengertian

mikrobiologi secara umum, mengisolasi artinya memisahkan suatu spesies

mikroorganisme tertentu dari organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, lalu

ditumbuhkan menjadi biakan murni. -iakan murni ialah biakan yang sel%selnya berasal

dari pembelahan satu sel tunggal. engisolasian untuk mendapatkan biakan murni ini

diperlukan, karena semua metode mikrobiologis yang digunakan untuk menelaah dan

mengidentifikasi mikroorganisme, termasuk penelaahan ciri%ciri kultural, morfologis,

fisiologis, maupun serologis, memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam

mikroorganisme saja ()adioetomo, 1!!*#.

ada saat memindahkan suatu biakan mikroba harus diperhatikan jangan sampai terjadi

kontaminasi oleh organisme yang tidak dikehendaki dalam biakan murni yang akan

dibuat. ikroorganisme yang tidak dikehendaki dapat masuk melalui kontak langsung

dengan permukaan atau tangan yang kotor. leh karena itu sebelum melakukan

pemindahan kultur kita diharapkan untuk menciptakan lingkungan yang aseptis. &pabila

mikroba yang tidak diharapkan masuk ke dalam kultur murni maka kultur murni tersebut

akan tercemar. Identitas biakan mikrobiologi diartikan sebagai pemindahan kultur ke

biakan segar tanpa terjadi pencemaran oleh mikroorganisme yang tidak diinginkan (ay,

1!!"#.

Tujuan dari pemerataan suspensi media dengan spatel agar mikrobia dapat tumbuh

membentuk koloni secara rata dengan bentuk yang wajar sehingga mudah diamati dan

dipelajari sifat%sifatnya ()adioetomo, 1!!*#. ikrobia yang berbeda sifat genetiknya

akan membentuk koloni dengan sifat yang berbeda. /ifat%sifat tersebut antara lain bentuk,

ukuran, warna, tekstur, permukaan dan beberapa sifat lain yang tampak (ay, 1!!"#.

edium yang telah dibuat digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme atau dengan

istilah lain adalah untuk mengkulturkan. Tujuan mengkulturkan adalah untuk

mempelajari suatu kultur mikroorganisme tertentu. Dalam studi atau mempelajari

mikroorganisme, maka diperlukan tiga langkah yang meliputi enumerasi, isolasi dan


3/14

determinasi atau identifikasi, dan langkah terakhir disini merupakan cara untuk

mengetahui ciri pertumbuhan yang bisa juga dijumpai dalam makanan sehari%hari. /alah

satu tahap yang perlu diperhatikan adalah enumerasi atau perhitungan jumlah

mikroorganisme baik secara langsung maupun tak langsung. /ebelum digunakan untuk

studi yang meliputi beberapa tahap tersebut, namun pertama%tama harus melakukan

pemindahan kultur mikroorganisme ke dalam medium yang telah dibuat sebelumnya.

(Trihendrokesowo.1!'!#

Teknik atau cara pemindahan kultur dari sumbernya ke dalam medium yang telah

disiapkan, yaitu 0

&. Teknik Spread Plate

Dapat dilakukan dalam tabung reaksi, caranya 0

Dengan menggunakan ose mengambil kultur mikroorganisme dari dalam sumber

mikroorganisme yang telah disiapkan dengan cara menggoreskan atau

mencelupkan ose ke dalam sumber mikroorganisme tersebut secara aseptis (ose

dipanaskan di atas bunsen sampai memerah lalu panaskan pula mulut tempat

sumber mikroorganisme itu berada#.

se digoreskan di dalam tabung reaksi dari bawah ke atas secara 2ig 2ag (secara

aseptis atau dengan memanaskan mulut tabung reaksi sebelumnya#. Tabung reaksi tersebut ditutup dengan kapas berlemak yang telah dibungkus

dengan kain kasa sebelumnya, setelah selesai ose dipanaskan lagi diatas bunsen.

Dapat pula dilakukan di dalam petridish, caranya 0

Dengan menggunakan ose mengambil kultur mikroorganisme dari dalam sumber

mikroorganisme yang telah disiapkan dengan cara menggoreskan atau

mencelupkan ose ke dalam sumber mikroorganisme tersebut secara aseptis (ose

dipanaskan di atas bunsen sampai memerah lalu panaskan pula mulut tempat

sumber mikroorganisme itu berada#.

se digoreskan di dalam petridish secara 2ig 2ag sehingga makin lama goresan

akan makin menipis (secara aseptis atau dengan memanaskan tepi petridish

sebelumnya#.

etridish tersebut ditutup, setelah selesai ose dipanaskan lagi diatas bunsen.


4/14

-. Teknik Pour Plate

&da dua metode yang dapat dilakukan di dalam penggunaaan teknik ini.

etode pertama yaitu 0

edium padat yang telah disiapkan dalam tabung reaksi dicairkan kembali

sampai suhunya "334.

Dengan menggunakan mikro pipet untuk mengambil mikroorganisme di dalam

sumber mikroorganisme yang telah disiapkan (secara aseptis#.

ikroorganisme yang telah diambil diteteskan ke dalam tabung reaksi yang berisi

medium yang telah dicairkan.

edium di dalam tabung reaksi digulung%gulung dalam posisi tegak untuk

menghomogenkan medium dan mikroorganisme, kemudian dituangkan ke dalam

petridish sambil diputar%putar agar medium dan mikroorganisme tersebut

menempati seluruh dasar petridish (secara aseptis#.

etode kedua, yaitu 0

edium padat yang telah disiapkan dalam tabung reaksi dicairkan kembali

sampai suhunya "334.

Dengan menggunakan pipet untuk mengambil mikroorganisme di dalam sumber

mikroorganisme yang telah disiapkan (secara aseptis#.

edium yang telah dicairkan tadi dituang ke dalam petridish (secara aseptis#.

ikroorganisme yang telah diambil diteteskan ke dalam petridish yang berisi

medium yang telah dicairkan (secara aseptis#.

etridish sambil diputar%putar agar medium dan mikroorganisme tersebut menjadi

homogen.

Dalam teknik ini medium dicairkan kembali sampai suhu "334, karena bila lebih dari

"334 maka akan meyebabkan kematian atau kerusakan sel mikroorganisme dan akan

menyebabkan kondensasi yang berlebihan pada petridish setelah agar memadat.4. Teknik Titik atau John Pite

edium disiapkan di dalam petridish.

ikroorganisme diambil dengan menggunakan jarum dari sumber

mikroorganisme yang telah disiapkan.


5/14

5arum yang telah mengandung mikroorganisme itu dititikkan ke dalam petridish

yang berisi medium.

D. Teknik Thin Layer Plates

ikroorganisme dari sumber mikroorganisme yang telah disiapkan diambil

dengan ose (secara aseptis#.

ikroorganisme pada ose tersebut dimasukkan ke dalam medium cair lalu

dikocok agar homogen.

4ampuran medium cair dan mikroorganisme tersebut dituangkan ke dalam

medium agar yang sudah memadat.

6. Teknik Layered Plates

ikroorganisme dari sumber mikroorganisme yang telah disiapkan diambil

dengan ose (secara aseptis#.

ikroorganisme pada ose tersebut dimasukkan ke dalam medium cair lalu

dikocok agar homogen.

4ampuran medium cair dan mikroorganisme tersebut dituangkan ke dalam

medium agar yang sudah memadat, namun ditambahkan satu lagi lapisan tipis

sampel yang sudah bercampur dengan medium cair.

(7ardia2, 1!!8#.

enurut ay (1!!"# bahwa, pada saat mengambil mikroba dari media padat yang telah

ditumbuhi mikroorganisme, ose tidak boleh menggores permukaan media terlalu keras.

)al ini penting untuk diperhatikan supaya media tidak ikut terambil dan tidak mengalami

kesulitan pada saat menghitung jumlah mikrobanya. Teknik penggoresan pada agar atau

media padat dilakukan dengan satu kali gerakan yang makin lama goresannya makin tipis

sehingga didapat hasil goresan garis yang berlikuk%likuk (seperti ular# dan semua

permukaannya dapat ditumbuhi mikroorganisme.

ertumbuhan mikroba hanya dimungkinkan apabila kondisi fisik dan kimiawi

lingkungannya sesuai. 9ondisi fisik contohnya suhu dan struktur bahan. /edangkan

kondisi kimiawi untuk pertumbuhan ditentukan oleh komponen yang menyusun media


6/14

pertumbuhan seperti air, sumber karbon, sumber energi, sumber nitrogen, mineral, faktor

pertumbuhan, maupun konsentrasi ion hidrogen (p)# ()adioetomo, 1!!*#.

9apang adalah fungi multiseluler yang mempunyai filamen dan pertumbuhannya pada

makanan mudah dilihat karena penampakannya yang beserabut seperti kapas.

ertumbuhannya mula%mula berwarna putih, tetapi jika spora telah timbul akan terbentuk

berbagai warna tergantung dari jenis kapang (7ardia2, 1!!8#.

1.8 Tujuan praktikum

Tujuan praktikum ini adalah mengetahui cara melakukan isolasi yang benar. engetahui

kultur mikroba. engetahui cara pembiakan mikroba dalam media. engetahui bentuk%

bentuk pertumbuhan mikroba pada media.

2. MATE! DAN MET"DA

8.1 &T6:I

8.1.1 &lat

eralatan yang dibutuhkan dalam praktikum ini adalah jarum ose, bunsen, tabung reaksi

dan inkubator.

8.1.8 -ahan

-ahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah ;&, D&,


7/14

>ntuk kelompok 1 dan 8 memindahkan kultur -acillus /ubtilis pada media ;& yang

telah disterilkan. >ntuk kelompok * dan " memindahkan kultur Aspergillus Niger pada

media D& yang telah disterilkan. >ntuk kelompok ? dan @ memindahkan kultur

Saccaromyses cerevisiae pada media


8/14

4@ 5amur pada

roti

1. utih

8. utih keruh

*. )ijau

/eperti beludru

*.8 emindahan 9ultur

9elompok )ari

ke%

5enis


9/14

8 1.tabung reaksi

8.media D&, Aarna 0

putih kekuningan ada

bintik hitam

*.&spergillus niger

" 3 A. niger 1.Tabung reaksi

8.edia D&, Aarna 0


bintik putih

". &spergillus ;iger

8 1.Tabung reaksi

8.edia D&, Aarna 0


bintik putih

*. 0 &spergillus ;iger

? 3 Saccaromyses

cerevisiae

1.Tabung reaksi

8.edia 6&, Aarna 0


endapan putih*. 6ndapan putih

8 1.Tabung reaksi

8.edia 6&, Aarna 0


endapan putih

*.6ndapan putih@ 3 Saccaromyses

cerevisiae

1.Tabung reaksi

8.edia


10/14

8 1.Tabung reaksi

8.edia ntuk

mengetahui jenis mikroorganisme yang hidup dalam bahan pangan dapat dilakukan

isolasi mikrobia, dengan cara menggoreskan suspensi campuran sel pada suatu media

padat di dalam cawan petri kemudian menginkubasikannya, sehingga setiap sel akan

tumbuh membentuk koloni dan memudahkan untuk memisahkannya (4appuccino B

/herman, 1!'*#.

emindahan kultur merupakan suatu cara untuk memindahkan kultur yang telah dibiakan

ke media lain. erpindahan kultur ini bertujuan untuk mendapatkan biakan murni. &da

terdapat dua jenis kultur yaitu 0 kultur murni yang terdiri dari satu macam spesiessedangkan kultur campuran terdiri dari spesies yang campuran (elc2ar, 1!?'#. ada

praktikum mikroorganisme yang digunakan untuk perpindahan kultur adalah Bacillus

Subtilis, Aspergillus Niger, dan Saccaromyses cerevisiae. /edangkan media yang kami

guanakan adalah ;& untuk Bacillus Subtilis, D& untuk Aspergillus Niges, dan


11/14

karena itu pada saat melakukan pemindahan kultur dan hal%hal yang berhubungan dengan

mikroorganisme harus dilakukan dalam lingkungan yang aseptis.

ada percobaan pemindahan kultur, ketika melakukan goresan untuk mengambil kultur

bakteri dari biakan dengan menggunaan ose, goresan tidak boleh dilakukan dengan kasar,

ose hanya boleh digoreskan secara halus dan mengambang di atas kultur, dan tidak boleh

menggores media agar. edia yang ikut dalam goresan, nantinya justru akan mempersulit

pengamatan. /elain itu, dalam melakukan goresan ini, gerakan menggores yang

dilakukan harus berasal dari ujung dan bergerak secara merata ke seluruh bagian media

sampai di bagian ujung luar.


12/14

faktor pertumbuhan, dan konsentrasi ion hidrogen atau disebut dengan p) ()adioetomo,

1!!*#.

ikroorganisme yang menunjukkan ciri%ciri warna hitam keputihan dan hijau lumut

keputihan, bentuk koloninya bulatan kecil%kecil yang menggerombol, bentuk

permukaannya halus seperti beludru, dengan ele$asi flat , dan tekstur halus dan kering,

tumbuh pada media roti (kelompok 8,*,",?#, menunjukkan adanya jamur yang

mengkontaminasi bahan pangan tersebut. 5amur tersebut termasuk dalam golongan

Aspergillus sp, yang merupakan kelompok mikroba kapang. &danya hifa dan konidia tipe

radial merupakan ciri%ciri adanya dan warna hijau, merupakan bukti adanya Aspergillus

flavus. /edangkan warna hitam menunjukkan tumbuhnya jamur Aspergillus niger.

(7ardia2, 1!!'#.

-erdasarkan ciri%ciri di atas, dapat dikatakan bahwa mikroorganisme yang berwarna putih

keruh, bentuk koloninya bulat, bentuk permukaannya halus dengan permukaan kasar

pada bagian yang tumbuh koloni, ele$asinya convex atau flat, dan teksturnya basah atau

kasar seperti lendir, dan tumbuh pada roti merupakan indikasi adanya bakteri pada bahan

pangan roti yang sudah membusuk ini. &danya perbedaan ele$asi yang terlihat, mungkin

disebabkan karena adanya kesalahan praktikan ketika memandang ele$asi dari koloni

yang ditumbuhkan pada media agar miring. enurut elc2ar B :eid (1!?'#, beberapa

ciri fisik yang dapat diamati dalam isolasi pada agar plate meliputi tekstur (kering C

keras C seperti mentega C seperti lendir#, bentuk ( punctiform / circular / filamentous /

irreguler/ rhizoid / spindle#, ele$asi ( flat / raised / convex / pulvinate / umbonate#, dan

bentuk permukaan (entire / undunate / lobate /erose / filamentous / curled #.

ikroorganisme yang terdapat pada roti termasuk golongan &spergilus. 9arena

&spergilus merupakan mikroorganisme yang dapat dengan baik tumbuh pada media yang

banyak mengandung kandungan pektin di mana pektin banyak terdapat dalam pati yang

merupakan golongan polisakarida. Di mana roti yang merupakan bahan praktikum yang

kami pakai merupakan media yang memiliki kandungan pektin. /esuai dengan dean

(1!'!# yang mengatakan bahwa jamur sering dijumpai pada roti karena roti memiliki


13/14

kandungan pektin yang banyak yang merupakan media yang sangat baik untuk

pertumbuhan jamur dan jamur yang sering dijumpai adalah dari golongan &spergilus.

'. (ES!MPULAN

Isolasi mikroorganisme dalam bahan pangan bertujuan untuk memisahkan suatu

mikroorganisme dari mikroorganisme yang lain.

emasukkan jarum ose yang masih panas dapat menyebabkan mikroba mati.

rinsip dasar dari isolasi yaitu mikrobia yang berbeda sifat genetiknya akan

membentuk koloni dengan karakter yang berbeda%beda pula, meliputi ukuran, bentuk,

warna, tekstur, bentuk koloni, permukaan, dan ele$asi.

Tujuan dari isolasi untuk memisahkan suatu mikroba dengan mikroba lainnya untuk

mendapatkan spesies tunggal dengan sifat%sifat yang diinginkan.

Isolasi merupakan cara untuk memisahkan mikroorganisme untuk mendapatkan

spesies tunggal.

ertumbuhan mikroorganisme dipengaruhi oleh 0 air, sumber karbon, sumber energi,

sumber nitrogen, mineral, faktor pertumbuhan, dan konsentrasi ion hidrogen atau

disebut dengan p).

). DA*TA PUSTA(A

&tlas, :.. (1!'"#. icrobiology0 7undamentals and &pplications. acillan

ublishing 4ompany. ;ew =ork.

de an, 5.. (1!'!#. 9imia akanan. IT-. -andung

4appuccino, 5.


14/14

ay, -. A. (1!!"#. &nalisis ikroba dalam aboratorium. T :aja ni$ersitas angan dan

isolasi&pemindahan kultur

Documents