kromatografi kolo1

7/24/2019 KROMATOGRAFI KOLO1

1/6

~KROMATOGRAFI KOLOM~

Rate This

PERCOBAAN III

KROMATOGRAFI KOLOM

1. I. TUJUAN PRAKTIKUM

Memisahkan pigmen dalam berbagai sampel daun dengan kromatografi kolom.

1. II. TINJAUAN PUSTAKA

Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran yang berdasarkan kecepatan perambatan

komponen dalam medium tertentu. Uraian mengenai kromatografi pertama kali dijelaskan

oleh Michael Tswett, seorang ahli biotani Rusia yang bekerja di Uniersitas !arsawa "ada

saat itu, Michael Tswett melakukan pemisahan klorofil dari pigmen# pigmen lain dari ekstrak

tanaman menggunakan kromatografi kolom yang berisi dengan kalsium karbonat. "ada

kromatografi, komponen# komponen yang akan dipisahkan berada diantara dua fase yaitu

fase diam $stationary% dan fase bergerak $ mobile%. &ase diam adalah fase yang akan

menahan komponen campuran sedangkan fase gerak adalah fase yang akan melarutkan 'at

komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal atau

tidak bergerak sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akan bergerak lebih

cepat $ (udarmadji, )**+ %.

Kromatografi kolom bertujuan untuk purifikasi dan isolasi komponen dari suatu

campurannya. Metode pembuatan kolom terbagi menjadi ) yaitu untuk metode kering, kolom

pertama diisi dengan kering fase diam bubuk, diikuti dengan penambahan fase mobile.

Metode basah, sebuah bubur disiapkan dari eluent dengan fase diam bubuk dan kemudian

dengan hati#hati dituangkan ke dalam kolom. apisan ini biasanya ditutupi dengan lapisan

pasir kecil atau dengan kapas atau wol kaca untuk melindungi bentuk lapisan organik dari

kecepatan baru ditambahkan eluent. -luent perlahan#lahan melewati kolom untuk memajukan

bahan organik $Roy, 11%.

(ebagian besar prinsip pemisahan kromatografi kolom didasarkan pada afinitas kepolarananalite dengan fase diam, sedangkan fase gerak selalu memiliki kepolaran yang berbeda


2/6

dengan fase diam. "ada sebagian besar kromatografi kolom menggunakan fase diam yang

bersifat polar dengan fase gerak yang non#polar dengan begitu waktu retensi akan menjadi

lebih singkat. (emakin cepat pergerakan fase gerak akan meminimalkan waktu yang

diperlukan untuk bergerak di sepanjang kolom. aju aliran kolom dapat ditingkatkan dengan

memperluas aliran eluent di dalam kolom dengan mengisi fase diam pada bagian bawah atau

dikurangi dengan mengontrol keran. aju aliran yang lebih baik dapat dicapai denganmenggunakan pompa atau dengan menggunakan gas dengan kompresi $misalnya

udara,nitrogen, argon% untuk mendorong pelarut melalui kolom.

Kolomnya $tabung gelas% diisi dengan bahan seperti alumina, silika gel atau pati yang

dicampur dengan adsorben, dan pastanya diisikan kedalam kolom. arutan sampel kemudian

diisikan kedalam kolom dari atas sehingga sampel diasorbsi oleh adsorben. Kemudian pelarut

$fasa mobil/ pembawa% ditambahkan tetes demi tetes dari atas kolom. "artisi 'at terlarut

berlangsung di pelarut yang turun ke bawah $fasa mobil% dan pelarut yang teradsorbsi oleh

adsorben $fasa stationer%. (elama perjalanan turun, 'at terlarut akan mengalami proses

adsorpsi dan partisi berulang#ulang. aju penurunan berbeda untuk masing#masing 'at

terlarut dan bergantung pada koefisien partisi masing#masing 'at terlarut $(astrohamidjojo,

)**0%.

Keuntungan kromatografi kolom yaitu dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi

preparatie, digunakan unruk menentukan jumlah komponen campuran digunakan untuk

memisahkan dan purifikasi substansi. Kerugian kromatografi kolom yaitu untuk

mempersiapkan kolom dibutuhkan kemampuan teknik dan manual, metode ini sangat

membutuhkan waktu yang lama $time consuming% $Rahman, )**%.

https22dcycheesadonna.wordpress.com2)*1)21)2102kromatografi#kolom2

1. III. ALAT DAN BAHAN

). A. Alat

3lat#alat yang digunakan pada praktikum kali ini adalah

1. 4uret

). 5elas piala

6. 5elas ukur

7. Kertas !hatman 8o.7)

0. ampu U9


3/6

:. 8eraca analitik

+. "enggaris

;. "ensil

. "ipa kapiler

1*. Ruang pengembang

11. B. Bahan

4ahan#bahan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah

1. 3seton n#heksan

).


4/6

6. (etelah itu elusi dengan menambahkan larutan n#heksana.

7. Menampung hasil elusi di dalam ial.

0. Kemudian mengujinya dengan KT.

:. Mengamati jenis pigmen apa saja yang terdapat dalam tiap fraksi.

1. V. HASIL DAN PEMBAHASAN

1. A. Ha!l Per(#)aan

N# Pen%a$atan Ha!l Ga$)ar

1.

).

(ilika = timbang 0 gr = oen

=gelas piala = aduk dengan

pelarut = membuat kolom

-kstrak sampel padat =larutkan dengan n#heksana#

aseton $+6%= masukkan

kolom= elusi dengan n#

heksana = tampung eluat

4entuk lumpuran

berwarna putih


5/6

6.

Uji KT

1. B. Pe$)ahaan

"raktikum kali ini yaitu tentang kromatografi kolom yang bertujuan untuk memisahkan

pigmen dalam berbagai sampel daun . "ada praktikum kali ini sampel daun yang digunakan

yaitu daun mangga yang pada praktikum sebelumnya telah dilakukan uji KT.

"ada praktikum kali ini pertama yaitu menyiapkan kolom yang akan digunakan untuk

pemisahan pigmen tersebut. Menimbang silica sebanyak 1* gram, kemudian sebagian silika

di larutkan dengan pelarut n#heksana sampai terbentuk lumpuran. (etelah itu masukkan silika

atau lumpuran silika tersebut kedalam buret yang sebelumnya buret tersebut sudah disumbat

dengan kapas pada bagian ujungnya. Ketuk#ketuk bagian dinding buret agar lumpuran

tersebut tertata rapi atau padat hingga tidak ada udara yang menempati kolom tersebut dan

bagian krannya dibiarkan terbuka agar larutannya keluar. (ebelum ekstrak dimasukkan,terlebih dahulu di larutkan dengan n#heksana aseton $+6% hingga larut, masukkan larutan

ekstrak tersebut ke dalam kolom yang sudah disiapkan tadi kemudian di elusi dengan larutan

n#heksana, dan fraksi#fraksinya ditampung dalam ial. &raksi yang diperoleh tersebut

kemudian di uji dengan KT, mengamati jenis pigmen apa saja yang terdapat pada tiap fraksi

yang didapat.

>asil yang didapat pada uji KT pada fraksi tersebut tidak ada spot yang terlihat pada lampu

U9. Kemungkinan kesalahan ini terjadi pada pemilihan pelarut dan sampel yang sebelumnya

telah dimaserasi dengan larutan tertentu. Mengingat pada prinsip kepolaran antara fase diam

dan fase gerak pada kromatografi, sehingga kemungkinan hasil yang didapat pada praktikum

kali ini karena factor tersebut. (elain itu, pada melarutkan silika memakan waktu yang terlalulama, silika yang dibuat terlalu tinggi sehingga pada praktikum ini memakan waktu yang

lama untuk mengeluarkan pelarutnya sampai kolom terbentuk sempurna. -lusi yang

dilakukan seharusnya ada beberapa pelarut, tapi karena alasan terbatasnya waktu dan

ketinggian kolom tersebut maka hanya bisa dengan pelarut n#heksana.

1. VI. KESIMPULAN

Kesimpulan yang diperoleh dari praktikum kali ini yaitu sebagai berikut

1. Kromatografi kolom yaitu purifikasi atau isolasi senyawa campuran.


6/6

). "ada pelarut n#heksan tidak terdapat spot mungkin karena kesalahan praktikan yang

tidak teliti dalam pengerjaan.

kromatografi kolo1

Documents