kel 09-kromatografi
TRANSCRIPT
![Page 1: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/1.jpg)
Kromatografi Gas-Cair(Gas-Liquid Chromatography)
![Page 2: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/2.jpg)
Kromatografi DEFINISI Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran
didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen-komponen campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase gerak.
![Page 3: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/3.jpg)
Fasa Gerak
Fasa Diam
Kromatografi
Padat GelPertukaran Ion
Gas Cair
Plat Kolom Anion
Cair Cair
GPCKation
![Page 4: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/4.jpg)
Jenis-Jenis Kromatografi Berdasarkan fase gerak yang digunakan, kromatografi
dibedakan menjadi dua golongan besar yaitu gas chromatography dan liquid chromatography. Masing-masing golongan dapat dibagi lagi seperti yang telah disebutkan pada definisi di atas.
![Page 5: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/5.jpg)
Kromatografi di dalam bentuk tempat
Komatografi Kolom : Kromatografi kolom merupakan teknik pemisahan di mana tempat stasioner dalam tabung.
Kromatografi Planar Kromatografi Kertas Kromatografi Lapisan Tipis
![Page 6: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/6.jpg)
Gas ChromatographyDigunakan untuk menentukan komposisi kimia zat-zat yang tidak diketahui, seperti senyawa berbeda dalam bensin yang ditunjukkan oleh tiap-tiap puncak dalam grafik di bawah ini.
Paper ChromatographyDapat digunakan untuk memisahkan komponen-komponen tinta, pewarna, senyawa tumbuhan (klorofil), make-up, dan banyak zat lain
Liquid Chromatographydigunakan untuk identifikasi pigmen tumbuhan atau komponen lain
Thin-Layer ChromatographyMenggunakan lapisan tipis atau gelas kaca untuk memisahkan komponen kimia dan bahan lainnya
Contoh Chromatography
![Page 7: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/7.jpg)
Kromatografi Gas-Cair
![Page 8: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/8.jpg)
Proses Kromatografi
Pembawa gas Detektor Kolom Flow Controller Sampel Injeksi
![Page 9: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/10.jpg)
GLC sebagai komatografi tak dieal linear
Disebut grafik isotermal
![Page 11: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/11.jpg)
Koefisien distribusi Suatu tetapan tanpa dimensi, K yang diperoleh dari
hukum Henry dengan menggantikan tekanan parsial dan fraksi mol suatu zat terlarut dengan dua suku konsentrasi yang sama satuannya.
![Page 12: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/12.jpg)
Kesetimbangan dalam perpindahan massa
Suatu faktor pelebaran pita dalam kromatografi yang disebakan oleh terhingganya waktu yang diperlukan oleh suatu zat terlarut untuk keseimbangan
Dapat dituliskan dari hukum Henry
Cl=KCg .... (1)
![Page 13: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/13.jpg)
Resolusi Disebut separation Dua zat terlarut yang didasarkan pada waktu-waktu
retensi dan lebar pita
![Page 14: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/14.jpg)
Aspek-aspek percobaan glc Gas Pembawa (Pengemban) Sistem Pengambilan Sampel Jenis-jenis Detektor : - Konduktivitas Termal
- Pengionan Nyala Karakteristik Detektor : - Detektor Integral
- Detektor Diferensial
- Kepekaan - Stabilitas
- Kelinieran
- Keserbagunaan
- Waktu Respons Kolom : - Kolom Isian
- Kolom Kapiler - Pemilihan Fasa Cair
![Page 15: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/15.jpg)
Gas pembawa Gas yang telah digunakan dalam GLC : Hidrogen, helium,
nitrogen, argon, karbon dioksida, dan uap air. Gas pembawa yang cocok bergantung pada karakteristik
detektor tersebut. Gas hidrogen dan helium digunakan pada detektor
kinduktivitas termal sedangkan nitrogen digunakan pada detektor pengionan nyala.
![Page 16: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/16.jpg)
Sistem pengambilan sampel Sampel-sampel cair : diinjeksikan melalui suatu karet
septum dengan memakai suntikan syringe. Sampel-sampel gas : diinjeksikan atau dimasukkan dengan
memakai bermacam-macam alat pengambilan sampel gas yang dirancang untuk kromatograf komersial
![Page 17: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/17.jpg)
kolom Kolom Kapiler
- Merupakan tabung yang panjang dan tipis dari kaca atau bahan lainnya seperti baja tahan karat. - Hanya dapat menangani sampel-sampel yang sangat kecil, dan penggunaannya secara luas menunggu pengembangan detektor yang sangat sensitif.
Kolom Isian Fasa stasioner dalam GLC adalah cairan, tetapi cairan itu tidak boleh dibiarkan bergerak-gerak di dalam tabung. Cairan tersebut harus diimobilisasi, biasanya dalam bentuk suatu lapisan tipis dengan luas permukaan besar. Ini paling lazim dilakukan dengan mengimpregnasi suatu bahan padat dengan fase cair kolom diisi.
![Page 18: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/18.jpg)
Kolom … (2) Pemilihan fasa cair
- Fasa cair stasioner harus dipilih dengan mempertimbangkan masalah pemisahan tertentu. - Fasa cair harus stabil secara termal pada temperatur kolom (kecuali dalam kasus-kasus khusus), tidak bereaksi secara kimia dengan komponen-komponen sampel, memiliki daya pelarut yang cukup untuk sampel.
![Page 19: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/19.jpg)
Karakteristik detektor
Detektor Integral
Memberikan suatu pengukuran setiap saat dari jumlah total bahan yang dielusi yang telah melewatinya sampai waktu itu.
Detektor Diferensial
Menghasilkan kromatogram familiar yang terdiri dari puncak-puncak dan bukan langkah-langkah.
Dibagi menjadi 2 kelas besar :
- detektor yang mengukur konsentrasi zat terlarut dengan memakai beberapa sifat fisika dari aliran gas buangan
- detektor yang merespons secara langsung zat terlarut dengan demikian berarti mengukur laju alir massanya.
![Page 20: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/20.jpg)
Karakteristik detektor … (2)
Kromatogram yang diperoleh dengan detektor Integral
Kromatogram yang diperoleh dengan detektor diferensial
![Page 21: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/21.jpg)
Karakteristik detektor …. (3)
KepekaanKepekaan detektor menunjukkan suatu batasan yang paling penting pada jumlah zat terlarut yang paling kecil yang dapat ditentukan dengan GLC
Rumus umum untuk kepekaan :
Stabilitas
Garis dasar suatu kromatogram dimaksudkan untuk fluktuasi jangka pendek dari suatu sifat yang sangat acak yang disebut noise.
Noise dapat dihubungkan dengan kepekaan, tingkat noise dan batas deteksi. Hubungan antara kepekaan, tingkat noise, dan batas deteksi dapat dirumuskan sebagai berikut. Mengingat kembali definisi kepekaan
Jika menggabungkan batas deteksi, Qo, dengan dua kali tingkat noise puncak ke puncak, 2Rn, maka kita bisa tulis
atau
![Page 22: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/22.jpg)
Karakteristik detektor … (3) Keserbagunaan Waktu Respons
Waktu respons keseluruhan untuk suatu kromatograf adalah fungsi bukan hanya dari detektor itu sendiri, tetapi juga kelembaman komponen-komponen lain. Misalnya perekam.
Kelinieran
![Page 23: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/23.jpg)
Jenis-jenis detektor Detektor Konduktivitas Termal - Detektor yang banyak digunakan untuk GLC. Alat ini
mengandung : filamen logam yang dipanaskan maupun suatu termistor.
- Gas pembawanya adalah hidrogen dan helium
- Detektor ini relatif sederhana, tidak mahal, memiliki kepekaan yang cukup bagi banyak kegunaan
![Page 24: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/24.jpg)
Jenis-jenis detektor …. (2)
Detektor Pengionan Nyala
Prinsip dasar :
1. Energi kalor dalam hidrogen menyebabkan banyak molekul untuk mengionisasi
2. Gas efluen dari kolom dicampur dengan hidrogen dan dibakar pada ujung jet logam dalam udara berlebih.
3. Potensial diberikan antara jet dan elektroda kedua yang bertempat di atas atau sekitar nyala itu.
4. Ketika ion-ion dibentuk dalam nyala, ruang gas antara kedua elektroda menjadi lebih konduktif, dan arus yang meningkat mengalir dalam sirkuit.
5. Arus melewati resistor, tegangan terbentuk yang dikuatkan untuk menghasilkan isyarat yang diterima perekam.
![Page 25: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/25.jpg)
Jenis-jenis detektor … (3)
Gambar Detektor Pengionan Nyala
![Page 26: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/26.jpg)
Penerapan glc Identifikasi Senyawa Keserbagunaan GLC Pirolisis Kromatografi Gas Analisis Kuantitatif
Bergantung pada hubungan antara jumlah suatu zat terlarut dan
ukuran dari pita elusi yang dihasilkan.
![Page 27: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/27.jpg)
Kromatografi Cair
![Page 28: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/28.jpg)
Kromatografi Cair
Kromatografi adalah kromatografi dengan fasa gerak berupa zat cair.
![Page 29: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/29.jpg)
PROSES-PROSES DISTRIBUSI FASA
Adsorpsi
Pertukaran Ion
Partisi Cair - Cair
![Page 30: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/30.jpg)
ADSORPSI Adsorpsi adalah proses pemisahan bahan dari suatu
campuran dengan cara pengikatan bahan tersebut pada seluruh bagian adsorben cair yang diikuti dengan pelarutan.
![Page 31: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/32.jpg)
Contoh
Pemisahan ionNa+, NH4
+, K+, Mg2+ dan Ca2+
Resin-SO3-H+ + Na+, NH4
+, K+, Mg2+, Ca2+ Resin-SO↔ 3-Na+, NH4
+, K+, Mg2+, Ca2+ + H+
![Page 33: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/33.jpg)
ADSORBEN
Persyaratan adsorben : Memiliki daya melarutkan bahan yang akan diabsorpsi
yang sebesar mungkin (kebutuhan akan cairan lebih sedikit, volume alat lebih kecil).
Selektif Memiliki tekanan uap yang rendah Tidak korosif Mempunyai viskositas yang rendah Stabil secara termis Murah
![Page 34: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/34.jpg)
Alat Absorpsi Secara Skematis
![Page 35: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/35.jpg)
Prinsip Pemisahan Ion
Untuk memisahkan sejumlah anion dan kation satu sama lainnya. Anorganik kation dipisahkan pada kolom resin pemisah kation, sementara anorganik anion dipisahkan pada kolom resin pemisah anion.
![Page 36: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/36.jpg)
Resin Pemisah Ion
![Page 37: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/38.jpg)
Partisi Cair - Cair
Teknik ini tergantung pada partisi zat padat diantara dua pelarut yang tidak dapat bercampur salah satu diantaranya bertindak sebagai fasa diam dan yang lainnya sebagai fasa gerak.
![Page 39: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/40.jpg)
Kromatografi Cair-Cair
![Page 41: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/41.jpg)
Kromatografi Cair-Cair Ada dua macam sistem penggunaan dalam
kromatografi cair-cair :
1. kromatografi fasa normal fase gerak non polar ( ex: heksana, isopropil-eter)→ fase diam sangat polar (ex: air)→
digunakan untuk memisahkan senyawa polar, sebab senyawa polar akan tertahan lebih lama didalam kolom yang polar, sedangkan senyawa yang non-polar akan keluar lebih awal dari dalam kolom.
![Page 42: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/42.jpg)
2. Kromatografi fasa terbalik
fase gerak polar ( ex: air, metanol)→fase diam non polar (ex: hidrokarbon oktadekana)→
digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa non polar.
![Page 43: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/43.jpg)
Analisa Kualitatif Dasarnya adalah waktu retensi atau volume retensi suatu
senyawa. Membandingkan t atau V senyawa dalam sampel yang
dianalisis dengan t atau V suatu senyawa standar (yang telah diketahui)
![Page 44: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/44.jpg)
Analisis Kuantitatif Metode pengukuran tinggi puncak
Tinggi puncak suatu kromatogram akan sebanding dengan kadar senyawa yang membentuk kromatogram tersebut. Pengukuran tinggi puncak didasarkan pada rumus pengukuran tinggi suatu segitiga, yaitu suatu garis tegak lurus dari titik tengah alas kromatogram sampai dengan perpotongan sisi segitiga kromatogram tersebut.
![Page 45: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/45.jpg)
Analisis Kuantitatif (lanjutan) Metode pengukuran luas puncak
Dapat memberikan hasil yang lebih akurat jika dibandingkan dengan cara pengukuran tinggi puncak. Luas puncak diukur seperti menghitung luas segitiga yaitu :
Rumus tersebut memberikan hasil yang baik jika kromatogramnya berbentuk lancip. Cara lain menggunakan rumus :
![Page 46: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/46.jpg)
Analisis Kuantitatif (lanjutan)
![Page 47: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/47.jpg)
Analisis Kuantitatif (lanjutan) Metode gunting dan timbang
Kromatogram yang telah digambarkan pada kertas digunting sesuai bentuknya, kemudian guntingan-guntingan kertas kromatogram ini ditimbang. Berat dari masing-masing guntingan kromatogram ini akan sebanding dengan kadar senyawa yang membentuk kromatogram tersebut.
![Page 48: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/48.jpg)
Analisis Kuantitatif (lanjutan) Metode Integrator
Integrator adalah peralatan elektronik yang sering dijumpai pada peralatan kromatografi yang modern. Alat ini akan mengubah tanda-tanda listrik dari detektor menjadi suatu gambaran kromatogram sekaligus menghitung luas kromatogram yang dibentuk secara elektronik.
![Page 49: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/49.jpg)
Kromatografi Kertasfase diam kertas serap→
Fase gerak pelarut atau campuran pelarut yang →sesuai.
Jarak relative pada pelarut disebut sebagai nilai Rf. Untuk setiap senyawa berlaku rumus sebagai berikut:
Rf=jarak yang ditempuh oleh senyawa jarak yang ditempuh oleh pelarut
![Page 50: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/50.jpg)
Kromatografi Kertas (lanjutan)
![Page 51: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/51.jpg)
Kromatografi Kertas Dua Arah Digunakan dalam menyelesaikan masalah pemisahan
substansi yang memiliki nilai Rf yang sangat serupa.
Menggunakan dua pelarut yang berbeda
![Page 52: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/52.jpg)
![Page 53: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/53.jpg)
Kromatografi Lapis Tipis Menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina
yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras.
Fase diam Jel silika (atau alumina) atau substansi →yang dapat berpendarflour dalam sinar ultra violet.
Fase gerak pelarut atau campuran pelarut yang →sesuai.
![Page 54: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/54.jpg)
Kromatografi Lapis Tipis (lanjutan)Sebuah garis menggunakan pinsil digambar dekat bagian bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu.
Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana posisi bercak berada.
Menutup gelas kimia untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah penguapan pelarut.
![Page 55: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/55.jpg)
Kromatografi Lapis Tipis (lanjutan)Perhitungan nilai Rf
Nilai Rf untuk setiap warna dihitung dengan rumus sebagai berikut:
Sebagai contoh, jika komponen berwarna merah bergerak dari 1.7 cm dari garis awal, sementara pelarut berjarak 5.0 cm, sehingga nilai Rf untuk komponen berwarna merah menjadi:
![Page 56: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/56.jpg)
Analisis Sampel yang Tidak Berwarna1.Menggunakan pendarflour
Fase diam pada sebuah lempengan lapis tipis seringkali memiliki substansi yang ditambahkan kedalamnya, supaya menghasilkan pendaran flour ketika diberikan sinar ultraviolet (UV).
Pendaran ini ditutupi pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada, meskipun bercak-bercak itu tidak tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Ketika sinar UV diberikan pada lempengan, akan timbul pendaran dari posisi yang berbeda dengan posisi bercak-bercak. Bercak tampak sebagai bidang kecil yang gelap.
![Page 57: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/57.jpg)
Analisis Sampel yang Tidak Berwarna2. Penunjukkan bercak secara kimia
Dalam beberapa kasus, dimungkinkan untuk membuat bercak-bercak
menjadi tampak dengan jalan mereaksikannya dengan zat kimia
sehingga menghasilkan produk yang berwarna. Sebuah contoh yang
baik adalah kromatogram yang dihasilkan dari campuran asam amino.
Kromatogram dapat dikeringkan dan disemprotkan dengan larutan
ninhidrin. Ninhidrin bereaksi dengan asam amino menghasilkan
senyawa-senyawa berwarna, umumnya coklat atau ungu.
Dalam metode lain, kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian
ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan
gelas arloji) bersama dengan kristal iodium.
Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan bercak pada
kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada
lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak
kecoklatan.
![Page 58: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/58.jpg)
Kromatografi Kolom
Kolom kromatografi berkerja berdasarkan skala yang lebih besar menggunakan material terpadatkan pada sebuah kolom gelas vertikal.
![Page 59: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/59.jpg)
Penggunaan kolom
Misalnya memisahkan campuran dari dua senyawa yang berwarna, yaitu kuning dan biru. Warna campuran yang tampak adalah hijau.Pertama penutup kran dibuka untuk membiarkan pelarut yang sudah berada dalam kolom mengering sehingga material terpadatkan rata pada bagian atas, dan kemudian tambahkan larutan secara hati-hati dari bagian atas kolom. Lalu buka kran kembali sehingga campuran berwarna akan diserap pada bagian atas material terpadatkan, sehingga akan tampak seperti gambar disamping.
menamambahkan pelarut baru melalui bagian atas kolom, jangan sampai merusak material terpadatkan dalam kolom. Lalu buka kran, supaya pelarut dapat mengalir melalui kolom, kumpulkan dalam satu gelas kimia atau labu dibawah kolom. Karena pelarut mengalir kontinyu, anda tetap tambahkan pelarut baru dari bagian atas kolom sehingga kolom tidak pernah kering.
![Page 60: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/60.jpg)
Perubahan yang mungkin terjadi sejalan perubahan waktu
![Page 61: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/61.jpg)
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Peralatan HPLC secara prinsip terdiri dari : Tempat pelarut Pompa Tempat injeksi sampel Kolom Detektor Rekorder
![Page 62: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/62.jpg)
i
![Page 63: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/63.jpg)
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) [lanjutan]
1. Fasa mobile (pelarut)
pelarut yang digunakan harus dilakukan degassing untuk mengeluarkan gas terlarut yang tidak diinginkan.
2. Sistem pompa
ada dua jenis pompa, yang mendasari pemakaiannya yaitu : tekanan tetap dan volume tetap.
3. Flow controller (pengendali aliran)
untuk menstabilkan aliran fasa mobile akibat adanya perubahan tekanan gas, temperatur dan viskositas.
4. Kolom
Tidak memerlukan temperatur yang tinggi, karena sifat ikatan kimia terhadap fasa stasioner sangat sensitif terhadap temperatur yang tinggi.
![Page 64: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/64.jpg)
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) [lanjutan]
5. Detektor
karakteristik detektor untuk HPLC
- sensivitasnya tinggi
- respon yang menyeluruh terhadap sampel
- tidak meruska sampel
- tidak sensitif terhadap perubahan temperatur dan kecepatan aliran fasa mobile
- dapat beroperasi secara terus menerus.
6. Rekaorder
Mengeluarkan output berupa kromatogram.
![Page 65: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/65.jpg)
Keuntungan HPLC Cepat Resolusi Sensitivitas detektor Kolom yang dapat digunakan kembali Ideal untuk zat bermolekul besar dan berionik Mudah rekoveri sampel
![Page 66: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/66.jpg)
SEKIAN DAN TERIMAKASIH
![Page 67: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/67.jpg)
Pertanyaan Fase diamnya dari GLC Mengapa larutan fase stasioner (khotib) Dampak pembuatan kromatografi sempit dan tebal Perbedaaan adsorpsi dari spektrokospi dengan
kromatografi (Daudi) Keunggulan antara kromatografi dan spektrokospi.
(Daudi)
![Page 68: Kel 09-kromatografi](https://reader030.vdokumen.net/reader030/viewer/2022013102/559668a21a28ab79128b468d/html5/thumbnails/68.jpg)
Bahwa metode ada kesamaannya yaitu analisis senyawa dengan tingkat pemisahan yang lebih akurat, tapi perbedaannya deteksi sampe yang digunakan berbeda, yaitu stre menggunakan sinar, kromatografi dengan fase cair dan gas.