5. kromatografi kertas

7/29/2019 5. kromatografi kertas

1/15

KROMATOGRAFI

KERTAS


2/15

Kromatografi kertas merupakan suatu bentuksederhana dari partisi cair-cair. Serat-serat

selulosa hidrofilik dari kertas dapat mengikatair; setelah berada di udara yang lembab,kertas penyaring yang tampak keringsebenarnya dapat mengandung persentase airyang besar 20% atau lebih.

Kertas dianggap analog dengan suatu kolomyang mengandung fasa diam yang berair.

Kemudian zat terlarut tersebut dipartisikan diantara air ini dan pelarut organik bergerakyang mudah bercampur dengan air.


3/15

Peralatan yang digunakan dalam kromatografi

kertas sangat sederhana. Hasil-hasil yang baik

dapat diperoleh dengan peralatan dan materi-

materi yang sangat sederhana. Senyawa-senyawa

yang terpisahkan dapat dideteksi pada kertas dan

dapat segera diidentifikasikan.Fasa diam dalam kromatografi kertas adalah zat

cair yaitu air yang teradsorbsi dalam serat

selulosa kertasFasa geraknya juga cair yang sering disebut

sebagai larutan pengembang


4/15

Selembar kertas Whatman atau kertas saring

biasa bertindak sebagai kolom. Kertas saringpada beberapa kasus dijenuhkan dengan air di

mana air yang teradsorbsi pada selulosa kertas

merupakan fasa diam cair.

Bejana pengembang merupakan wadah

tertutup yang berisi larutan fasa gerak cair.

Proses pemisahan dilakukan dalam keadaan

tertutup agar ruang dalam bejana jenuh oleh

uap fasa gerak.


5/15

Cara kerja dalam kk

Setetes dari larutan cuplikan yang mengandung

campuran yang akan dipisahkan diteteskan padadaerah yang diberi tanda diatas sepotong kertassaring, dimana ia akan meluas membentuk nodayang bulat.

Bila noda telah kering, kertas dimasukkan dalambejana tertutup yang sesuai dengan satu ujung,dimana tetesan cuplikan ditempatkan, tercelupdalam pelarut yang dipilih sebagai fasa bergerak(jangan sampai noda tercelup karena berartisenyawa yang akan dipisahkan akan terlarut darikertas).


6/15

Pelarut bergerak melalui serat-serat dari kertas

oleh gaya kapiler dan menggerakkkan

komponen-komponen dari campuran cuplikan.

Perlu diperhatikan bahwa permukaaan dari

kertas jangan sampai terlalu basah dengan

pelarut, karena hal ini tak akan memisahkansama sekali atau daerah-daerah noda akan

menjadi kabur.


7/15

Bila permukaan pelarut telah bergerak sampai

jarak yang cukup jauhnya atau setelah waktu

yang telah ditentukan, maka kertas diambildari bejana dan kedudukan dari permukaan

pelarut diberi tanda dan lembaran kertas

dibiarkan kering. Jika senyawa-senyawa berwarna maka mereka

akan terlihat sebagai pita-pita atau noda-noda

yang terpisah, jika senyawa-senyawa takberwarna maka mereka harus dideteksi dengan

cara fisika dan kimia.


8/15

Cara yang biasa adalah menggunakan suatu

pereaksi yang memberikan sebuah warna

terhadap beberapa atau semua dari senyawa-senyawa.

Sering juga menggunakan cara deteksi dengan

sinar ultra ungu. Bila daerah-daerah dari nodayang terpisah telah dideteksi, maka identifikasi

tiap-tiap senyawa dapat dilakukan.


9/15

Untuk tujuan identifikasi, noda-noda sering

dikarakterisasikan berdasarkan nilai Rfnya. NilaiRf, adalah rasio jarak yang ditempuh oleh suatuzat terlarut terhadap jarak yang dipindahkan olehgaris depan pelarut selama waktu sama.

Nilai Rf yang identik untuk suatu senyawa yangdiketahui dan yang tidak diketahui denganmenggunakan beberapa sistem pelarut yangberbeda memberikan bukti yang kuat bahwa nilai

untuk kedua senyawa tersebut adalah identik,terutama jika senyawa tersebut dijalankan secaraberdampingan di sepanjang pita kertas yang sama.


10/15

Bila akan melakukan pemisahan dengankromatografi kertas maka hal-hal seperti berikut

perlu mendapatkan perhatian : 1. Metoda (Penaikkan, Penurunan atan

Mendatar)

2. Macam dari kertas

3. pemilihan dan pembuatan pelarut (Fasabergerak)

4. Kesetimbangan dalam bejana yang dipilih

5. Pembuatan cuplikan 6. Waktu pengembangan

7. Metoda deteksi dan identifikasi


11/15

Dalam metoda penaikkan (ascending) kertas

dicelupkan hingga ujung dimana aliran mulai

bergerak terletak sedikit diatas permukaan dari

pelarut dan pelarut naik melalui serat-serat dari

kertas oleh gaya kapiler.

Di dalam metoda penurunan (descending)

ujung atas dari kertas dicelupkan dalam pelarut

dan mengalir, meskipun diawali oleh gaya

kapiler diteruskan oleh gravitasi.


12/15

Metoda mendatar (horisontal) sangat berbeda

dari kedua metoda diatas. Noda cuplikan

ditempatkan pada pusat dari kertas (biasanya

kertas saring berbentuk bulat ) dan pelarut

diteteskan juga dipusat kertas. Aliran juga oleh

gaya kapiler, senyawa-senyawa dalamcampuran segera berkembang dengan pelarut.


13/15

Kadang-kadang semua komponen sampel tidak

dapat dipisahkan dengan menggunakan sistem

pelarut manapun; beberapa komponen terpisahlebih baik di dalam satu sistem, dan beberapa

dalam sistem yang lainnya.

Untuk pemisahan yang lebih selektif, makadigunakan kromatografi 2 dimensi ( proses

pemisahan 2 kali)


14/15

Kromatograf kertas dua dimensi kemudian

dapat digunakan. Sampel terlihat di dekat satu

ujung dari lembaran kertas penyaring bujursangkar. Setelah perpindahan dari zat terlarut

sama dengan salah satu sisi dari kertas yang

yang menggunaka satu sistem pelarut, kertasyang diputar dengan sudut 90, dan kemudian

sistem pelarut kedua membawa zat terlarut ke

bagian kertas yang tidak digunakan.


15/15

Nilai Rf Standar Pelarut I Pelarut II

Valin 0,4 0,2 Isoleusin 0,3 0,2

Arginin 0,4 0,8

Fenilalanin 0,9 0,4

Glisin 0,8 0,8 Glutamin 0 0,3

Histidin 0,4 0,4

Pemisahan asam-asam amino dari ekstrak protein dapat dilakukan

dengan KK dua dimensi. Elusi pertama dengan pelarut (I)

butanol/asam asetat dan elusi kedua dengan pelarut (II)

fenol/kresol/air. Hasil pemisahan diperoleh sbb:

5. kromatografi kertas

Documents