sazujib 311 amali 3

8/10/2019 Sazujib 311 Amali 3

1/8

ABSTRAK

Eksperimen ini dijalankan untuk menentukan aktiviti spesifik enzim.

Sebelum itu,penentuan aktiviti fosforilase dan penentuan kepekatan protein

perlu dijalankan.Aktiviti fosforilase boleh ditentukan dengan menggunakantindakbalas terbalikan melalui penentuan kadar pembentukan fosfat

takorganik !i". #ntuk menentukan kepekatan fosfat tak organik,kaedah

spektrofotometer digunakan.Keputusan $ang diperoleh digunakan untuk

mengira kepekatan fosfat tak organik $ang terhasil bagi setiap

ekstrak.Kepekatan fosfat $ang terhasil dapat menentukan aktiviti fosforilase

untuk ekstrak.Keputusan eksperimen $ang diperoleh ditulis dalam unit

%mol&ml&min.Keputusan untuk tabung uji $ang berkandungan larutan enzim

'.( ml ialah tabung uji S1 0.070 %mol&ml&min, tabung uji S) '.*'+

%mol&ml&min,tabung uji * '.*-) %mol&ml&min dan tabung uji ) '.*'+

%mol&ml&min . Keputusan untuk tabung uji $ang berkandungan larutan enzim

'. ml ialah tabung uji S1 0.267 %mol&ml&min, tabung uji S) '.'/'

%mol&ml&min,tabung uji * '.0(+ %mol&ml&min dan tabung uji ) '.')-

%mol&ml&min. #ntuk penentuan kepekatan protein dalam ekstrat pula,

kaedah 1olin 2io3alteau digunakan. elalui keputusan $ang

diperoleh,kepekatan protein boleh didapati daripada graf $ang diplot,iaitu

kepekatan protein didapati tinggi sekali pada tabung uji * dengan

kepekatan seban$ak (0' ug&ml diikuti dengan tabung uji S* iaitu ('0 ug&ml,

) *(' ug&ml dan S) +* ug&ml .#ntuk menentukan aktiviti spesifik

enzim,nilai fosfat $ang diperoleh dibahagi dengan nilai protein.4asil daripada

pengiraan didapati baha5a tabung uji $ang berkandungan larutan enzim '.(

ml ialah tabung uji S* 1.148 x 10 5, tabung uji S) 0.+-+x 10 5,tabung uji *

2.600 x 10 5dan tabung uji ) 6.*+)x 10 5. Keputusan untuk tabung uji $ang

berkandungan larutan enzim '. ml ialah tabung uji S1 4.377 x 105, tabung uji

S) (.-6 7 *'5,tabung uji * /./'' 7 *'5dan tabung uji ) *.'// 7 *'5.

TEORI-TEORI (PRINSIP)

1


2/8

!rinsip asas pengasingan protein adalah kerana protein berkebolehan untuk

terlarut dalam larutan berair kerana protein mempun$ai 3iri83iri berikut 9

i" terdapat kumpulan berion seperti :4(; dan 2


3/8

Aktiviti enzim ? umoles hasil terbentuk

minit

Kaedah spektrofotometer di gunakan untuk menentukan kepekatan fosfat

takorganik dan kaedah ini mengikut prinsip fotometri seperti $ang telah

dijalankan pada sesi amali sebelum ini.

KEPUTUSAN DAN ANALISIS

Jadual 1 : Tatacara ujian k!katan "#$"at %a&i k$trak S1' S *1

dan *

S1 S2 M1 M2

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

5( l$utn

knji )ml*0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2

+$utn

mpn )ml*0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

+$utn

enzim )ml*0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6 0.3 0.6

Ai$ sulin&

)ml* 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7 1.0 0.7

-$m selm 2 minit p% 370

+$utn 25(

A0 0 1.0 1.0 0 0 1.0 1.0 0 0 1.0 1.0 0 0 1.0 1.0

+$utn&luk"s/1/

f"sft

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

-$mkn selm 15 minit p% 370

+$utn 25(

A

1.0 1.0 0 0 1.0 1.0 0 0 1.0 1.0 0 0 1.0 1.0 0 0

-mp$kn %n m#il supe$ntn se#nk 1ml utk setip t#un& uji

3


4/8

Jadual : Pnntuan k!katan PI

Ta%un&

uji

Su!rnatan

(+l)

Ra&n

"#$"at

(+l)

Air

$ulin&

(+l)

,Daa

!nra!an

(./n+)

K!katan

"#$"at

0&

S1

* *.' ).' '.' *.'6( +'

) *.' ).' '.' *.(6 *0'

( *.' ).' '.' *.'** /'

6 *.' ).' '.' *.'0- /6

S

* *.' ).' '.' '.--( 6'

) *.' ).' '.' '.+*( 0'

( *.' ).' '.' '.66( /*

6 *.' ).' '.' '.0(- /'

*1

* *.' ).' '.' *.0+ *)'

) *.' ).' '.' ).'-+ ))0

( *.' ).' '.' *.(6- -

6 *.' ).' '.' *.*/* /*.0

*

* *.' ).' '.' *.(0- 6)

) *.' ).' '.' *.*+ 0

( *.' ).' '.' '.-0/ /(

6 *.' ).' '.' '.+/( /(

Blank '.' '.' *.' '.''' '

Kepekatan fosfat diperolehi daripada graf da$a pen$erapan la5an

kepekatan fosfat kaedah daripada eksperimen ) $ang dijalankan sebelum

ini.

Jadual : Pnntuan k!katan !r#tin +n&&unakan ra&n 2#lin-

3i#caltau

Ta%un&

Uji

Ek$trak

(+l)

I$i!adu

Air(+l)

K!katan

Pr#tin(4&5+l)

Larutan

3u-(4&5+l)

Ra&n2#lin

6ralkalin(+l)

Daa

Pnra!an(.77n+)

1(6lank)

'.' *.' '.''' *.' '.'''

S1'.0 '.' -)' *.' *.0*-

S'.0 '.' '.)60 *.' '.0+'

*1'.0 '.' '.*0 *.' '.+-/

4


5/8

*'.0 '.' './' *.' './0'

Kepekatan protein diperolehi dari graf da$a pen$erapan la5an

kepekatan protein dalam kaedah 1olin82io3alteau daripada eksperimen

) tukar unit @g mg ".

!enukaran kepekatan protein daripada ug&ml ke mg&ml

2ontoh9 kepekatan enzim S*

*mg&ml ? *'''ug&ml

? **' ug&ml 7 *mg&ml

*''' ug&ml

? '.**' mg&ml

PENGIRAAN

S 1 = 0.161nm ) $ip% &$f j%ul 1.1 = 110 & ' ml *

S 2 = 0.356 nm) $ip% &$f j%ul 1.1 = 245 & ' ml *

1 = 0.234 nm) $ip% &$f j%ul 1.1 = 165 & ' ml *

2 = 0.100 nm) $ip% &$f j%ul 1.1 = 70 & ' ml *

S 1 /M1 mol / Pi / min/ ml g / Protein Aktiviti Spesifik

Enzim

S1 S 1 ) 1 * S 1) 3 *

380 180 = 20

) 200 ' 5 15 2 * x 10

=0.0 m"l ' ml

1x 2 x 10

= 110 x 2 x 10

= 2200

1'1= 0.70 '2200

= 0.00032

S 1 ) 2 * S 1) 4 *450 225 = 225

) 225 ' 5 15 2 * x 10

= 0.!" m"l ' ml

2'1= 0.78 ' 2200= 0.000336

S2 S 2 ) 1 * S 2) 3 *

350 150 = 200) 200 ' 5 15 2 * x 10

= 0.02 m"l ' ml

2 x 2 x 10

= 245 x 2 x 10= 400

3'2= 0.72 ' 400

= 0.000162

S 2 ) 2 * S 2) 4 * 4'2= 0.842 ' 400

5


6/8

340 100 = 240

) 240 ' 5 15 2 * x 10= 0.!#2m"l ' ml

= 0.00017

S 1 /M1 $ mol / Pi / min/ ml g / Protein Aktiviti Spesifik

Enzim 1 1 ) 1 * 1) 3 *

310 220 = 0

) 0 ' 5 15 2 * x 10= 0.%1& m"l ' ml

3x 2 x 10

= 165 x 2 x 10

= 3300

5'3= 0.316 ' 3300

= 0.00006

1 ) 2 * 1) 4 *410 300 = 110

) 110 ' 5 15 2 * x 10

= 0.%!& m"l ' ml

6'3= 0.386 ' 3300= 0.0001

2 2 ) 1 * 2) 3 *320 130 = 0

) 0 ' 5 15 2 * x 10

=0.%1& m"l ' ml

4 x 2 x 10= 0 x 2 x 10

= 1800

7'4= 0.316 ' 1800= 0.00018

2 ) 2 * 2)4 *

340 120 = 220) 220 ' 5 15 2 * x 10

= 0.2m"l ' ml

8'4= 0.772 ' 2600

= 0.00030

PER6IN3AN8AN

Eskperimen ini dijalankan untuk menentukan aktiviti spesifik enzim.Sebelum

itu,penentuan aktiviti enzim dan penentuan kepekatan protein perlu

dijalankan.

1osforilase memangkinkan tindakbalas berikut9

kanji"n ;!i 88888C kanji"n8* ; glikosa8*8fosfat

Aktiviti fosforilase boleh ditentukan dengan menggunakan tindakbalas

terbalikan melalui penentuan kadar pembentukan fosfat takorganik

!i".>alam ujikaji ini,larutan tampan ditambahkan untuk menstabilkan atau

mengekalkan nilai p4.Tabung uji ( dan 6 digunakan sebagai ka5alan.!ada

bahagian pertama,selama ) minit pengeraman digunakan.Selepas itu,T2A

ditambahkan ke dalam tabung uji ( dan 6 bagi setiap larutan estrat untuk

6


7/8

memberhentikan tindakbalas enzim.!ada masa $ang sama,Dlukosa8*8fosfat

seban$ak * ml ditambahkan ke tabung uji * dan ).asa pengeraman untuk

bahagian ini ialah selama *0 minit.=ni merupakan masa $ang optimum untuk

enzimE" bertindakbalas dengan substratS" dan menghasilkan suatu

kompleks enzim8substratES".ES ini memberikan hasil!" serta

membebaskan enzimE" sekali lagi.Kemudian, tambahkan T2A seban$ak *ml

ke tabung uji * dan ) untuk memberhentikan aktiviti fosfarilase.#ntuk

menentukan kepekatan fosfat tak organik,kaedah spektrofotometer

digunakan.Keputusan $ang diperoleh digunakan untuk mengira kepekatan

fosfat tak organik $ang terhasil bagi setiap ekstrak.Kepekatan fosfat $ang

terhasil dapat menentukan aktiviti fosforilase untuk ekstrak S*,S) dan

*,).

KES=!#A:

Keputusan $ang diperoleh menggambarkan keadaan $ang

sebenar.engikut prinsip,sepatutn$a ekstrat $ang telah diemparkan se3ara

berperingkat,pada akhir akan mendapat ekstrat $ang berkandungan

tulen,maka aktiviti spesifikn$a dijangkakan tinggi.

7


8/8

RUJUKAN

*. Nik N#rulaini Nik A%dul Ra9+an, Prinsip Biokimia, !usat !engajian!endidikan Farak Fauh, *+-0.

). Daid TPlu++r, An Introduction to Practical Biochemistry, 2nd

edition, 3Dra584ill 2ompan$, #K, *+/-.

(. J#9ari *#9d Saad, Metabolisma Asid Amino, >e5an Bahasa dan

!ustaka, *++'

6. Kit9 ;il$#n < J#9n ;alkr, Principles and Techniques of PracticalBiochemistry, 4thedition, 2ambridge #niversit$ !ress, *++6.

0. Li+ P9aik E' An& Tian T$, Prinsip dan Eksperimen Enim, >e5an

Bahsa dan !ustaka, ala$sia, *+--.

8

sazujib 311 amali 3

Documents