Presentacin de PowerPoint

EnzimaDNA polimerasa ISanabrais Jimnez Marco AntonioSerrano Vega Jos RobertoZavaleta Bahena Azucena INTRODUCCINLa replicacin del DNA es un evento en el que dos clulas hijas transmiten la informacin gentica Se lleva acabo en la fase S del ciclo celular.

Bioqumica de la replicacin Mediados de 1950 por Arthur Kornberg DNA polimerasa I.

Kornberg dedujo que los sustratos para la replicacin del DNA deban ser derivados activados de los residuos de nuclotidos del DNA.

Incubo dNTPs marcados radioactivamente con un extracto de protenas solubles de E. coli Se observo que la cantidad de radioactividad incorporaba sustancias de alto peso molecular Cuantificandose mediante presipitacin acida y conteo de ADN radioactivo.

Para que se realizara la reaccin se requera la adiccin de DNA y de Mg2+.

Precipitacin acida

Conteo de DNA radioactivoActividades

Estructura.

La enzima tiene un peso molecular de 103 KDa.

La enzima de la DNA polimerasa 1 consta de 928 aminoacidos, organizados en 2 fragmentos, uno pequeo y uno grande o fragmento klenow.

Contiene 43 % de - hlice , 17 % de -plegada , 58 -vueltas.

Estructura

Estructura primariaEstructura secundariaEstructura terciariaMECANISMO DE LA DNA POLIMERASAPrimero la base correspondiente al nucletido complementario por medio del apareamiento especfico de las bases de la cadena molde.

El grupo 3-OH del ultimo nucletido incorporado fija nucleoflicamente en la nueva cadena el grupo fosfato del nuclesido trifosfato fijado, lo que proporciona la salida de difosfato para formar un nuevo enlace fosfodister.

El mecanismo descrito da como resultado la lectura de la matriz en la direccin 35. Dicho de otra manera, la nueva cadena sintetizada crece siempre en direccin 53.

Cuando se purifico la enzima DNA polimerasa de E. coli se observ que estaba formada de una sola cadena polipeptidica.Actividad enzimticaClasificacion del congreso de enzimas: 2.7.7.7, DNA nucleotidiltransferasa.

Vmax = 16-20 nt/ segundo

Sitios activos: 3

pI: 5.40 (teorico)EXTRACCIN DE CIDOS NUCLEICOS COMPROBACIN DE LA EXTRACCINPREPARACIN DE LA MEZCLA PARA EL PCRDNA DIANAAMPLIFICACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS EXTRADOS POR PCR DETECCIN E INTERPRETACINProcesamiento de la muestraExtraccin de los cidos NucleicosPrecipitacin de los cidos Nucleicos

PrimersTaq Polimerasa IdNTPsTampn de Amplificacin

DesnaturalizacinAcoplamientoPolimerizacinAnlisis Electrofortico por comparacin con patrones moleculares conocidosAnlisis secundarios de Restriccin, Hibridacin, etc.