laporan praktikum genetika 4

8/10/2019 Laporan Praktikum Genetika 4

1/14

LAPORAN PRAKTIKUM GENETIKA (BI 2105)

PENGGUNAAN MIKROPIPET SERTA UJI AKURASIDAN PERSISI DALAM PENGAMBILAN

AKUADES DAN GLISEROL

Tanggal Praktikum : 3 Oktober 2014

Tanggal Pengumpulan : 10 Oktober 2014

disusun oleh :

Rahayu Jatiningsih

10612014

Kelompok 13

Asisten :

Dita Y.W10611045

PROGRAM STUDI BIOLOGI

SEKOLAH ILMU DAN TEKNOLOGI HAYATI

INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

BANDUNG

2014


2/14

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikropipet adalah alat yang digunakan untuk memindahkan cairan dalam

jumlah kecil secara akurat. Mikropipet merupakan sebuah alat standar

labolatorium yang digunakan sebagai alat ukur ketika mengambil sampel

cairan dalam jumlah yang sangat sedikit. Adapun satuan yang biasa digunakan

dalam skala mikropipet adalah l. Prinsip awal pada pembuatan mikropipet

ditemukan oleh Warren Gilson dan Henry Lardy, Professor bidang biokimia di

University of Wisconsin-Madison. Dimana prinsip tersebut menjabarkan

kebutuhan adanya suatu alat ukur yang dalam laboratorium sering

membutuhkan perhitungan dengan skala yang kecil serta membutuhkan presisi

dan akurasi pada setiap perlakuan.

Alat ini bekerja dengan menggerakkan piston untuk menjaga tekanan

udara konstan saat oksigen digunakan (Zinnen, 2004). Mikropipet terdiri dari

tiga jenis ukuran yang umum digunakan yaitu P20, P200, dan P1000. Setiap

ukuran yang berbeda dirancang untuk mengukur cairan dalam rentang volume

yang berbeda.

Memiliki keahlian dalam penggunaan mikropipet sangatlah penting, hal

ini berkaitan dengan pekerjaan para saintis, khususnya bagi bidang molekuler,

yang selalu membutuhkan ketepatan dalam setiap pengukuran suatu larutan

yang diuji cobakan. Ketidak akuratan dalam perhitungan serta ketidak

presisian dalam pengulangan perlakuan, akan menimbulkan kerancuan

perhitungan yang dapat berakibat fatal dalam suatu analisis hipotesis suatu

percobaan.

1.2 Tujuan

1. Menentukan perbedaan cara penggunaan mikropipet pada larutan kental

dan larutan yang encer


3/14

2. Menentukan nilai akurasi dan presisi dari mikropipet dalam pengambilan

akuades dan gliserol

3. Menentukan kelayakan mikropipet berdasarkan nilai akurasi dan presisi

yang didapatkan


4/14

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Prinsip Kerja Mikropipet

Prinsip utama dari penggunaan mikropipet adalah adanya pergantian udara

yang terdapat dalam tabung dengan volume larutan yang hendak diukur.

Menurut Zinnen (2004), ada tiga hal penting yang dilakukan oleh Gilson dan

Lady untuk memodifikasi alat pengambilan sampel darah dari percobaan yang

mereka lakukan, yakni alat yang digunakan ukurannya terlalu kecil, tingkat

akurasinya yang sangat tinggi, serta kesesuaian dalam setiap pengukuran.

Untuk itu, kedua orang tersebut berencana untuk memodifikasi alat yang

sudah ada, yakni dengan memunculkan prinsip baru, yakni udara yang

disimpan dalam piston untuk diukur tekanannya akan dialirkan ke pipa kecil

sehingga udara dapat mengalir keluar dari piston, sehingga piston dapat

menarik kembali materi lain (zat cair), sehingga piston yang semula

dipergunakan untuk menyimpan udara dapat diisi oleh zat cair tersebut dalam

volume yang sama.

2.2 Jenis jenis Mikropipet

Menurut buku panduan percobaan Volumetric measurement oleh

Sacramento City College (2013), terdapat tiga jenis mikropipet yang dapat

dibedakan berdasarkan ukuran volume yang mampu diambil oleh masing-

masing mikropipet, diantaranya P20, P200, dan P1000. Dalam P20, rentang

volume yang dapat diukur dalam mikropipet adalah 0,5 l-20 l. P200

menunjukkan rentang volume pengukurannya antara 20 l-200 l, dan dalam

P1000 volume maksimal yang dapat diambil oleh alat adalah sebesar 1000 l.

Perbedaan jenis pada mikropipet ini dapat dilihat dari perbedaan warna yang

terdapat dalam plunger, yakni putih untuk P20, warna kuning untuk P200, dan

warna biru untuk mikropipet P1000.

2.3 Hal hal yang Perlu Diperhatikan dalam Penggunaan Mikropipet


5/14

Mikropipet sebagai suatu alat yang memiliki nilai keakuratan dan presisi

yang cukup tinggi, sehingga diharuskan untuk berhati-hati dalam

pemakaiannya. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam penggunaan

mikropipet menurut Bates College (2013), diantaranya :

Tips harus dipasang dengan kuat pada ujung mikropipet agar tidak

longgar dan jatuh

Sudah bisa membedakan dengan baik antara stop 1 dan stop 2 ketika

menekan plunger. Stop pertama untuk menyedot cairan dalam jumlah

volume yang diharapkan, sedangkan stop 2 adalah untuk mengeluarkan

cairan dari tips

Jangan mengisi volume dalam mikropipet melebihi ukuran standar

yang tercantum dalam alat, karena bisa mengurangi ketepatan alat

dalam mengambil volume sampel

Mikropipet yang tipsnya sudah berisi cairan sampel harus selalu

disimpan dalam posisi tegak untuk mencegah naiknya cairan dari tipe

ke piston mikropipet

2.4 Akurasi dan Presisi

Akurasi merupakan sebuah cara untuk mengetahui kesalahan dari hasil

pengukuran terhadap suatu alat dalam bentuk persentase. Akurasi

menunjukan rasio dari volume rata-rata larutan yang didapatkan dari hasil

percobaan dan volume yang tercantum pada alat. Jika hasil yang didapat

(dalam satuan persen) memiliki nilai yang kecil, alat yang dipakai dalam

percobaan memiliki nilai keakuratan yang lebih tinggi. Persen kesalahan yang

memiliki nilai negatif mengindikasikan bahwa volume yang didapat dari hasil

percobaan lebih kecil dibanding volume seharusnya (yang tertera pada alat)

dan bila persen kesalahan benilai positif, maka nilai volume yang didapat dari

hasil percobaan lebih besar dibanding yang seharusnya (University of

Michigan-Dearborn, 2002). Rumus yang digunakan untuk menghitung nilai

akurasi mikropipet adalah:


6/14


7/14

BAB III

METODOLOGI

3.1 Alat dan Bahan

Pada penggunaan mikropipet serta uji akurasi dan presisi dalam pengambilan

akuades dan gliserol , alat dan bahan yang dibutuhkan adalah sebagai berikut

Tabel 3.1 Alat dan Bahan

Alat Bahan

Mikropipet 100 - 1000 l Tips kuning Timbangan analitik Tabung eppendorf

Akuades ( = 1,0) Gliserol ( = 1,261)

3.2 Cara Kerja

3.2.1 Pengambilan Larutan Encer

Mikropipet diatur volumenya lalu pada ujung mikropipet tersebut,

dipasang tips. Kemudian tombol stop pertama ditekan. Setelah itu ujung

tips dimasukan dalam akuades 1 mm. Selanjutnya tombol perlahan

dilepaskan sehingga akuades masuk ke dalam tips. Ujung tips diletakan

pada dinding tabung baru. Tombol ditekan perlahan hingga stop pertama.

Kemudian di diamkan sebentar. Selanjutnya tombol ditekan sampai habis

lalu ujung tips dikeluarkan dari tabung dan di geser pada dinding tabung.

Lalu tombol dilepaskan dan tips dilepas.

3.2.2 Pengambilan Larutan Kental

Mikropipet diatur volumenya lalu pada ujung mikropipet tersebut,

dipasang tips. Kemudian tombol ditekan hingga stop kedua. Setelah itu

ujung tips dimasukan dalam gliserol 1 mm. Selanjutnya tombol perlahan

dilepaskan sehingga gliserol masuk ke dalam tips. Ujung tips diletakan

pada dinding tabung baru. Tombol ditekan perlahan hingga stop pertama.

Kemudian di diamkan sebentar. Selanjutnya tombol ditekan sampai habis


8/14

lalu ujung tips dikeluarkan dari tabung dan di geser pada dinding tabung.

Lalu tombol dilepaskan dan tips dilepas.

3.2.3 Uji Kebocoran Mikropipet

Pertama, mikropipet diatur hingga mencapai volume maksimal.

Kemudian diisikan akuades dalam tips secukupnya. Mikropipet didiamkan

dalam posisi tegak selama kurang lebih 20 detik. Setelah itu ujung tips di

amati. Apabila di ujung tips tidak terdapat air yang menetes, maka

mikropipet tidak mengalami kebocoran.

3.2.4 Uji Akurasi dan Presisi

Pada pengujian akurasi dan presisi digunakanlah akuades (larutan

cair). Mikropipet yang telah dipasangi tips diatur sesuai dengan jumlah

volume yang akan diambil. Kemudian, tombol pada mikropipet ditekan

hingga stop 1 sambil kemudian dimasukkan ke dalam larutan. Setelah itu,

secara perlahan-lahan, tombol dibuka hingga semua akuades mengalir

masuk. Setelah akuades dipastikan masuk semua, mikropipet diangkat,

kemudian dimasukkan ke dalam tabung Eppendorf baru yang telah

ditimbang massanya sambil ujung tips mikropipet diusapkan ke dinding

tabung, tombol kemudian ditekan perlahan hingga stop 2. Tabung

Eppendorf berisi akuades kemudian ditimbang kembali untuk dapat dilihat

selisih massa akhir dan massa awal sehingga dapat diukur akurasi dan

presisinya. Untuk pengujian akurasi dan presisi dengan menggunakan

gliserol (larutan pekat), mula-mula mikropipet yang telah dipasangi tips

diatur sesuai dengan jumlah volume yang akan diambil. Kemudian,

plunger pada mikropipet ditekan hingga stop 2 sambil kemudian

dimasukkan ke dalam larutan. Setelah itu, secara perlahan-lahan,

tomboldibuka hingga semua gliserol mengalir masuk. Setelah gliserol

dipastikan masuk semua, mikropipet diangkat, kemudian dimasukkan ke

dalam tabung Eppendorf baru yang telah ditimbang massanya. Plunger

kemudian ditekan perlahan hingga stop 2. Tabung Eppendorf berisi


9/14

gliserol kemudian ditimbang kembali untuk dapat dilihat selisih massa

akhir dan massa awal sehingga dapat diukur akurasi dan presisinya.


10/14

BAB IV

HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

4.1.1 Massa Cairan Sebelum dan Sesudah

Berikut adalah tabel yang memuat massa cairan sebelum dan sesudah

pengulangan,

Tabel 4.1 Massa Cairan Sebelum dan Sesudah

Jenis

Cairan

Massa

Awal (g)

Massa Tabung +

Larutan (g)

Massa

Larutan

(g)

Volume

Larutan

(l)

Volume

Rata-rata

(l)

A1 0,91 1,11 0,2 200

203A2 0,92 1,13 0,21 210

A3 0,92 1,12 0,2 200

G1 0,91 1,15 0,24 190

206G2 0,91 1,20 0,29 230

G3 0,92 1,17 0,25 298

4.1.2 Perhitungan Volume Akuades dan Gliserol Massa akuades = ( ) ()

Volume akuades (dalam l, sehingga di pangkatkan 10 3)Volume A 1 = Volume A 2 =

Volume A 3 = Massa gliserol = ( ) ()

Volume gliserol = (dalam l, sehingga di pangkatkan 10 3)

Volume G 1 =


11/14

Volume G 2 =

Volume G 3 =

4.1.3 Perhitungan Akurasi dan Presisi pada Pemakaian Akuades dan Gliserol

Perhitungan Akurasi :

()

()

() Perhitungan Presisi :

( )

4.2 Pembahasan

Berdasarkan hasil percobaan pengukuran dengan mikropipet, telah didapatkan

nilai volume dari maisng-masing zat yang diambil serta nilai akurasi dan

presisinya. Untuk penghitungan akurasi, zat akuades memiliki nilai 1,5%

sementara zat gliserol memiliki akurasi sebesar 3%. Menurut University of

Michigan (2013), akurasi adalah rasio dari hasil pengukuran dengan mengacu

pada persentasi kesalahan dari volume rata-rata larutan yang diukur dengan

volume yang diharapkan. Semakin kecil nilai persentase kesalahan maka akurasi

alat semakin tinggi. Berdasarkan nilai standarisasi yang telah ditetapkan oleh

ISO/EN 8655, rentang persentase kesalahan untuk mengukur akurasi yang

tergolong normal sebesar 0% - 4%. Sehingga dari hasil yang didapat, mikropipet

yang digunakan berada dalam kondisi yang baik serta menghasilkan nilai yang


12/14

akurat. Sementara untuk penghitungan nilai presisi, dari hasil percobaan telah

didapatkan data senilai 2,85 % untuk zat akuades dan 10,27 % untuk gliserol.

Menurut University of Michigan (2013) pula, Presisi adalah suatu cara untuk

mengukur rasio kesalahan yang terjadi dalam setiap percobaan berulang, apakah

hasilnya cenderung sama atau berbeda. Semakin kecil nilai presisinya maka alat

yang digunakan memberikan hasil yang relatif sama dalam setiap percobaan. Nilai

presisi ini berhubungan dengan nilai standar deviasi, yakni semakin kecil nilai

standar deviasi maka akan semakin kecil nilai presisinya dan alat tersebut

memiliki kesalahan berulang yang relatif sama. Untuk penghitungan presisi, nilai

RSD normal dari zat akuades adalah sebesar 0,4 % (Eppendorff AG, 2013). Hasil

yang didapatkan pada pengukuran presisi terhadap akuades tidak memberikan

hasil yang baik, nilai standar deviasi sangat kecil sehingga menghasilkan nilai

RSD lebih dari 0,4%. Sedangkan pada pengukuran presisi terhadap gliserol

menunjukan hasil yang cukup baik dengan standar deviasi yang besar.

Hasil dari data percobaan dan literatur dapat berbeda karena disebabkan oleh

Kondisi fisik peralatan percobaan, seperti kondisi tips, viskositas atau kekentalan

larutan yang diuji, serta kandungan zat yang diuji. Selain dari kondisi alat, teknis

percobaan juga bisa menjadi faktor terjadinya perbedaan antara data percobaan

dan literatur, misalkan posisi mikropipet dan teknik pengambilan dan pelepasan

larutan. Kondisi lingkungan turut pula menyebabkan nilai akurasi dan presisi

berbeda dengan literatur seperti temperatur, tekanan udara, dan kelembaban.

Posisi mikropipet pada saat pengambilan larutan harus menjadi perhatian

karena posisinya harus tegak lurus. Posisi tegak lurus ini akan mencegah naiknya

larutan ke atas atau merembes ke dalam bersama udara yang tersedot keluar dari

tips ketika plunger ditekan. Keadaan seperti ini akan mempengaruhi keakurasian

dan presisi dari mikropipet (Sacramento City College, 2013).


13/14

BAB V

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pegamatan dalam penggunaan mikropipet kali ini, dapat

ditarik kesimpulan yaitu;

1. Perbedaan cara penggunaan mikropipet untuk pengambilan larutan encer dan

larutan kental adalah pada larutan encer tombol ditekan sampai stop 1

sedangkan pada larutan kental tombol ditekan sampai stop 2

2. Nilai akurasi dari mikropipet sebesar 1,5% pada akuades dan 3% pada

gliserol. Sedangkan nilai presisinya sebesar 2,85% pada akuades dan 10,27%

pada gliserol.

3. Mikropipet yang digunakan masih layak karena nilai persentasi akurasi yang

tinggi dan nilai presisi yang masih normal.


14/14

DAFTAR PUSTAKA

Bates College. 2013. Micropippetes .http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/pipet.html. Diakses

pada tanggal 9 Oktober pukul 21.38.

Sacramento City College. 2013. Experiment 1: Volumetric Measurement .

http://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdf.

Diakses pada tanggal 9 Oktober pukul 20.45.

Sacramento City Col lege. 2013. Using Micropipets and Graduated Pipets .

http://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdf. Diakses pada tanggal 9 Oktober pukul 21.00.

University of Michigan-Dearborn. 2013. Micropipette . http://slc.umd.umich.edu

Diakses pada tanggal 9 Oktober pukul 22.00

Zinnen, Tom. 2004. The Micropipette Story .

http://www.biotech.wisc.edu/outreach/pipettestory.html tanggal 4 November

Diakses pada tanggal 9 Oktober pukul 23.15
http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/pipet.htmlhttp://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdfhttp://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdfhttp://www.biotech.wisc.edu/outreach/pipettestory.htmlhttp://www.biotech.wisc.edu/outreach/pipettestory.htmlhttp://www.biotech.wisc.edu/outreach/pipettestory.htmlhttp://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdfhttp://scc.losrios.edu/~nussl/chem401/LABS/Lab%2001%20Pipetting.pdfhttp://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/pipet.html

laporan praktikum genetika 4

Documents