LaporanPraktikum Kimia OrganikPercobaan 4Putu Eka Satya Yudha11213011Kromatografi Kolom dan Kromatografi Lapis Tipis:Isolasi Kurkumin dari Kunyit (Curcuma longa L) dan Pemisahan Zat Pewarna MakananNamaAsistenPraktikum:Mayfin Eimeren Limiarni (10412001)Asih Suryati (11212030)

Laboratorium Kimia OrganikFakultasMatematikadanIlmuPengetahuabAlamInstitutTeknologi BandungJalanGanesa no. 10Bandung2014Percobaan 4 Kromatografi Kolom dan Kromatografi Lapis Tipis:Isolasi Kurkumin dari Kunyit (Curcuma longa L) dan Pemisahan Pewarna Makanan1. Tujuan1. Menentukan nilai Rf dari hasil isolasi dari kunyit dan zat pewarna makanan.2. Menentukan komponen senyawa dan urutan kepolaran senyawa dari isolat kunyit dari hasil KLT Preparatif.3. Menentukan kepolaran komponen zat penyusun pewarna makanan.2. TeoriDasarKromatografi merupakan suatu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik dan anorganik sehingga senyawa tersebut mudah dipelajari dan dianalisis. Metode kromatografi adalah cara pemisahan dua atau lebih senyawa atau ion berdasarkan pada pebedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion-ion tersebut dalam dua fasa berbeda. Fasa ini bisa berwujud padat-cair, cair-cair, gas-cair.zat terlarut yang memiliki afinitas yang lebih besar pada fasa gerak akan bertahan lebih lama di fasa gerak sedangkan yang memiliki afinitas kecil terhadap fasa gerak akan bertahan lebih lama pada fasa diam. Fasa adalah fasa yang tidak bergerak, sedangkan fasa gerak adalah fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen-komponen yang akan dipisahkan. Keakuratan pemisahan berdasarkan beberapa faktor, yaitu pemilihan adsorben sebagai fasa diam,kepolaran pelarut sebagai fasa gerak, ukuran kolom, dan laju elusi.3. Data Pengamatan3.1 Isolasi KurkuminMassa kunyit = 20 gMassa ekstrak kurkumin = 0.75 gData percobaan kromatografi lapis tipis preparatifSampelWarna Jarak noda (cm)Jarak eluen (cm)

KurkuminKuning1213.5

Demetoksi KurkuminJingga11.213.5

Bisdemetoksi Kurkumin Merah tua5.813.5

3.2 Pemisahan Zat Pewarna MakananSebelum pemisahan dengan kromatografi kolomSampel WarnaJarak noda (cm)Jarak eluen (cm)

Pewarna UnguMerah 1.13.45

Biru 1.23.45

Pewarna coklatKuning 0.83.5

Merah 1.153.5

Biru 1.33.5

Biru muda1.453.5

Merah muda1.43.5

Sesudah pemisahan dengan kromatografi kolomSampel WarnaJarak noda (cm)Jarak eluen (cm)

Pewarna UnguMerah 1.23.5

Biru 1.43.5

Pewarna coklatBiru 1.553.45

Orange 1.33.45

4. Pengolahan Data1. Isolasi kurkumin

Dengan menggunakan persamaan diatas, didapat bahwa nilai Rf dari bisdemetoksi kurkumin adalah 0.8889, Rf demetoksi kurkumin adalah 0.82963, dan Rf dari kurkumin adalah 0.42963. No.SampelWarnaRfPolaritas

1kurkuminkuning0.8888889

2Demetoksi kurkuminjingga0.8296296

3Bisdemetoksi kurkumin merah tua0.4296296

Hasil paparan dibawah sinar UV 254 nm Hasil paparan dibawah sinar UV 366 nm

2. Pemisahan zat pewarna makanana. Sebelum dipisahkan dengan kromatografi kolom(1) Warna ungu

(2) Warna coklat

Tabel warna unguNo.WarnaRfkepolaran

1Merah0.3188

2Biru0.3478

Tabel warna coklatNoWarnajarak nodaeluenRfPolaritas

1biru muda1.453.50.414286

2biru 1.33.50.371429

3orange1.153.50.328571

4pink1.43.50.314286

5kuning0.83.50.228571

b. Sesudah pemisahan dengan kromatografi kolom1) Warna ungu

2) Warna coklat

Tabel warna unguNo. WarnaRfPolaritas

1Merah 0.34286

2Biru 0.4

Tabel warna coklatNo.WarnaRfPolaritas

1Biru0.4492754

2Orange 0.374811

5. Pembahasan1. Kromatografi Kolom dan Kromatografi Lapis TipisKromatografi merupakan teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik ataupun non-organik sehingga senyawa tersebut dapat dipelajari dan dianalisis. Prinsip kerja dari kromatografi adalah melakukan pemisahan dua atau lebih ion berdasarkan pada perbedaan migrasi dan distribusi senyawa atau ion-ion tersebutdidalam dua fasa yang berbeda. Zat terlarut yang yang memiliki afinitas lebih tinggi pada fasa gerak akan bertahan lebih lama pada fasa gerak, sedangkan yang memiliki afinitas lebih rendah pada fasa gerak akan bertahan lebih lama pada fasa diam. Dengan demikian, senyawa senyawa akan dapat dipisahkan komponen-komponennya akibat dari perbedaan migrasi di fasa gerak dan fasa diam. Fasa diam adalah fasa yang tidak mengalami pergerakan, sedangkan fasa gerak merupakan fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa komponen-komponen senyawa yang akan dipisahkan. Dalam posisi yang berbeda-beda, senyawa-senyawa yang berbeda akan tertahan dan teradsorbsi oleh fasa diam, dan kemudian satu per satu senyawa ini akan terbawa kembali oleh fasa gerak yang melaluinyaDalam percobaan ini, kami menggunakan cara kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis. Kromatografi kolom merupakan suatu metode pemisahan dengan menggunakan suatu tabung yang berfungsi sebagai kolom tempat pemisahan senyawa. Pada kromatografi kolom, fasa diam yang digunakan adalah silika gel dan fasa geraknya adalah NaCl 1%, etanol-air (1:4), dan aqua dm. diperlukan pelarut yang berbeda karena jika menggunakan NaCl 1% pada proses tersebut dan warna yang telah terpisah tidak mau menetes, maka dapat menggunakan etanol-air yang bersifat lebih polar. Begitu juga setelah menggunakan etanol-air dan masih belum menetes semua warnanya, maka gunakan pelarut yang lebih polar lagi yaitu aqua dm karena semakin lama keluarnya zat warna, maka sifatnya semakin polar.. Kromatografi kolom dapat diaplikasikan untuk mengecek kandungan pigmen likopen dari tomat yang berfungsi sebagai antioksidan. Sedangkan kromatografi lapis tipis merupaka metode pemisahan dengan menggunakan plat kaca, plastik, atau aluminium. Pada KLT, yang menjadi fasa diamnya adalah silika gel dan fasa geraknya adalah butanol:etanol:ammonia 2% (3:1:2) Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk mengecek residu dari pestisida.

2. Isolasi KurkuminPada percobaan ini sebelum dilakukan isolasi terlebih dahulu dilakukan proses preparasi sampel. Kunyit yang digunakan berbentuk serbuk halus, agar mempermudah pemisahan kurkumin dari kunyit dan hasil yang akan diperoleh lebih maksimal. Kurkumin diekstraksi dengan cara refluks. Proses refluks dilakukan dengan menggunakan diklorometan yang bersifat nonpolar, hal ini karena kurkumin bersifat nonpolar. Setelah itu, campuran disaring dengan menggunakan saringan vakum agar semua larutannya (filtratnya) bisa diperoleh. Setelah itu, dilakukan distilasi pada larutan kuning tersebut agar larutan kuning tersebut menjadi lebih pekat dengan cara menguapkan pelarutnya. Setelah itu, didapat residu berwarna kuning kemerahan yang mengandung kurkumin, demetoksi kurkumin, dan bisdemetoksi kurkumin. Lalu, residu tersebut dicampurkan dengan n-heksana karena n-heksana bersifat non-polar. Setelah itu, dilakukan pemisaha antara senyawa kurkumin, demetoksi kurkumin, dan bisdemetoksi kurkumin dengan cara Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLT Preparatif). Tujuan dilakukannya pemisahan dengan cara KLT preparatif adalah agar senyawa yang telah terpisah dapat diperoleh kembali dengan cara dikeruk dan dilakukan distilasi. Jika kita melakukannya dengan metode KLT biasa, maka senyawa kurkumin yang terpisah tidak dapat diambil karena jumlahnya yang sedikit. Setelah melakukan pemisahan dengan KLT preparatif, maka didapat pada bagian bawah yaitu senyawa bisdemetoksi kurkumin yang bersifat paling polar diantara ketiga senyawa yang ada pada campuran tersebut karena memiliki nilai Rf 0.42963 yang tengah adalah demetoksi kurkumin yang bersifat lebih polar karena memiliki nilai Rf 0.82963, dan yang atas adalah kurkumin yang bersifat lebih tidak polar 0.8889. 3. Pengujian dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm.Pada saat noda dari KLT preparatif diletakkan dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm, maka lempeng akan berfluorensi dan sampel akan berwarna gelap karena adanya interaksi oleh UV dengan indikator fluoresensi yang ada pada lempeng yang terjadi karena elektron yang tereksitasi dari tingkat dasar ke tingkat yang lebih tinggi dan kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Sedangkan pada pemancaran sinar UV dengan panjang gelombang 366 nm, sampel akan berfluorensi dan berwarna kuning gelap karena adanya daya interaksi sinar UV dengan gugus kromofor yang terikat pada auksokrom yang ada pada noda tersebut. 4. Pada pemisahan zat pewarna makanan berwarna coklat, warna kuning tidak muncul pada saat pemisahan dengan kromatografi kolom karena warna kuning keluar bersamaan dengan warna merah sehingga merah yang didapat bercapur dengan warna kuning karena tingkat kepolaran zat warna merah mirip dengan warna kuning jadi, warna merah dan kuning keluar secara bersamaan.6. KesimpulanJadi, pada plat sampel terdiri dari bisdemetoksi kurkumin yang bersifat paling polar dengan nilai Rf 0.42963, demetoksi kurkumin yang bersifat kurang polar dibandingkan dengan kurkumin dengan Rf 0.82963, dan kurkumin yang lebih tidak polar dengan Rf 0.88889. Kemudian pada pemisahan zat pewarna makanan, untuk warna ungu didapat warna biru dan merah yang menjadi komponen penyusunnya dengan Rf warna biru adalah 0.4 dan Rf warna merah adalah 0.34386 yang berarti bahwa warna merah bersifat lebih polar diandingkan dengan warna biru. Untuk pewarna coklat, warna komponen yang muncul adalah biru dan merah. Warna kuning tidak muncul karena terdapat kemiripan kepolaran dengan warna merah sehingga warna merah yang keluar merupakan pencampuran dari warna merah dan kuning. Rf dari warna merah tersebut adalah 0.4201899 dan Rf warna biru 0.4492754.

7. DaftarPustakaMayo, D.W., Pike, R.M., Forbes, D.C. 2011. Microscale Organic Laboratory: with Multistep and Multiscale Synthesis, 5th ed. John Wiley & Sons. New York. Halaman: 92-101Williamson.1999. Macroscale and Microscale Organic Experiments, 3rd ed. Boston. Halaman: 164-194