laporan isolasi dna kromosom dan plasmid

8/16/2019 Laporan Isolasi Dna Kromosom Dan Plasmid

1/24


2/24

BAB I/ PENDA0,L,AN

1/1 LATAR BELAKAN

Asam nukleat adalah polinukleotida yang terdiri dari unit-unit mononukleotida, jika

unit - unit pembangunnya dioksinukleotida maka asam nukleat itu disebut dioksiribonukleat

(DNA) dan jika terdiri dari unit-unit mononukleotida disebut asam ribonukleat (RNA). DNA

dan RNA mempunyai sejumlah sifat kimia dan fisika yang sama sebab antara unit-unit

mononukleotida terdapat ikatan yang sama yaitu melalui jembatan fosfodiester antara posisi 3

suatu mononukleotida dan posisi ! pada mononukleotida lainnya ("arpet, #$%&).

Asam-asam nukleat seperti asam dioksiribosa nukleat (DNA) dan asam ribonukleat

(RNA) memberikan dasar kimia bagi pemindahan keterangan di dalam semua sel. Asam

nukleat merupakan molekul makro yang memberi keterangan tiap asam nukleat mempunyai

urutan nukleotida yang unik sama seperti urutan asam amino yang unik dari suatu protein

tertentu karena asam nukleat merupakan rantai polimer yang tersusun dari satuan monomer

yang disebut nukleotida (Dage, #$$').

Dua tipe utama asam nukleat adalah asam dioksiribonukleat (DNA) dan asam

ribonukleat (RNA). DNA terutama ditemui dalam inti sel, asam ini merupakan pengemban

kode genetik dan dapat memproduksi atau mereplikasi dirinya dengan tujuan membentuk sel-

sel baru untuk memproduksi organisme itu dalam sebagian besar organisme, DNA suatu sel

mengerahkan sintesis molekul RNA, satu tipe RNA, yaitu messenger RNA (mRNA),

meninggalkan inti sel dan mengarahkan tiosintesis dari berbagai tipe protein dalam organisme

itu sesuai dengan kode DNA-nya(fessenden, #$$&).

eskipun banyak memiliki persamaan dengan DNA, RNA memiliki perbedaan

dengan DNA, antara lain yaitu(oedjiati, #$$*)+a. agian pentosa RNA adalah ribosa, sedangkan bagian pentosa DNA adalah

dioksiribosa.

b. entuk molekul DNA adalah heliks ganda, bentuk molekul RNA berupa rantai tunggal

yang terlipat, sehingga menyerupai rantai ganda.

. RNA mengandung basa adenin, guanin dan sitosin seperti DNA tetapi tidak

mengandung timin, sebagai gantinya RNA mengandung urasil.

d. umlah guanin dalam molekul RNA tidak perlu sama dengan sitosin, demikian pula

jumlah adenin, tidak perlu sama dengan urasil.

/elain itu perbedaan RNA dengan DNA yang lain adalah dalam hal (/uryo, #$$') +


3/24

#. 0kuran dan bentuk

ada umumnya molekul RNA lebih pendek dari molekul DNA. DNA berbentuk double heli1,

sedangkan RNA berbentuk pita tunggal. eskipun demikian pada beberapa 2irus tanaman,

RNA merupakan pita double namun tidak terpilih sebagai spiral.

'. /usunan kimia

olekul RNA juga merupakan polimer nukleotida, perbedaannya dengan DNA yaitu+

a. ula yang menyusunnya bukan dioksiribosa, melainkan ribosa.

b. asa pirimidin yang menyusunnya bukan timin seperti DNA, tetapi urasil.

3. 4okasi

DNA pada umumnya terdapat di kromosom, sedangkan RNA tergantung dari maamnya,

yaitu+

• RNAd (RNA duta), terdapat dalam nukleus, RNA d dietak oleh salah satu pita DNA

yang berlangsung didalam nukleus.

• RNAp (RNA pemindah) atau RNA t(RNA transfer), terdapat di sitoplasma.

• RNAr (RNA ribosom), terdapat didalam ribosom.

*. 5ungsinya

DNA berfungsi memberikan informasi atau keterangan genetik, sedangkan fungsi RNA

tergantung dari maamnya, yaitu+

• RNAd, menerima informasi genetik dari DNA, prosesnya dinamakan transkripsi,

berlangsung didalam inti sel.

• RNAt, mengikat asam amino yang ada di sitoplasma.

• RNAt, mensintesa protein dengan menggunakan bahan asam amino, proses ini

berlangsung di ribosom dan hasil akhir berupa polipeptida.

DNA pada organisme tingkat tinggi seperti manusia, he6an dan tumbuhan terdapat di

dalam inti sel, dan beberapa organ lain di dalam sel seperti mitokondria dan kloroplast.

enyebutan nama DNA juga didasarkan pada lokasi asalnya. DNA genome inti (nuclear DNA

genome) berasal dari inti sel, DNA genom mitokondria (mitochondrial DNA genome) berasal

dari mitokondria, DNA genom kloroplast berasal dari kloroplast. ada organisme tingkat

rendah, DNA penyusun kromosom dan plasmid dibungkus oleh dinding sel (pada bakteri)

atau dibungkus oleh protein tertentu (pada 2irus). 7romosom eukariot berbentuk linear

sedangkan kromosom prokariot berbentuk sirkular. /elain itu prokariot juga mengandung satu


4/24

atau lebih plasmid. lasmid merupakan mulekul DNA sirkular dengan ukuran yang jauh lebih

keil dibanding kromosom.

• Isolasi DNA k&omosom/

rinsipnya adalah memisahkan DNA kromosom atau DNA genom dari komponen-

komponen sel lain. /umber DNA bisa dari tanaman, kultur mikroorganise, atau sel manusia.

embran sel dilisis dengan menambahkan detergen untuk membebaskan isinya, kemudian

pada ekstrak sel tersebut ditambahkan protease (yang berfungsi mendegradasi protein) dan

RNase (yang berfungsi untuk mendegradasi RNA), sehingga yang tinggal adalah DNA.

/elanjutnya ekstrak tersebut dipanaskan sampai suhu $&89 untuk menginaktifasi en:im yang

mendegradasi DNA (DNase). 4arutan DNA kemudian di presipitasi dengan etanol dan bisa

dilarutkan lagi dengan air.

• Isolasi DNA plasmi2

DNA plasmid merupakan 6adah yang digunakan untuk kloning gen, sehingga DNA

plasmid harus di pisahkan dari DNA kromosom. DNA plasmid mempunyai ukuran yang jauh

lebih keil daripada DNA kromosom. 0ntuk memisahkan DNA plasmid, maka memerlukan

perlakuan yang sedikit berbeda dengan prosedur di atas. ertama, membran sel dilisis dengan

penambahan detergen. roses ini membebaskan DNA kromosom, DNA plasmid, RNA,

protein dan komponen lain. DNA kromosom dan protein diendapkan dengan penambahan

potasium. DNA ; protein ; potasium yang mengendap dipisahkan dengan ara sentrifugasi.

/upernatan yang mengandung DNA plasmid, RNA dan protein yang tersisa dipisahkan.

7emudian ditambahkan RNase dan protese untuk mendegradasi RNA dan protein. Akhirnya

DNA plasmid dapat dipresipitasi menggunakan etanol.

• Isolasi RNA

RNA, terutama mRNA merupakan materi genetik yang mengkode suatu protein.

umlah populasi mRNA akan lebih banyak dibanding dengan DNA. mRNA eukariot dapat

dipisahkan dari DNA dengan menggunakan oligonukleotida d


5/24

DNA telah dikembangkan dari prinsip dasar tersebut, sehingga saat ini munul berbagai

teknik ekstraksi dan purifikasi DNA. rinsip dasar ekstraksi DNA adalah serangkaian proses

untuk memisahkan DNA dari komponen-komponen sel lainnya. "asil ekstraksi tersebut

merupakan tahapan penting untuk langkah berikutnya. =leh sebab itu dalam pelaksanaannya

harus dilakukan dengan baik dan bebas kontaminasi.

/eara kimia6i penghanuran sel dilakukan dengan memanfaatkan senya6a kimia

seperti >DDn:im proteinase 7 dapat digunakan untuk menghanurkan protein. 7otoran akibat lisis

sel dipisahkan dengan ara sentrifugasi. 7emudian molekul nuleotida (DNA dan RNA) yang

telah dipisahkan dibersihkan dari protein yang masih ada dengan menggunakan phenol.

Dalam proses ini sebagian keil RNA juga dapat dibersihkan. /edangkan holoform

digunakan untuk membersihkan sisa-sisa protein dan polisakarida dari larutan. >n:im

RNAase digunakan untuk menghanurkan RNA sehingga DNA dapat diisolasi seara utuh.

emurnian atau purifikasi DNA dapat dilakukan dengan menampur larutan DNA tersebut

dengan Na9l yang berfungsi memekatkan, memisahkan DNA dari larutan, dan

mengendapkan DNA se6aktu diampur dengan ethanol. roses sentrifugasi dengan keepatan

tinggi akan mengendapkan tepung ber6arna putih (DNA) dan menempel di dasar tabung

ependorf.

ada manusia, hanya sel darah putih yang mempunyai inti dan mengandung DNA. Agar

lebih efisien, isolasi DNA dilakukan hanya terhadap sel darah putih. =leh sebab itu sampel

darah total (whole blood ) yang masih segar langsung dipisahkan menjadi serum, sel darah

merah dan sel darah putih (dilapisan buffy coat ) dengan teknik sentrifugasi. /etelahdisentrifugasi, sampel darah total akan terbagi menjadi tiga lapisan, yaitu lapisan paling atas

merupakan serum, lapisan tengah ber6arna putih tipis adalah sel darah putih (buffy coat ) dan

lapisan ba6ah adalah sel darah merah. 4apisan kedua yang merupakan sel darah putih diambil

dengan klinipette.

olekul DNA dalam suatu sel dapat diekstraksi atau diisolasi untuk berbagai maam

keperluan seperti amplifikasi dan analisis DNA melalui elektroforesis. ?solasi DNA dilakukan

dengan tujuan untuk memisahkan DNA dari bahan lain seperti protein, lemak, dan

karbohidrat. risnsip utama dalam isolasi DNA ada tiga yakni penghanuran (lisis), ektraksi

atau pemisahan DNA dari bahan padat seperti selulosa dan protein, serta pemurnian DNA.


6/24

Ada beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam proses isolasi DNA antara lain harus

menghasilkan DNA tanpa adanya kontaminan seperti protein dan RNA@ metodenya harus

efektif dan bisa dilakukan untuk semua spesies metode yang dilakukan tidak boleh mengubah

struktur dan fungsi molekul DNA@ dan metodenya harus sederhana dan epat.

?solasi DNA merupakan langkah mempelajari DNA. /alah satu prinsip isolasi DNA

yaitu dengan sentrifugasi. /entrifugasi merupakan teknik untuk memisahkan ampuran

berdasarkan berat molekul komponennya. molekul yang mempunyai beratmolekul besar akan

berada di bagian ba6ah tabung dan molekul ringan akan berada pada bagian atas tabung

(ader, #$$3)

/etiap organisme memiliki DNA yang terletak dalam inti sel atau nukleus yang disebut

sebagai DNA kromosomal, begitu pula bakteri. Disamping DNA kromosom, beberapa bakteri

juga mengandung DNA ekstrakromosom yang disebut DNA plasmid. erbeda dengan DNA

kromosom, DNA plasmid berbentuk sirkular dengan ukuran yang jauh lebih keil dibanding

DNA kromosom. DNA plasmid hanya berukuran #.&&&-'&&.&&& pasang basa. DNA plasmid

terdapat bebas di dalam sitoplasma, dan dapat melakukan replikasi seara autonom.

ada bakteri jumlah plasmid yang dimiliki ber2ariasi bahkan sampai ribuan ataupun

tidak memiliki plasmid. lasmid bisa saja tidak terdapat pada bakteri yang biasa saja karena plasmid tidak mempengaruhi ketahanan hidup bakteri tersebut. lasmid hanya memberikan

sifat istime6a yang dimiliki oleh bakteri tersebut misalnya resistensi terhadap antibiotik.

eberapa karakteristik dari plasmid yang patut diketahui antaralain+ dapat ditransfer ke

bakteri lain dan memiliki =R? (Origin of replication) sehingga mampu mereplikasi diri tanpa

pengaturan dari DNA kromosom. Replikasi dimulai dari titik =R? hingga semua plasmid

tereplikasi. lasmid memba6a informasi genetik dan mengalami replikasi untuk

menghasilkan plasmid yang identik dan diturunkan selama pembelahan sel (affar, '&&).

lasmid sering digunakan sebagai 2ektor untuk memba6a gen-gen tertentu yang

diinginkan ke dalam suatu sel inang. =leh karena itu, perlu diperoleh plasmid yang tidak

terkontaminasi dengan kromosom agar diperoleh produk yang diinginkan.

erdasarkan fungsinya plasmid dapat dikelompokkan menjadi+

• 5ertility- 5 plasmids

erupakan plasmid yang dapat ditransfer dari satu sel ke sel bakteri lain untuk proses

konjugasi. lasmid ini juga mempunyai kemampuan untuk mentransfer DNA atau gen baik


7/24

yang terdapat dalam plasmid ataupun dalam kromosom. lasmid ditemukan antara lain

pada Escherichia coli, Pseudomonas sp, dan Streptomyces.

• Resistane- R plasmids

engandung gen yang resisten terhadap antibiotik atau raun dan inhibitor pertumbuhanlainnya. lasmid R dapat ditemukan pada Staphylococcus.

• lasmid penyandi baterioins

aterioins adalah senya6a yang diproduksi oleh bakteri untuk menghambat

pertumbuhan atau bakteri lain yang spesises atau galurnya berbeda. lasmid ini

mengandung gen struktural baterioins ataupun gen yang mengkode protein yang

berperan dalam pemrosesan dan transport baterioins. enamaan plasmid ini tergantung

pada organisme yang memproduksinya.isalnya plasmid 9ol pada bakteri Escherichia

coli yang mengkode oliins.• Degradati2e plasmids

erupakan plasmid yang mampu menerna subsansi yang tidak biasa, ontoh toluen dan

asam salisilat.

• Birulene plasmids

erupakan plasmid yang menjadikan bakteri tersebut patogen.

erbagai maam bentuk plasmid akan mempengaruhi keepatan migrasi plasmid dalam

elektroforesis. >lektroforesis adalah proses migrasi dari fragmen DNA di dalam gel yang

direndam dalam larutan buffer. 0rutan migrasi bentuk-bentuk plasmid tersebut dari yang

paling epat adalah superoiled, superoiled denaturated, rela1ed irular, dan niked open

irular. entuk plasmid yang semakin keil atau ramping akan lebih mudah bergerak melalui

pori gel agarose sehingga akan menapai bagian ba6ah terlebih dahulu. erjalanan molekul

DNA di dalam gel mengikuti arus listrik, dari kutub negati2e menuju kutub positif. /emakin

besar tegangan arus listrik, perjalanan molekul DNA akan makin epat, demikian pula

sebaliknya. Ada bermaam- maam :at kimia yang digunakan sebagai gel di dalam proses

elektrofoesis. enggunaan jenis gel disesuaikan denga tujuan yang akan diapai. Ada dua araelektroforesis, yaitu elektroforesis gel agarose dengan 2isualisasi menggunakan ethidium

bromide dan elektroforesis gel polyarilamide dengan 2isualisasi menggunakan sil2er

staining.

Ada berbagai maam kegunaan dari plasmid, dalam rekayasa genetika, plasmid

digunakan sebagai 2ektor untuk kloning DNA. /elain itu plasmid juga banyak digunakan

untuk perbanyakan jumlah DNA tertentu sehingga bisa mengekspresikan gen tertentu. Alasan

utama pengunaan plasmid ini adalah karena plasmid memiliki peta restriksi, adanya marker sehingga dapat diketahui apakah gen insert masuk atau tidak, memiliki opy number yang


8/24

besar, dan mudah dimodifikasi sesuai dengan tujuan tertentu. 7arena plasmid memiliki fungsi

yang bisa dimanfaatkan keuntungannya, maka ada banyak ara yang digunakan untuk

mengisolasi plasmid tersebut. lasmid yang diisolasi berasal dari bakteri. roses ini dikenal

sebagai proses mini preparation karena jumlahnya hanya sekitar #-'&Cg. /edangkan untuk

jumlah yang lebih besar (#&&-'&&Cg) digunakan midi preparation dan maxi preparation untuk

jumlah yang lebih besar dari '&& Cg.

Dalam isolasi DNA plasmid biasanya diperoleh plasmid dalam 3 topologi, yaitu+

o2alently losed irulair (), open irulair (o), dan linier (l). ?solasi plasmid bertujuan

untuk mengisolasi atau memisahkan plasmid dari molekul-molekul lain yang terdapat di

dalam sel (/uryani, dkk. '#).

7eberhasilan tahapan isolasi bergantung pada sumber bahan, konsentrasi bahan,

stabilitas, dan kadar kemurnian produk akhir. ?solasi plasmid terdiri dari tiga tahapan

kegiatan, yaitu tahap kulti2asi dan pemanenan atau har2esting, tahap lisis dan tahap

pemurnian DNA plasmid. 7ulti2asi yaitu proses reproduksi bakteri sehingga pada saat

pemanenan didapatkan plasmid dalam jumlah yang banyak. erusakan (lisis) dinding sel

bakteri dapat dilakukan dengan ara mekanis seperti sonikasi, tekanan tinggi, beku leleh

maupun dengan ara kimia6i menggunakan larutan lisis. lasmid yang diperoleh dimurnikan

dari berbagai kontaminan dengan penambahan fenol (ro6n '&&3).


9/24

plasma dan membran inti baik dengan ara mekanik maupun seara kimia6i. enambahan

detergen dalam isolasi DNA dapat dilakukan karena detergen dapat menyebabkan rusaknya

membran sel, melalui ikatan yang dibentuk melalui sisi hidrofobik detregen dengan protein

dan lemak pada membran membentuk senya6a lipid protein kompleks ( ahfud, '&& ).

aam-maam detergen yang digunakan juga berpengaruh pada hasil dari isolasi

DNA dengan kualitas baik karena kandungan pada masing masing detergen berbeda. ada

proses lisis dengan menggunakan detergen, sering digunakan sodium dodeyl sulphate (/D/)

sebagai tahap pelisisan membran sel. Detergen tersebut selain berperan dalam melisiskan

membran sel juga dapat berperan dalam mengurangi akti2itas en:im nuklease yang

merupakan en:im pendegradasi DNA. /elain digunakan /D/, detergen yang lain seperti etyl

trimethylammonium bromide (9


10/24

/etelah dilakukan proses presipitasi dan dilakukan penuian dengan etanol, maka

etanol kemudian dibuang dan pellet dikeringanginkan, perlakuan tersebut bertujuan untuk

menghilangkan residu etanol dari pelet DNA. enghilangan residu etanol dilakukan dengan

ara e2aporasi karena etanol mudah menguap. ada tahap penuian biasanya etanol

diampur dengan ammonium asetat yang bertujuan untuk membantu memisahkan kontaminan

yang tidak diinginkan seperti dN< ads dari Escherichia coliG

1/3 T,.,AN

• ahasis6a mampu melakukan isolasi DNA kromosom bakteri

• ahasis6a mengetahui dan mampu mengisolasi plasmid rekombinan p>< ads dari

bakteri Escherichia coli

1/( MAN+AAT

Dapat melakukan isolasi DNA kromosom (interselular) maupun plasmid

(ekstraselular) pada suatu bakteri

BAB II/ METODE PRAKTIK,M

/1 ALAT DAN BA0AN

• ISOLASI DNA KROMOSOM

Alat


11/24

- /entrifuse

- Borte1

- /haker ?nubator

- emanas air

-5ree:er

-


12/24

- /olution ??? (& m4 ! potasium asetat, ##.! m4 asam asetat glasial, '%.! m4

aEuadest)

- 9? (henolI9hloroformI?soamilalkohol)

- ufer

- >tanol pa

- Na asetat

/ CARA KER.A


• ISOLASI DNA PLASMID

embiakan dan emanenan akteri


13/24

?solasi plasmid


14/24

BAB III/ 0ASIL PENAMATAN DAN PEMBA0ASAN


15/24


ada praktikum kali ini kami melakukan perobaan isolasi DNA kromosom bakteri,

untuk mengisolasi DNA kromosom bakteri ini perlu dilakukan beberapa langkah yaitu

menumbuhkan bakteri dan pemanenan bakteri untuk mendapatkan sel yang ukup kemudian

pemeahan dinding sel bakteri dan yang terakhir pemurnian atau pemisahan kromosom dari

komponen-komponen sel lainnya.

enanaman untuk menumbuhkan sel bakteri dapat dilakukan dengan membiakkan

bakteri E!coli rekombinan yang diambil dari 4 padat dan ditumbuhkan di 4 air kemudiandishaker inkubasi selama #% jam pada suhu 3J9 dengan keepatan #!& rpm. Alasan

digunakannya shaker inkubator yaitu untuk meningkatkan aerasi sehingga mempermudah

dalam meratakan bakteri didalam media dan akhirnya pertumbuhan bakteri akan lebih

banyak.

/etelah penanaman yaitu dilakukan pemanenan, pemanenan dilakukan dengan ara

mengambil # ml biakan bakteri masukkan eppendorf #,! ml kemudian disentrifugasi selama !

menit keepatan #'.&&& rpm dengan keepatan ini maka akan mengendapkan sel-sel dari

bakteri sehingga yang diambil adalah natannya sedangkan supernatan dibuang. 7emudian

natan yang diperoleh diui dengan #ml / dan disentrifugasi lagi selama ! menit dengan

keepatan #'.&&& rpm penuian ini bertujuan untuk menghilangkan sisa-sisa media

supernatan. /etelah selesai penuian maka natan tadi disimpan pada suhu -'&J9.

emeahan dinding sel bakteri pada perobaan ini menggunakan metode "eat-/hok

yang dilakukan dengan ara mendidihkan pelet yang beku akibat disimpan disuhu -'&J9 tadi

selama * menit kemudian dilarutkan dengan !&Cl aEuabidest steril kemudian diresuspensi.


16/24

0ntuk mengisolasi DNA plasmid perlu dilakukan beberapa langkah yaitu penanaman

bakteri pada suatu media 4 air, pemanenan dan lisis sel bakteri serta pemurnian plasmid

DNA yang dilakukan dengan ekstraksi dengan pelarut organik atau metode kromatografi.

enumbuhan bakteri ini dilakukan dengan tujuan memperbanyak bakteri sehingga didapat sel

yang ukup untuk dilakukan dengan tujuan memperbanyak bakteri sehingga didapat sel yang

ukup untuk dilakukan proses selanjutnya. /ehari setelah penumbuhan bakteri dilakukan

pemanenan bakteri yang diambil sebanyak #,! ml dan dimasukkan ke tabuang eppendorf,

dilakukan pemeahanIlisis sel dengan sentrifugasi bakteri yang ada dalam tabung eppendorf

setelah ! menit. /upernatan (airan) sel dibuang, artinya DNA kromosom berada pada bagian

yang tidak larut yaitu pelet sel. roses sentrifuse di lakuakan sebanyak 3 kali berturut-turut

dengan tujuan mendapatkan pelet sel yang lebih banyak. "asilnya diresuspensi dengan

solution ? sebanyak #&&Cl dan di2orte1, lalu ditambah solution ?? sebanyak '&& Cl dengan

ara memipet #&& Cl /D/ #H dari #&H dan Na=" &,' N dari #& N sebanyak '& Cl serta

aEuadest steril %%& Cl dan dibolak-balik -% kali. 4alu, diinkubasi selama ! menit sampai

bening di es maka akan terjadi lisis dan diambil supernatannya. Ditambahkan #!& Cl solution

??? dan bolak-balik -% kali dan disimpan dalam es selama ! menit, lalu disentrifugasi dan

dipindahkan pada eppendorf baru. 0kur 2olume supernatan yaitu *!& Cl dan tambahkan 9?

dengan 2olume yang sama, di2orte1 dan sentrifus kembali (jangan lupa untuk memakai

sarung tangan saat bekerja dengan 9?). Diambil lapisan atas, ditambahkan etanol p.a ',!

kalinya dari *&& Cl dan Na asetat 3 sebanyak &,# kalinya dari 2olume supernatan saja yaitu

*&& Cl. Dilakukan presipitasi dengan suhu -'&89 didalam lemari es selama # jam, lalu

eppendorf ini disentrifugasi lagi dan diambil peletnya (residu) dan diui dengan etanol

dingin &H dengan ara resuspensi, lalu disentrifus lagi. /elanjutnya, pelet dikerngkan dalam

'& Cl buffer D


17/24

(/1 KESIMP,LAN

• ?solasi DNA adalah proses pemisahan DNA yang diinginkan dari molekul yang tidak

diinginkan.• lasmid merupakan DNA ekstrakromosom yang dapat replikasi otonom dan sebagai

2ektor transfer DNA.

• 4angkah isolasi adalah menumbuhkan bakteri, memanen bakteri, melisiskan dinding

sel bakteri dan pemisahan serta pemurnian plasmid DNA dari komponen lainnya.

(/ SARAN

?solasi DNA kromosom dan isolasi DNA plasmid harusnya dilakukan seara hati-hati

supaya tidak terkontaminasi pada tubuh.

BAB -/ DA+TAR P,STAKA

Dage ,Kohanis #$$'. "iokimia Dasar .andung+ enerbit Rekayasa /ains.

5esseden, Ronald A. '&&*. #in$auan %linis &asil Pemeriksaan 'aboratorium. akarta+

enerbit uku 7edokteran >9

/udjadi. '&&%. "ioteknologi %esehatan. Kogyakarta+ 7anisius


18/24

LAMPIRAN +OTO

Alat sentrifus


19/24

.9oli

emasukkan bakteri dalam tabung mikrosentrifus #.! ml


20/24


21/24


22/24

/upernatan dibuang untuk diambil peletnya dan dijadikan dalam tabung untuk

disentrifus

/upernatan dibuang untuk diambil peletnya dan dijadikan dalam tabung untuk

disentrifus


23/24

elet yang telah dipisahkan dengan supernatan di sentrifus selama ! menit

Dna kromosom diekstraksi dengan

mendidihkan pelet beku


24/24

elet disimpan pada suhu -'09

laporan isolasi dna kromosom dan plasmid

Documents