isolasi+dan+pemurnian+protein
TRANSCRIPT
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
1/23
Isolasi danPemurnian Protein
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
2/23
Tujuan
Mempelajari fungsi enzim/protein
Menentukan urutan asam amino
Mempelajari struktur
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
3/23
Sel mengandung ribuan protein
Prosedur pemurnian harus membedakan
protein yang diinginkan dari protein yanglain
Sifat protein merupakan kunci dalam
merancang protokol pemurnian
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
4/23
Sifat Protein
Muatan disebabkan oleh rantai samping
COOdan !"#$
%erat molekul protein ber&ariasi Titik isoelektrik' pI' p" ketika muatan
total protein nol
(ika protein dengan pI tertentu beradadalam larutan dengan p" tertentu' maka
p" ) pI ) p"!et$ !et
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
5/23
Prosedur pemurnian protein dapat dilakukankarena adanya &ariasi*
+elarutan' ukuran' muatan' bindingspecificity ,affinity-'sifat hidrofobik/hidrofilik
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
6/23
Sel
LisisOsmosisFreeze/ThawFrench pressGrindingglass beads
Sonication (bakteri)
Sentrifugasi
elet Supernatan!ebris sel
rotein terlarut
Isolasi Protein
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
7/23
!ama (enis Inhibitor Target Protease
PMS.
,Phenylmethylsulfonyl fluoride-
Ire&ersibel Ser ,$Cys- protease* terikatpada pusat aktif Ser/Cys
%enzamidine e&ersibel Ser dan Cys protease* inhibitorkompetitif
01T2 e&ersibel Metalo enzim* chelate metals
Pestatin ,pentapeptida $ gugusorganik-
e&ersibel 2sp3acidic3 protease* inhibitorkompetitif ,target* pepsin' "I4
protease-
2protinin ,56mer peptida- e&ersibel Serin protease' esterase*inhibitor kompetitif ,target*tripsin' kimotripsin' plasmin-
7eupeptin ,2cleuleu2rg- e&ersibel Ser dan Cys protease* inhibitorkompetitif
Inhibitor Protease* inakti&asi protease yang
dibebaskan selama lisis sel
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
8/23
Stabilisasi* +etika berada diluar lingkungan aslinya,nati&e-' protein menjadi kurang stabil8 Meskipun
organisme hidup pada temperatur #9oC' pemurnian
dilakukan pada temperatur :oC
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
9/23
Solubility ,Salting Out-
;aram berkompetisi
dengan air
Protein mengalami
agregasi melalui interaksi
&an der
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
10/23
Strategi Pemurnian
Muatan* +romatografi Penukar Ion
+epolaran* +romatografi Interaksi
"idrofobik?kuran* 1ialisis' ?ltrafiltrasi' ;el
elektroforesis' +romatografi .iltrasi ;el'
?ltrasentrifugasi
Spesifisitas* +romatografi afinitas
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
11/23
Ione@change Chromatography ,I0A-
Cation e@changers
contain negati&ely
charged polymer
2nion e@changerscontain positi&ely
charged polymer8
Is effected by p"
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
12/23
;el .iltration/Size 0@clusion
Chromatography
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
13/23
+romatografi Interaksi
"idrofobik Protein mempunyai Bdaerah3
hidrofobik dipermukaan yangdapat berinteraksi denganresin
esin yang mengandunggugus fenil atau alifatikmengikat protein* protein yangpaling hidrofobik akan terikatpaling kuat
0lusi dilakukan dengan pelarutyang kurang polar ataudengan menurunkan garamD
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
14/23
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
15/23
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
16/23
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
17/23
Schematic of "is7ink and "istag Interaction
Two site are a"ailable for #is$tag binding are rapidl% coordiwith histidine in the presence of a #is$tagged pol%peptide
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
18/23
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
19/23
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
20/23
2kti&itas 4s8 2kti&itas Spesifik
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
21/23
0lektroforesis S1SP2;0
Pemisahan protein
,molekul bermuatan
berdasarkan ukuran
dalam medan listrik Protein didenaturasi
dengan detergen anion
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
22/23
Penentuan Massa Molekul Protein
-
7/25/2019 Isolasi+dan+pemurnian+protein
23/23
2nalisa Tingkat +emurnian dengan
S1SP2;0
&' kstrak kasar' engendapan dengan garam
*' +romatogra, penukar ion-' +romatogra, ,ltrasi gel.' +romatogra, a,nitas
&0g protein/la1ur