isnainy dinul a352150021 - laporan bakteri patogen tumbuhan

8/18/2019 Isnainy Dinul A352150021 - Laporan Bakteri Patogen Tumbuhan

1/26

LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERI PATOGEN TUMBUHAN (PTN621)

Teknik Isolasi, De eksi !an I!en i"ikasi Bak e#i Pa o$en Tana%an

Isnainy Dinul Mursyalati Yus

A352150021

Dosen:

Dr. Ir. Kikin Hamzah Mutaqin M.!i

Dr. Ir. "iyanto M.!i

Asisten #raktikum:

$atit !astrini !.#

PROGRAM &TUDI 'ITOPATOLOGI

'AKULTA& PERTANIAN

&EKOLAH PA& A&AR ANA

IN&TITUT PERTANIAN BOGOR

2*1+


2/26

PENDAHULUAN

La a# Belakan$%akteri &a'at &itemukan &imana sa(a &en)an *era)amnya +isiolo)is yan) &imiliki masin),

masin) *akteri. %akteri yan) &itemukan *erasosiasi &en)an tanaman a&a yan) se*a)ai e'i+it en&o+it&an 'ato)en. %akteri 'ato)en atau +ito'ato)en meru'akan an))ota kelom'ok yan) terakhir yan)

(umlahnya relati+ se&ikit -Ka&o 1 2/ !i)ee 1 3 dalam !a&&ler 2002 . Dalam (urnal !a&&ler -2002menyatakan *ah a semua *akteri 'ato)en sam'ai saat ini masuk &alam %akteri Domain -yan)se*elumnya &ikenal se*a)ai u*a teria .

Ke*anyakan *akteri memiliki karakteristik mor+olo)i se ara umum yakni *er*entuk lurus atau *atan) yan) se&ikit melen)kun) &en)an &in&in) sel yan) kaku &an meta*olismenya aero*ik atau+akultati+ anaero*. #en)e ualian terha&a' an))ota &ari kelas Molli utes. An))ota &ari kelas Molli utesmeski'un masih *erhu*un)an &en)an *akteri "ram,'ositi+ se'erti lostri&ia &an *asil &imanakelom'ok ini ti&ak memiliki &in&in) sel yan) kaku.

!alah satu +aktor yan) menentukan &alam ter(a&inya 'enyakit tum*uhan ialah a&anya interaksi 'ato)en &en)an tanaman inan) yan) &itun(ukkan &en)an ter(a&inya 'ertum*uhan &an 'erkem*an)an 'ato)en &i &alam (arin)an inan). 4ntuk ter(a&inya in+eksi 'ato)en harus terle*ih &ahulu men)enalinan)nya -masa 'ra'enetrasi untuk selan(utnya melakukan in+eksi &an masuk ke &alam (arin)an inan)-masa 'as a 'enetrasi . !e*a)ai aki*at &ari a&anya in+eksi akan ter(a&i 'enyakit tum*uhan &antum*uhan (u)a akan menun(ukkan res'on se*a)ai salah *entuk 'ertahanannya.

#enyakit se*enarnya a&alah suatu 'roses &imana *a)ian,*a)ian tertentu &ari or)anisme ti&ak &a'at men(alankan +un)sinya se ara normal &en)an se*aik,*aiknya karena a&anya suatu )an))uan.$anaman &a'at &ilihat &ari &ua su&ut 'an&an) yaitu se ara *iolo)i &an ekonomi maka 'enyakittanaman'un men)an&un) unsur &ua su&ut 'an&an) ini. Dari se)i *iolo)i tanaman a&alah or)anismeyan) melakukan ke)iatan +isiolo)is sehin))a &ari se)i ini 'enyakit tanaman a&alah 'enyim'an)an &arisi+at normal sehin))a tanaman ti&ak &a'at melakukan ke)iatan +isiolo)is se'erti *iasanya.

%akteri ti&ak &a'at melakukan in+eksi &en)an menem*us 'ermukaan (arin)an tum*uhan yan)utuh. %akteri &a'at masuk ke &alam (arin)an tanaman melalui luka mekanis. A&anya tekanan ne)ati+ &i&alam 'em*uluh aki*at luka akan men)aki*atkan *akteri masuk ke&alam 'em*uluh sehin))a *akteriterse*ut terlin&un) &ari +aktor lin)kun)an yan) kuran) *aik. uka yan) &itim*ulkan oleh seran))a (u)a&a'at men(a&i (alan masuk *a)i *akteri.

%akteri +ito'ato)en memiliki &in&in) sel sehin))a &a'at &i*a)i la)i men(a&i *akteri "ram, 'ositi+ &an *akteri "ram,ne)ati+. #en)elom'okan ini *er&asarkan 'a&a kema'anan 'e arnaan 'a&amikrosko' yan) sama &en)an 'en&ekatan +ilo)enetik. Dalam hal ini semua *akteri "ram ne)ati+ tanaman ter aku' ke&alam Kelas #roteo*a teria -!ta ke*ran&t et al . 1 66 dalam !a&&ler 2002se&an)kan "ram,'ositi+ yan) &itemukan &i Kelas A tino*a teria -!ta ke*ran&t et al . 1 7dalam!a&&ler 2002 . Ke*anyakan *akteri +ito'atolo)i meru'akan *akteri "ram,ne)ati+ yan) mana *akteriyan) termasuk &alam ke&alam kelom'ok ini antara lain )enus A i&o8ora9 A)ro*a terium%urkhol&eria ntero*a ter r inia #antoea #seu&omonas alstonia &an ;anthomonas se&an)kan

*e*era'a *akteri "ram,'ositi+ yan) termasuk antara lain )enus


3/26

BAHAN DAN METODE

.ak !an Te%/a#raktikum %akteri #ato)en $anaman &ilaksanakan &i a*oratorium %akteriolo)i De'artemen

#roteksi $anaman =akultas #ertanian Institut #ertanian %o)or 'a&a *ulan >kto*er hin))a Desem*er 2015.

Ba0an !an Ala

1 Me!ia Pe# % 0an Bak e#iAlat &an *ahan yan) &i)unakan &alam 'raktikum ini a&alah me&ia *iakan *akteri yan)

ter&iri &ari Kin)?s % Agar Triphenyl Tetrazolium Chloride -$@< Yeast Dextrosa CaCO 3 Agar ( YDC 0.5 )ramA)ar 16 )ramAqua&es 1 liter

$!A 10B %akteri en&o+it $!% 3 )ramA)ar 20 )ramAqua&es 1 liter


4/26

2 Isolasi Bak e#i Pa o$en !an Bak e#i An a$onis !a#i a#in$an Tana%an !an Tana0Alat yan) &i)unakan *eru'a a an 'etri ta*un) reaksi erlenmeyer )elas ukur )elas

*aker glass %ead, mikro 'i'et 1 ml &an 200 E ti's mikro'i'et steril )untin) 'isau atau siletska'el (arum ose *ortex kertas tissu lam'u *unsen alat tulis &an la*el. !e&an)kan *ahan,

*ahan yan) &i)unakan &alam 'raktikum isolasi ini yaitu *akteri 'ato)en yan) &iisolasi &ari *er*a)ai tanaman antara lain

$a*el 2. Isolasi *akteri yan) &iam*il &ari *e*era'a sam'el tanaman%a)ian tanaman $anaman %akteri sasaranDaun $imun

Ku*is#a&i

'seudomonas syringae '8. glycinea anthomonas campestris '8. campestris anthomonas oryzae '8. oryzae

%atan) orteleun a

!r#inia caroto*ora alstonia solanacearum

#ele'ah #isan) %akteri en&o+it$anah &isekitar

'ertanaman *am*u

, Aktinomiset

Me&ium yan) &i)unakan &alam isolasi yaitu Kin)?s % YDH 3Bmalachite green 5 0B - F8 &alam H 2> sa+ranin 0 5 B- F8 &alam H2> crystal *iolet , lugol.siodine (iodone 0 g- potasium iodine (12) 4 g &alam aqua&es 100 ml alkohol 70B aku&essteril &an air *ersih.

+ De eksi !an I!en i"ikasi Bak e#i !en$an Teknik Molek la# Be# asis Asa% N klea%ahan &an alat yan) &i'erlukan untuk ektraksi D A kromosom *akteri a&alah isolat

*akteri ta*un) eppendor" 1 5 ml %u""er $ 'H 6.0 -10 mM $ris 1 mM D$A lysozim !D!10B a


5/26

6 U-i Po ensi Bak e#i An a$onisAlat yan) &i)unakan yaitu a an 'etri laminar air "lo#, kertas sarin) steril ta*un)

reaksi mikro'i'et ti's mikro'i'et glass %ead, (arum ose lam'u *unsen kertas tissu mistar&an kamera &i)ital.

%ahan yan) &i)unakan yaitu isolat *akteri 'ato)en -Isolat 1 , alstonia solanacearum,

!r#inia, anthomonas campestris '8. ampestris &an anthomonas oryzae '8. o ryzae) *akteria)ens hayati -Aktinomiset *akteri en&o+it me&ia A serta alkohol 70B.

K #7a Pe# % 0an !an Pe#0i n$an Po/ lasi Bak e#iAlat yan) &i)unakan yaitu ta*un) erlenmeyer ta*un) reaksi sha+er #ater%ath

s'ekto+otometer alat tulis &an kamera &i)ital. !e&an)kan untuk *ahan,*ahan yan) &i)unakanyaitu isolat *akteri !scherichia coli me&ium % &an aku&es steril.

8 Teknik Pen la#an 'i o/las%aAlat yan) &i)unakan yaitu silet kertas +ilm &an kamera &i)ital. %ahan yan) &i)unakan

yaitu tanaman ka an) tanah sehat &an tanaman ka an) tanah *er)e(ala sa'u setan.


6/26

Me o!eTeknik Ase/ ik

#eker(aan &en)an mikroor)anisme mem*utuhkan ke ermatan &an kera'ian yan) tin))i karenamikroor)anisme san)at terse*ar &i ruan)an &an 'eralatan. 4ntuk men e)ah kontaminasi mikro* nonsasaran &i'erlukan teknik ase'tik a)ar 'eker(aan &en)an mikro* sasaran men(a&i e+ekti+. $eknik ase'tik &ilakukan terha&a' ruan)an &an 'eralatan ker(a tan)an &an *ahan 'erlakuan. #elaksanaan

teknik ase'tik yan) *aik akan mem'ermu&ah &i'erolehnya mikro* non sasaran &alam *entuk *iakanmurni.Ke)iatan 'raktikum umumnya *ersi+at ase'sik sehin))a &ilakukan &i &alam laminar air "lo#

ca%inet . !e*elum melakukan 'eker(aan tan)an laminar air "lo# &isterilisasi men))unakan lam'u 4Gselama 15 menit setelah itu me(a ker(a &isem'rot &en)an alkohol 70B atau airan antise'tik lain. Ki'as

'a&a laminar &ihi&u'kan &an setia' kali men))unakan alat %ahan &an 'eralatan yan) akan &i)unakan&isterilisasi terle*ih &ahulu !elama *eker(a se'erti a an 'etri &an (arum ose harus &i'anaskanterle*ih &ahulu &en)an a'i *unsen. !terilisasi &a'at &ilakukan &en)an ara sterilisasi *asah sterilisasikerin) &an sterilisasi mekanik. !terilisasi yan) 'alin) umum &ilakukan a&alah sterilisasi *asah &en)anmeman+aatkan ua' air (enuh 'a&a suhu 121 o< selama 15 menit.

!terilisasi untuk me&ia &an alat &a'at &ilakukan &en)an teknik sterilisasi *asah &an sterilisasi

kerin). !terilisasi *asah &ilakukan &en)an men))unakan autokla+ &an sterilisasi kerin) &en)anmen))unakan o8en. !terilisasi men))unakan autokla+ &ilakukan 'a&a suhu 121 0< &an tekanan 15 atmselama 2 (am. Me&ia yan) su&ah steril &isim'an &i &alam re"rigerator &an anti*iotik 'a&a *e*era'ame&ia &itam*ahkan 'a&a saat me&ia akan &i)unakan. !e&an)kan alat,alat yan) su&ah steril akan&ilakukan sterilisasi kerin) &en)an &isim'an &i &alam o8en 'a&a suhu ruan) se*elum &i)unakan.

1 Teknik Isolasi Bak e#i Pa o$en !an Bak e#i Non9Pa o$enIsolasi *akteri 'enye*a* 'enyakit &imulai &en)an memanaskan me&ia *akteri steril yan)

telah &i*uat men))unakan o8en selama 2 menit. Me&ia yan) telah air &ituan)kan ke &alam 'etri&is 20 ml lalu &i&iamkan hin))a mem*eku &i &alam laminar air "lo# .a) Isolasi !a#i Da n

%akteri yan) &iisolasi &ari &aun yaitu !'esies 1 'enye*a* *er ak *erse)i 'a&a &aunke&elai anthomonas campestris '8. campestris 'enye*a* 'enyakit *usuk hitam 'a&aku*is &an anthomonas oryzae '8 & oryzae 'enye*a* 'enyakit ha ar &aun *akteri -kresek

'a&a 'a&i .%a)ian &iantara &aun sakit &an sehat &i'oton) ke il &en)an ukuran 1 5 9 1 5 m 2

kemu&ian &imasukkan ke &alam larutan kloroks 3B selama 1 menit. #oton)an &aunterse*ut kemu&ian &iam*il men))unakan 'inset steril &an &i*ilas selama 3 kalimen))unakan akua&es steril selama 20 &etik. Daun &ikerin)an)inkan 'a&a tisu steril.!elan(utnya &aun &i'oton),'oton) le*ih ke il men))unakan )untin) steril. #oton)anterse*ut &imasukkan ke &alam ta*un) reaksi yan) *erisi ml %u""er a


7/26

:) Isolasi Bak e#i An a$onis Ak ino%ise !a#i Tana0$anah se*anyak 1 ) &imasukkan ke &alam larutan %u""er a


8/26

&ikerin)an)inkan. !e*anyak tetes at % -larutan Io&in &iteteskan &i atas 're'arat &an

&i*iarkan selama 1 menit. #re'arat &i*ilas &en)an air men)alir lalu &ikerin)an)inkan. #re'arat

kemu&ian &itetesi tetes larutan at < -ethyl alkohol &an &i*iarkan selama 30 &etik lalu

&i u i kem*ali &an &ikerin)an)inkan. !elan(utnya 're'arat &itetesi &en)an larutan at D

-sa+ranin se*anyak tetes &an &i&iamkan selama 10 &etik lalu &i u i &an &ikerin)an)inkan.!etelah itu &iamati &i *a ah mikrosko'.

) U-i G#a% !en$an U-i KOH 3;O%/ect glass &isia'kan &an &itetesi &en)an K>H 3B. Koloni isolat hasil isolasi yan)

*erumur 2C (am &iam*il se*anyak satu lu' kemu&ian &isus'ensikan 'a&a larutan K>H 3B yan)telah &iteteskan 'a&a o%/ect glass .


9/26

Pen


10/26

'a&a suhu 5 o< selama 2 menit &an &ilakukan &en)an 35 siklus annealing 'a&a suhu sekitar 3 o< selama 30 &etik kstensi 'a&a suhu 72 o< selama 1 menit &an ekstensi akhir 'a&a suhu

yan) sama selama 7 menit. !e&an)kan 'roses am'li+ikasi #< men))unakan 'rimer s'esi+ik &ilakukan &en)an &enaturasi 'a&a suhu 5 o< selama 2 menit &an &ilakukan &en)an 2 siklus

'a&a 'a&a suhu 5 o< selama 30 &etik annealin) 'a&a suhu sekitar 3 o< selama 30 &etikekstensi 'a&a suhu 72 o< selama 1 menit &an ekstensi akhir 'a&a suhu yan) sama selama 7

menit.=is alisasi DNA Hasil P R%ahan -a)arose 1B &isia'kan yan) ter&iri &ari 2 )r a)arose &an 20ml %u""er$A 29

&imasukkan ke &alam )elas *eker &an &i'anaskan selama 3 menit atau sam'ai larutan terse*utmen(a&i *enin) &an &i&iamkan selama 3 menit. #a&a )el a)arose &i*uat sumuran &en)an sisir sesuai (umlah D A yan) in)in &i8isualisasi &an &itam*ahkan 5 El D A kemu&ian &iren&am&en)an larutan t%r selama 10 menit. Gisualisasi &ilakukan &en)an men))unakan mesinelektro+oresis selama 30 menit 'a&a te)an)an 70 8olt &an hasilnya &ilihat &en)an men))unakantransluminator 4G.

+ U-i An a$onis%e Bak e#i A$ens Ha


11/26

&an 7 (am *iakan !&coli &ilakukan 'latin) se*nyak 2 kali ulan)ansetia' +ase 'ertum*uhanyan) &iinokulasikan 'a&a me&ia A untuk melihat 'erkem*an)an (umlah koloni.Teknik Pen la#an 'i o/las%a

Disia'kan tanaman ka an) tanah sehat tanaman ka an) yan) *er)e(ala sa'u setan&iam*il &ari la'an)an. #a&a tanaman ka an) tanah yan) sehat &i*uat sayatan 'a&a a*an)tanaman. $anaman ka an) tanah yan) *er)e(ala &i 'oton) ti'is 'a&a *a)ian yan) *er)e(ala

+ito'lasma. !ayatan yan) telah &i*uat &item'elkan &en)an 'oton)an ti'is &ari tanaman yan)terseran) +ito'lasma. %a)ian yan) telah &item'el &i*un)kus &en)an seal .


12/26

HA&IL DAN PEMBAHA&AN

1 Pen$a%a an $e-ala /a!a ana%an inan$ !an 0asil -i 0i/e#sensi i" $a*el 3. "e(ala 'enyakit aki*at in+eksi *akteri serta hasil u(i hi'ersensiti+ 'a&a tanaman tem*akau

$anaman %akteri yan)&iisolasi=oto &an &eskri'si )e(ala =oto koloni

$imun-Daun

'seudomonas syringae '8. glycinea

%er ak nekrotik *ersu&ut 'a&a 'ermukaan atas&aun &isertai &en)an halo *er arna kunin) teran) arna: #utih kekunin)an

$e'ian: %er)elom*an)le8asi:


13/26

ortel-%uah

!r#iniacaroto*ora

$er&a'at len&ir ke oklatan &i 'an)kal ro' ku*ismem*entuk *usuh ke*asahan. %usuk *asah

terse*ut &a'at meluas ke *a)ian ten)ah ro'.

arna: Krem kekunin)an$e'ian: 4n&ulatele8asi:


14/26

$anah Aktinomiset

arna: #utih$e'ian: %ersetae &i seluruh

sisinyale8asi: Datar

%akteri yan) &iisolasi &iam*il &ari tanaman yan) menun(ukkan )e(ala khas yan) &iaki*atkan *akteri 'ato)en tertentu.!astrahi&ayat -2011 menyatakan *ah a ha ar &aun *akteri - %acterial lea" %light &ise*a*kan oleh anthomonas oryzae '8. oryzaememiliki iri koloni *er arna kunin) (erami sam'ai kunin) &en)an 'ertum*uhan koloni yan) lam*at. "e(ala a al &itan&ai &en)ana&anya tetesan,tetesan air kental &i'ermukaan u(un) &an te'i &aun yan) meru'akan masa *akteri 'a&a tanaman mu&a setelah tanam.%ila kon&isi men&ukun) maka akan ter*entuk *er ak,*er ak *esar meman(an) &ari u(un) &aun ke 'an)kal &aun yan) *er arna kunin).

uka akan *erkem*an) -mem*esar menyeru'ai te'un) ke'utihan. #ato)en akan masuk &aun melalui lu*an) alami se'erti hi&ato&a atauluka &an akan e'at meluas khususnya 'a&a musim 'en)hu(an karena masa *akteri yan) (atuh akan mu&ah &ise*arkan melalui

'en)airan. In+eksi sistemik yan) &ikenal se*a)ai kresek ter(a&i karena (arin)an &aun men)erin) &an mati khususnya 'a&a tanamanmu&a. !ementara 'a&a tanaman yan) tua &aun akan men)unin) &an mati. #a&a +ase selan(utnya 'enyakit akan sulit &i*e&akan &en)an)e(ala %acterial lea" strea+ . 4ntuk men)u(inya &a'at &ilakukan &en)an ara memoton) *a)ian *a ah &aun terin+eksi &an meren&amnya&alam larutan *asi +u hsin selama 1,2 hari.

Hasil 'raktikum menun(ukkan *ah a arna koloni !r#inia caroto*ora *er arna 'utih susu yan) semakin lama &isim'anmen(a&i arna krem. Hasil 'raktikum memiliki kesamaan &en)an 'en)amatan yan) &ilakukan !allytha et al&, -201C yan) menyatakan&alam (urnalnya yakni koloni !r#inia caroto*ora *er arna 'utih susu *erlen&ir men)kilat te'i rata &an tam'ak em*un) setelah&iinku*asi selama 2C (am. Holt et al . -1 C dalam !allytha et al&,-201C menyatakan *ah a kelom'ok A tinomy etes mem*entuk miselium *er a*an) setelah 2C (am 'a&a me&ia a)ar &an koloni mulai tam'ak setelah 3,C hari se&an)kan s'ora 'a&a aerial miselium&a'at ter*entuk setelah 7,1C hari.


15/26

Hasil U-i 'isiolo$i$a*el C. Hasil u(i 'e arnaan )ram &an K>H 3B

%akteri Hasil Dokumentasi 4(i 'e arnaan )ram 4(i K>H

'seudomonas syringae '8. glycinea "ram ne)ati+ - , %erlen&ir

anthomonas campestris '8. campestris "ram ne)ati+ - , %erlen&ir

anthomonas oryzae '8 & oryzae "ram ne)ati+ - , %erlen&ir

!r#inia caroto*ora "ram ne)ati+ - , %erlen&ir


16/26

alstonia solanacearum "ram ne)ati+ - , %erlen&ir

%akteri en&o+it "ram 'ositi+ - $i&ak %erlen&ir

Aktinomiset "ram 'ositi+ - $i&ak %erlen&ir

%ila &alam 'en)u(ian K>H 3B ti&ak a&a 'em*entukan len&ir len)ket yan) &a'at teran)kat le*ih &ari satu m oleh (arum ose kon&isiini &ikenal &en)an reaksi ne)ati+ &an mikro*a yan) &iu(i ter)olon) "ram #ositi+ - elliot an& !tea& 1 67 dalam Masnilah et al& 2013 . Dariketu(uh sam'el *akteri yan) meru'akan )ram 'ositi+ yakni isolat *akteri en&o+it &an isolat aktinomiset. Hal terse*ut (u)a &a'at &ilihat &ari

*entuk *akteri yan) mana 'a&a kelima sam'el yakni 'seudomonas syringae '8. glyciniea anthomonas campestris '8. campestris anthomonas oryzae '8 & oryzae !r#inia caroto*ora &an alstonia solanacearum memiliki *entuk *atan). #a&a umumnya *akteri yan) *ersi+at 'ato)en 'a&a tanaman meru'akan *akteri yan) *er*entuk *atan).


17/26

#e arnaan "ram &i)unakan untuk men)etahui mor+olo)i *akteri &an mem*e&akan antara *akteri "ram 'ositi+ &en)an *akteri "ram ne)ati+. ika &ilihat &i *a ah mikrosko' *akteri "ram 'ositi+ akan *er arna un)u karena &a'at menahan kom'leks 'e arna 'rimer kar*ol )entian8ioletio&ium sam'ai akhir 'rose&ur 'e arnaan. %akteri "ram ne)ati+ akan *er arna merah karenakehilan)an kom'leks arna kar*ol )entian 8ioletio&ium &en)an 'em*ilasan alkohol lalu ter arnaioleh 'e arna tan&in)an air +uksin -= . -A n&o+it -% Aktinomiset -< r inia -D #seu&omonas.- ;oo/ -= alstonia -" ;anthomonas.

%akteri yan) &iisolasi Hasil u(i H Hasil u(i >=

Anaero*-=ermentati+

Aero*->ksi&ati+

'seudomonas syringae '8. glycinea anthomonas campestris '8. campestris

anthomonas oryzae '8 & oryzae !r#inia caroto*ora

alstonia solanacearum%akteri en&o+it ,

Aktinomiset ,

#a&a 'en)u(ian hi'ersensiti+ 'a&a &aun tem*akau yan) &iin+iltrasikan &en)an sus'ensi isolataktinomiset &an *e*era'a isolat *akteri en&o+it ti&ak menun(ukkan ter(a&inya nekrosis 'a&a (arin)an&aun hin))a C6 (am setelah inku*asi. Hal ini mem*uktikan *ah a isolat yan) &iu(i *ukan *akteri

'ato)en tanaman. Hal ini sesuai &en)an 'en&a'at Kerr an& "i** -1 7 a'a*ila *akteri yan) &iu(i *eru'a *akteri 'ato)en maka akan ter(a&i nekrosis 'a&a &aun tem*akau &imana ter(a&i hu*un)an yan)kom'ati*le antara 'ato)en &an tem*akau. A'a*ila sus'ensi *akteri yan) &iin+iltrasikan 'a&a &auntem*akau ti&ak meran)san) res'on hi'ersensiti+ maka &a'at &i)unakan se*a)ai inokulan untuk 'ema u

'ertum*uhan tanaman - elliot an& !tea& 1 67 .

A B D E ' G


18/26

eaksi hi'ersensiti+ menye*a*kan han urnya seluruh mem*rane seluler &ari sel,sel yan) *erkontak &en)an *akteri &an kemu&ian &iikuti &en)an 'en)erin)an &an nekrosis (arin)an &aun yan)terseran) *akteri terse*ut -A)rios 200C . A&anya reaksi 'ositi+ ini mem*uktikan *ah a *akteri yan)&iu(i meru'akan 'atho)en tanaman.

Isolat alstonia solanacearum ti&ak &ilakukan u(i hi'ersensiti+ 'a&a tanaman tem*akau. Akanteta'i &iu(i 'a&a tanaman tomat yan) meru'akan tanaman se+amili &en)an tanaman leun a. Di&u)a

karena a&anya 'er*e&aan strain *akteri yan) menyeran) leun a &an tomat &an (u)a &aya in+eksi *akteri menurun 'a&a saat &ireisolasi. !elain itu isolat & solanacearum terse*ut meru'akan *akteriyan) menyeran) *a)ian 'em*uluh tanaman sehin))a &am'ak yan) akan &itim*ulkan ke&uanya *ukanter(a&inya nekrosis teta'i layu 'a&a tanaman. %er&asarkan i(iono -200 menyatakan * akteri &

solanacea rum teran)kut &alam 'em*uluh kayu &an 'a&a *atan) yan) lunak masuk &alam ruan) antar sel &alam kulit &an em'ulur yan) kemu&ian men)uraikan sel,sel sehin))a ter(a&i ron))a,ron))a.

%er&asarkan hasil u(i semua isolat *akteri yan) &iu(i mem*erikan reaksi 'ositi+ 'a&a 'en)u(ianoksi&ati+,+ermentati+ ->= -"am*ar 1. . Dari hasil u(i terse*ut *erarti semua isolat mam'umemeta*olisme kar*ohi&rat se ara +ermentati+. Ini &itan&ai &en)an 'eru*ahan 'a&a me&ium >= yan)&itutu' 'ara++in atau'un ti&ak &itutu' 'ara++in me&ium yan) a alnya hi(au *eru*ah men(a&i kunin)-#riharta 2006 .

eaksi 'ositi+ &itan&ai &en)an 'eru*ahan arna hi(au men(a&i kunin) yan) &imulai &ari 'ermukaan me&ia yan) ti&ak tertutu' minyak 'ara++in atau'un yan) tertutu'i 'ara+in setelah masainku*asi 7,1C hari. %er*e&a &en)an &eskri'si elliot &an !tea& -1 67 &an Asrul -2007 dalamMasnilah -2013 *ah a 'seudomonas syringae '8. glycinea *ereaksi 'ositi+ 'a&a u(i oksi&ati+ &an

*ereaksi ne)ati+ 'a&a u(i +ermentati+. eaksi 'ositi+ 'a&a u(i oksi&ati+ mem*uktikan %ah#a '& syringae '8. glycinea mem*utuhkan oksi)en untuk tum*uh &an mem'ro&uksi asam &alam kon&isi aero*sehin))a *akteri termasuk &alam )olon)an *akteri aero* -=ahy &an Hay ar 1 63 dalam Masnilah2013 . !e&an)kan reaksi 'ositi+ 'a&a u(i +ermentati+ kemun)kinan *isa &iaki*atkan a&anya kontaminasiatau'un *ahan,*ahan &alam 'em*uatan me&ia u(i su&ah ti&ak &alam kon&isi yan) o'timum atau

*ahkan *isa sa(a aki*at kesalahan 'en)er(aan aktu 'en)u(ian.%er&asarkan literatur &ari !astrahi&ayat -2011 *erikut si+at,si+at 'entin) &ari *e*era'a )enus

*akteri 'enye*a* 'enyakit tum*uhan.

$a*el 5. !i+at 'entin) &ari *e*era'a )enus *akteri 'enye*a* 'enyakit tum*uhan

In&ikator "enus *akteri

r inia #seu&omonas ;anthomonaseaksi )ram , , ,

>ksi&asiF+ermentati+ =ermentati+ >ksi&asi >ksi&asi

ika 'a&a me&ium yan) &itutu' yan) &itutu' 'ara++in teta' *er arna hi(au se&an)kan yan)ti&ak &itutu' 'ara++in arna me&iumnya *eru*ah men(a&i kunin) *erarti *akteri u(i mam'umemeta*olisme kar*ohi&rat se ara oksi&asi -#riharta 2006 . %er*e&a 'a&a *e*era'a isolat *akterise'erti 'a&a kelom'ok #seu&omonas &an ;anthomonas yan) &ise*utkan &i*e*era'a literatur menyatakan *ah a meru'akan oksi&asi akan teta'i 'a&a hasil 'raktikum men)hasilkan +ermentati+.A&a *e*era'a +aktor 'enye*a* hasil 'raktikum *er*e&a &en)an yan) a&a &i literatur antara lain&iaki*atkan a&anya kontaminasi atau'un *ahan,*ahan &alam 'em*uatan me&ia u(i su&ah ti&ak &alamkon&isi yan) o'timum atau *ahkan *isa sa(a aki*at kesalahan 'en)er(aan aktu 'en)u(ian.

#e arnaan s'ora &i)unakan untuk men)amati en&os'ora *akteri. n&os'ora hanya ter*entuk &alam lin)kun)an yan) ti&ak men)untun)kan se'erti kekuran)an nutrisi. %entuk ini tahan terha&a'

'emanasan &an unsur,unsur +isik lain se'erti 'em*ekuan kekerin)an ra&iasi ultra8iolet serta *ahan, *ahan kimia yan) &a'at men)han urkan sel *akteri. %ila kea&aan lin)kun)an kem*ali men(a&i *aik


19/26

maka &in&in) en&os'ora akan 'e ah &an *akteri mem*entuk sel 8e)etati+ kem*ali -


20/26

'seudomonas syringae '8. glyciniea

%er&asarkan hasil 'raktikum terlihat *ah a mekanisme anta)onis 'en)u(ian aktinomisetterha&a' kelima 'ato)en yan) &iu(ikan ialah mekanisme 'arasitisme. Aktinomiset yan) su&ahmem'arasit 'ato)en u(i menye*a*kan 'ato)en u(i ti&ak mam'u untuk tum*uh &i me&ia *uatan.Menurut D(atmiko -1 7 kemam'uan anta)onis &alam menekan 'ato)en in *itro karena 'a&a kon&isila*oratorium anta)onis hanya *erha&a'an &en)an 'ato)en &an a&a 'a&a lin)kun)an yan) kaya nutrisisehin))a mam'u memun ulkan kemam'uannya &alam men)ham*at 'ato)en.

Isolat aktinomiset ini *er'otensi untuk &i)unakan se*a)ai a)en 'en)en&ali 'ato)en tum*uhan.Hal ini &ikarenakan &ari hasil u(i anta)onis su&ah &i*uktikan mam'u menekan 'ertum*uhan 'ato)en&alam me&ia *uatan. Menurut Anu)rah ati -2011 aktinomiset men)eluarkan anti*iotik yan) 'ekaterha&a' *akteri )ram ne)ati+.


21/26

$a*el 7. Hasil u(i anta)onis *akteri 'ato)en &en)an *akteri en&o+it men))unakan meto&e paper dis+ di""usion

%akteri Hasil &okumentasi

anthomonas oryzae '8 & oryzae

alstonia solanacearum

anthomonas campestris '8. campestris

!r#inia caroto*ora

Menurut $ortora &kk , -2001 dalam 4tami -2005 'en)u(ian akti8itas *ahan antimikro*a se arain *itro &a'at &ilakukan melalui meto&e &i+usi akram. #rinsi' &ari meto&e &i+usi akram a&alahmenem'atkan kertas akram yan) su&ah men)an&un) *ahan antimiko*a tertentu 'a&a me&iumlem'en) 'a&at yan) telah &i am'ur &en)an isolat yan) akan &iu(i. Me&ium ini kemu&ian &iinku*asi

'a&a suhu 37J< selama 16,2C (am. !elan(utnya &iamati a&anya area -zona (ernih &isekitar kertasakram. Daerah (ernih yan) tam'ak &i sekelilin) kertas akram menun(ukkan ti&ak a&anya

'ertum*uhan mikro*a. Isolat yan) sensiti+ terha&a' *ahan antimikro*a akan &itan&ai &en)an a&anya


22/26

&aerah ham*atan &isekitar akram se&an)kan isolat yan) resisten terlihat teta' tum*uh 'a&a te'i kertasakram.

Anti*iotik yan) &ihasilkan mikror)anisme termasuk &alam hal ini *akteri en&o+it &alammelakukan ker(anya men)ham*at mikroor)anisme lain menurut !u an&i -1 2 dalam Diniyah -2010ter&a'at C (alur yaitu: men)ham*at sintesis &in&in) sel men)ham*at +un)si sela'ut sel men)ham*atsintesa 'rotein &an men)ham*at sintesis asam nukleat.

%er*e&a 'a&a hasil u(i anta)onis men))unakan paper dis+ isolat *akteri en&o+it ti&ak mam'umen)hasilkan zona ham*atF*enin) 'a&a me&ia yan) su&ah &i*eri masin),masin) isolat 'ato)en. Hal ini&i&u)a karena si+at anta)onis &ari masin),masin) isolat *akteri en&o+it su&ah menurun aki*at serin)&ilakukan 'emurnianF'uri+ikasi. $i&ak menutu' kemun)kinan 'emurnian yan) &ilakukan terlalu serin)&alam me&ia *iakan menye*a*kan *akteri su&ah menurun tin)kat anta)onisnya. !elain itu +aktor lainyan) menye*a*kan lemahnya si+at anta)onis *akteri en&o+it karena meman) *akteri en&o+it terse*utmemiliki si+at anta)onis yan) lemah -si+at )ennya . Menurut !to*el -2002 dalam Diniyah -2010ter*entuknya zona ham*at (u)a &a'at &i'en)aruhi oleh +aktor lin)kun)an &an *akteri u(i yan)

*erle*ihan sehin))a 'en)aruh meta*olit yan) &ihasilkan oleh *akteri en&o+it ti&ak si)ni+ikan terha&a' 'ertum*uahan *akteri & Solanacearum .

De eksi Be# asis Asa% N klea !en$an P R

"am*ar 2. Hasil #< &ari ekstraksi D A *akteri u(i &en)an 'rimer )eneral *akteri. -1 anthomonasoryzae '8. oryzae -2 alstonia solanacearum -3 "a)al -C n&o+it -5 "a)al -"a)al -7 Aktinomiset -6 !r#inia caroto*ora - & campestris '8. campestris -10

'seudomonas syringae '8. glycinae .

Dari hasil 8isualisasi terlihat *ah a hasil elektro+oresis menun(ukkan sam'el 'ositi+ yaitu&en)an ter*entuknya 'ita D A *erukuran C7 *' yan) &i8isualisasi &en)an elektro+oresis )el a)arose.#a&a "am*ar 2. $erlihat *ah a marker yan) &i)unakan meru'akan marker 100 *' &en)an 'itaam'li+ikon yan) &ihasilkan sekitar 500 *'. Kontrol 'ositi+ yan) &i)unakan meru'akan isolat murni

;oo koleksi la*oratorium &en)an ukuran C7 *' &an kontrol ne)ati+ men))unakan air. Am'li+ikasi )en1 ! r A men)hasilkan 'ita D A *erukuran 1500 *'. Analisis sequens )en 1 ! r A isolat u(imenun(ukkan a&anya kemiri'an &en)an *akeri & oryzae '8. oryzae . #ita yan) te*al terse*utmenun(ukkan *ah a )en 1 !r A isolat teram'li+ikasi &en)an *aik. Hal ini &a'at &ise*a*kan oleh

*e*era'a +aktor yan) mem'en)aruhi #< o'timasi am'li+ikasi #< &ari D A tia' isolat &ankesesuaian 'rimer yan) &i)unakan.

%er&asarkan hasil 8isualisasi ti&ak semua sam'el teram'li+ikasi &en)an *aik. Hal ini &i&u)akarena konsentrasi &ari ekstraksi D A yan) terlalu tin))i atau terlalu ren&ah. %ahkan ti&ak a&anya 'ita

1 5 + 6 8 > 1*2 3


23/26

yan) ter8isualisasi &ise*a*kan D A total yan) ti&ak a&a atau D A total yan) ter&e)ra&asi 'a&a saat&ilakukannya 'roses ekstraksi D A. Hasil 8isualisasi &ari elektro+oresis men(a&i 'an&uan untuk &ilakukannya meto&e #< - 'lymerase chain reaction . A'a*ila D A *akteri &iam'li+ikasi &en)anteknik #< men))unakan 'asan)an 'rimer )eneral 27= &an 1C 2 maka akan menun(ukkan hasilyan) 'ositi+. Hasil 'ositi+ &itun(ukkan &en)an ter*entuknya 'ita D A *erukuran 1500. %er&asarkanhasil 8isualisasi terlihat *ah a 'a&a semua sam'el D A yan) &ianalisis ter&a'at 'ita D A *erukuran1500 *' -!urya&i 201C .

Dari hasil 8isualisasi men))unakan 'rimer s'esi+ik untuk ;oo. #ita 'a&a urutan no 1meru'akan ekstraksi D A &ari sam'el tanaman yan) *er)e(ala ;oo. $erlihat arna teran) 'a&a sam'el;oo yan) mana menan&akan *ah a kromosom &ari ;oo ter&eteksi men))unakan 'rimer s'esi+ik.#en))unaan 'rimer s'esi+ik ;oo san)at mem*antu untuk i&enti+ikasi HD% &alam (umlah san)at

*anyak -$asliah 2013 .

Pen la#an "i o/las%a$a*el 6. $aha'an 'enularan +ito'lasma melalui gra"ting

#emoton)an *a)ian tanamanka an) tanah yan) terin+eksi+ito'lasma

%atan) tanaman sehat &i'oton)mirin) kemu&ian &i*elah 2

%a)ian tanaman yan) sakit

&isisi'kan 'a&a 'oton)an *atan)tanaman yan) sehat &an &irekatka

&en)an seal

"e(ala umum seran)an +ito'lasma *elum terlalu nam'ak &en)an (elasta'i &a'at &ilihat &aun ka an)

'ertum*uhannya san)at lamasetelah &ilakukan 'enyam*un)an

&en)an tanaman yan) terseran)+ito'lasma.


24/26

%er&asarkan hasil 'raktikum &i'eroleh hasil *ah a 'enularan tanaman ka an) yan) terin+eksi+ito'lasma ke tanaman ka an) yan) sehat ti&ak *erhasil. #enye*aran melalui teknik gra"ting meru'akan 'enye*aran yan) sulit &ilakukan men)in)at &alam teknik gra"ting hanya se&ikit tin)katke*erhasilannya. $eknik gra"ting yakni teknik yan) &i)unakan untuk menem'elkan antar mata tunastanaman. %ila ke&ua mata tunas &a'at menem'el &en)an sem'urna maka +ito'lasma yan) a&a&i(arin)an tanaman (u)a akan ikut ter*a a ke tanaman yan) &i(a&ikan gra"ting .

#enye*aran melalui teknik )ra+tin) ti&ak *e)itu 'entin) - i olaisen 2001 . #enye*aran+ito'lasma &ari tanaman ke tanaman lainnya *iasanya ter)antun) 8ektor seran))a. #enye*aran melalui8ektor seran))a se'erti eren) &an kutu meru'akan 'enye*aran yan) e+ekti+ &an ti&ak mem*utuhkan

aktu yan) lama.

K #7a Pe# % 0an Bak e#i

$erlihat &ari hasil kur8a 'ertum*uhan *akeri &ari (am 'ertama hin))a (am kesem*ilan kur8aterus men)alami kenaikan *aik 'a&a >D 1 mau'un >D 2. Kenaikan tertin))i 'a&a (am setelahinku*asi 'a&a >D 2 se&an)kan 'a&a >D 1 hanya men)alami se&ikit kenaikan. #a&a (am 'ertamameru'akan +ase la) yakni +ase &imana a&a'tasi *akteri terha&a' me&ia 'erkem*an)*iakannya untuk menyesuaikan &en)an kon&isi lin)kun)an &isekitarnya. ama +ase a&a'tasi ini &i'en)aruhi *e*era'a+aktor se'erti me&ium -lin)kun)an 'ertum*uhannya &an (umlah inokulum. ika me&ium &anlin)kun)an 'ertum*uhan sama se'erti me&ium &an lin)kun)an se*elumnya mun)kin ti&ak &i'erlukan

aktu a&a'tasi. $eta'i (ika nutrient yan) terse&ia &an kon&isi lin)kun)an yan) *aru *er*e&a &en)anse*elumnya &i'erlukan aktu 'enyesuaian untuk mensintesa enzim,enzim. $ak hanya itu umlaha al sel yan) semakin tin))i akan mem'er e'at +ase a&a'tasi.

=ase selan(utnya yakni +ase lo) atau 'ertum*uhan eks'onensial. $i&ak *utuh aktu yan) lama *akteri untuk melakukan 'em*elahan &iriFmem'er*anyak &irinya sehin))a kemun)kinan setelah 1 (am

aktu inku*asi su&ah ter(a&i 'em*elahan sel &an +ase lo) ini su&ah ter(a&i. #a&a +ase ini ke e'atan 'ertum*uhan san)at &i'en)aruhi oleh me&ium tem'at tum*uhnya se'erti 'H &an kan&un)an nutrient (u)a kon&isi lin)kun)an termasuk suhu &an kelem*a*an u&ara. #a&a +ase ini mikro*a mem*utuhkanener)i le*ih *anyak &ari 'a&a +ase lainnya.

aktu Inku*asi -(am

i l a i

> D


25/26

Dilihat &ari )ra+ik yan) terus naik *ah a sam'ai (am setelah inku*asi *elum menun(ukkana&anya *entuk kur8a yan) sta*il atau *elum ter(a&i +ase stationer. Hal ini menye*a*kan 'o'ulasi

*akteri &alam me&ia terus menerus men)alami 'em*elahan &an ke'a&atan 'o'olasinya terusmenin)kat. #a&a >D 1 terlihat antara 6, (am setelah inku*asi )ra+ik su&ah en&erun) ti&ak men)alami

'enin)katan yan) si)ni+ikan teta'i *elum *isa &ikatakan *ah a 'ertum*uhannya sta*il.

KE&IMPULANKesim'ulan &ari hasil ke)iatan 'raktikum 'a&a 'en)amatan )e(ala 'enyakit a&alah &i'eroleh

*e*era'a *akteri 'ato)en tanaman se'erti 'seudomonas syringae '8. glycinea yan) &iisolasi &ari &auntimun anthomonas campestris '8. campestris &iisolasi &ari ku*is & oryzae '8 & oryzae &iisolasi &ari&aun 'a&i !r#inia caroto*ora &iisolasi &ari um*i ortel &an alstonia solanacearum &iisolasi &aritanaman leun a se&an)kan untuk *akteri non 'ato)en &iisolasi &ari 'ele'ah 'isan) &an tanah &isekitar

'erakaran tum*uhan *am*u. Dari ketu(uh isolat terse*ut kemu&ian &iu(i untuk men)etahui kemam'uan+isiolo)is &an anta)onisnya. 'seudomonas syringae '8. glycinea & campestris '8. campestris &oryzae '8 & oryzae !r#inia caroto*ora &an alstonia solanacearum meru'akan )ram ne)ati+se&an)kan isolat *akteri en&o+it &an 1 isolat aktinomiset meru'akan )ram 'ositi+. #a&a aktinomisetti&ak &itemukan sel en&os'ora. Dari u(i +isiolo)is *akteri semua isolat *akteri u(i &a'at tum*uh se araaero* &an anaero* sehin))a se ara 'ositi+ menun(ukkan reaksi oksi&ati+,+ermentati+. !elain itu 'a&a u(ianta)onis aktinomiset mam'u menekan 'erkem*an)an 'ato)en sehin))a *er'otensi se*a)ai a)enshayati. %er*e&a 'a&a semua isolat *akteri en&o+it yan) mana ti&ak a&a satu'un yan) mam'umen)hasilkan zona ham*atF*enin). #enularan +ito'lasma &en)an teknik gra"ting ti&ak *erhasil. Darikur8a 'ertum*uhan *akteri terlihat *ah a sam'ai (am setelah inku*asi sam'el *akteri 1 &an 2 masihterus men)alami kenaikan 'ertum*uhan *akteri.


26/26

DA'TAR PU&TAKA

A)rios " . 200C. 'lant 'athology . =i+th &ition. !an Die)o

isnainy dinul a352150021 - laporan bakteri patogen tumbuhan

Documents