laporan preparat apusan darah (mikroteknik)

7/22/2019 Laporan Preparat Apusan Darah (Mikroteknik)

1/17

LAPORANPRAKTIKUM MIKROTEKNIK

PRAKTIKUM I

PREPARAT APUS (SMEAR PREPARATION)

OLEH

NAMA : I WAYAN RUSTANTO

NIM : F1D1 12 039

KELOMPOK : 3 (TIGA)

ASISTEN PEMBIMBING : FATMA CAHYA PUTRI

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HALU OLEO

KENDARI

2013


2/17

I. PENDAHULUAN

A. Latar BelakangMikroteknik atau teknik histologi merupakan teknik, keterampilan atau

seni dalam membuat preparat agar mudah diamati dan dapat ditelaah dibawa

mikroskop. Mikroteknik atau teknik histologi mempunyai dua metode secara

umum, yaitu metode embedded atau penanaman, dan metode unembedded/

tidak melalui penanaman. Salah satu teknik unembedded dalam pembuatan

preparat adalah menggunakan metode Smears atau metode geser. Metode

Smear biasanya digunakan untuk mengamati bentuk-bentuk sel-sel darah dan

penyusunnya, melalui proses pemisahan sel-sel baik secara kimiawi maupun

mekanik.

Darah merupakan bagian dalam sistem transport yang ada disetiap

organisme. Selain berfungsi menghantarkan oksigen ke seluruh tubuh, darah

juga membawa serta nutrisi-nutrisi yang diserap dari makanan melalui usus

halus yang akan disebarkan keseluruh tubuh. Darah merupakan jaringan yang

berbentuk cairan yang terdiri atas dua komponen yaitu plasma darah adalah

cairan yang mengandung sel-sel darah. Didalam plasma darah terlarut

berbagai macam zat antara lain zat makanan, protein, zat sekresi dan gas (O2,

CO2, dan N2). Plasma darah mengandung serum yang berfungsi sebagai

tempat pembentukan antibodi.

Ada tiga jenis sel darah, yaitu sel darah merah (eritrosit), sel darah

putih (leukosit), dan keping darah (trombosit). Eritrositatau sel darah merah

merupakan komponen darah yang jumlahnya paling banyak, berwarna merah,


3/17

serta tidak memiliki inti sel. Sel darah putih atau leukosit merupakan

komponen penyusun darah yang jumlahnya paling sedikit, berperan dalam

memperkuat antibodi atau sebagai anti bodi yang melawan penyakit, serta

strukturnya memiliki inti yang bermacam-macam. Trombosit/ keeping darah

disebut juga sel darah pembeku, yaitu bentuk keping darah tidak teratur dan

tidak mempunyai inti., serta berperan penting pada proses pembekuan darah.

Di dalam trombosit terdapat banyak sekali faktor pembeku (hemostasis) antara

lain adalah Faktor VIII (Anti Haemophilic Factor). Jika seseorang secara

genetis trombositnya tidak mengandung faktor tersebut, maka orang tersebut

menderita Hemofilia. Dari ketiga komponen darah tersebut, sama-sama

dibentuk di dalam sumsum tulang. Berdasarkan uraian diatas, maka dianggap

perlu untuk mengadakan pengamatan mengenai Preparat Apusan Darah

(Smear preparation), agar kita lebih tau teknik untuk membuat preparat

smears, serta mengetahui bagian-bagian dari darah.

B. Rumusan MasalahRumusan masalah pada praktikum Preparat Apus (Smear preparation)

yaitubagaimana cara membuat film darah tipis untuk mempelajari korpuskula

darah?

C. Tujuan PraktikumTujuan pada praktikum Preparat Apus (Smear preparation)yaitu untuk

mengetahui cara membuat film darah tipis untuk mempelajari korpuskula

darah.


4/17

D. Manfaat PraktikumManfaat yang diperoleh pada praktikum praktikum Preparat Apus

(Smear preparation) yaitu untuk dapat mengetahui cara membuat film darahtipis untuk mempelajari korpuskula darah.


5/17

II. TINJAUAN PUSTAKA

Pemeriksaan mikroskopik terhadap apusan darah yang diwarnai oleh

giemsa merupakan metode pilihan untuk mengidentifikasi pasien dengan

infeksi parasite darah, termasuk malaria, babesiosis, tripanosomiasis, dan

filariasis. Pada keadaan- keadaan tertentu, pemeriksaan apusan yang diwarnai

oleh giemsa dapat substitunsi. Harus disiapkan apusan tipis maupun tebal dari

darah segar atau telah mendapatkan antikoagulan EDTA. Sebelum diwarnai,

apusan tebal tidak difiksasi dan apusaan tipis difiksasi dengan metanol.

Apusan tebal harus diwarnai dengan reagen giemsa, karena reagen pewarnaan

wright mengandung suatu fiksatif alkohol yang mencegah lisis eritrosit

(Sacher, 2004).

Trombosit adalah sel darah tak berinti berasal dari sitoplasma mega

kariosit. Sel ini memegang peranan penting pada homeostasis dengan

pembentukan sumbat hemostatis untuk menutup luka. Sumbat hemostasis

dibentuk melalui tahapan adhesi trombosit, reaksi pelepasan dan

agregasitrombosit. Pemeriksaan fungsi agregasi trombosit dapat dikerjakan

dengan metode sediaan apus darah tepi Sediaan apus darah tepi adalah

pemeriksaan yang dapat dikerjakan dilaboratorium manapun, mudah dan

murah. Pada sediaan darah apus terlihat kelompok-kelompok trombosit yang

berada terutama dipinggir dan ujung sediaan seperti halnya sel besar. Keadaan

dimana trombosit besar dan banyak menggambarkan keadaan kecenderungan

agregasi lebih tinggi daripada gambaran kelompok trombosit yang kecil dan

sedikit. Pemeriksaan sediaan apus darah tepi untuk menilai fungsi agregasi


6/17

trombosit (untuk selanjutnya disebut pemeriksaan sediaan darah tepi) menilai

persentasi trombosit yang berkelompok dibandingkan total pada waktu

sebelum dan sesudah 3 menit pemberian induktor (Ronaldo, 2006).

Trombosit berfungsi menyumbat lubang-lubang kecil pada pembuluh

darah. Mula-mula sejumlah trombosit melekat ke kolagen yang terpapar dalam

dinding pembuluh darah yang rusak. Apusan darah tepi dapat memperlihatkan

trombositopenia atau trombositosis yang jelas, tetapi jarang pada pasien

dengan diatesis perdarahan. Selain itu, morfologi trombosit kadang-kadang

dapat berguna. Ingat, sediaan apus harus diambil dari ujung jari, karena

antikoagulan dapat merubah morfologi trombosit (membengkak, besar).

Morfologi sel darah merah juga dapat membantu, sperti pada DIC dimana sel

darah merah yang pecah dapat terlihat pada apusan. Morfologi sel darah putih

juga berguna seperti sel-sel poli yang menunjukkan perubahan yang

berhubungan dengan sepsis pada penderita DIC (Waterbury, 1998).

Leukosit memiliki jumlah yang lebih sedikit dibandingkan dengan

sel darah merah, yaitu berkisar antara 20.000/mm3hingga 150.000/mm3.

Bentuk sel darah putih adalah lonjong hingga bulat. Leukosit terdiri dari

agranulosit (monosit dan limfosit) dan granulosit (heterofil, eosinofi dan

basofil). Leukosit memiliki bermacam-macam fungsi, erat kaitannya untuk

menghilangkan benda asing (termasuk mikroorganisme patogen). Faktor-

faktor yang mempengaruhi jumlah leukosit adalah kondisi dan kesehatan

tubuh ikan. Infiltrasi granulosit muncul 12-24 jam setelah diinjeksi oleh


7/17

bakteri pada ikan rainbow trout. Setelah itu persentase granulosit dan

makrofag akan meningkat hingga 2-4 hari (Noercholis, 2013).

Fungsi utama dari sel darah merah (eritrosit)adalah mentransfer

hemoglobin. Eritrosit normal berbentuk bulat atau agak oval dengan

diameter 7 8 mikron (normosit). Dilihat dari samping, eritrositnampak

seperti cakram atau bikonkaf dengan sentral akromia kira-kira -

diameter sel. Dalam mengevaluasi morfologi sel darah merah pada

sediaan apus, ada 4 hal yang harus diperlihatkan bentuknya (shape), 2.

ukurannya (size), warnanya (staining), dan struktur intraselluler (structure).

(Patologi klinik, 2006 dalamWarni, 2009).


8/17

III . METODE PRAKTIKUM

A . Waktu dan tempat

Praktikum Preparat Apus (Smear preparation) dilaksanakan pada hariSenin, 25 November 2013, pada pukul 15.00-17.30 WITA, dan bertempat di

Laboratorium Zoologi, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam, Universitas Halu Oleo, Kendari.

B. Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum Preparat Apus (Smear

Preparation) adalah dapat dilihat pada Tabel 1.

Tabel 1. Alat-alat yang digunakan pada Praktikum Preparat Apus (Smear

Preparation) dengan metode Smears.

No. Nama Alat Fungsi

1.2.

3.

4.

5.

6.

MikroskopKaca objek

Kapas

Jarum frankle

Kertas label

Kamera digital

Untuk melihat objek pengamatan.Untuk meletakkan objek yang akan

diamati.Untuk menghisap larutan yang bertumpah,

serta media usap dalam sterilisasi jarumfrankle dan permukaan kulit.

Untuk menusuk jari yang akan diambildarahnya/ mengeluarkan darah.

Sebagai penanda preparat.

Sebagai pengambil gambar objek


9/17

Bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum Preparat Apus

(Smear preparation) dapat dilihat pada Tabel 2.Tabel 2.Bahan-bahan yang digunakan pada Praktikum Preparat Apus (Smear

preparation)

No Nama Bahan Fungsi

1

2

3

4

5.

Darah segar

Alkohol 70%

Aquadest

Larutan giemsa

Methanol

Sebagai sampel yang akan diamati.

Sebagai larutan pembersih.

Untuk mencuci/membersihkan sisa

alkohol.

Sebagai larutan untuk Mewrnai darah

Sebagai larutan untuk memfiksasi

darah.

C. Prosedur Kerja

Prosedur kerja yang dilakukan pada prakrikum Preparat Apus (Smear

preparation) dengan metode Smears adalah sebagai berikut:1. Pengambilan darah.

a. Mengayunkan tangan terlebih dahulu sebelum jarinya ditusukb. Membersihkan uung jari dengan kapas yang telah dibasahi alkohol 70%c. Memegang dan menekan sedikit jari tersebutd. Menusuk jari dengan jarum dengan arah tusukan tegak lurus garis-garis

sidik jari.

e. Mengusap tetesan darah yang pertama, kedua dan ketiga atau menghapusdengan kapas (tidak digunakan). Menggunakan tetesan darah berikutnya

untuk pemeriksaan.


10/17

2. Pembuatan preparat apusan darah.a. Menyiapkan dua kaca objek/ kaca preparat.b. Meletakkan setetes darah yang berasal dari ujung jari pada ujung kaca

objek yang pertama.

c. Mengmbil kaca objek yang kedua dan menyentuhkan salah satuujungnya pada kaca objek pertama di sebelah kiri tetesan darah

sehingga kedua ujung object glass tersebut membentuk sudut 45o ke

kanan.

d. Menggeser kaca objek kedua ke kanan sehingga tetesan darah beradadisudut

e. Mengeringkan preparat dan siap mewarnai.3. Pewarnaan preparat apus

a. Mengfiksasi preparat apus yang telah kering dengan methanol selama 3-5 menit

b. Merendam preparat apusan darah di dalam Giemsa selama 15 menit.Setelah itu mengeringkan di udara selama beberapa menit.

c. Mencuci preparat apus dalam air mengalir lalu mengeringkan dalamsuhu ruang, setelah kering, kemudian mengamati preparat apusan darah

di bawah mikroskop.


11/17

4. Pengamatan

a. Meletakkan preparat di papan preparat mikroskop dengan prosedur yangbaik.

b. Memulai pengamatan preparat dengan perbesaran rendah (40xperbesaran), jika belum dapat terlihat, meningkatkan perbesaran hingga

mendapatkan gambar yang jelas.

c. Mengambil gambar preparat dengan menggunakan kamera digital.


12/17

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil PengamatanHasil pengamatan pada praktikum Preparat Apus (Smear Preparation)

adalah sebagai berikut :

Keterangan :

1. Monosit2. Limfosit3. Neutrofil4. Basofil5. Eritrosit6. Eusinofil

1

2

3

4

6

5


13/17

B. Pembahasan

Darah vertebrata merupakan suatu jenis jaringan ikat yang terdiri atas

beberapa jenis sel yang tersuspensi dalam suatu matriks cairan yang disebut

plasma. Darah tersusun atas 55% plasma darh dan 45% unsur-unsur seluler

berupa sel dan fragmen sel. Darah merupakan bagian terpenting dalam sistem

transport. Darah merupakan jaringan yang berbentuk cairan yang terdiri atas

dua komponen yaitu plasma darah adalah cairan yang mengandung sel-sel

darah. Di dalam plasma darah terlarut berbagai macam zat antara lain zat

makanan, protein, zat sekresi dan gas (O2, CO2, dan N2). Plasma darah

mengandung serum yang berfungsi sebagai tempat pembentukan antibodi.

Terdapat dua kelas sel yang tersebar di seluruh plasma darah yaitu sel

darah merah yang mengangkut oksigen, dan sel darah putih, yang berfungsi

dalam pertahanan tubuh. Unsur seluler yang ketiga, keping darah, adalah

bagian sel yang terlibat dalam penggumpalan darah. Dari tiga tipe tersebut,

sel-sel darah merah yang paling banyak jumlahnya. Wanita normal

mempunyai 4,5 juta sel-sel ini dalam setiap millimeter kubik darah

Apusan darah merupakan salah satu cara mengamati materi-materi

yang ada dalam darah baik materi padat materi cairnya. Materi padat terdiri

dari sel darah merah sel darah putih, keeping-keping darah. Setelah diamati

menggunakan mikroskop tampak butiran-butiran dari eritrosit seperti gambar

pada hasil pengamatan.

Pembuatan preparat apusan darah, darah terlebih dahulu ditetesi ke

sebuah kaca objek pada tetesan ketiga, stelah itu darah tersebut digeser


14/17

dengan menggunakan kaca objek lain agar terbentuk filem dara yang tipie

dan rata sehinnga pada waktu pengamatan dibawah mikroskop. Setelah itu,

darah dikeringkan selama beberapa menit, barulah titetesi dengan methanol

beberapa tetes dan dikeringkan di suhu ruangan selama beberapa menit agar

darah yang akan diamati terjaga keawetannya, setelah itu barulah dilakukan

pewarnaan.

Saat pewarnaan preparat menggunakan larutan Giemsa, preparat

tersebut didiamkan selama 15 menit agar hasil filemnya lebih maksimal.

Setelah beberapa menit, preparat tersebut didiamkan sampai kering terlebih

dahulu baru dicuci dengan air mengalir sebab apabila belum kering tetapi

sudah dicuci maka ketika diamati menggunakan mikroskop maka darah akan

pudar.

Hasil pengamatan Preparat Apus (Smear preparation) eritrosit yangdiamati berbentuk butiran-butiran kecil berwarna sedikit transparan dengan

jumlah yang banyak dan pada bagian tengahnya seperti terdapat lekukan.

Selain itu, terdapat pula sel darah puti yang memiliki inti sel berwarna

keunguan dengan bentuk yang beragam dan ukurannya lebih besar dari sel

darah merah, namun jumlahnya sedikit.

Eosinofil berfungsi membunuh parasit, merusak selsel kanker dan

berperan dalam respon alergi.Jumlah eosinofil dalam sel darah putih yaitu

sekitar 2 - 4 %, dimana diameternya sama dengan diameter neutrofil yaitu 12

- 15 m. Jumlah nukleusnya terdiri dari dua lobe yang keduanya juga

terhubung oleh filament. Granula eosinofil berwarna merah kekuningan,


15/17

dalam sitoplasma jumlahnya sedikit sehingga nukleus masih dapat dilihat

jelas.

Basophil fungsinya berperan dalam respon alergi. Diameter basophil

lebih kecil dari neutrophil dan basophil yaitu sekitar 9-10 m. Jumlahnya 1%

dari total sel darah putih. Granulanya berwarna merah kebiruan dalam sel

jumlahnya sangat banyak hampir menutupi semua sel, sehingga nucleus yang

jumlah lobe dua dan terhubung oleh filament tidak dapat dilihat jelas.

Monosit ,berfungsi mencerna sel-sel yang mati atau yang rusak dan

memberikan perlawanan imunologis terhadap berbagai organisme penyebab

infeksi. Nuleusnya terdiri dari dua lobe yang menyatu. Jumlah monosit

sekitar 3 - 8 % dalam sel darah putih dengan diameter antara 16-20 m.

Limfosit fungsinya memberikan perlindungan terhadap infeksi virus

dan bisa menemukan dan merusak beberapa sel kanker dan membentuk sel-

sel yang menghasilkan antibodi atau sel plasma. Nukleusnya berbentuk bulat

hampir memenuhi sel atau dengan kata lain hanya ada satu lobe. Jumlahnya

sekitar 20-40% dalam sel darah putih, dengan diameter 8-10 m.

Neutrofil adalah adalah bagian sel darah putih dari kelompok

granulosit. Bersama dengan dua sel granulosit lain: eosinofil dan basofil yang

mempunyai granula pada sitoplasma, disebut juga polymorphonuclear karena

bentuk inti sel mereka yang aneh. Granula neutrofil berwarna merah kebiruan

dengan 3 inti sel.


16/17

IV. PENUTUP

A. KesimpulanBerdasarkan hasil pengamatan pada praktikum preparat smears maka

dapat ditarik kesimpulan bahwa cara membuat preparat apusan darah dengan

metode smears yang menggunakan larutan methanol sebagai larutan

fiksatifnya, dan giemsa sebagai pewarnanya, sehingga menghasilkan filem

darah dengan komposisi korpuskula darah yang terdiri dari sel darah merah

(eritrosit), sel darah putih (leukosit) dengan berbagai tipe sesuai bentuk inti sel

seperti; limsofit, neutrofil, dan eusinofil.

B. SaranSaran yang dapat diajukan pada praktikum uji karbohidrat yaitu

praktikan harus lebih aktif menjawab ketika asisten bertanya mengenai

praktikum yang akan dilaksanakan.


17/17

DAFTAR PUSTAKA

Noercholis, A., Muslim, M.A., dan Maftuch, 2013, Ekstraksi Fitur Roundnessuntuk Menghitung Jumlah Leukosit dalam Citra Sel Darah Ikan,Jurnal EECCIS,Vol. 7, No. 1.

Ronaldo, D., 2006, Perbedaan Nilai Agregasi Trombosit Antara Sediaan Darah

Segera Dengan Darah Yang Mengalami Penyimpanan Pada Hari

Pertama, Ketiga,dan Kelima. Skripsi, Universitas Diponegoro,

Semarang.

Sacher, R.A., dan Mcpherson R.A., 2002. Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan

Laboratorium, Buku Kedokteran, EGC, Jakarta.

Warni, E., 2009, Penentuan Morfologi Sel Darah Merah (Eritrosit) BerbasisPengolahan Citra Dan Jaringan Syaraf Tiruan, Jurnal Ilmiah

Elektrikal Enjiniring Unhas, Vol 07. No.03.

Waterbury, L., 1998.Hematologi Edisi Ketiga. EGC, Jakarta.

laporan preparat apusan darah (mikroteknik)

Documents