makmal serologi

MAKMAL SEROLOGI

PENGENALAN

Di dalam makmal serologi di Hospital Nukleus Labuan, ujian yang dilakukan adalah

seperti ujian saringan HIV, HCV, denggi dan beberapa ujian lagi. Makmal serologi ini berkait

rapat dengan makmal blood bank kerana di makma inilah ujian lanjutan bagi beg pendermaan

darah dilakukan iaitu ujian penyaringan. Darah yang diterima daripada kempen derma darah

akan disaring mengikut ujian seperti Ujian HIV, HCV dan bermacam lagi.

CARTA ORGANISASI MAKMAL SEROLOGI

MAKMAL SEROLOGI

Siti Noor Aisyah Bt. Md. HussinPSMP C41

Masri B. SuhaimiJTMP U32

Tajuk Ujian : Ujian Saringan Anti-HIV

Ujian saringan Anti-HIV adalah kit enzim imunoasai untuk mengesan antigen p24 HIV dan

antibodi HIV-1(kumpulan M dan O) serta serum atau plasma pesakit dalam HIV-2. Kit ini boleh

digunakan untuk kedua-dua saringan antigen HIV dan HIV antibodi.

Bahan & Radas :

Penyediaan reagen.

NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).

1. Penyediaaan reagen untuk digunakan.

Reagen 1 (R1) : Mikroplat

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting

atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas

pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan

semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada

+2-8°c.

Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif

Reagen 4 (R4) : Kawalan positif Ab HIV

Reagen 5 (R5) : Kawalan positif Ag HIV

Reagen 6 (R6) : Konjugat 1

Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir

2. Menyusun semula reagen

Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)

Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan untuk

membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.

Larutan kerja konjugat 2 : Reagen 7a (R7a) + Reagen 7b (R7b)

Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat 2 (R7a) secara perlahan-perlahan bagi

mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati

memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R7b) kepada pencair Konjugat

Lyophilised (R7a). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan perlahan-lahan

serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan penyelenggaraan.

Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)

Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10 ml

reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja

disediakan.

Prinsip :

Ujian saringan HIV Ag-Ab adalah enzim imunoasai berasaskan prinsip jenis ‘sandwich’ untuk

mengesan antigen HIV dan untuk pelbagai antibodi berkaitan dengan virus HIV-1 serta HIV-2

dalam serum atau plasma pesakit.

Fasa pepejal dilapis dengan:

1. Monoklonal terhadap antibodi p24 antigen HIV-1.

2. Antigen dtulenkan: gp160 protein rekombinan, peptida sintetik menyerupai sepenuhnya

(seperti dikodkan oleh virus yang tidak sedia ada).

1. HIV-1 kumpulan O-spesifik epitop dan peptida yang menyerupai immunodominan

kandungan HIV 2.

Konjugat berdasarkan penggunaan:

Biotinilated antibodi poliklonal Ag HIV (Konjugat 1)

Streptavidin dan antigen HIV- Konjugat peroksidase (gp41 dan gp36 peptides menyerupai

kandungan glikoprotein epitop immunodominan HIV- 1 dan HIV.

1. Kandungan glikoprotein dan peptida sintetik yang menyerupai kumpulan O- spesifik HIV

2. epitop digunakan untuk fasa pepejal) (Konjugat 2)

Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:

3. Konjugat 1 (biotinilat antibodi poliklonal p24 Ag HIV- 1) ditambah ke dalam petak kolum

mikroplat.

4. Sampel serum dan kontrol asai akan dipipet ke dalam petak kolum.

1. Jika hadir,antigen HIV akan mengikat dengan antibodi monoklonal yang terikat

pada fasa pepejal dan konjugat 1.

2. Jika ada antibodi HIV- 1 atau HIV- 2 mengikat pada antigen dan berubah kepada

fasa pepejal konjugat 1.

3. Pemendapan konjugat 1 dan sampel akan berubah warna daripada kuning hijau

kepada biru.

4. Selepas pengeraman pada suhu 37°c dan dibasuh, ditambahkan dengan konjugat 2:

1. Streptividin bertindak balas bersama biotinilated Ab-Ag-Ab kompleks.

2. Peroksidase dilabel,antigen HIV- 1 dan HIV-2 ditulenkan mengikat dalam bentuk

antibodi IgG,IgM atau IgA untuk pada fasa pepejal.

5. Selepas pengeraman pada suhu 18-30°c,pecahan konjugat 2 diasingkan dengan teknik

membasuh. Selepas pengeraman dalam kehadiran substrat pada suhu bilik (18-

13°c),kehadiran kompleks konjugat akan menunjukkan perubahan warna.

6. Tindak balas akan berhenti dan serapan akan dibaca oleh spektrofotometer pada

450/620-700 nm.Penyerapan diukur pada sampel untuk menentukan kehadiran samada

ada atau tidak Ag HIV atau HIV- 1 dan antibodi HIV- 2.

Kaedah Ujian :

1. Terima sampel daripada kaunter

2. Pastikan nama pada tiub dan borang pesanan adalah sama. Jika tidak sama, hantar

kembali ke kaunter

3. Daftarkan maklumat pesakit dan permohonan ujian di LabNet.

4. Emparkan sampel pada kelajuan 3500 rpm selama 5 minit

5. Keluarkan kit ujian dan biarkan pada suhu bilik.

6. Pastikan tarikh luput dan strip ujian berada dalam keadaan yang baik dalam kit ujian.

7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan

menggunakan 'marker'.

8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.

9. Titiskan 3 titik (75 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang

kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat dengan

menggunakan penitik.

10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.

1. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.

2. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang kedua, 1 titik (25 µl) 'HIV-1

sensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) 'HIV-2 sensitized particles' ke

'well' yang keempat.

3. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.

4. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.

5. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika

keputusan meragukan, ulangi ujian.

6. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian Anti HIV 1/2

dan borang Per. Pat 301.

7. Sahkan keputusan.

8. Hantar keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.

Interpretasi Ujian :

Sampel dengan kehadiran nilai kurang daripada nilai yang ditolak pada mulanya dianggap

negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.

Keputusan hanya nilai dibawah yang ditolak (C.O – 10% < OD <

C.O).Walaubagaimanapun,perlu ditafsirkan dengan berhati-hati (ini adalah untuk

pengulanganujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan jika sistem dan prosedur makmal

dapat melakukannya). Sampel dengan kehadiran nilai sama dengan atau lebih besar daripada

nilai yang ditolak dianggap positif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV. Ia perlu diuji dalam 2

salinan sebelum interpretasi keputusan akhir. Jika selepas sampel diuji, kehadiran nilai 2

salinan kurang daripada nilai yang ditolak,keputusan awal adalah tidak berulang dan sampel

disahkan negatif oleh ujian saringan Ag-Ab ULTRA HIV.

Tindak balas yang tidak diulang sering disebabkan oleh:

1. Mikroplat tidak dibasuh dengan baik.

2. Terkontaminasi oleh sampel serum atau plasma negatif dengan antibodi titre tinggi.

3. Terkontaminasi larutan subsrat oleh agen pengoksidaan ( peluntur,ion logam dan lain-

lain).

4. Terkontaminasi pemberhentian larutan.

Jika selepas pengulang ujian,kehadiran 1 salinan sama dengan atau lebih besar daripada nilai

yang ditolak,keputusan yang pertama diulang dan sampel disahkan positif oleh ujian saringan

Ag-Ab ULTRA HIV,tertakluk kepada had prosedur.

Tajuk ujian : Ujian Saringan HBs Ag ULTRA

Ujian saringan Ag HBs ULTRA merupakan satu enzim imunoasai dengan menggunakan teknik

jenis ‘sandwich’ untuk mengesan kehadiran antigen Hepatittis virus B (Ag HBs) dalam serum

atau plasma.

Bahan & Radas :

Penyediaan reagen.

NOTA : Sebelum guna, biarkan keadaan reagen berada pada suhu bilik (18-30°c).

1. Penyediaan reagen untuk digunakan.

Reagen 1 (R1) : Mikroplat

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut.

Gunting atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm

di atas pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak

digunakan semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula

penyimpanan pada +2-8°c.

Reagen 3 (R3) : Kawalan negatif

Reagen 4 (R4) : Kawalan positif

Reagen 10 (R10) : Larutan terakhir

2. Menyusun semula reagen

Membasuh larutan (20X perhatian) : Reagen 2 (R2)

Cairkan 1:20 dalam air suling untuk mendapatkannya dan sediakan sebelum digunakan

untuk membasuh larutan. Sediakan 800 ml untuk 1 plat bagi 12 petak kolum.

Larutan kerja konjugat (R6 + R7)

Goncangkan botol konjugat lyophilised konjugat (R7) secara perlahan-perlahan bagi

mengelakkan terdapat kehadiran bahan asing yang ada pada penutup getah. Berhati-hati

memindahkan penutup bagi kandungan botol pencair konjugat (R6) kepada pencair

Konjugat Lyophilised (R7). Gantikan penutup dan biarkan selama 10 minit,goncangkan

perlahan-lahan serta songsangkan semasa ke semasa untuk memudahkan

penyelenggaraan.

Larutan perkembangan enzim : Reagen 8 (R8) + Reagen (R9)

Cairkan 1:11 kromogen (R9) dalam substrat penampan (R8) (Bekas : 1 ml reagen R9 + 10

ml reagen R8). Kestabilan adalah selama 6 jam dalam keadaan gelap serta sekali sahaja

disediakan.

Prinsip :

Ujian saringan HBs Ag adalah enzim imunoasai berdasarkan prinsip jenis ‘sandwich’ iaitu

menggunakan antibodi monoklonal dan antibodi poliklonal yang dipilih untuk kebolehan

mereka mengikat kepada subjenis pelbagai HBs Ag. Diiktiraf oleh Pertubuhan Kesihtan

Sedunia (WHO) dan perkara yang paling HBV strain yang variasi.

HBs Ag fasa pepejal dilapisi dengan antibodi monoklonal.

Konjugat HBs Ag berdasarkan antibodi monoklonal yang digunakan daripada tikus dan

antibodi poliklonal daripada kambing terhadap HBs Ag. Antibodi ini terikat untuk

peroksidase.

Kaedah :

1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)

2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak

sama, hantar kembali ke UTD.

3. Isikan borang saringan ujian.




7. Pipetkan 100 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian.

8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'conjugate (R6 + R7)' ke strip ujian di langkah 7.

9. Eramkan selama 1 jam 30 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.

10. Selepas pengeraman, cuci strip ujian (rujuk prosedur penggunaan washer PW40).

11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.

12. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.

13. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.

14. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur

penggunaan mesin PR3100).

15. Sahkan keputusan

16. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.

Langkah-langkah prosedur tindak balas termasuklah:

1. Pengagihan kawalan sera dan sampel dilakukan ke dalam petak kolum mikroplat.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas

berbanding petak kolum yang kosong antara petak kolum yang ada sampel.

Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk membaca pada 490/620-

700 nm (pilihan).

2. Pengagihan konjugat berwarna merah ke dalam petak kolum.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Selepas penambahan larutan

konjugat,warna pada petak kolum akan berwarna merah. Kawalan secara automatik ini

mungkin untuk bacaan spektrofotometer pada 490/620-700 nm (pilihan). Pemendapan

sampel ini juga boleh menjadi kawalan pada langkah ini untuk memanipulasikan

bacaan automatik pada 490/620-700 nm.

3. Selepas pengeraman pada 37°c semasa satu jam dan separuh konjugat dipindah

secara membasuh.

4. Pengagihan larutan substrat bewarna.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Pewarnaan ini adalah lebih jelas

berbanding petak kolum yang kosong dan petak kolum larutan substart merah jambu.

Pengagihan ini juga boleh menjadi kawalan automatik untuk bacaan pada 490 nm

(pilihan).

5. Selepas 30 minit pengeraman dalam kehadiran substrat yang gelap dan suhu bilik (18-

30°c),kehadiran kompleks konjugat menunjukkan perubahan warna.

6. Pengagihan larutan terakhir.

Pengagihan ini boleh mnejadi kawalan visual: Larutan substrat pada mulanya bewarna

merah jambu akan berubah kepada jernih untuk petak kolum sampel yang tidak reaktif

dan berubah dari biru kepada kuning untuk petak kolum sampel yang posoitif.

7. Bacaan untuk ketumpatan optikal pada 490/620-700 nm dan interpretasi keputusan.

Interpretasi Ujian :

HBs Ag ULTRA. Keputusan dibawah hanya ditolak nilai (nisbah sampel antara 0.9 hingga 1).

Walaubagaimanapun, interpretasi keputusan hendaklah dilakukan dengan berhati-hati.

Pengulangan ujian dalam 2 salinan sampel yang sepadan adalah lebih baik jika sistem dan

prosedur makmal dapat melakukannya. Selepas sampel diulang semula,nilai nisbah 2 salinan

sampel kurang daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan sampel disahkan

negatif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA. Untuk reaktif awal atau sampel meragukan (0.9 <

nisbah <1),jika selepas pengulangan nilai nisbah sekurang-kurangnya satu daripada 2 salinan

adalah sama atau lebih besar daripada 1,keputusan yang pertama tidak akan diulang dan

sampel disahkan positif oleh ujian saringan HBs Ag ULTRA,tertakluk kepada had prosedur.

Tajuk ujian : Ujian Saringan HCV Ag-Ab ULTRA

Ujian saringan HCV ag-Ab ULTRA adalah enzim imunoasai untuk mengesan infeksi HCV

berdasarkan pengesanan kapsid antigen dan antibodi yang berkaitan dengan infeksi oleh virus

Hepatitis C di dalam serum atau plasma pesakit.

Bahan dan Radas :

Sebelum menggunakan reagen kit ujian saringan HCV Ag-Ab ULTRA,pastikan reagen dalam

kedaan baik pada suhu bilik selama 30 minit.

1. Penyediaan reagen untuk diguna.

Mikroplat (R1)

Dalam beg foil yang tertutup, setiap plat mengandungi 12 petak kolum yang dibalut. Gunting

atau potong beg tersebut dengan menggunakan pisau berukuran 0.5 hingga 1 cm di atas

pengedap. Buka beg dan keluarkan rangka. Letakkan petak kolum plat yang tidak digunakan

semula ke dalam beg. Tutup beg dengan berhati-hati serta letakkan semula penyimpanan pada

+2-8°c.

Konjugat 1 : Sediakan untuk digunakan (R6)

Songsangkan untuk mensebatikan sebelum diguna.

Konjugat 2 : sediakan untuk digunakan (R7)

2. Reagen yang digunakan semula

Konsentrasi larutan pembasuh untuk mencairkan R2 1:20 dalam air suling. Sediakan 800 ml

untuk 1 plat 12 petak kolum.

Larutan substrat untuk dicairkan (R8 + R9)

Reagen (R9) dicairkan menggunakan reagen R8 (contoh : 1 ml reagen R9 dalam 10 ml reagen

8ml). 10 ml mesti cukup untuk 1 hingga 12 petak kolum bagi mensebatikan.

Kawalan positif antigen (R5a + Rb)

Tuangkan kandungan R5 yang dicairkan ke dalam botol Ag R5 liopilised. Senaraikan botol dan

biarkan 10 minit dan goncang perlahan-lahan secara songsang dari semasa ke semasa untuk

memudahkan sebatian.

Prinsip :

Mikroplat fasa pepejal ujian saringan HCV Ag-Ab berlapis dengan :

1. Antibodi monoklonal terhadap kapsid protein virus Hepatitis C.

2. 2 produk protein rekombinan oleh E.coli daripada bahagian NS3 : genotip 1 dan 3a.

3. 1 antigen rekombinan daripada bukan struktural bahagian NS4.

4. Peptida bermutasi daripada bahagian strukutral kapsid genom virus hepatitis C.

Konjugat digunakan untuk :

1. Konjugat 1 (R6) : Antibodi monoklonal biotinilet tikus terhadap kapsid Hepatitis C.

Monoklonal ini tidak ada reaksi terhadap peptida bermutasi hepatitis C yang berlapis

pada mikroplat.

2. Konjugat 2 (R7) : Antibodi berlabel peroksidase tikus kepada IgG manusia dan

peroksidase berlabel streptividin.

3. Prestasi ujian termasuk langkah-langkah reaksi berikut :

4. Konjugat 1 dan sampel ditambahkan dengan kawalan sera untuk di uji pada petak

kolum. Jika antibodi HCV hadir,mereka akan terikat sebagai antigen tetap pada fasa

pepejal dan jika antigen kapsid hepatitis C hadir,antigen ini akan terikat oleh antibodi

monoklonal berlapis pada mikroplat oleh antibodi monoklonal biotinilet terhadap antigen

kapsid hepatitis C (konjugat 1).

5. Selepas pengeraman pada suhu 37°c selama 90 minit dan kaedah

pembasuhan,antibodi peroksidase berlabel IgG manusia dan peroksidase streptividin

(konjugat 2) ditambahkan. Konjugat streptividin peroksidase dengan antibodi

monoklonal biotinilet bertindak balas terhadap antigen hepatits C jika hadir. Konjugat

Anti-IgG manusia bertindak balas kepada peroksidase dan antibodi anti HCV jika hadir.

6. Selepas 30 minit pengeraman pada 37°c,enzim konjugat diasingkan melalui kaedah

pembasuhan dan menunjukkan kompleks antigen-antibodi oleh penambahan substrat.

7. Selepas 30 minit tindak balas akan berhenti,nilai serapannya dibaca dengan

menggunakan spektrofotometer pada 450/620-700nm. Serapan sampel diukur untuk

membolehkan mengesan kehadiran atau tidak hadir antibodi dan kapsid antigen HCV.

Warna intensiti berkadar pada kuantitti antibodi atau antigen HCV yang terikat pada fasa

pepejal.

Kaedah :

1. Penerimaan sampel daripada Unit Tabung Darah (UTD)

2. Pastikan nombor beg darah pada tiub dan borang rekod mobile adalah sama. Jika tidak

sama, hantar kembali ke UTD.

3. Isikan borang saringan ujian.




7. Pipetkan 100 µl 'conjugate 1 (R6)' ke strip ujian.

8. Seterusnya, tambahkan 50 µl 'control' atau 'sample' ke strip ujian di langkah 7.

9. Eramkan selama 90 minit pada suhu 37 °C di dalam 'incubator'.


11. Selepas cucian, tambahkan 100 µl 'conjugate 2 (R7)'.

12. Eramkan selama 30 minit pada suhu 37 °C.


14. Selepas cucian, tambahkan 80 µl 'TMB substrate(10 ml R8 + 1 ml R9)'.

15. Eramkan selama 30 minit pada suhu bilik (18°C-30°C) di tempat gelap.

16. Selepas pengeraman, tambahkan 100 µl 'stopping solution'.

17. Baca keputusan ujian pada panjang gelombang 450/620-700 nm (rujuk prosedur

penggunaan mesin PR3100).


19. Simpan keputusan ujian saringan dalam fail ujian saringan penderma darah.

Interpretasi keputusan :

Sampel dengan ketumpatan optik kurang daripada nilai yang ditolak dianggap negatif oleh

ujian anti-HCV Ag-Ab. Keputusan nilai yang ditolak dibawah hanya (C.O -10% < OD < C.O)

walaubagaimanapun,interpretasi dilakukan dengan berhati-hati (ini kerana adalah lebih baik

untuk pengulangan ujian dalam dua salinan sampel yang sepadan apabila sistem serta

prosedur makmal membenarkan. Manakala sampel dengan ketumpatan optik tinggi

daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak dianggap pada mulanya positif dan diuji dalam

dua salinan sebelum tafsiran terakhir.

Selepas diuji semula,sampel dianggap positif oleh ujian anti-HCV Ag-Ab jika pengukuran

kedua atau ketiga adalah positif. Tinggi daripada,atau sama dengan nilai yang ditolak,sampel

dianggap negatif jika nilai kedua-dua kurang daripada nilai yang ditolak.

Tajuk ujian : Ujian SD denggi IgG / IgM (BIOLINE)

Ujian cepat SD Bioline Denggi IgG/IgM bentuk pepejal imunokromatografik asai untuk

cepat,kualitatif dan pembezaan mengesan antibodi IgG/IgM kepada virus denggi dalam serum

manusia,plasma atau darah penuh. Ujian ini bertujuan untuk membantu secara profesional

dalam diagnosis andaian antara infeksi denggi primer atau sekunder. Ujian ini hanya

memberikan keputusan pada awal ujian. Oleh itu,penyelesaian untuk virus,antigen dikesan

dalam tissu tetap,RT-PCR dan ujian serologi seperti ujian hemagglutinasi-perencatan,kaedah

diagnosis lebih spesifik hanya digunakan dalam mengesahkan bagi infeksi virus denggi.

Bahan dan radas :

1. Pemungutan sampel.

2. Serum,plasma atau sampel darah penuh mesti digunakan dengan ujian ini.

Darah penuh.

(Pengambilan melalui salur vena).

1. Ambil darah penuh dan simpan dalam tiub (mengandungi tiub berantikoagulan seperti

heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena.

2. Jika spesimen darah tidak diuji segera,spesimen disimpan di dalam peti sejuk pada

suhu 2-8°C.

3. Apabila disimpan pada suhu 2-8°C,spesimen darah penuh boleh digunakan dalam masa

3 hari.

4. Untuk masa penyimpanan lebih daripada 3 hari,pembekuan adalah digalakkan.

Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum hendak digunakan.

5. Penggunaan spesimen darah menyimpan dalam jangka masa panjang lebih daripada 3

hari boleh menyebabkan reaksi tidak spesifik.

(Pemungutan menggunakan jarum lanset).

1. Bersihkan kawasan yang hendak ditusuk dengan lanset dengan swab kapas beralkohol.

2. Picit pada hujung jari dan tusukkan dengan lanset steril yang disediakan.

3. Ambil 10µl pipet kapilari yang disediakan,celupkan pada hujungdalm setitik darah

kemudian tekan darah pada pipet kapilari kepada garisan hitam.

serum atau plasma.

(Serum) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (TIDAK mengandungi

antikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena,biarkan

selama 30 minit untuk koagulasi darah kemudian emparkan darah untuk

mendapatkan spesimen supernatan serum.

(Plasma) pengambilan darah penuh dimasukkan ke dalam tiub (mengandungi tiub

berantikoagulan seperti heparin,EDTA dan sodium sitrat) melalui salur vena

kemudian empar darah untuk mendapatkan spesimen plasma.

1. Jika spesimen serum atau plasma tidak diuji segera,spesimen boleh diletakkan dalam

peti sejuk pada suhu 2-8°C. Untuk penyimpanan jangka masa panjang lebih daripada 2

minggu,pembekuan digalakkan. Spesimen dibiarkan pada suhu bilik sebelum

digunakan.

2. Spesimen serum atau plasma mengandungi mendakan mungkin boleh tidak konsisten

pada hasil ujian.

Prinsip :

Ujian cepat SD Denggi IgG/IgM adalah direka secara serentak mengesan dan membezakan

antibodi IgG dan IgM pada virus denggi dalam serum manusia,plasma atau darah penuh. Ujian

ini juga boleh mengesan semua 4 jenis denggi dengan menggunakan rekombinan protein

denggi. Ujian SD BIOLINE Denggi IgG/IgM terdiri daripada 3 anti garisan,”G” (garisan Ujian

denggi IgG),”M” (garisan Ujian denggi IgM),dan “C”(garisan kawalan) pada atas permukaan

membran. Keputusan boleh dilihat melalui semua ketiga-tiga garisan sebelum memohon mana-

man sampel. “Garisan kawalan” ini digunakan untuk kaedah kontrol. Garisan kawalan selalunya

muncul jika kaedah prosedur ini dilakuan betul dan reagen ujian garisan kawalan berfungsi. “G”

berwarna ungu dan garisan “M” akan dapat dilihat keputusannya jika antibodi IgG dan IgM

dalam sampel cukup untuk virus denggi. Jika antibodi IgG dan IgM tidak hadir di dalam sampel

untuk virus denggi,tidak ada perubahan warna yang akan berlaku dalam “G” atau “M”. Apabila

spesimen ditambahkan ke dalam kolum sampel,anti-denggi IgG dan IgM dalam spesimen akan

bertindak balas dengan rekombinan koloid-protein konjugat emas virus denggi dan bentuk

kompleks antigen-antibodi. Kompleks bertukar panjang dan peranti ujian oleh tindakan capilari.

Anti IgG atau anti IgM manusia akan menjadi relevan dalam dua garisan ujian serta

menghasilkan garisan berwarna.

Kaedah :



kembali ke kaunter





7. Tambahkan 10 µl serum/plasma ke ruang sampel bertanda "S" di kit ujian.

8. Titiskan 3-4 titik 'diluent' ke ruang bulat di kit ujian.

9. Tafsirkan keputusan ujian dalam 15-20 minit

10. Semak keputusan (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika

keputusan meragukan, ulangi ujian

11. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.


13. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.

Interpretasi ujian :

Negatif (Tidak ada infeksi denggi).

Satu garisan merah jambu “C”.

Positif

1. IgM positif (Infeksi denggi primer).

Dua garisan merah jambu “C” dan “M”.

Jika positif walaupun pada “M” ia adalah lemah.

2. IgG positif (Infeksi denggi sekunder).

Dua garisan merah jambu “C” dan “G”.

Jika positif walaupun pada “G” ia adalah lemah.

3. IgG dan IgM positif (Infeksi denggi primer akhir atau sekunder awal).

Tiga garisan “C”,”M” dan “G”.

Tidak sah.

1. Tidak ada garisan “C” untuk keputsan.

2. Sampel digalakkan untuk diulang dan diuji semula.

Tajuk ujian : Ujian RPR Kit.

Antigen karbon RPR digunakan dalam ujian bukan treponemal untuk kualitatif dan separuh

kualitatif mengesan siphilis menggunakan serum (dipanaskan atau tidak dipanaskan) dan

plasma.

Bahan dan radas :

Komposisi kit.

Kandungan piawai kit mungkin berbeza-beza bergantung dengan format yang dibekalkan.

Antigen (2 ml untuk 100 ujian kit,10 ml untuk 500 ujian kit)

Reagen ini sedia untuk digunakan dan dibekalkan dalam 2 ml/10 ml botol yang dihadkan. Masa

hanya dibenarkan untuk antigen mencecah suhu bilik sebelum ujian dan perlu digoncang untuk

memastikan kehomogenan.

Positif/negatif kawalan sera.

Kawalan yang dibekalkan boleh disemak secara berkala untuk kesahihan.

Kawalan yang dibekalkan sedia untuk digunakan.

Penbahagian botol (3ml) dan jarum.

Rekaan kompenen untuk pembahagian ujian antigen RPR. Untuk kegunaan,kepilkan jarum

pada hujung botol dan lakarkan serta GONCANGKAN antigen ke dalam botol. Keluarkan setitis

atau dua titis antigen bagi menyingkirkan kebarangkalian yang tidak mencukupi dalam sampel

kerana kehadiran udara dalam jarum. Ia adalah sangat penting untuk mengekalkan botol dan

jarum dalam kedudukan menegak apabila pendispensan antigen. Pada akhir ujian,jarum yang

telah digunakan mestilah dibuang,dibilas dengan air suling dan dbiarkan kering. Jarum

pendispensan tidak perlu dihapuskan kerana ia boleh mengeluarkan lapisan silikon yang

menyebabkan terdapat sestengah antigen mengikut jarum yang boleh mengakibatkan pada

antigen yang dihantar tidak mencukupi.

Kad ujian

Kad ujian ini digunakan dengan suspensi antigen RPR terutamanya penyediaan kad berlapis

plastik. Bulatan kad ujian ini mestilah tidak pernah tersentuh dengan jari,kerana ini mungkin

boleh menyebabkan keputusan ujian tidak sah. Ujian ini hanya boleh digunakan sekali sahaja

dan kad ujian mestilah dibuang.

Pipet stirrers (100 atau 500)

Titis demi titisan serum atau plasma dipindahkan pada permukaan kad ujian dan satu titis

bersamaan kira-kira 50µl. Dalam kualitatif ujian,titisan baru mesti digunakan untuk spesimen

ujian.

Prinsip :

Sifilis adalah penyakit kelamin yang disebabkan oleh mikorganisma spiroket Treponema

pallidum. Organisma ini tidak boleh dikultur pada media tiruan,diagnosis sifilis bergantung pada

kolerasi data klinikal dengan mengesan antibodi spesifik oleh ujian serologi. Ujian VDRL

antigen “Bukan Treponemal” dimana bermaksud antibodi mengesan bukan spesifik T.

Pallidum,walaupun kehadiran kuat menunjukkan infeksi oleh organisma. Langkah-langkah

antibodi (IgG dan IgM) dihasilkan dalam respon material lipoidal yang dibebaskan daripada sel-

sel perumah yang rosak serta lipoprotein seperti material yang dilepaskan oleh spiroket.

Selepas rawatan berjaya antibodi titre akan cepat jatuh.

Ujian penyaringan serologi bagi sifilis menggunakan kardiolipin dan lesitin iaitu antigen

merupakan sampel untuk melakukan tetapi untuk menjalankan boleh membawa sebahagian

kecil keputusan positif palsu kerana seperti yang dinyatakan di atas,ujian menggunakan “Bukan

Treponema” antigen. VDRL Antigen Partikel Karbon yang telah ditukarkan VDRL Antigen

mengandungi mikro-partikular karbon1. Ini adalah rekaan yang digunakan dalam ujian

pengelompokan untuk sero-diagnosis sifilis. Patikel karbon membantu bacaan keputusan

makrokospik. Keputusan reaktif lemah lebih mudah dan senang dikenal untuk corak bukan

reaktif dimana kehadiran makroskopik yang licin dan walaupun antigen ini sesuai untuk kedua-

dua ujian slaid manual serta Ujian Reagen Automasi2.

Kaedah :



kembali ke kaunter





7. Tambahkan 1 titik (gunakan 'dropper') RPR Carbon Antigen pada 50 µl serum/plasma di

kad ujian

8. Putarkan sampel pada kelajuan 100 rpm selama 8 minit

9. Semak keputusan(rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika


10. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi dan borang Per. Pat 301.


12. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat 301 ke kaunter.


Pada masa 8 minit pusingan terakhir keputusan positif akan menunjukkan ciri-ciri beragglutinasi

bermula dari sedikit (reaktif lemah) kepada kuat (reaktif kuat). Keputusan reaktif sangat lemah

ciri-cirinya adalah beragglutinasi kecil sekeliiling ujian periferi. Keputusan negatif tidak dapat

menunjukkan reaksi dan menunjukkan kehadiran makroskopik licin. Spesimen positif ujian

mestilah menjadi subjek kepada kajian serologi (seperti TPHA,FTA,dan ABS) setelah prosedur

kajian serologi banyak,diagnosis bagi sifilis mestilah tidak menjadi berubah kepada keputusan

satu reaktif. Untuk kaedah separuh kuantitatif,bacaan keputusan muktamad ujian akhir adalah

positif. Jika larutan ujian meningkat (1:32) ia masih menunjukkan reaktiviti kuat,pelarutan untuk

kali kedua hendaklah diteruskan sehinggalah titik akhir titre dapat ditentukan.

Tajuk ujian :ujian TPPA Kit.

Ujian TPPA digunakan untuk mengesahkan jangkitan sifilis setelah didapati positif bagi bakteria

sifilis dengan kaedah lain. Ujian ini mengesan antibodi untuk bakteria yang menyebabkan sifilis

dan boleh digunakan untuk mengesan sifilis disemua peringkat,kecuali pada 3 hingga 4 minggu

pertama.

Bahan dan radas :

Sel ujian : Eritrosit burung dilapisi dengan antigen T.pallidum diawet.

Sel kawalan : Eritrosit burung yang tidak dilapisi dengan antigen yang diawet.

Serum kawaln positif : (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati. Ini akan memberi titre

iaitu bersamaan 1/640:/2560 dalam ujian kuantitatif.

Serum kawalan bukan reaktif: (Larutkan 1:20). Gunakan secara berhati-hati.

Masukkan kit.

Semua reagen yang dibekalkan sedia untu digunakan.

Prinsip :

Ujian treponemal adalah ujian Kromosom Treponema Pallidum zarah (TPPA),(ujian

pengesahan) untuk mengesan serologi antibodi kepada pelbagai spesies dan subspesies

Treponema patogenik,agen penyebab sifilis,puru,pintal,bejel,sifilis endemik. Ujian ini adalah

satu prosedur kromosom pasif yang berasaskan atas menunjukkan pengagglutinasian zarah gel

yang peka dengan antigen T.Pallidum oleh antibodi yang ditemui dalam serum pesakit (1-3).

Ujian ini dicadangkan sebagai ujian pengesahan untuk menggantikan asai mikroagglutinasi bagi

antibodi T.Pallidum (MHA-TP).

Kaedah :


2. Pastikan nama pada tiub dan borang permohonan adalah sama. Jika tidak sama, hantar

kembali ke kaunter





7. Bahagikan 'microplate' kepada 3 bahagian dengan 4 'wells' setiap bahagian dengan

menggunakan 'marker'.

8. Labelkan 'wells' mengikut spesimen yang hendak diuji.

9. Titiskan 4 titik (100 µl) 'serum diluent' ke 'well' yang pertama, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang

kedua, 1 titik (25 µl) ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl) ke 'well' yang keempat

dengan menggunakan penitik.

10. Pipetkan 25 µl serum pesakit ke 'well' yang pertamadi langkah 9.

11. Lakukan pencairan bersiri dan pipet keluar 25 µl daripada 'well' yang keempat.

12. Titiskan 1 titik (25 µl) 'unsensitized particles' ke 'well' yang ketiga dan 1 titik (25 µl)

'sensitized particles' ke 'well' yang keempat.

13. Sebatikan campuran dengan diletakkan pada 'mixer' pada 1000 rpm selama 5 saat.

14. Eramkan pada suhu bilik selama 2 jam.

15. Semak keputusan. (rujuk fail pengendalian ujian serologi & kawalan kualiti). Jika


16. Rekodkan keputusan di LabNet, buku rekod ujian serologi , borang ujian TPPA dan

borang Per. Pat 301.


18. Hantarkan keputusan bersama borang Per. Pat. 301 ke kaunter.


Interpretasi kekerapan agglutinasi.

Kekerapan partikel Bacaaan Interpretasi

Partikel konsentrasi dalam bentuk seperti ‘button’

pada tengah bekas dengan sekeliling tepi yang

lembut atau licin. _ Tidak reaktif

Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat

dengan ‘lubang’ dalam sangat kecil pada tengah

bekas dengan sekeliling tepi yang lembut atau licin. _ Tidak reaktif

Partikel konsentrasi dalam bentuk cecincin padat

dengan ‘lubang’ pada tengah dan licin disekeliling

tepi. ± Tiada

kesimpulan

Partikel cecincin besar dengan bentuk multi kasar

diluar tepi dan agglutinasi periperal,dikelilingi oleh

bulatan merah kecil. 1+ Reaktif

Partikel agglutinasi merebak keluar menyeluruh

menyelaputi bawah bekas,dikelilingi oleh bulatan

merah kecil. 2+ Reaktif

Partikel yang licin menutupi atau menyelaputi kurang

daripada seluruh bawah bekas dan mungkin

dikelilingi oleh cecincin warna pucat. 3+ Reaktif

Partikel yang licin menyelaputi seluruh bawah bekas.

4+ Reaktif

makmal serologi

Documents