laporan biakan murni

5/21/2018 laporan biakan murni

1/15

BAB IPENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pada dasarnya, di alam bebas tidak ada mikroorganisme yang dapat hidup

sendiri dan lepas dari spesies lainnya. Di laboratorium, supaya kita hanya

mendapat satu spesies saja dalam suatu biakan campuran maka dilakukanlah

pembuatan media biakan murni.

Pembiakan adalah proses memperbanyak organisme dengan memberikan

keadaan lingkungan yang tepat. Menumbuhkan mikroorganisme adalah

membuat replika dari mikroorganisme tersebut, dan memerlukan unsur-unsur

yang ada dalam komposisi kimianya. Zat makanan harus menyediakan unsur-

unsur tersebut dalam bentuk yang dapat diakses secara metabolik.

Biakan murni adalah biakan yang hanya terdiri dari satu populasi jenis

mikroba yang semuanya berasal dari satu sel induk. Isolasi bakteri artinya

memisahkan satu jenis bakteri dari biakan campuran menjadi biakan murni.

Untuk mengisolasi suatu spesies dikenal beberapa cara, yaitu metode caan

sebar !spread plate", metode caan tuang !pour plate", dan metode caan

gores !streak plate". Untuk lebih memahami metode tersebut, khususnya

metode caan gores !streak plate", maka dilakukan percobaan ini.

1.2 Tujuan

Praktikum kali ini bertujuan untuk #

Mengetahui dan memahami teknik-teknik pembuatan biakan murni dari

biakan mikroba yang telah diisolasi dari lingkungan.

Mampu mendapatkan mikroba satu jenis spesies dengan menggunakan

biakan murni.


2/15

BAB IITINJAUAN PUSTAKA

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau $at-$at

hara !nutrient" yang digunakan menumbuhkan mikroorganisme di atas atau

didalamnya. %elain itu, medium dipergunakan pula untuk isolasi, perbanyakan,

pengujian si&at-si&at &isiologis, dan perhitungan jumlah mikroorganisme. 'al ini

kaitannya erat dengan postulat (ock) untuk menetapkan suatu jenis mikroba

sebagai penyebab penyakit harus terlebih dahulu harus mendapatkan mikroba

dalam keadaan murni !pure culture" untuk diselidiki si&at-si&atnya. Untuk tujuan

tersebut sangat diperlukan suatu medium !pembenih" sebagai tempat tumbuh dan

isolasi mikroorganisme.

*eknik pembuatan medium terus mengalami perkembangan. %ampai dengan

tahun +, penyiapan medium sangat memakan aktu karena harus dibuat dari

bahan mentah. %ekarang telah tersedia medium dalam bentuk bubuk !terdehidrasi".

Penyimpanan medium menjadi lebih mudah) tinggal menimbang, melarutkan dalam

air, menyesuaikan p' !kalau perlu", menempatkan dalam adah yang sesuai dan

kemudian baru mensterilkan. /amun di negara kita, sebagian besar medium jadi

masih harus diimpor dari /egara-negar maju.

0. Penjaminan Mutu Medium MikroboilogisProduk-produk medium dari industri !pabrik" harus ada aturan tentang

penggunaan semua produk medium mikrobiologis. 0spek-aspek yang harus

terstandar antara lain pengaasan, pemeliharaan, pembersihan, kalibrasi

peralatan, sanitasi, kontrol labeling, pengambilan sampel, penyimpanan, dan

distribusi medium. 'arus ada petunjuk &ormula dan dokumen untuk setiap

produk termasuk cara pengemasa produk medium.

Uji kualitas produk medium meliputi uji identitas, uji penampilan, dankompatibilitas komposisi komponen medium. Misalnya, pepton diuji secara &isik,

kimiai, dan mikrobiologik. 0gar diuji tentang klaritas, kekuatan gel, karakteristik

di&usi, dan sebagainya. Medium campuran yang telah jadi diuji penampakan,

homogenitas, dan isi campurannya.


3/15

B. Persyaratan Medium Biakan

Pembiakan mikroba dalam laboratorium memerlukan medium yang berisi $at

hara serta lingkungan pertumbuhan yang berisi $at hara serta lingkungan

pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme. Zat hara digunakan oleh

mikroorganisme untuk pertumbuhan, sintesis sel , keperluan energy dalam

metabolism, dan pergerakan. 1a$imnya, medium biakan berisi air, sumber

energy, $at hara sebagai sumber karbon, nitrogen, sul&ur, &os&at, oksigen,

hidrogen serta unsure-unsur sekelumit !trace element". Dalam bahan dasar

medium dapat pula ditambahkan &actor-&aktor pertombuhan berupa asam amino,

2itamin atau nukleotida.

Medium biakan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme dalam

bentuk padat, semi-padat, dan cair. Medium padat diperoleh dengan

menambahkan agar. 0gar berasal dari ganggang merah. 0gar digunakan

sebagai pemadat karena tidak dapat terurai oleh microbe, dan membeku pada

suhu diatas 3456. (andungan agar sebagai bahan pemadat dalam medium

adalah +,4 7 8, 9.

%etelah medium pembiakan disiapkan, harus disterilkan lebih dahulu

sebelum digunakan membiakan microbe. Bila medium biakan yang disiapkan

tidak disterilkan, microbe pencemaran akan tumbuh menyebabkan kita tidak

mengetahui apakah perubahan yang terjadi dalam medium disebabkan microbe

yang ditumbuhkan ataukah oleh microbe pencemar. Proses membunuh dan

melenyapkan semua mikroorganisme hidup yang terdapat dalam biakan disebut

sterrilisasi. Baru setelah disterilisasikan medium biakan siap dipakai.

Di laboratorium, sterilisasi medium menggunakan otokla& dengan tekanan

uap air, sehingga suhu dapat mencapai +8+56 dan tekanan +4 lbs atau + atm

selama +4 menit. 6airan yang tidak tahan panas, dapat disterilkan dengan

menggunakan berbagai macam saringan. 6ontoh cairan yang tidak dapat

dipanaskan adalah urea, berbagai macam karbohidrat, dan serum. 1a$imnya,

saringan yang digunakan mempunyai pori-pori sebesar ,34 um.

Pertumbuhan mikroorganisme dalam medium dapat tumbuh dengan baik

apabila memenuhi persyaratan, antara lain#


4/15

Medium harus mengandung semua nutrient yang mudah digunakan oleh

miroorganisme

Medium harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan, dan p'

yang sesuai dengan pertumbuhan mikroorganisme.

Medium tidak mengandung $at-$at yang menghambat pertumbuhan

mikroorganisme

Medium harus steril sebelum digunakan, supaya mikroorganisme dapat

tumbuh dengan baik.

6. Pengolahan Medium Biakan

Perbedaan si&at-si&at microbe terhadap induksemangnya akan berpengaruh

terhadap mediuam apa yang akan dipakai. %i&at mikroorganisme terhadap

hospesnya dapat sebagai parasit obligat, parasit &ukultati&, komensalis, sapro&itis,

dan lain sebagainya.

Berdasarkan sumber karbon yang digunakan, mikroba dibagi menjadi dua

kelompok. Mikroba yang mensintesis semua komponen sel dari karbon dioksida

dinamakan autotro&, sedangkan microbe yang memerlukan satu atau lebih

senyaa organiksebagai sumber karbon disebut heteroto&. /amun disamping

sumber karbon organic, heteroto& juga memerlukan karbon dioksida. Macam $at

organik yang diperlukan amat beragam bergantung pada setiap mikrobenya. 0dayang memerlukan + macam atau lebih senyaa organik dari yang sederhana

sampai yang kompleks.

Microbe autotro& dan heteroto& dapat dikelompokan lagi berdasarkan

energinya. :otoototro& !autotro& &otosintetik" merupakan ototro& yang dapat

meman&aatkan energy cahaya matahari dengan bantuan pigmen &otosintetiknya.

(hemototro& !ototro& khemosintetik" adalah kelompok mikrobe yang memperoleh

energy dari oksidasisenyaa-senyaa anorganik sederhana.misalnya nitrit,

nitrat, atau sul&ide. %ebagian besar bakteri termasuk khemootroto&, yaknimemerlukan sumber energi dari $at organik, misalnya glukosa, asam amino.

'anya sedikit saja bakteri yang tergolong kedalam kelompok &ototro&.

Pengertian Biakan Murni


5/15

Menurut Irianto !8;", Biakan adalah medium yang mengandung organisme

hidup. Medium itu menyediakan $at makanan untuk pertumbuhan bakteri.

Berbagai resep ramuan untuk membuat media telah dibuat untuk

memungkinkan tumbuhnya jenis-jenis tertentu. Medium pilihan dan

di&erensial berman&aat untuk memisahkan beberapa jenis. Identi&ikasi jenis

menggunakan semua si&at yang berkaitan dengan jenis. 'al ini mencakup

mor&ologi, daya gerak, si&at biokimianya, kebutuhan akan oksigen, reaksi

pearnaan gram, dan beberapa diantaranya si&at kekebalan !0nonim, 8ika bahan-bahan tersebut kita sebarkan pada medium

steril, maka akan tumbuh berbagai macam koloni yag mempunyai si&at yang

berbeda-beda. >ika kita mengambil bahan dari salah satu koloni tersebut,

kemudian bahan itu kita tanam pada medium baru yang steril maka bahan


6/15

itu akan tumbuh menjadi koloni yang murni, asalkan pekerjaan pemindahan

itu dilakukan denan cermat menurut teknik aseptik, yaitu menggunakan alat-

alat yang steril dan aturan-atuiran laboraturium tertentu. Biakan yang kita

peroleh dengan cara demikian kita sebut biakan pertama !primary culture"

dan si&atnya murni. Biakan semacam ini dapat disimpan, tetapi tiap-tiap

aktu tertentu harus diadakan peremajaan dengan memindahkannya ke

medium baru. Piaraan-piaraan yang diperoleh ari piaraan pertama disebut

piaraan turunan !sub-culture" ! Didjoseputro, +< ".

Mikroorganisme dibiakan di laboratorium pada bahan nutrient yang

disebut medium. Banyak sekali medium yang tersedia macamnya yang

dipakai bergantung kepada banyak &aktor, salah satu diantaranya ialah

macam mikrooragnisme yang akan ditumbuhkan. Misalnya ingin mengisolasi

biakan murni bakteri dari mulut. Maka liur diinokulasikan sedikit pada medium

yang cocok sedemikian rupa hingga sel-sel mikroba tumbuh terpisah-pisah

pada medium tadi. Bahan yang diinokulasikan pada medium itu disebut

inokulum. Dengan menginokulasi medium agar nutrient !nutrient agar"

dengan metode caan gores atau metode caan tuang, sel-sel itu akan

terpisah sendiri-sendiri. %etelah inkubasi, sel-sel mikroba indi2idu itu

memperbanyak diri sedemikian cepatnya sehingga di dalam aktu +ika dua sel mikroba pada

inokulum asal terlalu berdekatan letaknya pada medium agar, maka koloni

yang terbentuk dari masing-masing sel dapat bercampur dengan sesamanya,

atau paling tidak bersentuhan, jadi massa sel yang dapat diamati itu

bukanlah suatu biakan murni !Michael, 84".

Metode yang lebih langsung untuk mengisolasi mikroorganisme tunggal

ialah dengan menggunakan alat manipulatormikro yang disebut kuarmikro

!microscopic probe" untuk memindahkan satu sel dari suspensi $at alir sel.


7/15

*entu saja, manipulatormikro ini digunakan bersama-sama dengan

mikroskop !Michael, +?".

Beberapa teknik isolasi yang biasa dilakukan pada bakteri atau mikrobia

uniseluler. %alah satu yang paling umum dilakukan adalah teknik plate

culture. *eknik ini menggunakan caan petri untuk menumbuhkan mikrobia

dengan suatu medium !%alle, +?+". *eknik plate culture ini masih terbagi

lagi menjadi teknik-teknik spesi&ik, yaitu#

*eknik Streak Plate

*eknik streak plate !lempeng gores" adalah suatu teknik di dalam

menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara

menstreak !menggores" permukaan agar dengan jarum ose yang telah

diinokulasikan dengan kultur bakteri. Dengan teknik ini mikroorganisme

yang tumbuh akan tampak dalam goresan-goresan inokulum bekas dari

streak jarum ose.

*eknik Pour Plate

*eknik pour plate !lempeng tuang" adalah suatu teknik di dalam


mencampurkan media agar yang masih cair dengan stok kultur bakteri.

*eknik ini biasa digunakan pada uji *P6 !*otal Plate 6ount".(elebihan

teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata

pada media agar.

*eknik Spread Plate

*eknik spread plate !lempeng sebar" adalah suatu teknik di dalam


menuangkan stok kultur bakteri atau mengapuskannya di atas media

agar yang telah memadat. Bedanya dengan pour plate adalah,

pencampuran stok kultur bakteri dilakukan setelah media agar memadat

sedangkan pour plate kultur dicampurkan ketika media masih cair !belum

memadat". (elebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh

dapat tersebar merata pada bagian permukaan media agar !0nonim,

8


8/15

BAB IIIMET#D#L#$I PENELITIAN


9/15

%.1 &aktu an Te!'at

Praktikum dilaksanakan hari %elasa tanggal +; /o2emberl 8 pukul

arum ose

6aan petri

*abung reaksi

1ampu bunsen

Aak tabung

%.2.2 Ba(an

Media /0

0lkohol

%.% )ara Kerja

%.%.1 Metoe )a*an $ore+ 'aa )a*an Petri

>arum ose disterilkan menggunakan lampu bunsen.

Pegang jarum ose dengan menggunakan tangan kanan.

6aan petri yang telah berisi bakteri dipanaskan menggunakan

tangan kiri dan sambil dimutar caan petri dekan lampu bunsen

agar saat bakter diambil dengan menggunakan jarum ose yang

telah disterilkan tidak terkontaminasi oleh bakteri dari luar.

Bakteri diambil dengan menggunakan jarum ose yang telah

disterilkan.

>arum ose yang telah terdapat bakteri digoreskan ke media /0 di

caan petri.


10/15

>arum ose digoreskan dengan menggunakan teknik streak pada

tiga kuadran medium padat. aitu &irst streak, second streak, dan

trird streak.

Menginkubasi secara terbalik caan petri yang telah digores pada

suhu ;6 selama 83 jam.

%.%.2 Metoe )a*an $ore+ 'aa Ta"ung ,eak+i -Meia NA !iring

>arum ose disterilkan dengan menggunakan lampu bunsen.

Pegang jarum ose dengan menggunakan tangan kanan.

6aan petri yang telah berisi bakteri dipenggang menggunakantangan kiri dan sambil dimutar caan petri dekan lampu bunsen

agar saat bakter diambil dengan menggunakan jarum ose yang

telah disterilkan tidak terkontaminasi oleh bakteri dari luar.

Bakteri diambil dengan menggunakan jarum ose yang telah

disterilkan.

>arum ose yang telah terdapat bakteri digoreskan ke media /0

miring di tabung reaksi.

>arum ose digoreskan hanya menggunakan satu goresan yang

berbelok-belok saja.

Mulut tabung reaksi ditutup menggunakan kapas.

Menginkubasi tabung reaksi yang telah digores pada suhu ;6

selama 83 jam.

%.%.% )ara !elakukan /a*an gore+

First streak, Menggunakan jarum ose digoreskan pada media /0

dicaan petri dengan goresan pertama digores secara rapat.

Second streak, Menggunakan jarum ose digoreskan pada media

/0 dicaan petri dengan goresan yang agak jarang.

Third streak, Menggunakan jarum ose digoreskan pada media /0

dicaan petri dengan goresan yang jarang.


11/15

(etiga jenis goresan dilakukan secara tidak terputus dan selalu

menyambung dari goresan pertama hingga goresan ke tiga.

BAB I0HASIL DAN PEMBAHASAN

.1 Ha+il Penga!atan


12/15

/0

+. :% !:irst %treak"

8. %% !%econd %treak"

. *% !*hird %treak"

/0

+. :% !:irst %treak"

8. %% !%econd %treak"

. *% !*hird %treak"


13/15

.2 Pe!"a(a+an

*ujuan praktikum kali ini adalah untuk melakukan pembuatan biakan murni

dengan hanya menghasilkan satu spesies bakteri serta mengetahui teknik-teknik

dalam melakukan pembuatan biakan murni dengan menggunakan metode

caan gores.

Dalam metode caan gores, kami menggunakan teknik streak pada tiga kuadran

medium padat, yaitu#

(uadran pertama, yaitu &irst streak yang goresannya sangat

rapat.

(uadran kedua, yaitu second streak yang goresnnya agak

jarang dan goresan dimulai dari ujung &irst streak.

(uadran ketiga, yaitu third streak yang goresannya jarang-

jarang dan goresannya dimulai dari ujung second streak.

%ehingga didapatkan goresan yang saling menyambung dari &irst streak hingga

third streak.

Pada tabung reaksi kami menggunakan media /0 miring. Media /0 miring ini

dibuat untuk mendapatkan permukaan yang luas untuk tumbuhnya bakteri dan

memudahkan kami untuk melakukan penggoresan yang menggunakan

penggoresan yang bentuknya $ig-$ag dari ujung dalam tabung reaksi.

'asil percobaan yang kami dapatkan tidak sempurna. 'al ini dikarenakan saat

melakukan penggoresan bakteri yang telah diambil pada biakan bakteri dangan

menggunakan jarum ose, kami ragu-ragu. %elain itu percobaan yang kami

lakukan kurang aseptik sehingga terjadi kontaminasi oleh bakteri dari luar.

%eharusnya, saat melakukan panggoresan jangan ragu-ragu agar yang

dihasilkan goresan yang tegas, serta usahakan jangan membuka penutup caan

petri dan tabung reaksi terlalu lebar agar tidak terjadi kontaminasi dengan bakteri

dari luar.

BAB 0PENUTUP

.1 Ke+i!'ulan


14/15

Mengetahui teknik-teknik menggunakan metode caan gores

dengan melakukan teknik streak pada tiga kuadran medium padat, yaitu &irst

streak atau goresan yang rapat, second streak atau goresan yang agak

jarang, dan third streak atau goresan yang jarang-jarang. Dimana setiap

goresan saling menyambung dari &irst streak hingga third streak.

*idak bisa mendapatkan satu jenis spesies bakteri jika

percobaan dilakukan kurang aseptik karena terkontaminasi bakteri dari luar.

.2 Saran

Diharapkan saaat melakukan penggoresan jangan ragu-ragu untuk

melakukannya, agar didapat goresan yang sempurna.

%aat melakukan penggoresan diusahakan jangan membuka

penutup pada caan petri dan tabung reaksi terlalu lebar, untuk menghindari

kontaminasi bakteri dari luar, sehingga hanya didapatkan satu jenis spesies

bakteri.


15/15

DA3TA, PUSTAKA

Pelc$ar, Michael.+?.Dasar-Dasar Mikrobiologi.Uni2ersitas Indonesia#>akarta

Irianto, (oes,. 8?. Mikrobiologi : Menguak Dunia Mikroorganisme. rama @idya)

Bandung

Didjoseputro, D. +akarta

Pustekom.84.Biakan Murni dan Sterilisasi.! &ile#CCC#Cbahan98;.htm"

>aet$, Melnick dan 0delberg.8akarta

0nonim. 8

laporan biakan murni

Documents