aktivitas antioksidan dan sitotoksisitas biji pinang pada
TRANSCRIPT
BUKU REFERENSI
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN SITOTOKSISITAS
BIJI PINANG PADA KARSINOMA SEL SKUAMOSA
MULUT
LIZA MEUTIA SARI
SYIAH KUALA UNIVERSITY PRESS
Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang
Dilarang keras memperbanyak, memfotocopy sebagian atau
seluruh isi buku ini, serta memperjual belikannya tanpa
mendapat izin tertulis dari penerbit.
Diterbitkan oleh Syiah Kuala University Press
Darussalam – Banda Aceh, 23111
Judul Buku : AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN
SITOTOKSISITAS BIJI PINANG PADA KARSINOMA SEL
SKUAMOSA MULUT
Penulis : Liza Meutia Sari
Penerbit : Syiah Kuala University Press
Tel : (0651) 801222
Email : [email protected]
Cetakan : Pertama, 2019
ISBN : 978-623-7086-26-0Anggota Ikatan Penerbit Indonesia (IKAPI)
iii
KATA PENGANTAR
Bismillahirahmanirrohiiim. Puji dan syukur kami panjatkan kehadirat
Allah SWT, berkat rahmat dan karuniaNya, maka buku Referensi ini
dapat diselesaikan.
Ini adalah buku referensi yang berisi tentang manfaat aktivitas
antioksidan biji pinang terhadap sel kanker mulut, yakni karsinoma sel
skuamosa mulut. Buku ini disusun untuk memenuhi kebutuhan
pembelajaran dan referensi lanjutan dalam penelitian tentang terapi
adjuvan karsinoma sel skuamosa mulut yang berasal dari bahan herbal
alami, yakni biji pinang Aceh. Buku ini menjelaskan tentang aktivitas
antioksidan biji pinang yang selama ini kurang banyak diketahui oleh
masyarakat. Kemampuan aktivitas antioksidan biji pinang terhadap
sel-sel kanker mulut juga akan dianalisis melalui beberapa uji dengan
hasil yang signifikan.
Buku ini disusun secara ringkas dan sistematis agar mudah
dipelajari dan dipahami. Penulis menyadari ada beberapa masalah
yang belum dibahas dalam penulisan buku ini, namun diharapkan
buku ini sebagai langkah awal untuk menguak tabir ilmu pengetahuan
herbal alami di bidang Ilmu Kedokteran gigi khususnya Ilmu
Penyakit Mulut. Penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada
para guru dan pembimbing. Semoga buku ini bermanfaat bagi dunia
akademik dan menjadi ladang pahala bagi penulis
1 Juli 2019
Penulis,
Dr. Drg. Liza Meutia Sari, Sp.PM
v
KATA SAMBUTAN
Puji dan syukur kita panjatkan kehadirat Allah SWT, berkat rahmat
dan karunia Nya, buku referensi “Aktivitas Antioksidan dan
Sitotoksisitas Biji Pinang pada Karsinoma Sel Skuamosa Mulut” dapat
diterbitkan. Buku ini diharapkan dapat memberikan pemahaman baru
tentang Ilmu Kedokteran Gigi khususnya Ilmu Penyakit Mulut.
Karsinoma sel skuamosa mulut (KSSM) merupakan keganasan
pada sel-sel keratinosit epitel rongga mulut yang berpotensi untuk
menyebar melalui jaringan limfatik atau pembuluh darah dan
merupakan kasus keganasan yang paling sering terjadi yakni mencapai
94% dari seluruh kasus dalam rongga mulut. Terapi pilihan untuk
KSSM adalah pembedahan disertai kemo/radioterapi, tetapi teknik ini
banyak menimbulkan efek samping yang cukup parah. Buku ini
bertujuan untuk memaparkan kemampuan biji pinang yang memiliki
aktivitas antioksidan dan sitotoksik terhadap sel kanker namun
bersifat aman bagi sel normal.
Saya berharap buku referensi ini dapat menjadi pedoman
pembelajaran untuk pemahaman terhadap peran antioksidan biji
pinang terhadap sel kanker mulut. Saya mengucapkan selamat kepada
penulis yang telah menyelesaikan tulisannya dan mengharapkan dapat
ditingkatkannya produktivitas penelitian dan buku referensi oleh staf
pengajar Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Syiah Kuala.
Wassalam
Dekan Fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Syiah Kuala
Dr. Cut Soraya, drg., M.Pd., Sp.KG
vii
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR............................................................... iiiKATA SAMBUTAN................................................................. vDAFTAR ISI............................................................................. viiDAFTAR TABEL..................................................................... ixDAFTAR GAMBAR................................................................. xi
BAB 1. PENDAHULUAN....................................................... 1
BAB 2. AKTIVITAS ANTIOKSIDAN BIJI PINANG…... 132.1 Senyawa Antioksidan Alami dalam Biji Pinang................ 132.2 Uji Aktivitas Antioksidan DPPH......................................... 232.3 Tanaman Pinang.................................................................. 242.4 Kandungan Senyawa Fitokimia Biji Pinang........................ 272.5 Penelitian Tentang Manfaat Biji Pinang ........................... 28
BAB 3. KARSINOMA SEL SKUAMOSA MULUT.......... 313.1 Karakteristik Sel Kanker.................................................... 313.2 Etiologi, Patogenesis, dan Gambaran Klinis Karsinoma
Sel Skuamosa Mulut................................................................ 623.3 Uji sitotoksiistas MTS ...................................................... 65
BAB 4. HASIL PENELITIAN AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN BIJI PINANG.......................................... 68
BAB 5. HASIL PENELITIAN AKTIVITAS
SITOTOKSISITAS BIJI PINANG PADA SEL KSSM..... 72
BAB 6. PEMBAHASAN........................................................ 76
DAFTAR REFERENSI......................................................... 87
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Sumber katekin dalam makanan dan minuman....... 19
Tabel 2.2 Tingkat kekuatan antioksidan.................................. 24
Tabel 3.1 Caspase yang berperan dalam kematian sel............ 39
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Struktur kimia flavonoid....................................... 16
Gambar 2.2 Struktur kimia katekin........................................... 18
Gambar 2.3 Beri hitam............................................................. 20
Gambar 2.4 Teh hijau............................................................... 20
Gambar 2.5 Tanaman pinang.................................................... 25
Gambar 2.6 Biji pinang sebelum (a) dan sesudah dikupas (b). 26
Gambar 3.1 Jalur caspase dependen (ekstrinsik dan intrinsik). 40
Gambar 3.2 Jalur caspase independen...................................... 42
Gambar 3.3 Mekanisme yang mempengaruhi apoptosis dan
kanker…………………………………………… 43
Gambar 3.4 Siklus sel............................................................... 51
Gambar 3.5 Checkpoint akibat kerusakan DNA pada fase
G1/S dan G2/M………………………………..... 53 Gambar 3.6 Lesi eksofitik KSSM pada mukosa bukal kiri (a)
dan linggir alveolar (b).........................................
64
Gambar 3.7 Struktur tetrazolium MTS dan produk formazan.. 66
Gambar 4.1 Hasil analisis HPLC.............................................. 70
Gambar 4.2 Aktivitas antioksidan ekstrak biji pinang.............. 71
Gambar 5.1 Hasil uji MTS........................................................ 73
Gambar 5.2 Gambar morfologi dengan pembesaran akhir
x200……………………………………………... 75
1
BAB 1
PENDAHULUAN
Karsinoma Sel Skuamosa Mulut (KSSM) merupakan kasus keganasan
yang paling sering terjadi yakni mencapai 94% dari seluruh kasus
dalam rongga mulut serta menempati urutan kelima dari kejadian
kanker diseluruh dunia.1,2
Insidensi geografis menunjukkan 3%-6%
kasus KSSM terjadi di negara-negara barat dan 30% di negara bagian
timur, termasuk di Indonesia.3 Amerika Serikat merupakan salah satu
negara yang memiliki 35.000 kasus baru KSSM sepanjang tahun
2008, dan menimbulkan lebih dari 7500 kematian setiap tahun.4
Rerata angka keselamatan selama lima tahun untuk kanker tipe ini
menunjukkan angka yang paling rendah yakni kurang dari 50% jika
dibandingkan dengan jenis kanker yang lain dan kondisi ini tidak
mengalami perubahan selama empat puluh tahun terakhir terakhir.4, 5
Penelitian yang dilakukan oleh Ascani dkk. menunjukkan bahwa
lokasi yang paling sering terkena kanker rongga mulut adalah lidah
(lateral posterior dan ventral) diikuti dengan dasar mulut, gusi,
mukosa bukal, retromolar pad, dan yang terakhir adalah palatum
durum.3
Karsinoma sel skuamosa mulut merupakan keganasan pada
sel-sel keratinosit epitel rongga mulut yang berpotensi untuk
menyebar melalui jaringan limfatik atau pembuluh darah.6, 7
Faktor
risiko yang paling berpengaruh diantaranya adalah sirih, tembakau,
dan alkohol. Infeksi Human Papilloma Virus (HPV) dan faktor
genetik juga berperan dalam etiopatogenesis KSSM.8 Walaupun
13
BAB 2
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN BIJI PINANG
2.1 Senyawa Antioksidan Alami Dalam Biji Pinang
Menurut salah satu penelitian, 90%-95% kanker disebabkan oleh
faktor gaya hidup, dan hanya 5%-10% disebabkan oleh kerusakan
genetik.56
Hal ini menunjukkan bahwa kanker adalah penyakit yang
dapat dicegah oleh perubahan gaya hidup. Kanker mulut terjadi
melalui proses multifaktorial yang sangat kompleks. Gaya hidup yang
paling banyak memberikan kontribusi penyebab kanker mulut di
negara barat adalah tembakau dan alkohol.63
Perbaikan pola makan
dan gaya hidup sehat sangat dibutuhkan untuk mengurangi risiko
timbulnya kanker.56
Penemuan yang menunjukkan bahwa spesies oksigen reaktif
terlibat dalam perubahan sel prekanker menjadi kanker, menyebabkan
adanya usaha untuk mengontrol produksi spesies oksigen reaktif.44
Perhatian peneliti terhadap antioksidan tanaman semakin berkembang
pesat selama dua dekade terakhir karena penggunaannya yang aman,
availabilitas terjamin, harga terjangkau, serta khasiatnya yang cukup
efektif.44
Antioksidan terbukti dapat berperan sebagai kemoprevensi
dan kemoterapi tergantung dari tipe kanker dan konsentrasi yang
digunakan. Beberapa antioksidan alami tanaman yang terkait dalam
penelitian ini adalah polifenol, flavonoid, dan katekin.
31
BAB 3
KARSINOMA SEL SKUAMOSA MULUT
3.1 Karakteristik Sel Kanker
Hanahan dan Weinberg menggambarkan enam karakteristik sel kanker
yang membedakannya dengan sel normal. Karakteristik sel tersebut
berupa :
1. Sel Kanker Mampu Mencukupi Sinyal Pertumbuhan
Sel normal membutuhkan sinyal pertumbuhan eksogen untuk
menstimulasi proliferasi. Sinyal pertumbuhan ini dihantarkan dari
reseptor permukaan sel yang kemudaian secara bertahap mengaktivasi
jalur sinyal intraseluler yang menghasilkan proliferasi. Selama terjadi
karsinogenesis, terjadi peningkatan ikatan reseptor faktor
pertumbuhan dengan ligannya yang mengakibatkan stimulasi autokrin
tanpa faktor eksogen. Peningkatan ekspresi reseptor Epidermal
Growth Factor (EGFR), dan Transforming Growth Factor (TGF), dan
beberapa sinyal protein intraseluler memegang peran penting dalam
perkembangan tumor.
Molekul EGFR akan mengaktivasi jalur MAPK,
fosfatidillinositol-3-kinase (PI3K), AKT, mammalian Target of
Rapamycin (mTOR), Janus Kinase (Jak), Signal Transducer and
Activator of Transcription (STAT), dan Protein Kinase C (PKC) yang
menginduksi proliferasi dan keselamatan sel kanker, invasi,
metastasis, dan angiogenesis. Hepatocyte Growth Factor/c-Met
68
BAB 4
HASIL PENELITIAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN BIJI
PINANG
Ekstrak Biji Pinang Positif terhadap Tanin, Flavonoid, dan
Alkaloid
Skrining fitokimia ekstrak biji pinang menunjukkan bahwa
kandungan ekstrak positif terhadap tanin, flavonoid, dan alkaloid.
Senyawa tanin positif menghasilkan filtrat hijau kehitaman, yakni
senyawa tannin jenis katekol. Senyawa flavonoid positif dengan
adanya warna merah kecoklatan. Senyawa alkaloid positif dengan
adanya endapan putih kekuningan dengan pereaksi Mayer dan
endapan jingga dengan Dragendorff yang menunjukkan terbentuknya
garam alkaloid. Endapan ini timbul akibat alkaloid yang merupakan
senyawa golongan basa nitrogen bereaksi dengan asam klorida
membentuk garam yang tidak larut sehingga timbul endapan.
Total Fenolik dan Flavonoid dalam Ekstrak Biji Pinang
Kandungan total fenolik yang terdapat dalam ekstrak biji
pinang menggunakan tanin sebagai standar. Data absorbansi
spektrofotometri menunjukkan persamaan garis kurva standar fenolik
y = 4.807x - 0.0038, dengan nilai R² 99,99%. Nilai konsentrasi total
fenolik di dalam 1 gram ekstrak adalah 80,3 mg TAE/gr ekstrak.
Konsentrasi fenolik paling tinggi umumnya terdapat dalam pelarut
metanol, aseton, dan air. Konsentrasi ini tergantung dari besarnya
polaritas pelarut yang digunakan saat ekstraksi. Tingginya kelarutan
72
BAB 5
HASIL PENELITIAN AKTIVITAS SITOTOKSISITAS
BIJI PINANG PADA SEL KSSM
Efek Sitotoksisitas Ekstrak Biji Pinang Lebih Kuat pada
Sel HSC-3 daripada sel HSC-2
Uji MTS dilakukan untuk melihat efek sitotoksisitas ekstrak biji
pinang pada lima dosis yang lebih besar, yakni 160, 320, 640, 1280,
dan 2560 μg/ml pada sel HSC-2, HSC-3 dan HaCat. Sitotoksisitas
ekstrak dinyatakan dengan persentase viabilitas. Semakin tinggi
konsentrasi ekstrak maka semakin rendah persentase viabilitas yang
terjadi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa nilai IC50 ekstrak biji
pinang pada sel HSC-2 adalah 629,50 μg/ml, efek sitotoksik dimulai
pada konsentrasi 320 μg/ml. Nilai IC50 HSC-3 terjadi pada konsentrasi
yang rendah yakni 164,06 μg/ml. Efek sitotoksik dimulai dari
konsentrasi yang terkecil yakni antara 160-640 μg/ml, namun pada
konsentrasi diatas 1280 μg/ml, ekstrak mulai menimbulkan aktifitas
proliferasi. Ekstrak biji pinang memberikan efek sitotoksisitas yang
lebih kuat pada sel HSC-3 dibandingkan sel HSC-2. Kurva grafik
sitotoksisitas kedua galur tampak pada Gambar 5.1. Ekstrak biji
pinang tidak menimbulkan sitotoksisitas pada sel HaCat. Aktifitas
proliferasi terjadi diatas 100% viabilitas sel, dimulai dari konsentrasi
terkecil (160 μg/ml) dan meningkat sesuai dengan bertambahnya
konsentrasi ekstrak.
BAB 6
PEMBAHASAN
Mayoritas masyarakat saat ini lebih memilih pengobatan
herbal karena bahan alami dianggap bersifat lebih aman dan murah
jika dibandingkan dengan obat kimia. Faktor pendorong
meningkatnya penggunaan obat herbal di negara maju adalah akibat
besarnya efek samping penggunaan obat kimia, tingginya biaya
pengobatan modern, serta meningkatnya usia harapan hidup pada saat
prevalensi penyakit kronik meningkat sehingga obat herbal menjadi
pilihan alternatif yang diyakini dapat mencakup berbagai lapisan
masyarakat.152
Perkembangan penelitian obat herbal di Indonesia
dapat menciptakan peluang bagi Indonesia untuk menjadi pusat obat
herbal dunia karena Indonesia dikenal secara luas sebagai pusat
keanekaragaman hayati terbesar kedua setelah Brazil yang terdiri dari
tumbuhan tropis dan biota laut. Indonesia memiliki 30.000 jenis
spesies tumbuhan, dimana 960 spesies diantaranya telah tercatat
sebagai tumbuhan berkhasiat dan 283 jenis diantaranya merupakan
tumbuhan penting bagi industri obat tradisional.152
Biji pinang adalah salah satu biji tanaman yang sudah banyak
digunakan secara empiris dalam masyarakat, namun potensi
antioksidannya terhadap pengobatan kanker terutama KSSM belum
ditemukan dalam literatur. Biji ini juga merupakan salah satu etiologi
timbulnya KSSM. Kanker ini dapat timbul akibat mengunyah biji
pinang dalam waktu yang panjang dan tidak terkontrol. Namun,
76
DAFTAR REFERENSI
1. Neville BW, Damm DD, Allen CM, et al. Squamous cell carcinoma inOral and maxillofacial pathology. 2nd ed. Philadelphia, Pennsylvania:Saunders; 2002.
2. Khan MA, Saleem S, Shahid SM, Hameed A, Qureshi NR, et al.Prevalence of oral squamous cell carcinoma (OSCC) in relation todifferent chewing habits in Karachi. Pak J Biochem Mol Biol2012;45(2):59-63.
3. Ascani G, Messi M, Lupi G, Filosa A, et al. Angiogenesis in oralsquamous cell carcinoma. Acts Otorhinolaringol Ital 2003:13-17.
4. Jemal A, Siegel R, Ward E, Hao Y, Xu J, Murray T, et al. Cancerstatistic. CA Cancer J Clin 2008;58:71-96.
5. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistic. CA Cancer J Clin2015;65:5-29.
6. Hasina R, Lingen MW. Angiogenesis in oral cancer. J Dent Educ2001;65:1282-90.
7. Lim SC, Zhang S, Ishii G, Endoh Y, Kodama K, et al. Predictivemarkers for late cervical metastasis in stage I and II invasivesquamous cell carcinoma of the oral tongue. Clin Cancer Res2004;10:166-72
8. Tanaka T, Tanaka M, Tanaka T. Oral Carcinogenesis and oralchemoprevention: A review. Patholog Res Int 2011;2011:1-10.
9. Liu L, Kumar SK, Sedghizadeh PP, Jayakar AN, Shuler CF. Oralsquamous cell carcinoma incidence by subsite among diverse racialand ethnic populations in California. Oral Surg Oral Med Oral PatholOral Radiol Endod 2008;105:470-80.
10. Forastiere A, Koch W, Trotti A, Sidransky D. Head and neck cancer.N Engl J Med 2001;346:1890-900.
11. Deng H, Sambrook PJ, dan Logan RM. The treatment of oral cancer:an overview for dental professionals Aust Dent J 2011;56:244-52.
12. Tarlovsky V. Role of antioxidant in cancer therapy. Nutrition2013;29:15-21.
13. Callixto J. Efficacy, safety, quality control, marketing, and regulatoryguidelines for herbal medicine (phytotherapeutic agents). Braz JMed Biol Res 2000;33(2):179-89.
14. Abbot R. Documenting traditional medicine knowledge. LosAngeles: WIPO; 2014.
87
15. Barnes P. Complementary and alternative medicine use amongchildren: United States 2007. Nat'l Health Stat Rep 2008;1:1-24.
16. Naveen Kumar DR, Cijo George V, Suresh PK, Ashok Kumar R.Cytotoxicity, apoptosis induction and anti-metastatic potential ofOroxylum indicum in human breast cancer cells. Asian Pac J CancerPrev 2012;13(6):2729-34.
17. Mukherjee AK, Basu S, Sarkar N, Ghosh AC. Advances in cancertherapy with plant based natural products. Curr Med Chem2001;8(12):1467-86.
18. Safarzadeh E, Sandoghchian SS, Baradaran B. Herbal Medicine asInducers of Apoptosis in Cancer Treatment. Adv Pharm Bull2014;4(Suppl 1):421-27.
19. Hernani. Pengembangan biofarmaka sebagai obat herbal untukkesehatan. Buletin Teknologi Pasca Panen Pertanian 2011;7(1):20-30.
20. Fansworth NR, Arkele O, Bingel AS. Medicinal plants in therapy. BullWorld Organy 1985;63:456-81.
21. Pal SK, Shukla Y. Herbal medicine: current status and the future.Asian Pac J Cancer Prev 2003;4(4):281-88.
22. Lin YS, Chu NF, Wu DM, Shen MH. Prevalence and factorsassociated with the consumption of betel nut among militaryconscripts in Taiwan. Europ J Epid 2004;19:343-51.
23. Zain R. Cultural and dietary risk factors of oral cancer and precancer: A brief overview. Oral Oncol 2001;37:205-10.
24. Bhisey RA, Boucher BJ, Hsi-Chen TH, Gajalakshmi V, Gupta PC, et al.Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks toHumans.Betel-Quid and Areca-Nut Chewing and some Areca-NutRelated Nitrosamines. IARCS Monographs 2004;85:1-293.
25. Nagao T, Ikeda N, Warnakulasuriya S, Fukano H, Yuasa H, et al.Serum antioxidant micronutrients and the risk of oral leukoplakiaamong Japanese. Oral Oncol 2000;36:466-70.
26. Carossa S, Pera P, Doglio P, Lombardo S, Colagrande P, et al. Oralnitric oxide during plaque deposition. Eur J Clin Invest 2001;31:876-79.
27. Nair U, Bartsch H, Nair J. Alert for an epidemic of oral cancer due touse of the betel quid substitutes gutkha and pan masala: a reviewof agents and causative mechanisms. Mutagenesis 2004;19:251-62.
28. Johnson NW, Jayasekara P, dan Amarasinghe HK. Squamous cellcarcinoma and precursor lesions of the oral cavity: epidemiology
88
and aetiology. Periodontology 2000. Singapura: John Wiley and Sons; 2011.
29. Anttila A, Bhat RV, Bhond JA, Bhorgoff SJ, Bosch FX, et al.Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans.Some Traditional Herbal Medicines, Some Mycotoxins,Naphthalene and Styrene. IARCS Monographs 2002;82:171-74.
30. Xing Z, Jiao W, Zhuang H, Li MW, Fu DH. Antioxidant and cytotoxicphenolic compounds of areca nut (Areca catechu L.). Chem ResChinese Universities 2010;26(1):161-64.
31. Hannan A, Karan S, Chatterjee TP. A comparative study of invitroantioxidant capacity of different extract of areca seed collectedfrom areca catechu plant grown in Assam. Int J Pharm Pharm2012;4(2):420-27.
32. Sazwi NN, Nalina T, Rahim AZH. Antioxidant and cytoprotectiveactivities of Piper betle, Areca catechu, Uncaria gambir and betelquid with and witouth calcium hydoxide. BMC Complem Altern M2013;13(351):1-12.
33. Ferry Y. Strategi pengembangan pinang di Nanggroe AcehDarussalam. Warta Penelitian dan Pengembangan TanamanIndustri 2003;9(2):1-4.
34. Barlina R. Peluang pemanfaatan buah pinang untuk pangan. BuletinPalma 2007;33:96-105.
35. Hamsar MN, Ismail S, Mordi M, Ramanathan S, dkk. Antioxidantcapacity and the effect of different parts of Areca catechu extractson gluthatione-S-Transferase activity invitro. Free Rad Antiox2011;1(1):28-33.
36. Bradley B. Arecaidinism: Betel chewing in transcultural perpective.Can J Psychiat 1979;24:481-84.
37. Jaiswal P, Kumar P, Singh VK, Singh DK. Areca catechu L.: A valuableherbal medicine againts different health problems. Res J Med Plant2011;5(2):145-52.
38. Kim BJ, Kim JH, Kim HP, Heo MY. Biological screening of 100 plantextracts for cosmetic use (II): Anti-oxidative activity and free radicalscavenging activity. Int J Cosmetic Sci 1997;19:299-307.
39. Kuk Kook, Lee JJ, Cho J, Park, Choi JD. The effects of Areca Catechu LExtract on Anti-Inflammation and AntiMelanogenesis. Int JCosmetic Sci 1999;21(4):275-80.
40. Lee KK, Choi JD. The effects of Areca catechu L extract on antiaging.Int J Cosmetic Sci 1999;21(4):285-95.
89
41. Mates JM, Sanchez-Jiminez FM. Role of reactive oxygen species inapoptosis: Implications for cancer therapy. Int J Biochem Cell Biol1999;32(2000):157-70.
42. Lamson DW, Brignall MS. Antioxidants in Cancer Therapy; TheirActions and Interactions With Oncologic Therapies. Altern Med Rev1999;4(5):304-29.
43. Ahsan H, Ali A, Ali R. Oxygen free radicals and systemicautoimmunity. Clin Exp Immunol 2003;31:398-404.
44. Gupta SC, Hevia D, Patchva S, Park B, Koh W, et al. Upsides anddownsides of reactive oxygen species for cancer: The roles ofreactive oxygen species in tumorigenesis, prevention, and therapy.Antioxid Redox Signal 2012;16(11):1295-322.
45. Block K, Koch A, Mead M. Impact of antioxidant supplementationon chemotherapeutic toxicity: A systemic review of the evidencefrom randomized controlled trials. Int J Cancer 2008;123:1227-39.
46. Borek C. Dietary Antioxidants and Human Cancer. Integr CancerTher 2004;3(4):333-41.
47. Velioglu YS, Mazza G, Gao L, Oomah BD. Antioxidant activity andtotal phenolics in selected fruits, vegetables, and grain products. JAgri Food Chem 1998;46(9):4113-17.
48. De Bont R, Larabeke NV. Endogenous DNA damage in humans: Areview of quantitative data. Mutagenesis 2004;19:169-85.
49. Devasagayam TPA, Tilak JC, Boloor KK, Sane KS, Ghaskadbi SS, et al.Free Radicals and Antioxidants in Human Health: Current Status andFuture Prospects. JAPI 2004;52:794.
50. Zhang WM, Wei J, Chen WX, Zhang HD. The chemical compositionand phenolic antioxidants of areca (areca catechu L.) seeds. ICABE2011;1-2:16-22.
51. Gadkari PV, Balaramana M. Catechins: Sources, extraction andencapsulation: A review Food Bioprod Process 2014;xxx:1-17.
52. Daucas H, Garcea G, Neal CP, Manson MM, Berry DP.Chemoprevention of pancreatic cancer: A review of the molecularpathways involved and evidence for the potential forchemoprevention. Pancreatology 2006;6:429-39.
53. Kanduc D, Mittelman A, Serpico R, Sinigaglia E, Sinha A, et al. Celldeath: Apoptosis versus necrosis (Review). Int J Oncol2002;21(1):165-70.
90
54. Hassan M, Watari H, Almaaty AA, Ohba Y, dan Sakuragi N.Apoptosis and Molecular Targeting Therapy in Cancer. BioMed ResInt 2014;2014:1-24.
55. Li SX, Chai L, Cai ZG, Jin LJ, Chen Y, et al. Expression of Survivin andCaspase 3 in Oral Squamous Cell Carcinoma and Peritumoral Tissue.Asian Pacific J Cancer Prev 2012;13(10):5027-31.
56. Anand P, Kunnumakkara AB, Sundaram C, Harikumar KB, TharakanST, et al. Cancer is a preventable disease that requires major lifestyle changes. Pharm Res 2008;25:2097-116.
57. Petti S, dan Scully C. Polyphenols, oral health and disease: A review.J Dent 2009;37:413-23.
58. Din Y, Yao H, Yao Y, Fai LY, dan Zhang Z. Protection of DietaryPolyphenols against Oral Cancer. Nutrients 2013;5:2173-91.
59. Rice-Evans CA, Miller NJ, dan Paganga G. Structure-antioxidantactivity relationships of flavonoids and phenolic acids. Free RadicBiol Med 1996;20:933-56.
60. Gibellini L, Pinti M, Nasi M, Biasi SD, Roat E, et al. Interfering withROS Metabolism in Cancer Cells: The Potential Role of Quercetin.Cancers 2010;2:1288-311.
61. Wang HK, Xia Y, Yang ZY, Natschke SL, Lee KH. Recent advances inthe discovery and development of flavonoids and their analoguesas antitumor and anti-HIV agents. Adv Exp Med Biol 1998;439:191–225.
62. Thompson HJ. Oxidative DNA Damage and Cancer Risk Assessment.J Nutr 2006;136:2693S–94S.
63. Nijveldt RJ, Nood EV, Van Hoorn D, Boelens PG, Van Norren K, et al.Flavonoids: A review of probable mechanisms of action andpotential applications. Am J Clin Nutr 2001;74:418-25.
64. Middleton E. Effect of plant flavonoids on immune andinflammatory cell function. Adv Exp Med Biol 1998;439:175-82.
65. Casagrande F, Darbon JM Effects of structurally related flavonoidson cell cycle progression of human melanoma cells: regulation ofcyclin-dependent kinases CDK2 and CDK1. Biochem Pharmacol2001;61:1205–15.
66. Batra P, Sharma AK. Anti-cancer potential of flavonoids: recenttrends and future perspectives. Biotech 2013;3:439–59.
67. Kanadaswami C, Lee LT, Lee HP, Hwang JJ, Ke FC, et al. TheAntitumor Activities of Flavonoids. In vivo 2005;19:895-910.
91
68. Chen L, Zhang HY Cancer Preventive Mechanisms of the Green TeaPolyphenol (-)-Epigallocatechin-3-gallate. Molecules 2007;12:946-57.
69. Misaka S, Kawabe K, Onoue S, Werba JP, Giroli M, et al. Effects ofgreen tea catechins on cytochrome p450 2B6, 2C8, 2C19, 2D6, and3A activities in human liver and intestinal microsomes. Drug MetabPharmacokinet 2013;28(3):244-49.
70. Maeda-Yamamoto M, Suzuki N, Sawai Y, Miyase T, Sano M, et al.Association of suppression of extracellular signal-regulated kinasephosphorylation by epigallocatechin gallate with the reduction ofmatrix metalloproteinase activities in human fibrosarcoma HT1080cells. J Agric Food Chem 2003;51:1858-63.
71. Alshatwi AA. Catechin hydrate suppresses MCF-7 proliferationthrough TP53/Caspase-mediated apoptosis. J Exp Clin Canc Res2010;29(167):1-9.
72. Pekar O, Molotski N, Savion S, Fein A, Toder V, et al. p53 regulatescyclophosphamide teratogenesis by controlling caspases 3, 8, 9activation and NF-κB DNA binding. Reproduction 2007;134:379-88.
73. Nihal M, Ahmad N, Mukhtar H, Wood GS. Anti-proliferative andproapoptotic effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on humanmelanoma: Possible implications for the chemoprevention ofmelanoma. Int J Cancer 2005;11:513-21.
74. Kavanagh KT, Hafer LJ, Kim DW, Mann KK, Sherr DH, et al. Green teaextracts decrease carcinogen-induced mammary tumor burden inrats and rate of breast cancer cell proliferation in culture. J CellBiochem 2001;82:387-98.
75. Hastak K, Agarwal MK, Mukhtar H, Agarwal ML. Ablation of eitherp21 or Bax prevents p53-dependent apoptosis induced by green teapolyphenol epigallocatechin-3-gallate. FASEB J 2005;19:789-91.
76. Mayr C, Wagner A, Neureiter D, Pichler M, Jakab M, et al. The greentea catechin epigallocatechin gallate induces cell cycle arrest andshows potential synergism with cisplatin in biliary tract cancer cells.BMC Complement Altern Med 2015;15(194):1-7.
77. Fassina G, Vene R, Morini M. Mechanisms of inhibition of tumorangiogenesis and vascular tumor growth by epigallocatechin-3-gallate. Clin Cancer Res 2004;10:4865-73.
78. Amin AR, Thakur VS, Paul RK, Feng GS, Qu CK, Mukhtar H, et al.SHP-2 tyrosine phosphatase inhibits p73-dependent apoptosis and
92
expression of a subset of p53 target genes induced by EGCG. Proc Natl Acad Sci 2007;104:5419–24.
79. Molyneux P. The use of the stable free radicaldiphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity.Songklanakarin J Sci Technol 2004;26(2):210-19.
80. Jun M, Fu HY, Hong J, Wan X, Yang CS, et al. Comparison ofAntioxidant Activities of Isoflavones from Kudzu Root (Puerarialobata Ohwi). J Food Sci 2006;68(6):2117-22.
81. Staples GW, Bevacqua RF. Spesies profiles for pacific islandagroforestry. Areca catechu (betel nut palm):www.traditionaltree.org; 2006. p. 1-24.
82. IARC. WHO-biennial report. International agency for research oncancer, part I. 2004:1-192.
83. Liu R. Potential Synergy of Phytochemicals in Cancer Prevention:Mechanism of Action. J. Nutr 2004;134(12):3479S-85S.
84. Gopalakrishnan C, Shankaranarayanan D, Nazimudeen SK,Viswanathan S, Kameswaran L. Anti-inflammatory and C.N.S.depressant activities of xanthones from Calophyllum inophyllumand Mesua ferrea. Ind J Pharmac 1980;12(3):181-91.
85. Chilpa RR, Baggio CH, Solano DA, Muniz EE, Kaufmann FC, et al.Inhibition of gastric H+, K+,-ATPase activity by flavonoids coumarinsand xanthones isolated from Mexican medicinal. J Ethnopharm2006;105:167-72.
86. Chu N. Effects of betel chewing on the central and autonomicnervous system. J Biomed Sci 2001;8:229-36.
87. Giri S, Idle JR, Chen C, Zabriskie TM, Krausz KW, et al. A metabolicapproach to the metabolism of the areca nut alkaloids arecolineand arecaidine in the mouse. Chem Res Toxicol 2006;19:818-27.
88. Wetwitayaklung P, Paechamud T, Limmatvapirat C, Keokitichai S.The study of antioxidant capacity in various parts of Areca catechuL. Naresuan Univ J 2006;14(1):1-14.
89. Meiyanto E, Handayani S, Susidarti RA, Jenie RI. Chloroform fractionof Areca catechu L. induces apoptosis and decreases Bcl2expression on MCF-7 cells. Artocarpus 2008;8(2):55-69.
90. Azizan KB. Fabrication of antibacterial bio composite from bacterialsellulose and areca catechu extract [Thesis]. Pahang: UniversitiMalaysia Pahang; 2012.
93
91. Huang PL, Chi CW, Liu TY. Effects of Areca catechu L. containingprocyanidins on cyclooxygenase-2 expression in vitro and in vivo.Food Chem Toxicol 2010;48(1):306-13.
92. Bhandare AM, Kshirsagar AD, Vyawahare NS, Hadambar AA,Thorve VS. Potential analgesic, anti-inflammatory and antioxidantactivities of hydroalcoholic extract of Areca catechu L. nut. FoodChem. Toxicol 2010;48:3412-17.
93. Hamsar MN, Ismail S, Mordi M, Ramanathan S, et al. Antioxidantcapacity and the effect of different parts of areca catechu extractson gluthatione-S-Transferase activity invitro. Free Rad Antiox2011;1(1):28-33.
94. Joshi M, Gaonkar K, Mangoankar S, Satarkar S. Pharmacologicalinvestigation of Areca catechu extracts for evaluation of learning,memory and behavior in rats. IJCPR 2012;1(6):128-32.
95. Pithayanukul P, Nithitanakool S, Bavovada R. HepatoprotectivePotential of Extracts from Seeds of Areca catechu and Nutgalls ofQuercus infectoria. Molecules 2009;14(12):4987-5000.
96. Lawen A. Apoptosis—An Introduction. Bio Essays 2003;25(9):888-96.
97. Mohan H. Textbook of Pathology 5th ed. New Delhi: Jaypee BrothersMedical Publishers; 2010.
98. Kroemer G, El-Deiry WS, Golstein P, Peter ME, Vaux D, et al.Classification of cell death: recommendations of the NomenclatureCommittee on Cell Death. Cell Death Differ 2005;12:1463-67.
99. O’Brien MA, Kirby R. Apoptosis: a review of pro-apoptotic andantiapoptotic pathways and dysregulation in disease. J Vet EmergCrit Care 2008;18(6):572-85.
100. Cory S, Adams JM. The Bcl2 family: regulators of the cellular life-or-death switch. Nat Rev Cancer 2002;2:647-56.
101. Rastogi RP, Richa, dan Sinha RP. Apoptosis: Molecular mechanism and pathogenicity. EXCLI Journal 2009;8:155-81.
102. Vermes I, Haanen C, dan Reutelingsperger. Flowcytometry of apoptotic cell death. J Immunol Methods 2000;243:167-90.
103. Kuntz S, Wenzel U, Daniel H. Comparative analysis of the effects of flavonoids on proliferation, cytotoxicity, and apoptosis in human colon cancer cell lines. Eur J Nutr 1999;38:133-42.
104. Wong R. Apoptosis in cancer: From pathogenesis to treatment. J Exp Clin Canc Res 2011;30(87):1-14.
94
105. Deveraux QL, Roy N, Stennicke HR, Van Arsdale T, Zhou Q, et al. IAPs block apoptotic events induced by caspase-8 and cytochrome c by direct inhibition of distinct caspases. EMBO J 1998;17:2215-23.
106. Thome M, Schneider P, Hofmann K, Fickenscher H, Meinl E, et al. Viral FLICE-inhibitory proteins (FLIPs) prevent apoptosis induced by death receptors. Nature 1997;386:517-21.
107. Hongmei Z. Extrinsic and intrinsic apoptosis signal pathway in Apoptosis and Medicine. 2012;Edited Volume:3-23.
108. Denis M, Zhu P dan Judy L. GranzymeA,Induces Caspase-Independent Mitochondrial Damage, a Required First Step for Apoptosis Immunity 2005;22(3):355-70.
109. Dencic MS, Poljarevic J, Vilimanovich U. . Cyclohexyl Analogues of Ethylenediamine Dipropanoic Acid Induce Caspase-Independent Mitochondrial Apoptosis in Human Leukemic Cells. Chem Res Toxicol 2012;25(4):931-39.
110. Sun SY, Hail NJ, Lotan R. Apoptosis as a novel target for cancer chemoprevention. J Natl Cancer Inst 2004;96:662-72.
111. Tsujimoto Y, Finger LR, Yunis J, Nowell PC, Croce CM. Cloning of the chromosome breakpoint of neoplastic B cells with the t(14; 18) chromosome translocation. Science 1984;226:1097-99.
112. Suri C. The immunohistochemical evaluation of the expression of bcl-2 in different histological grades of squamous cell carcinoma. J Clin Diagn Res 2009;3:1891-99.
113. Fulda S, Meyer E, Debatin KM. Inhibition of TRAIL-induced apoptosis by Bcl-2 overexpression. Oncogen 2000;21:2283-94.
114. Bai L, Zhu WG. p53: structure, function and therapeutic applications. Canc Mol 2006;2(4):141-53.
115. Cruz IB, Meijer CJ, Braakhuis BJ, Snow G, Walboomers JM. p53 expression above the basal cell layer in oral mucosa is an early event of malignant transformation and has predictive value for developing oral squamous cell carcinoma J Pathol 1998;184(4):360-68.
116. Motta RD, Zettler CG, Cambruzzi E, Jotz GP, Berni RB. Ki-67 and p53 correlation prognostic value in squamous cell carcinomas of the oral cavity and tongue. Braz J Otorhinolaryngol 2009;75(4):544-49.
117. Martinez EA, Gomez RJ, Medina CMA. Immunoexpression of p53 in oral squamous cell carcinoma and oral dysplastic lesions in patients with the habbit of reverse smoke. Int J Odontostomat 2013;7(2):185-91.
95
118. Vucic D, Fairbrother WJ. . The inhibitor of apoptosis proteins as therapeutic targets in cancer. Clin Cancer Res 2007;13(20):5995-6000.
119. Lopes RB, Gangeswaran R, McNeish IA, Wang Y, Lemoine NR. Expression of the IAP protein family is dysregulated in pancreatic cancer cells and is important for resistance to chemotherapy. Int J Cancer 2007;120(11):2344-52.
120. Muzio LL, Pannone G, Staibano S, Mignogna MD, Mariggio MA, et al. Survivin expression in oral squamous cell carcinoma. Brit J Cancer 2003;89:2244-48.
121. Fink SL, Cookson BT. Apoptosis, pyroptosis, and necrosis: mechanistic description of dead and dying eukaryotic cells. Infect Immun 2005;73(4):1907-16.
122. Coutinho-Camillo CM, Lourenco SV, Nishimoto IN, Kowalski LP, Soares FA. Caspase expression in oral squamous cell carcinoma. Head & Neck 2010:1191-98.
123. Devarajan E, Sahin AA, Chen JS, Krishnamurthy RR, Aggarwal N, et al. Downregulation of caspase 3 in breast cancer: a possible mechanism for chemoresistance. Oncogene 2002;21(57):8843-51.
124. Friesen C, Fulda S, Debatin KM. Deficient activation of the CD95 (APO-1/Fas) system in drug resistant cells. Leukaemia 1997;11(11):1833-41.
125. Fulda S, Los M, Friesen C, Debatin KM. Chemosensitivity of solid tumour cells in vitro is related to activation of the CD95 system. Int J Cancer 1998;76(1):105-14.
126. Reesink-Peters N, Hougardy BM, van den Heuvel FA, Ten Hoor KA, Hollema H, et al. Death receptors and ligands in cervical carcinogenesis: an immunohistochemical study. Gynaecol Oncol 2005;96(3):705-13.
127. Sherr CJ. Cancer cell cycle. Science 1996;274:1672-77. 128. Roussel MF. The INK 4 family of cell cycle inhibitors in cancer.
Nature 1999;18(38):5311-17. 129. Satyanarayana A, Kaldis P. Mammalian Cell-cycle Regulation:
Several Cdks, Numerous Cyclins, and Diverse Compensatory Mechanisms. Oncogene 2009;28:2925-39.
130. Vermeulen K, Berneman ZN, Van Bockstaele DR. Cell Cycle and Apoptosis. Cell Prolif 2003;36(3):165-75.
96
131. Alberts B, Lewis J, Raff M, Robets K, Walter P. Molecular biology of the cell. In: Anderson M, dan Granum S, editor. The cell cycle. 5th ed. New York, USA: Garland Science, Taylor & Francis Group; 2008.
132. Lapenna S, Giordano A. Cell Cycle Kinases as Therapeutic Targets for Cancer. Nat Rev Drug Discov 2009;8(7):547-66.
133. Hartwell LH, Weinert TA. Checkpoints: controls that ensure order of cell cycle events. Science 1989;246:629–34.
134. Sherr C. D-type cyclins. Trends Biochem Sci 1995;20:187–90. 135. McCance KL, Huether SE. Pathophysiology; The biologic basis for
disease in adults and children. 5th ed. Philadelphia, USA: Elsevier Mosby; 2006.
136. Garrett MD. Cell cycle control and cancer. Curr Sci 2001;81(5):515-22.
137. Ford HL, Pardee AB. Cancer and the Cell Cycle. J Cell Biochem Suppl 1999;32(33):166–72.
138. Yang J, Winkler K, Yoshida M, Kornbluth S. Maintenance of the G(2) arrest in Xenopus oocyte: a role for 14–3-3-mediated inhibition of Cdc25 nuclear import. EMBO J 1999;18:2174–83.
139. Xiao Z, Chen Z, Gunasekera AH, Sowin TJ, Rosenberg SH, et al. Chk1 Mediates S and G2 Arrest Through Cdc25A Degradation in Response to DNA-Damaging Agents. J Biol Chem 2003;278(24):21767-73.
140. Choi S, dan Myers JN. Molecular Pathogenesis of Oral Squamous Cell Carcinoma: Implications for Therapy. J Dent Res 2008;87(1):14-32.
141. Kamiya Y, Ohshima T. The individual cell properties of oral squamous carcinoma and tumor suppressor gene mutation. Oral Sci Intl 2005;2(2):104-17.
142. Okamura M, Shimada J, Sakagami H. Comparative Analysis of Cell Death Induction by Cisplatin and 5-FU in Human Oral Squamous and Hepatocellular Carcinoma Cell Lines. Anticancer Res 2008;28:253-60.
143. Takahashi H, Shigeta T, Umeda M, Komori T. A New in vitro Invasion Model for Oral Cancer Using an Acellular Allogenic Dermal Matrix (Alloderm): The Relationship among in vitro Invasion Activity, in vivo Invasion and Metastasis. Kobe J Med Sci 2011;57(4):E128-E36.
144. Boukamp P, Petrussevska RT, Breitkreutz D, Hornung J, Markham A, et al. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol 1988;106:761-71.
97
145. Deyrieux AF, Wilson VG. In vitro culture conditions to study keratinocyte differentiation using the HaCaT cell line. Cytotechnology 2007;54:77-83.
146. Neville BW, Allen CM, Bouquot JE Squamous cell carcinoma in Oral and maxillofacial pathology. 2nd ed. Philadelphia: WB Saunders; 2002.
147. Greenberg M GM, Ship J Oral Cancer. In: M G, editor. Burket's Oral Medicine. 11th ed. Philadelphia: BC Decker Inc; 2008. p. 155-58.
148. Barltrop J. 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4,5-dimenthylthiazoly)-3-(4-sulfophenyl)tetrazolium inner salt (MTS) and MTS analogs of 3-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reducing to purple water-soluble formazans as cell-viability indicators. Bioorg Med Chem Lett 1991;1:611-14.
149. Berridge MV, Tan AS. Characterization of the cellular reduction of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT): Subcellular localization, substrate dependence, and involvement of mithocondrial electron transport in MTT reduction. Arch Biochem Biophys 1993;303:474-82.
150. Cory A. Use of an aqueous soluble tetraolium/formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Commun 1991;3:207-12.
151. Zhang M, Aguilera D, Das C, Vasquez H, Zge P, et al. Measuring Cytotoxicity: A New Perspective on LC50. Anticancer Res 2007;27:35-38.
152. Dewoto HR. Pengembangan Obat Tradisional Indonesia Menjadi Fitofarmaka. Maj Kedokt Indon 2007;57(7):205-11.
153. Mawardati. Analisis faktor-faktor yang mempengaruhi pendapatan usaha tani pinang kecamatan Sawang kabupaten Aceh Utara. Agrisep 2015;16(1):61-65.
154. Deng HX, Song HY, Hou YF, Yuan GY, Zheng FJ. Effects of quercetin on the proliferation of breast cancer cells and expression of survivin in vitro. Exp Ther Med 2013;6:1155-58.
155. Ramamoorthy P, Bono A. Antioxidant activity, total phenolic, and flavonoid content of Morinda citrifolia fruit extracts from various extraction processes. IJEST 2007;2(1):70-80.
156. Kong Y, Ma W, Liu X, Zu Y, Fu Y, et al. Cytotoxic Activity of Curcumin towards CCRF-CEM Leukemia Cells and Its Effect on DNA Damage. Molecules 2009;14:5328-38.
98
157. Sakano K, Kawanishi S. Metal-mediated DNA damage induced by curcumin in the presence of human cytochrome p450 isozymes Arch Biochem Biophys 2002;405:223-30.
158. Berridge MV, Herst PM, Tan AS. Tetrazolium dyes as tools in cell biology: New insights into their cellular reduction. Biotechnol Annu Rev 2015;11:127-52.
159. Sakagami H, Kobayashi H, Chien CH, Kanegae H, Kawase M. Selective Toxicity and Type of Cell Death Induced by Various Natural and Synthetic Compounds in Oral Squamous Cell Carcinoma. In vivo 2007;21:311-20.
99
