UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,

SEMIPOLAR DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum

sanctum L.) TERHADAP SEL T47D

SKRIPSI

Oleh:

RIZKI AWALIA PUSPITANINGRUM

K100130192

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2016

i

UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR,

SEMIPOLAR DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum

sanctum L.) TERHADAP SEL T47D

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai

derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta

di Surakarta

Oleh:

RIZKI AWALIA PUSPITANINGRUM

K100130192

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2016

iv

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh,

Alhamdulillah, puji syukur kepada Allah SWT atas limpahan rahmat dan

hidayahnya sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Salawat dan

salam semoga selalu tercurah pada baginda Rasulullah SAW. Skripsi ini berjudul

“UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL, FRAKSI POLAR, SEMIPOLAR

DAN NONPOLAR HERBA KEMANGI (Ocimum sanctum L.) TERHADAP

SEL T47D”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat meraih gelar

Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Surakarta.

Terimakasih penulis sampaikan kepada pihak-pihak yang membantu

selama penyusunan skripsi ini. Secara khusus rasa terimakasih penulis sampaikan

kepada :

1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta.

2. Ibu Maryati, Ph.D., Apt. selaku pembimbing skripsi.

3. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. selaku penguji 1.

4. Ibu Ratna Yuliani, M. Biotech.St. selaku penguji 2.

5. Ibu Setyo Nurwaini, S.Farm. selaku pembimbing akademik.

6. Kedua orang tua dan adik yang telah memberikan semangat, dukungan

dan doa yang tak terhingga selama ini.

7. Rekan-rekan tim seperjuangan skripsi: Putri, Atikah, Dhinar, dan

Selviana.

Semoga skripsi ini nantinya dapat bermanfaat bagi penulis, pembaca dan

perkembangan dunia kesehatan terutama bidang farmasi.

Wassalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh

Surakarta, 29 November 2016

Penulis

v

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ................................................................................... i

HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... ii

DEKLARASI .............................................................................................. iii

KATA PENGANTAR ................................................................................ iv

DAFTAR ISI ............................................................................................... v

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. vii

DAFTAR TABEL ....................................................................................... viii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... ix

DAFTAR SINGKATAN ............................................................................ x

ABSTRAK .................................................................................................. xi

ABSTRACT .................................................................................................. xii

BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................... 1

A. Latar Belakang Masalah ........................................................ 1

B. Rumusan Masalah .................................................................. 2

C. Tujuan Penelitian ................................................................... 3

D. Tinjauan Pustaka .................................................................... 3

1. Tanaman Kemangi ............................................................. 3

a. Sistematika Tanaman Kemangi ..................................... 3

b. Kandungan Kimia ......................................................... 3

c. Aktivitas Farmakologi ................................................... 4

2. Kanker ................................................................................ 4

a. Kanker Payudara ........................................................... 5

b. Gejala Kanker Payudara ................................................ 5

c. Faktor Risiko Kanker Payudara .................................... 5

3. Sel T47D ............................................................................ 6

4. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT assay ........................ 6

E. Landasan Teori ....................................................................... 7

F. Hipotesis ................................................................................. 8

BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................... 9

vi

A. Kategori dan Rancangan Penelitian ....................................... 9

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ........................ 9

C. Alat dan Bahan ....................................................................... 9

1. Alat ..................................................................................... 9

2. Bahan ................................................................................. 9

D. Tempat Penelitian .................................................................. 10

E. Jalannya Penelitian ................................................................. 10

1. Determinasi Tanaman ........................................................ 10

2. Preparasi Bahan ................................................................. 10

3. Ekstraksi dan Fraksinasi .................................................... 10

4. Pembuatan Media Kultur ................................................... 11

5. Pemanenan dan Penghitungan Sel T47D ........................... 11

6. Pembuatan Larutan Stok .................................................... 12

7. Uji MTT Assay .................................................................. 12

8. Uji Kromatografi Lapis Tipis ............................................ 13

F. Analisis Data .......................................................................... 14

BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 15

A. Determinasi Tanaman ............................................................ 15

B. Ekstraksi dan Fraksinasi ........................................................ 15

C. Uji Sitotoksik Terhadap Sel T47D ......................................... 16

D. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ........................................ 20

BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................... 25

A. Kesimpulan ............................................................................ 25

B. Saran ...................................................................................... 25

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 26

LAMPIRAN ................................................................................................ 30

vii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Reaksi pembentukan kristal formazan ................................................ 17

Gambar 2. Sel T47D normal tanpa perlakuan ....................................................... 17

Gambar 3. Grafik hubungan konsentrasi dengan persen sel hidup. ...................... 18

Gambar 4. Profil KLT ekstrak etanol herba kemangi . ......................................... 21

Gambar 5. Profil KLT fraksi kloroform ................................................................ 22

viii

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Reagen deteksi senyawa.......................................................................... 13

Tabel 2. Data absorbansi sel, persen sel hidup, dan nilai IC50 .............................. 19

Tabel 3. Deteksi golongan senyawa pada ekstrak etanol ...................................... 21

Tabel 4. Deteksi golongan senyawa pada fraksi kloroform...................................22

ix

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Determinasi tumbuhan kemangi ....................................................... 30

Lampiran 2. Perhitungan rendemen ...................................................................... 31

Lampiran 3. Perhitungan seri konsentrasi larutan uji............................................ 32

Lampiran 4. Perhitungan kepadatan sel T47D pada uji sitotoksik........................34

Lampiran 5. Perhitungan persen sel hidup dan nilai IC50 .................................... 35

x

DAFTAR SINGKATAN

CO2 : Karbondioksida

COX-2 : Cyclooxigenase-2

DMSO : Dimetil Sulfoksida

DNA : Deoxyribonucleid Acid

ELISA : Enzyme-linked Immunosorbent Assay

GF254 : Gel Fluoresensi 254

IAPs : Inhibitor of Apoptosis

IC50 : Inhibitory Concentration 50

IL-1β : Interleukin-1β

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

LAF : Laminar Air Flow

MTT : 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium bromid

NF-kB : Nuclear Factor kappa B

P.A : Pro Analisis

PBS : Phosphate Buffered Saline

Rf : Retardation Factor

RPMI : Roswell Park Memorial Institute

SDS : Sodium Dodecyl Sulfat

UV 254 : Ultraviolet 254

UV 366 : Ultraviolet 366

xi

ABSTRAK

Kemangi (Ocimum sanctum L.) merupakan tanaman yang telah diteliti

memiliki aktivitas sebagai antikanker, antibakteri dan antioksidan. Penelitian ini

bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak etanol 96%, fraksi polar,

semipolar dan nonpolar herba kemangi terhadap sel T47D dan mengetahui

golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol herba kemangi dan

fraksi yang memiliki aktivitas sitotoksik paling baik.

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan penyari etanol

96%. Ekstrak etanol selanjutnya difraksinasi dengan partisi cair-cair. Uji

sitotoksik dilakukan dengan metode MTT assay untuk mendapatkan nilai IC50.

Kandungan senyawa dalam ekstrak maupun fraksi dengan IC50 paling baik

diidentifikasi menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan berbagai

pereaksi semprot. Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi kloroform,

fraksi n-heksan, fraksi etil asetat memiliki nilai IC50 berturut turut adalah

>250 µg/mL, >250 µg/mL, 36,98 µg/mL, and >250 µg/mL. Fraksi kloroform

merupakan fraksi yang memiliki aktivitas sitotoksik paling baik. Hasil uji KLT

menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba kemangi mengandung golongan

senyawa flavonoid, terpenoid, saponin, alkaloid, dan fenolik. Fraksi kloroform

mengandung golongan senyawa flavonoid, terpenoid, alkaloid, dan fenolik.

Kata kunci : Ocimum sanctum L., sitotoksik, MTT assay, sel T47D.

xii

ABSTRACT

Previous experiment indicated broad spectrum biological activity of

Basil (Ocimum sanctum L.) ie anticancer, antibacterial, and antioxidant. This

experiment aimed to determine the cytotoxic effects of ethanol extract 96%, polar,

semipolar, and nonpolar fraction Basil (Ocimum sanctum L.) on T47D cells and

to know the compounds contained in herbs basil as well as the fraction of the best

cytotoxic activity.

Extraction was conducted by maceration method using ethanol extract

96%. The ethanolic extract fractionated by using liquid partition. The content of

the compounds in the extract and the fractions were identified using Thin Layer

Chromatography (TLC) with various spray reagent. Cytotoxic test performed by

using MTT assay method to obtain IC50 values.

This experiment conclude IC50 of ethanol extract 96%, n-hexane, chloroform, and ethyl acetate fraction were IC50 >250 µg/mL, >250 µg/mL,

36,98 µg/mL, and >250 µg/mL respectivly. Chloroform fraction has the strongest

effect anticancer. TLC test results show that the ethanol extract of the herbs basil

contain the class of flavonoids, terpenoids, saponins, alkaloids and phenolic.

Chloroform fraction containing class of flavonoids, terpenoids, alkaloids and

phenolic.

Keywords: Ocimum santum L., cytotoxic, MTT assay, T47D cell.