Ekstrak Mengkudu (Morinda Citrifolia L.) Menghambat Aktivasi Nf-źā Dan Menekan Ekspresi Protein Tnf-į Dan Icam-1 Pada Kultur Sel Endotel Huvecs

Dipapar Ox-ldl

M. Saifur Rohman, Endah Kusuma Rastini, Djanggan Sargowo dan Rasjad Indra

Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, Malang

Abstrak

Diterima tanggal. 20 Oktober 2007, disetujui tanggal 15 Mei 2008

Komplikasi aterosklerosis seperti seperti infark miokard akut, stroke, maupun iskemik tungkai hingga saat ini merupakan penyebab kesakitan dan kematian terbesar dibidang kardiovaskuler. Proses aterosklerosis dipercaya sebagai proses radang kronis yang progresif akibat dari tertimbunnya LDL yang termodifikasi menjadi LDL teroksidasi. Progresifitas keradangan ini selanjutnya dipicu oleh factor transkripsi NF-kB yang teraktivasi dan menyebabkan peningkatan sitokin dan molekul adesi seperti seperti TNF-á dan ICAM-1. Hingga saat ini mengkudu diketahui mempunyai khasiat mengurangi keradangan dan anti kanker, namun belum pernah diteliti mengenai efek mengkudu terhadap aterosklerosis. Penelitian ini bertujuan mengetahui mekanisme kerja mengkudu (Morinda citrifolia) dan dosis yang efektif dan adekuat .terhadap hambatan aktivasi NF-kB, yang selanjutnya menurunkan ekspresi protein TNF-á dan ICAM-1, karena zat zat tersebut sebagai petanda penting progresifitas aterosklerosis.Penelitian dilakukan secara in vitro menggunakan kultur sel endotel vena umbilikalis manusia (HUVECs). Dibuat dua kelompok kontrol pada kultur sel endotel yaitu kontrol negatif tanpa perlakuan, control positif dipapar Ox-LDL 40 ìg/mL, agar HUVECs menyerupai model aterosklerosis. Untuk Kelompok perlakuan yaitu kultur sel endotel dengan pemberian dosis ekstrak mengkudu 2,5 mg/mL, 5 mg/mL, dan 10 mg/mL diberikan selama 2 jam sebelum pemberian Ox-LDL, kemudian masing-masing dipapar Ox-LDL 40 ìg/mL. Pengukuran aktivasi NF-kB ekspresi protein TNF-á dan ICAM-1 menggunakan imunohistokimia.Pemeriksaan NF-kB dilakukan 30 menit setelah pemberian Ox-LDL, sedangkan pemeriksaan ekspresi protein TNF-á dan ICAM-1dilakukan setelah 24 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak mengkudu dapat menghambat aktivasi NF-kB, ekspresi protein TNF-á dan ICAM-1, melalui analisis ANOVA (p<0,01). Terdapat hubungan negatif pada perlakuan antar dosis ekstrak mengkudu dalam menghambat aktivasi NF-kB, ekspresi protein TNF-á dan ICAM-1 menggunakan analisis Spearman’s (p<0,01),artinya semakin besar dosis yang diberikan semakin berurang ekpresi TNF-α dan ICAM-1. Kata Kunci: Aterosklerosis, Ox-LDL, Morinda citrifolia, aktivasi NF-kB, TNF-á, ICAM-1.

Morinda Citrifolia L. Inhibits Nf-źā Activation And Suppress Tnf-į And Icam-1 Protein Expression In Ox-ldl-treated Huvecs

Abstract

Morinda citrifolia l. Inhibits nf-źā activation and suppress tnf-į and icam-1 protein expression in ox-ldl-treated huvecs. Complication of atherosclerosis such as acute myocardial infarction, stroke, and cute limb ischemia has contributed as a major cause of mortality and morbidity of cardiovascular disease. Atherosclerosis process is believed as a chronic progressive inflammatory disease caused by modified LDL; Ox-LDL. The NFkB transcription factor is then activated which result in increased cytokine and adhesion molecules such as TNF-į, ICAM-1. Morinda citrifolia is known as systemic anti-inflammatory agent as well as used for anti cancer, up to now. However, morinda effect on atherosclerosis has never investigated. This study aimed to know the mechanism of action and the

adequate dose of morinda citrifolia on activation of NFkB, which in turn may decreased the expression of TNF-į and ICAM-1, important markers of atherosclerosis progression. This in vitro study used human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The control divided into two groups; control negative without any treatment and control positive with addition of Ox-LDL 40 ug/mL in order to mimic atherosclerosis model. For the treatment group, 2,5 mg/mL, 5 mg/mL, and 10 mg/mL of morinda extract were given 2 hour prior to addition of 40 ug/mL of Ox-LDL. Activation of NFkB was measured by indirect method; translocation of NFkB from cytoplasm to nucleus, by immunohistochemistry 30 menit after OxLDL treatment. The protein expression of TNF-á and ICAM-1 were measured by immunohistochemistry 24 hour after OxLDL treatment.The results suggested that morinda citrifolia inhibit NFkB activation and decreased protein expression of TNF-áand ICAM-1as shown by statistical analysis (p< 0.01). The bigger morinda dose the smaller TNF-á and ICAM-1expression. Keywords : Atherosclerosis, Morinda Citrifolia, Ox-LDL, NFKB Activation, TNF-á, ICAM-1.