peningkatan apoptosis otot polos vagina pada wanita yang mengalami prolaps organ panggul

7/23/2019 Peningkatan Apoptosis Otot Polos Vagina Pada Wanita Yang Mengalami Prolaps Organ Panggul

1/10

Int Urogynecol J (2008) 19:15591564DOI 10.1007/s001920080690!

Artikel original

Peningkatan apoptosis otot polos vagina pada wanita yangmengalami prolaps organ panggul

D"ter"#$: 25 %$ret 2008 / D"s$&'$n: 4 Jl" 2008 / D"ter"t'$n sec$r$ *$r"ng: 2 +gsts 2008#,&e Intern$t"on$l Urogynecolog"c$l +ssoc"$t"on 2008

Peter Takacs & Marc Gualtieri & Mehdi Nassiri & Keith Candiotti & Carlos. A. Medina

Abstrak

Penelitian ini bertujuan membandingkan kandungan otot polos dan jumlah sel yangproptosis agina pada !anita yang mengalami maupun tidak mengalami prolaps dinding agina

anterior. "aringan agina diambil dari !anita yang mengalami #n$% atau tidak mengalami #n$%

prolaps dinding agina anterior yang menjalani histerektomi. 'tot polos agina diteliti

menggunakan imunohistokimia. Analisa gambar digital dilakukan untuk memnentukan area

(raksi otot polos dalam potongan histology melintang. Apoptosis dideteksi menggunakan uji

T)N*+. Area (raksi otot polos non ascular secara signi(ikan berkurang #,.-%,./0 s. ,./%

,./0 P$,.,0/ dan indeks apoptosis secara signi(ikan lebih tinggi #,.,1,.,/ s. ,.,0,.,-2

P$,.,1/ pada !anita yang mengalami prolaps dinding agina anterior dibandingkan !anita

yang tidak mengalami. 3raksi otot polos agina secara signi(ikan menurun dan laju apoptosis

meningkat pada !anita yang mengalami prolaps dinding agina anterior dibandingkan dengan

yang tidak.

Kata kunci: Apoptosis2 prolaps2 sel otot polos2 agina

Pendahuluan

Prolaps organ panggul #P'P merupakan masalah serius yang mempengaruhi hingga

4,5 !anita di Amerika 6erikat di mana resiko seumur hidup menjalani operasi karena

mengalami prolaps maupun inkontinensia meningkat menjadi //5. 7anita yang mengalami

inkontinensia atau prolaps menghadapi gangguan (ungsional2 sosial dan psikologis setiap hari.Gangguan tersebut menyebabkan penurunan yang berarti pada kualitas hidup. P'P merupakan

permasalahan serius yang mengenai populasi besar !anita2 namun mekanisme penyebab prolaps

tersebut masih belum diketahui secara pasti.

Penelitian sebelumnya mengenai agina menunjukkan perbedaan bermakna pada sel otot

polos !anita yang mengalami P'P2 dibandingkan dengan yang tidak. 8ata ini mengesankan

perubahan pada total area belah lintang2 status (ungsional2 dan bentuk (isiologis yang

1559Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


2/10

berkontribusi dalam pembentukan prolaps urogenital. Meskipun perbedaan tersebut telah

terdokumentasi dengan baik2 mekanisme perubahan tersebut masih belum diketahui dengan jelas.

Apoptosis2 mekanisme kematian nonin(lamasi2 diketahui berhubungan dengan trauma.

9ubungan antara apoptosis dan otot telah jelas pada kerusakan ascular otot polos: tetapi2 belum

diteliti mengenai hubungannya dengan organ panggul. 6elain itu2 trauma pada otot polos

menunjukkan penngkatan apoptosis. Kedua mekanisme tersebut ditemui pada kebanyakan

!anita yang mengalami P'P dan harus dipertimbangkan ketika menangani apoptosis dan otot

polos.

Ada dua tujuan studi ini2 Pertama untuk menganalisa si(at mor(ometrik agina pasien

dengan dan tanpa prolaps. 8engan menghitung tingkatan perubahan otot polos pada !anita

dengan P'P2 peneliti dapat memperkuat teori penurunan sokongan panggul yang mengakibatkan

prolap urogenital. Tujuan kedua adalah untuk mendemonstrasikan apoptosis sebagai mekanisme

perubahan otot polos. Peneliti memiliki hipotesa bah!a (raksi otot polos agina !anita yang

mengalami prolaps uterin secara bermakna menurun dibandingkan pada !anita yang tidak

mengalami prolaps dan kerusakan otot polos sel tersebut disebabkan oleh peningkatan apotosis.8engan menguji hipotesa bah!a apoptosis meningkat pada pasien dengan prolaps2 penelitti

dapat menjelaskan secara lanjut kemungkinan penyebab P'P.

Metode dan Bahan

6ampel jaringan dinding agina anterior diambil dari /0 !anita yang menjalani

histerektomi per abdominal atau aginal karena sebab ginekologis beningna di )niersitas

Miami2 6ekolah kedokteran Miller2 ;6 memorial "ackson antara /0


3/10

*mpat micrometer bagian para((in dilelehkan semalaman dengan suhu - DC2 dibersihkan

dengan Eylene2 dihidrasi dengan etanol. 6etelah terjadi blokade aktiitas peroksidase endogen

dengan larutan hydrogen peroksida dan methanol2 slide secara berurutan diberi antibody mouse

primer2 immunoglobulin biotinylated anti=mouse2 dan kompleks streptaidinFbiotin peroEidase

#+6ABHidin digunakan sebagai kromogen

karena adanya hydrogen peroksida. 6lide kemudian diberi pe!arnaan hematoksilin. 6emua

reaksi dilakukan dalam suhu ruang #00DC. Antibodi aktin anti otot polos #monoklonal mouse2

/I04,2 -, menit inkubasi2 klon /A12 katalog J ,4/ 8ako digunakan untuk mengidenti(ikasi

otot polos. 6ebagai kontrol negati(2 serum tikus normal disubstitusikan untuk antibodi.

Kelompok POP (n=! Kelompok non POP (n=! P"value

)sia #mean 68 61- 46-5 0.001

Paritas#median2 range 1 (14) 1 (05)

Paritas er aginam#median2 range

1 (14) 1 (05)

Merokok #n25 , ,

Menopaus #n25 6 (100) 5 (8)

M?#mean 68 29-2 29-

Tingkat P'P #median2

range (2) 0 (0) 0.002

Tabel /. Karakteristik klinis !anita yang mengalami dan tidak mengalami prolaps dinding anterior agina

Gambar /. Analisa imunohistokimia otot polos pada dinding anterior agina #/,,E. iopsi dinding anterior agina

dari pasien tanpa #a dan dengan prolaps uterin #b yang di!arnai secara imunologis dengan antibody

terhadap L=actin otot polos

Analisa gambarI penentuan area (raksi otot polos nonaskular

1561Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


4/10

6el otot polos diidenti(ikasi menggunakan pe!arnaan spesi(ik antibody terhadap L=aktin.

agian yang telah di!arnai kemudian dianalisis dengan mikroskop Nikon *clipse ,i yang

dilengkapi dengan kamera digital Nikon 86=+/ dan sebuah system analisis gambar. #?mage"2

N?92 ethesda2 M8. Teknik pemilahan gambaran yang mirip pada gambar imunohistokimia

telah di deskripsikan oleh +ehr et al. dan oreham et al. 8ari tiap slide2 lapang pandang acing

dianalisa. 'to agina #kecuali otot polos agina dipertebal secara manual pada tiap potongan

melintang dan area pe!arnaan spesi(ik L=aktin diidenti(ikasi pada tiap slide. 6etelah itu2 area

pe!arnaan L=aktin dalam area yang telah ditandai dihitung dengan perangkat lunak ?mage".

3raksi otot polos noaskular pada area tersebut ditentukan oleh perhitungan area pe!arnaan L=

aktin. Proporsi imunoreaktiitas dengan L=aktin otot polos digambarkan oleh (raksi dari total

area otot aginal. ;i!ayat medis pasien disamarkan dari pemeriksa.

Analisa gambarI penentuan jumlah dan ukuran dari area nucleus otot polos

Pada tiap slide otot aginal #kecuali otot polos askular dipertebal secara manual dan

area pe!arnaan spesi(ik L=aktin diidenti(ikasi. 6etelah itu2 jumlah nucleus otot polos dalam area

yang telah ditandai dihitung oleh perangkat lunak computer #?mage"2httpI


5/10

Gambar -. Apoptosis otot polos pada dinding anterior agina

ditentukan dengan obserasi cermat potongan pe!arnaan

T)N*+ dan potongan pe!arnaan 9*. ?ndeks apoptosis #?A

ditentukan sebagai jumlah sel apoptosis tiap 4,, sel otot polos.

?A dihitung pada !anita tanpa #non P'P2 n$% dan dengan

prolaps dinding anterior agina #P'P2 n$%. Asterisk P,2,4

8eteksi sel apoptosis

8eteksi sel apoptosis dilakukan dengan

metode T)N*+ termodi(ikasi yang telah

dideskripsikan oleh 6gonc dan 7ick2 yang metode

originalnya ditemukan oleh Garieli e al. )ntuk deteksi potongan 8NA2 digunakan perangkat

deteksi kematian sel in situ yang menggunakan metode terminal deoEynucleotidyl=trans(erase=

mediated d)TP nick=end=labeling. Potongan usus besar normal2 dengan dan tanpa pemberian

8Nase2 digunakan sebagai control positi( dan negatie. 6el apoptosis ditentukan denganobserasi cermat potongan pe!arnaan T)N*+ dan potongan pe!arnaan 9* karena sebagian sel

nekrotik dapat menunjukkan positi( T)N*+. "ika sel pe!arnaan T)N*+ positi( uga

menunjukkan gamaran hitologis nekrosis pada pe!arnaan 9*2 mereka tidak dimasukkan sebagai

sel apoptosis. Pada tiap kasus2 4,, sel otot polos diealuasi dengan perbesaran kuat #1,,E pada

/, lapang pandang acak: pemeriksa tidak mengetahui data maupun ri!ayat klinis pasiennya.

?ndeks apoptosis #?A ditentukan sebagai jumlah sel apoptosis tiap 4,, sel otot polos.

Metode 6tatistikal

Perhitungan besar sampel berdasarkan data a!al peneliti di mana apoptosis sel otot polos

jarang terjadi # ?ndek apoptosis ,2,- dari !anita tanpa prolaps dinding agina. Menggunakanuji dua sisi dan diasumsikan tingkat alpha 45 dan kekuatan ,52 dengan laju ?ndeks Apoptosis

,2,-2 dibutuhkan besar sampel sebanyak % pada tiap kelompok penelitian.

8ata berkelanjutan dibandingkan menggunakan )ji #tu'ent tjika distribusi sampel normal atau

dengan ujiMann()*itney +jika distribusi sample asimetris. Perbedaan dianggap bermakna jika

P=value ,2,4. 6emua perhitungan statistik dilakukan dengan perangkat lunak 6igma6tat #6P66

?nc2 Chicago2 ?+.

156Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


6/10

Gambar 1. Apoptosis sel otot polos pada dinding anterior agina. )ji T)N*+ dilakukan pada biopsy dinding

anterior agina dari pasien tanpa #a dan dengan prolaps dinding anterior agina #b. Penulis

menganggap sel benar=benar mengalami apoptosis jika uji T)N*+ positi( disertai gambaran mor(ologis

apoptosis yang jelas

#asil

Karakteristik demogra(is !anita dengan dan tanpa prolaps dinding anterior agina

dideskripsikan dalam tabel /. 7anita dalam kelompok P'P secara bermakna lebih tua

dibandingkan dengan !anita dalam kelompok tanpa P'P. Omean682 P=alue #%/ - tahun s.

1%4 tahun #Tabel /. 8itambah lagi2 tingkatan prolaps dinding anterior agina lebih tinggi pada

kelompok P'P dibandingkan dengan kelompok non P'P mean2 range2 P=alue O- #0F- s. ,

#,Q2 ,.,,0R.

Pe!arnaan imunologis menunjukkan penyebaran sel otot polos merata2 berbentuk tegas

dan serupa #uni(orm pada pasien tanpa P'P #Gamb. /a. 9al ini kontras dengan penyebaran sel

otot polos tidak merata pada pasien dengan P'P #Gamb. /b.

Analisa mor(ometrik kuantitati( menunjukkan bah!a area (raksi otot polos noaskular

pada biopsy dinding agina !anita yang mengalami prolaps secara bermakna menurun

dibandingkan dengan !anita yang tidak mengalami prolaps mean2 range2 P=alue O#,.-%,./0

s. ,./%,./0 P$,.,0/2 Gamb. 0QR. Pemeriksaan apoptosis sel otot polos agina oleh uji

T)N*+ menunjukkan bah!a indeks apoptosis sel otot polos secara bermakna meningkat pada

!anita yang mengalami P'P dibandingkan dengan !anita yang tidak mengalami P'P

mean682 P=alue O#,.,1,.,/ s. ,.,0,.,-2 P$,.,1/2 Gamb. - dan 1QR. Tambahan2 analisis

kedua nukleus sel otot polos menunjukkan penurunan jumlah nucleus yang bermakna pada

!anita yang mengalami prolaps dibandingkan dengan !anita yang tidak mengalami prolaps

Omean682 P=alue #//%%0s. 0-,1%2 ,.,/Q. Total area nucleus sel otot polos secara

bermakna menurun Omean682 P=alue #02,0-2,% Sm0 s. 42/-4/2/, Sm02 ,.,-Q.

Tetapi2 rerata area nucleus sel otot polos tidak memiliki perbedaan yang signi(ikan antara dua

kelompok tersebut Omean682 P=alue #02,0-2,% Sm0 s. 42/-4/2/, Sm02 ,.,-Q.

1564Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


7/10

Pembahasan

8alam penelitian yang membandingkan /0 !anita yang menjalani operasi karena

perbaikan P'P maupun kondisi ginekologis benigna2 prolaps dinding anterior agina ditemukan

berhubungan dengan penurunan bermakna pada area (raksi otot polos. 8itambah lagi2 peneliti

mendokumentasikan penurunan bermakna dari jumlah nukleus otot polos dan peningkatan

bermakna pada apoptosis sel otot polos di agina. Penemuan=penemuan tersebut mengesankan

bah!a penurunan bermakna pada jumlah otot polos dinding anterior agina disebabkan

apoptosis yang dipercepat.

Meskipun mekanisme pasti P'P masih menjadi perdebatan2 de(ek struktural dalam (ascia

endopanggul dan otot yang menyokong iscera panggul diduga berperan penting dalam

terjadinya P'P. Perubahan mor(ologis pada !anita yang mengalami P'P telah digambarkan

secara rinci pada berbagai penelitian. Pada pasien dengan P'P2 jaringan endopanggul telah

menunjukkan penurunan jumlah kolagen2 gangguan metabolism kolagen2 dan peningkatan

pemecahan kolagen. 6elain gangguan dalam komponen structural2 terjadi juga perubahan si(at(isiologis seperti gangguan kontraktibilitas myi(ibriblast agina. 8itambah lagi2 area (raksi sel

otot polos tampaknya secara bermakna lebih sedikit pada pasien dengan prolaps tanpa

memandang tingkatan.

Penemuan para penulis2 yang mennujukkan penuruna (raksi area otot polos pada lapisan

muskularis2 konsisten dengan penelitian sebelumnya. Tidak hanya jumlah sel otot polos pada

area pototngan melintang berkurang2 tetapi terdapat juga kumpulan sel otot polos irregular pada

pemeriksaan mikroskopik. Total area nukleus sel otot polos secara bermakna berkurang tetapi

reratanya tidak menunjukkan perbedaan bermakna antar 0 kelompok penelitian ini. Penulis

hanya dapat berspekulasi mengapa tidak terdapat perbedaan tersebut.6ebagian sel otot polos

tanpa tanda=tanda apoptosis dapat mencoba mengkompensasi (ungsi sel otot polos yang telahmengalami apoptosis sehingga menyebabkan inti membesar yang meniadakan e(ek apoptosis

pada ukuran rata=rata nukleus otot polos.

Penurunan jumlah dan susunan yang tidak beraturan pada sel otot polos tersebut

sepertinya disebabkan oleh berbagai (aktor. "umlah paritas2 peningkatan tekanan intraabdominal

kronis2 penuaan2 trauma2 merokok dapat berperan dalam menghambat di(erensiasi normal otot

poos menjadi otot polos yang berkontraksi secara normal. Namun proses remodeling abnormal

jaringan ini belum dimengerti secara pasti.

Penemuan penting dalam penelitian ini adalah peningkatan drastic pada indeks apoptosis

pasien yang mengalami prolaps dinding agina anterior. )ntuk menambah pengetahuan kita

semua2 ini adalah studi pertama yang menemukan apoptosis sebagai komponen dari mekanisme

yang menyebabkan prolaps organ pada manusia dan temuan penulis dapat membantu

menjelaskan salah satu penyebab otot polos menjadi abnormal pada prolaps organ panggul.

Pierce et al melaporkan terdapat sejumlah sel apoptosis pada bagian paraaginal monyet tupai2

Pierce tidak menemukan perbedaan jumlah sel apoptosis pada monyet tupai yang mengalami

prolaps maupun yang tidak

1565Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


8/10

Apoptosis telah digambarkan sebagai akibat dari hipoksia2 trauma2 denerasi2 dan

peningkatan metabolism. Trauma regang dari persalinan per aginiam merupakan (actor risiko

penting dalam terjadinya prolaps dan dapat menyebabkan penurunan sokongan dinding panggul

berkelanjutan2 sehingga kemungkinan terjadinya prolaps urogenital meningkat. Trauma otot

polos menunjukan peningkatan apoptosis pada keadaan akut2 namun2 belum ada penelitian

longitudinal yang dilakukan.

Kelompok penelitian penulis memiliki berbagai kemiripan dalam hal status menopause

dan terapi hormone tetapi !anita dalam kelompok prolaps dinding anterior agina lebih tua

dibandingkan dengan kelompok satunya2 hal ini tidak mengejutkan karena P'P memang lebih

banyak ditemui pada !anita yang lebih tua. Namun2 !anita yang leih tua mungkin memiliki

peningkatan laju apoptosis otot polos dan penurunan area (raksi otot polos agina. 6ehingga2

penulis tidak dapat menyingkirkan kemungkinan perbedaan yang terjadi dalam penelitian ini

dipengaruhi (aktor usia. Tetapi bagaimanapun juga sebelumnya telah dilaporkan (raksi otot polos

muskularis pada dinding anterior dan posterior agina menurun secara bermakna pada !anita

dengan P'P dan tidak berhubungan dengan (aktor usia. Area (raksi otot polos nonaskularmuskularis dari dinding anterior agina memiliki kemiripan antara - kelompok !anita #usia 4, t

th2 4,=%, th2 %,th yang mengalami prolaps genital.

atasan dalam penelitian ini adalah kecilnya besar sampel dan ketidak mampuan

membedakan apakah prolaps disebabkan atau menyebabkan perubahan otot polos. 8ibutukan

lebih banyak lagi pasien sebagai sampel untuk menjelaskan mekanisme cedera pada kelompok

pasien2 dengan menekankan penelitian lebih lanjut untuk membedakan apakah perubahan otot

polos dan peningkatan merupakan sebab atau akibat dari prolaps organ.

$e%erensi

/. 'lsen A+2 6mith U"2 ergstrom "'2 Colling "C2 Clark

A+ #/ *pidemiology o( surgically managed pelic

organ prolapse and urinary incontinence. 'bstet Gynecol

I4,/F4,%

0. aden 732 7alker T #/0 The anatomy o(

uteroaginal support. ?nI aden 732 7alker T #eds

6urgical repair o( aginal de(ects. " +ippincott2

Philadelphia2 pp 10F1

-. oreham MK2 7ai CV2 Miller ;T2 6cha((er "?2 7ord ;A

#0,,0b Morphometric properties o( the posterior aginal

!all in !omen !ith pelic organ prolapse. Am " 'bstet

Gynecol /I/4,/F/4, discussion /4,F/4,

1. oreham MK2 7ai CV2 Miller ;T2 6cha((er "?2 7ord ;A#0,,0a Morphometric analysis o( smooth muscle in the

anterior aginal !all o( !omen !ith pelic organ prolapse.

Am " 'bstet Gynecol /I4%F%-

4. Perlman 92 Maillard +2 Krasinski2 7alsh K #/

*idence (or the rapid onset o( apoptosis in medial smooth

muscle cells a(ter balloon injury. Circulation 4I/F

%. 9iona A2 +eeu!enburgh C #0,, The role o(

mitochondrial 8NA mutations in aging and sarcopeniaI

?mplications (or the mitochondrial icious cycle theory o(

aging. *Ep Gerontol 1-I 01F--

. ump ;C et al #/% The standardi>ation o(

terminology o( (emale pelic organ prolapse and pelic

(loor dys(unction. Am " 'bstet Gynecol /4I/,F/

. +ehr 9A2 Manko(( 8A2 Cor!in 82 6anteusanio G2 Go!n

AM #/ Application o( Photoshop=based image analysis

to Wuanti(ication o( hormone receptor eEpression in breast

cancer. " 9istochem Cytochem 14I/44F/4%4

. 6gonc ;2 7ick G #/1 Methods (or the detection o(

apoptosis. ?nt Arch Allergy ?mmunol /,4I-0F--0

/,. Garieli V2 6herman V2 en=6asson 6A #/0

?denti(ication o( programmed cell death in situ ia speci(ic

labeling o( nuclear 8NA (ragmentation. " Cell iol//I1-F4,/

//. 8e+ancey "' #/0 Anatomic aspects o( aginal

eersion a(ter hysterectomy. Am " 'bstet Gynecol

/%%I//F/01 discussion 01F//

/0. Norton PA2 oyd C2 8eak 6 #/0 Collagen synthesis

in !omen !ith genital prolapse or stress urinary

incontinence. Neurol )rodyn //I-,,F-,/

1566Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


9/10

/-. 6mith A;2 9osker G+2 7arrell 87 #/ The role o(

partial deneration o( the pelic (loor in the aetiology o(

genitourinary prolapse and stress incontinence o( urine. A

neurophysiological study. r " 'bstet Gynaecol %I01F0

/1. Poncet 62 Meyer 62 ;ichard C2 Aubert "82 "uillerat=

"eanneret + #0,,4 The eEpression and (unction o( the

endothelin system in contractile properties o( aginalmyo(ibroblasts o( !omen !ith uteroaginal prolapse. Am "

'bstet Gynecol /0I10%F1-0

/4. Vamamoto M2 Aka>a!a K2 Aoyagi M2 Vamamoto K

#0,,, Changes in biological characteristics during the

cellular aging o( ligament (ibroblasts deried (rom patients

!ith prolapsus uteri. Mech Ageing 8e //4I/4F/

/%. Pierce +M et al #0,, +eator ani muscle and

connectie tissue changes associated !ith pelic organ

prolapse2 parity2 and aging in the sWuirrel monkeyI a

histologic study. Am " 'bstet Gynecol / #%,Ie%/F%

/. 6cha((er "?2 7ai CV2 oreham MK #0,,4 *tiology o(

pelic organ prolapse. Clin 'bstet Gynecol 1I%-F%1

/. oreham MK2 Miller ;T2 6cha((er "?2 7ord ;A #0,,/6mooth muscle myosin heay chain and caldesmon

eEpression in the anterior aginal !all o( !omen !ith and

!ithout pelic organ prolapse. Am " 'bstet Gynecol

/4I11F40

1567Int Urogynecol J (2008) 19:15591566


10/10

peningkatan apoptosis otot polos vagina pada wanita yang mengalami prolaps organ panggul

Documents