LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI PT MERCK TBK.

(Validasi Metode Uji Disolusi Natrium Diklofenak dalam Obat Tablet Salut Enterik

Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT))

Laporan Praktik Kerja Industri sebagai Syarat Mengikuti Ujian Lisan

Semester Genap Tahun Ajaran 2014/2015

oleh

Andrea Gilang Fauzi 115706909

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri

Sekolah Menengah Kejuruan – SMAK

Bogor

2015

LEMBAR PERSETUJUAN DAN PENGESAHAN

Disetujui dan disahkan oleh:

Disetujui oleh:

Rahayu Ningsih, S.Si, MP Dwika Riandari, M. Si

NIP 19660726 200212 2 001

Pembimbing I, Pembimbing II,

Disahkan oleh,

Dra. Hadiati Agustine

NIP 19570817 198103 2 002

Kepala Sekolah Menengah Kejuruan-SMAK Bogor

i

KATA PENGANTAR

Laporan Praktik Kerja Industri ini disusun sebagai syarat melengkapi

tugas semester VIII di Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor. Di semester

VIII ini para siswa wajib melaksanakan Praktik Kerja Industri selama 4 bulan di

dunia industri. Setelah melaksanakan Prakerin, para siswa wajib untuk menulis

laporan yang berisikan tentang kegiatan yang mereka lakukan selama masa

prakerin. Laporan Prakerin ini berjudul “Validasi Metode Uji Disolusi Natrium

Diklofenak dalam Obat Tablet Salut Enterik”.

Adapun isi dari Laporan ini meliputi Pendahuluan, Tinjuan Umum Institusi

Prakerin, Kegiatan di Laboratorium, Hasil dan Pembahasan, serta Kesimpulan

dan Saran. Bagian-bagian di dalamnya membahas tentang kegiatan yang

dilakukan selama masa prakerin. Terutama tentang validasi metode uji disolusi

diklofenak dalam obat tablet salut enterik. Validasi metode uji yang dilakukan

mengacu kepada prosedur standar international yaitu United State

Pharmacopeia (USP).

Puji dan Syukur juga saya naikan Ke Hadirat Tuhan Y.M.E, yang telah

menganugerahi segala kepandaian dan segala yang baik kepada penulis.

Sehingga laporan ini dapat diselesaikan tepat waktu. Tidak lupa penulis juga

menyampaikan ucapan terima kasih kepada:

1. Dra. Hadiati Agustine selaku Kepala Sekolah Menengah Kejuruan – SMAK

Bogor.

2. Dra. Leni Liedarsino selaku Senior Manager Product Development PT.

Merck Tbk.

3. Ibu Amilia Sari Ghani, S.S selaku Waka Bidang Hubungan Kerja Industri.

4. Ibu Rahayu Ningsih, S.Si, MP selaku Pembimbing Institusi PT. Merck Tbk

atas bimbingan dan saran yang diberikan kepada penulis.

5. Ibu Dwika Riandari, M.Si selaku Pembimbing di Sekolah Menengah

Kejuruan-SMAK Bogor.

6. Orang tua yang senantiasa mendoakan dan mendukung selama prakerin

dan penulisan laporan ini.

7. Bapak dan Ibu Guru beserta seluruh staf pegawai Sekolah Menengah

Kejuruan-SMAK Bogor.

ii

8. Pak Kamto, Pak Arief, Mas Ade, Kak Dina, Kak Ismi, Kak Galih, Kak Lusy,

Kak Wika, Kak Cepi, dan Mas Dedi yang telah memberikan bimbingan

kepada penulis selama melakukan kegiatan prakerin.

9. Annisa Indah Pratiwi, Anida Maulidina Nurhayati, Farihah Naafiumamah, dan

Megie Noviani Wongso selaku rekan selama prakerin di PT Merck Tbk.

10. Seluruh teman-teman angkatan 57 Quinsena Quark atas kebersamaan dan

semangatnya.

11. Seluruh pihak yang telah membantu dengan keikhlasannya hingga

terselesaikannya laporan ini.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa laporan Prakerin ini tidak luput

dari kekurangan. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati penulis

mengharapkan kritik dan saran yang mampu menghasilkan perbaikan-perbaikan

yang bermanfaat dikemudian hari. Akhir kata semoga laporan Prakerin ini

bermanfaat bagi pembaca umumnya dan siswa-siswi Sekolah Menengah

Kejuruan-SMAK Bogor khususnya.

Bogor, Februari 2015 Penulis,

iii

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ............................................................................................. i

DAFTAR ISI ......................................................................................................... iii

DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. v

DAFTAR TABEL ................................................................................................. vi

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... vii

BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

A. Latar Belakang .......................................................................................... 1

B. Tujuan Prakrein ......................................................................................... 2

C. Materi Prakerin .......................................................................................... 2

D. Waktu dan Tempat Pelaksanaan Prakerin ................................................. 3

E. Tujuan Pembuatan Laporan Prakerin ........................................................ 3

BAB II TINJAUAN UMUM INSTITUSI PRAKERIN ............................................... 4

A. Profil PT Merck Tbk................................................................................... 4

1. Sejarah .................................................................................................. 4

2. Visi dan Misi PT Merck Tbk ................................................................... 6

B. Produk Yang Diproduksi ........................................................................... 6

C. Struktur Organisasi .................................................................................... 7

D. Tata Letak dan Fasilitas Bangunan ............................................................ 7

E. Disiplin kerja ............................................................................................. 8

F. Administrasi Laboratorium ......................................................................... 9

BAB III KEGIATAN DI LABORATORIUM DAN TINJAUAN PUSTAKA............... 10

A. Latar Belakang Pemilihan Judul Laporan ................................................ 10

B. Masalah dan Pentingnya Masalah .......................................................... 10

C. Kegiatan di Laboratorium ......................................................................... 11

D. Tinjauan Pustaka ..................................................................................... 11

1. Validasi Metode ................................................................................... 11

2. Obat .................................................................................................... 15

3. Tablet .................................................................................................. 19

4. Uji Disolusi........................................................................................... 25

5. Natrium Diklofenak .............................................................................. 30

6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi .......................................................... 33

E. Metode Analisis ....................................................................................... 42

iv

1. Preparasi Reagent ............................................................................... 42

2. Preparasi Larutan Standar ................................................................... 44

3. Kondisi Disolusi ................................................................................... 46

4. Kondisi Kromatografi ........................................................................... 46

5. Preparasi Larutan Spike untuk Uji Akurasi ........................................... 46

6. Preparasi Sampel ................................................................................ 47

7. Sampel ................................................................................................ 49

8. Penetapan validasi .............................................................................. 50

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................. 53

A. Uji Kesesuaian Sistem ............................................................................ 53

B. Uji Spesifisitas ......................................................................................... 54

C. Uji Linearitas ............................................................................................ 54

D. Uji Akurasi ............................................................................................... 56

E. Uji Presisi ................................................................................................ 59

1. Keterulangan (Repeatability) ............................................................... 59

2. Ketertiruan (Reproducibility) ................................................................ 60

F. Uji Ketahanan ......................................................................................... 63

1. Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel .......................................... 63

2. Variasi Prosedur .................................................................................. 65

BAB V SIMPULAN DAN SARAN ....................................................................... 67

A. SIMPULAN ............................................................................................. 67

B. SARAN ................................................................................................... 67

DAFTAR PUSTAKA........................................................................................... 68

LAMPIRAN ........................................................................................................ 71

v

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1 PT Merck Tbk. Indonesia .................................................................... 4

Gambar 2 Tahapan Penguraian Obat ................................................................ 26

Gambar 3 Tahapan Penguraian Obat di dalam Tubuh ....................................... 26

Gambar 4 Alat disolusi metode basket .............................................................. 28

Gambar 5 Alat disolusi metode paddle .............................................................. 29

Gambar 6 Rumus Bangun Na Diklofenak .......................................................... 30

Gambar 7 Pembentukan Prostaglandin ............................................................. 31

Gambar 8 Instrumentassi KCKT ........................................................................ 38

Gambar 9 Kurva Linearitas Standar tahap asam ............................................... 55

Gambar 10 Kurva Linearitas Standar tahap buffer ............................................. 56

Gambar 11 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap asam .............................. 63

Gambar 12 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap buffer ............................. 64

Gambar 13 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap asam .............................. 64

Gambar 14 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap buffer .............................. 65

vi

DAFTAR TABEL

Tabel 1 Tabel 1 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap asam ....................... 45

Tabel 2 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap buffer ................................... 45

Tabel 3 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap asam ............................................ 48

Tabel 4 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap buffer ............................................ 49

Tabel 5 Variasi Prosedur Paameter KCKT ......................................................... 52

Tabel 7 Hasil Uji Kesesuaian Sistem ................................................................. 53

Tabel 8 Hasil Uji Akurasi tahap asam ................................................................ 57

Tabel 9 Hasil Uji Akurasi tahap buffer ................................................................ 58

Tabel 10 Hasil Uji Keterulangan tahap asam ..................................................... 59

Tabel 11 Hasil Uji Keterulangan tahap buffer ..................................................... 60

Tabel 12 Hasil Uji Ketertiruan tahap asam ......................................................... 61

Tabel 13 Hasil Uji Ketertiruan tahap buffer ........................................................ 62

Tabel 18 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap asam .................... 65

Tabel 19 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap buffer .................... 66

vii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Rumus Perhitungan laju disolusi ..................................................... 71

Lampiran 2 Rumus Perhitungan laju disolusi untuk uji akurasi ........................... 72

Lampiran 3 Kromatogram Uji Spesifisitas .......................................................... 74

Lampiran 4 Tabel Uji Linearitas ......................................................................... 78

Lampiran 5 Tabel Hasil Uji Ketegaran ............................................................... 79

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Semakin berkembangnya zaman, pembangunan di berbagai sektor

yang terjadi di Indonesia pun semakin berkembang. Salah satunya adalah

sektor industri, perkembangan pengetahuan dan kemajuan teknologi yang

semakin canggih telah membawa kemajuan yang signifikan dalam sektor

industri. Dengan perkembangan tersebut, tentunya tantangan yang dihadapi

masyarakat industri juga akan semakin berat dan terus meningkat. Maka

disinilah peran Sekolah Menengah Kejuruan untuk mencetak lulusan-lulusan

yang siap menghadapi tantangan tersebut dan dapat membangun negeri ke

arah yang lebih baik.

Sebagaimana SMK lainnya di Indonesia, Sekolah Menengah

Kejuruan SMAK Bogor memiliki Visi dan Misi yang bertujuan untuk

menghasilkan lulusan profesional yang mampu memenuhi kebutuhan

masyarakat dunia usaha usaha dan dunia industri baik di tingkat nasional

maupun tingkat internasional. Dari tujuan tersebutlah maka SMK-SMAK

Bogor perlu untuk membangun kemitraan dengan dunia industri, dimana

dunia industri turut membantu sekolah melalui kegiatan Praktik Kerja Industri.

Praktik Kerja Industri ini adalah sebagai sarana bagi para siswa SMK untuk

belajar tentang dunia industri yang akan mereka hadapi dengan cara terjun

langsung ke lapangan dan menjadi bagian dari dunia industry tersebut.

Dalam Praktik Kerja Industri ini, siswa dapat melihat, mempelajari, dan

mempraktikkan prosedur dan peralatan modern yang tidak dapat dipelajari

disekolah secara langsung. Dan juga siswa dapat belajar untuk menyiapkan

dan menyesuaikan mental dengan lingkungan dan disiplin kerja di dunia

industri. Sehingga setelah lulus dari sekolah dapat menjadi seorang analis

kimia yang terampil, kreatif, dan bermoral.

B. Tujuan Prakrein

Adapun tujuan umum diadakannya kegiatan Praktik Kerja Industri

adalah sebagai berikut:

a. Meningkatkan pengetahuan, kemampuan dan keterampilan sebagai

bekal untuk masuk ke dunia industri sebagai seorang analis kimia.

b. Meningkatkan pengetahuan dan keterampilan siswa dalam penggunaan

instrument untuk analisis yang lebih modern dibandingkan fasilitas yang

ada di sekolah.

c. Memberikan wawasan kepada siswa tentang aspek-aspek yang termasuk

ke dalam ruang lingkup dunia kerja industri, antara lain yaitu: struktur

organisasi, disiplin kerja, pemeliharaan lingkungan dan keselamatan

kerja.

d. Memperkenalkan calon lulusan tenaga analis kimia SMK SMAK Bogor

kepada instansi tempat Prakerin.

e. Mendapatkan masukan dan saran untuk mengembangkan dan

meningkatkan kualitas pendidikan dan pelatihan di SMK SMAK Bogor.

C. Materi Prakerin

Materi pembelajaran di dalam Praktik Kerja industri terdiri atas:

1. Struktur organisasi, fungsi organisasi, disiplin kerja, dan administrasi

(terutama administrasi laboratorium) institusi siswa melaksanakan

Prakerin.

2. Pengetahuan tentang komoditi yang dianalisis, baik secara teoritis

maupun praktis.

3. Pengetahuan tentang metoda analisis kimia yang dilaksanakan secara

teoritis maupun praktis.

4. Pengetahuan tentang proses pengendalian mutu.

Secara umum materi yang diberikan adalah latihan analisis kimia

yang merupakan pekerjaan sehari-hari dan bukan dititik beratkan pada

penelitian.

D. Waktu dan Tempat Pelaksanaan Prakerin

Prakerin dilakukan di unit atau bagian pada perusahaan atau lembaga

penelitian yang terkait dengan analis kimia. Institusi yang dipilih penyusun

adalah PT Merck Tbk yang berlokasi di Jalan T.B. Simatupang No.8 Pasar

Rebo, Jakarta Timur, Kode pos 13760. Nomor telepon : (021) 28565600, fax

(021)28565601. Penyusun melaksanakan prakerin di Departemen Product

Development pada bagian Analytical Development. Prakerin dilakukan

selama empat bulan terhitung mulai 3 November 2014 hingga 27 Februari

2015.

E. Tujuan Pembuatan Laporan Prakerin

Seusai melaksanakan Prakerin, siswa/siswi diwajibkan untuk

membuat laporan Prakerin. Laporan Prakerin tersebut berisikan tentang

kegiatan dan materi yang diberikan kepada siswa selama melaksanakan

Praktik Kerja Industri atas persetujuan pembimbing, adapun tujuannya adalah

sebagai berikut

1. Sebagai media untuk mengetahui sejauh mana siswa/siswi peserta

Prakerin telah mempelajari dan memahami materi yang telah diberikan

selama proses Prakerin berlangsung.

2. Sebagai koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi

Prakerin sehingga dapat menambah pengetahuan baik penyusun

maupun pembaca.

3. Sebagai wujud tanggung jawab siswa dalam melaksanakan kewajibannya

serta melatih siswa untuk dapat membuat laporan kerja dan

mempertanggung jawabkannya.

4

BAB II TINJAUAN UMUM INSTITUSI PRAKERIN

A. Profil PT Merck Tbk

1. Sejarah

Pada awal pendiriannya, Merck adalah sebuah apotek bernama

“Engel Apotheke” yang didirikan oleh Jacob Merck pada tahun 1668 di

kota Darmstadt, Jerman. Apotek ini menjual obat-obatan dan bahan

kimia. Barulah pada tahun 1827, Immanuel Merck mendirikan pabrik obat-

obatan yang diantaranya adalah alkaloid dan beberapa senyawa kimia.

Hingga saat ini pabrik tersebut telah berkembang menjadi perusahaan

farmasi multinasional dan berubah nama menjadi Merck KgaA.

Pada tanggal 14 Oktober 1970, Merck KgaA membangun cabang

di Indonesia dengan nama PT Merck Indonesia (PTMI). Kemudian

memulai pembangunan fasilitas produksi Farmasi dan Kantor Umum 2

tahun kemudian. PTMI memulai produksi farmasi pada April 1974 dan

membuat perjanjian lisensi dengan Astra lima tahun sesudahnya yaitu

pada 1979. PTMI menjadi perusahaan publik pada tahun 1981 dengan

menawarkan saham kepada publik dan merupakan salah satu

perusahaan pertama yang terdaftar di Bursa Saham Indonesia. Sebagian

besar saham dimiliki oleh Grup Merck yang berkantor pusat di Jerman.

Gambar 1 PT Merck Tbk. Indonesia

5

Pada masa itu pemerintah Indonesia mewajibkan perusahaan

farmasi asing untuk memproduksi sedikitnya satu bahan baku kuat,

sehingga tahun 1983 PT Merck Indonesia membangun fasilitas produk

kimia. Thiamin Disulfida merupakan salah satu produksi kimia yang

pertama pada tahun 1985, lalu PTMI memulai bisnis Obat Bebas pada

tahun1993 dan mendapat 12 sertifikat Cara Pembuatan Obat yang Baik

(CPOB) untuk semua fasilitas produksi.

Pada tahun 2000, perusahaan mulai menggunakan sistem

SCALA. Sistem ini memudahkan akses data dan pencarian informasi.

Dalam rangka penerapan identitas korporat Merck secara global, pada

tahun 2002 nama perseroan berubah menjadi PT Merck Tbk. Kini PT

Merck Tbk menjalankan usaha pada tiga sector utamanya yaitu:

1. Farmasi Merck

Divisi Farmasi Merck mengembangkan, membuat dan

memasarkan obat-obatan dengan formula yang inovatif.

2. Kimia Merck

Merck menawarkan ragam bahan kimia yang sangat luas

untuk aplikasi teknologi yang canggih. Di Indonesia, PT. Merck

Tbk. memiliki dua sektor bisnis kimia yaitu Perfomance Materials

dan Merck Millipore. Departemen Performance Meterials

mencakup produk-produk pigmen, termasuk di dalamnya produk

untuk aplikasi kosmetik. Departemen ini merupakan pemimpin

global untuk produk-produk kristal cair yang digunakan untuk layar

televisi, PC dan elektronik lainnya.

Departemen Merck Millipore mencakup produk-produk

untuk aplikasi bisnis Bioscience, Lab Solutions, Process Solutions.

Departemen ini menyediakan alat uji kadar logam dan reagen

unuk penelitian protein, solusi sel kultur, serta layanan penemuan

obat bagi perusahaan biofarmasi, laboratorium kimia untuk

penelitian analisis dan laboratorium rumah sakit.

3. Merck Serono

Merck Serono mengkhususkan diri pada pengobatan

kanker, penyakit menurunnya fungsi syaraf, kemandulan, endkrin

6

dan penyakit metabolisme, penyakit kardiovaskular serta berbagai

kondisi lainnya dengan kebutuhan medis yang sulit.

2. Visi dan Misi PT Merck Tbk

a. Visi:

Kami di PT Merck Tbk, dihargai oleh seluruh pemegang

kepentingan karena kesuksesan kami yang berkelanjutan,

berkesinambungan, dan di atas pangsa pasar pada bidang yang kami

jalankan.

b. Misi:

Kami di PT Merck Tbk memberikan nilai tambah bagi :

1. Pelanggan kami, melalui perluasan kesempatan pada usaha

mereka dalam jangka panjang, membentuk kemitraan yang saling

menguntungkan.

2. Konsumen kami, melalui penyediaan produk-produk yang aman

dan bermanfaat.

3. Pemegang saham kami, melalui pencapaian hasil usaha yang

berkesinambung dan berarti.

4. Karyawan kami, melalui penciptaan lingkungan kerja yang aman

dan pemberian kesempatan yang sama bagi semua.

5. Lingkungan kami, melalui teladan yang kami berikan dalam bentuk

tindakan perlindungan dan dukungan masyarakat sekitar.

B. Produk Yang Diproduksi

Di bidang farmasi, PT Merck Tbk memproduksi dan menjual merek

farmasi terkemuka seperti seperti Neurobion, Sangobion, Illiadin, Becombion,

dan Glucophage dengan fasilitas bersertifikat cGMP.

7

C. Struktur Organisasi

PT. Merck Tbk merupakan perusahaan yang bergerak dibidang

farmasi. PT. Merck Tbk terdiri dari lima divisi masing-masing dipimpin oleh

seorang direktur. Berikut divisi PT. Merck Tbk:

1. Divisi Merck Serono.

2. Divisi Consumen Health Care (CHC).

3. Divisi Chemicals.

4. Divisi Human Resources.

5. Divisi Plant.

6. Divisi Finance and Controlling.

Divisi Plant terdiri dari 6 bagian,

1. Quality Assurance (QA) and Quality Control (QC) Departement.

2. Production Departemen.

3. Supply Chain Management (SCM).

4. Engineering Departement.

5. Product Development.

Product Development terdiri dari 3 bagian, yaitu:

a. Analytical Development.

b. Galenic Development.

c. Packaging Development.

D. Tata Letak dan Fasilitas Bangunan

PT Merck Tbk didirikan dalam bentuk Perusahaan Modal Asing

berdasarkan undang-undang No.1/1976 dengan izin mendirikan bangunan

diatas area seluas 22.257 m2 dan luas bangunan 4.694 m2. Sejak pertama

kali didirikan PT Merck Tbk berlokasi di Jl. TB Simatupang No.8 Pasar Rebo,

Jakarta Timur. PT Merck dibagi atas 3 gedung, yaitu:

1. Gedung pertama merupakan kantor, terdiri dari ruang President Director,

Departemen Finance & accounting, Departemen Pembelian

(Procurement), Departemen Human Resource (HR), Departemen General

Affair (GA), Depatemen HSE (Health Safety Environment), Divisi

Chemical dan Departemen IS.

2. Gedung kedua terdiri atas ruang produksi pharma, gedung bahan baku

(Raw Material), gudang bahan pengemas (packaging materials), gudang

8

obat jadi (finished goods), ruang laboratorium pengawasan mutu/QC

(Quality Control), ruang Production Manager, ruang Quality Assurance

Manager, ruang Engineering Manager, ruang Quality Control Manager,

ruang Product Development Manager, dan beberapa fasilitas umum.

3. Gedung ketiga adalah gedung yang baru dibangun pada tahun 2010 yang

digunakan sebagai laboratorium Product Development.

E. Disiplin kerja

PT. Merck Tbk bergerak dibidang industri Farmasi dan Kimia.

Sehingga dalam kegiatan produksinya sangat menerapkan proses industri

farmasi CPOB. CPOB merupakan suatu konsep mengenai prosedur atau

langkah langkah yang dilakukan dalam suatu industri farmasi untuk menjamin

mutu obat jadi, yang diproduksi dengan menerapkan “Good Manufacturing

Practices” dalam seluruh aspek dan rangkaian kegiatan produksi sehingga

obat yang diproduksi senantiasa memenuhi persyaratan mutu yang telah

ditentukan sesuai dengan tujuan penggunaannya. PT. Merck Tbk. telah

memperoleh sertifikat CPOB pada tanggal 19 April 1993. Diterapkannya

konsep CPOB bertujuan untuk menjamin agar obat dibuat secara konsisten

memenuhi persyaratan yang ditetapkan dan sesuai dengan tujuan

penggunaannya. CPOB mencakup seluruh aspek produksi dan pengendalian

mutu (BPOM, 2006). Bagian Analytical Development PT. Merck Tbk dipimpin

oleh seorang Associate Analytical Development Manager. Dengan fungsi

sebagai berikut :

1. Mengembangkan dan memvalidasi metode pengujian untuk

digunakan selama validasi pembersihan.

2. Memecahkan masalah kimia analitik yang kompleks.

3. Mentransfer metode analisis baru ke Laboratorium Pengawasan

Mutu.

4. Pengujian stabilitas untuk produk dengan formulasi baru.

5. Pengujian mutu produk trial.

6. Pengembangan metode analisis untuk produk baru dan bahan baku

baru.

7. Validasi / verifikasi metode analisis baru (produk dan bahan baku).

9

F. Administrasi Laboratorium

Dalam kegiatan analisis rutin yang dilakukan di laboratorium Product

Development dokumentasi harus dilakukan dengan baik. Hal ini bertujuan

apabila terdapat masalah ketidaksesuaian pada hasil dapat mudah ditelusuri.

Dokumentasi meliputi, yaitu sebagai berikut:

1. Form Permintaan Analisis

2. Pembelajaran Literatur

3. Desain Trial

4. Laporan Trial

5. Metode Analisis

6. Protokol Validasi

7. Laporan Validasi

8. Transfer Metoda Analisis

10

BAB III KEGIATAN DI LABORATORIUM DAN TINJAUAN PUSTAKA

A. Latar Belakang Pemilihan Judul Laporan

Kegiatan di laboratorium Product Development meliputi analisis rutin

pengembangan metode, pemeriksaan stabilitas produk dengan formulasi

baru, validasi metode, dan pemeriksaan kadar zat aktif dalam bahan baku

yang akan digunakan. Dalam analisis produk multivitamin dilakukan

pemeriksaan kadar zat aktif menggunakan metode kromatografi,

pemeriksaan kadar air menggunakan Karl Fisher, waktu hancur obat dengan

menggunakan alat disintegrator dan pemeriksaan stabilitas produk dalam

kurun waktu dan suhu tertentu. Hal ini dilakukan untuk menjaga kualitas dan

keamanan produk yang dihasilkan.

Pemilihan judul laporan prakerin didasarkan pada pekerjaaan analisis

yang dilakukan oleh siswa selama masa prakerin, yang bertujuan untuk

melihat sejauh mana kemampuan siswa dalam memahami materi yang dari

pekerjaan yang dilakukan selama melakukan kegiatan prakerin. Sesuai

dengan tugas bagian Analytical Development yaitu melakukann

pengembangan metode analisis terhadap suatu produk baru ataupun produk

yang telah mengalami perubahan komposisi, sebelum metode tersebut

digunakan untuk analisis rutin di laboratorium uji, metode yang

dikembangkan tersebut harus melalui tahapan validasi metode terlebih

dahulu, validasi metode ini juga merupakan salah satu tugas bagian

Analytical Development.

B. Masalah dan Pentingnya Masalah

Metode analisis yang akan digunakan di laboratorium uji sebelumnya

harus divalidasi terlebih dahulu dengan tujuan untuk mengetahui bahwa

metode tersebut telah sesuai dengan persyaratan dan tujuan yang telah

ditentukan. Oleh sebab itulah, metode analisis hasil percobaan terhadap

produk baru ataupun produk yang telah mengalami perubahan komposisi

harus melewati tahapan validasi metode uji terlebih dahulu.

11

C. Kegiatan di Laboratorium

Laboratorium Product Development PT. Merck Tbk bertanggung

jawab melakukan validasi terhadap metode analisis baru yang akan

diterapkan dan melakukan trial terhadap formulasi-formulasi terbaru yang

sedang dibuat. Laporan ini mengacu pada salah satu kegiatan yang

dilakukan laboratorium yaitu Validasi Metode Uji Disolusi Natrium Diklofenak

dalam Obat Tablet Salut Enterik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.

D. Tinjauan Pustaka

1. Validasi Metode

Validasi metode adalah konfirmasi bahwa suatu metode dapat

memenuhi persyaratan tujuan penggunaannya, yaitu melakukan uji untuk

kerja metode yang bersangkutan dan mengumpulkan bukti atau hasilnya.

Menurut CPOB Validasi adalah suatu proses pembuktian dengan cara

yang sesuai bahwa setiap bahan, proses, prosedur kegiatan, sistem

kelengkapan atau mekanisme yang digunakan dalam produksi dan

pengawasan akan mencapai hasil yang diinginkan.

Menurut American Chemical Society ( ACS ), validasi adalah

kemampuan untuk mendapatkan data yang akurat, tepat waktu, dan

dapat dipercaya adalah hal yang penting dalam kimia analitik terutama

dalam bidang pengembangan penemuan dan manufaktur dari produk-

produk farmasi.

Menurut CPOB jenis-jenis prosedur analisis yang harus divalidasi :

a. Uji identifikasi

b. Uji kuantitatif bentuk aktif bahan atau produk

c. Uji kuantitatif komponen terpilih lainnya dalam suatu produk obat

d. Uji kuantitatif kandungan cemaran

e. Uji batas untuk mengendalikan cemaran

Tujuan dari validasi metode adalah:

12

a. Membuktikan bahwa prosedur yang dilakukan sesuai dengan tujuan

yang dicapai.

b. Menjamin bahwa prosedur penetapan kadar dapat dipercaya

c. Menjamin keterulangan prosedur penetapan kadar

d. Menjamin Mutu obat

Ada beberapa protokol yang harus dikerjakan dalam

melaksanakan validasi metode, antara lain :

a. Uji Kesesuaian Sistem

Sistem kromatografi terutama kromatografi cair kinerja tinggi

(KCKT) harus diuji dahulu sebelum digunakan untuk analisis, melalui

uji kesesuaian sistem agar mendapatkan keyakinan tentang

keefektifan sistem kromatografi sehingga data analisis yang

dihasilkan cukup handal untuk dipakai dalam mennyimpulkan suatu

hasil pengujian. Hal ini karena banyak faktor yang dapat memberikan

perbedaan hasil uji seperti kolom yang walaupun jenisnya sama, umur

kolom, komposisi dan pH larutan fase gerak (Snyder, 1997).

Parameter uji kesesuaina sistem dapat digunakan sebagai

petunjuk mendesain pengoperassian kromatografi ini, meliputi:

a. Keberulangan penyuntikan

Keberulangan penyuntikan ditetapkan dengan penyuntikan

berulang larutan analait dan dinyatakan dalam simpangan baku

relatif (RSD)

b. Daya pemisahan (Resolusi)

Daya pemisahan adalah ukuran daya pisah dua puncak

kromatogram yang terelusi berdekatan dari dua komponen yang

terdapat dalam larutan yang terpisahkan, sehingga dapat

digunakan untuk analisis kuantitatif secara akurat. Nilai resolusi

yang lebih besar dari 1,5 menunjukan pemisahan yang baik

(Snyder, 1997)

c. Efisiensi Kolom

Efisiensi kolom dinyatakan sebagai jumlah lempeng teoritis per

meter (N) yang merupakan ukuran ketajaman kromatogram.

Kinerja kolom yang berubah ditunjukan dari lebar kromatogram

13

yang berbeda pada analisis berulang sehingga memberikan nilai

efisiensi kolom yang berbeda. Jumlah lempeng teoritis yang lebih

besar dari 10000/m dianggap cukup memadai untuk analisis

(Jatnika, 2007)

d. Faktor Ikutan (kesimetrisan)

Faktor ikutan (Tailing Factor) merupakan ukuran kesimetrisan

suatau kromatogram. Nilai Tf bertambah jika kromatogram makin

terlihat berekor. Kecermatan kromatogram berkurang apabila

faktor ikutan bertambah karena rekorder/pencatat sukar

menentukan dimana dan kapan kromatogram berakhir sehingga

mempengaruhi perhitungan luas kromatogram. Nilai Tf lebih kecil

dari 2.0 menunjukan ukuran kesimetrisan kromatogram baik

sehingga kromatogram dapat digunakan untuk analisis (Jatnika,

2007).

e. Faktor kapasitas (k‟)

Faktor Kapasitas menyatakan kemampuan senyawa tertentu

berinteraksi dengan sistem kromatografi dan mementukan retensi

dari senyawa terlarut. Faktor ini merupakan perbandingan waktu

atau jumlah senyawa dalam fase diam dan dalam fase gerak

(Syder, 1997). Jika k‟ kurang dari satu, maka elusinya sangat

cepat sehingga senyawa sedikit diretensi oleh kolom dan

kromatogram senyawa terelusi dekat dengan kromatogram

senyawa yang tidak diretensi, menunjukan pemisahan yang terjadi

buruk. Jika nilai k‟ sangat besar (antara 20-30), waktu elusinya

sangat lama sehingga tidak berguna untuk analisis. Nilai k‟ yang

ideal dalah diantara 1-10.

b. Akurasi

Menurut International Organitation for Standardization ( ISO ),

akurasi didefinisikan sebagai kesesuaian antara hasil analisis dengan

nilai benar analit. Akurasi sering dinyatakan sebagai persentase

perolehan kembali. Uji akurasi dilakukan untuk mengetahui adanya

gangguan matriks di dalam contoh uji terhadap pereaksi yang

digunakan atau untuk mengetahui ketepatan metode yang digunakan.

Secara umum dikenal tiga cara yang digunakan untuk pengecekan

akurasi metode uji, yaitu:

14

1. Uji Pungut Ulang (Recovery Test)

2. Uji Relatif terhadap akurasi metode baku

3. Uji terhadap Standard Reference Material (SRM)

Akurasi dilakukan untuk mengetahui ketepatan/keakurasian

analisa zat aktif dalam sampel dengan menggunakan metode yang

sedang divalidasi. Zat aktif yang ditambahkan dalam masing-masing

sampel memiliki konsentrasi yang berbeda. Sampel disini adalah

campuran dari zat aktif dengan placebo (bahan pengisi fungsional).

c. Presisi

Presisi merupakan derajat keterulangan suatu kelompok data

hasil uji diantara hasil-hasil itu sendiri, dengan tujuan mengetahui

kesalahan akibat operator. Presisi dilakukan dengan pengukuran

ulang terhadap suatu sampel kemudian hasil pengukuran tersebut

dihitung Simpangan Baku Relatifnya (Relative Standard Deviation

(RSD)) dan dibandingkan dengan suatu range standar. Presisi dapat

dibagi dengan tiga tingkatan yaitu keterulangan ( repeatibility ),

ketertiruan ( Reproducibility ), presisi antara ( Intermediete Precission

) ( BPOM, 2003 ).

d. Linearitas

Pengujian Linearitas dilakukan dengan membuat kurva

linearitas untuk menentukan jangkauan keakuratan dari metode

tersebut. Kurva dibuat dengan cara memplot konsentrasi larutan

standar zat aktif dengan berbagai konsentrasi dengan luas area

sampel yang dihasilkan dari pembacaan alat. Bertambah naiknya

konsentrasi harus sebanding dengan besarnya/bertambah luasnya

area sampel. Semakin Linear kurva yang dihasilkan maka keakuratan

metode uji tersebut semakin baik.

e. Spesifitas

Parameter ini dilakuakn untuk membuktikan bahwa metode

yang digunakan mampu mendeteksi dan mengukur secara tepat dan

spesifik suatu analit atau zat aktif murni yang terdapat bersama

komponen lainnya dalam contoh ( CPOB, 2001 ).

15

f. Ketegaran (Robustness)

Ketegaran (Robustness) merupakan ukuran kemampuan

metode untuk tidak terpengaruh atau bertahan terhadap pengaruh

kecil. Pengaruh tersebut dilakukan secara sengaja dengan menbuat

variasi dalam faktor metode yang memberikan indikasi reabilitas

metode normal pada pengujian. Contoh perubahan atau variasi

parameter metode analisis adalah stabilitas larutan sampel. Apabila

pengukuran peka terhadap variasi kondisi analisis maka kondisi

tersebut harus dikendalikan atau harus berhati-hati terhadap kondisi

tersebut. Kesesuaian sistem harus ditetapkan pada evaluasi

ketegaran untuk menjamin keabsahan metode analisis tetap

terpelihara ketika digunakan (Jatnika, 2007).

2. Obat

Obat adalah suatu zat yang dimaksudkan untuk dipakai dalam

diagnosis, mengurangi rasa sakit, mengobati atau mencegah penyakit

pada manusia atau hewan (Ansel, 1989). Berdasarkan Surat Keputusan

Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 193/KabB.VII/71 memberikan

defenisi berikut obat ialah suatu bahan atau paduan bahan-bahan yang

dimaksudkan untuk digunakan dalam menetapkan diagnosis, mencegah,

mengurangkan, menghilangkan, menyembuhkan penyakit atau gejala

penyakit, luka atau kelainan badaniah dan rohaniah pada manusia atau

hewan dan untuk memperelok atau memperindah badan atau bagian

badan lainnya (Joenoes, 2001). Obat-obat yang digunakan dalam terapi

dapat dibagi dalam 4 (empat) golongan besar yaitu : Obat

farmakodinamis, Obat kemoterapeutis, Obat tradisional dan Obat

diagnosis (Tan Hoan Tjay dan Kirana Rahardja, 2007).

Berdasarkan mekanisme aksi dan efek penggunaannya, obat

dapat dipisahkan menjadi sebagai berikut:

1) Analgetik, merupakan obat yang dapat mengurangi atau

menghilangkan rasa nyeri tanpa menghilangkan kesadaran. Contoh:

asetaminofen, aspirin, dan kodein.

16

2) Antipiretik, merupakan obat yang dapat menurunkan suhu tubuh yang

tinggi. Contoh: asetaminofen, asam asetilsalisilat, metampiron,

salisilamid, dan asam mefenamat.

3) Antibiotik, merupakan obat yang mempunyai efek menekan atau

menghentikan suatu proses biokimia di dalam organisme, khususnya

dalam proses infeksi oleh bakteri. Contoh: ampisilin, penisilin,

rifampisin,dan tetrasiklin.

4) Antiinflamasi, merupakan obat yang dapat menghilangkan radang

yang disebabkan bukan karena mikroorganisme (non infeksi). Contoh:

aspirin, benorilat, piroksikam, fenilbutazon, ketoprofen.

5) Antitusif, merupakan obat yang digunakan untuk menekan batuk.

Contoh: dekstrometorfan hidrobromida.

6) Ekpektoran, merupakan obat yang digunakan untuk mempertinggi

sekresi dari saluran pernafasan atau mencairkan riak agar mudah

dikeluarkan. Contoh: amonium klorida, bromheksin hidroklorida,

gliseril guaiakolat.

7) Antihistamin, merupakan obat yang digunakan untuk melawan atau

memblokir pekerjaan histamin, dapat menyembuhkan adanya alergi,

dan anafilaktik, biasanya sebagian besar memiliki efek kantuk.

Contoh: CTM, prometazin HCl, difenhidramin HCl.

Berdasarkan bentuknya, sediaan obat dapat digolongkan menjadi

sediaan padat, cair, semi padat, dan gas.

1) Sediaan Padat

a) Serbuk (Pulvis)

Serbuk adalah campuran homogen kering dua atau lebih

obat yang dihaluskan, dapat berasal dari tumbuh-tumbuhan yang

dikeringkan secara alamiah maupun sejumlah kecil cairan yang

disebarkan secara merata pada campuran bahan padat yang

kering (Ansel, 1989).

b) Granul

Granul adalah gumpalan-gumpalan dari partikel-partikel

yang lebih kecil dengan diameter 2-4 µm dengan atau tanpa

17

vehikulum. Pada umumnya granul berbentuk tidak merata dan

menjadi seperti partikel tunggal yang lebih besar. Granul dapat

dibuat dengan cara melembapkan serbuk atau campuran serbuk

yang digiling dan melewatkan adonan yang sudah lembap pada

celah ayakan dengan ukuran lubang yang sesuai dengan ukuran

granul yang diinginkan. Contoh sediaan granul: obat-obat

laksansia (senokot granules) (Ansel, 1989).

c) Tablet

Tablet merupakan sediaan padat kompak yang dicetak

dalam bentuk tabung pipih atau sirkuler, kedua permukaannya

rata atau cembung. Mengandung satu jenis obat atau lebih

dengan atau tanpa bahan tambahan.

d) Kapsul (Capsulae)

Kapsul adalah sediaan padat yang terdiri dari satu atau

lebih macam obat dan bahan inert lainnya yang dimasukkan

dalam cangkang keras atau lunak yang dapat melarut. Biasanya

cangkang terbuat dari gelatin, metil selulosa, atau dari pati dan

bahan lain yang sesuai.

e) Pil (Pilulae)

Pil adalah sediaan padat yang berbentuk bulat,

mengandung satu atau lebih bahan obat dan dimaksudkan untuk

pemakaian secara oral. Pil biasanya memiliki berat 60-300 mg.

2) Sediaan Cair

a) Eliksir

Eliksir adalah sediaan obat berupa larutan dengan zat

aditif seperti gula, pengawet, pewangi, dan pewarna, sehingga

memiliki rasa dan bau yang sedap. Biasanya sebagai pelarut

digunakan etanol 90 % dan ditambahkan gliserol, sorbitol, dan

propilen glikol. (Sari, 2011)

b) Sirup

Sirup adalah sediaan obat berupa larutan pekat gula yang

biasanya ditambahkan sorbitol (polialkohol) dalam jumlah sedikit

untuk meningkatkan kelarutan bahan obat dan menghalangi

pembentukan hablur sukrosa. (Sari, 2011)

18

c) Emulsi

Emulsi adalah sediaan cair yang berupa campuran dari

dua fase cairan dalam sistem dispersi, fase cairan yang satu

terdispersi sangat halus dan merata dalam fase cairan lainnya.

Pada umumnya emulsi distabilkan oleh zat pengemulsi.

d) Suspensi

Suspensi adalah sediaan cair yang mengandung fase yang

terdiri dari partikel padat yang tidak larut terdispersi dalam fase

cair. Contoh: suspensi oral (susu), suspensi tetes telinga (guttae

auriculares).

e) Injeksi

Injeksi adalah sediaan obat steril yang berupa larutan,

emulsi, suspensi, atau serbuk yang harus dilarutkan terlebih

dahulu sebelum digunakan secara parental, disuntikkan melalui

kulit.

3) Sediaan Semi Padat

a) Salep

Salep adalah sediaan obat yang mengandung bahan obat

yang larut/ terdispersi dalam basis salep yang cocok. Basis salep

dapat dikelompokkan dalam basis hidrokarbon (vaselin, parafin),

salep absorpsi (lanolin), dan basis yang larut dalam air (polietilen

glikol).

b) Krim (Cremores)

Krim adalah bentuk sediaan obat yang mengandung satu

atau lebih bahan obat berupa emulsi minyak dalam air atau

dispersi mikrokristal asam-asam lemak atau alkohol rantai panjang

dalam air dan emulsi air dalam minyak sebagai pelunak dan

pencuci. Sebagai penstabil, biasanya ditambahkan antioksidan

dan zat pengawet, seperti nipagin-nipasol.

c) Gel (Jelly)

Gel adalah bentuk sediaan obat yang mengandung zat-zat

aktif dalam keadaan terlarut dalam basis, biasanya berupa

mucilago atau gum, berbentuk jernih dan tembus cahaya. Gel

pada umumnya lebih encer daripada salep dengan atau tanpa lilin.

19

d) Pasta

Pasta adalah bentuk sediaan obat yang terdiri dari satu

atau lebih bahan obat yang mengandung bahan padat 40-50 %

dan tidak memberikan rasa berminyak pada pemakaian secara

topikal.

4) Sediaan Gas

a) Aerosol

Aerosol adalah sediaan obat yang dikemas di bawah

tekanan, mengandung zat aktif obat yang dapat dilepas pada saat

sistem katup yang sesuai ditekan. Sediaan ini digunakan untuk

pemakaian topikal pada kulit dan juga untuk pemakaian lokal pada

hidung, mulut, atau paru-paru. Contoh: obat asma.

3. Tablet

Nama tablet (tabuletta atau tabletta) berasal dari “tabuletta‟ piring

pipih, papan tipis. Beberapa farmakope dijumpai penandaan tablet

sebagai kompressi (comprimere = dicetak bersama), juga sebagai

komprimat dan dengan demikian menunjukkan cara membuatnya. Tablet

adalah sediaan obat padat takaran tunggal. Tablet dicetak dari serbuk

kering, kristal atau granulat, umumnya dengan penambahan bahan

pembantu, pada mesin yang sesuai dengan menggunakan suatu tekanan

tinggi. Tablet dapat memiliki bentuk silinder, kubus, batang, dan bentuk

cakram, juga bentuk seperti telur atau peluru. Keberhasilan dimiliki bentuk

bundar, lebih atau kurang bentuknya cembung ganda atau bentuk

cakram. Besarnya garis tengah tablet pada umumnya 5-17 mm, bobot

tablet 0,1 – 1 gram (Voight, 1994).

Menurut Farmakope Indonesia edisi IV, tablet adalah sediaan

padat yang mengandung bahan obat dengan atau tanpa bahan pengisi.

Berdasarkan metode pembuatan, dapat digolongkan sebagai tablet cetak

dan tablet kempa. Tablet cetak dibuat dengan cara menekan massa

serbuk lembab dengan tekanan rendah ke dalam cetakan. Tablet kempa

dibuat dengan memberikan tekanan tinggi pada serbuk atau granul

menggunakan cetakan baja (tahan karat) (Agoes, 2008).

Tablet dapat berbentuk rata atau cembung rangkap, umumnya

bulat, mengandung satu jenis obat atau lebih dengan atau tanpa zat

20

tambahan. Zat tambahan yang digunakan dapat berfungsi sebagai zat

pengisi, zat pengembang, zat pembasah. Tablet dapat digunakan untuk

tujuan pengobatan lokal atau sistemik. Tablet yang berbentuk kapsul

umumnya disebut kaplet. Berbagai bentuk khusus tablet dimaksudkan

untuk menghindari, mencegah, atau mempersulit pemalsuan dan agar

mudah dikenal orang (Syamsuni, 2006).

Tablet sangat baik disimpan dalam wadah yang tertutup rapat

ditempat yang kelembabannya rendah, serta terlindung dari temperatur

yang tinggi. Tablet khusus yang cenderung hancur bila kena lembab

dapat disertai dengan pengering dalam kemasannya. Tablet yang dapat

rusak oleh cahaya disimpan dalam wadah yang dapat menahan

masuknya sinar / cahaya agar dapat bertahan lebih lama (Ansel, 1989).

a. Keunggulan Bentuk Sediaan Tablet

Tablet merupakan salah satu bentuk sediaan farmasi yang sangat

populer, dimana hampir sebagian besar bentuk sediaan farmasi

terdapat dalam bentuk tablet. Hal ini didukung oleh beberapa

keunggulan yang dimiliki oleh tablet, yaitu :

a) Tablet merupakan bentuk sediaan yang utuh dan menawarkan

kemampuan terbaik dari semua bentuk sediaan oral untuk

ketepatan ukuran serta variabilitas kandungan yang paling rendah.

b) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling ringan dan

paling kompak.

c) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling mudah dan

murah untuk dikemas serta dikirim.

d) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang ongkos

pembuatannya paling rendah.

e) Pemberian tanda pengenal produk pada tablet paling mudah dan

murah, tidak memerlukan langkah pekerjaan tambahan bila

menggunakan permukaan pencetak yangbermonogram atau

berhiasan timbul.

f) Tablet paling mudah ditelan serta paling kecil kemungkinan

tertinggal ditenggorokan terutama bila bersalut yang

memungkinkan pecah atau hancurnya tablet tidak segera terjadi.

21

g) Tablet bisa dijadikan produk dengan profil pelepasan seperti

pelepasan di usus atau produk lepas lambat.

h) Tablet merupakan bentuk sediaan oral yang paling mudah

diproduksi dalam skala besar.

i) Tablet merupakan sediaan solid oral yang memiliki sifat

pencampuan kimia, mekanik, dan stabilitas mikroorganisme yang

paling baik (Lachman dkk, 2008)

b. Kelemahan Bentuk Sediaan Tablet

Adapun beberapa kelemahan dari bentuk sediaan obat

sebagai tablet adalah sebagai berikut:

a. Beberapa obat tidak dapat dikempa menjadi padat dan kompak,

tergantung pada keadaan amorfnya, flokulasi, atau rendahnya

berat jenis.

b. Obat yang sukar dibasahkan, lambat melarut, dosisnya cukup

tinggi, absorbs optimumnya tinggi melalui saluran cerna atau

setiap kombinasi dari sifat diatas, akan sukar larut atau tidak

mungkin diformulasi dan dipabrikasi dalam bentuk tablet yang

masih menghasilkan bioavaibilitasobat cukup.

c. Obat yang rasanya pahit, obat dengan bau yang tidak dapat

dihilangkan, atau obat yang peka terhadap oksigen atau

kelembapan udara perlu pengapsulan atau penyalutan terlebih

dahulu. Pada jalan ini kapsul dapat merupakan jalan keluar terbaik

serta lebih murah (Lachman dkk, 2008).

c. Bahan tambahan pada tablet

Untuk membuat obat dalam bentuk sediaan tablet, diperlukan

beberapa jenis zat tambahan berupa:

a) Zat pengisi, dimaksudkan untuk memperbesar volume tablet.

Biasanya digunakan saccharum lactis, amylum manihot, calcii

phospas, calcii carbonas, dan zat lain yang cocok.

b) Zat pengikat dimaksudkan agar tablet tidak pecah atau retak, dan

dapat merekat. Zat pengikat memberikan daya adhesi pada

massa serbuk sewaktu granulasi dan pada tablet kempa serta

22

menambah daya kohesi yang telah ada pada bahan pengisi. Zat

pengikat dapat ditambahkan dalam bentuk kering, tetapi lebih

efektif jika ditambahkan dalam larutan.

c) Zat penghancur, dimaksudkan agar tablet dapat hancur dalam

perut. Biasanya yang digunakan adalah manthot kering,

gelatinum, agar-agar, natrium alginate.

d) Zat pelican, dimaksudkan agar tablet tidak lekat pada cetakan.

Senyawa asam stearate dengan logam, asam stearate, minyak

nabati terhidrogenasi, dan talk digunakan sebagai zat pelican. Zat

pelican pada umumnya bersifat hidrofobik sehingga cenderung

menurunkan kecepatan disintegrasi dan disolusi tablet. Oleh

karena itu penambahan zat pelican tidak boleh terlalu banyak.

e) Bahan-bahan pembantu seperti zat pewarna, zat perasa dan zat

pemanis. Zat pewarna yang diizinkan sering ditambahkan pada

formulasi tablet untuk menambah nilai estetik atau untuk identitas

produk. Kebanyakan zat pewarna peka terhadap cahaya dan

warnanya akan memudar jika terpapar cahaya. (Wisnu, 2014)

d. Pembuatan tablet

Dalam pembuatan tablet, zat aktif dan zat-zat lain (kecuali

bahan pelicin) dibuat granul (butiran kasar) terlebih dahulu karena

serbuk halus tidak mengisi cetakan tablet dengan baik makan dibuat

granul agar mudah mengalir mengisi cetakan serta menjaga agar

tablet tidak mudah retak (Anief, 1994).

Granulasi adalah proses yang bertujuan untuk meningkatkan

kemampuan mengalir serbuk dengan jalan membentuk bulatan-

bulatan atau agregat-agregat dalam bentuk beraturan yang disebut

granul (Lachman dkk, 2008). Cara membuat granul ada 2 macam

(Anief 1994), yaitu:

1. Cara basah

Pembuatan granul cara basah dilakukan dengan cara zat

aktif, zat pengisi, dan zat penghancuran dicampur baik-baik, lalu

dibasahi dengan larutan bahan pengikat, bila perlu ditambah

bahan pewarna. Cara penambahan bahan pengikat tergantung

23

pada kelarutannya dan tergantung pada komponen campuran.

Setelah itu diayak menjadi granul dan dikeringkan dalam lemari

pengering pada suhu 40o-50o C. Setelah kering diayak kembali

uantuk memperoleh granul dengan ukuran yang diperlukan dan

ditambahkan bahan pelican dan dicetak menjadi tablet dengan

mesin tablet.

2. Cara kering atau disebut slugging atau pre compression.

Pembuatan granul dengan cara kering dilakuan dengan

cara zat aktif, zat pengisi, zat penghancur, bila perlu zat pengikat

dan zat pelican dicampur dan dibuat dengan cara kempa atau

cetak (slugging). Setelah itu tablet yang terbentuk dipecah menjadi

granul lalu diayak, lalu akhirnya tablet dapat dicetak.

Berdasarkan metode pembuatannya, tablet dapat

digolongkan sebagai tablet cetak dan tablet kempa. Sebagian

besar tablet dibuat dengan cara pengempaan dan merupakan

bentuk sediaan yang paling banyak digunakan. Tablet kempa

dibuat dengan cara memberikan tekanan tinggi pada serbuk atau

granul menggunakan cetakan baja. Tablet dapat dibuat dalam

berbagai ukuran, bentuk, dan penandaan permukaan tergantung

pada desain cetakan. Tablet berbentuk kapsul umumnya disebut

Kaplet. (Departemen Kesehatan RI, 1995).

Tablet cetak dibuat dengan cara menekan massa serbuk

lembab dengan tekanan rendah kedalam lubang cetakan.

Kepadatan tablet tergantung pada ikatan Kristal yang terbentuk

selama proses pengeringan selanjutnya dan tidak tergantung

pada kekuatan tekana yang diberikan (Departemen Kesehatan RI,

1995). Tablet yang dibuat dengan cara cetak biasanya lebih lunak

dibandingkan dengan yang dibuat dengan cara pengempaan,

sehingga tablet semacam itu akan lebih mudah larut (Lachman

dkk, 2008).

Untuk maksud dan tujuan tertentu, tablet biasanya disalut

dengan zat penyalut yang cocok, biasanya berwarna ataupun

tidak. Tablet disalut untuk berbagai alasan, antara lain melindungi

zat aktif dari udara, kelembapan ataupun cahaya, menutupi rasa

24

dan bau yang tidak enak, membuat penampilan lebih baik, dan

mengatur tempat pelepasan obat dalam saluran cerna. Berikut ini

adalah macam-macam tablet yang disalut:

1. Tablet bersalut gula. Tablet ini sering disebut dragee.

Penyalutan dilakukan dengan larutan gula dalam bejana

penyalutan untuk mengkilapkan yang diputar dengan motor

penggerak yang dilengkapi dengan alat penghisapdan sistem

penghembus udara panas.

2. Tablet bersalut kempa. Tablet inti yang sudah jadi mengalami

proses seperti, yaitu granul halus dan kering dikempa disekitar

tablet inti. Tablet seperti ini sering disebut tablet dalam tablet.

Tablet salut kempa lebih sepat proses pembuatannya dan

lebih ekonomis. Tetapi proses pembuatannya harus bebas

lembap serta tidak terjadi inkompati bilitas tablet karena

lembap.

3. Tablet bersalut selaput. Tablet ini dilapisi oleh lapisan tipis

dengan penyalut yang dikenakan atau disemprotkan pada

tablet.

4. Tablet bersalut enterik. Tablet ini adalah tablet yang disalut

dengan zat penyalut yang relatif tidak larut dalam asam

lambung tetapi larut dalam usus halus. Penyalutan enterik

dimaksudkan:

a) Agar obat tidak mengiritasi perut

b) Dikehendaki agar obat berkhasiat dalam usus.

c) Menghindari obat menjadi inaktif dalam cairan lambung,

yaitu karena pH rendah atau dirusak enzim digestif dalam

perut.

e. Penyimpanan Tablet

Penyimpanan tablet dilakukan dalam wadah tertutup rapat,

ditempatkan pada tempat yang sejuk dan terlindung cahaya. Wadah

yang digunakan harus diberi etiket. Dalam etiket wadah atau kemasan

25

tablet harus disebutkan nama tablet atau nama zat aktifnya dan

jumlah atau zat-zat yang berkhasiat dalam tiap tablet (Anief, 1994).

4. Uji Disolusi

a. Prinsip Uji Disolusi

Uji disolusi merupakan parameter penting dalam pengukuran

bioavailabilitas obat. Bioavailabilitas sendiri adalah persentase obat

yang mencapai sirkulasi sistemik dalam keadaan utuh/ aktif. Uji

disolusi didefenisikan sebagai proses suatu zat padat masuk ke

dalam pelarut menghasilkan suatu larutan. Secara sederhana,

disolusi adalah proses zat padat melarut. Secara prinsip, proses ini

dikendalikan oleh afinitas antara zat padat dan pelarut (Ansel, 1989).

Berdasarkan aspek farmakokinetik, obat yang masuk ke dalam

tubuh melalui berbagai cara pemberian akan mengalami proses

absorpsi, dan selanjutnya masuk ke dalam sirkulasi sistemik untuk

didistribusikan ke seluruh tubuh, sehingga dapat diperoleh efek terapi

yang diinginkan. Sebelum mengalami proses absorpsi, sediaan obat

yang diberikan secara oral di dalam saluran cerna harus mengalami

proses pelepasan dari sediaannya kemudian zat aktifnya akan

melarut. Kecepatan melarutnya zat aktif dari sediaan obat pada

waktu tertentu dalam kondisi tertentu (cairan lambung/ usus) disebut

dengan laju disolusi. Proses pelepasan zat aktif obat dari sediaannya

sangat dipengaruhi oleh sifat fisika dan kimia zat tersebut serta

formulasi sediaannya. Salah satu sifat zat aktif yang penting ialah

kelarutannya dalam saluran cerna. Oleh karena itu, salah satu usaha

untuk meningkatkan ketersediaan hayati suatu sediaan adalah

dengan meningkatkan kelarutan zat aktifnya. (Astuti dkk, 2007)

Obat yang telah memenuhi persyaratan kekerasan, waktu

hancur, keregasan, keseragaman bobot, dan penetapan kadar, belum

dapat menjamin bahwa suatu obat memenuhi efek terapi, karena itu

uji disolusi harus dilakukan pada setiap produksi tablet atau kapsul.

Uji disolusi adalah proses pemindahan molekul obat dari bentuk padat

kedalam larutan pada suatu medium. Uji disolusi menunjukkan jumlah

bahan obat yang terlarut dalam waktu tertentu. Uji disolusi

menggambarkan efek obat secara in vitro, jika disolusi memenuhi

26

syarat maka diharapkan obat akan memberikan khasiat secara in vitro

(Syukri, 2002).

Adapun tahapan disolusi obat dalam tubuh dapat dilihat dalam

gambar di bawah ini:

Gambar 2 Tahapan Penguraian Obat

Gambar 3 Tahapan Penguraian Obat di dalam Tubuh

b. Metode Uji Disolusi

Dalam United State Pharmacopeia cara pengujian disolusi

tablet dan kapsul dinyatakan dalam masing-masing monografi obat.

Disolusi merupakan pengujian yang objektif dalam hal menetapkan

sifat disolusi suatu obat yang berada dalam sediaan padat. Karena

kemampuan absorbs obat dipengaruhi oleh kemampuan melarutnya

obat dalam tubuh, maka uji disolusi merupakan pengujian yang harus

dilakukan untuk mengetahui kemampuan melarutnya obat dalam

tubuh (Ansel, 2008).

27

Secara singkat, alat untuk menguji karakteristik disolusi dan

sediaan padat kapsul atau tablet terdiri dari:

1. Motor pengaduk dengan kecepatan yang dapat diubah.

2. Keranjang baja stainless berbentuk silinder atau dayung untuk

ditempelkan ke ujung pengaduk

3. Bejana dari gelas atau bahan lain yang inert dan transparan

dengan volume 1000 mL, bertutup dan di tengah-tengahnya ada

tempat untuk menempelkan pengaduk da nada lubang tempat

masuk pada tiga tempat, dua untuk memindahkan sampel dan

satu untuk menempatkan termometer.

Berdasarkan United State Pharmacopeia, metode pengujian

laju disolusi yang digunakan dan dikembangkan adalah sebagai

berikut:

1) Metode Keranjang (Rotating Basket)

Alat ini terdiri dari bejana (vessel) bertutup yang terbuat

dari gelas atau bahan lain yang inert dan transparan dengan

volume 1000 ml, motor penggerak dengan kecepatan yang dapat

diatur, dan keranjang baja stainless berbentuk silinder. Bejana

direndam dalam penangas air yang sesuai untuk menjaga

temperatur pada media disolusi di dalam bejana pada 37 ± 0,5 ºC

selama pengujian. Tinggi bejana dengan volume 1 liter ialah 160-

210 mm dan diameter bagian dalam berukuran 98-106 mm,

berbentuk silinder dengan dasar hemisferik, serta memiliki tutup

yang terdapat lubang untuk pengaduk, termometer, dan tempat

memasukkan sampel. Sedangkan keranjang baja memiliki

diameter ± 1 inci dengan tinggi 1,375 inci, dan ukuran kasa 40

mesh yang dihubungkan ke motor penggerak oleh suatu tiang

silinder, serta dapat diputar dengan kecepatan antara 25-150 rpm.

(USP-NF 34, 2011)

Sebuah tablet atau kapsul diletakkan dalam keranjang

saringan stainless dan dicelupkan ke dalam media disolusi (sesuai

dalam monografi) yang terdapat dalam bejana 900-1000 ml.

Keranjang stainless dihubungkan kepada sebuah motor yang

kecepatannya konstan sesuai monografi selama pengukuran.

28

Suhu media di dalam bejana dipertahankan pada 37 ± 0,5 ºC.

Jarak antara bagian bawah bejana dengan keranjang di dalamnya

ialah 25 ± 2 mm. Pada waktu tertentu sampel pada media disolusi

diambil untuk analisis kimia dari bagian obat yang terlarut. (Wati,

2012)

Gambar 4 Alat disolusi metode basket

2) Metode Dayung (Paddle Apparatus)

Pada metode dayung pada dasarnya sama dengan

metode keranjang, hanya saja fungsi keranjang saringan stainless

diganti dengan dayung (paddle) untuk mengaduk sediaan obat.

Dayung yang digunakan berbentuk seperti pisau dan terdiri dari

tongkat sebagai elemen pengaduk. Sediaan obat dibiarkan

tenggelam ke dasar bejana berisi media disolusi sebelum diaduk

pada 37 ± 0,5 ºC.

29

Gambar 5 Alat disolusi metode paddle

c. Media Uji Disolusi

Media disolusi yang biasanya digunakan dalam pengujian,

yaitu sebagai berikut:

1) Air suling biasa digunakan untuk bahan aktif yang kelarutannya

tidak begitu dipengaruhi oleh pH.

2) Larutan ionik merupakan media yang paling banyak digunakan,

karena lebih mendekati cairan saluran pencernaan yang menjadi

tempat larutnya bahan aktif obat dalam tubuh, contohnya: larutan

HCl 0,1 N (pH= 1,2), larutan buffer dengan beragam nilai pH

sesuai dengan nilai pH cairan pada saluran pencernaan.

30

5. Natrium Diklofenak

a. Uraian Bahan

Gambar 6 Rumus Bangun Na Diklofenak

1) Rumus molekul: C14H10Cl2NNaO2

2) Berat molekul: 318,13

3) Nama kimia: asam benzeneasetat, 2-[(2,6-diklorofenil)amino]-

monosodium

4) Nama lain: Sodium [o-(dikloroanilino)fenil]asetat

5) Pemerian: serbuk hablur, berwarna putih, tidak berasa (USP 30

NF 25, 2007).

6) Kelarutan : Sedikit larut dalam air, larut dalam alkohol; praktis

tidak larut dalam kloroform dan eter; bebas larut dalam alkohol

metil. pH larutan 1% dalam air adalah antara 7.0 dan 8.

(Sweetman, 2009).

7) pKa : 4,2 (Moffat, 2005)

b. Farmakologi Natrium Diklofenak

Natrium Diklofenak adalah senyawa turunan asam fenilasetat.

Natrium Dikofenak yang biasa disebut Kaflam, merupakan obat

golongan AINS (Anti Inflamasi Non Steroid). Obat-obatan jenis AINS

sudah dikenal luas di dunia kedokteran yang digunakan sebagai obat

analgesic, antiinflamasi, dan antipiretik (Neal, M.J., 2006). Analgesik

atau analgetik adalah obat yang digunakan untuk mengurangi atau

menghilangkan rasa sakit atau obat-obat penghilang nyeri tanpa

mengurangi atau menghilangkan kesadaran. Antipiretik adalah obat

yang berkhasiat menurunkan suhu tubuh, dari suhu yang tinggi

menjadi kembali normal. Anti inflamasi adalah obat yang dapat

31

menghilangkan radang yang disebabkan bukan karena

mikroorganisme (non infeksi).

Obat yang termasuk dalam turunan diklofenak sampai saat ini

dianggap lebih aman dan bereaksi lebih cepat dibandingkan dengan

ibuprofen dan aktif lebih lama di dalam tubuh dibandingkan dengan

parasetamol. Obat golongan diklofenak merupakan COX-inhibitor

nonselektif yang bekerja dengan menghambat enzim siklooksigenase

(COX). Enzim siklooksigenase berpean dalam produksi sejumlah zat

kimia dalam tubuh, salah satunya prostaglandin. Prostaglandin ini

diproduksi oleh tubuh sebagai respon dari cedera sehingga syaraf

akan lebih sensitif terhadap rasa nyeri (Gunawan, 2009). Reaksi di

bawah ini merupakan reaksi pembentukan prostaglandin.

Gambar 7 Pembentukan Prostaglandin

Natrium diklofenak diabsorbsi secara maksimal di dalam tubuh

setelah pemberian peroral dengan kadar maksimal dalam plasma

pada waktu 2 – 3 jam. Obat ini 99% terikat pada protein plasma.

Metabolisme sebagian besar terjadi di dalam hati dan metabolit-

metabolitnya diekskresikan dalam urin sebesar 65% dan di dalam

empedu sebesar 35%.

Obat –obat AINS bekerja dengan cara menghambat sintesis

prostaglandin. Prostaglandin sendiri adalah suatu senyawa dalam

tubuh yang merupakan mediator nyeri dan radang/inflamasi.

Prostaglandin terbentuk dari asam arakidonat pada sel-sel tubuh

dengan bantuan enzim siklooksigenase (COX). Dengan

penghambatan pada enzim COX, maka prostaglandin tidak terbentuk,

dan nyeri atau radang dapat diatasi. COX itu sendiri ada dua jenis,

32

yaitu disebut COX-1 dan COX-2. COX-1 selalu ada dalam tubuh

secara normal, untuk membentuk prostaglandin yang dibutuhkan

yang dibutuhkan oleh proses-proses normal tubuh, antara lain

memberikan efek perlindungan terhadap mukosa lambung.

Sedangkan COX-2, adalah enzim yang terbentuk hanya pada saat

terjadi peradangan atau cedera, yang menghasilkan prostaglandin

yang menjadi mediator nyeri/radang. Jadi, sebenarnya yang perlu

dihambat hanyalah COX-2 saja yang berperandalam peradangan,

sedangkan COX-1 semestinya tetap dipertahankan. Tetapi,

kebanyakan obat AINS bersifat tidak selektif sehingga akan

menghambat enzim COX-1 dan COX-2 sekaligus (Gunawan, 2009).

Sehingga obat ini bersifat dapat menghambat pembentukan

prostaglandin pada peradangan sehingga dapat meredakan rasa

nyeri, namuan juga dapat menghambat pembentukan prostaglandin

yang dibutuhkan untuk melindungi mukosa lambung (Herlambang,

2014).

c. Efek Samping

Efek samping yang dapat terjadi meliputi distres

gastrointestinal, pendarahan gastrointestinal dan timbulnya ulserasi

lambung, sekalipun timbulnya ulkus lebih jarang terjadi daripada

dengan beberapa antiinflamasi non-steroid (AINS) lainnya.

Peningkatan serum aminotransferases lebih umum terjadi dengan

obat ini daripada dengan AINS lainnya. (Katzung, 2002).

d. Sediaan

Oral 3 kali sehari 25-50 mg garam-Na/K, rektal 1 kali sehari

50-100 mg, i.m. pada nyeri kolik atau serangan encok: 1-2 kali sehari

75 mg selama 1-3 hari. Pra dan pasca bedah dalam tetes mata 0,1%

3-5x 1 tetes, juga dalam krem/gel 1% (Tjay dan Rahardja, 2007).

e. Dosis

Dalam perdagangan natrium diklofenak tersedia dalam bentuk

tablet setara 25 mg, 50 mg dan 100 mg, tablet salut enterik setara 50

mg, injeksi setara 25 mg/ml, 75 mg/ml, supositoria setara 50 mg, 100

mg, dan gel setara 10 mg/g (ISO, 2007).

33

6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

1) Sejarah Singkat Kromatografi

Proses kromatografi ditemukan pertama kalinya oleh Michael

Tswett yang pada tahun 1906 berhasil melakukan pemisahan klorofil

dari ekstrak tumbuh-tumbuhan didalam kolom kalsium karbonat

menggunakan pelarut petroleum eter.

Tswett menempatkan ekstrak hijau daun tersebut pada bagian

atas kolom dan kemudian kedalam kolom tadi dituangkan petroleum

eter. Petroleum eter mengalir berdasarkan gaya gravitasi bumi.

Sambil bergerak, petroleum eter membawa serta komponen-

komponen hijau daun tadi melalui kolom dan masing-masing

komponen bergerak dengan kecepatan berbeda. Terjadilah

pemisahan dari komponen-komponen ekstrak hijau daun tersebut

didalam kolom, berupa pita-pita berwarna.

Gejala ini menyebabkan proses pemisahan diatas disebut

kromatografi. Nama kromatografi berasal dari dua kata yunani, kroma

yang berarti warna dan grafi yang berarti menulis. Tetapi timbulnya

warna tidak merupakan syarat mutlak agar suatu proses dapat

digolongkan kedalam kromatografi. Dalam perkembangannya, jenis-

jenis kromatografi makin banyak ditemukan dengan teknik pemisahan

yang berdeda-beda.

2) Perkembangan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Pada tahun 1941, karya Archer John Porter Martin dan

Richard Laurence Millington Synge yang membahas mengenai sistem

kromatografi gas membuahkan hadiah nobel. Hal inilah yang

membuat sistem kromatografi gas makin berkembang. Syarat utama

suatu sampel dapat dianalisis dengan kromatografi gas ialah harus

dapat dijadikan uap pada suhu kerja kolom. Namun pada

kenyataannya banyak senyawa yang tidak dapat dijadikan uap

bahkan tidak dapat dipanaskan, seperti bahan farmasi, protein,

polimer, dan zat warna. Oleh karena itu, diperlukan sebuah teknik

34

pemisahan beresolusi tinggi untuk menutupi kelemahan dari sistem

kromatografi gas.

Pada akhir tahun 1960-an, semakin banyak usaha dilakukan

untuk pengembangan kromatografi cair. Sistem kromatografi cair

yang dikembangkan merupakan perbaikan dari kinerja kromatografi

cair sebelumnya yang umumnya memiliki efisiensi kolom yang rendah

dan waktu pemisahan yang lama. Kromatografi cair sederhana, dalam

praktek ditampilkan dalam kolom gelas berdiameter besar, pada

dasamya dibawah kondisi atmosfer. Csaba Horvath pada tahun 1967

telah berhasil menyusun sebuah sistem kromatografi cair modern. Ia

melakukan analisis terhadap senyawa nukleotida .

Pada waktu yang sama sebuah kolom dengan ukuran mikro

juga telah ditemukan. Sehingga penggabungan dua penemuan ini

menghasilkan sebuah sistem kromatografi cair modern beresolusi

tinggi, berkecepatan tinggi, bertekanan tinggi, berkinerja tinggi

sehingga dinamakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).

Alasan pengembangan kromatografi cair modern ini ialah

dengan mempertimbangkan faktor penghambat perkembangan

kromatografi cair sebelumnya. Hal tersebut ialah mengenai

penurunan kecepatan difusi yang signifikan antara fase-fase

kromatografi jika digunakan fase gerak (mobile phase) berupa cairan.

Untuk meningkatkan kecepatan transfer massa dan kecepatan

kesetimbangan antara fase diam dan fase gerak, dapat dilakukan

dengan membuat partikel fase diam sekecil mungkin. Namun dengan

ukuran partikel fase diam yang sangat kecil, maka diperlukan suatu

sistem tekanan tinggi yang dapat mendorong cairan melewati kolom.

3) Kegunaan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Saat ini KCKT digunakan untuk pemisahan sejumlah senyawa

organik, anorganik, senyawa biologis, polimer alami dan sintetis,

analisis impuritis suatu zat, analisis formulasi industri farmasi, analisis

senyawa-senyawa non volatil, analisis molekul-molekul netral, ionik,

maupun zwitter ion, pemisahan senyawa yang strukturnya hampir

sama, serta pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah sedikit (trace

element) maupun dalam jumlah banyak. KCKT merupakan metode

35

yang tidak dekstruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis

kualitatif maupun kuantitatif.

Pada penerapannya KCKT sering kali digunakan untuk

analisis asam-asam amino, asam-asam nukleat, senyawa aktif obat,

produk sampingan suatu proses sintetis, atau produk-produk

degradasi dalam sediaan farmasi, monitor sampel-sampel lingkungan,

pemurnian senyawa dalam suatu campuran, memisahkan polimer dan

menentukan distribusi berat molekulnya dalam suatu campuran, serta

sebagai kontrol kualitas. Namun KCKT juga memiliki keterbatasan

yaitu jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit

diperoleh.

4) Keunggulan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

KCKT memiliki banyak keuntungan dibandingkan kromatografi

cair klasik, yaitu:

1) Waktu analisis relatif lebih cepat

Waktu analisis umumnya kurang dari 1 jam. Untuk analisis

senyawa yang tidak rumit dapat dilakukan kurang dari 5 menit.

Pada umumnya analisis sering dilakukan dalam 15-30 menit.

2) Sensitivitas Detektor

Detektor pada KCKT yang biasa digunakan yaitu detektor

absorbansi UV-VIS dapat mendeteksi berbagai senyawa dalam

jumlah nanogram (10-9 g). Detektor fluoresensi dan elektrokimia

dapat mendeteksi dalam jumlah pikogram (10-12g).

3) Kolom dapat digunakan kembali

Berbeda dengan kromatografi cair klasik, kolom pada

KCKT dapat digunakan kembali. Banyak analisis dapat dilakukan

dengan kolom yang sama. Akan tetapi, kolom tersebut turun

mutunya bergantung pada jenis analit yang disuntikkan,

kemurnian pelarut, dan jenis pelarut yang digunakan.

4) Pemisahan Molekul Besar dan Ion

Molekul besar tidak bisa dipisahkan dengan kromatografi

gas karena volatilitasnya yang rendah. Sedangkan untuk analisis

ion, biasanya pada kromatografi gas menggunakan senyawa

36

turunannya. KCKT dengan mekanisme pemisahan eksklusi dan

penukar ion ideal untuk memisahkan molekul besar dan ion.

5) Mudah memperoleh cuplikan kembali

Sebagian besar detektor yang digunakan pada KCKT tidak

bersifat dekstruktif sehingga komponen sampel dapat

dikumpulkan kembali dengan mudah ketika melewati detektor.

Untuk memperoleh cuplikan kembali biasanya pelarut dihilangkan

dengan penguapan.

5) Prinsip Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Sampel yang akan dianalisis secara KCKT dipisahkan dari

komponen sampel lainnya berdasarkan perbedaan distribusi

komponen antara fase diam dan fase gerak. Sejumlah kecil sampel

masuk ke dalam kolom pemisahan bersama aliran fase gerak.

Kecepatan elusi sampel tergantung pada perbedaan polaritasnya

dengan fase diam dalam kolom. Sehingga dapat dikatakan

mekanisme pemisahan yang terjadi dalam sistem KCKT ditentukan

oleh jenis kolom yang digunakan. Dibandingkan dengan kromatografi

gas, KCKT memiliki mekanisme pemisahan lebih banyak, terdapat

kemudahan untuk mengubah secara radikal sifat kimia dan kekuatan

elusi dari fase gerak, dan fase penunjang, serta dapat diikatkan

dengan lapisan sangat tipis bersifat polar atau nonpolar.

Waktu elusi suatu komponen sampel hingga keluar peak

komponen dalam kromatogram yang disebut dengan waktu retensi

(tR), bersifat spesifik untuk setiap komponen, sehingga dapat

digunakan untuk identifikasi suatu komponen. Selanjutnya dapat

dilakukan analisis kualitatif maupun kuantitatif terhadap komponen

sampel yang diinginkan dengan membandingkannya terhadap larutan

standar. Sampel yang mengandung banyak komponen di dalamnya

maka akan muncul banyak peak dalam kromatogram. Bahkan tak

jarang peak - peak yang muncul dapat saling bertumpuk (overlap).

Hal ini dapat menyulitkan proses identifikasi dan analisis komponen

sampel. Oleh karena itu, dalam KCKT ini diperlukan tahapan

preparasi yang baik agar komponen sampel dapat terpisahkan, dan

tidak terganggu oleh impuritis lainnya.

37

Proses elusi (pemisahan) dapat dilakukan baik secara

isokratik maupun elusi gradien. Cara isokratik ialah apabila

pemisahan menggunakan satu jenis pelarut dalam keadaan konstan

atau komposisi fase gerak tetap selama proses elusi. Sedangkan

elusi gradien ialah apabila komposisi fase gerak berubah-ubah

selama proses elusi. Biasanya elusi gradien digunakan untuk

meningkatkan resolusi pemisahan suatu campuran kompleks yang

memiliki kisaran polaritas yang luas.

f. Mekanisme Pemisahan dalam Sistem KCKT

Pemisahan dalam sistem KCKT dapat dilakukan dengan fase

normal maupun fase terbalik. Fase normal menunjukkan fase diam

yang digunakan lebih polar dibandingkan dengan fase geraknya.

Sebaliknya fase terbalik menunjukkan fase diamnya kurang polar

dibandingkan fase geraknya. Berdasarkan pada kedua pemisahan ini,

sering kali KCKT dikelompokkan menjadi KCKT fase normal dan

KCKT fase terbalik.

Selain klasifikasi di atas, KCKT juga dapat dikelompokkan

berdasarkan pada sifat fase diam dan atau berdasarkan pada

mekanisme interaksi komponen dengan fase diam, yaitu Pemisahan

cara Adsorpsi, Fase terikat, Penukar ion, dan Eksklusi (Arifin, 2014).

38

g. Instrumentasi KCKT

KCKT mempunyai prinsip yaitu pemisahan komponen dari

suatu campuran yang didasarkan pada perbedaan

interaksi/kecepatan migrasi komponen (polar dan non polar) terhadap

dua fasa, fasa gerak (eluent) dan fasa diam .

Gambar 8 Instrumentassi KCKT

1) Penampung Fase Gerak (Chamber)

Penampung eluen harus digunakan suatu wadah yang

tahan terhadap pelarut-pelarut organik/pelarut buffer lainnya.

Biasanya wadah ini digunakan erlenmeyer atau botol yang

dilengkapi dengan penutup dari teflon atau plastik.

2) Pompa

Pompa berfungsi untuk mengalirkan eluen ke dalam

kolom. Semua penghubung dalam sistem kromatografi harus

terbuat dari bahan yang secara kimiawi tahan terhadap fase

gerak. Bahan yang umum digunakan adalah gelas, baja, teflon,

dan batu nilam. Pada sistem kromatografi cair yang relatif murah

membutuhkan pompa yang baik. Syarat-syarat pompa yang baik

antara lain:

a) Dapat memompa fasa gerak secara konstan (0,1-10

mL/menit).

b) Dapat memberikan tekanan yang cukup tinggi.

c) Stabil/ tekanan bisa diatur.

39

d) Memberikan gangguan noise yang rendah, tidak berdenyut,

dan fluktuasi tekanan seminimal mungkin.

e) Cara kerja sederhana.

f) Cukup inert terhadap pelarut-pelarut umum yang digunakan.

Ada tiga jenis pompa yang digunakan dalam sistem HPLC,

yaitu :

a) Pompa resiprokating

b) Pompa sistem pergantian (displacement pump)

c) Pompa tekanan udara (pnumatic pump)

Pompa yang umum digunakan dalam HPLC adalah tipe

resiprokating (pompa dengan tekanan balik). Pompa ini

menghasilkan pulse sehingga ditambah dengan alat pulse damper

sehingga tidak berdenyut. Ada dua tipe resiprocating yaitu tipe

piston tunggal dan tipe piston ganda. Biasanya tekanan maksimal

yang dihasilkan pompa HPLC sekitar ± 5000 psi. (Arifin, 2014)

3) Injektor

Injektor adalah alat yang digunakan untuk memasukan

contoh yang akan dianalisis. Sistem injeksi sampel merupakan

keterbatasan dari sistem kromatografi cair. Masalah ini

menyebabkan pelebaran puncak sebagai akibat kolom yang

kelebihan kapasitas. Sebagai akibatnya volume injeksi harus

dibatasi hingga kisaran maksimum 500µl. Ada dua sistem

pemasukan sampel :

a) Sistem septum (menggunakan syring). Syiring yang digunakan

harus memiliki kemampuan melawan tekanan 1500 psi. Aliran

diberhentikan sementara saat injeksi dan dikembalikan setelah

sampel masuk ke aliran fasa gerak.

b) Sistem loop (loop sampler), sampel dimasukan kedalam alat

dengan bantuan komputer. Kapasitas dari sistem loop sampler

ini beragam, berkisar antara 0,5 hingga 500µL.

40

4) Kolom

Kolom merupakan tempat pemisahan zat dari komponen-

komponen yang dianalisis. Kolom merupakan jantung dari HPLC,

keberhasilan atau kegagalan suatu analisis tergantung dari

pemilihan yang tepat untuk sampel yang akan dianalisis. Kolom

secara umum dibuat dari bahan tabung stainless steel, walaupun

untuk tekanan dibawah 600 psi kolom kaca dapat digunakan.

Kolom standar mempunyai diameter dalam antara 4-5 mm.

Isi kolom harus berukuran homogen dan stabil secara mekanik.

Diameter partikel berkisar antara 4-7 µm. Panjang kolom standar

berkisar antara 10-30 cm. Bila kecepatan analisis merupakan

pertimbangan utama misalnya pada pekerjaan kontrol kualitas,

kolom pendek (3-6 cm) akan sangat membantu.

Kolom dengan diameter dalam yang kecil (2 mm) di

bandingkan dengan kolom standar pada kondisi isokratik akan

menghasilkan waktu analisis yang sama. Beberapa kelebihan

kolom berdiameter kecil dibandingkan dengan kolom standar:

a) Konsumsi eluen 4 kali lebih hemat

b) Pelarut dengan kemurnian tinggi dapat digunakan mengingat

konsumsinya yang rendah.

c) Kepadatan pengemasan kolom lebih homogen

d) Dengan permeabilitas kolom yang lebih baik pengemasan

partikel kecil lebih mudah

e) Penyebaran panas lebih merata, sehingga gradient atau

perbedaan suhu sepanjang kolom lebih kecil.

f) Sejumlah kolom pendek dapat digabung tanpa kehilangan

efisiensi kolom.

5) Detektor

Detektor adalah alat untuk mendeteksi komponen-

komponen yang telah dipisahkan dalam kolom. Pendeteksi ini

digunakan untuk menentukan komponen-komponen baik secara

41

kualitatif maupun secara kuantitatif. Didalam analisis kuantitatif

sinyal detektor tergantung pada konsentrasi contoh.

Detektor yang ideal mempunyai syarat-syarat sebagai

berikut :

a) Sensitif.

b) Mempunyai kestabilan dan keterulangan yang tinggi.

c) Harus linier dengan kepekatan

d) Mempunyai respon yang cepat

e) Tidak merusak analit

f) Mudah digunakan dan dalam perawatannya.

Berbagai macam detektor yang telah dikembangkan untuk

kromatografi cairan, antara lain :

a) Detektor Refraksi Indeks (RI)

Detektor ini bekerja berdasarkan perbedaan refraksi

indeks contoh dengan refraksi indeks fase gerak. Oleh karena

itu, fase gerak yang digunakan harus dipilih sehingga fase

gerak tidak memiliki nilai refraksi indeks yang sama atau

berdekatan dengan refraksi indeks contoh.

b) Detektor Serapan Optik

1) Detektor serapan UV dengan panjang gelombang tetap,

mendeteksi pada 254 atau 280 nm, atau pada keduanya.

Detektor ini sangat cocok untuk teknik elusi gradien.

Detektor ini mampu mendeteksi senyawa hayati seperti

asam amino aromatik, protein, dan enzim pada panjang

gelombang 254 nm.

2) Detektor serapan UV dengan panjang gelombang dapat

diubah-ubah. Detektor ini beroperasi pada berbagai

panjang gelombang bergantung pada panjang gelombang

maksimum contoh. Sebagian besar analisis yang

menggunakan detektor ini dilakukan pada daerah UV 195-

400 nm.

3) Detektor inframerah

Detektor inframerah digunakan untuk mendeteksi gugus

fungsional yang ada pada contoh. Detektor ini kurang

42

populer dalam kromatografi cair. Hal ini disebabkan oleh

sifat contoh dan pelarut yang menyulitkan pemakaiannya

secara umum dan membatasi cakupan pemakaian.

b. Detektor Flouresence

Detektor jenis ini disebut juga detektor fluorometer.

Sensitivitas detektor ini lebih baik dibandingkan dengan

detektor absorban. Akan tetapi detektor ini hanya dapat

mendeteksi komponen-komponen yang dapat berfluoresensi.

Pembacaan respon didasarkan pada intensitas sinar emisi

yang disebabkan oleh gejala fluorensi.

c. Detektor Hantaran/Elektrokimia

Detektor dengan mendasarkan kerjanya pada pengukuran

arus listrik. Perubahan arus akan dideteksi terhadap waktu

dan ditampilkan dalam bentuk kromatogram. Detektor

elektrokimia cocok digunakan untuk analisis senyawa-

senyawa penukar ion (Johnson dan Stevenson, 1991).

6) Rekorder

Rekorder/Data Prosesor/Pencatat adalah alat mencatat

hasil pemisahan komponen-komponen zat yang dianalisis. Alat

pencatat harus dapat mencatat puncak-puncak yang tajam yang

dipisahkan dengan cepat, tidak dipengaruhi oleh noise dari aliran

listrik.

E. Metode Analisis

1. Preparasi Reagent

a) Media disolusi untuk tahap asam

Asam Klorida 0,1 N:

1) Sebanyak 78,20 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam piala

gelas 6000 mL.

2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 6000 mL

sambil diaduk.

b) Pelarut untuk tahap asam

43

Asam Klorida 0,1 N:

1) Sebanyak 13,04 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam labu

takar 1000 mL.

2) Ditambahkan air hingga tanda tera kemudian dihomogenkan.

Natrium Hidroksida 5 N:

1) Ditimbang sebanyak 20,00 gram Natrium Hidroksida pellet,

kemudian dimasukkan ke piala gelas 100 mL.

2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 100 mL

sambil diaduk.

Campuran HCl 0,1 N dan NaOH 5 N (900:20):

1) Campurkan HCl 0,1 N dan NaOH 5 N dengan perbandingan

900:20 kemudian dihomogenkan.

c) Media disolusi untuk tahap buffer

Larutan A (Larutan Trisodium fosfat dodekahidrat 76 mg/mL):

1) Ditimbang 114 gram Trisodium fosfat dodekahidrat, kemudian

dimasukkan ke dalam piala gelas 2000 mL.

2) Dilarutkan dengan air hingga volumenya 1500 mL, kemudian

dihomogenkan.

Asam Klorida 0,1 N:

1) Sebanyak 58,7 mL Asam Klorida 25% dimasukkan ke dalam piala

gelas 5000 mL.

2) Ditambahkan air sedikit demi sedikit hingga volumenya 4500 mL

sambil diaduk.

Media Disolusi tahap buffer (Buffer fosfat pH 6,8):

1) HCl 0,1 N dan Larutan A dicampurkan dengan perbandingan 1 : 3

2) Larutan dihomogenkan kemudian pH-nya diatur hingga mencapai

pH 6,8.

d) Pelarut untuk tahap buffer

Buffer fosfat pH 6,8:

1) HCl 0,1 N dan Larutan A dicampurkan dengan perbandingan 1 : 3.

2) Larutan dihomogenkan kemudian pH-nya diatur hingga mencapai

pH 6,8.

44

e) Fase Gerak

Larutan AH:

1) Asam fosfat 0,01 M dicampurkan dengan larutan Natrium

Dihidrogen Fosfat 0,01 M dengan volume yang sama kemudian

dihomogenkan.

2) pH larutan kemudian diatur hingga pH nya ± 2,5

Fase Gerak Natrium Diklofenak:

1) Larutan AH dan Metanol dicampurkan dengan perbandingan 700 :

300 kemudian larutan dihomogenkan.

2. Preparasi Larutan Standar

a) Larutan standar stok

1) Sebanyak 12,5 mg Standar Natrium Diklofenak ditimbang

kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 50 mL.

2) Dilarutkan dengan 5 mL NaOH 0,1 N, kemudian diencerkan

dengan air hingga tanda tera, lalu dihomogenkan.

b) Larutan standar untuk tahap asam

1) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan Larutan Sa1

3) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan Sa1 kemudian dimasukkan ke

dalam labu ukur 20 mL.

4) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan Larutan Sa2

5) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm, kemudian

dimasukkan kedalam vial.

c) Larutan standar untuk tahap buffer

1) Dipipet sebanyak 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan.

3) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

45

d) Larutan Standar untuk Uji Linearitas Tahap Asam

a. Larutan Standar Stok Linearitas 50% tahap asam

1) Dipipet 2,0 mL larutan standar stok natrium diklofenak

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan.

b. Deret Standar untuk uji linearitas tahap asam:

1) Dibuat deret standar dengan konsentrasi larutan sesuai tabel

dibawah ini:

Tabel 1 Tabel 1 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap asam

No. Tingkatan

Konsentrasi (%)

Volume Larutan LSa

(mL)

Volume akhir

larutan (mL)

Konsentrasi Larutan (ppm)

LSa1 1,0 1,0 50,0 0,2 LSa2 2,0 1,0 25,0 0,4 LSa3 5,0 2,0 20,0 1,0 LSa4 10,0 5,0 25,0 2,0 LSa5 12,0 10,0 20,0 4,0

2) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

e) Larutan Standar untuk Uji Linearitas Tahap Buffer

a. Larutan standar stok linearitas 250% tahap buffer

1) Dipipet 10,0 mL larutan standar stok Natrium Diklofenak

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50,0 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan.

b. Deret Standar untuk uji linearitas tahap buffer:

1) Dibuat deret standar dengan konsentrasi larutan sesuai tabel

dibawah ini:

Tabel 2 Preparasi Deret Standar Linearitas tahap buffer

No. Tingkatan Konsentrasi

(%)

Volume Larutan LSa

(mL)

Volume akhir

larutan (mL)

Konsentrasi Larutan (ppm)

LSb1 30,0 3,0 25,0 6,0 LSb2 60,0 6,0 25,0 12,0 LSb3 100,0 10,0 25,0 20,0 LSb4 110,0 11,0 25,0 22,0 LSb5 120,0 12,0 25,0 24,0

46

2) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

3. Kondisi Disolusi

a. Tahap Asam:

Media : HCl 0,1 N

Volume : 900 mL

Metode : Metode 2 (Metode Dayung)

RPM : 50 rpm

Waktu : 2 jam

Suhu : 37oC

b. Tahap Buffer:

Media : Buffer fosfat pH 6,8

Volume : 900 mL

Metode : Metode 2 (Metode Dayung)

RPM : 50 rpm

Waktu : 45 menit

Suhu : 37oC

4. Kondisi Kromatografi

Kolom : 4,6-mm x 25-cm; packing L7. „LiChroCART®

LiChrospher®‟ 60 Rp-select B (5 µm)

Volume Injeksi : 10 µL

Laju Alir : 1,0 mL/menit

Fase Gerak : Metanol dan Buffer pH 2,5 (7 : 3)

Detektor : UV – VIS λ = 254 nm

Waktu Pembacaan : 13 menit

Waktu Retensi : Natrium Diklofenak : ± 11 menit

5. Preparasi Larutan Spike untuk Uji Akurasi

a. Larutan Spike Stok

1) Sebanyak 50,0 mg Standar Natrium Diklofenak ditimbang

kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL.

2) Dilarutkan dengan 10 mL NaOH 0,1 N, kemudian diencerkan

dengan air hingga tanda tera, lalu dihomogenkan (Larutan A).

47

b. Larutan Spike Tahap Asam

1) Dipipet sebanyak 25,0 mL Larutan A kemudian dimasukkan

kedalam labu ukur 100 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera, lalu

dihomogenkan (Larutan Aa1).

c. Larutan Spike Tahap Buffer

1) Dipipet sebanyak 2,0 mL Larutan A kemudian dimasukkan

kedalam labu ukur 20 mL.

2) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera, lalu

dihomogenkan (Larutan Ab1).

6. Preparasi Sampel

a. Preparasi Sampel Tahap Asam

1) Dimasukkan satu tablet ke masing-masing bejana yang telah diisi

dengan media disolusi tahap asam.

2) Disolusi dilakukan sesuai dengan kondisi yang ditetapkan.

3) Setelah dua jam, tablet dari masing-masing bejana dikeluarkan

dari bejana berisi media disolusi tahap asam, untuk selanjutnya

tablet akan melalui proses disolusi tahap buffer.

4) Sebanyak 20,0 mL NaOH 5 N ditambahkan ke dalam masing-

masing bejana.

5) Sebanyak 10,0 mL larutan sampel di dalam bejana dipipet

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

6) Diencerkan dengan pelarut tahap asam hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan.

7) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

d. Preparasi Sampel Tahap Buffer

1) Dimasukkan tablet yang telah melalui disolusi tahap asam ke

masing-masing bejana yang telah diisi dengan media disolusi

tahap buffer.

2) Disolusi dilakukan sesuai dengan kondisi yang ditetapkan.

3) Setelah 45 menit, diambil ± 20 mL larutan sampel di dalam bejana

kemudian disaring dengan kertas saring.

48

4) Filtrat yang didapatkan kemudian dipipet sebanyak 10,0 mL, lalu

dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL.

5) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer hingga tanda tera

kemudian dihomogenkan.

6) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

e. Preparasi Sampel untuk Uji Akurasi Tahap Asam

1) Dimasukkan sejumlah plasebo dan larutan spike sesuai tabel

dibawah ini, kedalam labu ukur 500,0 mL.

Tabel 3 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap asam

Tingkatan Konsentrasi

(%)

Nama Spl.

Jumlah Plasebo yang ditambahkan

(mg)

Vol. lar. spike.

(mL)/lar. spike

Konsentrasi lar. Spike (mg/mL)

Kadar di dalam tablet

(mg/tab)

Konsentrasi Lar. (µg/mL)

1% SAa 301.4 2.0 / Lar.

Aa1 0.14 0.5 0.2

10% SBa 298.9 2.0 / Lar.

A 1.4 5.0 2.0

25% SCa 294.8 5.0 / Lar.

A 1.4 12.5 5.0

2) Dilarutkan dengan HCl 0,1 N kemudian diaduk selama 5 menit.

3) Ditambahkan 11,0 mL NaOH 5 N kemudian diaduk lagi selama 3

menit.

4) Larutan disaring dengan kertas saring

5) Kemudian filtratnya dipipet sebanyak 10,0 mL dan dimasukkan ke

dalam labu ukur 25 mL.

6) Diencerkan dengan pelarut tahap asam kemudian dihomogenkan.

7) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

f. Preparasi Sampel untuk Uji Akurasi Tahap Buffer

1) Dimasukkan sejumlah plasebo dan larutan spike sesuai tabel

dibawah ini, kedalam labu ukur 500,0 mL.

49

Tabel 4 Preparasi Sampel Uji Akurasi tahap buffer

Tingkatan Konsentrasi

(%)

Nama Spl

Jumlah Plasebo yang ditambahkan

(mg)

Vol. lar. spike.

(mL)/lar. spike

Konsentrasi lar. Spike (mg/mL)

Kadar di dalam tablet

(mg/tab)

Konsentrasi Lar. (µg/mL)

30% SAb 293,4 6.0 / Lar.

Ab1 1,4 15,0 6,0

100% SBb 273,9 5.0 / Lar.

A 5,6 50.0 20.0

120% SCb 268,4 6.0 / Lar.

A 5,6 60,0 24.0

2) Dilarutkan dengan Buffer pH 6,8 kemudian diaduk selama 5 menit.

3) Larutan disaring dengan kertas saring

4) Kemudian filtratnya dipipet sebanyak 10,0 mL dan dimasukkan ke

dalam labu ukur 25 mL.

5) Diencerkan dengan pelarut tahap buffer kemudian dihomogenkan.

6) Disaring dengan kertas saring membran 0,45 µm kemudian

dimasukkan ke dalam vial.

7. Sampel

a. Sampel untuk uji selektifitas:

1) Blako pelarut (pelarut tahap asam dan pelarut tahap buffer)

2) Fase Gerak Fase gerak Na Diklofenak ( buffer pH 2,5 :

methanol 300 : 700)

3) Larutan Standar Larutan Standar tahap asam dan larutan

standar tahap buffer

4) Plasebo A plasebo yang disimpan pada kondisi ambien (suhu :

25oC Kelembapan: 60%)

5) Plasebo B plasebo yang telah disimpan pada stress condition

(suhu : 40oC Kelembapan: 75%) selama 7 hari

6) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan

pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)

7) Sampel NP2 Sampel obat tablet salut enterik yang telah

disimpan pada stress condition (suhu : 40oC Kelembapan: 75%)

selama 7 hari

b. Sampel untuk uji Presisi

1) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan

pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)

50

c. Sampel untuk uji ketahanan

1) Sampel NP1 Sampel obat tablet salut enterik yang disimpan

pada kondisi ambien (suhu : 25oC Kelembapan: 60%)

d. Sampel untuk uji linearitas

1) Larutan Standar linearitas (L1 – L5) pada tahap asam dan tahap

buffer

e. Sampel untuk uji akurasi

1) Larutan A, B, dan C pada tahap asam dan tahap buffer

8. Penetapan validasi

a. Uji Kesesuaian Sistem

Uji Kesesuaian Sistem dilakukan dengan cara menerapkan metode

pengukuran kepada larutan standar kemudian dilihat kesesuaian

sistemnya (meliputi : faktor ikutan (T), resolusi (R), faktor kapasitas

(k‟), jumlah plat (N), RSD luas puncak, dan RSD waktu retensi)

kemudian dibandingkan dengan syarat keterimaan yang telah

ditetapkan. Pengukuran dilakukan sebanyak lima kali pengulangan.

b. Uji Spesifisitas

Uji Speifisitas atau Selektivitas dilakukan dengan mengukur luas

puncak fase gerak, pelarut, placebo, standar, dan sampel, kemudian

kromatogram yang didapatkan dibandingkan. Pengukuran dilakukan

masing-masing satu kali terhadap pelarut tahan asam & tahap basa,

fase gerak, placebo A dalam tahap asam & tahap basa, larutan

standar konsentrasi 100% dalam tahap asam & basa, dan larutan

sampel NP1 dan NP2 dalam tahap asam & tahap basa.

c. Uji Presisi

1) Uji Keterulangan (Repeatability)

Uji Keterulangan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak

sampel homogen yang telah melalui tahap disolusi, kemudian

dihitung laju disolusinya. Pengukuran dilakukan masing-masing

dua kali terhadap enam kali pengulangan disolusi (enam bejana

disolusi).

2) Uji Ketertiruan (Reproducibility)

Uji Ketertiruan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak

sampel homogen yang telah melalui tahap disolusi, kemudian

51

dihitung laju disolusinya. Pengukuran dilakukan di laboratorium

yang berbeda dan oleh analis yang berbeda. Pengukuran

dilakukan masing-masing dua kali terhadap enam kali

pengulangan disolusi (enam bejana disolusi).

d. Uji Akurasi

Uji Akurasi dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel

yang mengandung konsentrasi zat aktif yang berbeda pada masing-

masing tahap (tahap asam : 1%, 10%, dan 25% ; tahap basa : 30%,

100%, dan 120%). Pengerjaan dilakukan sebanyak tiga kali

pengulangan dan dua kali pengukuran pada setiap masing-masing

tingkatan konsentrasi. Untuk akurasi tahap asam, dihitung RSD %

perolehan kembalinya (recovery rate), dan untuk tahap buffer dihitung

rata-rata % perolehan kembali (recovery rate), dan % RSD

keseluruhannya.

e. Uji Linearitas

Uji Linearitas dilakukan dengan cara mengukur deret larutan standar

yang konsentrasinya berbeda-beda (deret standar tahap asam : 1%,

2%, 5%, 10%, dan 25% ; deret standar tahap buffer : 30%, 60%,

100%, 110%, dan 120%). Hubungan linearitas antara respon dari

analat dengan konsentrasinya ditunjukan dalam persamaan garis

regresi dan % Y intersep. Pengerjaaan dilakukan dua kali

pengulangan dengan dua kali pengukuran untuk masing-masing

tingkatan konsentrasi pada larutan standar tahap asam dan tahap

buffer.

f. Uji Ketahanan

1) Stabilitas Sampel dan Standar

Uji Stabilitas Sampel dan Standar ini dilakukan dengan

menginjeksikan larutan sampel dan larutan standar Natrium

Diklofenak dalam waktu analisis yang berbeda. Analisis dilakukan

dengan satu kali injeksi sampel dan standar setiap selang waktu

selama 72 jam. Injeksi dilakukan pada jam ke- 0, 4, 8, 12, 24, 48,

dan 72.

2) Variasi Prosedur

Uji ketahanan ini dilakukan dengan menguji kestabilan metode

dengan cara melakukan sedikit modifikasi yang berbeda dari

52

kondisi normalnya. Analisis dilakukan sebanyak enam kali

pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-masing

dilakukan pengukuran sebanyak dua kali. Variasi metode

dilakukan pada dua parameter, yaitu:

a) Variasi Prosedur pada parameter KCKT

Dilakukan Variasi prosedur pada pada parameter KCKT

sesuai dengan kondisi dibawah ini:

Tabel 5 Variasi Prosedur Paameter KCKT

Parameter Kondisi Normal

Uji Ketegaran

(-) (+)

Laju Alir (ml / menit) 1.0 0.95 1.05

Komposisi Fase Gerak Metanol : Larutan A

700 : 300 693 : 297 707 : 303

pH Larutan A 2.5 2.45 2.55

53

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Berdasarkan uji yang telah dilakukan terhadap parameter-parameter

validasi pada uji disolusi Natrium Diklofenak didalam tablet salut enterik, hasilnya

dapat dijelaskan sebagai berikut

A. Uji Kesesuaian Sistem

Uji Kesesuaian Sistem dilakukan untuk mengetahui keefektifan sistem

kromatografi sehingga data analisis yang dihasilkan cukup handal untuk

dipakai dalam menyimpulkan suatu hasil pengujian. Uji Kesesuaian Sistem

dilakukan dengan cara menerapkan metode pengukuran kepada larutan

standar yang diinjeksikan sebanyak lima kali pengulangan kemudian dilihat

kesesuaian sistemnya (meliputi : faktor ikutan (T), resolusi (R), faktor

kapasitas (k‟), jumlah plat (N), RSD luas puncak, dan RSD waktu retensi)

kemudian dibandingkan dengan syarat keterimaan yang telah ditetapkan.

Tabel di bawah ini merupakan hasil dari Uji Kesesuaian Sistem untuk Validasi

Disolusi Natrium Diklofenak pada Tahap Asam dan Tahap Buffer.

Tabel 6 Hasil Uji Kesesuaian Sistem

Parameter Syarat Keberterimaan

Hasil

Tahap Asam Tahap Buffer

Faktor Ikutan (T) < 2,0 1,0 1,1

Faktor Kapasitas (k’) > 2,0 8,2 8,2

Efisiensi Kolom (N) ≥ 2000 8719 7897

RSD Luas Area Puncak (%)

≤ 2,0 0,8 0,2

RSD Waktu Retensi (%) ≤ 1,0 0,1 0,05

Dari hasil Uji Kesesuaian Sistem yang didapatkan, seluruh parameter

memenuhi kriteria keberterimaan yang ditetapkan, hasil ini menujukan bahwa

keefektivitas sistem kromatografinya cukup baik, sehingga data analisis yang

dihasilkan cukup handal untuk dipakai dalam menyimpulkan suatu hasil

pengujian.

54

B. Uji Spesifisitas

Uji spesifisitas dilakukan untuk mengetahui adanya gangguan pada

luas puncak pembacaan pada sampel yang disebabkan oleh pelarut, fase

gerak, ataupun produk degradasi yang terdapat didalam sampel. Uji

spesifisitas ini dilakukan dengan menginjeksikan pelarut tahap asam dan

buffer, fase gerak, Sampel NP1 dan NP2 pada tahap asam dan buffer, serta

plasebo A dan B pada tahap asam dan buffer. Kemudian kromatogram yang

didapatkan dibandingkan dan dilihat apakah ada puncak dari komponen lain

yang dapat mengganggu pembacaan luas puncak pada sampel.

Kromatogram hasil uji selektifitas dapat dilihat pada lampiran.

Dari hasil uji selektifitas yang dilakukan, tidak ditemukan adanya

puncak dari komponen lain yang mengganggu puncak pembacaan dari

Natrium diklofenak di dalam sampel. Hal ini menunjukan bahwa metode ini

dapat memisahkan Natrium Diklofenak dari komponen lain dengan baik tanpa

adanya puncak pembacaan yang bercampur ataupun bertumpukan.

C. Uji Linearitas

Uji Linearitas dilakukan untuk mengetahui kemampuan metode

analisis untuk menunjukan respon/hasil uji secara langsung terhadap

konsentrasi analit dalam sampel dan dalam rentang konsentrasi yang

digunakan. Pengujian linearitas dilakukan terhadap beberapa tingkatan

konsentrasi zat aktif. Tingkatan konsentrasi zat aktif pada tahap asam adalah

sebesar 1%, 2%, 5%, 10%, dan 25% sedangkan pada tahap buffer sebesar

60%, 80%, 100%, 120% dan 140%. Hubungan linear antara respon analit

dengan konsentrasi analit ditampilkan sebagai persamaan regresi dan

dihitung %Y intersepnya. Berikut ini merupakan kurva hasil uji linearitas untuk

tahap asam dan tahap buffer.

55

Gambar 9 Kurva Linearitas Standar tahap asam

Uji Linearitas tahap asam, koefisien korelasi yang didapatkan sebesar

1,000, nilai tersebut memenuhi syarat keterimaan sebesar ≥ 0,995. Hal ini

menunjukan bahwa korelasi antara luas puncak dan konsentrasi Natrium

diklofenak dalam rentang 0,2 – 0,6 µg/Ml intersep yang didapatkan sebesar –

1,069 angka tersebut menunjukan simpangan baku respon analit terhadap

larutan sampel dengan konsentrasi nol. %Y intersep didapatkan sebesar –

0,5%, % Y intersep dapat dihitung dari pembagian antara nilai intersep

dengan luas area Natrium Diklofenak pada konsentrasi 100%. Karena pada

saat pengujian tidak dilakukan pengukuran luas area larutan Natrium

Diklofenak pada tingkat konsentrasi 100%, maka nilai luas area konsentrasi

100% didapatkan dari ekstrapolasi persamaan garis yang didapatkan. Syarat

keterimaan %Y intersep adalah ≤ 3,0% agar garis linear tetap proporsional.

Nilai slope didapatkan sebesar 9,921, nilai tersebut menunjukan besaran

kenaikan respon pada setiap tingkatan konsentrasi.

y = 9,921x - 1,069 R² = 1.000

15006500

115001650021500265003150036500415004650051500

0.1 0.6 1.1 1.6 2.1 2.6 3.1 3.6 4.1 4.6 5.1 5.6

Are

a (A

U)

Konsentrasi Sebenarnya (µg/mL)

Kurva Linearitas Natrium Diklofenak (Tahap Asam)

56

Gambar 10 Kurva Linearitas Standar tahap buffer

Uji Linearitas tahap buffer, koefisien korelasi yang didapatkan

sebesar 0.9999, nilai tersebut memenuhi syarat keterimaan sebesar ≥ 0,995.

Hal ini menunjukan bahwa korelasi antara luas puncak dan konsentrasi

Natrium diklofenak dalam rentang 6,6768 – 26,7073 µg/Ml intersep yang

didapatkan sebesar – 1474,5 angka tersebut menunjukan simpangan baku

respon analit terhadap larutan sampel dengan konsentrasi nol. %Y intersep

didapatkan sebesar – 0,7%, % Y intersep dapat dihitung dari pembagian

antara nilai intersep dengan luas area Natrium Diklofenak pada konsentrasi

100%. Syarat keterimaan %Y intersep adalah ≤ 3,0% agar garis linear tetap

proporsional. Nilai slope didapatkan sebesar 9897,4 nilai tersebut

menunjukan besaran kenaikan respon pada setiap tingkatan konsentrasi.

D. Uji Akurasi

Pengujian Akurasi dilakukan untuk menunjukan kedekatan antara

hasil percobaan dengan nilai sebenarnya, mengukur kesesuaian antara hasil

dan nilai sebenarnya, dan dapat menggambarkan kesalahan sistematis. Uji

Akurasi dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel yang

mengandung konsentrasi zat aktif yang berbeda pada masing-masing tahap

(tahap asam : 1%, 10% dan 25% ; tahap basa : 30%, 100%, dan 120%).

y = 9897.4x - 1474.5 R² = 0.9999

50000

100000

150000

200000

250000

300000

5.0 12.0 19.0 26.0 33.0

Are

a (A

U)

Konsentrasi Sebenarnya (µg/mL)

Kurva Linearitas Natrium Diklofenak (Tahap Asam)

57

Pengerjaan dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dan dua kali

pengukuran pada setiap masing-masing tingkatan konsentrasi.

Pengujian akurasi menggunakan larutan dengankadar zat aktif yang

berbeda ini bertujuan untuk mengetahui tingkat akurasi metode pada

beberapa tingkat konsentrasi. Berikut ini adalah tabel hasil uji akurasi pada

tahap asam dan tahap buffer.

Tabel 7 Hasil Uji Akurasi tahap asam

Nama Spl.

Tingkat Konsentrasi

(%)

Uji Disolusi Natrium Diklofenak

Laju Disolusi Teoritis (%)

Laju Disolusi

Aktual (%)

Perolehan Kembali (%)

Rata-rata Perolehan Kembali

RSD Perolehan Kembali

SAa.1.1

1,00

0,9985 1,0900 109,16%

109% 1.6%

SAa.1.2 0,9985 1,0800 108,16%

SAa.2.1 0,9985 1,0900 109,16%

SAa.2.2 0,9985 1,0600 106,16%

SAa.3.1 0,9985 1,1100 111,17%

SAa.3.2 0,9985 1,1000 110,17%

SBa.1.1

10,00

9,9882 8,6500 86,60%

89% 1.3%

SBa.1.2 9,9882 8,8500 88,60%

SBa.2.1 9,9882 8,9000 89,11%

SBa.2.2 9,9882 8,9900 90,01%

SBa.3.1 9,9882 8,9300 89,41%

SBa.3.2 9,9882 8,9300 89,41%

SCa.1.1

25,00

24,9704 24,2900 97,28%

95% 1.9%

SCa.1.2 24,9704 24,4500 97,92%

SCa.2.1 24,9704 23,8400 95,47%

SCa.2.2 24,9704 23,5600 94,35%

SCa.3.1 24,9704 23,3900 93,67%

SCa.3.2 24,9704 23,4700 93,99%

Rata-rata 97,77%

RSD (≤ 10.0%) 9,0%

58

Tabel 8 Hasil Uji Akurasi tahap buffer

Nama Spl.

Tingkat Konsentrasi

(%)

Laju Disolusi Natrium Diklofenak

Laju Disolusi Teoritis(%)

Laju Disolusi

Aktual (%)

Perolehan Kembali

(%)

Rata-rata Perolehan Kembali

RSD Perolehan Kembali

SAb.1.1

30,00

29,9645 29,7700 99,35%

99% 0.5%

SAb.1.2 29,9645 29,7700 99,35%

SAb.2.1 29,9645 29,5900 98,75%

SAb.2.2 29,9645 29,6300 98,88%

SAb.3.1 29,9645 29,3600 97,98%

SAb.3.2 29,9645 29,4700 98,35%

SBb.1.1

100,00

99,8818 98,7700 98,89%

99% 0.2%

SBb.1.2 99,8818 98,8600 98,98%

SBb.2.1 99,8818 98,7700 98,89%

SBb.2.2 99,8818 99,1300 99,25%

SBb.3.1 99,8818 99,0000 99,12%

SBb.3.2 99,8818 99,1400 99,26%

SCb.1.1

120,00

119,8581 118,9900 99,28%

100% 0.2%

SCb.1.2 119,8581 119,3200 99,55%

SCb.2.1 119,8581 119,7300 99,89%

SCb.2.2 119,8581 119,6600 99,83%

SCb.3.1 119,8581 119,5200 99,72%

SCb.3.2 119,8581 119,3600 99,58%

Rata-rata 99,16%

Rentang perolehan kembali (95 - 105%) 97,98% - 99,89%

RSD (≤ 5.0%) 0,5%

Hasil pengujian akurasi pada tahap asam, didapatkan nilai RSD

sebesar 9,0% hasil ini memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤

10,0%, sedangkan pada tahap buffer, didapatkan RSD sebesar 0,5% dengan

rentang persentase perolehan kembali 97,98% - 99,89%. Hasil dari %

perolehan kembali menunjukan bahwa pada pengujian akurasi pada masing-

masing tingkat konsentrasi tidak terjadi kesalahan sistematis, melainkan

hanya terdapat kesalahan acak yang tidak dapat dikendalikan namun tidak

terlalu berpengaruh pada hasil analisis. Nilai % RSD yang memenuhi syarat

keberterimaan menunjukan bahwa hasil analisis memiliki nilai keterulangan

yang cukup baik. Oleh karena itu metode ini akurat untuk mengukur laju

disolusi natrium diklofenak.

59

E. Uji Presisi

1. Keterulangan (Repeatability)

Uji Keterulangan dilakukan untuk mengukur keragaman nilai hasil

uji yang dilakukan pada kondisi operator, alat, sampel, dan laboratorium

yang sama dalam interval waktu pemeriksaan yang singkat. Uji

Keterulangan dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel

homogen yang telah melalui tahap disolusi sesuai metode yang telah

ditetapkan, kemudian dihitung laju disolusinya. Pengerjaan dilakukan

sebanyak enam kali pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-

masing diinjeksikan dua kali. Berikut ini adalah tabel hasil dari uji

Keterulangan Disolusi Natrium Diklofenak pada tahap asam dan tahap

buffer (total laju disolusi).

Tabel 9 Hasil Uji Keterulangan tahap asam

Nama Sampel

Tingkatan Konsentrasi (%) Laju Disolusi Na Diklofenak (%)

NPa.1 1

100%

0,0000

NPa.1 2 0,0000

NPa.2 1 0,0000

NPa.2 2 0,0000

NPa.3 1 0,0000

NPa.3 2 0,0000

NPa.4 1 0,0000

NPa.4 2 0,0000

NPa.5 1 0,0000

NPa.5 2 0,0000

NPa.6 1 0,0000

NPa.6 2 0,0000

Rata-rata Laju Disolusi 0,0000

Simpangan Baku 0,0000

RSD (≤ 10.0%) 0,0%

60

Tabel 10 Hasil Uji Keterulangan tahap buffer

Nama Sampel

Tingkatan Konsentrasi (%) Laju Disolusi Na Diklofenak (%)

NPb.1 1

100%

96,0789

NPb.1 2 96,3946

NPb.2 1 99,3434

NPb.2 2 99,8921

NPb.3 1 97,1325

NPb.3 2 97,8900

NPb.4 1 96,3642

NPb.4 2 96,1272

NPb.5 1 92,0833

NPb.5 2 92,6428

NPb.6 1 89,4110

NPb.6 2 89,3604

Rata-rata Total Laju Disolusi 95,2267

Simpangan Baku 3,5474

RSD (≤ 5.0%) 3,7%

Dari pengujian keterulangan yang telah dilakukan, diperoleh hasil

nilai %RSD pada disolusi tahap asam sebesar 0,0% hasil ini telah

memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤ 10,0% dan hasil %RSD

total laju disolusi sebesar 3,7% hasil tersebut juga memenuhi syarat

keberterimaan yaitu ≤ 5,0%. Berdasarkan hasil yang didapatkan, dapat

dinyatakan bahwa metode tersebut memiliki keterulangan yang cukup

baik. Keterulangan metode menggambarkan adanya pengaruh akibat

kesalahan acak seperti ketidakstabilan instrument, variasi suhu/pereaksi,

keseragaman teknik dan operator yang berbeda, namun masih dapat

diterima dan tidak secara signifikan mempengaruhi hasil analisis.

2. Ketertiruan (Reproducibility)

Uji Ketertiruan dilakukan untuk memastikan bahwa metode akan

menghasilkan hasil yang sama meskipun dikerjakan dilaboratorium yang

berbeda. Validasi ketertiruan penting dilakukan jika metode akan

digunakan di laboratorium yang berbeda. Uji Reproduksibilitas dilakukan

dengan cara mengukur luas puncak sampel homogen yang telah melalui

61

tahap disolusi, kemudian dihitung laju disolusinya. Uji Ketertiruan

dilakukan dengan cara mengukur luas puncak sampel homogen yang

telah melalui tahap disolusi sesuai metode yang telah ditetapkan,

kemudian dihitung laju disolusinya. Pengerjaan dilakukan oleh dua analis

yang berbeda di laboratorium yang berbeda pula, pengerjaan dilakukan

sebanyak enam kali pengulangan (enam bejana disolusi) yang masing-

masing diinjeksikan dua kali. Berikut ini adalah tabel hasil dari uji

Ketetiruan Disolusi Natrium Diklofenak pada tahap asam dan tahap

buffer.

Tabel 11 Hasil Uji Ketertiruan tahap asam

Tingkat Konsentrasi (%)

Analis 1 Tanggal analisis:

19/12/2014

Analis 2 Tanggal analisis:

23/01/2015

Nama Sampel

Laju disolusi Na Diclofenak

(%)

Nama Sampel

Laju disolusi Na Diclofenak (%)

100%

NPa 1.1 0,0000 NPa 1.1 0,0000

NPa 1.2 0,0000 NPa 1.2 0,0000

NPa 2.1 0,0000 NPa 2.1 0,0000

NPa 2.2 0,0000 NPa 2.2 0,0000

NPa 3.1 0,0000 NPa 3.1 0,0000

NPa 3.2 0,0000 NPa 3.2 0,0000

NPa 4.1 0,0000 NPa 4.1 0,0000

NPa 4.2 0,0000 NPa 4.2 0,0000

NPa 5.1 0,0000 NPa 5.1 0,0000

NPa 5.2 0,0000 NPa 5.2 0,0000

NPa 6.1 0,0000 NPa 6.1 0,0000

NPa 6.2 0,0000 NPa 6.2 0,0000

Rata-rata masing-masing

0,0000 0,0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0,0% 0,0%

Rata-rata keseluruhan 0,0000

RSD keseluruhan (≤ 10.0%)

0,0%

62

Tabel 12 Hasil Uji Ketertiruan tahap buffer

Tingkat Konsentrasi (%)

Analis 1 Tanggal analisis:

19/02/2014

Analis 2 Tanggal analisis:

23/01/2015

Nama Sampel

Total laju disolusi Na

Diclofenak (%)

Nama Sampel

Total laju disolusi Na

Diclofenak (%)

100%

NPa 1.1 96,0789 NPa 1.1 96,4639

NPa 1.2 96,3946 NPa 1.2 96,7682

NPa 2.1 99,3434 NPa 2.1 96,7639

NPa 2.2 99,8921 NPa 2.2 97,0644

NPa 3.1 97,1325 NPa 3.1 97,4318

NPa 3.2 97,8900 NPa 3.2 97,7559

NPa 4.1 96,3642 NPa 4.1 99,1175

NPa 4.2 96,1272 NPa 4.2 98,8753

NPa 5.1 92,0833 NPa 5.1 99,2599

NPa 5.2 92,6428 NPa 5.2 99,5589

NPa 6.1 89,4110 NPa 6.1 97,8368

NPa 6.2 89,3604 NPa 6.2 98,0849

Rata-rata masing-masing 95,2267 97,9151

RSD masing-masing (≤ 5.0%)

3,7% 1,1%

Rata-rata keseluruhan 96,5709

RSD keseluruhan (≤ 5.0%)

3,0%

Dari hasil uji keteriruan yang dilakukan, pada tahap asam

didapatkan RSD data Laju disolusi pada masing-masing laboratorium dan

RSD percobaan keseluruhan sebesar 0,0%. Hasil tersebut memenuhi syarat

keberterimaan yaitu sebesar ≤ 10,0%. Pada tahap basa, didapatkan RSD

total laju disolusi di lab PD sebesar 3,7% dan di lab QC sebesar 1,1%, untuk

RSD keseluruhan didapatkan sebesar 3,0% hasil tersebut memenuhi syarat

keberterimaan yaitu sebesar ≤ 5,0%. Dari hasil uji ketertiruan tersebut, dapat

diketahui bahwa metode uji disolusi yang dilakukan memiliki keterulangan

yang baik serta dapat menghasilkan nilai yang tidak jauh berbeda apabila

dilakukan oleh analis yang berbeda, pada waktu yang berbeda, ataupun di

Laboratorium yang berbeda.

63

F. Uji Ketahanan

Uji ketahanan metode dilakukan untuk mengetahui ketahanan metode

terhadap perubahan kecil dari kondisi pada prosedur. Uji ketahanan ini

terbagi menjadi dua yaitu:

1. Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel

Uji Stabilitas Larutan Standar dan Sampel dilakukan dengan

pengukuran analit dalam larutan standar dan sampel pada waktu yang

berbeda selama jangka waktu tertentu. Pengujian ini juga bisa digunakan

untuk mengetahui masa simpan dari larutan standar dan sampel. Berikut

ini merupakan hasil dari pengujian stabilitas larutan standar dan sampel.

Gambar 11 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap asam

Berdasarkan hasil uji stabilitas pada larutan standar, seluruh

deviasi luas area puncak yang dibandingkan dengan nilai awal memenuhi

syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini menunjukan bahwa Natrium

diklofenak didalam larutan standar tahap asam dapat stabil hingga 72

jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-24 dengan nilai deviasi

sebesar 1,7%.

19000

19500

20000

20500

21000

0 12 24 36 48 60 72

Luas

Pu

nca

k (A

U)

Waktu Analisis (jam)

Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan standar (Tahap Asam)

Na Diklofenak

Batas Atas

Batas Bawah

Nilai Awal

64

Gambar 12 Hasil Uji Stabilitas Larutan Standar tahap buffer

Untuk hasil uji stabilitas pada larutan standar buffer, seluruh

deviasi luas area puncak yang dibandingkan dengan nilai awal juga

memenuhi syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini menunjukan bahwa

Natrium diklofenak didalam larutan standar tahap buffer dapat stabil

hingga 72 jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-72 dengan nilai

deviasi sebesar 0,8%.

Gambar 13 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap asam

Pada larutan sampel tahap asam, tidak terdeteksi adanya zat aktif

Natrium Diklofenak dalam larutan sampel. Sehingga tidak terdapat deviasi

terhadap laju disolusi awal.

210000

220000

230000

240000

0 12 24 36 48 60 72

Luas

Pu

nca

k (A

U)

Waktu Analisis (jam)

Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Standar (Tahap Buffer)

Na Diklofenak

Batas Atas

Batas Bawah

Nilai Awal

19000

19500

20000

20500

21000

0 12 24 36 48 60 72

Laju

Dis

olu

si (

%)

Waktu Analisis (jam)

Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Sampel (Tahap Asam)

Na Diklofenak

Batas Atas

Batas Bawah

Nilai Awal

65

Gambar 14 Hasil Uji Stabilitas Larutan Sampel tahap buffer

Untuk hasil uji stabilitas Natrium Diklofenak dalam larutan sampel

tahap buffer seluruh deviasi Total Laju disolusi yang dibandingkan

dengan nilai awal memenuhi syarat keberterimaan yaitu ≤ 3,0%. Hal ini

menunjukan bahwa Natrium diklofenak didalam larutan sampel tahap

buffer dapat stabil hingga 72 jam. Deviasi maksimal terjadi pada jam ke-

24 dengan nilai deviasi sebesar 1,8%.

2. Variasi Prosedur

a. Variasi Prosedur pada parameter KCKT

Uji ketahanan terhadap variasi prosedur ini dilakukan dengan

cara menganalisis sampel menggunakan prosedur yang sudah sedikit

dimodifikasi dari kondisin normalnya, dalam hal ini variasi prosedur

dilakukan pada parameter kondisi KCKT. Berikut ini merupakan hasil

dari uji ketahanan variasi prosedur pada parameter kondisi KCKT.

Tabel 13 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap asam

Hasil

Tahap Asam

Parameter

Laju alir (ml/menit) pH larutan A Komposisi Fase Gerak

Kondisi Normal

Variasi Kondisi Normal

Variasi Kondisi Normal

Variasi

1,00 0,95 1,05 2,50 2,45 2,55 700 : 300 693 : 297 707 : 303

RSD masing-masing (%)

0,0

0,0 0,0

0,0

0,0 0,0

0,0

0,0 0,0

RSD keseluruhan

(%) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Syarat Keberterimaan

90.0000

92.0000

94.0000

96.0000

0 12 24 36 48 60 72Tota

l Laj

u D

iso

lusi

(%

)

Waktu analisis (jam)

Stabilitas Na Diklofenak dalam Larutan Sampel (Tahap Buffer)

Na Diklofenak

Batas Atas

Batas Bawah

Nilai Awal

66

RSD masing-masing (%)

≤ 10,0

RSD keseluruhan

(%) ≤ 10,0

Pada tahap asam, tidak terdeteksi adanya zat aktif Natrium

Diklofenak pada kondisi normal maupun kondisi variasi pada seluruh

parameter. Sehingga laju disolusi Natrium diklofenak di dalam larutan

sampel tahap asam sama dengan 0,0% dan tidak terdapat

penyimpangan nilai pada setiap pengerjaan dengan variasi prosedur.

Tabel 14 Hasil Uji Variasi Prosedur Parameter KCKT tahap buffer

Hasil

Tahap Buffer (Total Disolusi)

Parameter

Laju alir (ml/menit) pH larutan A Komposisi Fase Gerak

Kondisi Normal

Variasi Kondisi Normal

Variasi Kondisi Normal

Variasi

1,00 0,95 1,05 2,50 2,45 2,55 700 : 300 693 : 297 707 : 303

RSD masing-masing (%)

3,7

3,8 3,6

3,7

3,5 3,3

3,7

4,0 3,6

RSD keseluruhan

(%) 3,7 3,6 3,6 3,5 3,8 3,6

Syarat Keberterimaan

RSD masing-masing (%)

≤ 5,0

RSD keseluruhan

(%) ≤ 5,0

Pada tahap buffer, RSD total laju disolusi masing-masing pada

kondisi normal maupun variasi, memenuhi syarat keberterimaan yaitu

sebesar ≤ 5,0%. Hal ini menunjukan bahwa dengan adanya variasi

pada parameter KCKT, hasil analisis masih memiliki nilai

keterulangan yang baik. Untuk RSD total laju disolusi keseluruhan

yang dibandingkan dengan kondisi normalnya, seluruh nilai RSD-nya

memenuhi syarat keberterimaan yaitu sebesar ≤ 5,0%. Hal tersebut

menunjukan bahwa dengan adanya variasi pada parameter KCKT,

hasil analisis masih memiliki nilai ketertiruan yang cukup baik karena

nilai penyimpangan dari kondisi normalnya tidak terlalu besar.

67

BAB V SIMPULAN DAN SARAN

A. SIMPULAN

Berdasarkan hasil validasi metode yang telah dilakukan dapat

disimpulkan bahwa metode disolusi Natrium Diklofenak dalam obat tablet salut

enterik telah memenuhi syarat keberterimaan yang ditetapkan oleh PT Merck

Tbk. Maka, metode ini valid dan dapat digunakan untuk analisis rutin di

laboratorium Product Development dan laboratorium Quality control di PT Merck

Tbk oleh analis yang sudah terkualifikasi.

B. SARAN

Saran penulis mengenai analisis uji disolusi Natrium Diklofenak ini ialah

agar ke depannya dapat terus berkembang peralatan dari disolusi sendiri, yaitu

pengambilan sampel secara otomatis sehingga dalam proses sampling dapat

efisien dan dilakukan secara serentak tanpa alat manual seiring dengan

perkembangan penemuan di bidang ilmu pengetahuan.

Sedangkan saran umum penulis selama prakerin ini ialah agar penerapan

K3 di laboratorium dapat dijalankan dengan lebih baik lagi, dokumentasi

pemakaian alat ataupun bahan kimia dapat dijalankan dengan lebih disiplin dan

ditata agar lebih baik lagi, serta kebersihan dan kerapihan laboratorium tetap

terjaga dan ditingkatkan lagi. Dengan demikian, diharapkan dapat tercapainya

kelancaran dan keselamatan kerja di laboratorium. Serta saran untuk sekolah

agar kedepannya terus membina hubungan kerjasama dengan institusi-institusi

lain sehingga dapat memperluas hubungan dengan dunia industri selaku

penyerap tenaga kerja analis kimia.

68

DAFTAR PUSTAKA

Agoes, G. 2008. Pengembangan Sediaan Farmasi. Edisi Revisi dan Perluasan.

Bandung: Institut Teknologi Bandung.

Anief, M. 1994. Farmasetika. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.

Ansel, Howard. C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi IV.

Diterjemahkan oleh Farida Ibrahim. Jakarta: UI Press.

Ansel, Howard C. 2008. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi edisi 4. Jakarta. UI-

Press.

Arifin, Zaenal, dan Krisnandi Ismail. 2014. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

(KCKT). Bogor: Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri Sekolah

Menengah Analis Kimia Bogor.

Astuti, Ika Yuni, Iskandar Sudirman, dan Umi Hidayat, 2007, Jurnal Pharmacy

Vol. 05 No. 01 “Pengaruh Konsentrasi Adeps Lanae dalam Dasar Salep

Cold Cream Terhadap Pelepasan Asam Salisilat”. Purwokerto:

Universitas Muhammadiyah Purwokerto.

Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2001. Pedoman Cara Pembuatan Obat

yang Baik (CPOB). Jakarta : BPOM.

Clark, Jim. 2007. “Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC)”. Tanpa Kota:

http://www.chem-is-

try.org/materi_kimia/instrumen_analisis/kromatografi1/kromatografi_cair_k

inerja_tinggi_hplc/, Artikel 6 Oktober 2007, diakses pada Januari 2015

pukul 20.00.

Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia Edisi ke IV. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia..

Gunawan, Gan S. 2009. Farmakologi dan Terapi edisi 5. Jakarta: Departemen

Farmakologi dan Teurapeutik FKUI.

Herlambang, Wisnu Satrio. 2014. Uji Disolusi Natrium Diklofenak Pada Sampel

Obat Tablet Secara KCKT. Bogor: Pusdiklat Industri Akademi Kimia

Analisis.

69

Jatnika, Eka Dian. 2007. Pembuatan Perangkat Lunak Sistem Validasi Metode

Analisis Kromatografi. Bandung. Institut Teknologi Bandung.

Joenoes, Nanizar Zaman. 2001. Ars Prescribendi (Resep Yang Rasional).

Surabaya : Airlangga University Press.

Johnson, Edward L., dan Robert Stevenson. 1991. Dasar Kromatografi Cair.

Bandung: Penerbit ITB

Katzung, Bertram G. 2004. Farmakologi Dasar dan Klinik . Jakarta : Penerbit

Buku Kedokteran EGC.

Laboratorium Product Development PT Merck Tbk. 2014. Protokol Validasi

Disolusi Natrium Diklofenak secara KCKT. Jakarta: PT Merck Tbk.

Lachman, L., Lieberman, H. A. and Kanig, J.L. 2008, Teori dan Praktek Farmasi

Industri edisi 3 Jilid 2, diterjemahkan dari bahasa Inggris oleh Suyatmi, S.

Jakarta: Universitas Indonesia Press.

Moffat, A.C., dkk. 2005. Clarke„s Analysis Of Drug And Poisons. Thirth edition

London: Pharmaceutical Press.

Neal, M. J. 2006. Farmakologi Medis (70 -71). Jakarta: Erlangga.

Nurbandini, Amalia. 2014. Laporan Prakerin di PT Merck Tbk. Bogor :

Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri SMK SMAK Bogor

Sari, Bina Lohita. 2011. Modul Analisis Kimia Farmasi Praktikum Kimia Terpadu

3. Bogor: Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri Sekolah

Menengah Analis Kimia Bogor.

Sweetman, S.C. 2009. Martindale The Complete Drug Reference 36. London:

Pharmaceutical Press.

Snyder, L.R., Kirkland, J.J., dan Glajch, J.L. 1997. Practical HPLC Method

Development. Edisi 2. New York: A John Willey & Sons Inc.

Syamsuni. 2006. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi. Jakarta : Penerbit

Buku Kedokteran EGC.

70

Syukri, Y. 2002. Biofarmasetika. Jogjakarta: UII Press.

Tjay, T. H., dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan,

dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi ke VI. Jakarta: PT Elex Media

Komputindo .

United States Pharmacopeia Convention. 2007. United States Pharmacopoeia

National Formulary, USP 30/NF 25. Twinbrook Parkway: United States

Pharmacopeial Convention.

United States Pharmacopeia Convention. 2011. United StatesPharmacopoeia

National Formulary, USP 34 /NF 29. Rockville USA: United

States Pharmacopeial Convention.

Voight, Rudolf. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Yogyakarta : Gadjah

Mada University Press.

Wati, Wulan Sadat. 2012. Laporan Prakerin di PT Taisho Pharmaceutical

Indonesia Tbk. Bogor : Kementerian Perindustrian Pusdiklat Industri SMK

SMAK Bogor.

71

LAMPIRAN

Lampiran 1 Rumus Perhitungan laju disolusi

Tahap asam:

% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050

x 22

9x

Px

mx

Astd

Aspl

a

a

Tahap buffer:

% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050

4 x

Px

mx

Astd

Aspl

b

b

Keterangan:

Aspla : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap asam

Astda : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap

asam

Asplb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap

buffer

Astdb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap

buffer

m : Bobot standar Na Diklofenak (mg)

P : Kemurnian standar Na Diklofenak

72

Lampiran 2 Rumus Perhitungan laju disolusi untuk uji akurasi

Tahap asam:

% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 10050

x 318W

65 x

Px

mx

Astd

Aspl

a

a

Tahap buffer:

% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 100

x 25W

xP

xm

xAstd

Aspl

b

b

Laju Disolusi Teoritis:

% Laju Disolusi Na Diklofenak = %100 50

7,301

Vs x Csxx

Perolehan Kembali:

% Perolehan Kembali = %100 Teoritis DisolusiLaju

Aktual DisolusiLaju x

Keterangan:

Aspla : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap asam

Astda : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap

asam

Asplb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram sampel tahap

buffer

Astdb : Luas area puncak Na Diklofenak pada kromatogram standar tahap

buffer

m : Bobot standar Na Diklofenak (mg)

W : Bobot sampel (placebo) (mg)

ω : Bobot rata-rata tablet (543 mg)

Cs : Konsentrasi spike solution (mg / mL)

Vs : Volume Ispike solution yang ditambahkan (mL)

73

P : Kemurnian Standar Na Diklofenak (%)

74

Lampiran 3 Kromatogram Uji Spesifisitas

Kromatogram Fase Gerak

Kromatogram Blanko tahap asam

Kromatogram Blanko tahap buffer

Kromatogram Larutan Plasebo A tahap asam

75

Kromatogram Larutan Plasebo A tahap buffer

Kromatogram Larutan Plasebo B tahap asam

Kromatogram Larutan Plasebo B tahap buffer

Kromatogram Larutan Standar tahap asam

76

Kromatogram Larutan Standar tahap buffer

Kromatogram Larutan Sampel NP1 tahap asam

Kromatogram Larutan Sampel NP1 tahap buffer

Kromatogram Larutan Sampel NP2 tahap asam

77

Kromatogram Larutan Sampel NP2 tahap buffer

78

Lampiran 4 Tabel Uji Linearitas

Tahap Asam

Nama Sampel Tingkat Konsentrasi

(%) Laju disolusi (%) Luas Puncak (AU)

L1-1 1% 0.2220 1125

L1-2 1% 0.2220 1761

L2-1 2% 0.4440 3628

L2-2 2% 0.4440 3610

L3-1 5% 1.1100 8858

L3-2 5% 1.1100 8581

L4-1 10% 2.2200 20495

L4-2 10% 2.2200 20117

L5-1 25% 5.5500 54900

L5-2 25% 5.5500 54734

Ext 100% 22.2000 222122

R2 1.000

R (≥ 0.995) 1.000

Y Intersep -1446.0

Luas Puncak pada konsentrasi 100% 222122

%Y Intersep (≤ 5.0% Luas Puncak Kons. 100%) -0.7%

TahapBuffer

Nama Sampel Tingkat Konsentrasi

(%) Laju disolusi (%) Luas Puncak (AU)

L1-1 30% 6.6768 64530

L1-2 30% 6.6768 64489

L2-1 60% 13.3537 130426

L2-2 60% 13.3537 131294

L3-1 100% 22.2561 218486

L3-2 100% 22.2561 219493

L4-1 110% 24.4817 240618

L4-2 110% 24.4817 240066

L5-1 120% 26.7073 263896

L5-2 120% 26.7073 262287

R2 1.000

R (≥ 0.995) 1.000

Y Intersep -1474.5

Luas Puncak pada konsentrasi 100% 218990

%Y Intersep (≤ 5.0% Luas Puncak Kons. 100%) -0.7%

79

Lampiran 5 Tabel Hasil Uji Ketegaran

Uji Stabilitas Larutan Standar

Larutan Standar (Tahap Asam)

Nama Sampel Waktu Analisis

(jam)

Tingkat Konsentrasi

(%)

Luas Puncak (IU)

% Deviasi

Ket.

SDRa-1 0 100.00 20028 - -

SDRa-2 4 100.00 20341 1.56%

SDRa-3 8 100.00 20134 0.53% -

SDRa-4 12 100.00 19929 -0.49% -

SDRa-5 24 100.00 20361 1.66% Maks

SDRa-6 48 100.00 20069 0.20% -

SDRa-7 72 100.00 20069 0.20% -

Deviasi Maksimal 1.7%

Larutan Standar (Tahap Buffer)

Nama Sampel Waktu Analisis

(jam)

Tingkat Konsentrasi

(%)

Luas Puncak (IU)

% Deviasi

Ket.

SDRb-1 0 100.00 225840 - -

SDRb-2 4 100.00 224909 -0.41%

SDRb-3 8 100.00 225854 0.01% -

SDRb-4 12 100.00 226229 0.17% -

SDRb-5 24 100.00 223596 -0.99% Maks

SDRb-6 48 100.00 225449 -0.17% -

SDRb-7 72 100.00 224143 -0.75% -

Deviasi Maksimal 0.8%

Uji Stabilitas Larutan Sampel

Larutan Standar (Tahap Asam)

Nama Sampel Waktu Analisis

(jam)

Tingkat Konsentrasi

(%)

Laju Disolusi (%)

% Deviasi

Ket.

SPRa-1 0 100.00 0 - -

SPRa-2 4 100.00 0 0.00%

SPRa-3 8 100.00 0 0.00% -

SPRa-4 12 100.00 0 0.00% -

SPRa-5 24 100.00 0 0.00% -

SPRa-6 48 100.00 0 0.00% -

SPRa-7 72 100.00 0 0.00% -

Deviasi Maksimal 0.00%

80

Larutan Standar (Tahap Buffer)

Nama Sampel Waktu Analisis

(jam)

Tingkat Konsentrasi

(%)

Total Laju Disolusi (%)

% Deviasi

Ket.

SPRb-1 0 100.00 93.0218 - -

SPRb-2 4 100.00 93.3620 -

SPRb-3 8 100.00 93.4462 0.37% -

SPRb-4 12 100.00 93.4645 0.46% -

SPRb-5 24 100.00 91.3521 0.48% -

SPRb-6 48 100.00 91.6344 -1.79% maks

SPRb-7 72 100.00 91.8611 -1.49% -

Deviasi Maksimal 1.8%

81

Uji Variasi Metode Parameter KCKT

Variasi Laju Alir (0,95 ml/mnt)

Tahap Asam

Sampel

Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 0.95 ml/mnt

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

Tahap Buffer

Sampel

Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 0.95 ml/mnt

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 95.5191

1-2 96.3946 1-2 96.1635

2-1 99.3434 2-1 99.3936

2-2 99.8921 2-2 99.1294

3-1 97.1325 3-1 97.1689

3-2 97.8900 3-2 97.5980

4-1 96.3642 4-1 95.8502

4-2 96.1272 4-2 96.0386

5-1 92.0833 5-1 92.6213

5-2 92.6428 5-2 92.4628

6-1 89.4110 6-1 89.0251

6-2 89.3604 6-2 89.3128

Rata-rata masing-masing 95.2267 95.0236

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

3.7% 3.6%

82

Rata-rata keseluruhan 95.1252

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.6%

83

Variasi Laju Alir (1,05 ml/mnt)

Tahap Asam

Sampel

Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 1.05 ml/mnt

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

TahapBuffer

Sampel

Laju Alir 1.0 ml/mnt Laju Alir 1.05 ml/mnt

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 95.8639

1-2 96.3946 1-2 95.3051

2-1 99.3434 2-1 99.0395

2-2 99.8921 2-2 98.3997

3-1 97.1325 3-1 96.9362

3-2 97.8900 3-2 97.4941

4-1 96.3642 4-1 95.1477

4-2 96.1272 4-2 95.3084

5-1 92.0833 5-1 92.1865

5-2 92.6428 5-2 92.1653

6-1 89.4110 6-1 88.8432

6-2 89.3604 6-2 89.2540

Rata-rata masing-masing 95.2267 94.6620

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

3.7% 3.5%

Rata-rata keseluruhan 94.9443

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.6%

84

Variasi pH Larutan A (pH 2.45)

Tahap Asam

Sampel

pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.455

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

Tahap Buffer

Sampel

pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.45

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 97.7576

1-2 96.3946 1-2 97.0139

2-1 99.3434 2-1 95.7310

2-2 99.8921 2-2 96.0277

3-1 97.1325 3-1 91.7292

3-2 97.8900 3-2 91.6186

4-1 96.3642 4-1 97.6756

4-2 96.1272 4-2 98.0526

5-1 92.0833 5-1 93.6061

5-2 92.6428 5-2 93.8766

6-1 89.4110 6-1 101.8082

6-2 89.3604 6-2 101.9391

Rata-rata masing-masing 95.2267 96.4030

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

3.7% 3.5%

Rata-rata keseluruhan 95.8149

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.6%

85

Variasi pH Larutan A (pH 2.55)

Tahap Asam

Sampel

pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.55

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

Tahap Buffer

Sampel

pH larutan A 2.50 pH larutan A 2.55

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 97.8223

1-2 96.3946 1-2 98.2972

2-1 99.3434 2-1 96.4523

2-2 99.8921 2-2 96.3261

3-1 97.1325 3-1 91.7631

3-2 97.8900 3-2 92.2999

4-1 96.3642 4-1 98.2743

4-2 96.1272 4-2 98.3651

5-1 92.0833 5-1 93.9379

5-2 92.6428 5-2 93.3850

6-1 89.4110 6-1 101.2420

6-2 89.3604 6-2 101.1832

Rata-rata masing-masing 95.2267 96.6124

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

3.7% 3.3%

Rata-rata keseluruhan 95.9195

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 3.5%

86

Variasi Komposisi Fase Gerak (MeOH : Lar. A 693 : 297)

Tahap Asam

Sampel

Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (693 : 297)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

Tahap Buffer

Sampel

Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (693 : 297)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 95.9276

1-2 96.3946 1-2 95.8774

2-1 99.3434 2-1 99.2692

2-2 99.8921 2-2 98.4625

3-1 97.1325 3-1 97.5320

3-2 97.8900 3-2 98.0187

4-1 96.3642 4-1 95.5904

4-2 96.1272 4-2 96.1467

5-1 92.0833 5-1 91.7661

5-2 92.6428 5-2 91.9984

6-1 89.4110 6-1 88.3431

6-2 89.3604 6-2 88.2391

Rata-rata masing-masing 95.2267 94.7643

RSD masing-masing (≤ 5.0%) 3.7% 4.0%

Rata-rata keseluruhan 94.9955

RSD Keseluruhan (≤ 5.0%) 3.8%

87

Variasi Komposisi Fase Gerak (MeOH : Lar. A 707 : 303)

Tahap Asam

Sampel

Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (707 : 303)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 0.0000 1-1 0.0000

1-2 0.0000 1-2 0.0000

2-1 0.0000 2-1 0.0000

2-2 0.0000 2-2 0.0000

3-1 0.0000 3-1 0.0000

3-2 0.0000 3-2 0.0000

4-1 0.0000 4-1 0.0000

4-2 0.0000 4-2 0.0000

5-1 0.0000 5-1 0.0000

5-2 0.0000 5-2 0.0000

6-1 0.0000 6-1 0.0000

6-2 0.0000 6-2 0.0000

Rata-rata masing-masing 0.0000 0.0000

RSD masing-masing (≤ 10.0%)

0.0% 0.0%

Rata-rata keseluruhan 0.0000

RSD Keseluruhan (≤ 10.0%) 0.0%

Tahap Buffer

Sampel

Komposisi FG (700 : 300) Komposisi FG (707 : 303)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

Repl. Anal.- Injeksi

Total Laju Disolusi (%)

NP1

1-1 96.0789 1-1 95.4308

1-2 96.3946 1-2 95.6733

2-1 99.3434 2-1 98.3363

2-2 99.8921 2-2 98.8194

3-1 97.1325 3-1 97.0851

3-2 97.8900 3-2 97.0392

4-1 96.3642 4-1 95.5518

4-2 96.1272 4-2 95.6715

5-1 92.0833 5-1 92.1343

5-2 92.6428 5-2 92.1402

6-1 89.4110 6-1 88.5081

6-2 89.3604 6-2 88.7448

Rata-rata masing-masing 95.2267 94.5946

RSD masing-masing (≤ 5.0%) 3.7% 3.7%

Rata-rata keseluruhan 94.9106

RSD Keseluruhan (≤ 5.0%) 3.6%

88