pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga merah …repository.ub.ac.id/7472/1/khoirus...

i

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK KULIT BUAH

NAGA MERAH (HYLOCEREUS POLYRIZUS) PADA

TIKUS PUTIH (RATTUS NORVEGICUS) YANG

DIINDUKSI DIAZINON TERHADAP KADAR

MALONDIALDEHIDA (MDA) DAN

GAMBARAN HISTOPATOLOGI

LAMBUNG

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan

Oleh:

Khoirus Viestaria

135130101111035

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTERAN HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2017

ii

HALAMAN PENGESAHAN

Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus Polyrizus)

Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Yang Diinduksi DiazinonTerhadap

Kadar Malondialdehida (MDA) dan Gambaran

Histopatologi Lambung

Oleh:

Khoirus Viestaria

135130101111035

Setelah dipertahankan di depan Majelis Penguji

Pada tanggal 14 Desember 2017

dan dinyatakan memenuhi syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan

Pembimbing I Pembimbing II

Prof. Dr. Ir. Chanif Mahdi, MS drh. Viski Fitri Hendrawan, M. Vet

NIP. 19520412 198002 1 001

NIK. 19880518 201504 1 003

Mengetahui,

Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES

NIP. 19600903 198802 2 001

iii

Lembar Pernyataan

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Khoirus Viestaria

NIM : 135130101111035

Program Studi : Kedokteran Hewan

Penulis Skripsi berjudul:

Efek pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) pada tikus

putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi Diazinoon terhadap kadar

Malondialdehida dan Histopatologi lambung.

Dengan ini saya menyatakan bahwa:

1. Isi dari skripsi yang saya buat adalah benar-benar karya saya sendiri dan tidak menjiplak karya orang lain, selain nama-nama yang termaksud di isi

dan tertulis di daftar pustaka dalam skripsi ini.

2. Apabila dikemudian hari ternyata skripsi yang saya tulis terbukti hasil jiplakan, maka saya akan bersedia menanggung resiko yang akan saya

terima.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan segala kesadaran.

Malang, 14 Desember 2017

Khoirus Viestaria

135130101111035

iv

Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus Polyrizus)

Pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Yang Diinduksi Diazinon Terhadap

Kadar Malondialdehida (MDA) dan Gambaran

Histopatologi Lambung

Abstrak

Diazinon merupakan insektisida jenis organofosfat yang banyak digunakan

pada sebagian besar sektor pertanian. Hasil metabolisme senyawa organofosfat ini

dapat meningkatkan Reactive Oxygen Species (ROS) dalam tubuh, sehingga akan

menyebabkan komplikasi ke berbagai organ, termasuk lambung. Ekstrak kulit

buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) memiliki aktivitas antioksidan yang

tinggi dalam menurunkan ROS pada kasus keracunan diazinon. Penelitian ini

bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak kulit buah naga merah dalam

menurunkan kadar MDA dan memperbaiki kerusakan gambaran histopatologi

lambung tikus yang diinduksi diazinon. Penelitian ini menggunakan tikus putih

(Rattus norvegicus), jantan strain Wistar berumur 8-12 minggu, berat badan rata-

rata 150 g sebagai hewan coba sebanyak 20 ekor. Terdapat 5 kelompok perlakuan,

yaitu kelompok K(-), K(+), P1, P2, dan P3. Dosis diazinon yang digunakan

sebanyak 40 mg/kg BB per-oral selama 5 hari berturut-turut. Ekstrak kulit buah

naga merah (Hylocereus polyrhizus) yang diberikan dengan dosis bertingkat yaitu

150 mg/150 g BB, 200 mg/150 g BB, dan 250 mg/150 g BB per-oral, selama 14

hari. Data kadar MDA dianalisis kuantitatif dengan ANOVA menggunakan

program komputer SPSS version 22 for Windows serta dilanjutkan dengan uji

Beda Nyata Jujur (BNJ) α = 5% dan gambaran histopatologi lambung dianalisis

secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan pemberian ekstrak kulit buah

naga merah (Hylocereus polyrhizus) dosis 150 mg/150g BB secara sangat

signifikan (p

v

Effect of Extract Red Pitaya peel (Hylocereus Polyrizus) In Rat (Rattus

norvegicus) The Induced Diazinon Against Malondialdehida

levels and Histopathology of Gastric

Abstract

Diazinon is an organophosphate type insecticide widely used in most

agricultural sectors. The metabolic results of these organophosphate compounds

can increase Reactive Oxygen Species (ROS) in the body, thus causing

complications to the various organs of one of the stomach. Red pitaya peel extract

has high antioxidant activity in lowering ROS, in cases of diazinon poisoning.

This study aims to determine the effectiveness of Red-pitaya peel extract in

reducing levels of Malondialdehyde (MDA) and repair histopathological damage

to rat induced diazinone. This study used white rats (Rattus norvegicus) male

Wistar strain aged 8-12weeks, average weight 150 g as a trial animal of 20 tails.

There were 5 treatment groups, which were K (-), K (+), P1, P2, and P3. The dose

of diazinone used was 40 mg / kg BW with oral sonde for 5 consecutive days. Red

pitaya peel (Hylocereus polyrhizus) extract given with a multilevel dose of 150

mg/150 g BW, 200/150 g BW mg and 250 mg/150 g BW, for 14 days. MDA

levels were measured using the Thiobarbituric acid (TBA) test and gastric

histopathology features using Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The MDA

content was analyzed quantitatively by ANOVA using SPSS version 22 computer

program for Windows and continued with honestly significant difference (HSD)

test (α = 5%) and gastric histopathology were analyzed descriptively. The results

showed that the extract of red pitaya peel (Hylocereus polyrhizus) dose 150

mg/150 g BW significantly (p

vi

KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT atas diberikannya nikmat, limpahan

rahmat, serta hidayah-Nya sehingga penulis mampu menyelesaikan skripsi ini

yang berjudul “Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus

polyrizus) pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) yang Diindusuksi Diazinon

Terhadap Kadar Malondialdehida (MDA) dan Gambaran Histopatologi

Lambung”. Selama penelitian dan penyusunan skripsi ini, halangan dan rintangan

terus menerus muncul pada diri penulis, sehingga dalam penyelesaian tulisan ini

melibatkan banyak pihak. Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan

terimakasih banyak kepada:

1. Prof. Dr. Ir. Chanif Mahdi, MS., selaku pembimbing I tugas akhir ini atas

segala bantuan, kesempatan, nasihat, bimbingan, dan arahan yang

diberikan kepada penulis.

2. drh. Viski Fitri Hendrawan, M. Vet., selaku pembimbing II tugas akhir ini

yang telah banyak memberikan bimbingan, nasehat, arahan, serta saran

kepada penulis.

3. Drh. Desi Wulansari, M. Vet., selaku dosen penguji I atas saran yang telah

diberikan.

4. Drh. Rahadi Swastomo, selaku dosen penguji II atas saran yang telah

diberikan.

5. Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES., selaku Dekan Fakultas Kedokteran

Hewan Universitas Brawijaya atas kepemimpinan dan dukungan demi

kemajuan FKH UB.

6. Secara khusus penulis ingin mengucapkan terimakasih banyak kepada

Bapak Choirur Rofiq dan Ibu Rosidatul Islamiah, Mbak Safitri Dian

Novita, serta keluarga besar atas doa, kasih sayang, semangat dan

dukungan dalam bentuk moril maupun materil kepada penulis selama

menempuh pendidikan di FKH UB.

7. Teman dalam penelitian, Amilia Yunita, Previana Rahmawati, Diah wahyu

Atika Suri, dan Fega Okta P.

vii

8. Sahabat di Kota Rantau, Ristanti P, Tia Sundari, Mentari Putri A, Luh

Putu S, Novita S, Nurma A, Eka, Tri indah L dan Dina Sahmiranda atas

bantuan motivasi, kebersamaan, keluarga, serta memaknai kehidupan di

perantauan.

9. Seluruh staf dan karyawan FKH UB yang telah membantu proses

administrasi dalam membuat tugas akhir.

10. Keluarga besar B-Tis dan CAVITAS sebagai keluarga baru selama

menempuh studi di FKH UB.

Penulis sangat menyadari bahwa skripsi ini masih banyak

kekurangan. Oleh karena itu, penulis sangat mengharapkan saran maupun

kritik yang bersifat membangun atas tulisan ini. Penulis sangat berharap

skripsi ini akan banyak bermanfaat baik bagi penulis pribadi maupun

pembaca.

Malang, 14 Desember 2017

Khoirus Viestaria

135130101111035

viii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................... ii

LEMBAR PERNYATAAN ............................................................................. iii

ABSTRAK ....................................................................................................... iv

ABSTACT ........................................................................................................ v

KATA PENGANTAR ..................................................................................... vi

DAFTAR ISI ................................................................................................. viii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xi

DAFTAR TABEL .......................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xiii

DAFTAR ISTILAH DAN SINGKATAN ...................................................... xiv

BAB 1. PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1 Latar Belakang .................................................................................. 5

1.2 Rumusan Masalah ............................................................................. 3

1.3 Batasan Masalah ............................................................................... 4

1.4 Tujuan Penelitian .............................................................................. 5

1.5 Manfaat Penelitian ............................................................................ 5

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 6

2.1 Tikus Putih (Rattus norvegicus) ...................................................... 6

2.2 Diazinon ........................................................................................ 7

2.2.1 Pengaruh Diazinon ............................................................... 9

2.3 Lambung ..................................................................................... 10

2.3.1 Anatomi Lambung .............................................................. 10

2.3.2 Histologi Lambung ............................................................. 11

2.4 Radikal Bebas ............................................................................. 12

2.5 Malondialdehida (MDA) ............................................................. 12

2.6 Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) .......................... 14

ix

BAB 3. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN ........... 17

3.1 Kerangka Konseptual ...................................................................... 17

3.2 Hipotesis Penelitian ........................................................................ 20

BAB 4. METODE PENELITIAN................................................................... 21

4.1 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 21

4.2 Populasi dan Sampel ....................................................................... 21

4.3 Rancangan Penelitian ...................................................................... 21

4.4 Penetapan Jumlah Perlakuan dan Ulangan ...................................... 23

4.5 Variabel Penelitian .......................................................................... 23

4.6 Alat dan Bahan ............................................................................... 24

4.6.1 Alat ...................................................................................... 24

4.6.2 Bahan .................................................................................... 24

4.7 Tahapan Penelitian .......................................................................... 25

4.7.1 Persiapan Hewan Coba .......................................................... 25

4.7.2 Pembuatan Ekstrak Kulit

Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) ............................ 25

4.7.3 Induksi Diazinon pada Tikus Putih

(Rattus norvegicus) ................................................................ 26

4.7.4 Terapi Ekstrak Kulit Buah Naga Merah

(Hylocereus polyrhizus) ........................................................ 26

4.7.5 Pengambilan Organ Lambung ................................................ 27

4.7.6 Pengukuran Kadar Malondialdehida (MDA) Lambung .......... 27

4.7.7 Pembuatan dan Pengamatan Preparat

Histopatologi Lambung ......................................................... 28

4.7.8 Analisis Data ......................................................................... 30

BAB 5. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 31

5.1 Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah

Naga Merah (Hylocereus Polyrhizus) terhadap

Kadar Malondialdehida (MDA) Lambung..................................... 31

5.2 Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah

x

Naga Merah (Hylocereus Polyrhizus) terhadap

Gambaran Histopatologi Lambung................................................ 34

BAB VI. PENUTUP ........................................................................................ 41

6.1 Kesimpulan .................................................................................. 41

6.2 Saran ............................................................................................ 41

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 42

LAMPIRAN ................................................................................................... 45

xi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Tikus Putih (Rattus norvegicus) strain Wistar ................................. 7

Gambar 2.2 Struktur Kimia Diazinon ............................................................... 8

Gambar 2.3 Anatomi Lambung ...................................................................... 10

Gambar 2.4 Histologi Lambung ...................................................................... 12

Gambar 2.5 Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) ................................. 15

Gambar 2.6 Struktur Kimia Antosianin ........................................................... 16

Gambar 3.1 Kerangka Konseptual Penelitian ................................................... 17

Gambar 5.1 Gambaran histopatologi lambung tikus

putih (Rattus norvegicus) kelompok K(-)

dengan pewarnaan HE perbesaran 100x dan 400x......................... 35


putih (Rattus norvegicus) kelompok K(+)



putih (Rattus norvegicus) kelompok P1








xii

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

Tabel 2.1 Kandungan Ekstrak Kulit Buah

Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) ................................................ 16

Tabel 4.1 Rancangan Kelompok Penelitian ...................................................... 22

Tabel 5.1 Hasil Pengukuran Kadar Malondialdehida (MDA)

Lambung Setiap Kelompok Perlakuan .............................................. 31

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1 Kerangka Operasional Penelitian ................................................. 45

Lampiran 2 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah

Naga Merah (Hylocereus polyrhizus ............................................. 46

Lampiran 3 Perhitungan Dosis Diazinon ......................................................... 47

Lampiran 4 Perhitungan Dosis Ekstrak Kulit

Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus ................................... 48

Lampiran 5 Prosedur Pengukuran Malondialdehida (MDA) Lambung ............ 50

Lampiran 6 Prosedur Pembuatan Preparat Histopatologi Lambung ................. 51

Lampiran 7 Keterangan Kelaikan Etik ............................................................. 53

Lampiran 8 Surat Keterangan Identifikasi Tanaman ........................................ 54

Lampiran 9 Hasil Uji LC-MS Kulit Buah Naga

Merah (Hylocereus plyrhizus) ....................................................... 55

Lampiran 10 Hasil Pengukuran Kadar Malondialdehida (MDA) Lambung ...... 56

Lampiran 11 Analisis Statistika Malondialdehida (MDA) Lambung ................ 57

xiv

DAFTAR ISTILAH DAN SINGKATAN

Simbol/ Singkatan Keterangan

µl : mikroliter

µg : mikrogram

ANOVA : Analysis of Variance

ATP : Adenosina trifosfat

BB : Berat Badan

BHC : Benzane hexacloride

BMR : Batas Maksimum Residu

DNA : Deoxyribose-nucleic acid

EC : Emulsifiable consentrates

gr : Gram

GRP : Gastrin releasing peptide

HE : Hematoxylin Eosin

HCL : Hydrochloric Acid

K(-) : Kontrol Negatif

K(+) : Kontrol Positif

KEP-UB : Komisi Etik Penelitian

Universitas Brawijaya

Kg : Kilogram

L : Liter

LD : Lethal Dose

MDA : Malondialdehida

mg : Miligram

ml : Mililiter

mm : Milimeter

N : Natrium

NaCL : Natrium Klorida

P1 : Perlakuan satu

P2 : Perlakuan dua

P3 : Perlakuan tiga

ppm : Part per Million

PUFA : Polyunsaturated fatty acid

RAL : Rancangan Acak Lengkap

ROS : Reactive Oxygen

SSP : Sistem Syaraf Pusat

TBA : Thiobarbiturat acid

TCA : Trichloroacetic acid

UPHP : Unit Pengembangan Hewan

Percobaan.

1

BAB 1.PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pestisida saat ini menjadi ancaman besar bagi masyarakat Indonesia,

dimana penggunaan hampir sebagian besar pada sektor pertanian yaitu sebagai

pengendali hama seperti wereng, belalang, semut, lalat, ulat dan serangga lain.

Pada tahun 2010 World Health Organization (WHO) menyatakan bahwa sekitar

5000-10.000 orang keracunan pestisida dan akan terus meningkat, terutama pada

negara-negara berkembang, seperti negara Kamboja, pada tahun 2013 telah

dilaporkan sebanyak 88% petani positif keracunan akut pestisida. Di Indonesia

telah dilaporkan sekitar 12.000 kasus kematian akibat keracunan pestisida setiap

tahunnya (Zulmi, 2016).

Berdasarkan target organisme sasaran, pestisida dikelompokkan menjadi

tiga, yaitu herbisida, fungisida dan insektisida. Insektisida merupakan pestisida

yang seringkali digunakan untuk membasmi hama tanaman. Insektisida yang

paling sering digunakan oleh para petani adalah jenis organofosfat. Insektisida

golongan organofosfat terdiri atas sekelompok zat kimia yang memiliki struktur

dan aktivitas kimia yang bervariasi. Salah satu jenis insektisida yang sering

digunakan adalah golongan organofosfat diazinon. Pemakaian hampir selalu

digunakan pada seluruh kegiatan pertanian terutama digunakan untuk mengontrol

serangga pada dedaunan, sayuran, buah-buahan, dan tanaman pertanian lain. Efek

samping diazinon secara terus-menerus adalah dapat meninggalkan residu pada

tanaman, baik pada daun, buah, batang maupun tanah. Pada dosis tertentu dapat

meracuni manusia yang mengkonsumsi tanaman tersebut (Budiyono, 2012).

2

Keracunan organofosfat dapat menyebabkan penumpukan radikal bebas

dan stress oksidatif. Stress oksidatif akan menginduksi peroksidasi lipid,

peroksidasi lipid merupakan proses oksidasi asam tidak jenuh berantai panjang

(polyunsaturated fatty acid) pada membran sel yang menghasilkan radikal

peroksida-lipid, hidroperoksida, dan produk aldehida, misal Malondialdehida

(MDA) (Palupi dkk., 2012).

Menurut Lesmana dkk., (2013), salah satu organ pencernaan yang pertama

kali terpapar oleh diazinon yang diinduksikan secara per-oral adalah organ

lambung, ada stress oksidatif akan meningkatkan kerusakan sel pada jaringan

lambung, sehingga perlu dilakukan pengamatan histopatologi organ lambung.

Menurut Kumari dan Mirshra (2015), diazinon memiliki efek yang berbahaya

apabila terkonsumsi oleh tubuh, salah satu efek diazinon dapat dilihat pada saat

pemeriksaan histopatologi lambung adalah terjadi kerusakan epitel pada tunika

mukosa, terjadi ruptur pada tunika submukosa bahkan terkadang sampai pada

tunika muskularis, hiperemik pembuluh darah, dan tampak infiltrasi sel radang

pada tunika submukosa dan muskularis.

Saat ini pengobatan pada kasus keracunan pestisida hanya mengandalkan

obat kimia, seperti atropin sulfat, yang diketahui bahwa obat kimia tersebut juga

memiliki efek samping terhadap kesehatan manusia, antara lain peningkatan

tekanan intraokuler, midriasis, mulut kering, takikardi, konstipasi, ruam kulit,

fotofobia, dan peningkatan terhadap rangsangan susunan syaraf pusat. Hal ini

membuat masyarakat banyak yang beralih kepada pengobatan tradisional yang

dinilai aman dan tidak membahayakan bagi tubuh, karena berasal dari alam.

3

Bahan alam yang diketahui memiliki efek dalam mengatasi keracunan

organofosfat adalah sambiloto, dimana bahan ini memiliki aktivitas antioksidan

yang tinggi dalam menangkal radikal bebas dari residu pestisida yang masuk

kedalam tubuh (Wulandari, 2006).

Bahan alami lain yang memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi adalah

buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) karena memiliki aktivitas antioksidan

yang tinggi, sehingga baik untuk kesehatan apabila dikonsumsi. Menurut

beberapa penelitian aktivitas antioksidan yang tertinggi terdapat pada kulit. Kulit

buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) saat ini belum banyak dimanfaatkan,

masyarakat cenderung mengkonsumsi buahnya dan kulitnya dibuang sebagai

limbah pertanian. Dalam bidang farmakologi kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrhizus) dapat dijadikan sebagai obat herbal yang bermanfaat sebagai

antioksidan dalam menangkan radikal bebas dalam tubuh (Putri dkk., 2015).

Berdasarkan latar belakang diatas, penelitian ini dilakukan untuk

mengetahui pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus

Polyrizus) pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi organofosfat

diazinon terhadap kadar MDA dan gambaran histopatologi lambung.

1.2 Rumusan Masalah

1. Apakah pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus Polyrizus)

pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon dapat

menurunkan kadar MDA Lambung?

4

2. Apakah pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus Polyrizus)

pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon dapat

memperbaiki gambaran kerusakan histopatologi lambung?

1.3 Batasan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka penelitian ini dibatasi

pada:

1. Hewan coba yang digunakan adalah tikus putih (Rattus norvegicus) jantan,

strain Wistar, umur 8-12 minggu, dengan berat badan rata-rata 150 g.

2. Penelitian yang dilakukan sudah mendapatkan surat laik etik dari Komisi Etik

Penelitian Universitas Brawijaya (765-KEP-UB) (Lampiran ).

3. Insektisida yang digunakan untuk menginduksi tikus putih (Rattus

norvegicus) agar mendapatkan model hewan coba dengan gejala keracunan,

yaitu organofosfat diazinon, berbentuk cair yang diinduksikan per-oral

sebanyak 40mg/kg BB per hari selama 5 hari.

4. Kulit buah naga yang digunakan adalah kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrizus) segar, yang memiliki ciri daging buah berwarna merah. Dosis

ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) yang digunakan

adalah 150 mg/150 g BB, 200 mg/150 g BB, 250 mg/150 g BB diberikan per

hari per-oral selama 14 hari. Ekstrak diperoleh dari Laboratorium Materia

Medika Batu.

5. Variabel yang diamati dalam penelitian ini adalah hasil terapi ekstrak kulit

buah naga merah berdasarkan kadar MDA dan gambaran histopatologi

lambung tikus putih (Rattus norvegicus).

5

1.4 Tujuan Penelitian

1. Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrizus) pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon dapat

menurunkan kadar MDA lambung.

2. Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrizus) pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon dapat

memperbaiki gambaran kerusakan histopatologi lambung.

1.5 Manfaat Penelitian

Penelitian ini bermanfaat untuk memberikan informasi kepada masyarakat

tentang pengaruh antioksidan dalam ekstrak kulit buah naga (Hylocereus

polyrhizus) dalam menangkal radikal bebas pada kasus keracunan insektisida jenis

organofosfat, seperti diazinon.

6

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tikus Putih (Rattus norvegicus)

Hewan laboratorium merupakan hewan percobaan yang sengaja dipelihara

dan diternakkan, bertujuan untuk dijadikan sebagai hewan model dalam beberapa

penelitian agar dapat dipelajari dan dikembangkan dalam berbagai bidang ilmu

skala penelitian, serta pengamatan laboratoris. Tikus putih yang memiliki nama

ilmiah Rattus norvegicus merupakan hewan coba yang seringkali digunakan

dalam berbagai penelitian. Kriteria tikus putih (Rattus norvegicus) yang

dibutuhkan oleh peneliti sebagai syarat hewan laboratorium, yaitu kontrol pakan,

kontrol kesehatan, jenis (strain), jenis kelamin, umur, berat badan, dan silsilah

genetik. Terdapat tiga galur tikus putih (Rattus norvegicus) yang seringkali

digunakan dalam penelitian antara lain strain Wistar, Long Evans, dan Sprague

Dawley (Prasetyo dkk., 2013).

Taksonomi tikus putih adalah sebagai berikut (Robinson, 1979):

Kingdom : Animal

Filum : Chordata

Kelas : Mamalia

Ordo : Rodentia

Family : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus norvegicus

7

Gambar 2.1 Tikus Putih (Rattus norvegicus) strain

Wistar (Alexandru, 2011)

2.2 Diazinon

Diazinon merupakan salah satu insektisida golongan organofosfat yang

seringkali digunakan dalam bidang agro pertanian sebagai senyawa kimia untuk

mengendalikan hama pada semua jenis tanaman dan setiap penggunaan akan

meninggalkan residu pada tanaman tersebut. Residu diazinon dapat ditemukan

pada sayuran seperti kubis, selada, dan tomat dengan kadar residu 0,0069-0,0591

ppm. Kadar tersebut masih dibawah Batas Maksimum Residu (BMR) yang

ditetapkan yaitu 0,75 ppm. Apabila penggunaan diazinon yang terlalu sering akan

sangat berbahaya bagi tubuh karena dapat menyebabkan keracunan (Ngabekti dan

Wiwi, 2000).

Diazinon bersifat racun kontak dan racun sistemik, senyawa ini memiliki

rumus empirik C12H21N2O3PS dengan nama kimia O-Diethyl-O-(2-isopropyl-

6methyl-pyrimidine-4-yl). Senyawa diazinon termasuk dalam senyawa

thiophsphoric acid ester. Seseorang yang mengalami keracunan diazinon akan

menunjukkan gejala, seperti lemas, inkoordinasi, kelemahan anggota gerak,

dispnea, depresi, hipersalivasi, kejang, diare, tremor bahkan beberapa kasus

keracunan dapat menimbulkan kematian (Lesmana dkk., 2014).

8

Menurut Baehaki (1993), bahan aktif diazinon diperdagangkan sebagai

Diazinon®, Basminon

®, Basudin

®, Dharmazinon

®, Neocidal

®. Diazinon

memiliki struktur kimia sebagai berikut :

Gambar 2.2 Struktur Kimia Diazinon (Cox, 2000)

Menurut Baehaki (1993), insektisida diazinon dapat dipergunakan sebagai

arkarisida, merupakan racun kontak, dan racun perut. Diazinon memiliki LD50

melalui mulut tikus adalah 300-850 mg/kg, sedangkan melalui kulit tikus adalah

2.150 mg/kg. Diazinon secara umum digunakan untuk mengendalikan hama

tanaman, seperti kutu perisai daun pada anggrek Parlatoria proteu, kutu arben

Euchlora viridis, Spodoptera mauritia, Aphis tavaresii, Lamproseme indicate,

Phaedonia inclusa, Plusia chalcites, kutu kapuk kelapa Aleurodicus destructor,

Artona sp., Sexava sp., dan lain-lain. Formulasi yang diperdangangkan adalah

sebagai berikut: (1) Basminon 60EC mengandung 600 gr diazinon/L; (2) Basudin

60EC mengandung 600 gr diazinon/L; (3) Basudin 10G mengandung 10% gr

diazinon/L; (4) Diazinon 60EC mengandung 641 gr diazinon/L; (5) Diazinon 10G

mengandung 11,3 gr diazinon/I; (6) Diazinon 90ULV mengandung 960 gr

diazinon/L; (7) Dharmazinon 60EC mengandung 60% diazinon/L; (8) Dezimin

60EC mengandung 600 gr diazinon/L; (9) Neocidal 40WP mengandung 40%

9

diazinon/L. Insektisida ini khusus dikembangkan untuk mengatasi caplak

Boophilus annulatus dan B. Spirophylus pada hewan.

2.2.1 Pengaruh Diazinon

Dampak langsung dari penggunaan pestisida adalah keracunan bagi

seseorang yang secara langsung terlibat dalam penggunaan senyawa ini, baik

secara akut maupun kronis. Seseorang dengan keracunan akut akan menunjukkan

gejala, seperti sakit kepala, pusing, mual, diare, dan muntah. Pada kasus yang

berat dapat menyebabkan penderita tidak sadarkan diri, kejang-kejang, bahkan

dapat menyebabkan kematian. Keracunan kronis lebih sulit dideteksi karena tidak

langsung menimbulkan gejala klinis, akan tetapi dalam jangka waktu yang

panjang dapat menimbulkan gangguan kesehatan. Beberapa gangguan kesehatan

yang dapat ditimbulkan seperti kanker, gangguan syaraf, fungsi hati, ginjal,

gangguan pernafasan serta keguguran (Djojosumarto, 2000).

Senyawa metabolit diazinon yang terbentuk, akan meningkatkan radikal

bebas dalam tubuh karena aktivasi senyawa ini memiliki sifat yang lebih poten

dan efek yang ditimbulkan lebih toksik dalam menyebabkan kerusakan sel

dibandingkan dengan senyawa pembentuk. Senyawa ini akan menyebar ke

seluruh tubuh, sehingga mengakibatkan gangguan aliran ion melalui membran sel.

Ketidakseimbangan ion dalam sel akan meningkatkan ROS dan menginduksi

stress oksidatif yang akan berdampak pada kerusakan sel (Elsrek dan Metka,

2011).

Selain dampak pestisida bagi pengguna dan konsumen, residu dari

pertisida juga akan berdampak pada lingkungan. Bagi lingkungan umum,

10

pestisida dapat menyebabkan pencemaran lingkungan pada tanah, udara, dan air

(Djojosumarto, 2000).

2.3 Lambung

2.3.1 Anatomi Lambung

Lambung merupakan organ pertama saluran pencernaan pada cavum

abdominalis, dimana banyak terjadi aktifitas enzimatis. Lambung memiliki bentuk

seperti buah pir, pada bagian superior dibatasi oleh spihgter esophagus dan bagian

inferior dibatasi oleh sphincter pylorus. Lambung terdiri atas antrum cardia,

fundus, corpus, dan pylorus. Dinding lambung terbagi atas 4 tunika yaitu tunika

serosa yang terletak pada bagian luar, tunika muskularis propria yang terdapat

selubung serabut otot polos, tunika submukosa, dan tunika mukosa yang terletak

pada bagian dalam lambung (Saunders, 1987).

Menurut Harris (2009), tikus termasuk dalam hewan monogastrik yang

hanya memiliki satu lambung dan terletak pada sisi kiri rongga abdomen, serta

berbatasan langsung dengan hati. Lambung tikus terbagai menjadi dua bagian,

yaitu sisi glandular dan sisi lambung bagian depan non-glandular, yang keduanya

dibatasi oleh sebuah jembatan (ridge).

Gambar 2.3 Anatomi Lambung (Singh, 2014)

11

2.4.2 Histologi Lambung

Menurut Harris (2009), secara mikroskopis pada sisi lambung depan non-

glandular memiliki lipatan mukosa yang menyerupai mukosa dalam lumen dan

dilapisi oleh sel epitel skuamosa bertingkat, sedangkan pada sisi glandular

lambung (corpus) terdapat sumur lambung yang dilapisi oleh sel epitel kolumnar

selapis. Pada bagian pylorus dilapisi oleh epitel kolumnar selapis yang juga

melapisi perpanjangan sumur lambung. Lambung tikus dilapisi oleh mukosa,

selaput lendir ini dibentuk oleh sel epitel permukaan dimana akan menginvaginasi

lamina propria yang berada dibawah untuk membentuk sumur-sumur atau biasa

dikenal dengan gastric pit. Menurut Wibowo (2005), diantara sel-sel yang

membentuk gastric pits terdapat sel yang menghasilkan asam lambung (HCL),

pepsin, dan mukus. Produksi HCL dapat dirangsang oleh syaraf, pikiran atau

emosi dan makanan yang terdapat dalam mulut atau lambung.

Lamina propria lambung terdiri atas jaringan ikat, sel otot polos, dan sel

limfoid. Tunika mukosa dan submoka yang berada dibawah dipisahkan oleh otot

polos yang disebut sebagai tunika muskularis mukosa (Harris, 2009). Dinding

lambung diperkuat oleh otot yang memanjang, melintang, dan serong. Kedua jenis

otot pertama terdapat dalam semua organ pencernaan yang lain akan tetapi otot

serong hanya terdapat pada lambung. Pada bagian akhir lambung yaitu pylorus,

otot melintang terdapat lebih tebal dan berfungsi sebagai sphincter yang berfungsi

untuk menahan makan tidak langsung turun kedalam duodenum (Wibowo, 2005).

12

Gambar 2.4 Histologi Lambung

(Tortora dan Grabowski, 1996)

2.5 Radikal Bebas

Menurut Swastika (2013) radikal bebas merupakan setiap unsur yang

memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan di orbit yang paling luar,

dimana radikal bebas mempunyai sifat yang sangat reaktif, dapat mengubah

molekul menjadi radikal, dan menyebabkan kerusakan membran sel yang banyak

mengandung asam lemak tidak jenuh menjadi lipid peroksidasi yang tidak stabil

dan reaktif. Kerusakan sel atau jaringan akibat lipid peroksidasi dapat secara

langsung dan tidak langsung. Efek langsung menyebabkan kerusakan struktur

membran sel, sedangkan efek yang tidak langsung melalui produk-produk

metabolit dari lipid peroksidasi. Menurut Palupi dkk., (2012) peroksidasi lipid

merupakan proses oksidasi asam tidak jenuh berantai panjang (polyunsaturated

fatty acid) pada membran sel yang menghasilkan radikal peroksida-lipid,

hidroperoksida, dan produk aldehida yaitu MDA.

2.6 Malondialdehida (MDA)

Malondialdehida (MDA) dapat digunakan sebagi biomarker terhadap

stress oksidatif yang ditimbulkan oleh paparan radikal bebas. Radikal bebas

bersifat reaktif dan tidak stabil, sehingga sulit mengukur secara langsung, akan

13

tetapi dengan terbentuk produk peroksidasi lipid, seperti MDA secara tidak

langsung dapat digunakan sebagai marker atau tanda ada radikal bebas tersebut.

Malondialdehida merupakan produk dekomposisi dari polyunsaturated fatty acid

peroksidasi. Malondialdehida termasuk dalam senyawa dialdehida, yang

merupakan produk akhir peroksidasi lipid dalam tubuh. Malondialdehida

menunjukkan produk oksidasi asam lemak tidak jenuh sebagai akibat dari adanya

radikal bebas dalam tubuh. Paparan radikal bebas yang tinggi dan terus menerus

akan menyebabkan terjadi stress oksidatif. Peningkatan stress oksidatif ini

sebanding dengan peningkatan MDA. Stress oksidatif dapat menyebabkan

kerusakan sel yang dapat menyebabkan nekrosis pada jaringan akibat sel yang

rusak dan mengalami kematian (Swastika, 2013).

Pendapat yang sama juga dijelaskan oleh Safitri (2016), yang

menyatakan bahwa MDA dihasilkan oleh radikal bebas melalui suatu proses, yaitu

peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid merupakan suatu reaksi dimana radikal bebas

maupun oksidan menyerang lipid yang mengandung ikatan karbon ganda terutama

pada polyunsaturated fatty acid. Peroksidasi lipid melibatkan pemisahan hidrogen

dengan rantai karbon dan digantikan oleh oksigen untuk menjadikan lipid peroksil

radical dan lipid hidroperoksida. Radikal hidroksil memiliki sifat yang sangat

reaktif karena dapat menginduksi reaksi peroksidasi lipid. Hasil akhir dari

peroksidasi lipid, antara lain MDA, propanal, hexanal, dan 4-hydroxynoneal.

Lipid peroksida akan menempel pada free fatty acid, triasilgliserol, fosfolipid, dan

sterol pada membran sel. Malondialdehida merupakan senyawa yang mutagenik

bagi tubuh dan dapat berikatan kembali pada polyunsaturated fatty acid melalui

14

omega-6 dari polyunsaturated fatty acid menyebabkan fragmentasi dan membran

sel menjadi rapuh.

2.7 Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus)

Buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) berasal dari daerah yang

memilki iklim tropis kering, merupakan jenis tanaman memanjat. Buah naga

merah (Hylocereus polyrhizus) banyak dibudidayakan di Indonesia pada kota-kota

besar, seperti Pasuruan, Malang, Banyuwangi, dan Jember. Habitat asli buah ini

berasal dari negara Meksiko, Amerika Utara, dan Amerika Selatan bagian utara.

Pertumbuhan buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) dipengaruhi oleh

beberapa faktor seperti suhu, kelembaban tanah, dan curah hujan. Dalam beberapa

penelitian buah naga memiliki manfaat yang luar biasa untuk kesehatan. Hal

tersebut dikarenakan buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) mengandung

senyawa antioksidan yang tinggi, beberapa penelitian juga menyatakan bahwa

aktivitas antioksidan pada kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) lebih

tinggi dari pada daging buah. Dalam bidang farmakologi kulit buah naga merah

(Hylocereus polyrhizus) dapat dijadikan sebagai obat herbal alami yang

bermanfaat sebagai antioksidan dalam menangkan radikal bebas dalam tubuh.

Pada 1 mg/ mL kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) mampu

menghambat radikal bebas sebesar 83,48 ± 1,02%, sedangkan pada daging buah

hanya 27,45 ± 5,03%. Penelitian lain juga menyebutkan bahwa ekstrak klorofom

kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) memiliki aktivitas antioksidan

dengan nilai IC50 sebesar 43,836 µg/mL (Putri dkk., 2015).

15

Gambar 2.5 Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus) (Minh, 2014).

Dalam penelitian Putri (2015), menyatakan bahwa kulit buah naga

tergolong memiliki aktivitas antioksidan yang kuat dalam menangkal radikal

bebas, hal tersebut didasarkan pada hasil uji aktivitas antioksidan menggunakan

metode DPPH dan diperoleh nilai IC50 sebesar 96,9454 mg/L. Suatu senyawa

dapat dikatakan memiliki antioksidan yang kuat pada uji DPPH apabila

didapatkan nilai IC50 antara 50-100 ppm, aktivitas sedang apabila didapatkan nilai

IC50 antara 100-150 ppm, dan dapat dikatan senyawa tersebut memiliki aktivitas

antioksidan yang lemah apabila nilai IC50 antara 150-200 ppm. Salah satu

antioksidan yang dapat ditemukan dalam kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrhizus) adalah antosianin.

Antosianin merupakan pewarna yang paling penting dan tersebar luas

dalam tumbuhan. Antosianin memiliki pigmen berwarna kuat dan mudah larut

dalam air, sehingga menyebabkan hampir semua warna merah jambu, merah

marak, merah, ungu dan biru dalam daun bunga. Secara kimiawi antosianin dapat

dikelompokkan dalam golongan flavonoid dengan rumus molekul C15H110.

Senyawa flavonoid merupakan senyawa polar dan dapat diekstraksi dengan

pelarut yang polar juga. Adapula faktor-faktor yang dapat mempengaruhi

16

stabilitas dari senyawa antosianin meliputi PH, enzim, cahaya, oksigen, suhu,

oksidator, dan penyimpanan (Ingrath dkk., 2015).

Gambar 2.6 Struktur Kimia Antosianin (Simanjuntak dkk., 2014)

Menurut Hambali dkk., (2014), antosianin mampu menghalangi laju

kerusakan sel akibat radikal bebas dari penggunaan bahan kimia, seperti diazinon.

Menurut Lianiwati (2011), Antosianin menghambat radikal bebas dengan cara

mendonorkan atom hidrogen pada radikal bebas dan menyebabkan senyawa

tersebut menjadi stabil. Keseimbangan antara oksidan dengan antioksidan

menyebabkan tingkat stress oksidatif menjadi berkurang. Kandungan ekstrak kulit

buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) seperti ditunjukan pada Tabel 2.1

Tabel 2.1 Kandungan Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus)

Jenis Jumlah (per 100 gram)

Kandungan Gizi

Kadar Air (%)

Kadar Protein (%)

Kadar Lemak (%)

Kadar Abu (%)

Antioksidan

Aktifitas antioksidan DPPH (Nilai IC50)

Betasianin (mg/100 g)

Phenol (GAE/ 100g)

Flavonoid (katechin/ 100g)

Antosianin

4.9% ± 0.3

3.2% ± 0.2

0.7% ± 0.2

19.3% ± 0.2

94,9454 mg/L

6.8 ± 0.3 mg

19.8 ± 1.2 mg

9.0 ± 1.4 mg

58,0720 mg/L

(Saneto, 2012)

17

BAB 3. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konseptual

Gambar 3.1 Kerangka Konseptual Penelitian

Diazinon Tikus Putih

(Rattus norvegicus)

Absorbsi

Radikal Bebas

ROS

Metabolisme

Kerusakan Sel

Lambung

Stres Oksidatif

Perubahan

Gambaran

Histopatologi

Lambung

MDA

Peroksidasi Lipid

Oxono-organophosphat

Ekstrak Kulit

Buah Naga

(Hylocereus

polyrhizus)

Atom S

Dialkylphospate Leaving group

Oksidasi

Hidrolisis Antosianin

18

Keterangan :

: patomekanisme : penurunan

Senyawa organofosfat diazinon masuk kedalam tubuh melalui mulut

menuju saluran pencernaan, kemudian senyawa tersebut akan langsung

mengiritasi epitel lambung, selanjutnya diabsorbsi dan dimetabolisme dalam

hepar menjadi bentuk yang aktif. Metabolisme organofosfat terjadi dalam dua fase

yaitu fase I dan fase II. Metabolisme fase I senyawa organofosfat melibatkan

proses oksidasi dan hidrolisis. Reaksi oksidasi merupakan reaksi yang penting

dalam aktivasi thiono-organofosfat menjadi bentuk yang lebih aktif, dengan

bantuan enzim Cytochrome P450 (CYP), thiono-organofosfat dioksidasi menjadi

oxono-organofosfat dengan pengikatan atom oksigen pada atom sulfur, sehingga

terjadi intermediet yang tidak stabil. Oxono-organofosfat hasil oksidasi memiliki

toksisitas yang tinggi, sehingga akan meningkatkan radikal bebas dalam tubuh.

Sedangkan, pengaruh aktif dari atom S sebagai produk sampingan reaksi ini masih

belum diketahui. Oxono-organofosfat yang terbentuk dari reaksi oksidasi

kemudian akan dihidrolisis dengan bantuan enzim esterase A yang juga disebut

sebagai reaksi Paraoxonase (PON), kemudian terpecah menjadi dealkylphospate

dan leaving group. Dealkylphospate selanjutnya akan dikatalis oleh enzim pada

fase II yang akan menghasilkan molekul yang lebih bersifat hidrofilik, sehingga

lebih mudah diekskresikan lewat urin, sedangkan leaving grup yang terbentuk

: peningkatan

:Menghambat : Terapi

: Variabel tergantung : Variabel bebas

: Induksi

19

dapat meningkatkan ROS. Reactive Oxygen Species (ROS) yang meningkat akan

menyebabkan ketidakseimbangan antara antioksidan dan radikal bebas yang ada

didalam tubuh. Peningkatan radikal bebas yang tidak diimbangi dengan

peningkatan antioksidan akan menginduksi terjadi stress oksidatif, sehingga

berdampak pada kerusakan sel termasuk sel-sel pada lambung. Perubahan struktur

sel dapat diamati melalui pengamatan histopatologi lambung. Stress oksidatif

akan menginduksi peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid merupakan suatu reaksi

dimana radikal bebas maupun oksidan menyerang lipid yang mengandung ikatan

karbon ganda terutama pada polyunsaturated fatty acid. Peroksidasi lipid

melibatkan pemisahan hidrogen dengan rantai karbon dan digantikan oleh oksigen

untuk menjadikan lipid peroxyl radicals dan lipid hidroperoksida. Radikal

hidroksil memiliki sifat yang sangat reaktif karena dapat menginduksi reaksi

peroksidasi lipid. Salah satu hasil akhir dari peroksidasi lipid adalah MDA.

Sehingga dapat dikatakan bahwa peningkatan stress oksidatif akan sebanding

dengan peningkatan MDA.

Stress oksidatif akibat paparan organofosfat diazinon dapat diturunkan

oleh senyawa antioksidan. Buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) memiliki

aktivitas antioksidan yang tinggi sehingga baik untuk kesehatan bagi orang yang

mengkonsumsi. Ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyhizus) yang

masuk kedalam tubuh akan diabsorbsi lalu dimetabolisme dan menyebar

keseluruh tubuh. Kandungan antioksidan dalam kulit buah naga merah

(Hylocereus polyhizus) dipercaya mampu menangkal radikal bebas adalah

antosianin. Antosianin juga mampu menghalagi laju kerusakan sel akibat radikal

20

bebas dari penggunaan bahan kimia, seperti diazinon. Antosianin bekerja dalam

menangkal radikal bebas dengan cara mendonorkan atom hidrogen pada radikal

bebas yang menyebabkan senyawa tersebut menjadi stabil dan kurang reaktif.

Keseimbangan antara oksidan dengan antioksidan akan menurunkan ROS, sejalan

dengan itu terjadi penurunan stress oksidatif dan peroksidasi lipid. Penurunan

stress oksidatif akan sebanding dengan penurunan kadar MDA dalam jaringan.

Penurunan tersebut juga berpengaruh pada perbaikan histopatologi lambung.

Kandungan antioksidan yang tinggi dalam ekstrak kulit buah naga merah

(Hylocereus polyhizus) dapat menghalagi laju kerusakan sel dengan menghambat

radikal bebas tersebut, sehingga perbaikan sel dapat diamati pada gambaran

histopatologi lambung.

3.2 Hipotesis Penelitian

Hipotesis penelitin tentang pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga

merah (Hylocereus undatus) pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi

diazinon adalah :

1. Pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) dapat

menurunkan kadar MDA lambung tikus putih (Rattus norvegicus) diinduksi

diazinon.

2. Pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) dapat

memperbaiki gambaran kerusakan histopatologi lambung tikus putih (Rattus

norvegicus) yang diinduksi diazinon.

21

BAB 4. METODE PENELITIAN

4.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Mei 2017 yang bertempat

di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya

Malang sebagai tempat untuk pemeliharaan hewan coba sekaligus untuk

pengukuran kadar MDA lambung. Unit Pelaksanaan Teknis (UPT)

Material Medica Batu sebagai tempat dalam pembuatan ekstrak kulit buah

naga merah (Hylocereus polyrizus). Laboratorium Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya sebagai tempat untuk

pembuatan dan pengamatan preparat histopatologi lambung.

4.2 Populasi dan Sampel

Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih

(Rattus norvegicus) jantan, strain Wistar, umur 8-12 minggu, dengan berat

badan rata-rata 150 g.

4.3 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium dengan

desain The Post Test-Only Control Group. Penelitan ini menggunakan

Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan membagi kelompok hewan coba

menjadi 5 kelompok perlakuan, sehingga setiap kelompok perlakuan

terdiri dari 4 ekor hewan coba, yaitu K(-), K(+), P1, P2 dan P3. K(-) atau

kelempok kontrol negatif, yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) yang tidak

diberikan perlakuan apapun, hanya diberikan pakan dan minum ad-

libitum. K(+) atau kelompok kontrol positif, yaitu tikus putih (Rattus

22

norvegicus) yang hanya diinduksi diazinon dengan dosis 40mg/kgBB per-

hari per-oral selama 5 hari. P(1) atau kelompok perlakuan 1, yaitu tikus

putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon 40 mg/kgBB per-hari

per-oral selama 5 hari dan diterapi menggunakan ekstrak kulit buah naga

merah (Hylocereus polyrhizus) dengan dosis 150 mg/150 g BB per-hari

per-oral selama 14 hari. P(2) atau kelompok perlakuan 2, yaitu tikus putih

(Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon 40 mg/kgBB per-hari per-

oral selama 5 hari dan diterapi dengan ekstrak kulit buah naga merah

(Hylocereus polyrhizus) dengan dosis 200 mg/150 g BB per-hari per-oral

selama 14 hari. P(3) atau kelompok perlakuan 3, yaitu tikus putih (Rattus

norvegicus) yang diinduksi diazinon 40 mg/kgBB per-hari per-oral selama

5 hari dan diterapi dengan ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrhizus) dengan dosis 250 mg/150 g BB per-hari per-oral selama 14

hari.

Tabel 4.1 Rancangan Kelompok Penelitian

Kelompok Perlakuan Perlakuan

Kelompok K(-) Tidak diberikan perlakuan apapun

Kelompok K(+) Diazinon 40 mg/kg BB

Kelompok P(1) Diazinon 40 mg/kg BB + ekstrak kulit buah

naga merah (Hylocereus polyrhizus)

150 mg/150 g BB


23


200 mg/150 g BB



250 mg/150 g BB

4.4 Penetapan Jumlah Perlakuan dan Ulangan

Penelitian ini meggunakan hewan coba berupa tikus putih (Rattus

norvegicus) jantan, strain Wistar umur 8-10 minggu, berat badan rata-rata 150

gram. Hewan coba dibagi menjadi 5 kelompok dan estimasi besar sampel

dihitung berdasarkan rumus sebagai berikut (Kusrinigrum, 2008):

T (n-1) ≥ 15

5 (n-1) ≥ 15

5n-5 ≥ 15

5n ≥ 15

n ≥ 15

Berdasarkan perhitungan diatas, maka untuk 5 kelompok perlakuan

kelompok diperlukan ulangan minimal 4 kali dalam setiap kelompok dan

hewan coba yang diperlukan sebanyak 20 ekor.

4.5 Variabel Penelitian

Adapun variabel dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :

Variabel bebas : Dosis induksi diazinon dan dosis terapi ekstrak

kulit buah naga merah (Hylocereus Polyrizus).

Keterangan :

T = jumLah kelompok hewan

perlakuan

N = jumLah ulangan yang diperlukan

24

Variabel terikat : Kadar MDA dan gambaran histopatologi lambung

tikus putih (Rattus norvegicus).

Variabel kontrol : Tikus putih (Rattus norvegicus) jantan, strain

Wistar, umur, berat badan, suhu dan kelembapan

kandang serta pakan dan air minum.

4.6 Alat dan Bahan

4.6.1 Alat

Alat yang digunakan untuk pemeliharan hewan coba dalam penelitian ini

meliputi, kandang, botol minum, dan tempat makan, serta disposable syringe

untuk melakukan sonde. Pada pembuatan ekstrak alat yang digunakan meliputi

blander, timbangan digital, gelas ukur, mikropipet, dan evaporator. Pada saat

pengambilan organ alat yang digunakan meliputi pinset, scalpel, blade, jarum

pentul, gunting, dan styrofoam. Pada saat pengukuran kadar MDA alat digunakan

meliputi, microtube, mortir, vortex, water bath, tabung eppendorf, dan

spektrofotometer. Pada pembuatan preparat HE alat yang digunakan meliputi,

gelas objek, cover glass, lemari pendingin, mikrotom dan mikroskop cahaya.

4.6.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih (Rattus

norvegicus) strain Wistar jantan sebagai hewan coba, pakan dan minum PDAM

untuk pemeliharan hewan coba. Bahan yang digunakan untuk induksi hewan coba

agar keracunan digunakan senyawa organofosfat diazinon 600 EC. Pada

pembuatan ekstrak untuk terapi keracunan, bahan yang digunakan adalah kulit

buah naga merah (Hylocereus polyrizus), HCL dan etanol 96%. Pada pengukuran

25

kadar MDA bahan yang digunakan meliputi organ lambung, HCL 1%, Na-Thiol,

NaCL 0,9%, TCA, dan aquadest. Pada pembuatan preparat histopatologi bahan

yang digunakan meliputi, formalin 10%, paraffin, xylol,etanol absolut, etanol

bertingkat 70%, 80%, 90%, 95%, dan pewarna HE.

4.7 Tahap Penelitian

1. Persiapan hewan coba

2. Pembuatan ekstrak kulit buah naga merah (Hylocerus polyrhizuzus)

3. Induksi diazinon pada tikus putih (Rattus norvegicus).

4. Terapi ekstrak kulit buah naga merah (Hylocerus polyrhizuzus).

5. Pengambilan organ lambung

6. Pengukuran kadar malondialdehida (MDA) lambung.

7. Pembuatan preparat histopatologi organ lambung.

8. Analisis data.

4.7.1 Persiapan Hewan Coba

Persiapan hewan coba meliputi pembuatan surat laik etik dari komisi etik

penelitian universitas brawijaya. Aklimatisasi tikus putih (Rattus norvegicus)

sebelum mendapatkan perlakuan selama 7 hari dengan diberikan pakan dan

minum ad-libitum serta dipersiapkan kandang tikus putih (Rattus norvegicus)

berukuran 17,5 cm x 23,75 cm yang dilengkapi dengan penutup kawat. Tikus

putih (Rattus norvegicus) ditempatkan di tempat yang tenang dan bebas dari

polusi dengan lantai kandang mudah dibersihkan dan disanitasi. Suhu optimum

ruangan untuk tikus putih (Rattus norvegicus) adalah 22-24ºC dan memiliki

kelembapan udara 50-60% dengan ventilasi yang cukup.

26

4.7.2 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrizus)

Pada pebuatan ekstrak, sebanyak 1000 gram kulit buah naga merah

(Hylocereus polyrizus) yang telah halus kemudian dimaserasi selama 24 jam

menggunakan pelarut etanol 96% dan HCL 1% dengan perbandingan volume 9:1

sebanyak 1000 mL, hasil maserasi kemudian disaring. Masetrat yang telah

disaring kemudian ditampung dan disimpan pada suhu kamar yang terlindung dari

cahaya matahari. Hasil dari seluruh masetrat etanol 96% diuapkan dengan alat

evaporator putar pada suhu 40 ºC sampai didapatkan hasil ekstrak etanol kental

(Putri dkk., 2015)

4.7.3 Induksi Diazinon pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) (Wulandari,

2006)

Diazinon yang diinduksi pada tikus putih (Rattus norvegicus) berupa

sediaan cair diazinon 600EC dengan dosis 40 mg/kg BB yang diberikan per-oral

setiap satu kali sehari selama 5 hari.

Dosis yang digunakan adalah 40 mg/kg BB , sehingga volume yang

diberikan untuk 1 ekor tikus dengan berat 150 gr harus diberikan sebanyak:

x 40 mg = 6 mg

4.7.4 Terapi Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrizus) (Katuuk,

2015)

Pemberian terapi menggunakan ekstrak buah naga merah (Hylocereus

polyrizus) digunakan dosis pada perlakuan 1 (P1) adalah 150 mg/ 150 g BB,

perlakuan 2 (P2) adalah 200 mg/ 150 g BB, dan perlakuan 3 (P3) adalah 250 mg/

150

1000

27

150 g BB. Terapi diberikan pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang sebelumnya

telah diinduksi oleh diazinon. Terapi diberikan setiap satu hari sekali selama 14

hari diberikan per-oral.

4.7.5 Pengambilan Organ Lambung

Pengambilan organ dilakukan setelah dilakukan eutanasi tikus putih

(Rattus norvegicus) dengan cara dislokasi leher pada hari ke 26. Selanjutnya pada

hari yang sama dilakukan pembedahan bagian abdomen untuk diambil dan

dilakukan pencucian organ lambung menggunakan NaCl fisiologis 0,9% yang

bertujuan untuk menghilangkan darah, namun sebelum itu tikus diletakkan diatas

stiroform pada posisi dorsal (terlentang), kemudian dilakukan fiksasi pada

keempat ekstremitas menggunakan jarum pentul. Nekropsi dilakukan tepat pada

linea alba tikus putih (Rattus norvegicus) dengan membuka kulit dan fascia.

Setelah rongga abdomen terbuka, dilakukan pengambilan organ lambung dan

dimasukkan ke dalam larutan formalin 10% untuk pengamatan histopatologi dan

sebagian lainnya dimasukkan kedalam larutan PBS-Azida untuk pengukuran

kadar MDA, untuk selanjutnya sampel langsung dikirim ke laboratorium.

4.7.6 Pengukuran Kadar Malondialdehida (MDA) Lambung (Palupi dkk.,

2012)

Lambung sebanyak 0,225 gram diperoleh dari pendedahan hewan coba.

Organ lambung dipotong kecil-kecil, diberikan sedikit pasir kuarsa dan digerus

dalam mortar dingin. Sampel yang telah hancur ditambahkan 1 mL NaCL 0.9%.

Homogenat dipindah ke dalam microtube dan disentrifugasi pada kecepatan 8000

rpm selama 20 menit. Setelah dilakukan sentrifugasi, supernatan yang terbentuk

28

diambil sebanyak 100 µL, dipindahkan kedalam microtube baru. Aquadest

ditambahkan sebanyak 500 µL kedalam microtube dan dihomogenkan dengan

vortex. Larutan TCA ditambahkan sebanyak 100 µL kedalam microtube dan

dihomogenkan lagi menggunakan vortex. Laruran HCL IN ditambahkan kedalam

microtube sebanyak 250 µL dan dihomogenkan kembali dengan vortex.

Ditambahkan sebanyak 100 µL larutan Na-Thiol ke dalam microtube dan

dihomogenkan kembali dengan vortex lalu microtube disentrifugasi dengan

kecepatan 500 rpm selama 15 menit. Supernatan yang terbentuk diambil dari

microtube dan dimasukkan ke dalam microtube yang baru. Diinkubasi dalam

waterbath pada suhu 100ºC selama 30 menit, setelah itu microtube dibuka dan

dibiarkan dalam suhu ruang. Dilakukan pengukuran absorbansi dengan uji TBA

pada λmax (530 mm) menggunkan spektrofotometer (Shimadzu UV-visible

spectrophotometer UV-1601) dan diplotkan pada kurva standar yang telah dibuat

untuk perhitungan konsentrasi sampel.

4.7.7 Pembuatan dan Pengamatan Preparat Histopatologi Lambung

(Junquiera dan Carneiro, 2007).

Proses pembuatan preparat histopatologi terbagi menjadi beberapa tahap

diantaranya fiksasi, dehidrasi, penjernihan, infiltrasi paraffin, embedding,

sectioning, penempelan digelas objek, dan pewarnaan. Pada proses fiksasi organ

lambung yang didapat segera dimasukkan kedalam larutan formalin 10% sampai

maksimal 2 hari untuk mencegah terjadi kerusakan organ.

Pada tahap dehidrasi, jaringan dimasukkan kedalam larutan etanol dengan

konsentarasi bertingkat yaitu 70% selama 2 jam, 80% selama 2 jam dan etanol

29

90%, 95% sampai etanol absolute masing-masing 20 menit. Setelah tahap

dehidrasi jaringan dipindahkan kedalam larutan xylol I (20 menit) dan xylol II (30

menit) untuk proses penjernihan. Pada tahap embedding, jaringan dicelupkan

dalam cetakan yang berisi paraffin cair dan ditunggu beberapa saat sampai cairan

memadat dan terbentuk blok-blok, kemudian disimpan dalam lemari pendingin.

Setelah blok paraffin terbentuk, dilanjutkan tahap sectioning, pada tahap

ini dilakukan pengirisan dari jaringan yang telah dipadatkan dengan paraffin,

dimana ketebalan irisan ± 6-8 µm menggunakan sebuah alat khusus, yaitu

mikrotom. Hasil potongan diapungkan kedalam air hangat bersuhu 60ºC

(waterbath) untuk merenggangkan agar jaringan tidak berlipat. Diangkat sediaan

dan diletakkan pada gelas objek untuk dilakukan pewarnaan hematoksilin dan

eosin. Sebelum proses pewarnaan HE terlebih dahulu dilakukan penempelan

preparat jaringan pada gelas objek. Perendaman sediaan preparat dalam xylol 1

dan 2 selama masing-masing lima menit untuk dilakukan deparafinasi dan

rehidrasi secara berturut dengan melakukan perendaman dalam larutan etanol

absolute, 95%, 90%, 80%, dan 70% masing-masing selama dua menit lalu

dilakukan pencucian dengan air mengalir. Setelah tahap tersebut selesai,

dilakukan pewarnaan hematoksilin selama 1 menit, dicuci dengan air mengalir,

dan kemudian dicuci dengan aquades selama 5 menit. Selanjutnya, dilakukan

pewarnaan dengan eosin selama 2-3 menit. Sediaan yang telah terwarnai dengan

eosin dicuci dengan air mengalir dan dicuci kembali dengan aquades selama 5

menit. Sediaan dimasukkan kedalam etanol 70%, 80%, 90%, 95% masing-masing

beberapa detik dan etanol absolute I, II, III masing-masing 2 menit. Dilanjutkan

30

dengan perendaman ke dalam larutan xylol I, II, III selama 2 menit. Sediaan

diteteskan dengan perekat permount dan ditutup dengan gelas penutup, kemudian

preparat yang telah jadi dapat dilakukan pemeriksaan dan diamati dibawah

mikroskop cahaya Olympus BX51 dengan perbesaran 400x.

Pengamatan preparat jaringan lambung dimulai dari tunika mukosa sampai

serosa untuk mengetahui perbedaan gambaran histopatologi pada lambung tikus

putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon sebelum diterapi dan sesudah

diterapi dengan ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrizus). Bagian

yang diamati berupa kerusakan pada tunika mukosa lambung, seperti terdapat

erosi epitel dan infiltrasi sel-sel radang.

4.7.8 Analisis Data

Parameter yang digunakan dalam penelitian ini adalah penurunan kadar

MDA dan perbaikan gambaran kerusakan histopatologi lambung tikus putih

(Rattus norvegicus). Kadar MDA diukur dengan menggunakan uji TBA. Data

kadar MDA yang diperoleh dilakukan analisis secara kuantitatif menggunakan

alanalisis ragam ANOVA dengan menggunakan SPSS version 22 for windows,

dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Jujur (BNJ) α = 5%. Gambaran kerusakan

histopatologi lambung dianalisis secara deskriptif dengan mengamati kerusakan

yang terlihat melalui mikroskop cahaya perbesaran 100x dan 400x.

31

BAB 5. HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus

Polyrhizus) Terhadap Kadar Malondialdehida (MDA) Lambung

Malondialdehida (MDA) termasuk dalam senyawa dialdehida yang

merupakan produk akhir peroksidasi lipid dalam tubuh karena ada stress oksidatif

akibat paparan radikal bebas. Secara tidak langsung peningkatan kadar MDA

dapat dijadikan sebagai biomarker terjadi stress oksidatif, sedangkan penurunan

kadar MDA menunjukkan ada perbaikan kerusakan organ. Kadar MDA diperoleh

dari uji TBA, yang kemudian dilakukan analisis statistika menggunakan ANOVA.

Analisis ANOVA menunjukkan perbedaan hasil terhadap kadar MDA antar

kelompok perlakuan secara sangat signifikan (p

32

Berdasarkan analisis diatas pada Tabel 5.1 kelompok K(+) memiliki rata-rata

kadar MDA yang lebih tinggi dibanding kelompok K(-). Perbedaan ini

menunjukkan bahwa nilai rata-rata kadar MDA kelompok K(+) berbeda nyata

dengan kelompok K(-) yang dibuktikan dengan ada notasi yang berbeda. Pada

kelompok K(+) hewan coba diinduksi dengan diazinon dengan dosis 40mg/kg

BB, didapatkan rata-rata kadar MDA sebesar 0,445 ± 0,08

ng/100mg dan terjadi

peningkatan kadar MDA sebanyak 171% yang dibandingkan dengan kelompok

K(-). Hasil tersebut menunjukkan bahwa induksi diazinon dapat meningkatkan

kadar MDA lambung.

Menurut Elsrek dan Metka (2011), terbentuk oxono-organofosfat dan

leaving group dari metabolisme aktif senyawa diazinon dapat meningkatkan ROS

dalam tubuh karena senyawa tersebut mempunyai sifat yang lebih poten dan lebih

toksik dalam menyebabkan kerusakan sel dalam tubuh, sehingga menginduksi

stress oksidatif dan peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid merupakan suatu reaksi

dimana radikal bebas maupun oksidan menyerang lipid yang mengandung ikatan

karbon ganda terutama pada PUFA. Peroksidasi lipid melibatkan pemisahan

hidrogen dengan rantai karbon dan digantikan oleh oksigen untuk menjadikan

lipid peroxyl radicals dan lipid hidroperoksida. Radikal hidroksil memiliki sifat

yang sangat reaktif karena dapat menginduksi reaksi peroksidasi lipid. Hasil akhir

dari peroksidasi lipid adalah MDA. Sehingga, dapat dikatakan bahwa peningkatan

stress oksidatif akan sebanding dengan peningkatan MDA.

Pada kelompok P1, yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi

dengan diazinon 40 mg/kg BB dan diterapi menggunakan ekstrak kulit buah naga

33

merah (Hylocereus polyrhizus) dengan dosis 150 mg/150 g BB, didapatkan hasil

rata-rata kadar MDA sebesar 0,233±0,05 ng/100mg dan dengan dosis tersebut

dapat menurunkan kadar MDA sebesar 47% dibandingkan dengan kelompok

K(+).

Kelompok P2, yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi

dengan diazinon 40 mg/kg BB dan diterapi menggunakan ekstrak kulit buah naga

merah (Hylocereus polyrhizus) dengan dosis 200 mg/150 g BB, didapatkan hasil

rata-rata kadar MDA sebesar 0,219 ± 0,036 ng/100mg dan dengan dosis tersebut

dapat menurunkan kadar MDA sebesar 50% dibandingkan dengan kelompok

K(+).

Kelompok perlakuan 3, yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) yang

diinduksi dengan diazinon 40 mg/kg BB dan diterapi menggunakan ekstrak kulit

buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) dengan dosis 250 mg/150 g BB,

didapatkan hasil rata-rata kadar MDA sebesar 0,209 ± 0,104 ng/100mg dan

dengan dosis tersebut dapat menurunkan kadar MDA sebesar 53% dibandingkan

dengan kelompok K(+).

Secara keseluruan kelompok P1, P2, dan P3 memiliki nilai kadar MDA

yang berbeda nyata dengan kelompok K(+), yang dibuktikan dengan perbedaan

notasi antar kelompok P1, P2, P3 dengan kelompok K(+). Kelompok K(+)

memiliki nilai rata-rata kadar MDA yang tinggi, sedangkan pada setiap kelompok

P1, P2, P3 terjadi penurunan rata-rata kadar MDA. Penurunan tersebut

dikarenakan pada kelompok P1, P2, P3, tikus putih (Rattus norvegicus) diterapi

menggunakan ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) yang

34

menggandung senyawa antioksidan, yaitu antosianin yang dapat menangkal

senyawa radikal bebas dalam tubuh. Berdasarkan analisis uji LC-MS juga

menunjukkan bahwa ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus)

memiliki kandungan antosianin (Lampiran 9). Menurut Lianiwati (2011),

Antosianin bekerja dengan mendonorkan atom hidrogen pada radikal bebas dan

menyebabkan senyawa tersebut menjadi stabil. Keseimbangan antara oksidan

dengan antioksidan menyebabkan tingkat stress oksidatif menjadi berkurang,

sehingga akan menurunkan kadar MDA pada jaringan.

. Kelompok K(-) memiliki nilai rata-rata kadar MDA relatif sama

dengan kelompok P1, P2, dan P3, yang dibuktikan dari notasi yang sama antara

kelompok K(-) dengan kelompok P1, P2, dan P3. Persamaan ini menunjukkan

ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) memiliki pengaruh

terhadap penurunan kadar MDA lambung, yang sebelumnya meningkat pada tikus

putih (Rattus norvegicus) akibat diinduksi diazinon, dimana pemberian ekstrak ini

dapat mengembalikan kadar MDA lambung seperti pada kelompok K(-). Notasi

yang sama juga ditunjukkan pada kelompok P1, P2, dan P3, sehingga didapatkan

hasil yang tidak berbeda nyata pada kelompok P1, P2, dan P3. Untuk

membedakan besar penurunan kadar MDA lambung pada kelompok P1, P2, dan

P3 dengan membandingkan rata-rata kadar MDA lambung antar kelompok P1,

P2, dan P3, sehingga didapatkan dosis terbaik yaitu 250 mg/150 g BB.

5.2 Pengaruh Pemberian Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus

Polyrhizus) terhadap Gambaran Histopatologi Lambung

Pemeriksaan gambaran histology dan histopatologi lambung dilakukan

dengan pembuatan preparat pewarnaan HE, kemudian diamati dengan

35

menggunakan mikroskop cahaya perbesaran 100x dan 400x untuk mengamati

perubahan yang terjadi, seperti kerusakan epitel dan infiltrasi sel-sel radang pada

tunika mukosa. Pada pengamatan secara histopatologis akan dapat dibedakan

secara deskriptif perubahan struktur sel-sel jaringan lambung pada setiap

kelompok perlakuan.

Gambar 5.1 Gambaran histopatologi lambung tikus putih (Rattus norvegicus)

kelompok K(-) dengan pewarnaan HE perbesaran 100x dan 400x.

Keterangan: TM = tunika mukosa, SB = Submukosa, M= muskularis mukosa.


kelompok K(+) dengan pewarnaan HE perbesaran 100x dan 400x.

Keterangan: ( ) menunjukkan reruntuhan sel epitel akibat erosi epitel pada tunika

mukosa,( ) menunjukkan infiltrasi sel radang, ( ) menunjukkan inti

piknotik sel parietal. TM = tunika mukosa, SB = Submukosa, M=

muskularis mukosa

TM

TM

A

B

A

TM

SB

M

TM

SB M

100x 400x

100x 400x

36


kelompok P1 dengan pewarnaan HE perbesaran 100x dan 400x.

Keterangan: ( ) menunjukkan reruntuhan sel epitel berkurang pada tunika

mukosa, ( ) menunjukkan infiltrasi sel radang, ( ) menunjukkan

regenerasi sel epitel sehingga tampak perbaikan pada sebagian

permukaan tunika mukosa. TM = tunika mukosa, SB = Submukosa,

MM= muskularis mukosa.



Keterangan: ( ) menunjukkan reruntuhan sel epitel yang sudah berkurang pada

tunika mukosa, ( ) menunjukkan infiltrasi sel radang, ( )

menunjukkan regenerasi sel epitel sehingga tampak perbaikan pada

sebagian permukaan tunika mukosa. TM = tunika mukosa, SB =

Submukosa, MM= muskularis mukosa.

TM

TM

C

D

TM

SB

TM

100x 400x

100x 400x

37



Keterangan: ( ) menunjukkan regenerasi sel epitel sehingga tampak perbaikan

seluruh permukaan tunika mukosa. TM = tunika mukosa, SB =

Submukosa, MM= muskularis mukosa.

Gambaran histologi lambung pada kelompok K(-), yaitu hewan coba

tikus putih (Rattus norvegicus) tidak diberikan perlakuan apapun menunjukkan

gambaran histopatologi lambung yang masih normal, tampak tunika mukosa

lambung yang masih utuh dibuktikan dengan tidak ditemukan lesi ataupun

kerusakan epitel pada tunika mukosa seperti ada reruntuhan epitel akibat erosi

maupun hemoragi. Sedangkan gambaran histopatologi pada kelompok K(+)

tampak secara jelas pada gambaran histopatologi lambung terjadi erosi epitel pada

tunika mukosa, nekrosis piknotik sel parietal, dan ditemukan infiltrasi sel radang.

Kerusakan ini terjadi karena pada kelompok K(+) hewan coba diinduksi dengan

diazinon dengan dosis 40 mg/kg per-oral. Penggunaan zat kimia seperti diazinon

akan langsung dapat mengiritasi sel epitel pada tunika mukosa dengan

menurunkan barier mukosa lambung, radikal bebas yang terbentuk akan dapat

merusak membran sel dengan meningkatkan anion superoksida dan produksi

radikal hidroksil serta peroksidasi lipid, yang meninggalkan hasil akhir berupa

TM

E

TM

SB MM

100x 400x

38

peningkatan kadar MDA pada mukosa lambung. Stress oksidatif yang dihasilkan

juga dapat meningkatkan permeabilitas mitokondria dan depolarisasi mitokondria

menyebabkan kematian sel (Sugiyanta dkk., 2013). Sebelum sel mengalami

nekrosis atau kematian sel, inti sel akan mengalami piknotik. Pada gambaran

histopatologi tampak inti sel parietal mengalami piknotik yang ditandai dengan

inti sel tampak berwarna gelap dibandingkan dengan inti sel parietal normal. Hal

ini dikarenakan kromosom didalam inti yang mengalami piknotik mengalami

homogenesasi, sehingga inti sel banyak menyerap zat warna dan menjadikan inti

sel tersebut berwarna gelap. Sedangkan, sel yang telah mengalami nekrosis akan

tampak sel yang hancur dengan inti dan bagian-bagial sel tidak terlihat jelas

(Yulihastuti dkk., 2016). Penggunaan zat kimia tersebut juga dapat menyebabkan

erosi epitel, yang merupakan rupturnya sel epitel pada permukaan tunika mukosa

dengan bagian dalam mukosa masih tetap utuh (Romdhoni, 2015).

Gambaran histopatologi lambung pada kelompok perlakuan P1, P2, dan

P3 menunjukkan ada perbaikan gambaran histopatologi dibandingkan dengan

kelompok K(+). Perbaikan gambaran histopatologi ditunjukkan dengan penurnan

tingkat kerusakan sel epitel pada tunika mukosa organ lambung. Pada kelompok

P1, gambaran histopatologi menunjukkan tingkat kerusakan pada tunika mukosa

yang mulai berkurang ditandai dengan sudah tidak terjadi erosi sel epitel namun

masih ditemukan infiltrasi dari sel radang. Pada kelompok P2, gambaran

histopatologi tampak sel epitel yang melapisi tunika mukosa sudah kembali utuh

pada beberapa bagian walaupun ada beberapa yang masih mengalami ruptur.

Perbaikan ini terjadi karena sel epitel telah mengalami re-epitelisasi namun masih

39

ditemukan infiltrasi sel radang. Pada kelompok P3, gambaran histopatologi

menunjukkan bahwa jaringan sudah mulai tampak seperti kelompok K(-) yang

normal, ditandai dengan tunika mukosa pada jaringan lambung sudah kembali

utuh dan sudah tidak tampak lagi reruntuhan epitel akibat erosi dan infiltrasi sel

radang.

Menurut Hehi dkk., (2013), sel epitel lambung yang ruptur diakibatkan

karena terjadi iritasi yang disebabkan oleh beberapa faktor perusak endogen,

seperti HCL, pepsinogen, dan garam empedu, serta faktor eksogen seperti obat-

obatan, alkohol, bakteri dan senyawa kimia lain, seperti insektisida. Perbaikan sel

epitel pada kelompok kontrol P1, P2, dan P3 disebabkan karena pada setiap

kelompok perlakuan diberikan terapi ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus

polyrhizus) dengan dosis berbeda pada setiap kelompok perlakuan, yaitu 150

mg/150 g BB, 200 mg/150 g BB, dan 250 mg/150g BB. Kulit buah naga merah

banyak mengandung antioksidan yang bermanfaat dalam menangkal radikal bebas

dalam tubuh adalah antosinin.

Menurut Sugiyanta dkk., (2013), aktivitas antosianin dalam

menurunkan kerusakan epitel pada mukosa lambung dengan mendonorkan atom

hidrogen dan mengikat perpindahan ion logam, menghambat enzim oksidan atau

produksi radikal bebas oleh sel, serta dapat meregenerasi mukosa lambung.

Menurut Lianiwati (2011), antosianin bekerja dengan mendonorkan atom

hidrogen pada radikal bebas dan menyebabkan senyawa tersebut menjadi stabil.

Keseimbangan antara oksidan dengan antioksidan menyebabkan tingkat stress

40

oksidatif menjadi berkurang. Stress oksidatif yang berkurang akan menurunkan

kerusakan sel pada jaringan, sehingga akan terjadi perbaikan pada jaringan.

41

BAB 6 PENUTUP

6.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil Penelitian yang telah dilakukan dapat diambil

kesimpulan bahwa:

1. Pemberian Ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) pada

dosis 150 mg/ 150 g BB dapat menurunkan kadar MDA secara signifikan

pada tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi diazinon.

2. Pemberian ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) pada

dosis 150 mg/150 g BB dapat memperbaiki gambaran kerusakan

histopatologi lambung tikus putih (Rattus norvegicus) yang diinduksi

diazinon.

6.2 Saran

Perlu dilakukan uji lanjutan mengenai berapa banyak total kandungan

antosianin dalam ekstrak kulit buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) dan

uji lanjutan lain seperti, uji kolinesterase untuk mengetahui kadar

kolinesterase darah pada tikus putih (Rattus norvegicus) sebagai indikator

terjadi keracunan akibat diazinon untuk mengetahui tingkat residu pestisida di

dalam tubuh.

42

DAFTAR PUSTAKA

Alit, S., Suma A, M., dan Dharmayuda O. 2013. Identifikasi Senyawa Kimia

Ekstrak Kulit Buah Naga Putih dan Pengaruhnya Terhadap Glukosa

Darah Tikus Diabetes. Indonesia Medicus Veterinus. Vol 2(2): 151-161.

Alexandru, I. 2011. Experimental Use of Animals in Research Spa. Balneo

Research Journal. Vol 2(1): 65-69.

Baehaki. 1993. Insektisida Pengendalian Hama Tanaman. Bandung : Angkasa.

Budiyono. 2012. Kajian Sistematis Dampak Pestisida Diazinone Terhadap

Manusia, Mamalia Lainnya Dan Lingkungan. Fakultas Kesehatan

Masyarakat Universitas Indonesia.

Cox, C. 2000. Diazinon: Toksikology. Journal of Pesticide Reform. Vol. 20 (2).

Djojosumarto, P. 2000. Teknik Aplikasi Pestisida Pertanian. Yogyakarta :

Kasinus.

Elsrek, T., dan Metka F. 2011. “Organophosphorous Pesticides” Mechanisms of

Their Toksikity. Slovenia: National Institute of Biology.

Hambali, M., Febriana M., dan Fitriadi N. 2014. Ekstraksi Antosianin dari Ubi

Jalar dengan Variasi Konsentrasi Solven dan Lama Waktu Ekstraksi.

Jurnal Teknik Kimia Vol. 20(2): 25-35.

Harris. 2009. Peran Capsaicin Dalam Mempercepat Penyembuahan Ulkus pada

Lambung yang Diberi Paparan Deksametason. Skripsi. Jakarta: Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia.

Hehi, F. K., Durry, M. F., dan Loho, L. 2013. Gambaran Histopatologi Tikus

Wistar Pasca Pemberian Metanol. Jurnal e-Biomedik Vol 1(2): 890-895.

Ingrath, W., Wahyunanto A. N., dan Rini Y. 2015. Ekstrak Pigmen Antosianin

dari Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus costaricensis) Sebagai

Pewarna Alami Makanan dengan Menggunakan Microwave. Jurnal

Bioproses Komoditas Tropis Vol.3(3).

Junqueira, L. C and J. Carneiro. 2004. Basic Histology Text and Atlas. McGraw-

Hill Education, New York.

Katuuk, S. H. H. 2015. Ekstrak Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus Polyrhizus)

Terhadap Penurunan Kadar Trigliserida pada Tikus Wistar Jantan.

Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Maranatha, Bandung.

43

Kusriningrum, R. S. 2008. Dasar Perancangan Percobaan dan Rancangan Acak

Lengkap. Airlangga University Press, Surabaya.

Lesmana, G. L., Diana A., dan Asus M. 2013. Pengamatan Jaringan Lambung

Kijing Taiwan (Anodonta Woodiana Lea) yang Terdedah Pestisida

Diazinon 60 EC pada Beberapa Konsentrasi. Journal of Experimental

Life Science Vol 3 (2).

Lianiwati, B.V. 2011. Pemberian Ekstrak Buah Naga Merah (Hylocereus

Polyrhizus) Menurunkan kadar F2 Isoprostan pada Tikus Putih Jantan

(Albino rat) yang Diberi Aktivitas Berlebih. Tesis. Denpasar: Program

Studi Ilmu Biomedik Program Pascasarjana Universitas Udayana.

Minh, N. P. 2014. Various Factors Influencing to Red Dragon Fruit (Hylocereus

polyrhizus) Wine Fermentation. International Journal of

Multidisciplinary Research and Development. 1(5): 94-98.

Mishra, B. K. P., dan Kumari R. 2015. Effect of Pesticide on Hystology of

Stomach and Liver of a Water Breathing Teleost, Mystus Tengara.

Research Journal of Chemical and Enviroment Science. 3 (5): 32-36.

Ngabekti, S., dan Wiwi I. 2000. Pemanfaatan Kurkumin untuk Mengeliminir

Pengaruh Diazinon Terhadap Kerusakan Hati Mencit (Mus musculus,

L). Jurnal Manusia dan Lingkungan Hidup. 1(7): 24-34.

Palupi, N. H., Aulanni’am, dan Dyah K.W. 2012. Studi Terapi Air Perasan Buah

Labu Siam (Sechium endule) pada Tikus (Rattus norvegicus) Model

Inflammatory Bowel Disease Pasca Induksi Indometasin Terhadap

Kadar Malondialdehida dan Gambaran Histopatologi Duodenum.

Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya.

Putri, N. K. M., I Wayan G. G., dan I Wayan S. 2015. Aktivitas Antioksidan

Dalam Ekstrak Etanol Kulit Buah Naga Super Merah (Hylocereus

costaricensis) dan Analisis Kadar Totalnya. Jurnal Kimia. 9 (2): 243-

251.

Prasetyo, E., Wiwik W., Eka S., Ana S., dan Ita M. R. 2013. Pengembangan

Usaha Tikus Putih (Rattus norvegicus) Tersertivikasi dalam Upaya

Memenuhi Hewan Laboratorium. Fakultas Peternakan dan Pertanian,

Universitas Diponegoro.

Robinson. 1979. Taxonomi and Genetic. Didalam Beker HJ, JR Lindsay, S

Weisbroth, editor. The Laboratory Rat London. Academic press.

Romdhoni, M. F. 2015. Pengaruh Pemberian Formalin Per-oral Terhadap

Mukosa Lambung Tikus Putih Strain Wistar (Rattus norvegicus).

Fakultas Kedokteran, Universitas Muhammadiah Purwokerto.

44

Saneto, B. 2012. Karakterisasi Kulit Buah Naga Merah (H.polyrhizus). Jurnal

Agrika. 2(2): 143-149.

Safitri, E. E. 2016. Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum Sanctum)

Sebagai Hepatoprotektor Terhadap Kadar MDA Hati Mencit yang

diinduksi Isoniazid. Skripsi. Jember: Fakultas Kedokteran Universitas

Jember.

Saunders, W. B. 1987. Alih bahasa oleh Petrus A dan Timan I.S (1992). Buku

Ajar Bedah. Jakarta: EGC.

Simanjuntak L., Chairina S., dan Fatimah. 2014. Ekstrak Pigmen Antosianin dari

Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus). Jurnal Teknik Kimia.

3(2): 25-29.

Singh, V. 2014. Text book of anatomy: Abdomen and Lower Limb. 2nd

ed, Vol. 2.

Elsevier

Sugiyanta, Dewi O. S., dan Azham P. 2013. Pengaruh Pemberian Madu

Terhadap Gambaran Histopatologi Lambung Tikus Wistar (Rattus

norvegicus) Jantan yang Diinduksi Metanol. Fakultas Kedokteran

Universitas Jember.

Swastika, A. P. A. 2013. Kadar Malondialdehida (MDA) Pada Abortus Inkomplit

Lebih Tinggi Dibandingkan Dengangan Kehamilan Normal. Tesis.

Denpasar: Program Studi Ilmu Biomedik Program Pascasarjana

Universitas Udayana.

Tortora, G. J., and Grabowski, S. R. 1996. Principles of Anatomy and Physiology.

New York, NY: HarperCollins Collage.

Wibowo, D.S. 2005. Anatomi Tubuh Manusia. Jakarta: Grasindo.

Wulandari T. 2006. Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis

paniculata Ness.) Terhadap Struktur Mikroanatomi Hepar dan Kadar

Glutamat Piruvat Transaminase yang Terpapar Diazinon. Fakultas Ilmu

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret.

Yulihastuti D. A., Wayan N. S., Iriana S., dan Made N. S. 2016. Pengaruh Fungsi

Hati Tikus Betina (Rattus norvegicus) yang Diinjeksi White Vitamin C

dosis Tinggi Dalam Jangka Waktu lama Ditinjau dari Kadar SGPT,

SGOT, Serta Gambaran Histologi Hati. Jurnal Metamorfosa Vol.3 (1):

44-51.

Zulmi, N. 2016. Hubungan Antara Frekuensi dan Lama Penyemprotan dan

Interval Kontras Pestisida Dengan Aktivitas Cholinesterase Petani di

Desa Kembangkuning Kecamatan Cepogo. Fakultas Ilmu Kesehatan,

Universitas Surakarta.

2. BAGIAN AWAL.pdf3. BAB 1 PENDAHULUAN.pdf4. BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA.pdf5. BAB 3 KERANGKA KONSEP.pdf6. BAB 4 MOTODE PENELITIAN.pdf7. BAB 5 PEMBAHASAN & HASIL.pdf8. BAB 6 PENUTUP.pdf9. DAFTAR PUSTAKA.pdf

pengaruh pemberian ekstrak kulit buah naga merah …repository.ub.ac.id/7472/1/khoirus...

Documents