PEMERIKSAAN UJI SILANG SERASI(CROSSMATCHING)

OLEH :KELOMPOK V1. Ni Kadek Lina Winati( P07134013040 )2. Ni Made Yuni Trisna Dewi( P07134013041 )3. Ni Made Ayu Juni Anggreni( P07134013042 )4. Ni Putu Meri Kusumawati( P07134013043 )5. I Kadek Mardana( P07134013044 )6. I Putu Bandem Arista Putra( P07134013045 )7. Putu Ratna Muliartini( P07134013046 )8. I Gusti Ayu Tari Diva Pradnya Dewi( P07134013047 )9. Ni Made Ita Purnamadewi( P07134013048 )10. Marissah Thamrin( P07134013049 )

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIAPOLITEKNIK KESEHATAN DENPASARJURUSAN ANALIS KESEHATAN2015PEMERIKSAAN UJI SILANG SERASI (CROSSMATCHING)

Hari, Tanggal Praktikum: Selasa, 12 Mei 2015Praktikum: VIII (Kedelapan)Tempat: Laboratorium Hematologi Analis Kesehatan

I. Tujuan 1. Tujuan Instruksional UmumMahasiswa dapat memahami cara pemeriksaan uji silang serasi (crossmatching) 2. Tujuan Instruksional Khususa. Mahasiswa dapat melakukan cara pemeriksaan uji silang serasi (crossmatching)b. Mahasiswa dapat menentukan hasil pemeriksaan uji silang serasi dari sampel darah pasienII. Metode Metode yang digunakan dalam praktikum ini adalah metode aglutinasi

III. PrinsipAntibodi yang terdapat dalam serum / plasma ,bila direaksikan dengan antigen pada sel darah merah ,melalui inkubasi pada suhu 37C dan dalam waktu tertentu dengan penambahan anti monoglobulin akan terjadi reaksi aglutinasi

IV. Dasar TeoriA. Tinjauan tentang Transfusi DarahTransfusi darah adalah proses pemindahan atau pemberian darah dari seseorang (donor) kepada orang lain (resipien). Transfusi bertujuan mengganti darah yang hilang akibat perdarahan, luka bakar, mengatai shock, mempertahankan daya tahan tubuh terhadap infeksi (Tarwoto, 2006).Pertimbangan utama dalam transfusi darah, khususnya yangmengandung eritrosit, adalah kecocokan antigen-antibodi eritrosit.Golongan darah AB secara teoritis merupakan resipien universal, karenamemiliki antigen A dan B di permukaan eritrositnya, sehingga serumdarahnya tidak mengandung antibodi (baik anti-A maupun anti-B). Karena tidak adanya antibodi tersebut, berarti darah mereka (lagi-lagi, secara teoritis) tidak akan menolak darah golongan manapun yang berperan selaku donor, dengan kata lain mereka boleh menerima darah dari semua golongan darah lainnya. Sedangkan golongan darah O secara teoritis merupakan donoruniversal, karena memiliki antibodi anti-A dan anti-B.Darah yang diberikan diharapkan tidak memicu reaksi imunitas dari resipien, dengan kata lain mereka boleh memberikan darah ke semua golongan darah lain, termasukgolongan A dan B.Hal lain yang perlu dipertimbangkan adalah faktor Rh. Seorang Rh (-) yang belum memiliki anti-D namun menerima donor darah Rh (+) akan mengalami reaksi sensitisasi terhadap antigen D.Untuk wanita hal ini dapatberbahaya bagi kehamilan (sudah dibahas di bagian kedua). Sekali sajaseorang Rh (-) terpapar darah Rh (+); jika kali berikutnya ia kembaliterpapar darah Rh (+), maka reaksi transfusi yang timbul dapat sangatberbahaya.Namun hal ini tidak berlaku sebaliknya. Jika seorang Rh (+)mendapat darah dari donor Rh (-), darah Rh (-) itu sudah lepas dari sistemimunitas si donor, sehingga tidak akan terjadi reaksi sensitisasi. Dengan katalain, sistem imun orang Rh (+) tidak bereaksi imunologis terhadap paparandarah Rh (-).

B. Tinjauan tentang DarahDarah adalah cairan yang terdapat pada hewan tingkat tinggi yang berfungsi sebagai alat transportasi zat seperti oksigen, bahan hasil metabolisme tubuh, pertahanan tubuh dari serangan kuman, dan lain sebagainya. Beda halnya dengan tumbuhan, manusia dan hewan level tinggi punya sistem transportasi dengan darah (Gustini, 2011).Darah merupakan suatu cairan yang sangat penting bagi manusia karena berfungsi sebagai alat transportasi serta memiliki banyak kegunaan lainnya untuk menunjang kehidupan. Tanpa darah yang cukup seseorang dapat mengalami gangguan kesehatan dan bahkan dapat mengakibatkan kematian (Gustini, 2011).Darah pada tubuh manusia mengandung 55% plasma darah (cairan darah) dan 45% sel-sel darah (darah padat). Jumlah darah yang ada pada tubuh kita yaitu sekitar sepertigabelas berat tubuh orang dewasa atau sekitar 4 atau 5 liter (Gustini, 2011).Fungsi darah pada tubuh manusia yaitu (Gustini, 2011) :1. Alat pengangkut air dan menyebarkannya ke seluruh tubuh2. Alat pengangkut oksigen dan menyebarkannya ke seluruh tubuh3. Alat pengangkut sari makanan dan menyebarkannya ke seluruh tubuh4. Alat pengangkut hasil oksidasi untuk dibuang melalui alat ekskresi5. Alat pengangkut getah hormon dari kelenjar buntu6. Menjaga suhu temperatur tubuh7. Mencegah infeksi dengan sel darah putih, antibodi dan sel darah beku8. Mengatur keseimbangan asam basa tubuh.Komponen-Komponen Daraha. Sel Darah MerahSel Darah Merah atau SDM adalah sel yang terbanyak di dalam darah. Karena sel ini mengandung senyawa yang berwarna merah, yaitu hemoglobin. hemoglobin.b. Sel Darah Putih (Leukosit)Jumlahnya lebih sedikit, dengan perbandingan sekitar 1 sel darah putih untuk setiap 660 sel darah merah. Terdapat 5 jenis utama dari sel darah putih yang bekerja sama untuk membangun mekanisme utama tubuh dalam melawan infeksi, termasuk menghasilkan antibodi.. c. Platelet ( Trombosit )Merupakan paritikel yang menyerupai sel, dengan ukuran lebih kecil daripada sel darah merah atau sel darah putih. Sebagai bagian dari mekanisme perlindungan darah untuk menghentikan perdarahan, trombosit berkumpul dapa daerah yang mengalami perdarahan dan mengalami pengaktivan.

d. PlasmaPlasma darah adalah komponen darah berbentuk cairan berwarna kuning yang menjadi medium sel-sel darah, dimana sel darah ditutup. 55% dari jumlah/volume darah merupakan plasma darah. Volume plasma darah terdiri dari 90% berupa air dan 10% berupa larutan protein, glukosa, faktor koagulasi, ion mineral, hormon dan karbon dioksida. Plasma darah juga merupakan medium pada proses ekskresi. Plasma darah dapat dipisahkan di dalam sebuah tuba berisi darah segar yang telah dibubuhi zat anti-koagulan yang kemudian diputar sentrifugal sampai sel darah merah jatuh ke dasar tuba, sel darah putih akan berada di atasnya dan membentuk lapisan buffy coat, plasma darah berada di atas lapisan tersebut dengan kepadatan sekitar 1025 kg/m3 atau 1.025 kg/l. e. SerumDi dalam darah, serum (bahasa Inggris: blood serum) adalah komponen yang bukan berupa sel darah, juga bukan faktor koagulasi; serum adalah plasma darah tanpa fibrinogen, (bahasa Latin: serum) berarti bagian tetap cair dari susu yang membeku pada proses pembuatan keju. Serum darah adalah plasma tanpa fibrinogen, sel dan faktor koagulasi lainnya. Fibrinogen menempati 4% alokasi protein dalam plasma dan merupakan faktor penting dalam proses pembekuan darah.Serum terdiri dari semua protein (yang tidak digunakan untuk pembekuan darah) termasuk cairan elektrolit, antibodi, antigen, hormon, dan semua substansi exogenous. Rumusan umum yaitu: serum = plasma - fibrinogen - protein faktor koagulasi. Studi yang mempelajari serum disebut serologi. Serum digunakan dalam berbagai uji diagnostik termasuk untuk menentukan golongan darah. Di dalam serum tidak ada fibrinogen, karena protein sudah berubah menjadi jaring fibrin dan menggumpal bersama unsur figuratif yang berupa sel.

B. Hemolisis pada DarahHemolisis atau lebih dikenal dengan kejadian pecahnya sel darah merah secara normal didalam tubuh tidak dapat dihindari apabila sel darah merah atau eritrosit sudah mencapai usianya, dengan pecahnya sel darah merah atau eritrosit didalam tubuh secara normal tubuh direspon untuk membentuk sel darah merah yang baru. Haemoglobin yang keluar dari sel darah merah atau eritrosit akan diuraikan oleh organ tubuh yang bertanggung jawab dan bagian yang penting dari penguraian ini akan dimanfaatkan kembali untuk pembentukan sel darah merah yang baru.Pada kejadian yang tidak normal jumlah sel darah merah yang pecah lebih besar dari pada pembentukan sel darah merah yang baru dan mengakibatkan dari peruraian Hb akan membubung tinggi dan sangat mengganggu organ lain (organ tubuh) (Ismail, 2010).Kejadian hemolisis yang tidak normal (abnormal) bisa disebabkan oleh beberapa faktor dari dalam tubuh (invivo) sendiri, misalnya kondisi sel darah merah itu sendiri kurang baik, atau bisa disebabkan oleh faktor luar (invitro), dari faktor luar bisa dijumpai akibat dari faktor transfusi darah, karena disebabkan adanya reaksi antibodi terhadap antigen yang masuk kedalam tubuh atau pada sel darah merah dan risikonya akan lebih besar apabila sel darah merah donor yang ditransfusikan tidak cocok dengan antibodi yang berada dalam plasma donor dengan sel darah merah pasien. reaksi hemolisis in vivo karena transfusi ini disebut reaksi hemolitik transfusi. Reaksi hemolitik bisa terjadi secara langsung (direck or indirec) dan dapat berakibat fatal, dan bisa juga reaksinya baru muncul beberapa waktu kemudian setelah transfusi ( delay hemolitik tarnsfution reaction ).Akibat yang fatal dari reaksi transfusi dikarenakan ketidak cocokan golongan darah ABO ( antibodi-A,-B,-AB ) yang dibuat secara teratur menurut golongan darah masing-masing. Disamping itu mungkin ada antibodi lain yang mungkin dibentuk secara alamiah tetapi tidak beratur ( antibodi -Lewis,-A1,-P1 dll ) atau antibodi immun (Ismail, 2010).Reaksi transfusi yang baru muncul beberapa waktu kemudian setelah transfusi ( delay hemolitik tarnsfution reaction ) bisa disebabkan karena darah donor sesungguhnya tidak compatible denga darah pasien, namun dalam reaksi silang/uji silang serasi menhasilkan false-compatible (Ismail, 2010).C. CrossmatchingReaksi silang (Crossmatch = Compatibility-test)perlu dilakukan sebelum melakukan transfusi darah untuk melihat apakah darah penderita sesuai dengan darah donor.Pengartian Crossmatchadalah reaksi silang in vitro antara darah pasien dengan darah donornya yang akan di transfusikan. Reaksi ini dimaksudkan untuk mencari tahu atau apakah darah donor akan ditranfusikan itu nantinya akan dilawan oleh serum pasien didalam tubuhnya, atau adakah plasma donor yang turut ditransfusikan akan melawan sel pasien didalam tubuhnya hingga akan memperberat anemia, disamping kemungkinan adanya reaksi hemolytic transfusi yang biasanya membahayakan pasien.Maka dapat disimpulkan tujuan Crossmacth sendiri yaitu mencegah reaksi hemolitik tranfusi darah bila darah didonorkan dan supaya darah yang ditrafusikan itu benar-benar ada manfaatnya bagi kesembuhan pasien.Jika pada reaksi tersebut golongan darah A,B dan O penerima dan donor sama, baik mayor maupun minor test tidak bereaksi berarticocok. Jika berlainan, misalnya donor golongan darah O dan penerima golongan darah A maka pada test minor akan terjadi aglutinasi atau juga bisa sebaliknya berartitidak cocok(Anonim, 2010).Mayor Crossmatch merupakan tindakan terakhir untuk melindungi keselamatan penerima darah dan sebaiknya dilakukan demikian sehingga Complete Antibodies maupun incomplete Antibodies dapat ditemukan dengan cara tabung saja. Cara dengan objek glass kurang menjaminkan hasil percobaan. Reaksi silang yang dilakukan hanya pada suhu kamar saja tidak dapat mengesampingkan aglutinin Rh yang hanya bereaksi pada suhu 37 derajat Celcius. Lagi pula untuk menentukan anti Rh sebaiknya digunakan cara Crossmatch dengan high protein methode. Ada beberapa cara untuk menentukan reaksi silang yaitu reaksi silang dalam larutan garam faal dan reaksi silang pada objek glass (Anonim, 2010).Serum antiglobulin meningkatkan sensitivitas pengujian in vitro. Antibodi kelas IgM yang kuat biasanya menggumpalkan eritrosit yang mengandung antigen yang relevam secara nyata, tetapi antibodi yang lemah sulit dideteksi. Banyak antibodi kelas IgG yang tak mampu menggumpalkan eritrosit walaupun antibodi itu kuat. Semua pengujian antibodi termasuk uji silang tahap pertama menggunakan cara sentrifugasi serum dengan eritrosit. Sel dan serum kemudian diinkubasi selama 15-30 menit untuk memberi kesempatan antibodi melekat pada permukaan sel, lalu ditambahkan serum antiglobulin dan bila pendertita mengandung antibodi dengan eritrosit donor maka terjadi gumpalan. Untuk fase dalam cross matching terdiri atas : (Febriyanti, 2011)a. Test fase I Cross Match yaitu fase suhu kamarPada fase ini antibody complete yang akan mengaglutinasikan sel dalam saline medium atau bovine albumin yang kebanyakan kelas Ig M bisa terdeteksi misalnya : tidak cocok golongan ABO ; adanya allo antibody : M, N, Lea, I, IH, E ; serta adanya auto cold antibody.b. Tes fase II Cross Match yaitu fase inkubasi 37o CPada fese ini bila mediumnya bovine albumin, beberapa antibody dalam sistem Rhesus bisa terdeteksi aglutinasi,(misalnya anti D, anti E, anti c) anti Lea dan anti Leb. Bila mediumnya saline bisa terdeteksi aglutinasi anti E, anti Lea. Antibody yang bersifat incomplete, dan antibodi yang belum terdeteksi aglutinasi atau hemolisisnya pada fase II ini bisa bereaksi coated (sensitized) : anti D, E, c, K, Fya,Fyb, Jka, S, Lea, Leb. Jadi penting sekali peranan fase inkubasi 37 oC ini, dimana setidak-tidaknya memberi kesempatan kepada antibody untuk mengcoatedkan sel.c. Tes fase III Cross Match yaitu fase anti globulinPada fase ini setalah melaluo fase II, akan terdeteksi aglutinasi incompelete antibodi yang tadi di fase II sudah mengcoated sel. Berikut keterangan apakah darah bisa ditransfusikan atau tidak pada uji silang serasi:MayorMinorAuto ControlKeterangan

(-)(-)(-)Dara dapat ditransfusikan

(+)(-)(-)Periksa golongan darah sekali lagi,jika golongan darah telah sesuai maka dilanjutkan dg DCT

(+)(+)(-)Ada irregular antibodi pada serum/plasma donor

(-)(+)(+)Lakukan DCT pada OS,jika positif pada DCT,hasil posiitif pada Minor dan AC berasal dari autoantibodi terhadap eritrosit dari transfusi sebelumnya.Apabila derajat positif pada minor sama atau lebih kecil dibandingkan dengan AC/DCT darah dapat ditransfusikan, dan sebaliknya ,ganti darah donor dan lakukan crossmatching sampai positif pada minor sama.

V. Alat, Bahan dan Reagen Alat : Tabung Reaksi Rak tabung reaksi Sentrifuge Pipet pasteur Gelas plastik Ember plastik Botol semprot Inkubator Bahan : Sampel serum OS Sampel plasma donor Suspensi sel darah donor 5 % Suspensi sel darah OS 5%

Reagen : Bovine Albumin 22% (No batch : Ba-050614/Exp: Juli 2015) Coombs serum NaCl CCC (Coombs Control Cel)

VI. Cara KerjaUJI SILANG SERASI UNTUK 1 DONORPhase I: pada suhu kamar di dalam sline medium1. Diambil 3 buah tabung uk 12x75 dimasukkan kedalam masling-masing tabungTabung I (Mayor): 2 tetes serum OS + 1 tetes sel 5% donorTabung II (Minor): 2 tetes plasma donor + 1 tetes sel 5% OSTabung III (Auto Control): 2 tetes serum OS + 1 tetes sel 5% OS2. Dicampurkan isi,dihomogenkan dengan cara dikocok-kocok ,diputar pada centrifuge pada kecepatan 3000 rpm selam 15 detik3. Dibaca reaksi terhadap hemolisis dan aglutinasi secara makroskopiPhase II: inkubasi 37C di dalam medium bouvine albumin 22%1. Kedalam masing-masing tabung,ditambahkan 2 tetes bouvine albumin 22%2. Dihomogenkan,dan diinkubasi pada suhu 37C pada inkubator selama 15 menit3. Disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 detik 4. Dibaca reaksi terhadap hemolisi dan aglutinasi secara makroskopis bila negatif dilanjutkan ke phase IIIPhase III: Indirect Coombs Test1. Dicuci sel darah merah di dalam tabung sebanyak 3 kali dengan NaCl/Saline2. Ditambahkan ke dalam setip tabung 2 tetes Coombs serum3. Dihomogenkan hingga tercampur rata dan diputar pada kecepatan 3000 rpm selama 15 detik4. Dibaca hasil reaksi secara makroskopisVALIDITAS: 1. Kepada tabung yang hasil Coombs Testnya negatif ditambahkan 1 tetes CCC (Coombs Contol Cell)2. Dicentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit3. Hasil dibaca :Positif (+) : reaksi silang validNegatif (-) : reaksi silang invalid

VII. Interpretasi Hasil( + ) Positif: Terjadi aglutinasi pada tabung (Reaksi silang valid)( -) Negatif: Tidak terjadi aglutinasi pada tabung (Reaksi silang invalid)

VIII. Hasil Pengamatan1. Persiapan Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam praktikum ada gelas plastik (tempat aquadest dan Nacl),Ember(tempat buangan),Tabung reaksi beserta raknya Disiapkan bahan dan reagen yang akan digunakan (Serum OS,Plasma donor,Suspensi sel 5% donor,Suspensi sel 5% OS , Bovine Albumin 22% dan Coombs Control Cell)Reagen Coombs Serum yang digunakan pada phase III

2. Hasil Pemeriksaan Uji Silang Serasi

Hasil dari uji crossmatching phase I yang menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi) pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto Control) .Pembacaan hasil dilakukan setelah pemutaran pada dicentifuge dengan kecepatan 3000 rpm sellama 15 detikInkubasi 37C yang dilakukan pada uji crossmatching phase II ,setelahdilakukan penambahan bouvine albumin 22% pada tabung negatif phase IHasil dari uji crossmatching phase II yang menunjukkan hasil negatif pada ketiga tabung (Mayor Minor dan Auto contol).

Proses pencucian sel darah merah pada phase III untuk tabung hasil negatif phase II dengan NaCl yang dilakukan sebanyak 3 kali,penambahan NaCl dilakukan tabung.Pemutaran yang dilakukan pada centrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 detikHasil pemutaran ketiga tabung (mayor,minor dan auto control) pada centrifuge sebelum dihomogenkan,tampak eritrosit menggupal.

Hasil dari uji crossmatching phase III yang menunjukkan hasil negatif pada ketiga tabung (mayor ,minor dan auto control)yang ditandai dengan tidak terjadi aglutinasi ,setelah dihomogenkan dari proses pemutaran.Karena Uji Crossmatching negative maka dilanjutkan dengan uji validitas. Yaitu dengan penambahan 1 tetes CCC (Coombs Control Cell) dan kemudian dicentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 detik Hasil dari uji validitas menunjukan hasil positif (valid)dengan terbentuknya aglutinasi positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya) pada ketiga tabung (mayor ,minor dan auto control)

3.Hasil Pemeriksaan Uji Silang Serasi Masing-masing Kelompk(I,II,III,IV)

Hasil pengamatan klp 1 ,Phase I yang menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase II yang menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase III yang menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)

Hasil Uji Validitas Mayor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Minor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Auto control Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)

Hasil pengamatan klp 2,Phase I menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase II menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase III menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)

Hasil Uji Validitas Mayor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Minor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Auto control Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)

Hasil pengamatan klp 3,Phase I menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase II menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase III menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)

Hasil Uji Validitas Mayor Positif (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Minor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Auto control Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)

Hasil pengamatan klp 4,Phase I menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase II menunjukkan hasil negatfi (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)Phase III menunjukkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi)pada ketiga tabung (Mayor,Minor dan Auto control)

Hasil Uji Validitas Mayor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Minor Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)Hasil Uji Validitas Auto control Positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya)

IX. PembahasanCrossmatch adalah reaksi silang in vitro antara darah pasien dengan darah donornya yang akan di transfusikan. Pemeriksaan ini dilakukan sebelum pelaksanaan transfusi darah.Tindakan uji silang (crossmatch) diperlukan sebelum melakukan tranfusi darah untuk melihat apakah darah penderita sesuai dengan donor.Untuk tujuan tersebut, golongan darah penerima resipien harus sama dengan golongan darah pemberi donordanuji aglutinasi antara serum resipien (OS) dengan sel donor dan plasma donor dengan sel resipien (OS).Uji crossmatch ini penting bukan hanya pada transfusi tetapi juga ibu hamil yang kemungkinan terkena penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.Tujuan dilakukan periksaan uji silang adalah1.untuk melihat apakah darah dari pendonor cocok dengan penerima (resipien).2.untuk konfirmasi golongan darah.3.untuk mencari tahu atau apakah darah donor akan ditranfusikan itu nantinya akan dilawan oleh serum pasien didalam tubuhnya, atau adakah plasma donor yang turut ditransfusikan akan melawan sel pasien didalam tubuhnya hingga akan memperberat anemia, disamping kemungkinan adanya reaksi hemolytic transfusi yang biasanya membahayakan pasien.Maka dapat disimpulkan tujuan Crossmacth sendiri yaitu mencegah reaksi hemolitik darah bila darah didonorkan dan supaya darah yang ditrafusikan itu benar-benar ada manfaatnya bagi kesembuhan pasien.Crossmatch mempunyai tiga fungsi, yaitu:1.Konfirmasi jenis ABO dan Rh (kurang dari 5 menit)2.Mendeteksi antibodi pada golongan darah lain.3.Mendeteksi antibodi dengan titer rendah atau tidak terjadi aglutinasi mudah. Yang dua terakhir memerlukan sedikitnya 45 menit.Prinsip crossmatch ada dua yaitu Mayor dan Minor, yang penjelasnya sebagai berikut : Mayor crossmatch adalah serum penerima dicampur dengan sel donor. Maksudnya apakah sel donor itu akan dihancurkan oleh antibodi dalam serum pasien. Minor crossmatch adalahplasmadonor dicampur dengan sel penerima. Yang dengan maksud apakah sel pasien akan dihancurkan oleh plasma donor.Jika golongan darah (system ABO) penerima dan donor sama, baik mayor maupun minor tidak bereaksi, jika berlainan misalnya, donor golongan O dan penerima golongan A, akan terjadi aglutinasi pada tes minor.Pada praktikum kali ini digunakan sampel yang didapat dari UTD RSUP Sanglah yang berisi label (Serum OS,Plasma donor,Suspensi sel 5% donor,Suspensi sel 5% OS)Pada pemeriksaan uji silang serasi pada praktikum kali ini ada tiga phase yang dilakukan ,yaitu :1).Phase I (fase suhu kamar, dalam medium salin)Pada phase ini adalah mempersiapkan tiga tabung yang akan digunakan uji (Mayor,Minor dan Auto control) pada tabung mayor berisi 2 tetes serum Udin dan 1 tetes sel darah donor 5%,pada tabung minor berisi 2 tetes plasma donor dan 1 tetes sel darah 5% Udin,dan pada auto control berisi 2 tetes serum Udin dan 1 tetes sel darah 5% Udin.Kemudian di centrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 detik dan dihomogenkan lalu dilihat apakah ada aglutinasi yang terbentuk atau tidak.Pada phase ini digunakan untuk menilai kecocokan antibodi alami dengan antigen eritrosit antara donor dan resipien, sehingga reaksi tranfusi hemolitik yang fatal bisa dihindari. Pada fase ini juga dapat menentukan golongan darah.2).Phase II (fase inkubasi pada suhu 37OC)Hasil negatif pada phase I akan dilanjutkan ke phase II ini untuk mendeteksi antibodi anti-Rh dan meningkatkan sensitivitas tes globulin dengan menggunakan media bovine albumin 22%. Setelah penambahan 2 tetes bouvine albumin 22 % dilakukan inkubasi selama 15 menit pada suhu37OCsebagai suhu yang sama dengan suhu badan, sehingga memberi kesempatan antibodi untuk melekat pada sel. Inkubasi tidak boleh lebih dari 15 menit karena ada kemungkinan terjadi aglutinasi nonspesifik.Setelah diinkubasi dicentrifuge untuk melihat terjadinya aglutinasi atau tidak3).Fase III (Indirect Coombs Test)Hasil negatif pada phase II akan dilanjutkan ke phase III ini merupakan uji antiglobulin. Untuk mendeteksi IgG yang dapat menimbulkan masalah dalam tranfusi yang tidak dapat terdeteksi pada kedua fase sebelumnya.Sebelum di tes, eritrosit dicuci terlebih dahulu dari globulin plasma yang tidak bersifat antizat spesifik dengan NaCl sebanyak 3 kali dan kemudian dicampur dengan 2 tetes Coombs serum, yaitu serum hewan yang mengandung antizat spesifik terhadap globulin human. Kemudian di centrifuge.Adanya aglutinasi menunjukan adanya antizat yang melapisi eritrosit.Setelah tahap uji ketiga phase, dilakuakn Uji validitas berfungsi untuk mengetahui, apakah uji silang yang dilakukan sudah valid atau tidak. Hasil uji validitas pasti menunjukan hasil positif, namun positif lemah. Pada uji validitas, tabung yang menghasilkan hasil positif pada fase sebelumnya tidak di lakukan uji lagi, karena uji ini untuk mengetahui validitas dari uji silang. Uji Validitas dilakukan untuk mengetahui hasil yang diperoleh pada crossmatching test fase I sampai III benar menunjukkan cocok/compatible. Uji validitas dilakukan dengan menambahkan CCC (Coombs Control Cell) sebanyak 1 tetes ke dalam tabung yang hasil coombs testnya negative pada fase III.Coombs control cell merupakan suspensi sel control yang dibuat dari darah golongan O Rh (+) yang sengaja dibuat coated dengan suatu antibodi inkomplit. Penggunaan CCC bertujuan untuk mengetahui apakah coombs serum yang digunakan pada fase III masih aktif atau tidak, bila masih aktif penambahan CCC ke dalam Coombs serum memberi hasil reaksi positif (aglutinasi). Setelah itu baru kemudian tabung yang telah berisi campuran tadi disentrifugasi selama 15 detik dengan kecepatan 3000 rpm. Reaksi dibaca terhadap hemolisis dan aglutinasi secara makroskopis dan mikroskopis. Namun dalam praktikum ini hanya dilakukan pengamatan secara makroskopis saja. Dari uji validitas ini diperoleh hasil, mayor menunjukkan adanya reaksi positif 1 (gumpalan kecil dengan cairan merah disekitarnya), minor, auto control dan auto pool juga menunjukkan adanya reaksi positif 1 (aglutinasi dengan gumpalan kecil dan cairan berwarna merah). Hasil tersebut menunjukkan bahwa uji crossmatching test dinyatakan valid. Hasil positif pada uji validitas dan hasil negative (compatible) dari ketiga fase menunjukkan bahwa darah dari donor aman untuk diberikan atau ditransfusikan kepada pasien.

Dari hasil pengamatan masing-masing kelompok (1,2,3,dan 4) juga menunjukkan hasil yang sama seperti hasil yang kelompok kami dapatkan,dari uji ketig phase yang dilakukan pada ketig tabung (Mayor,Minor,dan Auto Control) menunjukkan hasil negatif yang ditandai dengan tidak terjadinya aglutinasi.Meskipun telah dilakukan tes crossmatch dengan benar, tetap masih ada kemungkinan terjadinya reaksi transfusi, hal ini dapat disebabkan beberapa hal, antara lain : kurang sensitifnya metode pemeriksaan yang digunakan Factor human error reaksi transfusi yang tertunda ( delayed transfusion reaction )Dalam melakukan uji silang cocok serasi / crossmatch, menggunakan teknik metode tabung / metode konvensional yang memiliki beberapa keterbatasan, antara lain : Perlu waktu lama ( time consuming ) Hasil sangat subyektif ( tergantung ketrampilan petugas ) Hasil reaksi tidak stabil sehingga pembacaan reaksi harus segera dilakukan setelah pemutaran karena penundaan pembacaan reaksi dapat mengakibatkan penurunan derajad reaksi, hal ini merupakan penyebab reaksi false negative yang berbahaya bagi pasien. Harus melakukan pencucian sel 3 kali , yang paling vital adalah pencucian sel 3 kali sebelum penambahan Coombs serum, karena jika tahap pencucian 3 kali tidak sempurna atau dikurangi, maka dapat menyebabkan terjadinya reaksi false negatif, karena Coombs dapat dinetralkan oleh serum/plasma dari sample. Sehingga darah yang seharusnya tidak boleh diberikan kepada penderita, dapat lolos karena reaksi false negatif tersebut dimana hal ini sangat membahayakan penerima darah Hasil pembacaan reaksi negatif masih harus dikonfirmasi dengan penambahan Coombs Control Cells ( CCC ) untuk meyakinkan apakah proses pencucian sel sebelum penambahan Coombs serum sudah sempurna Hasil reaksi secara visual tidak dapat didokumentasikan, dokumentasi hanya berupa laporan kerja

Untuk sempurnanya pekerjan kita didalam Cross Match yang akan menyokong hasil-hasil pada tingkatan fase, maka harus diperhatikan benar-benar : Inkubator harus disetel suhunya dengan benar-benar 37oC ( 0,5 o C ). Waktunya inkubasi : lamanya waktu harus diperhatikan dan ditaati, minimal 15 menit. Jika waktunya dikurangi maka antibody incomplet tidak akan coated

X. Kesimpulan1. Uji silang serasi (crossmatching) adalah suatu reaksi silang in vitro antara darah pasien dengan darah donornya yang akan di transfusikan, pemeriksaan ini dilakukan sebelum pelaksanaan transfusi darah2. Uji silang serasi dilakukan dengan empat tahap pengujian. Phase I disiapkan tiga buah tabung untuk mayor(serum OS+sel 5% donor),minor (plasma donor+sel 5% OS)dan auto control(serum OS+sel 5% OS).Phase II dilakukan inkubasi pada suhu 37C pada medium bouvine albumin 22%.Dan phase III dilakukan Indirect Coombs Test,dan yang terakhir dilakukan uji validitas dengan penambahan reagen Coombs Control Cell sebanyak 1 tetes.3. Dari pemeriksaan uji silang serasi yang dilakukan di dapatkan hasil negatif (tidak terjadi aglutinasi) pada ketiga phase uji yang telah dilakukan baik pada tabung mayor,minor maupun auto control,pada masing-masing kelompok I,II,II,IV,dan V.Hal ini menandakan bahwa darah pasien dapat ditransfusikan karena tidak terjadi reaksi antara serum pasien dengan darah donor.Dan pada uji validitas menunjukan hasil positif pada mayor, minor dan autocontrol yang berarti bahwa hasil tes dinyatakan valid.

XI. Daftar Pustaka

L,W.Bunga.SE.Petujuk Praktikum Transfusi Darah.2013.IIK.Bhakti Wiyata.Kediri Guyton, Arthur C. 1990.Fisiologi Manusia dan Mekanisme Penyakit. Terjemahan. Jakarta: Kedokteran EGCNotoatmodjo, S. 2003.Ilmu Kesehatan Masyarakat. Jakarta : PT. Rineka CiptaOmegawati, Wigati. 2010.Biologi Umum. Klaten: Intan PariwaraIsmail.2011. Pemeriksaan pre Transfusi Darah. Online .http://ismail-pemeriksaandarahpretransfusi.blogspot.com/. (Diakses tanggal 8 Mei 2015.Sadikin, Muhamad. 2002.Biokimia Darah. Jakarta : Widya MedikaWaluyo, Joko. 2006.Biologi Dasar. Jember: University PressYatim, Wildan. 1990.Biologi Modern Nistologi. Bandung: TarsitoSatria,Imam.2013.Laporan Biologi Pemeriksaan Golongan Darah. Online. http://imamgery45.blogspot.com/2013/11/laporan-biologi-pemeriksaan-golongan .html. (Diakses pada tanggal 8 Mei 2015).

Denpasar, 19 Mei 2015

a.n Kelompok V

LEMBAR PENGESAHAN

Mengetahui,

Pembimbing I Pembimbing II

(Dr. Ni Kadek Mulyantari, Sp.PK (K) (Kadek Aryadi Hartawiguna, A.Md. AK)

Pembimbing III Pembimbing IV

(I Gede Putu Sudana) (Ni Made Darmaasih) Pembimbing V

(Gusti Ayu Ngurah Wardani)