laporan klt senyawa asam

8/10/2019 Laporan KLT Senyawa Asam

1/25

LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA ANALISIS

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

IDENTIFIKASI SENYAWA ASAM

Golongan / Kelompok : T / D

Claudio Dassmer / 2443012026

Dewi Kartikasari / 2443012145

Elisabeth Wulan / 2443012218

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA

SURABAYA

2014


2/25

LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA ANALISIS

FAKULTAS FARMASI-UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA

SURABAYA

GOLONGAN/KELOMPOK : T/D

TOPIK PRAKTIKUM : KLT Senyawa Asam

TANGGAL PRAKTIKUM : 11 April 2014

NAMA ASISTEN : Senny Y. Esar, S.Si., M.Si., Apt

NAMA MAHASISWA / NRP : Claudio Dassmer / 2443012026

Dewi Kartikasari / 2443012145

Elisabeth Wulan / 2443012218

I. TUJUAN

1. Mahasiswa mampu melakukan identifikasi dan pemisahan senyawa dari

campuran dengan metode KLT

2. Mahasiswa mampu membuat eluen (fase gerak)

3. Menentukan harga Rf senyawa

II. DASAR TEORI

Dalam analisis kimia suatu bahan, maka akan sering dihadapkan pada

pekerjaan-pekerjaan seperti menghilangkan konstituen pengganggu atau

mengisolasikannya maupun memekatkan konstituen yang dikehendaki sebelum

dilakukuan identifikasi maupun pengukuran jumlahnya. Untuk melakukan

analisis kimia tersebut maka kita harus menggunakan suatu metode agar dapat

menentukan hasil yang tepat, kromatografi salah satunya, dan dapat pula

digunakan sebagai analisa secara kuantitatif.


3/25

Kromatografi adalah suatu metoda untuk separasi yang menyangkut komponen

suatu contoh di mana komponen dibagi-bagikan antara dua tahap, salah satu yang

mana adalah keperluan selagi gerak yang lain. Di dalam gas kromatografi adalah

gas mengangsur suatu cairan atau tahap keperluan padat. Di dalam

cairan kromatografi adalah campuran cairan pindah gerakkan melalui cairan yang

lain, suatu padat, atau suatu gel agar. Mekanisme separasi komponen mungkin

adalah adsorpsi, daya larut diferensial, ion-exchange, penyebaran/perembesan,

atau mekanisme lain (David. 2001).

Teknik kromatografi merupakan teknik pemisahan yang sangat sensitif,

yang dapat memisahkan campuran kompleks, seperti minyak bumi yang

merupakan campuran dari ratusan senyawa yang terkandung di dalamnya, dan

masih banyak lagi keunggulan lainnya.

Kromatografi lapis tipis (KLT) dikembangkan tahun 1938 oleh Ismailoff

dan Schraiber. KLT merupakan bentuk kromatografi planar, selain kromatografi

kertas dan elektroforesis. Berbeda debgan kromatografi kolom yang mana fase

diamnya diisikan atau dikemas di dalamnya, pada kromatografi lapis tipis, fase

diamnya berupa lapisan yang seragam ( uniform ) pada permukaan bidang datar

yang didukung oleh lempeng kaca, pelat aluminium atau pelat plastik. Meskipundemikian, kromatografi planar ini dapat dikatakan sebagai bentuk terbuka dari

kromatografi kolom (Khopkar, 2007).

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran

senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya yang

menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan

bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya (Khopkar, 2007).

KLT dapat dipakai dengan dua tujuan. Pertama, dipakai selayaknya

sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, atau preparatif. Kedua,

dipakai untuk menjajaki system pelarut dan system penyangga yang akan dipakai

dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi (Khopkar, 2007).


4/25

KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa senyawa yang

sifatnya hidrofobik seperti lipida lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan

dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk

kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom,

identifikasi senyawa secara kromatografi, dan isolasi senyawa murni skala kecil.

Pelarut yang dipilih untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan

senyawa yang dianalisis. Bahan lapisan tipis seperti silika gel adalah senyawa

yang tidak bereaksi dengan pereaksi pereaksi yang lebih reaktif seperti asam

sulfat (Khopkar, 2007).

Bila KLT dibandingkan dengan KKt, kelebihan khas KLT ialah

keserbagunaan, kecepatan, dan kepekaannya. Keserbagunaan KLT

disebabkanoleh kenyataan bahwa di samping selulosa, sejumlah penjerap yang

berbeda-beda dapat disaputkan pada plat kaca atau penyangga lain dan digunakan

untuk kromatografi (Harborne, 1987; 13).

Adsorben dilapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang

fase diam. Fase bergerak akan merayap sepanjang fase diam dan terbentuklah

kromatogram. Ini dikenal juga sebagai kromatografi kolom terbuka. Metode inisederhana, cepat dalam pemisahan tinggi dan mudah untuk memperoleh kembali

senyawa-senyawa yang terpisahkan (Khopkar, 2007: 155).

Fase gerak yang dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak

sepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara menaik

(ascending ) atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun

(descending ) (Khopkar, 2007).

Kromatografi lapis tipis dalam pelaksanaannya lebih mudah dan lebih

murah dibandingkan dengan kromatografi kolom. Demikian juga peralatan yang

digunakan. Dalam kromatografi lapis tipis, peralatan yang digunakan lebih

sederhana dan dapat dikatakan hampir semua laboratorium dapat melaksanakan

setiap saat secara cepat (Khopkar, 2007).

Beberapa keuntungan dari kromatografi planar ini : (Khopkar, 2007).


5/25

Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.

Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna,

fluorosensi atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet.

Dapat dilakukan elusi secara menaik ( ascending ), menurun ( descending ),

atau dengan cara elusi 2 dimensi.

Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan

ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak.

Pada dasarnya kromatografi lapis tipis (KLT atau TLC = Thin layer

Chromatography) sangat mirip dengan kromatografi kertas, terutama pada cara

melakukannya. Perbedaan nyata terlihat pada media pemisahannya, yakni

digunakan lapisan tipis adsorben halus yang tersangga pada papan kaca,

aluminium atau plastic sebagai pengganti kertas. Lapisan tipis adsorben ini pada

pross pemisahan berlaku sebagai fasa diam (Soebagio, 2002: 87).

Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika

atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik

yang keras. Jel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk

kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat

berpendarflour dalam sinar ultra violet. Fase gerak merupakan pelarut atau

campuran pelarut yang sesuai (Clark, 2007).

Bahan adsorben sebagai fasa diam digunakan silica gel, alumina, dan

serbuk selulosa. Partikel silica gel mengandung gugus hidroksil di permukaannya

yang akan membentuk ikatan hidrogen dengan molekul-molekul polar. Aluminalebih disukai untuk memisahkan senyawa-senyawa polar lemah, sedangkan silica

gel lebih disukai untuk memisahkan molekul-molekul seperti asam-asam amino

dan gula. Magnesium silikat, kalsium silikat, dan arang aktif mungkin juga dapat

digunakan sebagai adsorben (Soebagio, 2002; 87-88).


6/25

Zat yang paling umum digunakan sebagai adsorben adalah alumina, silica

gel, dan bubuk silica. Zat-zat tersebut dibuat bubuk tepung yang selanjutnya

tersebar di atas lempeng dan dibuat sedemikian rupa hingga ketebalannya merata.

Kadang-kadang suatu pengikat, misalnya plaster parte ditambahkan untuk

menambah daya lekat zat tersebut. Setelah kering, selanjutnay diaktivasi dengan

pemanasan dalam oven pada temperature 110 oC selama beberapa jam. Cara

kerjanya sama dengan kromatografi kertas. Deteksi terhadap noda timbul kadang-

kadang lebih mudah dibandingkan kromatografi kertas karena dapat dipakai cara-

cara yang lebih umum (Clark, 2007).

Jel silika adalah bentuk dari silikon dioksida (silika). Atom silikon

dihubungkan oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. Namun, pada

permukaan jel silika, atom silikon berlekatan pada gugus -OH. Jadi, pada

permukaan jel silika terdapat ikatan Si-O-H selain Si-O-Si. Gambar ini

menunjukkan bagian kecil dari permukaan silika (Clark, 2007).

Eluen pengembang dapat berupa pelarut tunggal dan campuran pelarut

dengan susunan tertentu. Pelarut-pelarut pengembang harus mempunyai

kemurnian yang tinggi. Terdapatnya sejumlah kecil air atau zat pengotor lainnyadapat menghasilkan kromatogram yang tidak diharapkan (Soebagio,2002; 88).

Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai Rf yang berguna untuk identifikasi

senyawa. Nilai Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf dari

senyawa standar. Nilai Rf dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh

senyawa dari titik asal dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh pelarut dari titik

asal. Oleh karena itu bilangan Rf selalu lebih kecil dari 1,0 (Khopkar, 2007).

Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah suatu tehnik yang sederhana dan

banyak digunakan. Metode ini menggunakan lempeng kaca atau lembaran plastik

yang ditutupi penyerap untuk lapisan tipis dan kering bentuk silika gel, alomina,

selulosa dan polianida. Untuk menotolkan larutan cuplikan pada lempeng kaca,

pada dasarnya dgunakan mikro pipet/ pipa kapiler. Setelah itu, bagian bawah dari


7/25

lempeng dicelup dalam larutan pengulsi di dalam wadah yang tertutup (Chamber)

(Rudi, 2010)

Kromatografi lapis tipis digunakan untuk memisahkan komponen-komponen atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh pase diam dibawah

gerakan pelarut pengembang. Pada dasarnya KLT sangat mirip dengan

kromatografi kertas , terutama pada cara pelaksanaannya. Perbedaan nyatanya

terlihat pada fase diamnya atau media pemisahnya, yakni digunakan lapisan tipis

adsorben sebagai pengganti kertas. Bahan adsorben sebagai fasa diam dapat

digunakan silika gel, alumina dan serbuk selulosa. Partikel selika gel mengandung

gugus hidroksil pada permukaannya yang akan membentuk ikatan hidrogen

dengan molekul polar air. Fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga

mengandung substansi yang mana dapat berpendarflour dalam sinar ultra violet.

Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.

Gambar kromatografi lapis

Pada identifikasi noda atau penampakan noda, jika noda sudah bewarna

dapat langsung diperiksa dan ditentukan harga R f . R f merupakan nilai dari Jarak

relative pada pelarut. Harga R f dihitung sebagai jarak yang ditempuh oleh

komponen dibagi dengan jarak tempuh oleh eluen ( fase gerak ) untuk setiap

senyawa berlaku rumus sebagai berikut:


8/25

R f juga menyatakan drajat retensi suatu komponen dalam fase diam. Karenan itu

R f juga disebut factor referensi.

Pemisahan campuran dengan cara kromatografi didasarkan pada perbedaan

kecepatan merambat antara partikel-partikel zat yang bercampur pada medium

tertentu. Dalam kehidupan sehari-hari pemisahan secara kromatografi dapat kita

temui pada rembesan air pada dinding yang menghasilkan garis-garis dengan

jarak ternentu.

KLT dapat digunakan untuk memisahkan berbagai senyawa seperti ion

anorganik, kompleks senyawa senyawa organik dengan anorganik, dan senyawa

senyawa organik baik yang terdapat di alam dan senyawa senyawa organik

sintetik. Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan

kromatografi kertas ialah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih

sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat dilaksanakan dengan lebih cepat.

Banyak pemisahan yang memakan waktu berjam-jam bila dikerjakan dengan

kromatografi kertas, tetapi dapat dilaksanakan hanya beberapa menit saja bila

dikerjakan dengan KLT. Empat macam adsorben yang umum dipakai ialah silika

gel, alumina, kieselguhr, dan selulosa. Sampel yang merupakan campuran

senyawa yang akan dipisahkan, dilarutkan dalam zat pelarut yang mudah

menguap, misalnya kloroform atau zat pelarut lain yang serupa, yang mempunyai

titik didih antara 50-100 C. Tetesan sampel harus di usahakan sekecil mungkin

dengan meneteskan berulang kali, dengan di biarkan mengering sebelum tetesan

berikutnya dikerjakan. Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas

prinsip like dissolves like , yakni untuk memisahkan sampel yang bersifat non

polar digunakan sistem pelarut yang bersifat non polar juga. Penggunaan sinar

ultraviolet dapat memberikan fluoresensi pada plat yang mengandung unsur fosfor

(Adnan, 1997).

Berikut merupakan rumus menghitung Rf :


9/25

Ada dua cara untuk menyelesaikan analisis sampel yang tidak berwarna:

1. 1. Menggunakan pendarflour

Mungkin anda masih ingat apa yang telah saya sebutkan bahwa fase diam pada

sebuah lempengan lapis tipis seringkali memiliki substansi yang ditambahkan

kedalamnya, supaya menghasilkan pendaran flour ketika diberikan sinar

ultraviolet (UV). Itu berarti jika anda menyinarkannya dengan sinar UV, akan

berpendar.

Pendaran ini ditutupi pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada,meskipun bercak-bercak itu tidak tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Itu

berarti bahwa jika anda menyinarkan sinar UV pada lempengan, akan timbul

pendaran dari posisi yang berbeda dengan posisi bercak-bercak. Bercak tampak

sebagai bidang kecil yang gelap.

Sementara UV tetap disinarkan pada lempengan, anda harus menandai posisi-

posisi dari bercak-bercak dengan menggunakan pinsil dan melingkari daerah

bercak-bercak itu. Seketika anda mematikan sinar UV, bercak-bercak tersebut

tidak tampak kembali.

1. 2. Penunjukkan bercak secara kimia

Dalam beberapa kasus, dimungkinkan untuk membuat bercak-bercak menjadi

tampak dengan jalan mereaksikannya dengan zat kimia sehingga menghasilkan

produk yang berwarna. Sebuah contoh yang baik adalah kromatogram yang

dihasilkan dari campuran asam amino.

Kromatogram dapat dikeringkan dan disemprotkan dengan larutan ninhidrin.

Ninhidrin bereaksi dengan asam amino menghasilkan senyawa-senyawa

berwarna, umumnya coklat atau ungu.

Dalam metode lain, kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian

ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan gelas arloji)


10/25

bersama dengan kristal iodium. Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan

bercak pada kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada

lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak kecoklatan.

Dalam metode lain, kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian

ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan gelas arloji)

bersama dengan kristal iodium. Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan

bercak pada kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada

lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak kecoklatan.

Penggunaan kromatografi lapis tipis untuk mengidentifikasi senyawa-senyawa

Anggaplah anda mempunyai campuran asam amino dan ingin menemukan asam

amino-asam amino tertentu yang terkandung didalam campuran tersebut. Untuk

sederhananya, mari kira berasumsi bahwa anda mengetahui bahwa campuran

hanya mungkin mengandung lima asam amino.

Setetes campuran ditempatkan pada garis dasar lempengan lapis tipis dan bercak-

bercak kecil yang serupa dari asam amino yang telah diketahui juga ditempatkan

pada disamping tetesan yang akan diidentifikasi. Lempengan lalu ditempatkan

pada posisi berdiri dalam pelarut yang sesuai dan dibiarkan seperti sebelumnya.

Bagian kiri gambar menunjukkan lempengan setelah pelarut hampir mencapai

bagian atas dari lempengan. Bercak-bercak masih belum tampak. Gambar kedua

menunjukkan apa yang terjadi setelah lempengan disemprotkan ninhidrin.

Tidak diperlukan menghitung nilai Rf karena anda dengan mudah dapat

membandingkan bercak-bercak pada campuran dengan bercak dari asam amino

yang telah diketahui melalui posisi dan warnanya. Dalam contoh ini, campuran

mengandung asam amino 1, 4 dan 5.


11/25

Fase Diam

Sifat fase diam yang satu dengan fase diam yang lain berbeda karena strukturnya,

ukurannya, kemurniannya, zat tambahan sebagai pengikat dll. Fasa diam yang

digunakan TLC tidak sama dengan yang digunakan untuk kromatografi kolom,

terutama karena ukuran dan zat yang ditambahkan. Fase diam dijual dengan

spesifikasi tertentu, iaitu ukuran (diameter) dalam mesh dan untuk kegunaannya

(mis: untuk TLC atau kromatografi kolom).

Beberapa fase diam yang banyak dijual dipasaran:

Silika gel

Silika gel merupakan fase diam yang sering digunakan pada TLC. Dalam

perdagangan dijual dengan variasi ukuran (diameter) 10- 40m. Makin kecil

diameter akan makin lambat kecepatan alir fase geraknya dengan demikian

mempengaruhi kualitas pemisahan. Luas permukaan silica gel bervariasi dari 300-

1000 m2/g. Bersifat higroskopis, pada kelembaban relatif 45-75% dapat mengikat

air 7-20%. Macam-macam silka gel yang dijual dipasaran:

Silika gel dengan pengikat. Pada umumnya digunakan pengikat gypsum, (CaSO4

5-15%). Jenis ini diberi nama Silika gel G. Ada juga menggunakan pengikat pati

(starch) dan dikenal Silika gel S, penggunaan pati sebagai pengikat mengganggu penggunaan asam sulfat sebagai pereaksi penentuan bercak.

Silika gel dengan pengikat dan indicator flouresensi. Jenis silica gel ini sama

seperti silika gel diatas dengan tambahan zat berfluoresensi bila diperiksa dibawah

lampu UV A, panjang atau pendek. Sebagai indicator digunakan timahkadmium

sulfida atau mangan-timah silikat. Jenis ini disebut Silika gel GF atau Silika gel

GF254 (berflouresensi pada 254 nm). Silika gel tanpa pengikat, dikenal dengannama Silika gel H atau Silika gel N.

Silika gel tanpa pengikat tetapi dengan indicator flouresensi.

Silika gel untuk keperluan pemisahan preparative


12/25

Alumina

Banyak digunakan setelah silika gel, alumina termasuk kelompok fase diam yang

beraktifitas tinggi. Alumina yang digunakan TLC bersifat sedikit basa (pH 9), ada

juga yang bersifat netral (pH 7) dan alumina yang bersifat asam (pH 4). Juga

digunakan CaSO4 sebagai pengikat yang dapat menurunkan bebasaan pada

tinggkat tertentu. Sepertihalnya Silica gel, alumina dikenal dengan atau tanpa

pengikat dan bahan indicator. Pemberian namapun identik dengan silika gel

dengan code G.H.P.F.

Selulosa

Menggunakan selulosa sebagai fase diam maka mekanisme pemisahannya sama

seperti mekanisme pemisahan pada kromatografi kertas. Perbedaannya hanya

serat selulosenya pada TLC/KLT lebih pendek dari pada serat selulosa

kromatografi kertas. Panjang serat bervariasi 2- 20 . Serat lebih pendek

menyebabkan difusi rendah selama elusi dan menghasilkan bercak yang sempit

(lebih kecil). Selulosa untuk TLC terdapat dim bentuk selulosa serat asli

(contohnya MN 300) dan selulosa mikrokristal (contohnya Avicel). Fase diam

selulosa biasanya digunakan senyawa yang bersifat polar.

Fase diam-jel silika

Jel silika adalah bentuk dari silikon dioksida (silika). Atom silikon dihubungkan

oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. Namun, pada permukaan

jel silika, atom silikon berlekatan pada gugus -OH.

Permukaan jel silika sangat polar dan karenanya gugus -OH dapat membentuk

ikatan hidrogen dengan senyawa-senyawa yang sesuai disekitarnya, sebagaimana

halnya gaya van der Waals dan atraksi dipol-dipol.

Fase diam lainnya yang biasa digunakan adalah alumina-aluminium oksida. Atom

aluminium pada permukaan juga memiliki gugus -OH. Apa yang kita sebutkan

tentang jel silika kemudian digunakan serupa untuk alumina.


13/25

Penentuan jumlah komponen senyawa dapat dideteksi dengan kromatografi lapis

tipis (KLT) dengan menggunakan plat KLT yang sudah siap pakai. Terjadinya

pemisahan komponen-komponen pada KLT dengan Rf tertentu dapat dijadikan

sebagai panduan untuk memisahkan komponen kimia tersebut dengan

menggunakan kolom kromatografi dan sebagai fasa diam dapat digunakan silika

gel dan eluen yang digunakan berdasarkan basil yang diperoleh dari KLT dan

akan lebih baik kalau kepolaraan eluen pada kolom kromatografi sedikit dibawah

kepolaran eluen pada KLT (Lenny, 2006)

Pada hakekatnya KLT merupakan metoda kromatografi cair yang melibatkan dua

fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Fasa geraknya berupa campuran pelarut

pengembang dan fasa diamnya dapat berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai

permukaan penyerap (kromatografi cair-padat) atau berfungsi sebagai penyangga

untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-cair). Fasa diam pada KLT sering disebut

penyerap walaupun berfungsi sebagai penyangga untuk zat cair di dalam sistem

kromatografi cair-cair. Hampir segala macam serbuk dapat dipakai sebagai

penyerap pada KLT, contohnya silika gel (asam silikat), alumina (aluminium

oksida), kiselgur (tanah diatomae) dan selulosa. Silika gel merupakan penyerap

paling banyak dipakai dalam KLT (Iskandar, 2007)


14/25

Berikut ini adalah beberapa penjerap fase diam yang digunakan pada KLT :


15/25

Fase Gerak

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan

mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang palingsederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua

pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi

secara optimal.

Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak :

Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT

merupakan teknik yang sensitif.

Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf

terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silica gel,

polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solute yang

berarti juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit

polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzene

akan meningkatkan harga Rf secara signifikan.

Solut-solut ionik dan solute-solut polar lebih baik digunakan campuran

pelarut sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan methanol dengan

perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam etanoat atau ammonia

masing-masing akan meningkatkan solute-solut yang bersifat basa dan

asam.

Pencampuran dari campuran fase gerak juga harus diperhatikan. Yang

digunakan sebagai fase gerak biasanya adalah pelarut organik. Dapat digunakan

satu macam pelarut organic saja ataupun campuran.

Bilamana fase gerak merupakan campuran pelarut organik dengan air

maka mekanisme pemisahan adalah partisi. Pemilihan pelarut organic ini sangat

penting karena akan menentukan keberhasilan pemisahan. Pendekatan polaritas

adalah yang paling sesuai untuk pemilihan pelarut. Senyawa polar


16/25

akan lebih mudah terelusi oleh fase gerak yang bersifat polar dari pada fase gerak

yang non polar. Sebaliknya, senyawa non polar lebih mudah terelusi oleh fase

gerak non polar dari pada fase gerak yang polar.

Pelarut organik yang sering digunakan sebagai fase gerak (deret eluotropik)


17/25

Indeks Kepolaran Pelarut Organik

Solvent PolarityIndex SolventPolarityIndex

Acetic Acid 6.2 Heptane 0Acetone 5.1 Hexane 0Acetonitrile 5.8 Pentane 0Benzene 2.7 Cyclohexane 0.2n-Butanol 4 Trichloroethylene 1

Butyl Acetate 3.9 Carbon Tetrachloride 1.6

Carbon Tetrachloride 1.6 Di-Iso-Propyl Ether 2.2

Chloroform 4.1 Toluene 2.4

Cyclohexane 0.2 Methyl-t-Butyl Ether 2.5

1,2-Dichloroethane 3.5 Xylene 2.5Dichloromethane 3.1 Benzene 2.7Dimethylformamide 6.4 DiEthyl Ether 2.8Dimethyl Sulfoxide 7.2 Dichloromethane 3.1Dioxane 4.8 1,2-Dichloroethane 3.5Ethanol 5.2 Butyl Acetate 3.9Ethyl Acetate 4.4 Iso-Propanol 3.9DiEthyl Ether 2.8 n-Butanol 4Heptane 0 Tetrahydrofuran 4Hexane 0 n-Propanol 4Methanol 5.1 Chloroform 4.1Methyl-t-Butyl Ether 2.5 Ethyl Acetate 4.42-Butanone 4.7 2-Butanone 4.7Pentane 0 Dioxane 4.8n-Propanol 4 Acetone 5.1Iso-Propanol 3.9 Methanol 5.1Di-Iso-Propyl Ether 2.2 Ethanol 5.2Tetrahydrofuran 4 Acetonitrile 5.8Toluene 2.4 Acetic Acid 6.2Trichloroethylene 1 Dimethylformamide 6.4Water 9 Dimethyl Sulfoxide 7.2Xylene 2.5 Water 9


18/25

Pengamatan (mendeteksi) bercak / visualisasi

Cara mengamati bercak pada TLC dapat digolongkan menjadi dua :

Pertama dengan cara merusakkan / mereaksikan komponen/senyawa yang ada

bercak itu dan Kedua tanpa merusakkan komponen / senyawa. Cara pertama

dengan menyemprotkan pereaksi penanda.

Banyak pereaksi-pereaksi yang digunakan dapat dilihat dalam literature

dan dijual dipasaran (niaga). Contoh pereaksi semprot yang umum untuk senyawa

organik adalah asam sulfat dalam metanol, selanjutnya bercak dipanaskan di

dalam oven, sebaiknya digunakan oven yang ada jendela kacanya sehingga dapat

diikuti perubahan bercak selama pemanasan menjadi bercak warna hitam.

Pada dasarnya adalah reaksi oksidasi pada senyawa organic oleh asam

sulfat. Pereaksi lain adalah dengan disemprot dengan larutan lodium dan paling

mudah adalah dengan memasukkan plat kedalam bejana yang berisi uap lodium

(Kristal lodium diletakkan dalam bejana, tidak merusak 75% senyawa). Contoh

pereaksi semprot dan penggunaannya dapat dilihat pada tabel dibawah.

Cara ke dua, yang tidak merusak komponen/ senyawa di bercak. Untuk

senyawa berwarna atau berpendar dibawah lampu UV (berfluoresensi) tidak ada

masalah menggunakan silika tanpa tambahan zat berpendar. Sedang untuksenyawa yang tidak berpendar dibawah lampu UV digunakan fase diam dengan

tambahan zat berpendar.

Macam pereaksi warna / penanda dan penggunaannya


19/25

III. CARA KERJA

1. Membuat fase gerak

- Kloroform : Aseton ( 4 : 1 )

Ambil kloroform sebanyak 14,4 ml

Dan Aseton sebanyak 3,6 ml

Masukan dalam beaker glass

aduk ad larut

Pindahkan dalam Chamber

Biarkan jenuh (30menit)

- Etilasetat : Metanol : NH 4OH (85:10:5)

Ambil Etilasetat 15,3 ml, Metanol 1,8 ml

Dan NH 4OH 0,9 ml

Masukan dalam beaker glass

aduk ad larut

Pindahkan dalam Chamber


20/25

Biarkan jenuh (30menit)

2. Membuat Larutan Uji dan Larutan Pembanding

Ambil sedikit (qs) masing-masing dari Sampel,

Parasetamol, Fenobarbital, Salisilamida, Asam Mefenamat

Masukkan dalam tabung reaksi kecil

Tambahkan Alkohol

Tutup dengan kapas

3. Penotolan Pada Lempeng Gilica Gel

Masing-masing larutan uji dan pembanding ditotol kan satu pipa kapilerdengan jarak 1cm

Biarkan totolan kering

Masukan dalam chember untuk di eluasi

Angkat jika eluasi sudah sampai batas garis

Keringkang silika lalu amati bercak


21/25

Dibawah UV 254 nm

Hitung harga Rf

IV. DATA PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

Pembuatan Eluen

Kloroform = 4/5x18 = 14,4 ml

Aseton = 1/5x18 = 3,6 ml

Etil asetat = 85/100x18 = 15,3 ml

Metanol = 10/100x18 = 1,8 ml

NH 4OH = 5/100x18 = 0,9 ml

Harga Rf

Fase Gerak Kloroform : Aseton ( 4 : 1 )

Rf Paracetamol = 1,5/7,7 = 0,1948 = 2,6/7,7 = 0,34

Rf As. Mefenamat = 5,25/7,7 = 0,68

Rf Fenobarbital = 4,2/7,7 = 0,55

Rf Salisilamida = 4,2/7,7 = 0,55

Rf Sampel = 4,2/7,7 = 0,55

Fase Gerak Etilasetat : Metanol : NH 4OH (85:10:5)

Rf Paracetamol = 3,7/8 = 0,4625 = 5,8/8 = 0,725


22/25

Rf As. Mefenamat = 2,7/8 = 0,3375

Rf Fenobarbital = 6,6/8 = 0,825

Rf Salisilamida = 7/8 = 0,875

Rf Sampel = 7/8 = 0,875

V. PEMBAHASAN

Analisis kuantitatif dengan KLT ada dua macam. Yang pertama noda

cuplikan setelah dikembangkan diukur langsung luasnya atau kerapatannya(density). Secara manual atau menggunakan alat alat yang disebut densitometer.

Tehnik ini disebut evaluasi in one. L uas atau kerapatan noda dibandingkan

dengan kerapatan noda senyawa standar yang telah diketahui konsentrasinya. Cara

yang kedua, noda diambil dengan cara dikerok atau diisap dengan suatu alat

kemudian dilarutkan dalam suatu pelarut dan larutan terakhir diamati dengan

spectrometer UV vis atau ditimbang (gravimetric) setelah pelarut diuapkan.

Cara gravimetric hanya dapat dilakukan apabila jumlah cuplikan cukup besar.Cara ini tidak membutuhkan standar pembanding

Pada percobaan ini, tehnik kromatografi lapis tipis yang digunakan adalah

suatu plat tipis (aluminium) yang berfungsinya untuk tempat berjalannya

adsorbens sehingga proses migrasi analit oleh solventnya bisa berjalan. Hal inilah

yang membedakan antara kromatografi kertas dengan kromatografi lapis tipis.

Yang dimana pada KLT menggunakan plat tipis sedangkan pada KK

menggunakan kertas (lapisan selulosa) sehingga proses elusinya lebih lama (kira

kira 10 20 menit lebih lama dari KLT). Perbedaan lainnya dari kedua

kromatografi tersebut adalah pembentukan noda pada adsorbensnya dimana pada

KLT noda yang dihasilkan lebih tajam dibandingkan noda yang nampak dalam

KK. Hal ini disebabkan pada KK penyusun dari adsorbens berupa selulosa yang

dapat mengikat air, sehingga ketika dielusi dengan suatu pelarut atau fase gerak


23/25

maka noda yang dihasilkan mengalami penyebaran akibat terdapatnya gugus OH

dalam adsorbens yang masih tertingal dalam fase diamnya sehingga penampakan

nodanya terlihat lebih pudar dan bentuk nodanya tidak bulat. Sedangkan dalam

KLT adsorbens yang digunakan berupa slika gel (SiO 2) yang tidak mengikat

molekul air, sehingga noda yang tercipta lebih terfokus dan tajam.

Faktor penyebab yang mempengaruhi nilai Rf pada KLT seperti kualitas

adsorben, ketebalan lapisan, kejenuhan ruang kromatografi, tehnik

pengembangan (elusi), suhu, dan kualitas pelarut. Fase gerak adalah campuran 2

pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah

diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Pada

percobaan kali ini digunakan campuran aseton-HCl. Digunakan HCl karena HCl

dapat mengikat zat sampel dan membawanya menuju garis akhir plat dengan

bantuan aseton yang merupakan zat organic yang mudah menguap.

Pencampuran campuran fase gerak memperhitungkan dari kepolaran dari

masing-masing pelarut. Pencampuran harus didahulukan dari yang paling polar,

semi polar dan yang paling non polar. Hal tersebut dikarenakan bila fase non polar

langsung ditambahkan pada pelarut fase yang polar maka kedua pelarut tesebut

tidak akan menyatu karena perbedaan derajat kepolaran yang sangat jauh. Bila

diteruskan, maka pada chamber akan terbentuk dua fase eluen yang menyebabkan

hasil yang nampak akan buruk.

Penentuan nilai Rf suatu standar analit pada KLT pada dasarnya sama

dengan penentuan nilai Rf dalam KK, dimana nilai Rf ditentukan dengan

membandingkan jarak noda yang dihasilkan dari migrasi solvent/ pelarutnya

dengan jarak sample/ standar. Nilai Rf menyatakan ukuran daya pisah suatu zatdengan kromatografi planar (KK mapun KLT), dimana jika nilai Rf-nya besar

berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent (eluenya) maksimum sedangkan jika

nilai Rf-nya kecil berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent (eluenya)

minimum. Tidak munculnya noda dalam percobaan kali ini dapat disebabkan oleh

faktor faktor yang mempengaruhi nilai Rf seperti diatas, akan tetapi ada juga

kemungkinan lain misalnya noda yang tidak nampak, sehingga untuk


24/25

menampakkan noda tersebut harus direaksikan dengan reagen penampak warna

berupa ion logam transisi untuk membentuk kompleks, karena salah satu ciri

senyawa kompleks adalah berwarna akibat adanya bilangan koordinasi dari atom

pusatnya. Adapun untuk identifikasi dan deteksi zat setelah terbentuknya noda

dilakukan dengan beberapa cara misalnya; planimetri, densitometri,

spektrofotometri, dan fluorensis, dimana masing masing alat tersebut memeliki

kelebihan dan kekurangan yang jika dijabarkan akan lebih panjang dan rumit

karena dihubungkan dengan proses penggunaanya.

VI. KESIMPULAN

1. Sampel yang diberikan merupakan salisilamida.


25/25

laporan klt senyawa asam

Documents