cawan tuang

8/19/2019 Cawan Tuang

1/5

Isolasi metode cawan tuang adalah teknik inokulasi mikroorganisme di

dalam media agar dengan cara mencampurkan media agar yang masih cair dengan

kultur mikroorganisme. Kelebihan metode ini adalah mikroorganisme yang

tumbuh dapat tersebar merata pada media agar. Akan tetapi metode ini dianggap

kurang praktis digunakan di lapangan karena membutuhkan banyak peralatan

untuk mencairkan dan membekukan media agar. Pada cawan tuang ini peralatan

utama yang perlu dipersiapkan dalam adalah cawan petri, mikropipet, media NA,

dan sampel yang sudah melalui tahap pengenceran. Cawan petri digunakan untuk

mengkultur mikroorganisme. Cawan petri dipilih karena memiliki permukaan

yang relatif lebih luas untuk pertumbuhan dan pengembangan mikroorganisme.

Cawan petri terdiri dari dua bagian. Bagian bawah cawan yang mengandung

medium dan bagian atas cawan yang berfungsi sebagai penutup. emua peralatan

yang akan digunakan harus sudah disterilisasi terlebih dahulu agar aseptis dan

steril dan hasil isolasi yang didapatkan akurat.

Prinsip ker!a dari metode ini adalah mengencerkan mikroorganisme yang

akan ditumbuhkan lalu dengan "olume tertentu sampel biakan dimasukkan dalam

cawan petri kemudian medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan dituang

dalam cawan. Pengenceran dilakukan agar setelah inkubasi, koloni yang terbentuk

pada cawan tersebut berada dalam !umlah yang dapat dihitung. #imana !umlah

terbaik adalah antara $% sampai $%% sel mikroorganisme per ml, per gram atau per

cm permukaan. &enurut 'ardia( )*++-, !ika pada semua pengenceran dihasilkan

koloni bakteri $% koloni pada cawan petri, maka pengenceran yang dilakukan

terlalu tinggi. sedangkan !ika pada semua pengenceran dihasilkan koloni bakteri /

$%% koloni pada cawan petri, maka pengenceran yang dilakukan terlalu rendah.

etelah dilakukan pengenceran, sampel mikroorganisme perlu dipindahkan

dari satu tempat ke tempat lainnya. Pemindahan tersebut disebut subculturing dan

harus dilakukan dalam kondisi lingkungan steril untuk mencegah kemungkinan

ter!adinya kontaminasi. Pemindahan sampel mikroorganisme dilakukan dengan

menggunakan mikropipet. Penggunaan mikropipet bertu!uan agar dapat diperoleh

"olume sampel mikroorganisme dengan ukuran yang tepat. Pada isolasi ini

digunakan mikropipet dengan penentuan "olume sebesar * m0. 1ingkat


2/5

pengenceran yang akan diisolasi pada cawan tuang adalah pengenceran *%2*,

pengenceran *%2$, dan pengenceran *%23. elan!utnya masing2masing sampel

dimasukkan ke dalam cawan petri yang berbeda dan beri label sesuai dengan asal

tabungnya. 1uangkan !uga media ke dalam cawan petri kosong dan beri label

bertuliskan blanko. Kegunaan dari blanko adalah sebagai pembanding atau

"ariabel kontrol dari percobaan ini. Keadaan pada blanko merupakan keadaan

awal pada setiap sektor sehingga setiap perubahan pada tiap2tiap sektor dapat

terlihat dengan membandingkannya dengan keadaan blanko. aat memindahkan

sampel mikroorganisme dan menuangkan media dibutuhkan kondisi aseptik atau

steril, baik pada alat maupun proses, untuk menghindari kontaminasi, yaitu

masuknya mikroorganisme yang tidak diinginkan.

etelah sampel dimasukkan dalam cawan petri, tuangkan media dalam

ketiga cawan tersebut. &edia diperoleh dari agar yang sudah dicairkan. Pada saat

menuang media suhu media di!aga 4 5%oC. Bila suhu terlalu tinggi dikhawatirkan

mikroorganisme dalam sampel akan mati. 1etapi bila suhunya terlalu rendah

media mulai mengental dan menyulitkan saat proses penuangan.

Kemudian cawan petri digeserkan di permukaan me!a. Cawan petri diputar

searah !arum !am sebanyak 3 kali, berlawanan arah !arum !am 3 kali, dan terakhir

dengan membentuk pola angka delapan sebanyak 3 kali. Ini dilakukan agar

mikroorganisme tersebar merata di seluruh media agar. etelah itu biarkan cawan

petri beberapa saat supaya agar membeku dan dapat di inkubasi.

ampel mikroorganisme yang telah dipindahkan perlu ditumbuhkan. Agar

tumbuh baik, diperlukan ruangan yang mampu mempertahankan kondisi suhu.

Kebutuhan utama dalam kultur mikroorganisme adalah mengupayakan mereka

dapat tumbuh dalam temperatur optimum. &aka dari itu, proses inkubasidilakukan di dalam bo6 selama ... hari. Pada saat inkubasi, cawan petri harus

disimpan dengan posisi terbalik yaitu dengan bagian tutupnya terletak di bagian

bawah. Posisi demikian bertu!uan untuk mencegah pengembunan pada permukaan

tutup selama pembekuan media. Pengembunan dicegah supaya uap air tidak


3/5

menetes ke permukaan media agar. Pada hari ke..., dilakukan pengecekan. Karena

sudah ditumbuhi oleh koloni2koloni bakteri, maka hasil isolasi cawan tuang

dipindah ke dalam kulkas )refrigerator-. Kondisi lembab pada kulkas dapat

mencegah ter!adinya dehidrasi dari media. Pemindahan ini dimaksudkan untuk

memperlambat pertumbuhan koloni bakteri, karena pengamatan isolasi cawan

tuang akan dilakukan ... hari kemudian. 7asil koloni yang tumbuh sebagai

berikut8

Pada cawan dengan pengenceran *%2* !umlah koloni yang tumbuh cukup

banyak dan berukuran kecil. Pada cawan kemudian dilakukan pengamatan bentuk,

ele"asi,

dan

tepiankoloni.

Pada cawan ini, sebagian besar koloninya memiliki bentuk bundar, tepian licin,

dan ele"asi cembung.7ampir semua koloni berwarna putih susu namun ada pula

yang sedikit kekuningan. Cawan ini nantinya akan digunakan pada col ony

counter untuk dihitung !umlah selnya.

7asil Isolasi Cawan

1uang Pengenceran

*%2*

7asil Isolasi Cawan

1uang Pengenceran

*%2$


4/5

Pada cawan dengan pengenceran *%2$ !umlah koloni yang tumbuh sedikit

dengan satu koloni berukuran besar, koloni berukuran sedang, dan cukup

banyak koloni berukuran sangat kecil. Pada cawan kemudian dilakukan

pengamatan bentuk, ele"asi, dan tepian koloni. Pada cawan ini, koloni yang

paling besar memiliki bentuk berbenang2benang, tepian berlekuk, dan ele"asi

datar. Cawan ini tidak

bisa digunakan untuk

penghitungan colony

counter karena !umlah

total koloni tidak

memenuhi syarat !umlah

minimal koloni. Koloni

paling besar pada cawan ini nantinya akan diambil untuk di!adikan sampel biakan

isolasi cawan gores.

7asil Isolasi Cawan

1uang Pengenceran

*%23


5/5

Pada cawan dengan pengenceran *%23 !umlah koloni yang tumbuh sedikit

dengan dua koloni berukuran kecil. 7al ini mungkin disebabkan pada saat

menuang media, suhu media terlalu tinggi. elain itu bisa !uga disebabkan karena

tingkat pengenceran yang terlalu tinggi. Pada cawan ini tidak dilakukan

pengamatan bentuk, ele"asi, dan tepian koloni karena ukuran koloninya yang

terlalu kecil sehingga menyulitkan pengamatan. Kedua koloni ini berwarna putih

susu. Koloni pada cawan ini tidak digunakan untuk penghitungan colony counter

karena tidak memenuh i syarat !umlah minimal koloni.

Pada blanko ada koloni yang tumbuh. Koloni ini adalah kontaminan.

Kontaminan ini disebabkan kelalaian praktikan yang kurang aseptis saat

melakukan metode isolasi.

Blanko

)Ada Kontaminasi-

cawan tuang

Documents