188835297 laporan pemeriksaan minyak atsiri secara kromatografi (prakt nosi m. atsiri)

LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI DAN FITOKIMIA PEMERIKSAAN MINYAK ATSIRI SECARA KROMATOGRAFI"

DISUSUN OLEH :

KELOMPOK 1

M. SAIFUL AMIN 1111102000056

EVI NURUL HIDAYATI 1111102000131

LAILA NOVILIA MAKMUN 1111102000050

ARINI EKA PRATIWI 1111102000051

ANNISA NURUL AZ-ZAHRA 1111102000029

ATI MARYANTI 1111102000037

KARIMAH YULIANTI 1111102000033

SYAIMA 1111102000056

FARMASI IIIB

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

2012

Pemeriksaan Minyak Atsiri Secara Kromatografi 2

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Dunia farmasi adalah dunia yang tak lepas dari penelitian dan penelitian.

Penelitian ini sangat penting guna adanya inovasi obat yang ada. Inti dari bahan obat ini

sebenarnya adalah dari bahan alam. Dari bahan alam inilah kemudian dikembangkan

obat-obat sintesis.

Dalam hal penelitian dan formulasi, bahan alam memegang peran penting. Hal ini

dikarenakan bahan sintetis pada mulanya terinsirasi dari bahan alam. Banyak sekali

bahan alam yang sangat bermanfaat bagi kehidupan, khususnya dunia farmasi.

Pembahasan minyak menjadi menarik karena banyak sekali tanaman yang

mengandung minyak, terutama minyak atsiri. Banyak peluang bisnis yang bisa

dimanfaatkan dengan adanya ekstraksi minyak atsiri ini. Salah satu manfaat minyak atsiri,

misalnya minyak atsiri cengkeh adalah sebagai obat sakit gigi, obat luka berdarah, dan

lain-lain.

Minyak atsiri adalah zat lipofil yang dapat didestilasi(disuling) dengan uap air,

aroma kuat, dapat membiaskan cahaya, bersifat cair dan umumnya berasal dari alam

nabati. Zat organik pada minyak atsiri disusun dari unsure C, H, dan O, berupa senyawa

alifatis atau aromatis meliputi kelompok hidrokarbon, ester, eter, aldehid, dan lain

sebagainya.

Minyak atsiri memiliki kandungan yang beragam tergantung dari tanaman

asalnya, ada yang mengandung eugenol, mentol, anetol, dan lain-lain. Untuk memeriksa

dan mengetahui kandungan yang terdapat dalam suatu minyak atsiri, maka dilakukanlah

suatu pemeriksaan dengan cara kromatografi yaitu Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

1.2. Tujuan

Adapun tujuan pemeriksaan minyak atsiri secara kromatografi adalah sebagai berikut:

Sesudah melakukan praktikum, mahasiswa diharapkan dapat memisahkan campuran

senyawa yang terdapat minyak atsiri dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).


1.3. Manfaat

Adapun manfaat dari praktikum kali ini adalah:

1. Mahasiswa mampu memisahkan campuran senyawa yang terdapat dalam minyak

atsiri dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

2. Mahasiswa mampu mengetahui kandungan yang ada pada minyak atsiri.


BAB II

KAJIAN PUSTAKA

Kromatografi lapis tipis (KLT) atau Thin layer Chromatography (TLC) adalah metode

pemisahan fisikokimia dimana komponen yang dipisahkan didistribusikan diantara 2 fase

yaitu fase diam (Stationer Phase) dan fase gerak (Mobile Phase). Metode ini adalah salah

satu teknik kromatografi yang paling awal, tersedia sangat banyak uji berbasis KLT dan

monografi farmakope yang mencerminkan sejauh mana teknik ini telah dikembangkan

sebagai teknik pengendalian mutu dasar untuk pengotor minor. Alasan keunggulannya dalam

hal ini dikarenakan fleksibilitasnya untuk dapat mendeteksi hampir semua senyawa, bahkan

beberapa senyawa anorganik.

Berdasarkan terikatnya suatu komponen pada fase gerak, komponen-komponen suatu

campuran dapat dipisahkan. Komponen yang kurang larut dalam fase gerak atau yang lebih

kuat terserap atau terabsorbsi pada fase diam akan tertinggal, sedangkan komponen yang

lebih larut atau kurang terserap atau terabsorbsi pada fase diam akan bergerak lebih cepat.

Fase Diam KLT ( Stationer Phase )

Lapisan fase diam dibuat dari salah satu penjerap yang khusus digunakan untuk KLT

yang dihasilkan oleh berbagai perusahaan. Panjang lapisan 200 mm dengan lebar 200 atau

100 mm. Untuk analisis totalnya 0,1-0,3 mm, biasanya 0,2 mm. Sebelum digunakan, lapisan

disimpan dalam lingkungan yang baik, lembab, dan bebas dari uap laboratorium.

Penjerap yang umum digunakan ialah silica gel, aluminium oksida, kieselgur, selulosa

dan turunannya, poliamida, dan lain-lain. Silica gel adalah yang paling banyak digunakan.

Partikel silika gel mengandung gugus hidroksin pada permukaannya yang akan membentuk

ikatan hidrogen dengan molekul polar air fase diam, pada KLT sering kali juga mengandung

substansi yang dapat berpendarflour dalam sinar untuk fase gerak yang merupakan pelarut

atau campuran pelarut yang sesuai.

Baik silika maupun alumiisa merupakan suatu adsomen yang bersifat polar, dengan

demikian cuplikan akan ditahan berdasarkan perbedaan kepolaraanya. Oleh karena itu dapat

digunakan untuk memisahkan senyawa atau ion yang sifatnya polar. Silica gel ini

menghasilkan perbedaan dalam efek pemisahan yang tergantung kepada cara pembuatannya

sehingga silica gel G Merck, menurut spesifikasi Stahl, yang diperkenalkan tahun 1958, telah

diterima sebagai bahan standar. Selain itu harus diingat bahwa penjerap seperti aluminium

oksida dan silica gel mempunyai kadar air yang berpengaruh nyata terhadap daya

pemisahnya.

Fase Gerak KLT (Mobile Phase)

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-

coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana ialah

campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur

sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut adalah beberapa

petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak:


1. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan

teknik yang sensitif.

2. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara

0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

3. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silica gel, polaritas

fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solute yang berarti juga menentukan

nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam

pelarut non polar seperti metal benzene akan meningkatkan harga Rf secara

signifikan.

4. Untuk solute-solut ionic dan solute-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut

sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan methanol dengan perbandingan

tertentu. Penambahan sedikit asam etanoat atau amonia masing-masing akan

meningkatkan solute-solut yang bersifat basa dan asam.

Campuran yang akan dipisah, berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita (awal).

Untuk menotolkan pada dasarnya digunakan mikro pipet/ pipa kapiler. Setelah pelat atau

lapisan ditaruh di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok

(fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan). Selanjutnya,

senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi).

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ini mirip dengan kromatograafi kertas, hanya bedanya

kertas digantikan dengan lembaran kaca tau plastik yang dilapisi dengan lapisan tipis

adsorben seperti alumina, silike gel, selulosa atau materi lainnya.

Dasar pemisahan pada KLT adalah perbedaan kecepatan migrasi di antara fasa diam

yang berupa padatan dan fasa gerak yang merupakan campuran solven (eluen) yang juga

dikenal dengan istilah pelarut pengembang campur. Jenis eluen yang digunakan tergantung

jenis sampel yang akan dipisahkan. Eluen yang menyebabkan seluruh noda yang ditotolkan

pada pelat naik sampai batas atas pelat tanpa mengalami pemisahan, dikatakan terlalu polar.

Sebaliknya, apabila noda yang ditotolkan sama sekali tidak bergerak, berarti eluen tersebut

kurang polar. Sampel yang biasanya berupa campuran senyawa organik diteteskan di dekat

salah satu sisi lempengan dalam bentuk larutan dengan jumlah kecil, biasanya beberapa

mikroliter berisi sejumlah mikrogram senyawa.

Eluen pengembang dapat berupa pelarut tunggal dan campuran pelarut dengan susunan

tertentu. Pelarut-pelarut pengembang harus mempunyai kemurnian yang tinggi. Terdapatnya

sejumlah air atau zat pengotor lainnya dapat menghasilkan kromatogram yang tidak

diharapkan. KLT merupakan contoh dari kromatografi adsorpsi. Fasa diam berupa padatan

dan fasa geraknya dapat berupa cairan atau gas. Zat terlarut diadsorpsi oleh permukaan

partikel padat. Pelarut akan bergerak lambat dalam lempeng / plat, komponen-komponen

yang berbeda dari campuran pewarna akan bergerak pada kecepatan yang berbeda dan akan

tampak perbedaan warna berbentu bercak-bercak.

Seringkali pengukuran diperoleh dari lempengan / plat untuk memudahkan identifikasi

senyawa-senyawa yang muncul. Pengukuran ini berdasarkan pada jarak yang ditempuh oleh

pelarut dan jarak yang ditempuh oleh bercak warna masing masing komponen. Ketika


pelarut telah mencapai batas atas maka lempeng / plat dipindahkan dan dapat di amati di

bawah sinar UV dan ditentukan harga faktor retensi (Rf).

Analisis dengan KLT yaitu :

1. Persiapan pelat

`Untuk pengujian cincin terkonsentrasi, pelat diberi tanda titik dengan pensil untuk

tempat menotolkan noda dan tiap titik memiliki jarak yang sama panjangnya satu sama

lain. Dan untuk penentuan Rf, pelat diberi tanda garis sebagai dengan pensil yang berjarak

1 cm dari bagian bawah dan 0,5 cm dari bagian atas. Pada pemberian tanda dan garis ini

tidak menggunakan tinta melainkan menggunkan pensil karena jika menggunakan tinta

nanti tintanya bisa ikut berpendar atau memancarkan warna sebab tinta terdiri dari

berbagai macam warna. Selain itu dalam pemberian tanda juga harus hati-hati, jangan

sampai silica yang ada pada pelat ikut terbawa oleh pensil tersebut.

2. Pemilihan pelarut pengembang (eluen)

Pemilihan eluen tergantung pada jenis analit yang akan dipisahkan. Eluen yang

menyebabkan seluruh noda yang ditotolkan pada pelat naik sampai batas atas pelat

(solvent front) tanpa mengalami pemisahan berarti eluen terlalu polar. Sebaliknya jika

noda yang ditotolkan sama sekali tidak bergerak berarti eluen kurang polar.

3. Persiapan Chamber

Chamber yang digunakan dapat berupa bejana, gelas, atau botol dari kaca dengan

dasar rata. Kemudian eluen yang digunakan dimasukkan kedalam chamber sebanyak 5 mL

untuk menjenuhi kertas saring dengan uap eluen tersebut. Selama proses penjenuhan

chamber harus ditutup dengan pelat kaca sampai kertas saring basah seluruhnya. Kertas

saring tidak boleh melebihi tinggi gelas karena uapnya dapat keluar melalui kertas saring

yang berada di luar gelas sehingga chamber tidak jenuh lagi dan noda tidak naik.

Jika kertas saring terlalu kecil maka chamber tidak akan jenuh semuanya sehingga

noda sulit naik atau berkembang. Bila digunakan campuran pelarut pengembang,

persyaratan kemurnian campuran ini harus sesuai dengan Farmakope Jerman kecuali

etanol yang tercemar oleh eter minyak bumi. Campuran pelarut pengembang hanya boleh

digunakan untuk sekali pengembangan karena berubah selama proses pengembangan.

Bejana ditutup selama 30 menit pada suhu kamar; selanjutnya lempeng yang telah

siap untuk digunakan ditempatkan vertikal dalam bejana yang sudah jenuh itu dan segera

ditutup kembali. Penutup jangan berlemak. Selama pengembangan, bejana tidak boleh

dibuka; bejana diletakkan di tempat yang bebas angin dan terlindung dari panas serta sinar

matahari. Perubahan suhu sedikit tidaklah mempengaruhi hasil pemisahan. Bila pelarut

pengembang telah merambat setinggi 15 cm dari titik awal penotolan, lempeng

dikeluarkan dan kemudian bejana dikeringkan di udara dalam lemari asam.

4. Tahap penotolan dan tahap pengembangan


Larutan contoh yang akan diaplikasikan (larutan cuplikan) hendaknya berisi antara

0,1 dan 10 mg kation per cm3 dan dapat bersifat netral dan asam encer sekitar 1 l larutan

ditotolkan dengan sebuah apuit mikro (micro syringe) atau mikropipet didekat salah satu

ujung lempeng kromatografi (chromatoplate) (sekitar 1,5-2,0 cm dari pinggir lempeng)

dan kemudian dibiarkan kering diudara. Untuk pengujian cincin terkonsentrasi, pada

sebuah pelat ditotolkan beberapa noda sampel yang sama kemudian setiap noda ditotolkan

eluen yang berbeda.

Sedangkan untuk penentuan Rf, pada sebuah pelat ditotolkan beberapa noda yang

sama di batas bawah pelat. Kemudian pelat dimasukkan ke dalam chamber yang telah

dijenuhkan. Penempatan pelat dilakukan dengan hati-hati sehingga lapisan tipis fasa diam

pelat tidak bersentuhan dengan kertas saring di dalam chamber dan noda yang ditotolkan

tidak terkena pelarut. Setelah pelat diletakkan dengan benar, chamber ditutup dan

dibiarkan eluen merambat naik secara kapiler. Setelah eluen mencapai batas atas pelat,

maka pelat segera diangkat dan noda yang terbentuk ditandai dengan pensil, kemudian

diukur Rf-nya.

Jika tidak ada noda yang terlihat maka pelat disemprot dengan pereaksi penimbul

warna seperti ditizon, ninhidrin, kalium kromat, amonium sulfida, dan sebagainya. Atau

dengan cara menyinari pelat dengan lampu ultra violet atau menjenuhkan pelat dengan uap

iodium.

5. Larutan Pembanding (campuran uji atau baku)

Disamping larutan cuplikan, selalu ada suatu suatu cairan pembanding yang

dikromatografi pada waktu yang bersamaan. Campuran ini terdiri atas 1-5 senyawa yang

diketahui, dengan konsentrasi yang telah diketahui pula. Bila mungkin, senyawa

pembanding ini sama denga senyawa yang terdapat di dalam larutan cuplikan. Tetapi,

boleh juga senyawa lain yang berbeda, yang mempunya sifat rambat serupa dengan

senyawa cuplikan.

6. Deteksi Bercak

Bercak pemisahan pada KLT umumnya merupakan bercak yang tidak berwarna.

Untuk penentuannya dapat dilakukan secara kimia, fisika, maupun biologi. Cara kimia

yang biasa digunakan adalah dengan mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui

cara penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Cara fisika yang dapat digunakan untuk

menampakkan bercak adalah dengan pencacahan radioaktif dan fluoresensi sinar

ultraviolet. Fluoresensi sinar ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat

berfluoresensi, membuat bercak akan terlihat jelas. Jika senyawa tidak dapat

berfluoresensi maka bahan penyerapnya akan diberi indikator yang berfluoresensi, dengan

demikian bercak akan kelihatan hitam sedang latar belakangnya akan kelihatan

berfluoresensi.

7. Penilaian kromatogram

Angka pada Rf pada KLT


Jarak pengembangan senyawa pada kromatogram biasanya dinyatakan dengan angka

Rf atau hRf.

Rf = Jarak titk pusat bercak dari titik awal

Jarak garis depan dari titik awal

Angka Rf berjangka antara 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua desimal.

hRf ialah angka Rf dikalikan faktor 100 (h), menghasilkan nilai berjangka 0 sampai

100.

Penilaian visual

Pada penilaian visual suatu kromatogram, hal berikut harus diamati.

1. Jarak pengembangan komponen larutan cuplikan dibandingkan dengan jarak

pengembangan larutan pembanding.

2. Beberapa sifat dan terutama warna hasil reaksi warna. Informasi mengenai

identitas sering kali dapat juga diperoleh dengan membandingkan perubahan

warna pada pemanasan, dan selanjutnya pada penyimpanan pelet.

3. Perbandingan luas bercak memberi informasi mengenai angka banding

kuantitatif. Ukuran bercak juga tergantung pada kepekaan reaksi deteksi. Pada

deteksi yang tidak peka, ukuran bercak kecil dan seluruh batasnya tampak

tajam, sedangkan pada deteksi fluorosensi yang sangat peka, bercak sering kali

terlalu besar dan menyatu.

Minyak atsiri adalah campuran alamiah lipofilik yang komponennya terdiri atas

turunan isoprena. Sebagian besar dari komponen itu merupakan hidrokarbon hemi-,

mono-, dan seskuiterpen serta turunannya. Di samping itu, turunan fenilpropana dan

ftalida termasuk minyak atsiri juga. Semua senyawa ini, yang dapat diisolasi dengan

penyulingan uap air, berbeda strukturnya (rantai terbuka, mono dan bisiklik, dan

sebagainya), jumlah dan letak ikatan rangkapnya, dan sifat gugus fungsinya. Sifat fisika

minyak atsiri pun berbeda-beda, tergantung pada komposisinya.

KLT diperlukan untuk menunjukkan kekhasan minyak atsiri. Metode yang

diuraikan di sini telah dibuat sedemikian rupa sehingga praktis hanya kandungan utama

terdeteksi. Jika kandungan sekunder harus terdeteksi, maka harus digunakan larutan

dengan konsentrasi 5-10 % dan ditotolkan sebanyak 10 l dalam bentuk pita.

Kromatografi lapis tipis minyak atsiri obat

I. Metode standar: ya; pengembangan ganda, kelembaban nisbi 50 %, suhu 200 C

II. Lapisan fase diam: silika ge GF 254

III. Pengembang (fase gerak) : penjenuhan bejana kromatografi; heksana-etilasetat

(96:4), dua kali setinggi 10 cm, pengeringan-antara dua pengembangan 5 menit pada

suhu kamar.

IV. Deteksi: (1) UV 254 perhatikan pemadaman fluoresensi; (2) anis-aldehida-asam sulfat,

5 menit, 1000-110

0C.


V. Larutan cuplikan : setiap minyak atsiri dilarutkan dalam toluena dengankonsentrasi

1%. Cuplikan ditotolkan 3 l, kecuali minyak Juniperus dan minyak terpentin yang

ditotolkan 6 l.

VI. Larutan pembanding : 10 l anetol, linalil asetat, 1,8-sineol, karvon, eugenol, dan 10

mg mentol masing-masing dilarutkan dalam 0,1 ml toluena dan tiap larutan

ditotolkan 5 l.

Hasil kromatografi lapis tipis

Komponen hRf Warna dengan

IV / 2 VI /1

Anetol

Linalil asetat

Eukaliptol

Karvon

Sitral

Eugenol

Sinamilaldehid

mentol

55-65

35-45

30-40

15-25

10-15

10-15

10-15

5-10

coklat- ungu

biru muda

biru tua

coklat

hijau-biru

hijau-biru

hijau biru

biru tua

gelap

-

-

gelap

gelap

gelap

gelap

-

Angka Rf berjangka antara 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua desimal. hRf

ialah angka Rf dikalikan faktor 100 (h), menghasilkan nilai berjangka 0 sampai 100. Jika

dipilih 10 cm sebagai jarak pengembangan, maka jarak rambat suatu senyawa (titik awal-

pusat bercak dalam cm) x 10 menghasilkan angka hRf. Tetapi karena angka Rf merupakan

fungsi sejumlah faktor, angka ini harus dianggap sebagai petunjuk saja. Inilah yang menjadi

alasan mengapa angka hRf-lah, misalnya hRf 60-70, yang dicantumkan untuk menunjukkan

letak suatu senyawa pada kromatogram.

Jika keadaan luar, misalnya kelembaban atmosfer yang tidak cukup atau penjerap yang

sifatnya agak menyimpang, menghasilkan kromatogram yang secara umum menunjukkan

angka Rf dari berbagai komponen lebih rendah atau lebih tinggi, maka sistem pelarut harus

diganti dengan yang lebih sesuai. Jika angka hRf lebih tinggi daripada hRf yang dinyatakan,

kepolaran pelarut harus dikurangi; jika angka hRf lebih rendah, komponen polar pelarut harus

dinaikkan. Ini dapat dilakukan dengan cara sederhana, misalnya pada pengaturan sistem

benzena-kloroform atau kloroform-metanol.

Hasil kromatografi lapis tipis beberapa minyak atsiri


a. Minyak cengkeh (Oleum Caryophylli)

adalah minyak atsiri yang diperoleh dengan penyulingan air atau penyulingan uap

kuncup yang telah dikeringkan dari :

o Tanaman asal : Eugenia caryophyllusBullock et Herrison

o Familia : Myrtaceae

o Pemerian : Minyak cair, baru didestilasi tidak berwarna

atau kuning pucat, jika disimpan atau kena udara makin tua

dan makin kental.

o Tempat Tumbuh : Indonesia (terutama Maluku)

o Isi : - eugenol 85-90%

- asetil eugenol

- kariofilen

- vanilin, furfurol


- metil-amil keton

o Pemakaian : obat sakit gigi, obat mulas dan kadang bisa

digunakan sebagai obat batuk

Tanaman cengkeh (Eugenia caryophillata) dapat digunakan untuk menghasilkan

minyak cengkeh, minyak tangkai cengkeh dan minyak daun cengkeh. Minyak cengkeh

merupakan minyak atsiri hasil penyulingan serbuk bunga cengkeh kering. Minyak

tangkai cengkeh adalah minyak atsiri hasil penyulingan dari tangkai kuntum cengkeh.

Minyak daun cengkeh adalah minyak atsiri hasil penyulingan daun cengkeh kering dari

ketiga jenis minyak cengkeh tersebut yang paling sering digunakan adalah ekstrak dari

bagian daun. Minyak daun cengkeh yang dipasaran berupa cairan berwarna cokelat gelap

dan baunya sangat tajam,

Kandungan minyak cengkeh yang paling utama adalah eugenol (90%). Eugenol

inilah yang memberikan aroma khas yang banyak dibutuhkan oleh berbagai industry,

antara lain industry kosmetik, farmasi, dan pestisida nabati.

Eugenol

Kandungan lain dari cengkeh dapat berupa eugenil acetate, methyl n-hepthyl

alcohol, benzyl alcohol, methyl salicilate, methyl n-amyl carbinol dan terpene caryo-

phyllene. Hasil penelitian menunjukan bahwa kadar minyak pada cengkih naik sejalan

dengan naiknya ketinggian tempat, tetapi menurun diatas 800m dpl.

b. Minyak kayu putih (Oleum cajuputi)

Adalah minyak atsiri yang diperoleh dengan destilasi air dan destilasi uap daun dan

ranting segar dari:

o Tanaman asal : Melaleuca leucadendra L dan Melaleuca minor Sm

o Familia : Myrtaceae

o Tempat tumbuh : Indonesia

o Pemerian : cairan tidak berwarna, warna kuning hijau,

khas aromatik, rasa pahit

o Isi : - Cineol ( kayuputol)

- Terpineol bbs

- Ester terpineol dengan as.asetat

- As.valerat

o Pemakaian : -Obat gosok pada sakit encok

-Obat batuk


Daun segar-0,4-1,2% minyak kayu putih. Bahan kimianya bervariasi mengikut

jenis bahan pokok dan keadaan ekologi. Minyak kayu putih lebih bervariasi karena

campuran tumbuhan dan bahan kimia lain. Minyak kayu putih yang tulen dalam pasaran

biasanya disuling daripada pokok yang mengandungi lebih cineol. Kandungan cineol

dalam minyak daun kayu putih ialah 3-60%. Minyak kayu putih juga mengadung

aldehid, alfa humulen, alfa selinen, alfa terpineol, beta kariofilen, beta selinen, globulol,

karjuputol, kariogilen oksida, limonene, 1-pinen, spatilenol, terpinol, viridifloren, dan

viridiflorol.

c. Minyak Permen, Peppermint Oil (Oleum Menthae Piperitae)

adalah minyak atsiri yang diperoleh dengan penyulingan (destilasi) air pucuk

berbunga dari:

o Tanaman Asal : Mentha piperita L

o Famili : Labiatae

o Pemerian : cairan tidak berwarna, kuning pucat

atau kuning kehijauan, bau aromatic, rasa pedas kemudian

dingin

o Tempat Tumbuh : Eropa dan Indonesia

o Pemalsuan : diencerkan dengan alkohol, minyak terpentin,

minyak kopaiba, m. Eukaliptus dan dengan minyak atsiri lain.

o Isi :- menthol 51 %

- Ester mentil asetat

- mentil iso valerianat , alfa pinen

- limonen

- kadinen

- sineol, menton

- asetaldehid, isovaleraldehid

- asam Cuka, asam Valerianat & amil alkohol

o Pemakaian : karminativa, stimulansia, obat mulas dan obat batuk

Unsur utama dari daun Mentha piperita L. adalah minyak atsiri (0,5-4%), yang

mengandung mentol (30-55%) dan menthone (14-32%). Mentol terjadi kebanyakan dalam

bentuk bebas alkohol, dengan jumlah kecil sebagai (% 3-5) asetat dan Valerat ester.

Menthol


Monoterpen lain yang hadir termasuk isomenthone (2-10%), 1,8-cineole (6-14%),

a-pinene (1,0-1,5%), b-pinene (1-2%), limonene (1 5%), neomenthol (2.5-3.5%) dan

menthofuran (1-9%).

d. Minyak Anisi (Oleum Anisi)

adalah buah masak dari :

o Tanaman Asal : Pimpinella anisum L

o Familia : Umbelliferae

o Pemerian : bau khas aromatik, rasa manis

o Tempat Tumbuh : Spanyol, Rusia Selatan, Bulgaria, Asia Kecil, Mesir dan

Yunani, Indonesia

o Isi : - minyak atsiri 6% mengandung: * anetol 80-90%

* metil kavikol

* anis keton

* asetaldehid

- minyak lemak 10%

- protein

o Pemakaian : karminativa dan obat mulas

Dalam bahasa latin, adas dikenal dengan nama Pimpinella Anisum. Secara

kimiawi, Adas mengandung minyak asiri (Oleum Anisi) 1 6%, mengandung 50 60%

anetol, lebih kurang 20% fenkon, pinen, limonen, dipenten, felandren, metilchavikol,

anisaldehid, asam anisat, dan 12% minyak lemak. Kandungan anetol yang menyebabkan

adas mengeluarkan aroma yang khas dan berkhasiat karminatif. Akar mengandung

bergapten. Akar dan biji mengandung stigmasterin (serposterin).

Anetol


BAB III

METODOLOGI PRAKTIKUM

3.1. WAKTU DAN TEMPAT PRAKTIKUM

Hari, Tanggal : Rabu, 31 Oktober 2012

Waktu : 09.20-12.00

Tempat : Laboratorium PNA

3.2. ALAT DAN BAHAN

Bahan Uji

Oleum Menthae piperitae

Oleum Caryophily

Oleum Anisi

Oleum Cayuputi

Bahan dan Alat

Fase diam : Silica Gel GF 254

Fase gerak : Heksana : Etil asetat (96:4)

Bejana kromatografi

Pipa kapiler

Alat semprot untuk deteksi

Lampu UV 254

Kertas saring

3.3. CARA KERJA

1. Buat fase gerak dalam bejana kromatografi sebanyak 38,4 ml heksana dan 1,6 ml etil

asetat. Pengerjaan harus dilakukan di lemari asam. Kemudian dibagi ke masing-

masing kelompok sebanyak 10 ml.

2. Jenuhkan bejana kromatografi dengan larutan fase gerak yang akan digunakan dengan

menggunakan sehelai kertas saring. Jangan membuka bejana kromatografi sselam

penjenuhan berlangsung.

3. Beri batas atas dan batas bawah pada silica gel 254 masing-masing 1cm. tandai batas

bawah dengan 4 titik, masing-masing titik diberi jarak 1 cm (titik A: oleum Mentha

piperitae, titik B: oleum caryophily, titik C: Oleum Anisi, titik D: Oleum Cayuputi)

4. Buatlah larutan minyak atsiri 1 % dalam toluene


5. Totolkan larutan percobaan pada fase diam silica gel dengan menggunakan pipa

kapiler. Buatlah totolan sekecil mungkin dengan jalan menotolkan larutan sedikit

demi sedikit. Jarak antara totolan yang satu dengan yang lain 1 cm.

6. Masukkan fase diam silica gel pada bejana kromatografi yang berisi larutan

percobaan yang telah dijenuhkan dengan fase gerak hingga mencapai jarak yang telah

ditentukan.

7. Angkat fase diam dari bejana kromatografi , keringkan dengan pemanasan pada suhu

1050 Cselama 5 menit. Amati bercak yang terjadi di bawah lampu UV, catat warna

masing-masing bercak.

8. Semprot bercak pada fase diam dengan pereaksi penampak bercak vanillin-asam

sulfat atau anisaldehida asam sulfat. Keringkan dengan pemanasan pada suhu 1050 C

selama 5 menit. Amati warna bercak yang terjadi di bawah lampu UV.

9. Gambar kromatogram yang telah didapat pada kertas gambar. Hitung Rf masing-

masing bercak, tentukan kemungkinan komponen untuk masing-masing minyak atsiri

yang diperiksa berdasarkan harga Rf yang diperoleh.


BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. HASIL

1. Oleum Menthae piperitae

Jarak yang ditempuh noda : 0,5cm dan 1,2cm

Panjang plat KLT : 8 cm

Rf = jarak yang ditempuh noda / panjang plat

KLT

Rf = 0,5 cm / 8 cm = 0,0625

Rf = 1,2 cm / 8 cm = 0,15

2. Oleum Caryophylli

Jarak yang ditempuh noda : 0,9 cm

Panjang plat KLT : 8 cm

Rf = jarak yang ditempuh noda / panjang plat

KLT

Rf = 0,9 cm / 8 cm = 0,1125

3. Oleum Anisi


Panjang plat KLT : 8cm

Rf = jarak yang ditempuh / panjang plat KLT

Rf = 0,7 cm / 8 cm = 0,0875

Rf = 5,2 cm / 8 cm = 0,65

4. Oleum Cajuputi


Panjang plat KLT : 8cm

Rf = jarak yang ditempuh / panjang plat KLT

Rf = 2,2 cm / 8 cm = 0,275

Rf = 0,3 cm / 8 cm = 0,0375


4.2. PEMBAHASAN

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa

menjadi senyawa murninya dan dapat mengetahui kuantitasnya. Kromatografi

juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun

cuplikannya.

KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis

fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi, dan

isolasi senyawa murni skala kecil. Pelarut yang dipilih untuk pengembang disesuaikan

dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Bahan lapisan tipis seperti silika gel adalah

senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksipereaksi yang lebih reaktif seperti asam sulfat.

Pada praktikum kali ini kita melakukan pemeriksaan minyak atsiri secara

kromatografi lapis tipis. Pelat kromatografi yang digunakan berupa silica gel sebagai fase

diam dan heksana : etil asetat (96:4) sebagai fase gerak. Pelarut yang digunakan adalah

hexan-etilasetat karena kepolarannya sama dengan senyawa yang di uji. Hexan-etilasetat

bersifat non polar.

Langkah pertama yang kita lakukan yaitu menjenuhkan bejana kromatografi dengan

larutan fase gerak yang akan digunakan dengan menggunakan sehelai kertas saring.

Penjenuhan ini dilakukan agar proses elusi berjalan dengan baik dan juga dimaksudkan untuk

memperkecil penguapan pelarut dan menghasilkan bercak (noda) yang lebih baik. Jangan

membuka bejana kromatografi selama penjenuhan berlangsung. Karena apabila bejana

kromatografi terbuka larutan yang di dalamnya akan menguap karena sifatnya mudah

menguap bila terkena udara. Cara kita mengetahui apakah larutan telah jenuh yaitu dengan

melihat naiknya larutan pada kertas saring, apabila sudah naik sempurna berarti larutan sudah

jenuh.

Setelah itu membuat larutan minyak atsiri 1% dalam toluene dan larutan pembanding

timol 0,1% dalam toluene. Pada percobaan kemarin larutan pembanding tidak dibuat karena

ketidaktersediaan timol, dan hasilnya hanya dicari menurut referensi. Larutan pembanding

adalah larutan yang dikromatografi pada waktu bersamaan.

Kemudian totolkan larutan percobaan masing-masing sebanyak 5 l pada fase diam

silica gel GF254 dengan menggunakan pipa kapiler. Buatlah totolan sekecil mungkin dengan

jalan menotolkan larutan sedikit demi sedikit. Jarak antara totolan yang satu dengan yang lain

minimal 1cm, agar hasil tidak bertabrakan sehingga kita bisa melihat bagaimana jarak elusi

yang terbentuk. Pada saat penotolan jangan terlalu banyak karena jika cairan yang ditotolkan

terlalu banyak dan menjadi melebar akan mempersempit ruang gerak senyawa untuk berelusi

sehingga terjadi tabrakan satu dengan yang lain.

Masukkan fase diam silica gel yang sudah ditotoli ke dalam bejana kromatografi yang

telah dijenuhkan dengan fase gerak, tunggu sampai fase gerak mencapai jarak yang sudah


ditentukan. Dalam mengambil dan meletakkan plat kromatografi harus hati-hati karena silica

gel mudah terkelupas sehingga apabila ada bagian yang terkelupas membuat naiknya cairan

tidak merata. Lalu angkat fase diam dari bejana kromatografi, keringkan dengan pemanasan

dalam oven pada suhu 1050C selama 5 menit. Lalu dilakukan penyemprotan bercak pada fase

diam dengan pereaksi penampak bercak vanillin-asam sulfat atau anisaldehid asam sulfat.

Penyemprotan ini dilakukan untuk menghasilkan warna atau memperjelas warna yang

dilakukan dilemari asam. Ini di karenakan pereaksi yang merusak. Setelah itu keringkan

dengan pemanasan pada suhu 1050C selama 5 menit. Pembentukkan warna yang optimum

sering kali memerlukan peningkatan suhu dan waktu tertentu.

Angka Rf berjangka antara 0,00 dan 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua desimal.

hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 (h), menghasilkan nilai berjangka 0 100.

Pada praktikum ini didapat hasil Rf dari masing-masing minyak atsiri adalah :

Oleum Anisi, kandungannya adalah : 1,5-3% minyak atsiri termasuk 80-90% anetol (I), metil

eter kavikol (II) (estragol), anisaldehid (III), dan dianetol (turunan dimetil dari stilbestrol).

Endosperm mengandung 30% minyak lemak dan protein.

Pada oleum anisi didapatkan Rf 0,0825 dan 0, 65. Harga hRf nya adalah hRf1 8 dan

hRf2 65. Ini menunjukan bahwa pada hRf2 oleum anisi mengandung anetol .

Oleum Menthae Piperitae, kandungannya adalah 1-2% minyak (1,2 % v/b), 50 % mentol,

10-30% menton, piperiton dan sejenisnya 5-15%, mentilester, 5-10 % metofuran,

mengandung 5-10% tannin dan flavonoid.

Pada oleum menthae piperitae didapatkan Rf1 dan Rf2 . Harga hRf nya

adalah hRf1 6,25 dan hRf2 15. Ini menunjukan bahwa pada hRf1 oleum mentha

mengandung mentol.

Oleum Caryophylli, kandungannya adalah 16-21% minyak atsiri (minimum 15%).

Kandungan utama eugenol 70-96%, 2-17% asetilegenol dan sesquiterpen, misalnya beta-

kariyofilena.

Pada oleum caryophylli didapatkan Rf 0,1125, dan harga hRf 11. Ini menunjukan

bahwa oleum caryophylli mengandung eugenol.

Oleum Cajuputi, kandungannya adalah sineol, terpineol, asam valerat.

Pada oleum cayuputih didapatkan Rf1 dan Rf2 , dan harga hRf1 27,5 dan hRf2

3,75.

Pada plat KTL noda yang terbentuk pada praktikum tidak lurus. Noda yang terbentuk

akan mempengaruhi harga Rf yang didapat. Hal ini bisa terjadi karena beberapa factor,

diantaranya, fase diam (kualitas, keberadaan pengotor, ketidakseragaman ketebalan, aktivasi

pelat), fase gerak (kemurnian pelarut), bejana pengembang (ukuran bejana, kuantitas pelarut,


kejenuhan), suhu (pemisahan-pemisahan sebaiknya dikerjakan pada suhu tetap), jarak

pengembangan, dan kuantitas sampel.


BAB V

KESIMPULAN

Kromatografi lapis tipis (KLT) atau Thin layer Chromatography (TLC) adalah

metode pemisahan fisikokimia dimana komponen yang dipisahkan didistribusikan

diantara 2 fase yaitu fase diam (Stationer Phase) dan fase gerak (Mobile Phase).

Fase diam yang digunakan pada uji minyak atsiri dengan KLT ini adalah silica gel

dan fase geraknya adalah hexan-etilasetat dengan konsentrasi 96 : 4.

Alasan menggunakan hexan-etilasetat sebagai fase geraknya karena kepolarannya

sama dengan senyawa yang di uji, yaitu bersifat non polar.

Alasan penjenuhan fase diam dalam bejana dengan menggunakan kertas saring dan

kemudian ditutup adalah agar proses elusi berjalan dengan baik dan juga

dimaksudkan untuk memperkecil penguapan pelarut dan menghasilkan bercak (noda)

yang lebih baik.

Penotolan minyak atsiri pada silica gel harus sekecil mungkin dan jarak antara totolan

yang satu dengan yang lain minimal 1 cm, agar tidak bertabrakan sehingga kita bisa

melihat bagaimana jarak elusi yang terbentuk. Jika totolan terlalu besar/banyak maka

totolan akan melebar dan mempersempit ruang gerak senyawa untuk berelusi

sehingga terjadi tabrakan satu dengan yang lain.

Dalam mengambil dan meletakkan plat kromatografi harus hati-hati karena silica gel

mudah terkelupas sehingga apabila ada bagian yang terkelupas membuat naiknya

cairan tidak merata.

Penyemprotan bercak pada fase diam dengan pereaksi vanillin-asam sulfat atau

anisaldehid asam sulfat bertujuan untuk menghasilkan warna atau memperjelas warna.

Penyemprotan dilakukan dilemari asam, dikarenakan pereaksi yang bersifat merusak.

Pembentukkan warna yang optimum pada saat pemanasan sering kali memerlukan

peningkatan suhu dan waktu tertentu.

Pada praktikum ini didapat hasil Rf dari masing-masing minyak atsiri adalah :


Pada oleum anisi didapatkan Rf 0,0825 dan 0,65. Harga hRf nya adalah hRf1

8 dan hRf2 65. Ini menunjukan bahwa pada hRf2 oleum anisi mengandung

anetol.

Pada oleum menthae piperitae didapatkan Rf1 dan Rf2 . Harga

hRf nya adalah hRf1 6,25 dan hRf2 15. Ini menunjukan bahwa pada hRf1

oleum mentha mengandung mentol.

Pada oleum caryophylli didapatkan Rf 0,1125, dan harga hRf 11. Ini

menunjukan bahwa oleum caryophylli mengandung eugenol.

Pada oleum cayuputih didapatkan Rf1 dan Rf2 , dan harga hRf1

27,5 dan hRf2 3,75.

Pada plat KTL noda yang terbentuk pada praktikum tidak lurus. Noda yang terbentuk

akan mempengaruhi harga Rf yang didapat. Hal ini bisa terjadi karena beberapa

factor, diantaranya, fase diam (kualitas, keberadaan pengotor, ketidakseragaman

ketebalan, aktivasi pelat), fase gerak (kemurnian pelarut), bejana pengembang (ukuran

bejana, kuantitas pelarut, kejenuhan), suhu (pemisahan-pemisahan sebaiknya

dikerjakan pada suhu tetap), jarak pengembangan, dan kuantitas sampel.


Daftar Pustaka

G.Watson, David. 2009. Analisis Farmasi. Jakarta: EGC.

Kardinan, agus. 2010. Tanaman penghasil minyak atsiri. Jakarta : Apu Agro Media Pustaka.

Koensoemardiyah. A to Z Minyak Atsiri. Jakarta: Andi Publisher.

Ong, Hean Chooi. 2004. Tumbuhan liar : khasiat ubatan dan kegunaan lain. Kuala lumpur :

Utusan publications dan distributor.

Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. Bandung : Penerbit

ITB.

188835297 laporan pemeriksaan minyak atsiri secara kromatografi (prakt nosi m. atsiri)

Documents