laporan_bioteknologi_kultur_jaringan.doc

8/18/2019 Laporan_Bioteknologi_Kultur_Jaringan.doc

1/36

LAPORAN

PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI

Acara III

(Kultur Organ)

Oleh

Winda Di A!tuti

NIM" ##$%#$#&'$#&

Prgra *tudi Pendidi+an Bilgi

LABORATORIUM KULTUR ,ARINGAN TUMBU-AN

,URU*AN BUDIDA.A PERTANIAN

/AKULTA* PERTANIAN

UNI0ER*ITA* ,EMBER

%$#1


2/36

BAB #" PENDA-ULUAN

#"# Latar Bela+ang

Program revitalisasi yang digalakkan mulai tahun 2010 dapat diprediksi

membutuhkan bahan tanam sekitar 50 juta dalam hal peremajaan, proses

rehabilitasi dan perluasan areal yang diharapkan. Hal ini ikut serta diiringi dengan

faktor diluar kebutuhan revitalisasi, sehingga diperlukan bahan tanam sekitar 80

juta pada tahun 2010. amun hal ini sangat kontras dengan teknik konvensional

yang telah dilakukan oleh beberapa ahli yang hanya bisa menyediakan bahan

tanam sekitar !5"50 juta pada setiap tahunnya. #leh karena itu untuk memenuhi

kebutuhan akan bahan tanam maka perlu ditambahkan suatu alternatif yang dapat

digunakan dalam proses perbanyakan, yaitu teknik kultur jaringan $%ahyudi et al

dalam &holeh, 2011'.

(eknik untuk mengatasinya dengan menggunakan teknik kultur jaringan

dengan tahap organogenesis. &ebelumnya dapat diperjelas dari pengertian kultur

jaringan yang merupakan suatu teknik untuk mendapatkan tanaman dalam jumlahyang besar dalam )aktu yang relatif lebih singkat serta dapat dipastikan bebas

dari virus dan penyakit. *ultiplikasi atau perbanyakan yang diperoleh melalui

penanaman se+ara in vitro sangat tinggi. Produksi bibit yang berkualitas, hasil

yang homogen, dan dalam )aktu yang singkat dapat diperoleh jumlah yang sangat

banyak juga dapat diperoleh melalui teknik budidaya konvensional $Hobir et al

dalam nna, 201!'.

Perbanyakan yang diperoleh menggunakan teknik kultur jaringan dapat

menghasilkan tanaman yang seragam hal ini dikarenakan perbanyakan yang

dilakukan dipengaruhi beberapa faktor yang diantaranya dapat mempengaruhi

inisiasi akar dan pertumbuhan kultur jaringan yaitu garam mineral, auksin, gula,

suhu, dan +ahaya, pertumbuhan dan morfogenesis tanaman se+ara kultur jaringan

dapat dikendalikan dengan keseimbangan yang diperoleh dari interaksi -at

pengatur tumbuh $P(' dalam eksplan dan juga media yang dipergunakan $/)i,

2010'.


3/36

ultur jaringan se+ara klonal dapat menggunakan eksplan bunga, akar, dan

daun serta embrio -igotik. Hal ini dikarenakan faktor yang sangat berperan dalam

perbanyakan dengan eksplan embrio adalah umur dari embrio yang digunakan

sebagai eksplan. arena semakin ke+il ukuran embrio maka jaringan

meristematiknya juga semakin muda. #leh karena itu dalam hal ini planlet dapat

diperoleh dari jaringan embrio -igotik muda yang berumur 120"150 hari $ope-

dalam &holeh, 2011'. /alam praktikum kultur jaringan ini yang bertujuan untuk

mengetahui organ yang dapat digunakan dalam proses kultur jaringan yang salah

satunya diperuntukkan pada daun tembakau yang dapat diamati pada hari ke" dan

hari ke"13. /alam hal ini maka dapat disajikan melalui grafik pertumbuhan bahan

tanam tembakau untuk mengetahui proses pertumbuhan yang dapat dilihat selama

proses pengamatan.

#"% Tu2uan

1. *engetahui organ tanaman yang mampu beregenerasi menjadi tanaman

lengkap

2. *endapatkan eksplan yang steril

BAB %" TIN,AUAN PU*TAKA

ultur jaringan dapat mempergunakan bahan tanam berupa tunas lateral.

Hal ini menga+u pada salah satu konsep dasar yang mendasari teknik kultur

jaringan yaitu organ yang digunakan dalam kultur jaringan harus mempunyai sifat

totipotensi. &ifat totipotensi adalah kemampuan masing"masing sel dalam hal


4/36

tumbuh dan beregenerasi menjadi tanaman lengkap yang disertai dengan kondisi

lingkungan yang memadai. *aka dari itu eksplan yang digunakan berasal dari

jaringan yang masih muda $juvenil' yang dikarenakan dapat mudah tumbuh dan

beregenerasi dibandingkan jaringan yang sudah mature atau sudah mengalami

diferensiasi lanjut. 4aringan muda yang digunakan memiliki sifat sel yang sangat

aktif membelah dengan dinding sel yang masih belum kompleks. 4aringan muda

yang sering digunakan antara lain pu+uk muda, kun+up muda, hipokotil,

inflores+en+e yang belum de)asa.

Penggunaan tunas lateral juga dapat digunakan sebagai eksplan yang

bertujuan untuk mendapatkan organ dengan jaringan yang masih bersifat

meristematik, artinya jaringan tersebut masih aktif membelah. /isamping kultur

pu+uk yang telah berkembang pada tahun 60"an, berdasarkan 7uliarti $2010 36'

kultur dapat digunakan dalam berma+am"ma+am kultur yaitu kultur organ yang

bersumber dari eksplan yang dapat berasal dari bagian organ tanaman seperti

tunas, akar, batang, biji, umbi, daun, dan tangkai daun. ultur meristem yang

menggunakan eksplan dari tunas pu+uk atau tunas aksiler, dan juga ruas batang.

ultur sel yang mempunyai tipe khusus seperti serbuk sari $sel haploid'

dan endosperm dengan sel triploid. &etelah itu, kultur anter atau polen yang

menggunakan eksplan dari anter atau kepala sari yang mengandung polen. ultur

embrio bertujuan memperpendek )aktu berke+ambah, menguji ke+epatan

viabilitas biji, memperbanyak tanaman langka yang mempunyai embrio pada

keadaan normal sering mati pada a)al tingkat perkembangannya. angkah dalam

kultur embrio dengan memisahkan embrio yang masih belum de)asa dan

menumbuhkannya se+ara in vitro.

ultur protoplas yang bertujuan untuk mempelajari komponen penyusun

sel atau organel hingga dapat melakukan fusi protoplas. &elain itu juga untuk

mendapatkan tanaman hybrid dan +ybrid somati+ yang dapat digunakan dalam

transplantasi dan transformasi genetik. ultur biji yang memper+epat )aktu untuk

berke+ambah dan mengatasi masalah pada tanaman langka, mempelajari

ke+epatan pertumbuhan hingga diperoleh biji steril untuk mengatasi kontaminasi

yang terjadi pada eksplan yang dibudidayakan.


5/36

eberhasilan kultur jaringan sangat dipengaruhi oleh -at pengatur tumbuh

tanaman. at pengatur tumbuh ini mempengaruhi pertumbuhan dan morfogenesis

dalam kultur sel, jaringan dan organ. at pengatur tumbuh dapat digolongan

menjadi beberapa golongan, yaitu auksin, sitokinin, giberelin, dan inhibitor. Hal

ini dikarenakan interaksi dan perimbangan antara -at pengatur tumbuh yang

diberikan dalam media dan yang diproduksi oleh sel se+ara endogen, menentukan

arah perkembangan suatu kultur $una)an, 1988 dalam nna, 201!'.

:nisiasi tunas dapat dirangsang dengan penambahan -at pengatur tumbuh

golongan sitokinin seperti ben-ilamino purin $;P',


6/36

dan ;P merupakan jenis -at pengatur tumbuh yang sering digunakan

dalam kultur jaringan.

;P golongan sitokinin sering digunakan bersamaan dengan untuk

mendapatkan morfogenesis tanaman yang diinginkan. Hal ini ditunjukkan dengan

mun+ulnya akar, tinggi planlet, jumlah daun, jumlah tunas, dan jumlah akar.

*edia yang digunakan mampu mendorong organogenesis pertumbuhan. &ehingga

menunjukkan adanya keseimbangan antara hormon endogen dan -at pengatur

tumbuh yang diberikan pada setiap perlakuan guna mendorong proses

organogenesis. Pertumbuhan dan perkembangan eksplan dipengaruhi oleh

interaksi dan keseimbangan antara -at pengatur tumbuh endogen dan -at pengatur

tumbuh eksogen $*irni, 2011'.

Pertumbuhan juga memerlukan pembentukan senya)a bahan baku dinding

sel. Pembuatan komponen"komponen ini dan penyusunan kembali ke dalam suatu

matriks yang utuh dipengaruhi oleh auksin, dengan jalan mengaktifkan en-im

yang berperan dalam pembentukan dinding sel $%attimena, 1991 dalam nna,

201!'. &el dapat mengembang dengan berbagai +ara. &alah satunya dikarenakan

beberapa bahan osmotik seperti gula, dapat diangkut masuk ke vakuola. ir akan

masuk ke sel dan dinding sel akan mengembang sampai suatu tekanan dinding sel

tertentu yang dapat menghalangi masuknya air selanjutnya. /inding sel yang

retak diakibatkan oleh pengembangan sel ini diperbaiki dengan penambahan atau

pembentukan bahan dinding sel yang baru $oggle dan =rit-, 198! dalam nna,

201!'.

Pertumbuhan berkaitan dengan pertambahan volume dan jumlah sel,

pembentukan protoplasma, pertambahan berat dan selanjutnya terjadi

pertambahan berat kering. Pengeringan bertujuan untuk menghentikan

metabolisme sel dari bahan tersebut $&itompul dan uritno, 1995 dalam


7/36

protein melalui proses transkripsi molekul


8/36

yang tidak tertutup rapat dapat +epat menguap dan kering sehingga eksplan dan

planlet yang dikulturkan akan kehilangan nutrisi yang terkandung pada media.

elembaban udara relatif yang tinggi dalam botol kultur juga tidak baik untuk

eksplan dan planlet dikarenakan menyebabkan tanaman dapat tumbuh abnormal

dengan daun yang lemah, mudah patah, tanaman ke+il"ke+il sehingga kondisi ini

disebut vitrifikasi atau hiperhidro+ity $7usnita dalam *irni, 2011'.

Pada teknik perbanyakan tanaman se+ara in vitro, kultur umumnya

diinkubasikan pada sebuah ruang penyimpanan dengan penyinaran yang +ukup.

Hal ini dikarenakantunas umumnya dapat dirangsang pertumbuhannya dengan

adanya penyinaran. &umber +ahaya yang biasanya digunakan dalam ruangan

kultur jaringan adalah lamu fluores+ent $(' yang dapat menghasilkan )arna

putih, selain itu suhu ruang kultur dapat meningkat namun dalam jumlah yang

sedikit. :ntesitas yang digunakan dalam ruang kultur sekitar 1B10 dari intensitas

+ahaya yang dibutuhkan dalam keadaan normal. :ntensitas yang digunakan untuk

pertumbuhan tunas sekitar 600"1000 luC. &edangkan pada tahap perke+ambahan

dan inisiasi akar hanya dapat dilakukan pada intensitas +ahaya yang lebih sedikit

dibandingkan dengan pertumbuhan tunas $(riningsih, 201!'. #leh karena itu

kuantitas dan kualitas dari +ahaya, lama )aktu penyinaran, dan panjang

gelombang +ahaya dapat mempengaruhi pertumbuhan eksplan dalam kultur in

vitro disamping adanya suhu dan kelembaban relatif udara.

BAB '" METODE PRAKTIKUM

'"# Wa+tu dan Te3at

Praktikum ultur 4aringan (umbuhan dengan a+ara ultur #rgan

dilaksanakan pada hari *inggu, 11 *ei 2013 pukul 12.00 sBd selesai bertempat di

aboratorium ultur 4aringan (umbuhan 4urusan ;udidaya Pertanian, =akultas

Pertanian, >niversitas 4ember.

'"% Alat dan Bahan

!.2.1 lat


9/36

1. aminar ir =lo) $='

2. ;otol semprot

!. Pinset3. Pisau

5. &eal $segel'

6. ertas label

. lat tulis

8. ;unsen

9. Petridish

!.2.2 ;ahan

1. *edium padat kultur jaringan yang telah dibuat pada praktikum

sebelumnya dengan 5 ma+am perlakuan

2. ultur tembakau dalam botol kultur

!. PestisidaB =ungisida

3. Duades

5. lkohol 0A

'"' Pr!edur Ker2a

Bahan tana Te4a+au di!aa+an 4erda!ar+an 3ra+ti+u 5ang telah

dila+u+an

1. *embuka plastik yang membungkus petridish yang sebelumnya telah

disterilkan menggunakan auto+lave, mensterilkan di atas nyala api ;unsen

2. *enjaga agar alat tetap steril maka sebelum digunakan memanaskan

terlebih dahulu di atas nyala api ;unsen

!. *engangin"anginkan peralatan yang telah steril sebelum masuk dalam

botol kultur

3. *engeluarkan kultur dari dalam botol dengan sangat hati"hati agar

merusak kultur

5. *eletakkan kultur pada petridish menggunakan pinset steril

6. &etelah meletakkan kultur pada petridish pinset yang telah digunakan

harus disterilkan kembali sebelum digunakan lagi.


10/36

. *ensterilkan dahulu Pisau dan Pinset yang hendak digunakan dengan

nyala api pada ;unsen

8. *emotong kultur tembakau tepat pada bagian daun yang masih muda dan

sehat

9. *emotong daun yang utuh menjadi 2 bagian yang sama dan begitu pula

seterusnya hingga di dapatkan jumlah yang diharapkan

10. *ensterilkan kembali potongan yang telah di dapatkan beserta

petridishnya

11. &ebelum dibuka, maka hendaklah mensterilkannya dalam nyala api pada

;unsen

12. *engambil beberapa potongan daun tembakau

1!. *eletakkan potongan daun $menanam potongan daun' yang telah di ambil

ke dalam botol kultur yang telah disediakan hingga tepat pada medium

13. &etelah selesai menanam atau meletakkan kultur pada media media

tersebut harus ditutup kembali dengan aluminium foil

15. *emasang kembali karet gelang pada leher botol kutur agar tidak ada

rongga udara pada botol untuk men+egah kontaminan

16. >ntuk mengun+i media agar tidak terpengaruh dari luar atau mendapat

kontaminan dari luar selain dileher botol dipasang karet gelang harus di

seal atau di segel lagi

1. *engamati kultur pada hari ke" dan ke"13

'"1 Paraeter Pengaatan

1. *engamati perubahan yang terjadi pada bahan tanam. Perubahan dapat

ditunjukkan dengan adanya proses pertumbuhan pada bahan tanam baik

dalam bentuk kalus, akar atau tunas.

2. *embuat grafik yang menyatakan pertubuhan kalus, tunas, dan akar.

(abel 1. Pertumbuhan ;ahan (anam (embakau

at

Pengatur

;ahan (anam (embakau

Hari ke" Hari ke"13


11/36

(umbuhalus (unas kar alus (unas kar

*& E 0 1 1 1

0,25 ppm

dan ;P

1 ppm

1 2 1

1

ppm dan

;P 0,25

ppm

1 1 1

;P 0,5

ppm1 2 1

2,3 / 0,5

ppm2 2 2 dst dst dst

ambar 1. rafik Pertumbuhan (embakau pada hari ke"


12/36

BAB 1" -A*IL DAN PEMBA-A*AN

1"# -a!il Pengaatan

Ta4el #" Pertu4uhan Bahan Tana Te4a+au

6at

Pengatur

Tu4uh

Bahan Tana Te4a+au

-ari +e78 -ari +e7#1

Kalu! Tuna! A+ar Kalu! Tuna! A+ar

M* 9 $ $ $ $ $ $ $

NAA

$:%& 33

dan BAP

# 33

$ $ $ $ $ $

NAA #

33 dan

BAP $:%&

33

$ $ $ $ $ $

BAP $:& $ $ $ $ $ $


13/36

33

%:1 D $:&33

$ $ $ $ $ $

Pertu4uhan Te4a+au dala gra;i+

Ga4ar #" Gra;i+ Pertu4uhan Te4a+au 3ada hari +e78

Ga4ar %" Gra;i+ Pertu4uhan Te4a+au 3ada hari +e7#1

1"% Pe4aha!an

Pada praktikum kultur jaringan dengan a+ara kultur organ yang bertujuan

untuk mengetahui organ tanaman yang mampu beregenerasi menjadi tanman

lengkap dan untuk mendapatkan eksplan yang steril. lat yang digunakan dalam


14/36

praktikum ini sama dengan praktikum teknik aseptik karena dilakukan pada )aktu

yang bersamaan yaitu, aminar ir =lo) $=', ;otol semprot yang berisi

alkohol 0A, Pinset, Pisau, &eal )rap $segel', ertas label, lat tulis, ;unsen dan

Petri dish. &edangkan bahan yang harus disediakan yaitu medium padat kultur

jaringan yang telah dibuat pada praktikum sebelumnya, PestisidaB =ungisida,

Duades serta lkohol 0A.

&etelah alat dan bahan sudah lengkap tersedia, maka praktikan dapat

memulai praktikum a+ara kultur organ dengan prosedur yang sudah terdapat

dalam modul yaitu membuka plastik yang membungkus petridish yang

sebelumnya telah disterilkan menggunakan auto+lave, mensterilkan di atas nyala

api ;unsen. *enjaga agar alat tetap steril maka sebelum digunakan memanaskan

terlebih dahulu di atas nyala api ;unsen. *engangin"anginkan peralatan yang

telah steril sebelum masuk dalam botol kultur. *engeluarkan kultur dari dalam

botol dengan sangat hati"hati agar merusak kultur. *eletakkan kultur pada

petridish menggunakan pinset steril. &etelah meletakkan kultur pada petridish

pinset yang telah digunakan harus disterilkan kembali sebelum digunakan lagi.

*ensterilkan dahulu Pisau dan Pinset yang hendak digunakan dengan nyala api

pada ;unsen.

*emotong kultur tembakau tepat pada bagian daun yang masih muda dan

sehat. *emotong daun yang utuh menjadi 2 bagian yang sama dan begitu pula

seterusnya hingga di dapatkan jumlah yang diharapkan. *ensterilkan kembali

potongan yang telah di dapatkan beserta petridishnya &ebelum dibuka, maka

hendaklah mensterilkannya dalam nyala api pada ;unsen. *engambil beberapa

potongan daun tembakau. *eletakkan potongan daun $menanam potongan daun'

yang telah di ambil ke dalam botol kultur yang telah disediakan hingga tepat pada

medium. &etelah selesai menanam atau meletakkan kultur pada media media

tersebut harus ditutup kembali dengan aluminium foil. *emasang kembali karet

gelang pada leher botol kutur agar tidak ada rongga udara pada botol untuk

men+egah kontaminan. >ntuk mengun+i media agar tidak terpengaruh dari luar

atau mendapat kontaminan dari luar selain dileher botol dipasang karet gelang

harus di seal atau di segel lagi. *engamati kultur pada hari ke" dan ke"13


15/36

&etelah praktikum selesai dilakukan maka dilakukanlah pengamatan pada

hari ke" dan hari ke"13. Parameter yang digunakan untuk mengamatinya adalah

mengamati perubahan yang terjadi pada bahan tanam. Perubahan dapat

ditunjukkan dengan adanya proses pertumbuhan pada bahan tanam baik dalam

bentuk kalus, akar atau tunas. Pertumbuhan bahan tanam tembakau dapat

diperjelas dengan menggunakan grafik. ;erdasarkan tabel hasil pengamatan dapat

diperoleh bah)asanya pada hari ke" dan ke"13 menunjukkan hasil yang sama.

;ahan tanam tembakau yang telah ditanam dengan perlakuan *&E0 menunjukkan

bah)a tidak ada perubahan bahan tanam baik dari segi kalus E 0, tunas E 0, dan

juga akarE 0.

Pada perlakuan *& dengan P( 0,25ppm dan ;P 1ppm diperoleh

hasil tidak ada perubahan bahan tanam baik dari segi kalus E 0, tunas E 0, dan

juga akarE 0. Pada perlakuan selanjutnya dengan menggunakan media *& yang di

tambahi dengan P( 1ppm dan ;P 0,25ppm menunjukkan hal yang sama

bah)a tidak ada perubahan bahan tanam baik dari segi kalus E 0, tunas E 0, dan

juga akarE 0. Pada perlakuan ke"3 dengan media *& menggunakan P( ;P

0,5ppm menunjukkan tidak ada perubahan bahan tanam baik dari segi kalus E 0,

tunas E 0, dan juga akarE 0. Perlakuan yang terakhir dengan media *& yang

ditambahi dengan 2,3 / 0,5 ppm tidak ada perubahan bahan tanam baik dari segi

kalus E 0, tunas E 0, dan juga akarE 0. &ehingga dapat disimpulkan berdasarkan

hasil pengamatan hari ke" dan hari ke"13 dapat diketahui tidak ada aktivitas

pertumbuhan. Hal ini dikarenakan tidak adanya perubahan yang dapat dilihat

dengan mun+ulnya kalus, tunas, dan akar pada eksplan. #leh karena itu dapat

diperjelas dalam grafik pertumbuhan pada hari ke" dan hari ke"13.


16/36

Pada grafik pertumbuhan hari ke"13 juga diperoleh grafik yang sama

dengan grafik pertumbuhan pada hari ke".

;erdasarkan grafik yang telah ditampilkan maka, )aktu pertumbuhan

untuk bahan tanam tembakau membutuhkan )aktu yang lebih lama untuk

membentuk kalus hingga menjadi tunas dan menjadi planlet dengan adanya akar.

arena pada dasarnya kultur organ merupakan salah satu teknik dalam hal

perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan. Perbanyakan se+ara in vitro dapat

dilakukan melalui tiga +ara yaitu pembentukan tunas adventif, proliferasi tunas

lateral, dan embriogenesis somati+ $


17/36

ultur sel yang mempunyai tipe khusus seperti serbuk sari $sel haploid' dan

endosperm dengan sel triploid. &etelah itu, kultur anter atau polen yang

menggunakan eksplan dari anter atau kepala sari yang mengandung polen.

ultur embrio bertujuan memperpendek )aktu berke+ambah, menguji

ke+epatan viabilitas biji, memperbanyak tanaman langka yang mempunyai embrio

pada keadaan normal sering mati pada a)al tingkat perkembangannya. angkah

dalam kultur embrio dengan memisahkan embrio yang masih belum de)asa dan

menumbuhkannya se+ara in vitro. ultur protoplas yang bertujuan untuk

mempelajari komponen penyusun sel atau organel hingga dapat melakukan fusi

protoplas. &elain itu juga untuk mendapatkan tanaman hybrid dan cybrid somatic

yang dapat digunakan dalam transplantasi dan transformasi genetik. ultur biji

yang memper+epat )aktu untuk berke+ambah dan mengatasi masalah pada

tanaman langka, mempelajari ke+epatan pertumbuhan hingga diperoleh biji steril

untuk mengatasi kontaminasi yang terjadi pada eksplan yang dibudidayakan.

&alah satu faktor keberhasilan kultur jaringan sangat dipengaruhi oleh -at

pengatur tumbuh tanaman. at pengatur tumbuh ini mempengaruhi pertumbuhan

dan morfogenesis dalam kultur sel, jaringan dan organ. at pengatur tumbuh dapat

digolongan menjadi beberapa golongan, yaitu auksin, sitokinin, giberelin, dan

inhibitor. Hal ini dikarenakan interaksi dan perimbangan antara -at pengatur

tumbuh yang diberikan dalam media dan yang diproduksi oleh sel se+ara endogen,

menentukan arah perkembangan suatu kultur $una)an, 1988 dalam nna,

201!'.

Hal ini dikarenakan pertumbuhan juga memerlukan pembentukan senya)a

bahan baku dinding sel. Pertumbuhan berkaitan dengan pertambahan volume dan

jumlah sel, pembentukan protoplasma, pertambahan berat dan selanjutnya terjadi

pertambahan berat kering. Pengeringan bertujuan untuk menghentikan

metabolisme sel dari bahan tersebut $&itompul dan uritno, 1995 dalam


18/36

seperti auksin dan sitokinin. Hal ini diduga dengan penambahan kedua hormon

tersebut dapat mempengaruhi metabolisme


19/36

;P termasuk ke dalam golongan sitokinin sering digunakan bersamaan

dengan untuk mendapatkan morfogenesis tanaman yang diinginkan. Hal ini

ditunjukkan dengan mun+ulnya akar, tinggi planlet, jumlah daun, jumlah tunas,

dan jumlah akar. *edia yang digunakan mampu mendorong organogenesis

pertumbuhan. &ehingga menunjukkan adanya keseimbangan antara hormon

endogen dan -at pengatur tumbuh yang diberikan pada setiap perlakuan guna

mendorong proses organogenesis. Pertumbuhan dan perkembangan eksplan

dipengaruhi oleh interaksi dan keseimbangan antara -at pengatur tumbuh endogen

dan -at pengatur tumbuh eksogen $*irni, 2011'.

=aktor lain dalam hal mempengaruhi keberhasilan teknik kultur jaringan

menggunakan kultur organ yaitu adalah pengaruh lingkungan tumbuh dengan

beberapa parameter lingkungan yang ada dalam botol kultur terhadap

pertumbuhan talus atau tunas, antara lain suhu, kelembaban dan +ahaya. (anaman

umumnya dapat tumbuh pada lingkungan dengan suhu yang sama di setiap proses

pertumbuhannya. /apat dimisalkan bah)a suhu pada siang hari dengan malam

hari sangatlah berbeda sehingga tanaman mengalami perbedaan kondisi suhu yang

lumayan +ukup besar. #leh karena itu, dalam laboratorium kultur in vitro dapat

diatur dengan suhu yang selalu konstan yang tidak lebih tinggi dari suhu pada

kondisi in vivo. &uhu yang dipergunakan dalam laboratorium suhu 21"25?@.

(anaman tropis dapat dikulturkan pada suhuyang lebih tinggi dari tanaman empat

musim sekitar 2?@ $23"!2?@' $7uliarti, 2010 50'.

elembaban relatif dalam botol kultur dengan mulut botol yang ditutup

dengan aluminium foil umumnya diperoleh kelembaban yang tinggi antara 80"

99A. amun apabila sudah ditutup tapi masih sedikit longgar maka kelembaban

relative dalam botol dapat lebih rendah dari 80A. elembaban di ruangan kultur

berada pada kelembaban relative diba)ah 0A dapat mengakibatkan botol kutur

yang tidak tertutup rapat dapat +epat menguap dan kering sehingga eksplan dan

planlet yang dikulturkan akan kehilangan nutrisi yang terkandung pada media.

elembaban udara relatif yang tinggi dalam botol kultur juga tidak baik untuk

eksplan dan planlet dikarenakan menyebabkan tanaman dapat tumbuh abnormal


20/36

dengan daun yang lemah, mudah patah, tanaman ke+il"ke+il sehingga kondisi ini

disebut vitrifikasi atau hiperhidro+ity $7usnita dalam *irni, 2011'.

Pada teknik perbanyakan tanaman se+ara in vitro, kultur umumnya

diinkubasikan pada sebuah ruang penyimpanan dengan penyinaran yang +ukup.

Hal ini dikarenakantunas umumnya dapat dirangsang pertumbuhannya dengan

adanya penyinaran. &umber +ahaya yang biasanya digunakan dalam ruangan

kultur jaringan adalah lamu fluores+ent $(' yang dapat menghasilkan )arna

putih, selain itu suhu ruang kultur dapat meningkat namun dalam jumlah yang

sedikit. :ntesitas yang digunakan dalam ruang kultur sekitar 1B10 dari intensitas

+ahaya yang dibutuhkan dalam keadaan normal. :ntensitas yang digunakan untuk

pertumbuhan tunas sekitar 600"1000 luC. &edangkan pada tahap perke+ambahan

dan inisiasi akar hanya dapat dilakukan pada intensitas +ahaya yang lebih sedikit

dibandingkan dengan pertumbuhan tunas $(riningsih, 201!'. ;erdasarkan

pembahasan yang telah diuraikan dapat disimpulkan bah)asanya lingkungan

seperti suhu, kelembaban relatif udara, kuantitas serta kualitas +ahaya yang

disebut intensitas +ahaya, lama penyinaran, dan panjang gelombang dalam botol

kultur sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan kalus, sebelum terjadi

pertumbuhan organ atau juga jaringan yang tidak terpengaruh oleh beberapa

parameter lingkungan yang ada dalam botol kultur selama proses kultur jaringan.

BAB &" KE*IMPULAN DAN *ARAN

&"# Ke!i3ulan

1. #rgan tanaman yang mampu beregenerasi menjadi tanaman lengkap sehingga

mempunyai sifat totipotensi. arena sifat tersebut tanaman dapat diperbanyak

dengan menggunakan teknik kultur jaringan. *aka dari itu eksplan yang

digunakan berasal dari jaringan yang masih muda $juvenil' yang dikarenakan

dapat mudah tumbuh dan beregenerasi dibandingkan jaringan yang sudah

mature atau sudah mengalami diferensiasi lanjut. 4aringan muda yang

digunakan memiliki sifat sel yang sangat aktif membelah dengan dinding sel


21/36

yang masih belum kompleks. 4aringan muda yang sering digunakan antara lain

pu+uk muda, kun+up muda, hipokotil, inflores+en+e yang belum de)asa.

2. Fksplan yang steril dapat dihasilkan melalui proses sterilisasi bahan tanam

dengan menggunakan bahan sterilisasi seperti @loroC atau bay+lin ditujukan

karena bay+lin memiliki kandungan yang dapat membersihkan eksplan dari

berbagai ma+am kontaminan baik berupa jamur, virus, bakteri. &ehingga pada

eksplan yang steril dapat diperoleh planlet murni atau stok murni tanaman

dalam jumlah yang besar dalam )aktu yang relatif lebih singkat serta dapat

dipastikan bebas dari virus dan penyakit. *ultiplikasi atau perbanyakan yang

diperoleh melalui penanaman se+ara in vitro sangat tinggi. Produksi bibit yang

berkualitas, hasil yang homogen, dan dalam )aktu yang singkat dapat

diperoleh jumlah yang sangat banyak juga dapat diperoleh melalui teknik

budidaya konvensional $Hobir et al dalam nna, 201!'.

&"% *aran

/alam hal menaikkan keberhasilan pada praktikum ini, adapun beberapa

saran yang pastinya perlu untuk diperhatikan, yaitu

1. &angat memperhatikan kesterilan alat dan bahan dan memastikan semuanya

dalam keadaan steril.

2. &elalu memakai jas praktikum saat praktikum maupun pada saat

pengamatan baik pada praktikan maupun asisten laboratorium untuk

menghindari adanya kontaminasi.


22/36

DA/TAR PU*TAKA

nna


23/36

/)i %ahyuni rdiana dan :da =itrianingsih. 2010. (eknik ultur 4aringan

(unas Pepaya dengan *enggunakan ;eberapa onsentrasi :;. Dwi

W Buletin e!ni! "ertanian Gol. 15, o. 2 52"55

Hendaryono, /aisy P &riyanti %ijayanti, ri. 1993. e!ni! #ultur Jarin$an

%eta!an !e&'(. 7ogyakarta anisius

*arlin, 7ulian, dan Hermansyah. 2012. :nisiasi alus Fmbriogenik Pada

ultur 4antung Pisang I@urupJ /engan Pemberian &ukrosa, ;ap /an

2,3"/. :nitiation of embryogeni+ +allus formation of ;anana I@urupJ

male bud +ulture supplemented )ith su+rose, ;P, and 2,3"/. J.

A$rivi$or '')*+, *-&*/(0 :&& 1312"2286

*irni >lfa ;ustami. 2011. Penggunaan 2, 3"/ >ntuk :nduksi alus a+ang

(anah. 1edia 2itban$ Sulten$ IV )*+, 1! K 131, :&& 199 K 591


24/36

(riningsih, uthfi . * &iregar, ollie . P. Putri. 201!. Pertumbuhan

Fksplan Puar (enangau $ 3lettario5sis &p.' &e+ara :n Gitro. Jurnal

Online A$roe!ote!nolo$i Vol.'0 No.*0 :&& o. 2!!" 659

7uliarti, urheti. 2010. #ultur Jarin$an anaman S!ala 4umah an$$a.

7ogyakarta ily Publisher 1


25/36


26/36


27/36


28/36


29/36


30/36


31/36


32/36


33/36


34/36


35/36


36/36

laporan_bioteknologi_kultur_jaringan.doc

Documents