Download - Penanaman Dan Isolasi Mikroba
Penanaman dan Isolasi Mikroba
KELOMPOK 8
Anis Wahyu Fadhilah 4311411023 Wardatul khoiriyah 4311411024 Aris Tri Susanto 4311411026
POKOK PEMBAHASAN
PENANAMAN MIKROBA
PENGAWETAN BIAKAN MURNI
KOLONI MIKROBA
ISOLASI MIKROBA
PENANAMAN MIKROBA
MACAM PENANAMAN MIKROBA
PENGANTAR
MIKROBA AEROB
Cara Goresan
Cara Tabur
Medium yang Diperkaya
Menghilangkan Oksigen
MIKROBA ANAEROB
Absorpsi Oksigen
Mendesak Oksigen
MIKROBA ANAEROB
MIKROBA PARASIT OBLIGAT
Menanam mikroba->menumbuhkan mikroba dalam medium
Mengisolasi mikroba->memisahkan mikroba dari lingkungannya di
alam dan menumbuhkannya sebagai biakan murni dalam medium buatan
Pengantar penanaman mikroba
Menanam mikroba merupakan pekerjaan yang membuthkan ketelitian.
Alat dan medium harus benar-benar dalam keadaan steril untuk menghindari kontaminasi.
Untuk isolasi mikroba harus mengetahui cara-cara menanam dan menumbuhkan mikroba pada medium biakan serta syarat syarat lain untuk pertumbuhan mikroba tertenru
PENANAMAN MIKROBA PENANAMAN MIKROBA PERLU MEMPERHATIKAN FAKTOR NUTRISI DAN KEBUTUHAN AKAN OKSIGEN
Penanaman mikroba
Penanaman
mikroba aerob
Penanaman
mikroba anaerob
Penanaman mikroba parasit obligat
Penanaman mikroba aerob dapat dilakukan pada :-agar deep culture / medium agar tegak-agar slant culture / medium agar miring-borth culture / medium cair
Penanaman mikroba aerob
PENANAMAN MIKROBA AEROB
Goresan-> dapat menggunakan medium agar tegak
steril, miring steril, atau medium agar pada cawan petri yang steril
Tabur->menggunakan medium agar yang cair
a)menggunakan medium yang diperkaya
b)menghilangkan oksigen bebas dengan pembakaran
c)absorpsi oksigen secara kimiad)mendesak oksigen dengan gas inert
Penanaman mikroba anaerob
PENANAMAN MIKROBA ANAEROB MENGGUNAKAN MEDIUM YANG DIPERKAYA
Medium diperkaya yang digunakan adalah thioglycolate cair, thioglycolate agar, dll. Medium tersebut mengandung bahan yang dapat menyerap oksigen
PENANAMAN MIKROBA ANAEROB DENGAN MENGHILANGKAN OKSIGEN BEBAS MELALUI PEMBAKARAN
Diperlukan penyungkup yang dapat ditutup rapat, misalnya eksikator
Dalam penyungkup ditambahkan phosphor murni, pada dasar penyungkup ditambahkan air
PENANAMAN MIKROBA ANAEROB DENGAN ABSORPSI OKSIGEN SECARA KIMIA
Yang diperlukan adalah eksikator , asam pirogalol dan alkali (KOH).
Untuk setiap liter eksikator diberi 12,5cc larutan KOH 20% dan 10cc larutan asam pirogalol 40%
PENANAMAN MIKROBA ANAEROBDENGAN MENDESAK OKSIGEN MENGGUNAKAN GAS INERT
Menggunakan alat novy untuk mendesak gas hidrogen atau gas nitrogen secara mekanik
Indikator adanya oksigen menggunakan campuran larutan NaOH 1/160 N, larutan methylene blue 0,015% dan larutan glukosa 6% padapermandingan volume yang sama. Campuran direbus sebelum digunakan, apabila terdapat oksigen maka methylene blue berwarna biru apabila tidak maka tidak berwarna.
Medium pertumbuhannya memerlukan jaringan hidup
Biakan dalam jaringan tersebut disebut biakan jaringan (tissue culture)
Penanaman mikroba parasit obligat
ISOLASI MIKROBA
MACAM-MACAM ISOLASI MIKROBA
PENGANTAR
ISOLASI BAKTERI
ISOLASI KHAMIR
ISOLASI JAMUR BENANGISOLASI
AKTINOMISETESISOLASI ALGAE
Dalam mengisolasi mikroba ada beberapa hal penting, antara lain :
1. Sifat spesies mikrobia yang akan diisolasi,
2. Tempat hidup atau asal mikrobia tersebut,
3. Medium untuk pertumbuhannya yang sesuai,
4. Cara mananam mikroba tersebut,
5. Cara inkubasi mikroba tersebut,
6. Cara menguji bahwa mikroba yang diisolasi telah berupa biakan murni,
7. Cara memelihara agar mikroba yang telah diisolasi tetap merupakan biakan murni.
PENGANTAR
Dua cara yang umum digunakan untuk mengisolasi bakteri, yaitu:
1. Cara goresan (streak plate method)
Dengan menggoreskan suspensi bahan yang mengandung bakteri pada permukaan media agar dalam petridish. Setelah inkubasi, maka pada bekas goresan akan tumbuh koloni-koloni terpisah yang mungkin berasal dari satu sel bakteri, sehingga dapat diisolasi lebih lanjut.
ISOLASI BAKTERI
2. Cara taburan (pour plate method)
Dilakukan dengan menginokulasi medium agar yang sedang mencair pada temperatur 50 C dengan suspensi bahan yang ⁰mengandung bakteri, dan menuangkannya ke dalam petridish steril. Setelah inkubasi akan terlihat koloni-koloni yang tersebar di permukaan agar yang mungkin berasal dari satu sel bakteri, sehingga dapat diisolasi lebih lanjut.
ISOLASI BAKTERI
Khamir dapat diisolasi dengan cara goresan dan taburan seperti bakteri, tetapi berbeda dengan susunan mediumnya. Cara – cara lain untuk mengisolasi khamir adalah sebagai berikut:
1. Cara Hansen, menggunakan ruangan lembab (moist chamber method)
2. Cara pengenceran – penaburan (dilution plate method)
ISOLASI KHAMIR
3. Cara Linder
Merupakan modifikasi dari cara Hansen. Suspensi yang mengandung khamir dimasukkan ke dalam cairan buah steril. Setetes cairan tersebut diteteskan pada gelas penutup,diletakkan terbalik
Pada gelas benda yang berlekuk, keduanya diletakkan dengan vaselin, diinkubasikan dan diamati dengan mikroskop. Setelah sel tumbuh menjadi sekelompok sel, dipindahkan ke medium yang baru.
ISOLASI KHAMIR
4. Dengan Mikromanipulator
Pada cara ini dipakai mikroskop yang dilengkapi alat khusus (mikromanipulator). Pada dasarnya satu sel khamir diambil kemudian dimasukkan ke dalam medium, sehingga pertumbuhan yang terjadi berasal dari satu sel itu saja.
ISOLASI KHAMIR
Terdapat beberapa cara dalam mengisolasi jamur benang, diantaranya :
1. Cara pengenceran – penaburan.2. Cara isolasi dengan mengambil spora –
spora dari satu sporangium. Dilakukan dengan cara mengambil spora –spora dari satu sporangium jamur yang diduga telah murni, lalu menumbuhkannya pada medium yang sesuai. Dari hasil tersebut kemungkinan masih diperoleh biakan jamur yang belum murni, sehingga isolasi perlu diulangi beberapa kali.
ISOLASI JAMUR BENANG
3. Dengan mikromanipulator prinsipnya sama dengan cara isolasi
khamir.4. Dengan mengecambahkan satu
spora.5. Dengan mengecambahkan satu spora
menurut cara keitt yang dimodifikasi.6. Dengan mengecambahkan satu spora
menurut cara Hansen.
ISOLASI JAMUR BENANG
Aktinomisetes dapat diisolasi dari tanah atau bahan lain dengan cara taburan atau goresan yang didahului oleh pengenceran pada medium agar atau medium gelatin. Inkubasi biasanya pada temperatur 28-30⁰C selama 2-7 hari. Koloni aktonomisetes dapat dibedakan dari koloni jamur dan koloni bakteri. Koloni aktinomisetes kelihatan kompak, kadang-kadang membentuk kerucut dengan permukaan yang kering, kadang-kadang ditutupi dengan miselium udara.
ISOLASI AKTINOMISETES
Jika koloni berkembang baik dan miselium udara lebat, maka spora di permukaan mudah diambil dengan ose. Jika perkembangannya kurang baik atau miselium udara tidak terbentuk, maka harus menggunakan spatel inokulasi untuk memindahkan sebagian koloninya ke medium baru. Jika ditumbuhkan pada medium cair kebanyakan aktinomisetes tumbuh pada permukaan medium, membentuk masa yang kompak dan dapat diambil dengan penyaringan menggunakan kertas saring.
ISOLASI AKTINOMISETES
Medium yang mengandung glukosa, gliserol atau tepung sebagai sumber karbon. Nitrat atau kasein sebagai sumber nitrogen dan mineral-mineral seperti: NaCl, K₂HPO₄.7H₂0, CaCO₃, dan FeSO₄.7H₂0 merupakan medium yang baik untuk aktonomisetes. Antibiotik seperti mystatin dan cyclohexide untuk menghambat jamur, untuk menekan perkembangan bakteri ke dalam medium ditambahkan polymizin atau penicillin. Untuk isolasi Nacardia dari tanah digunakan cholesterol dan Natrium Acide dengan alkali –agar pada pH 8,0.
ISOLASI AKTINOMISETES
Terdapat beberapa cara untuk mengisolasi Algae, diantaranya ialah :
1. Cara langsungPada cara ini digunakan mediaum agar yang selektif. Bahan yang mengandungb algae disebarkan pada permukaan medium agar yang telah dituangkan dalam petridish. Setelah tumbuh akan membentuk koloni-koloni algae.
ISOLASI ALGAE
2. Cara goresanCara isolasi secara goresan ini sama dengan cara goresan mikrobia- -mikrobia lain. Untuk mengambil dan meratakan inokulen di atas medium agar digunakan spatel drigalski.
3. Biakan dalam larutan garamLarutan garam seperti larutan medium Detmer, Benecke, Beyerinck atau knop diinokulasi dengan tanah atau suspensi yang mengandung algae. Setelah diinkubasi tampak beberapa spesies yang tumbuh baik. Larutan garam tadi dapat menekan pertumbuhan bakteri dan jamur benang karena tidak mengandung sumber energi.
ISOLASI ALGAE
4. Biakan tanah air (soil water culture)Pada cara ini algae ditumbuhkan dalam air yang ada tanahnya di dasar. Tanah berfungsi sebagai sumber unsur-unsur yang diperlukan. Dapat juga ditambahkan garam-garam mineral untuk memperkaya medium.
5. Cara pengenceran-penaburan6. Isolasi dari sel tunggal
Cara melakukan sama dengan cara isolasi menggunakn mikromanipulator.
ISOLASI ALGAE
7. Isolasi dengan Menggunakan Gerakan karena Cahaya (photostastic purification)Prinsip isolasi dengan menggunakan petridish yang ditutup dengan kertas hitam yang sebagian diberi lubang, maka setelah diinkubasikan akan tumbuh kelompok-kelompok algae pada daerah yang terkena cahaya. Algae ini dapat diisolasi lebih lanjut dan dapat dipindahkan ke medium steril lainnya.
ISOLASI ALGAE
KOLONI MIKROBAKOLONI MIKROBA
SIFAT KOLONI MIKROBA
PENGANTAR
Pada Agar-Agar Lempeng
Pada Agar-Agar Miring
Pada Tusukan dalam Gelatin
Pada medium cair
Setelah didapatkan biakan murni, maka perlu diadakan pengamatan terhadap koloni yang tumbuh dalam medium, diantaranya bentuk koloni, warna permukaan koloni, pengkilatan koloni, dan yang lainnya.
Untuk mengamati koloni mikroba, dapat dilakukan dengan mengamati sifat-sifatnya jika terdapat pada :1. Agar-agar Lempeng,2. Agar-agar Miring,3. Tusukan dalam Gelatin, dan4. Medium Cair.
PENGANTAR
Bentuk koloni : Seperti titik-titik, bulat, berbenang, tak teratur, serupa akar, serupa kumparan
Permukaan : Datar, timbul membukit, timbul berkawah.
Tepi : utuh, berombak, berbelah-belah, bergerigi, berbenang-benang, dan keriting.
Pada agar-agar lempeng
Memiliki bentuk seperti pedang duri, tasbih, titik, batang, dan akar.
Pada agar-agar Miring
Terdapat dua jenis mikroba, yaitu :1. mikroba yang dapat mengencerkan gelatin memiliki bentuk seperti kawah, mangkuk, corong, dan pundi-pundi.
Pada Tusukan dalam Gelatin
2. Mikoba yang tak dapat mengencerkan gelatin memiliki bentuk seperti pedang, tasbih, bertonjol-tonjol, berjonjot, dan batang
Pada Tusukan dalam Gelatin
Perbedaan bentuk koloni mikroba berdasarkan kebutuhannya akan udara.
Memiliki bentuk seperti serabut, cincin, langit-langit, dan selaput.
Pada Medium Cair
PENGAWETAN BIAKAN MURNI
CARA PENGAWETAN
PENGANTAR
Mencegah terjadinya pengeringan
Liofilisasi (freeze drying)
Menanam pada medium tanah steril
Pengawetan biakan murni bertujuan agar biakan murni dapat mempertahankan sifat-sifat fisiologisnya. Hal ini karena biakan murni yang yang ditanam dalam medium buatan sering mengalami kemunduran sifat-sifat fisiologi aslinya. Misalnya akibat faktor penanaman terus-menerus dalam medium buatan dapat menyebabkan :1. Streptomyces griseus kehilangan kemampuan untuk membentuk streptomycin,2. Clostridium acetobutylicum kehilangan daya fermentasi karbohidrat menjadi aseton butanol ,3. beberapa bakteri patogen kehilangan virulensinya.
PENGANTAR
Dapat dilakukan dengan cara :a. Menutup tabung biakan dengan kapas yang
telah direndam dalam parafin.b. Menutup tabung biakan dengan kertas
parafin, plastik, atau sumbat karet.c. Menutup tabung biakan dengan pemijaran.d. Menutup permukaan biakan dengan minyak
parafin atau minyak mineral. Alur prosesnya :
Mikroba
Direndam dengan minyak parafin
Inkubasi (24-28 jam)
Media agar miring
Inkubasi dalam suhu kamar
Mencegah Terjadinya Pengeringan
BIAKAN BAKTERI
Didinginkan dengan DRY ICEPerlakuan :
Temperatur 0°C Tekanan 0,01 mmHg
Waktu 12-24 jam
Mikroba liofilik berupa tepung dan mudah menyerap air
Liofilisasi (Freeze Drying)
Bakteri ditumbuhkan dalam medium tanah steril. Medium yang digunakan adalah tanah kebun disterilkan dengan Autoclave (121˚C, 20 menit) 3 kali berturut-turut selama 3 hari. Setelah diinokulasi dengan sejumlah inokulum cair, medium diinkubasikan pada temperatur 5-6˚C.
Menanam Mikroba dalam Medium Tanah Steril
Terima kasih