cermai.pdf

7/22/2019 Cermai.pdf

1/39

i

POTENSIANTIOKSIDAN DAN SITOTOKSISITAS EKSTRAK

BUAH CEREMAI (Phyll anthus acidus L.)

WULAN WIDIANTI

DEPARTEMEN BIOKIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2012


2/39

ii

ABSTRAK

WULAN WIDIANTI. Potensi Antioksidan dan Sitotoksisitas Ekstrak Buah

Ceremai (Phyllanthus acidus L.). Dibimbing oleh MARIA BINTANG dan

DIMAS ANDRIANTO.

Buah ceremai merupakan tanaman yang berasal dari India yang termasuk ke

dalam famili Euphorbiaceae. Tanaman ceremai tidak hanya dapat digunakan

sebagai tanaman hias tetapi juga dapat digunakan sebagai suplemen herbal.

Tanaman ceremai dilaporkan mempunyai khasiat sebagai hepatoprotektif,

antibakteri, antijamur, namun potensi antioksidan belum diketahui. Tujuan

penelitian ini untuk menguji aktivitas antioksidan dan sitotoksisitas dari buah

ceremai. Buah ceremai diekstrak dengan menggunakan metode maserasi, proses

ekstraksi menggunakan tiga pelarut yaitu etanol 70%, etanol 30%, dan air.

Aktivitas antioksidan dengan metode 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) dan

sitotoksisnya (uji potensi hayati) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test(BSLT). Nilai IC50 yang dihasilkan dari ketiga ekstrak yaitu ekstrak air, etanol

30%, dan etanol 70% berturut-turut 26.06 ppm, 72.39 ppm, dan 62. 17 ppm. Nilai

LC50yang dihasilkan dari ekstrak air, etanol 30%, dan etanol 70% berturut-turut

473.26 ppm, 486.78 ppm, dan 618.55 ppm. Ektrak air merupakan ekstrak yang

memiliki aktivitas antioksidan terbaik dibandingkan dengan ekstrak etanol 30%

dan etanol 70%. Namun ketiga ekstrak buah ceremai segar kurang baik untuk

dikonsumsi oleh manusia sebagai suplemen herbal karena bersifat toksik.

Kata kunci : Antioksidan, DPPH, sitotoksisitas, ceremai.


3/39

iii

ABSTRACT

WULAN WIDIANTI. Antioxidant and Cytotoxicity of Ceremai (Phyllanthus

acidus L.) Extract. Under supervision of MARIA BINTANG and DIMAS

ANDRIANTO.

Ceremai is an indigenous plant from India, belongs to Euphorbiaceae

family. Ceremai plnat not only be used as an ornamental plant but can also be

used as a herbal supplement. Ceremai Plants reported to have efficacy as a

hepatoprotective, antibacterial, antifungal, antioxidant potency is not known yet.

The purpose of this study to prove the antioxidant activity and cytotoxicity of fruit

Ceremai. Ceremai was extracted by maceration using 70% ethanol, 30% ethanol,

and water as solvents. Results were determined by antioxidant activity using of

2,2-diphenyl-1-pikrilhidrazil (DPPH) and its cytotoxicity (biological potency) was

determined by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. IC50 values were

26.06 ppm, 72.39 ppm, and 62, 17 ppm for water, 30% ethanol and 70% ethanolexstract respectively. LC50 values were produced from three extracts water,

ethanol 30%, and 70% ethanol, they were 473.26 ppm, 486.78 ppm, 618.55 ppm.

Water extract is the best antioxidant activity compared with 30% ethanol extract

and 70% ethanol. However, ceremai fresh fruit extracts are not good for human

consumption herbal supplements because it is toxic.

Keywords: Antioxidant, DPPH, cytotoxicity, ceremai.


4/39

iv

POTENSIANTIOKSIDAN DAN SITOTOKSISITAS EKSTRAK

BUAH CEREMAI (Phyll anthus acidus L.)

WULAN WIDIANTI

G84080018

Skripsi

sebagai salah satu syarat memperoleh gelar

Sarjana Sains pada

Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2012


5/39

v

Judul Skripsi : Potensi Antioksidan dan Sitotoksisitas EkstrakBuah Ceremai(Phyllanthus acidus L.)

Nama : Wulan Widianti

NIM : G84080018

Disetujui

Komisi Pembimbing

Prof. Dr. drh. Maria Bintang, M.S Dimas Andrianto, S.Si, M.Si.

Ketua Anggota

Diketahui

Dr. Ir. I Made Artika, M.App.Sc

Ketua Departemen Biokimia

Tanggal Lulus:


6/39

vi

PRAKATA

Puji Syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT dan junjungan kita nabi

Muhammad SAW yang telah memberikan limpahan rahmat dan hidayah-Nya

sehingga penulis pada kesempatan ini dapat menyelesaikan penelitian denganjudul Potensi Antioksidan dan Sitotoksisitas Ekstrak Buah Ceremai(Phyllanthus acidus L.).Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan Februari 2012

sampai dengan Juni 2012 di Laboratorium Biokimia IPB, Institut Pertanian Bogor.

Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Prof.

Dr. drh. Maria Bintang dan Dimas Andrianto, S.Si, M.Si. selaku komisi

pembimbing atas segala kesabaran dan keikhlasan dalam memberikan bimbingan,

arahan, dan masukan bagi penulis.

Penulis juga mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada kedua

orang tua, adik penulis, dan keluarga atas doa, motivasi, semangat, dan dukungan

moriil, maupun materi yang telah diberikan. Tidak lupa penulis ucapkan terima

kasih kepada Nanda Yudhistira, Esti, Elsha, Sofi, dewi, Nadia, Daniel, dan Fecoatas segala doa, bantuan teknis maupun nonteknis, serta dukungan semangatnya.

Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan.

Bogor, September 2012

Wulan Widianti


7/39

vii

RIWAYAT HIDUP

Wulan Widianti dilahirkan di Sumedang pada tanggal 23 April 1989 dari

Ayah Juhana Erly Kusdian dan Ibu Darsem. Penulis merupakan anak pertama dari

dua bersaudara. Penulis menyelesaikan pendidikan jenjang menengah atas diSMA Negeri 1 Sumedang pada tahun 2008. Pada tahun yang sama penulis

melanjutkan jenjang lebih tinggi di Institut Pertanian Boogor (IPB) melalui

Undangan Selesksi Masuk IPB (USMI). Penulis diterima sebagai mahasiswa

Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB.

Selama mengikuti kegiatan perkuliahan penulis pernah mengikuti berbagai

kepanitiaan seperti Kesehatan dan Keselamatan Kerja tahun 2009, Lomba Karya

Ilmiah Populer tahun 2009, Masa Pengenalan Departemen tahun 2010, Sport

Competition and Art Festival On MIPA (SPIRIT) 2010, Seminar Kesehatan

Biokimia tahun 2011, seminar Sain Nasional 2011. Selama mengikuti kegiatan

perkuliahan pada tahun 2011 penulis melaksanakan kegiatan praktik lapangan diLaboratorium makanan Kementrian Perdagangan, dengan karya ilmiah berjudul

Analisis Kadar Benzoat, Sorbat, dan Sakarin dalam Saus Cabai Secara

Kromatografi Cair Kinjerja Tinggi (KCKT). Pada tahun 2012 penulis dkk,

mendapatkan dana program kreativitas mahasiswa bidang penelitian (PKMP) dan

lolos PIMNAS (Pekan Ilmiah Mahasiswa Nasional) berjudul Inhibisi Xantin

Oksidase Secara In Vitro oleh Ekstrak Suruhan (Peperomia pellucida (L. )

Kunth).


8/39

viii

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... ix

DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... ix

PENDAHULUAN .............................................................................................. 1

TINJAUAN PUSTAKA

Buah Ceremai .............................................................................................. 1

Radikal Bebas ............................................................................................. 2

Antioksidan ................................................................................................. 3

Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH ................................................... 4

Uji Sitotoksisitas Metode BSLT ................................................................. 4

BAHAN DAN METODE

Alat dan Bahan ........................................................................................... 5

Metode Penelitian ....................................................................................... 5

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air .................................................................................................... 7

Ekstraksi Sampel ......................................................................................... 7

Uji Fitokimia ............................................................................................... 8

Uji Aktivitas Antioksidan ........................................................................... 8

Uji Sitotoksisitas ......................................................................................... 9

Uji Korelasi Antioksidan dan Sitotoksisitas ............................................... 9

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan ..................................................................................................... 10

Saran ........................................................................................................... 10

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 10

LAMPIRAN ....................................................................................................... 13


9/39

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Buah ceremai (Phyllanthus acidus L.) .......................................................... 22 Radikal bebas ................................................................................................ 3

3 Prinsip penangkapan H oleh DPPH .............................................................. 4

4 Uji aktivitas antioksidan ............................................................................... 9

5 Uji sitotoksisitas ............................................................................................ 9

6 Korelasi antara IC50dan LC50 ....................................................................... 10

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1 Diagram alir penelitian secara umum .......................................................... 14

2 Ekstraksi buah ceremai ................................................................................. 15

3 Kadar air buah ceremai ................................................................................. 16

4 Rendemen masing-masing ektrak ................................................................ 17

5 Uji fitokimia ................................................................................................. 18

6 Gambar uji fitokimia .................................................................................... 19

7 Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH .......................................... 21

8 Prosedur uji antioksidan DPPH .................................................................... 22

9 Absorban ekstrak ......................................................................................... 23

10 Grafik hubungan antara % inhibisi dan konsentrasi .................................... 24

11 Nilai IC50 masing-masing ekstrak ................................................................ 25

12 Hasil analisis statistik IC50dengan selang kepercayaan 95% ...................... 26

13 Hasil analisis statistik IC50dengan ANOVA ............................................... 27

14 Hasil uji duncan IC50dengan selang kepercayaan 95% ................................ 28

15 Uji sitotoksisitas potensi hayati ................................................................... 29

16 Hasil analisis probit ...................................................................................... 30


10/39

1

PENDAHULUAN

Masyarakat Indonesia telah lama

mengenal serta menggunakan suplemen

herbal atau yang dikenal dengan obat

tradisional. Suplemen herbal lebih mudahditerima oleh masyarakat karena selain telahakrab dengan masyarakat, suplemen herbal ini

lebih murah dan mudah didapat. Berbagai

macam suplemen herbal yang berasal dari

tanaman dan telah banyak diteliti kandungankimia dan khasiat yang berada di dalamnya.

Menurut laporan WHO 1990 bahwasebanyak 17 juta orang meninggal tiap

tahunnya akibat penyakit degeneratif. Hinggasaat ini penyakit degeneratif menjadi

penyebab kematian terbesar di dunia. Menurut

Direktorat Jendral Pelayanan Medik

Kementrian Kesehatan tahun 2000 di Jakartadilaporkan bahwa jenis gangguan yang paling

tinggi pada penyakit degeneratif adalah sepertikanker, jantung, diabetes, dan hati

(Kementrian Kesehatan RI 2010).Penyakit degeneratif ini disebabkan karena

antioksidan yang ada di dalam tubuh tidak

mampu menetralisir peningkatan konsentrasi

radikal bebas. Radikal bebas sifatnya sangatlabil dan sangat reaktif sehingga dapat

menimbulkan kerusakan pada komponen selseperti DNA, lipid, protein, dan karbohidrat.

Kerusakan tersebut dapat menimbulkan

berbagai kelainan biologis seperti

aterosklerosis, kanker, dan diabetes (Chen et

al. 1996). Hal tersebut perlu dihindari dengan

pemakaian antioksidan tambahan dari luaratau antioksidan eksogen, seperti vitamin E,

vitamin C, betakaroten, flavonoid, dansenyawa fenolik.

Buah ceremai (Phyllanthus acidus L.)tidak hanya dapat digunakan sebagai tanaman

hias tetapi juga dapat digunakan sebagai

suplemen herbal. Dasar pemilihan buah

ceremai sebagai antioksidan dilatar belakangioleh potensi farmakologi daun, buah, batang,

dan kayu ceremai yang mengandungpolifenol, saponin, flavonoid, alkaloid, dan

tanin (Syamsuhidayat & Hutapea 1991).

Tanaman ceremai mempunyai khasiat sebagai

hepatoprotektif (Lee et al. 2006 dalam

Krismawati 2007) antibakteri, dan antijamur

(Melendez & Capriles 2006; Satish et al.2007; Jagessar et al. 2006 dalam Krismawati2007) . Daun ceremai berkhasiat untuk radang

usus dan obat mual. Akar ceremai digunakan

untuk obat asma dan daun muda untuk obat

sariawan. Daun ceremai terbukti memilikiaktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus

aureus, Escherichia coli, dan Candida

albicans (Jagessar et al. 2007 dalam

Krismawati 2007). Daun ceremai jugaberkhasiat sebagai peluruh dahak (Krismawati

2007).Radikal bebas dalam jumlah normal

bermanfaat bagi kesehatan misalnya,memerangi peradangan, membunuh bakteri,

dan mengendalikan tonus otot polospembuluh darah serta organ-organ dalam

tubuh. Radikal bebas dalam jumlah berlebihdapat mengakibatkan stress oksidatif.

Keadaan tersebut dapat menyebabkan

kerusakan oksidatif mulai dari tingkat sel,

jaringan, hingga ke organ tubuh yang

mempercepat terjadinya proses penuaan dan

munculnya penyakit degeneratif sepertikanker, katarak, diabetes melitus, penyakit

jantung koroner, dan gangguan

imonudefisiensi. (Yuwono 2009 dalamWidyastuti 2010).

Solusi dari masalah yang ditimbulkan

radikal bebas adalah dengan menggunakan

antioksidan. Antioksidan merupakan suatu zat

yang dapat menunda atau menghambat reaksioksidasi oleh radikal bebas. Perlakuan tiga

pelarut ekstrak, diharapkan mampumembuktikan potensi bioaktivitas antioksidan

dan efek farmakologi dari buah ceremai.

Penelitian ini bertujuan untuk menguji

aktivitas antioksidan dan sitotoksisitas terbaikdari ketiga ekstrak buah ceremai. Hipotesis

penelitian ini adalah ekstrak buah ceremaimemiliki aktivitas antioksidan dan bersifat

racun terhadapArtemia salina Leach. Manfaatdari penelitian ini yaitu sebagai informasi

tentang ekstrak tanaman buah ceremai yang

dapat menghasilkan aktivitas antioksidan

efektif yaitu yang memiliki hubungan terbaikantara potensi antioksidan dan sitotoksisitas.

TINJAUAN PUSTAKA

Buah Ceremai

Ceremai merupakan tanaman yang berasaldari India yang termasuk ke dalam famili

Euphorbiaceae. Ceremai dapat tumbuh hingga

ketinggian 1 000 meter dpl dan bertahan hidup

pada tanah dengan kondisi kekurangan air.

Ceremai sendiri diketahui tumbuh hampir di

seluruh bagian kepulauan Indonesia terutamadi Sumatera, Jawa, Sulewesi, kepulauan NusaTenggara, dan Maluku. Klasifikasi dari

tanaman ceremai menurut Syamsuhidayat dan

Hutapea (1991) tanaman ceremai dapat

diklasifikasikan sebagai berikut kingdom

plantae, subkingdom Tracheobiota, divisio

Spermatophyta, sub divisio Angiospermae,


11/39

2

classis Dicotyledoneae, ordo Euphorbiales,

familia Euphorbiaceae, genus Phyllanthus,dan speciesPhyllanthus acidus (L.) Skeels.

Ceremai merupakan pohon yangmempunyai tinggi 10 m. Batang tegak,

bulat, berkayu, mudah patah, kasar,percabangan monopodial, dan berwarna coklat

tua. Daun berupa daun majemuk, lonjong,berseling, panjang 5-6 cm, lebar 2-3 cm, tepi

rata, ujung runcing, pangkal tumpul,pertulangan menyirip, halus, tangkai silindris,

panjang 2 cm, dan berwarna hijau tua. Buah

berbentuk bulat, permukaannya berlekuk, dan

berwarna kuning keputih-putihan. Biji

berbentuk bulat pipih dan berwarna coklat

muda. Akarnya berupa akar tunggang danberwarna coklat muda (Syamsuhidayat &

Hutapea 1991).

Daun ceremai berbau khas aromatik dantidak berasa. Kandungan kimia yang terdapat

pada daun, kulit batang, dan kayu ceremai

adalah saponin, flavonoida, tanin, dan fenolik.

Akar mengandung saponin, zat samak, dan zat

beracun, sedangkan buah ceremaimengandung vitamin C. Bagian dari pohon

ceremai yang biasa digunakan sebagai obatadalah daun, kulit akar, dan biji. Setiap bagian

pohon ceremai memiliki khasiat yang

berbeda-beda dipercaya untuk menyembuhkan

penyakit. Daun ceremai sendiri berkhasiatuntuk menyembuhkan batuk berdahak, mual,

kanker, sariawan, dan dapat menguruskanbadan. Bagian kulit pohon ceremai dapat

digunakan mengobati asma dan sakit kulit,sedangkan biji ceremai berkhasiat untuk

mengobati sembelit dan mual. Daun ceremai

biasa dikonsumsi sebanyak 325 gram dalam

200 ml pelarut (Syamsuhidayat & Hutapea1991).

Gambar 1 Buah Ceremai (Phyllanthus acidusL.)

Radikal Bebas

Radikal bebas adalah suatu molekul atau

atom yang mempunyai satu atau lebih

elektron tidak berpasangan. Radikal ini dapat

berasal dari atom hidrogen, molekul oksigen,atau ion logam transisi. Senyawa radikal

bebas sangat reaktif dan selalu berusahamencari pasangan elektron agar kondisinya

stabil (Halliwel & Gutteridge 1989 ).Sumber radikal bebas diantaranya hasil

metabolisme, radiasi uv, polusi air dan udara,lemak makanan, bahan kimia berbahaya, dan

asap rokok. Radikal bebas dapatmenyebabkan kerusakan protein, DNA,

peroksidasi lipid, dan kerusakan membran sel

terutama pada asam lemak penyusunnya.

Kerusakan tersebut akan menyebabkan

penyakit yang bersifat kronis, yaitu penyakit

yang membutuhkan periode waktu yang lamauntuk terakumulasi dalam tubuh (Ozyurt et

al. 2006).

Radikal dapat terbentuk secara endogendan eksogen. Radikal endogen terbentuk

dalam tubuh melalui proses metabolisme

normal di dalam tubuh. Contohnya oksidasi

enzimatis, fagositosis, transport elektron, dan

oksidasi logam transisi melalui ischemic.Sementara radikal eksogen berasal dari bahan

pencemar yang masuk ke dalam tubuh melaluipernafasan, pencernaan, dan penyerapan kulit.

Seperti polusi udara, bahan tambahan pangan,

dan radiasi ultraviolet (UV) (Ozyurt et al.

2006).Antioksidan yang terdapat dalam tubuh

dapat berupa enzim seperti fosfolipase,protease, serta enzim yang dapat memperbaiki

susunan DNA (Ozyurt et al. 2006).Antioksidan yang tersedia dalam tubuh tidak

sebanding dengan banyaknya radikal bebas

yang mungkin masuk ke dalam tubuh. Oleh

karena itu, untuk menangkap dan mencegahradikal bebas tersebut merusak sel-sel tubuh,

diperlukan tambahan antioksidan dari luartubuh.

Menurut Gordon (1991) diacu dalamMarpaung (2008), mekanisme reaksi

pembentukan radikal bebas terdiri atas tiga

tahap, yaitu inisiasi, propagasi, dan terminasi.Tahap inisiasi, merupakan tahap awal

pembentukan radikal bebas. Tahap kedua

adalah propagasi, yaitu perubahan suatumolekul radikal bebas menjadi radikal bentuk

lain. Tahap yang terakhir adalah terminasi.

Terminasi adalah tahap dimana terjadi

penggabungan dua molekul radikal bebas dan

membentuk produk yang stabil. Radikal bebasdalam jumlah normal bermanfaat bagi

kesehatan misalnya, memerangi peradangan,membunuh bakteri, dan mengendalikan tonus

otot polos pembuluh darah serta organ-organ

dalam tubuh (Yuwono 2009 dalam Widyastuti


12/39

3

2010). Sementara dalam jumlah berlebih

mengakibatkan stress oksidatif. Keadaantersebut dapat menyebabkan kerusakan

oksidatif mulai dari tingkat sel, jaringan,hingga ke organ tubuh yang mempercepat

terjadinya proses penuaan dan munculnyapenyakit. Antioksidan dibutuhkan untuk dapat

menunda atau menghambat reaksi oksidasioleh radikal bebas.

Gambar 2 Radikal bebas (Prakash et al. 2001)

Antioksidan

Antioksidan memiliki peranan yang sangatpenting dalam memerangi radikal bebas.

Antioksidan adalah zat yang diperlukan tubuhuntuk menangkap radikal bebas terhadap sel

normal, protein, dan lemak (Prakash et al.

2001). Antioksidan dalam tubuh bermanfaat

untuk mencegah reaksi oksidasi yangditimbulkan oleh radikal bebas baik berasal

dari metabolisme tubuh maupun faktoreksternal lainnya.

Terdapat tiga macam antioksidan yaituAntioksidan yang dibuat oleh tubuh kita

sendiri yang berupa enzim antara lain

superoksida dismutase, glutathione peroxidase

dan katalase. Antioksidan alami yang dapatdiperoleh dari tanaman atau hewan, yaitu

ferol, vitamin C, betakaroten, dan flavonoid.Antioksidan sintetik, yang dibuat dari bahan-

bahan kimia yaitu butylated hydroxyanisole(BHA), butylated hydroxytoluen (BHT),

tertier butylhydroquinone (TBHQ),

propylgallate (PG) dan nordihydro guaiareticacid (NDGA) yang ditambahkan dalam

makanan untuk mencegah kerusakan lemak

(Kumalaningsih 2006).Tubuh manusia menghasilkan senyawa

antioksidan, tetapi jumlahnya sering kali tidak

cukup untuk menetralkan radikal bebas yang

masuk ke dalam tubuh (Sofia 2006). Sebagai

contoh, tubuh manusia dapat menghasilkanglutation, salah satu antioksidan yang sangat

kuat, tubuh hanya memerlukan asupanvitamin C sebesar 100-200 mg untuk memicu

tubuh menghasilkan glutation. Kekurangan

antioksidan dalam tubuh membutuhkan

asupan dari luar. Bila mulai menerapkan pola

hidup sebagai vegetarian akan sangatmembantu dalam mengurangi resiko

keracunan akibat radikal bebas.Keseimbangan antara antioksidan dan radikal

bebas menjadi kunci utama pencegahan stressoksidatif dan penyakit-penyakit kronis yang

dihasilkan (Sofia 2006). Antioksidan terbagimenjadi antioksidan enzim dan vitamin.

Antioksidan enzim meliputi superoksidadismutase (SOD), katalase dan glutation

peroksidase (GSH.Prx). Antioksidan vitamin

lebih populer sebagai antioksidan

dibandingkan enzim. Antioksidan vitamin

mencakup alfa tokoferol (vitamin E), beta

karoten dan asam askorbat (vitamin C) yangbanyak didapatkan dari tanaman dan hewan

(Sofia 2006).

Antioksidan alami di dalam makanandapat berasal dari senyawa antioksidan yang

sudah ada dari satu atau dua komponen

makanan, senyawa antioksidan yang terbentuk

dari reaksi-reaksi selama proses pengolahan,

senyawa antioksidan yang diisolasi darisumber alami dan ditambahkan ke dalam

makanan sebagai bahan tambahan pangan(Kumalaningsih 2007).

Jaringan tumbuhan mengandung sangat

banyak jenis senyawa yang memiliki aktivitas

antioksidan. Senyawa fenolik (flavonoid danasam fenolat), senyawa nitrogen (alkaloid,

turunan-turunan klorofil, asam-asam aminodan amina), karotenoid, lignan dan terpen

semuanya memiliki aktivitas antioksidandalam menekan pembentukan rantai reaksi

radikal bebas. Flavonoid dan senyawa fenolik

adalah antioksidan utama dalam buah-buahan

dan sayur-sayuran. Flavonoid terdiri atasstruktur dasar inti flavan di mana dua cincin

benzen dihubungkan oleh cincin piran yangmengandung oksigen. Flavonoid dibagi atas

flavonol, flavon, flavan dan isoflavon.Beberapa contoh yang terdapat dalam pangan

adalah mirisetin, quersetin, luteolin, apigenin,

genistein dan krisin (Silalahi 2002).Antioksidan memiliki fungsi utama untuk

memutus reaksi berantai radikal bebas.

Radikal bebas bersifat sangat reaktif danmampu menyebabkan kerusakan oksidatif

pada asam nukleat, protein, dan lipid yang

mampu menginisiasi terjadinya penyakit

degeneratif. Senyawa antioksidan seperti

fenol, polifenol, dan flavonoid dapatmenghambat mekanisme oksidasi yang

disebabkan oleh radikal bebas sepertisuperoksida, hidroksiperoksida, atau lipid

peroksida (Shahidi 1997 diacu dalam

Kurniawan 2011).


13/39

4

Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH

Uji aktivitas antioksidan dilakukan padasampel yang diduga mempunyai aktivitasnya

sebagai antioksidan. Terdapat beberapametode untuk menentukan aktivitas

antioksidan yaitu DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), cupric ion reducing

antioxidant (CuPRAC) dan ferric reducingability of plasma (FRAP). Metode DPPH

dipilih karena memiliki beberapa keunggulan,diantaranya sederhana, cepat, sensitif, dan

hanya membutuhkan sedikit sampel (Koleva

et al. 2002).

Pereaksi DPPH ditemukan pertama kali

oleh Goldschmidt dan Renn pada tahun 1922.

DPPH merupakan seyawa radikal bebasberwarna ungu. Pereaksi DPPH berfungsi

untuk investigasi reaksi inhibisi polimerisasi,

uji antioksidan serta inhibisi reaksi homolitik(Ionita 2003).

Karakter dari DPPH merupakan senyawa

hidrofobik (tidak larut air). Namun, dapat

berubah menjadi hidrofilik dengan

melekatkan gugus CO maupun SO2 padaDPPH. Menurut Ionita (2003), DPPH

merupakan senyawa radikal bebas yang stabildan dapat disimpan dalam jangka waktu yang

lama, pada kondisi penyimpanan yang baik

(kering).

Prinsip metode penangkapan radikaladalah pengukuran penangkapan radikal bebas

sintetik dalam pelarut organik polar sepertietanol atau metanol pada suhu kamar oleh

suatu senyawa yang mempunyai aktivitasantioksidasi (Pokorni 2001). Proses

penangkapan radikal ini melalui mekanisme

pengambilan atom hidrogen dari senyawa

antioksidan oleh radikal bebas (Pine 1988)sehingga radikal bebas menangkap satu

elektron dari antioksidan. Selanjutnya DPPHakan diubah menjadi DPPH-H (bentuk

tereduksi DPPH) oleh senyawa antioksidan.Radikal bebas DPPH dapat menangkap atom

hidrogen dari komponen aktif ekstrak yang

dicampurkan, kemudian bereaksi menjadibentuk yang lebih stabil (Gambar 3).

Metode DPPH (2,2-difenil-1-

pikrilhidrazil) mengukur kemampuan suatusenyawa antioksidan dalam menangkap

radikal bebas. Kemampuan penangkapan

radikal berhubungan dengan kemampuan

komponen senyawa dalam menyumbangkan

elektron. Setiap molekul yang dapatmenyumbangkan elektron akan bereaksi dan

akan memudarkan DPPH. Intensitas warnaDPPH akan berubah dari ungu menjadi

kuning oleh elektron yang berasal dari

senyawa antioksidan. Konsentrasi DPPH pada

akhir reaksi tergantung pada konsentrasi awal

dan struktur komponen senyawa penangkapradikal (Koleva et al. 2002).

Metode DPPH secara umum digunakanuntuk memindai berbagai sampel dalam

penentuan aktivitas antioksidan. Pengukuranserapan DPPH pada panjang gelombang

maksimum ( maks) yaitu 515-520 nm.Metode DPPH dapat digunakan untuk sampel

padatan maupun larutan (Molyneux 2004).Perhitungan yang digunakan dalam

penentuan aktivitas penangkap radikal adalah

nilai IC50 (Inhibition Concentration 50%),

nilai tersebut menggambarkan besarnya

konsentrasi senyawa uji yang dapat

menangkap radikal sebesar 50%. PenentuanIC50, diperlukan persamaan kurva standar dari

%inhibisi sebagai sumbu y dan konsentrasi

fraksi antioksidan sebagai sumbu x. IC50dihitung dengan cara memasukkan nilai 50%

ke dalam persamaan kurva standar sebagai

sumbu y kemudian dihitung nilai x sebagai

konsentrasi IC50. Semakin kecil nilai IC50

menunjukkan semakin tinggi aktivitasantioksidasinya (Molyneux 2004). Semakin

kecil nilai IC50 maka senyawa uji tersebutmempunyai keefektifan sebagai penangkap

radikal yang lebih baik.

Gambar 3 Prinsip penangkapan H oleh DPPH

(Prakash et al.2001).

Uji Sitotoksisitas Metode BSLT

Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

merupakan salah satu metode untuk mengujibahan-bahan yang bersifat toksik dan

digunakan sebagai suatu bioassay yang

pertama untuk penelitian bahan alam. Metode

ini menggunakan larva Artemia salina Leachsebagai hewan coba. Uji sitotoksisitas dengan

metode BSLT ini merupakan uji sitotoksisitasakut dimana efek toksik dari suatu senyawa

ditentukan dalam waktu singkat, yaitu rentangwaktu selama 24 jam setelah pemberian dosis

uji. Prosedurnya dengan menentukan nilai


14/39

5

LC50. Nilai LC50 adalah konsentrasi yang

dibutuhkan untuk mematikan 50% daripopulasi larva udang total (Frank 1995).

Metode ini digunakan untuk mendeteksisenyawa bioaktif yang memiliki efek

farmakologi. Data yang diperoleh dari hasilpengujian dengan menggunakan larva udang

dapat dianalisis dengan menggunakanprogram SPSS untuk menentukan nilai LC50

(Finney 1971). Aktivitas komponen aktiftanaman terhadap larva A. salina. Suatu

ekstrak dikatakan toksik berdasarkan metode

BSLT jika harga LC < 1 000 g/ ml( Meyer

et al.1982).

Meyer et al. (1982) telah mengembangkan

metode BSLT untuk menemukan senyawabioaktif baru pada tumbuhan tingkat tinggi.

Metode ini telah banyak digunakan untuk uji

potensi hayati dalam analisis residu pestisida,anestetik, dan zat pencemaran air.

Penelitian Carballo et al. (2002),

menunjukkan adanya hubungan yang

konsisten antara sitotoksisitas dan letalitas

larva udangpada ekstrak tanaman, sehinggametode BSLT dapat dipercaya untuk menguji

aktivitas farmakologis dari bahan-bahanalami. Apabila suatu ekstrak tanaman bersifat

toksik menurut harga LC50 dengan metode

BSLT, maka tanaman tersebut dapat

berpotensi sebagai obat. Namun, bila tidakbersifat toksik maka tanaman tersebut dapat

diteliti kembali untuk mengetahui khasiatlainnya dengan menggunakan hewan coba lain

yang lebih besar dari larva A. salina sepertimencit dan tikus secara in vivo.

Artemia salina merupakan kelompok

udang (Crustaceae) dari filum Arthropoda dan

hidup dalam air garam (berair asin). Udang initoleran terhadap selang salinitas yang sangat

luas. Secara alamiah, salinitas danau tersebutmengakibatkan larva hidup sangat bervariasi,

tergantung pada intensitas air hujan danevaporasi yang terjadi. Apabila kadar garam

kurang dari 6% maka telur A. salina akan

tenggelam dan tidak menetas. Hal ini biasanyaterjadi apabila air tawar masuk ke dalam

danau di musim penghujan dalam jumlah

berlebih. Jika kadar garam melebihi 25%,telur akan tetap berada dalam kondisi

tersuspensi, sehingga dapat menetas dengan

normal (Purwakusumah 2007 dalam Setiarto

2009).

Pertimbangan pemilihan larva udangsebagai hewan uji didasarkan karena telur A.

salina memiliki daya tahan yang lama (dapattetap hidup dalam kondisi kering, selama

beberapa tahun). Telur A. salina lebih cepat

dan mudah menetas dalam waktu 48 jam,

sehingga dapat dihasilkan naupli dalam

jumlah besar yang siap untuk diuji (Carballoet al. 2002). Selain itu telur A. salina juga

memiliki kemampuan untuk mengatasiperubahan tekanan osmotik dan regulasi ionik

yang tinggi (Croghan 1957 dalam Kurniawan2011).

Metode uji potensi hayati BSLT memilikibeberapa keunggulan diantaranya waktu

pelaksanaan cepat, biaya relatif murah,sederhana, tidak memerlukan teknik aseptis,

tidak memerlukan peralatan khusus, dan

hanya membutuhkan sedikit sampel uji

(Meyer et al. 1982).

BAHAN DAN METODE

Bahan dan alatBahan yang digunakan adalah buah

ceremai segar tanpa biji yang berwarnakuning keputihan yang diambil sore hari

berasal dari daerah Sumedang. Bahan-bahankimia yang digunakan adalah etanol, serbuk

magnesium, asam klorida 2%, FeCl3,

kloroform, perekasi Meyer, Dragendorf,

Wagner, DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil),vitamin C, akuades, Artemia salina Leach,

dan air laut buatan. Alat-alat yang digunakandalam penelitian ini adalah vial, labu takar,

pH meter, gelas ukur, cawan porselin,

sonikator, tabung reaksi, spatula, pipet tetes,

pipet volumetrik, neraca digital, vorteks, oven,

blander,freezer, eksikator, pipet mikro, lampu

pijar, aerator, dan micro plate readerEPOCH.

Metode Penelitian

Persiapan SampelSampel basah diambil dari kabupaten

Sumedang, terdiri atas 5 kg buah ceremai

segar. Jumlah bobot yang dipanen didasarkan

pada jumlah pohon yang tersedia di satudaerah. Tujuannya adalah untuk menghindari

perbedaan kandungan senyawa dari buahceremai.

Penentuan Kadar Air (AOAC 2006)

Cawan porselen dikeringkan pada suhu

105C selama 30 menit lalu didinginkan dalam

eksikator dan ditimbang. Sebanyak 3 gramsampel buah ceremai segar tanpa biji yangtelah dihancurkan kemudian dimasukkan ke

dalam cawan dan dipanaskan pada suhu 105C

selama 3 jam sampai diperoleh bobot konstan.

Setelah itu, didinginkan dalam eksikator dan

ditimbang. Kemudian dihitung kadar air

dengan menggunakan rumusn berikut :


15/39

6

Kadar air = Bobotsampel Bobotkering x100%

Bobotsampel

Ekstraksi Buah Ceremai (BPOM 2005)Proses ekstraksi buah ceremai

menggunakan metode maserasi. Ekstraksimenggunakan pelarut etanol 70%, etanol 30%,

dan air. Buah ceremai segar tanpa bijidihaluskan terlebih dahulu menggunakan

blender. Setelah buah ceremai dihaluskankemudian ditambahkan pelarut. Sebanyak 400

gram sampel ditambahkan 400 mL pelarut

(b/v). Selanjutnya dimasukan ke dalam

maserator selama 6 jam sambil sesekali

diaduk, kemudian didiamkan sampai 24 jam.

Maserat dipisahkan, dan proses diulang 2 kalidengan jenis dan jumlah pelarut yang sama.

Semua maserat dikumpulkan dan dipekatkan

menggunakan rotary evaporator pada suhu50C sampai diperoleh sampel yang

menyerupai pasta.

Identifikasi fitokimia (Harbone 1987)

Identifikasi Flavonoid. Ekstraksebanyak 0.1 gram ditambah 2 mL etanol

30% sampai terendam lalu dipanaskan.Filtratnya ditambah H2SO4 sebanyak 3 tetes.

Uji positif ditunjukkan oleh terbentuknya

warna merah akibat penambahan H2SO4.

Identifikasi Tanin. Ekstrak sebanyak 1gram ditambahkan 10 mL akuades kemudian

dididihkan. Setelah dingin filtrat ditambahkan5 mL FeCl3 1 % (b/v). Apabila terjadi

perubahan warna menjadi biru tua, berartisampel mengandung tanin.

Identifikasi Alkaloid. Ekstrak sebanyak

0.1 gram ditambahkan 10 mL kloroform dan

ditambahkan beberapa tetes amonia. Fraksikloroform dipisahkan dan diasamkan dengan

beberapa tetes H2SO4 pekat. Fraksi asamdiambil dan dibagi menjadi 3 tabung,

kemudian ditambahkan pereaksi Dragendorf,Meyer, dan Wagner. Terdapatnya alkaloid

ditandai dengan terbentuknya endapan putih

pada pereaksi Meyer, endapan merah padapereaksi Dragendorf, dan endapan coklat pada

pereaksi Wagner.

Identifikasi Fenolik. Ekstrak sebanyak0.1 gram ditambah 2 mL etanol 30% sampai

terendam lalu dipanaskan. Filtratnya ditambah

NaOH sebanyak 3 tetes. Uji positif

ditunjukkan oleh terbentuknya warna merah

akibat penambahan NaOH.Identifikasi Terpenoid dan Steroid.

Ekstrak sebanyak 0.1 gram ditambah 2 mLetanol 30% kemudian dipanaskan dan

disaring. Selanjutnya filtrat diuapkan dan

ditambahkan eter sebanyak 1 mL. Lapisan

eter ditambah dengan pereaksi Lieberman

Burchard (3 tetes asam asetat anhidrat dan 1tetes H2S04 pekat). Warna merah atau ungu

menunjukkan adanya triterpenoid dan warnahijau menunjukkan adanya steroid.

Identifikasi Saponin. Ekstrak sebanyak0.1 gram ditambah akuades 5 mL dan

dipanaskan selama 5 menit. Uji positifditunjukkan oleh terbentuknya busa permanen

15 menit.

Identifikasi Glikosida. Sebanyak 3 gram

buah segar yang telah dihaluskan, disaring

dengan cara refluks menggunakan 30 ml

campuran etanol 95% selama 10 menit,

didinginkan dan disaring. Pada 20 mL filtrat

ditambahkan 24 mL air suling dan 25 mltimbal (II) asetat 0.4 M, dikocok, didiamkan

selama 5 menit lalu disaring, filtrat disari

dengan 20 mL campuran isopropanol dankloroform (2:3), dilakukan berulang sampai 3

kali. kumpulan sari air ditambahkan natrium

sulfat anhidrat, saring dan uapkan pada suhu

50C. sisanya dilarutkan dalam 2 mL metanol.

Larutan sari air dalam metanol dimasukkan kedalam tabung reaksi selanjutnya diuapkan di

atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2mL air dan 5 tetes pereaksi Molisch.

Kemudian tambahkan 2 mL asam sulfat pekat

melalui dinding tabung, terbentuknya cincin

ungu pada batas kedua cincin menunjukanadanya glikosida (Departemen Kesehatan RI

1978)

Uji Aktivitas Antioksidan DPPH (Batubara

2009)

Aktivitas antioksidan dari masing-masing

kombinasi ditentukan dengan menggunakan

metode DPPH, menurut Batubara 2009.Ekstrak ceremai dilarutkan dalam etanol dan

dibuat dalam berbagai konsentrasi (0, 3.125,6.25, 12.5, 25, 50, 100 dan 200 ppm). Masing-

masing dimasukkan ke dalam mikro plate.Selanjutnya ditambahkan 100 l larutan

DPPH 1 mM dalam etanol. kemudian

diinkubasi pada suhu 30C selama 30 menit,absorban diukur pada panjang gelombang 517

nm. Sebagai kontrol positif, dan untuk

pembanding digunakan vitamin C. Nilai %inhibisi dihitung dengan menggunakan rumus

sebagai berikut:

% Inhibisi = A DPPH A sampelx 100%

ADPPH

Keterangan:

A DPPH: serapan DPPH

A sampel: serapan sampel dan DPPH


16/39

7

Uji Sitotoksisitas LC50 Brine Shrimp

Lethality Test (BSLT)Sebanyak 100 L air laut yang

mengandung A. salina L sebanyak 10 ekordipipet, kemudian dimasukkan ke dalam

wadah uji. Di tambahkan larutan sampel yangakan diuji masing-masing sebanyak 100 L,

dengan konsentrasi 10, 100, 200, 500, dan1000 ppm. Untuk setiap konsentrasi dilakukan

3 kali pengulangan. Kontrol negatif disiapkandengan perlakuan yang sama tetapi tanpa

mengandung ekstrak. Setelah itu diinkubasi

selama 24 jam dan dihitung jumlah larva yang

mati. Nilai LC50 ditentukan melalui metode

analisis probit dengan software SPSS 17.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air

Sampel buah ceremai yang digunakanpada penelitian ini berbentuk buah segar.

Penentuan kadar air dilakukan untukmengetahui penyimpanan terbaik bagi sampel

untuk menghindari pengaruh aktivitas

mikroba (jamur). Kadar air yang diperoleh

dari buah ceremai segar adalah 85.55%3.00(Lampiran 3). Suatu sampel memiliki

ketahanan dalam penyimpanan apabila kadarair dibawah 100% (AOAC 2006). Selain itu

kadar air pada buah ceremai segar

mempengaruhi jumlah pengikatan antara

molekul etanol (pelarut) dengan molekul-

molekul dari senyawa yang terdapat pada

buah ceremai segar. Semakin rendah kadar airdalam jaringan buah ceremai segar, maka

semakin sedikit senyawa-senyawa dalamjaringan yang terekstrak oleh etanol karena

etanol merupakan pelarut alcohol denganberat molekul rendah yang dapat

menggantikan molekul-molekul air dalam

jaringan tumbuhan (Hart 1987).

Ekstraksi Sampel

Tahap ekstraksi dilakukan denganmenggunakan tiga pelarut, yaitu akuades,

etanol 30 %, dan etanol 70%. Ekstraksi

dilakukan pada buah ceremai segar. Bagian

tanaman tersebut merupakan bagian tanaman

yang umum untuk dikonsumsi oleh

masyarakat secara tradisional.

Tabel 1 Persentase rendemen ekstrak ceremai

Sampel Rendemen (%)

Etanol 70% 3.720.01

Etanol 30% 3.280.04

Air 1.130.07

Hasil maserasi ekstrak air, etanol 30%,

dan etanol 70% dari 200 gram buah ceremaisegar masing-masing dihasilkan maserat

sebesar 4.9, 13.4, dan 16.0 gram. Berdasarkanhasil tersebut, diperoleh rendemen masing-

masing ekstrak sebesar 1.21 %, 3.33%, dan3.94 % (Tabel 1)

Berdasarkan hasil tersebut, ekstrak etanol70% memiliki persentase rendemen tertinggi

dibandingkan kedua jenis ekstrak lainnya,yaitu sebesar 3.94%, sedangkan persentase

rendemen terendah dimiliki oleh ekstrak air,

dengan nilai sebesar 1.21%. Senyawa bioaktif

yang terlarut dalam ketiga pelarut tersebut

diharapkan memiliki aktivitas antioksidasi dan

sitotoksisitas potensi hayati yang akan diujipada tahap selanjutnya. Perbedaan jumlah

rendemen pada setiap ekstrak tersebut

dikarenakan pada ekstrak dengan rendementertinggi mengandung lebih banyak senyawa

yang mudah larut dalam etanol 70%,

sedangkan ekstrak dengan rendemen yang

lebih rendah yaitu ekstrak air mengandung

sejumlah senyawa yang kurang larut dalamair.

Proses ekstraksi harus dilakukan denganmenggunakan pelarut yang sesuai. Pelarut

polar digunakan untuk mengekstrak

komponen polar pula, dan sebaliknya. Selain

itu, rasio pelarut dan sampel yang hendakdiekstrak, suhu yang digunakan selama proses

ekstraksi, serta lamanya proses ekstraksi jugaturut menentukan hasil yang didapatkan

selama proses ekstraksi.Proses ekstraksi dipengaruhi oleh

beberapa faktor, diantaranya jenis pelarut

yang digunakan dan luas permukaan sampel.

Jenis pelarut yang digunakan tergantung padapolaritas senyawa yang akan diekstrak.

Pemilihan etanol 70% dan etanol 30% sebagaipelarut organik didasarkan pada

kemampuannya untuk mengisolasi sejumlahbahan bioaktif yang lebih optimal

dibandingkan beberapa jenis pelarut lainnya.

Pemilihan etanol 70% dan etanol 30% sebagaipelarut memiliki beberapa keuntungan,

diantaranya dapat menyebabkan komponen

senyawa yang terkandung di dalam sampeldapat terekstrak lebih banyak dibandingkan

dengan pelarut air, karena dapat mengekstrak

komponen kimia yang tahan panas dan tidak

tahan panas (Harborne 1987).

Etanol dapat melarutkan secarakeseluruhan semua zat aktif yang terkandung

di dalam simplisia, baik yang bersifat polar,semi polar, maupun kurang polar. Menurut

Harborne (1996), etanol dapat menarik

senyawa alkaloid, steroid, saponin, flavonoid,


17/39

8

antakuinon, dan glikosida. Sedangkan akuades

digunakan sebagai pelarut karena umumdigunakan dalam proses ekstraksi pada

kehidupan sehari-hari dengan biaya yangrelative sangat murah.

Uji Fitokimia

Senyawa metabolit sekunder yangterkandung dalam ekstrak buah ceremai dapat

diketahui melalui uji kualitatif yaitu ujifitokimia. Uji pendahuluan ini dilakukan

untuk menentukan ada atau tidaknya senyawa-

senyawa metabolit sekunder yang

kemungkinan berperan dalam pengujian

aktivitas antioksidan dan sitotoksisitas potensi

hayati.Hasil dari pengujian fitokimia dapat dilihat

pada Tabel 2. Hasil pengujian fitokimia

ekstrak buah ceremai pada berbagai pelarutmenunjukkan adanya senyawa flavonoid,

alkaloid, fenolik, triterpenoid, saponin, dan

glikosida. Berdasarkan hasil uji fitokimia

senyawa yang paling banyak terkandung

dalam ketiga ekstrak adalah flavonoid.Senyawa tersebut berfungsi sebagai

antioksidan untuk menangkap radikal bebasdalam tubuh (Haraguchi 2001 dalam Ismail

2007).

Senyawa fenol biasanya terdapat dalam

berbagai jenis sayuran, buah-buahan dantanaman. Turunan senyawa fenol merupakan

metabolit sekunder terbesar yang diproduksioleh tanaman. Senyawaan ini diproduksi

dalam tanaman melalui jalur sikimat danmetabolisme fenil propano. Senyawaan fenol

dapat memiliki aktivitas antioksidan,

antitumor, antiviral, dan antibiotik (Koleva et

al. 2002).

Tabel 2 Hasil uji fitokimia

Ujifitokimia

Ekstrak

Air Etanol

30%

Etanol

70%

Flavonoid +++ +++ +++Tanin - - -

Alkaloid ++ ++ ++

Fenolik + ++ +

Terpenoid + + +

Steroid - - -

Saponin ++ ++ ++Glikosida + + +

Keterangan :- tidak mengandung metabolit sekunder

+ mengandung sedikit metabolit sekunder++ mengandung banyak metabolit sekunder

+++ mengandung banyak sekali metabolitsekunder

Berdasarkan data dari Tabel 2, senyawa

Flavonoid merupakan senyawa yang palingbanyak dihasilkan dari ketiga ekstrak,

kemudian diikuti dengan senyawa alkaloid,terpenoid, saponin dan glikosida. Sedangkan

senyawa fenolik lebih banyak dihasilkan olehekstrak etanol 30% kemudian diikutin dengan

ekstrak air dan etanol 70% artinya pelarutetanol 30% lebih banyak menjerap senyawa

fenolik dibandingkan dengan pelarut yanglain. Menurut Kumalaningsih (2006)

flavonoid merupakan senyawa yang paling

berperan dalam pengujian aktivitas

antioksidan dan sitotoksisitas.

Uji Aktivitas Antioksidan

Uji aktivitas antioksidan dilakukan untuk

menguji seberapa besar aktivitas antioksidasi

ekstrak buah ceremai. Sebagai pembandingdigunakan vitamin C yang telah diketahui

sebagai standar antioksidan.

Hasil pengukuran aktivitas antioksidan

dari masing-masing sampel ditunjukan pada

Gambar 4. Semakin rendah nilai IC50 suatusampel, maka semakin tinggi aktivitas

antioksidannya. Hal tersebut didasarkankarena hanya membutuhkan sejumlah kecil

konsentrasi sampel untuk merendam 50%

radikal bebas DPPH. Hasil uji antioksidan

secara kuantitatif ditunjukkan (Gambar 4)ekstrak air memiliki aktivitas antioksidasi

yang paling tinggi yaitu sebesar 86.97%dibandingkan dengan ekstrak etanol 30% dan

ekstrak etanol 70% yang masing-masinghanyaa memiliki aktivitas antioksidan sebesar

63.195% dan 68.92%, hal ini dapat dikatakan

bahwa ekstrak air buah ceremai dapat

menghambat radikal bebas pada konsentrasi26.06 ppm dengan daya hambat sebesar

86.97%. Akan tetapi apabila dibandingkandengan standar antioksidan (vitamin C)

memiliki aktivitas antioksidan yang jauh lebihtinggi dibandingkan ekstrak air yaitu sebesar

2.68 ppm memiliki daya hambat 98.66%,

dalam hal ini diharapkan radikal bebas dapatditangkap oleh senyawa antioksidan dengan

konsentrasi kecil (Molyneux 2004). Suatu

bahan memiliki aktivitas antioksidan yangbaik apabila memiliki nilai IC50 kurang dari

200 ppm (Hanani et al. 2005). Berdasarkan

hasil penelitian yang diperoleh, menunjukan

bahwa dari ketiga ekstrak yaitu ektrsk air,

etanol 30% dan etanol 70% memiliki aktivitasyang tinggi. Sehingga ketiga ekstrak

berpotensi sebagai antioksidan.Hasil analisis statistik ANOVA

menunjukkan nilai p-value sebesar 0.00 atau

bernilai lebih kecil dibandingkan nilai 5%


18/39

9

(Lampiran 12), sehingga dapat

diintrepertasikan bahwa setiap perlakuanekstrak berpengaruh terhadap nilai IC50 yang

dihasilkan. Pengambilan intrepretasi tersebutdidasarkan pada hipotesis awal yang

menyebutkan bahwa perlakuan ektrak sampelberpengaruh pada nilai IC50yang dihasilkan.

Senyawa bioaktif pada masing-masingtanaman yang diduga berperan sebagai

antioksidan yaitu flavonoid, alkaloid, fenolik,tanin, steroid, triterpenoid, saponin, dan

glikosida. Senyawa-senyawa tersebut akan

berperan sebagai donor proton pada reagen

DPPH, dan menghasilkan produk berupa

DPPH-H. Atom hidrogen yang disumbangkan

oleh masing-masing senyawa bioaktif akanberikatan dengan atom nitrogen yang terdapat

pada cincin hidrazin (Ionita 2003).

Gambar 4 Uji aktivitas antioksidan

Uji Sitotoksisitas (BSLT)Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

adalah suatu metode pengujian dengan

menggunakan hewan uji yaitu Artemia salina

Leach, yang dapat digunakan sebagai bioassayyang sederhana untuk meneliti sitotoksisitas

akut suatu senyawa, dengan cara menentukannilai LC50 yang dinyatakan dari komponen

aktif suatu simplisia maupun bentuk sediaanekstrak dari suatu tanaman (Frank 1995).

Mekanisme kematian larva berhubungan

dengan fungsi senyawa alkaloid, triterpenoid,saponin dan flavonoid dalam buah pare yang

dapat menghambat daya makan larva

(antifedant). Cara kerja senyawa-senyawatersebut adalah dengan bertindak sebagai

racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa-

senyawa ini masuk ke dalam tubuh larva,

kemudian alat pencernaannya akan terganggu.

Selain itu, senyawa ini menghambat reseptorperasa pada daerah mulut larva. Hal ini

mengakibatkan larva gagal mendapatkanstimulus rasa sehingga tidak mampu

mengenali makanannya sehingga larva mati

kelaparan.

Penentuan nilai LC50 dilakukan dengan

menggunakan analisis probit pada softwareSPSS 17. Melalui perangkat tersebut dapat

ditentukan hubungan linearitas antarakonsentrasi sampel terhadap probit kematian

dari larva udang. Jumlah letalitas larva udangdihitung secara manual. Kematian larva

udang, disebabkan oleh perlakuan pemberiansampel pada konsentrasi 10, 100, 500, dan

1000 ppm.Hasil uji sitotoksisitas (potensi hayati)

terbaik dimiliki oleh ekstrak air dengan nilai

LC50 sebesar 473.26 ppm, kemudian diikuti

dengan ekstrak etanol 30% dengan nilai LC50sebesar 486.78 ppm, dan ekstrak etanol 70%

dengan nilai LC50 yaitu sebesar 618.55 ppm.Rendahnya nilai LC50pada ekstrak air diduga

disebabkan oleh banyaknya senyawa

bioaktivitas yang terkandung didalam sampel.Juniarti (2009) menyatakan bahwa suatu zat

dikatakan memiliki potensi hayati apabila

memiliki nilai LC50 1000 ppm untuk

ekstrak, sedangkan untuk senyawa murni

memiliki nilai LC50 30 ppm. Hasil ujisitotoksisitas dari keseluruh ekstrak memiliki

potensi hayati, akan tetapi ekstrak air lebihberpotensi dibandingkan dengan ekstrak

etanol 70% dan ekstrak etanol 30%.

Sedangkan apabila nilai LC50 1000 ppm

maka suatu zat dikatakan bersifat tidak toksikdan baik untuk dikonsumsi sebagai

antioksidan.

Gambar 5 Uji sitotoksisitas potensi hayati

Uji Korelasi Antioksidan dan SitotoksisitasSetelah diketahui aktivitas senyawa

antioksidan dan sitotoksisitas potensi hayati

dari masing-masing sampel ekstrak buah

ceremai segar, kemudian dilakukan uji

korelasi bivarian melalui software SPSS 17.Tujuan dari uji korelasi adalah untuk

mengaitkan dan mengetahui seberapa besarhubungan antara aktivitas senyawa

antioksidasi terhadap sitotoksisitas (potensi

hayati) dari masing-masing ekstrak sampel.


19/39

10

Apabila dalam suatu sampel memiliki korelasi

antara LC50 dan IC50 maka sampel tersebutberpotensi sebagai obat.

Koefisien korelasi adalah angka yangmenggambarkan tingkat keeratan hubungan

antara dua peubah atau lebih, sehinggamelalui nilai tersebut dapat dinyatakan bahwa

nilai IC50 ekstrak buah ceremai berkorelasirenda terhadap nilai LC50. Berdasarkan hasil

uji korelasi secara bivarian, diketahui bahwanilai IC50 dan LC50 memiliki nilai koefisien

korelasi sebesar 0.386, serta tidak signifikan

secara statistik dengan nilai p-value sebesar

0.748 atau diatas 0.05. Hasil uji korelasi

antara aktivitas antioksidan dan sitotoksisitas

tidak terlalu terlihat korelasinya dikarenakanhanya menggunakan tiga ekstrak.

Aktivitas antioksidan yang baik untuk

dikonsumsi oleh manusia sebagai suplemenharus memiliki nilai keamanan yaitu semakin

kecil nilai IC50(IC50< 200 ppm) dan semakin

besar nilai LC50 (LC50.>1000 ppm) atau

berkorelasi negatif. Sedangkan hasil yang

diperoleh tidak memenuhi syarat korelasiyang baik, sehingga ekstrak buah ceremai

kurang baik dikonsumsi sebagai suplemenantioksidan.

Gambar 6 Uji korelasi antioksidan dansitotoksisitas

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Ekstrak air merupakan ekstrak yang

memiliki aktivitas antioksidan terbaikdibandingkan dengan ekstrak etanol 30% dan

ekstrak etanol 70% dengan nilai IC50 sebesar26.06 ppm. Hasil uji sitotoksisitas ekstrak air,

ekstrak etanol 30%, dan ekstrak etanol 70%

bersifat toksis dengan nilai 473.26 ppm,486.78 ppm, dan 618.55 ppm. Ekstrak buah

ceremai segar kurang baik untuk dikonsumsioleh manusia sebagai suplemen herbal

walaupun memiliki aktivitas antioksidan yang

tinggi.

Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut,untuk mengetahui secara spesifik senyawa

bioaktif yang paling berperan dalam aktivitasantioksidan ekstrak buah ceremai segar. Perlu

juga dilakukan analisis terhadap aktivitasantioksidasi dan efek farmakologis secara in

vivo.

DAFTAR PUSTAKA

[AOAC] Association of Official Analytical

Chemist. 2006. Official Methods of

Analysis. Washington DC: Association of

Official Analytical Chemist.

[BPOM RI] Badan Pengawas Obat dan

Makanan Republik Indonesia. 2005.Gerakan Nasional Minum Temulawak.

Jakarta : BPOM RI.

Batubara. 2009. Antiance potency of

Indonesia medicinal plats. [thesis]. Gifu:United Graduated School, Gifu

Univercity.

Cahyadi Robby. 2009. Uji toksisitas akut

ekstrak etanol buah pare (Momordica

charantia L.) terhadap larva Artemia

salina Leach dengan metodeBrine Shrimp

Lethality test (BSLT) [skripsi]. Bogor:Fakultas Kedokteran, UniversitasDiponegoro.

Chen HM, Koji M, Fumio Y, Kiyoshi N.1996. Antioxidant activity of designed

dalam teh. Majalah Kedokteran Indonesia

52: 361-4.

Croghan PC. 1957. The osmotic and ionicregulation of Artemia salina L. Zoology

Journal 10: 219-232.

Darwis D. 2000. Teknik dasar laboratorium

dalam penelitian senyawa bahan alam

hayati. Padang : Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, UNAND.

Departemen Kesehatan RI. 1978. Materia

Medika Indonesia. Jilid II. Jakarta :Depkes RI. Hal 150-156, 165-167.

Finney DJ. 1971. Probit Analysis 3rd Ed.England: Cambridge University Press.

Frank CL. 1995. Toksikologi Dasar. Edi,penerjemah. Jakarta: UI Press. Terjemahan

dari:Basic of Toxicology


20/39

11

Halliwell B, Gutteridge JMC. 1989. Free

Radical In Biology and Medicine. NewYork: Oxford University Press.

Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.

Identifikasi senyawa antioksidan dalamspons Callyspongia sp dari Kepulauan

Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2: 127

133.

Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Iwang

S, penerjemah. Bandung: ITB Press.Terjemahan dari :Phytochemical Method.

Harborne JB. 1996. Metode Fitokimia. Ed ke-2. Padmawinata K, Soediro I, penerjemah.

Bandung: ITB Press. Terjemahan dari: Phytochemical Method.

Ismail SE, Marliana, I. Fikriah, Noorhidayah.2007. Eksplorasi biotamedika kandungan

kimia, sitotoksisitas, dan aktivitasantioksidan tumbuhan asli Kalimantan

Timur [skripsi]. Samarinda : Universitas

Mulawarman.

Ionita P. 2003. Is DPPH stable free radical a

good scavenger for oxygen active species.

Chem Pap 59: 11-16.

Josephy PD. 1997. Molecular Toxicology.

New York : Oxford University Press.

Juniarti, Osmeli D, Yuhernita. 2009.

Kandungan senyawa kimia, ujisitotoksisitas (Brine Shrimp Lethality Test)

dan antioksidan DPPH dari ekstrak daunAbrus precatorius. Makara Sains 13: 50-

54.

Kadarisman I. 2000. Isolasi dan identifikasi

senyawa kimia bioaktif dari uji

sitotoksisitas dan skrining fitokimia

[skripsi]. Bogor : Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian

Bogor.

Kementrian Kesehatan RI. 2010. Pedomen

Penanggulangan Masalah KesehatanIntelegensia Akibat Gangguan

Degeneratif. Hal 3-7.

Krismawati A . 2007. Pengaruh ekstrak

tanaman ceremai, delima putih, jatiBelanda, kecombrang, dan kemuning

secara in vitro terhadap proliferasi sel

limfosit manusia [skripsi]. Bogor: Fakultas

teknologi pertanian, Institut Pertanian

Bogor.

Koleva I, Van Beek T, Linnssen JPH, De

Groot A, Evstarieva LN. 2002. Screeningof plant extracts for antioxidant activity.

Phytochem Anal 13: 494-500.

Kumalaningsih S. 2006. Antioksidan Sumberdan Manfaatnya. Antioxidant centre 12:

112-123

Kurniawan A. 2011. Aktivitas antioksidan dan

potensi hayati dari kombinasi ekstrak

empat jenis tanaman obat Indonesia[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, Institut PertanianBogor.

Lupea AX, Chambire D, Iditoiou C, SzabroMR. 2006. Short communication

improved DPPH determination forantioxidant activity spectrophotometric

Assay. Chem Pap 3: 214-216.

Marpaung IM. 2008. Potensi aktivitas

antioksidan pada kulit kayu dan daun

tanaman akway (Drymis sp) [skripsi].

Bogor: Fakultas matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam, Institut Pertanian

Bogor.

Meyer BN, Ferrigni NR, Putman JE, Jacobson

LB, Nichol DE, Mc Laughin JL. 1982.Brine Shrimps: A convenient general

bioassay for active plant constituent.Planta Medica 45: 31-34.

Molyneux P. 2004. The use of the stable freeradical 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl

(DPPH) for estimating antioxidantactivity. J. Sci. Technol26: 211-219.

Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwel

VW. 2003. Biokimia Harper. Andry

Hartono, penerjemah. Anna P Bani &Tiara MN, editor. Jakarta: Penerbit Buku

Kedokteran EGC. Terjemahan dari:

Harpers Biochemistry.

Ozyurt D, Demirata B, Apak R. 2006.Determination of total antioxidant capacity

by a new spectrophotometric method

based on Ce(IV) reducing capacity

measurement. Talanta24: 273- 282.

Pine SH. 1988. Kimia Organik 2. Roehyati

Joedodibroto, penerjemah. Terjemahan

dari: Organic Chemistry.


21/39

12

Pokorni. 2001. Antioxidant in Food;

Practical Applications. New York : CRCPress.

Prakash A, Rigelhof F, Miller E. 2001.

Antioxidant Activity. MedalliaonLaboratories Analitycal Progress10: 2.

Pramono S, Sumarno, Wahyono S. 1993.

Flavonoid daun Sonchus arvensis L.

senyawa aktif pembentuk komplek dengan

batu ginjal berkalsium. Tumbuhan ObatIndonesia2: 5-7.

Setiarto HB. 2009. Deteksi dan uji

sitotoksisitas LC50 senyawa aflatoksin B1,

B2, G1, G2 pada kacang tanah (Arachishypogeal L) [skripsi]. Bogor: Fakultas

Matematika dan IPA, Institut PertanianBogor.

Silalahi J. 2002. Senyawa polifenol sebagaikomponen aktif yang berkhasiat dalam

teh. Majalah Kedokteran Indonesia 52:

361-4.

Sofia D. 2006. Antioksidan dan Radikal

bebas.Chemistry3: 76-108

Syamsuhidayat SS, Hutapea JR. 1991.

Invertaris Tanaman Obat Indonesia Jilid

I.Jakarta : Balai Pustaka.

Tahir I, Wijaya K, Widianingsih, D. 2003.

Terapan analisis hansch untuk aktivitasantioksidan senyawa turunan

flavon/flavonol. Bandung: ITB Press.

Widyastuti N . 2010. Pengukuran aktivitas

antioksidan dengan metode cuprac, dpph,dan frap serta korelasinya dengan fenol

dan flavonoid pada enam tanaman

[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian

Bogor.

Windono T. 2001. Uji peredam radikal bebas

terhadap 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazil

(DPPH) dari ekstrak kulit buah dan bijianggur (vitis vinifera) probolinggo biru

dan bali [skripsi]. Surabaya: FakultasFarmasi, UNAIR.


22/39

13

LAMPIRAN


23/39

14

Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Sampel buah ceremai segar

Ekstraksi dengan air, etanol 30%, dan

etanol 70%

Buah ceremai segar diblender sampai

halus

Uji fitokimia

Uji aktifitas antioksidan DPPH Uji toksisitas BSLT

Analisis nilai LC50

Korelasi nilai IC50 dengan LC50

Analisis nilai IC50


24/39

15

Lampiran 2 Prosedur ekstrak (BPOM 2005)

Sampel buah ceremai segar

400 gram sampel dilarutkan dalam etanol

70%, 30% dan air (1:1)

Direndam dan diaduk ke dalam maserator

selama 6 jam

Didiamkan selama 24 jam

Maserat dipisahkan dan ekstrak diuapkan

hingga kental dengan evaporator pada suhu

50C

Disimpan di dalamfreezer

Ekstrak ditimbang


25/39

16

Lampiran 3 Kadar air buah segar

UlanganBobot

sampel

Bobot cawan

kosong

(gram)

Bobot sampel+ cawan

setelah

dikeringkan(gram)

Bobot

kering

(gram)

Kadar air

(%)

Rata-rata

kadar air

(%)

1 3.00 5.36 5.74 0.38 87.30

2 3.00 5.32 5.75 0.43 85.67 85.553.00

3 3.02 5.25 5.76 0.51 83.67

Contoh perhitungan

Kadar air = Bobotsampel Bobotkering x100%

Bobotsampel

= 3.00 0.38x100%

3.00

= 87.30%


26/39

17

Lampiran 4 Rendemen ekstrak

Sampel Ulangan Bobot buah

segar (gram)

Bobot ekstrak

(gram)

Rendemen

(%)

Rataan

Etanol 70% 1 406.35 16.00 3.94

2 405.50 15.92 3.93 3.72 0.013 406.59 16.00 3.94

Etanol 30% 1 402.97 13.40 3.33

2 401.37 13.05 3.25 3.28 0.043 400.21 13.01 3.25

Air 1 404.79 4.90 1.21

2 400.59 4.53 1.13 1.13 0.07

3 400.51 4.20 1.05

Contoh perhitungan:

Rendemen = Bobotekstrak x 100%

Bobot buah segar

= 16 x 100%

406.351

= 3.94%


27/39

18

Lampira 5 Uji fitokimia

Uji fitokimia Ekstrak

Air Etanol 30% Etanol 70% Standar

Flavonoid +++ +++ +++ +++

Tanin - - - +++Alkaloid ++ ++ ++ +++

Dragendorf - + + +++Meyer + - - +++

Wagner + + + +++Fenolik + ++ + +++

Terpenoid ++ ++ ++ +++

Steroid - - - +++

Saponin ++ ++ ++ +++

Glikosida + + + +++

Keterangan : +++ Mengandung banyak senyawa metabolit sekunder++ Mengandung sedikit metabolit sekunder

+ Mengandung sangat sedikit metabolit sekunder- Tidak mengandung senyawa metabolit sekunder

- Standar :- Flavonoid = Daun Pare- Tanin = Teh- Alkaloid = Daun Pepaya- Fenolik = Teh- Terpenoid = Jamu Kuat- Steroid = Suren- Saponin = Teh- Glikosida = Pati


28/39

19

Lampiran 6 Gambar uji fitokimia

Uji FitokimiaEkstrak


Alkaloid

Triterpenoid

dan steroid

Flavonoid


29/39

20

Lampiran 6 Gambar uji fitokimia

Uji FitokimiaEkstrak


Saponin

Tanin

Fenolik

Glikosida


30/39

21

Lampiran 7 Uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH

Sebanyak 500 g DPPH ditimbang dan

dilarutkan ke dalam 10 ml etanol

Setiap sampel dimasukkan ke dalam mikro plate

dengan konsentrasi 0, 3.125, 6.24, 12.5, 25, 50,

100, dan 200ppm

100 L reagen DPPH ditambahkan pada tiapsampel

Sampel diinkubasi selama 30 menit pada suhu

37C

Serapan sampel dibaca

pada panjang gelombang 517 nm


31/39

22

Lampiran 8 Prosedur uji antioksidan DPPH (Batubara 2009)

1. Stok sampelPembuatan stok sampel dengan konsentrasi 1000 ppm

2. Stok DPPHSebanyak 500 g DPPH dilarutkan dalam 10 mL etanol

3. Komposisi konsentrasi sampel dan reagen DPPHKonsentrasi sampel

(ppm)

Sampel (l) Etanol (l) DPPH (l)

0 0 100 100

3.125 10 90 1006.25 20 80 100

12.5 30 70 100

25 40 60 100

50 50 50 100100 60 40 100

200 70 30 100

4. Uji aktivitasUlangan Ulangan Ulangan

1 2 3 1 2 3 1 2 3

Sampel 1 A 200

Sampel 2 B 100

Sampel 3 C 50

Sampel 4 D 25

Sampel 5 E 12.5

Sampel 6 F 6.25

Sampel 7 G 3.125

Sampel 8 H 0

5. Sampel diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37C6. Serapan sampel dibaca pada panjang gelombang 517 nm


32/39

23

Lampiran 9 Data absorbansi ekstrak buah ceremai

Sampel Ulangan Konsentrasi Absorbansi % Inhibisi IC50 Rataan

IC50

Air 1 200 0.066 97.55245

26.06

100 0.094 87.76224

24.23

50 0.160 64.6853125 0.299 40.55944

12.5 0.248 33.916086.25 0.301 15.38462

3.125 0.302 15.03497

0 0.345 -

2 200 0.069 96.9230769

100 0.114 83.0769231

26.52

50 0.195 58.1538462

25 0.249 41.538416012.5 0.278 32.6153846

6.25 0.316 20.9230769

3.125 0.358 8.00000000 0.384 -

3 200 0.070 96.61538462

100 0.116 82.46153846

50 0.201 56.30769231

27.4425 0.251 40.92307692

12.5 0.80 32.00000006.25 0.318 20.30769231

3.125 0.360 7.384615380 0.384 -

Etanol 30% 1 200 0.112 82.21476510

69.77

72.39

100 0.201 52.3489932950 0.255 34.22818792

25 0.286 23.8255033612.5 0.300 19.12751678

6.25 0.320 12.416107383.125 0.340 5.70469798

0 0.357 -

2 200 0.11 83.22368421

71.90

100 0.205 51.97368421

50 0.261 33.5526315825 0.294 22.69736842

12.5 0.308 18.09210526

6.25 0.351 3.94736842

3.125 0.340 7.56578947

0 0.363 -

3 200 0.114 81.90789474

75.50

100 0.208 50.9868421150 0.265 32.23684211

25 0.294 22.6973684212.5 0.310 17.43421053

6.25 0.353 3.28947368

3.125 0.358 1.64473684

0 0.363 -


33/39

24

Lampiran 9 Data absorbansi ekstrak buah ceremai

Sampel Ulangan Konsentrasi Absorbansi % InhibisiIC50

Rataan

IC50

Etanol 70% 1 200 0.099 86.57718121

62.34

100 0.187 57.0469798750 0.258 33.2214765125 0.275 27.51677852

12.5 0.318 13.087248326.25 0.344 7.71812080

3.125 0.340 5.70469798

0 0.357 -

2 200 0.104 85.43689320

62.51

100 0.187 58.57605178

50 0.263 33.98058252

25 0.297 22.97734628

12.5 0.315 17.15210356 62.17

6.25 0.342 8.41423948

3.125 0.351 5.501618120 0.368 -

3 200 0.100 86.73139159

61.64

100 0.188 58.25242718

50 0.260 34.95145631

25 0.299 22.33009709

12.5 0.317 16.50485437

6.25 0.344 7.76699029

3.125 0.353 4.85436893

0 0.368 -

Contoh perhitungan :

% Inhibisi = A blanko-A sampel

A blanko-A standar

= (0.345- 0.066) x 100%

( 0.345- 0.059)

= 97.55%


34/39

25

Lampiran 10 Contoh grafik hubungan antara % inhibisi dan konsentrasi

Kurva ekstrak air ulangan 3

Kurva ekstrak air ulan an 2Kurva ekstrak air ulangan 1

Kurva ekstrak etanol 30% ulangan 1

Kurva ekstrak etanol 30% ulangan 2 Kurva ekstrak etanol 30% ulan an 3

Kurva ekstrak etanol 70% ulangan 2Kurva ekstrak etanol 70% ulangan 1


35/39

26

Lampiran 10 Contoh grafik hubungan antara % inhibisi dengan konsentrasi

Lampiran 11 Nilai IC50 masing-masing ekstrak

Sampel Ulangan Persamaan garis Nilai IC50

(ppm)

Rataan IC50

(ppm)

Ekstrak air 1 y = 21.79 ln(x)19.46 24.23

2 y = 21.46 ln(x) - 20,34 26.52 26.061.35

3 y = 21.45 ln(x) - 21,04 27.44

Ekstrak etanol

30%

1 y = 16.72 ln(x)20.98 69.7772.392.36

2 y = 17.44 ln(x)24.56 71.90

3 y = 18.08 ln(x)28.18 75.50

Ekstrak etanol70%

1 y = 18.62ln (x)26.95 62.342 y = 18.39ln (x)26.05 62.51 62.170.38

3 y = 18.80ln (x)27.48 61.64

Kurva ekstrak etanol 70% ulangan 3


36/39

27

Lampiran 12 Hasil analisis statistic IC50dengan selang kepercayaan 95%

Faktor

Dependent Variable: Konsentrasi

26.062 1.122 23.317 28.806

72.389 1.122 69.644 75.133

62.165 1.122 59.421 64.910

Faktor

Air

Etanol 30%

Etanol 70%

Mean Std. Error Lower Bound Upper Bound

95% Confidence Interval

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

9

.0000

1.68233

.171

.171

-.155

.514

.954

N

Mean

Std. Dev iation

Normal Parametersa,b

Absolute

Positive

Negative

Most Extreme

Dif f erences

Kolmogorov -Smirnov Z

Asy mp. Sig. (2-tailed)

Residual f or

Konsentrasi

Test distribution is Normal.a.

Calculated f rom data.b.

Lampiran 13 Hasil analisis statistic IC50dengan ANOVA

ANOVA

Konsentrasi

3554.186 2 1777.093 470.919 .000

22.642 6 3.774

3576.828 8

Between Groups

Within Groups

Total

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

H0 : perlakuan tidak berpengaruh terhadap IC50

H1 : perlakuan berpengaruh terhadap nilai IC50

Karena sig kurang dari alpha 5% maka tolak H0 artinya perlakuan berpengaruh

terhadap nilai IC50


37/39

28

Lampiran 14 Hasil Uji Duncan IC50dengan selang kepercayaan 95%

Konsentrasi

Duncana

3 26.061627

3 62.165200

3 72.388700

1.000 1.000 1.000

Perlakuan

Air

Etanol 70%

Etanol 30%

Sig.

N 1 2 3

Subset f or alpha = .05

Means for groups in homogeneous subsets are display ed.

Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.a.


38/39

29

Lampiran 15 Uji sitotoksisitas potensi hayati

10 ekor larva udang diambil dan dimasukkan

dalam plate uji

Di tambahkan larutan sampel yang akan diuji

masing-masing sebanyak 100 L.

sampel dengan konsentrasi 1000 ppm, 500 ppm,

100 ppm, dan 10 ppm

Diinkubasi selama 24 jam dan dihitung jumlahudang yang mati

Telur udang diteteskan dalam media air laut

selama 24 jam

0.02 gram sampel dari masing-masing ekstrak

di encerkan dengan 10 mL air laut

Hitung % kematian larva pada masing-masing

sumur


39/39

30

Lampiran 16 Hasil perhitungan analisis probit

Sampel Ulangan Konsentrasi LC50

1000 500 100 10

Ekstrak air 1 8 5 2 1

473.262 7 4 1 03 7 5 1 0

% kematian 73.3 46.66 13.3 3.33

Ekstrak etanol

30%

1 8 4 3 0

486.782 6 4 2 1

3 7 4 3 0

% kematian 70 40 26.67 3.33

Ekstrak 70% 1 7 3 2 0

618.552 8 4 2 1

3 4 2 1 0

% kematian 63.3 30 16.67 3.33

cermai.pdf

Documents