presentasi enzimologi (ki- 5162 ) “ gliserol kinase “ e.c 2.7.1.30

PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162)“GLISEROL KINASE “

E.C 2.7.1.30

Beta Zahra Al Husna10507009

AGENDA PRESENTASI• PENDAHULUAN• TATA NAMA ENZIM• STRUKTUR• ISOLASI• PEMURNIAN• MEKANISME• KINETIKA• INHIBISI

PENDAHULUAN

• Gliserol : produk metabolisme jaringan adiposa (glukoneogenesis)

• Hanya dapat digunakan oleh jaringan yang memiliki enzim pengaktifnya yaitu : GLISEROL KINASE

GLISEROL

• E.C 2.7.1.30

• Nama sistematik : ATP: glycerol-3-phosphotransferase

• Nama trivial : Gliserol kinase

TATA NAMA ENZIM

Kelas transferase

Sub kelas fosfotransferase

Sub sub kelas fosfotransferase

Nama dari GK

Struktur domain dan daerah tempat berikatannya efektor

pada GK

Tempat berikatannya ADP & gliserolSTRUKTUR

• Sumber : Eschericia coli • Protein oligomer yang

tetramer (terdiri dari 4 subunit yang identik).

• Daerah aktifnya mengandung ADP dan gliserol pada satu unitnya.

• Berat molekul enzim : 217,000

• Berat molekul subunit : 55,000

Ikatan hidrogen

Ikatan van der waals

Ikatan Mg2+

Hidrolisis ATP

TOPOLOGI STRUKTUR

ISOLASIstarter

(kultur pH 7,0)

Dipindahkan ke medium 100 L dalam fermentor

(37oC, 5 kubik feet/min, 8-12 jam)

Kultur dipindah ke bak dingin yang berisi sel yang dipanen dengan Sharples sentrifuga

Sel dicuci dengan buffer

standar pH 7,0 (4oC)

Berat bersih (745 g)

pemurnian Karakteristik protein

Sel 745 gr (4oC) disuspensi dalam 2

ml buffer

Homogenat disentrifuga 20

min (48.000 x g)

Ultrasentrifuga (100.000 x g, 1 jam)

Suspensi diaduk

semalam

Presipitat dihilangkan dgn sentrifugasi (30.000 x g, 30 min), supernatan

difraksinasi dgn (NH4)2SO4

Fraksi (NH4)2SO4 didilusi dgn buffer 0,1 M KCl (36

jam) ke kolom DEAE-selulosa (500 ml)

Protein dielusi dgn 1650 ml buffer 0,1 M KCl (mixing chamber) &

1650 ml buffer 0,25 M KCl (reservoir)

Konsentrat (NH4)2SO4 didilusi dalam kolom

Sephadex-200 dengan buffer

Diawasi dgn ultraviolet analyzer 280 nm

Elektroforesis 2-D (gradien

pH)

PEMURNIAN

MEKANISMEReaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase

Transfer fosfat dari ATP

KINETIKA

INHIBISI• GK terinhibisi secara alosterik oleh

fruktosa bifosfat (FDP).• Inhibisi dengan FDP

nonkompetitif

PENGENDALIAN INHIBISI• Inhibisi gliserol kinase oleh FDP dapat direduksi

dengan:1. memanipulasi kondisi ioniknya2. dilakukan mutasi

1. Manipulasi kondisi ionik : menggunakan garam (misal: KCl) konsentrasi tinggi menurunkan sensitivitas dan stimulasi terhadap FDP.

Pengaruh KCl terhadap reaksi gliserol kinase Pengaruh garam lain terhadap reaksi gliserol kinase

2. Dilakukan mutasi

SEKIAN DANTERIMA KASIH