presentasi enzimologi (ki- 5162 ) “ gliserol kinase “ e.c 2.7.1.30
DESCRIPTION
PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI- 5162 ) “ Gliserol kinase “ e.c 2.7.1.30. Beta Zahra Al Husna 10507009. AGENDA PRESENTASI. PENDAHULUAN TATA NAMA ENZIM STRUKTUR ISOLASI PEMURNIAN MEKANISME KINETIKA INHIBISI. PENDAHULUAN. GLISEROL. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
PRESENTASI ENZIMOLOGI (KI-5162)“GLISEROL KINASE “
E.C 2.7.1.30
Beta Zahra Al Husna10507009
AGENDA PRESENTASI• PENDAHULUAN• TATA NAMA ENZIM• STRUKTUR• ISOLASI• PEMURNIAN• MEKANISME• KINETIKA• INHIBISI
PENDAHULUAN
• Gliserol : produk metabolisme jaringan adiposa (glukoneogenesis)
• Hanya dapat digunakan oleh jaringan yang memiliki enzim pengaktifnya yaitu : GLISEROL KINASE
GLISEROL
• E.C 2.7.1.30
• Nama sistematik : ATP: glycerol-3-phosphotransferase
• Nama trivial : Gliserol kinase
TATA NAMA ENZIM
Kelas transferase
Sub kelas fosfotransferase
Sub sub kelas fosfotransferase
Nama dari GK
Struktur domain dan daerah tempat berikatannya efektor
pada GK
Tempat berikatannya ADP & gliserolSTRUKTUR
• Sumber : Eschericia coli • Protein oligomer yang
tetramer (terdiri dari 4 subunit yang identik).
• Daerah aktifnya mengandung ADP dan gliserol pada satu unitnya.
• Berat molekul enzim : 217,000
• Berat molekul subunit : 55,000
Ikatan hidrogen
Ikatan van der waals
Ikatan Mg2+
Hidrolisis ATP
TOPOLOGI STRUKTUR
ISOLASIstarter
(kultur pH 7,0)
Dipindahkan ke medium 100 L dalam fermentor
(37oC, 5 kubik feet/min, 8-12 jam)
Kultur dipindah ke bak dingin yang berisi sel yang dipanen dengan Sharples sentrifuga
Sel dicuci dengan buffer
standar pH 7,0 (4oC)
Berat bersih (745 g)
pemurnian Karakteristik protein
Sel 745 gr (4oC) disuspensi dalam 2
ml buffer
Homogenat disentrifuga 20
min (48.000 x g)
Ultrasentrifuga (100.000 x g, 1 jam)
Suspensi diaduk
semalam
Presipitat dihilangkan dgn sentrifugasi (30.000 x g, 30 min), supernatan
difraksinasi dgn (NH4)2SO4
Fraksi (NH4)2SO4 didilusi dgn buffer 0,1 M KCl (36
jam) ke kolom DEAE-selulosa (500 ml)
Protein dielusi dgn 1650 ml buffer 0,1 M KCl (mixing chamber) &
1650 ml buffer 0,25 M KCl (reservoir)
Konsentrat (NH4)2SO4 didilusi dalam kolom
Sephadex-200 dengan buffer
Diawasi dgn ultraviolet analyzer 280 nm
Elektroforesis 2-D (gradien
pH)
PEMURNIAN
MEKANISMEReaksi aktivitas gliserol dengan gliserol kinase
Transfer fosfat dari ATP
KINETIKA
INHIBISI• GK terinhibisi secara alosterik oleh
fruktosa bifosfat (FDP).• Inhibisi dengan FDP
nonkompetitif
PENGENDALIAN INHIBISI• Inhibisi gliserol kinase oleh FDP dapat direduksi
dengan:1. memanipulasi kondisi ioniknya2. dilakukan mutasi
1. Manipulasi kondisi ionik : menggunakan garam (misal: KCl) konsentrasi tinggi menurunkan sensitivitas dan stimulasi terhadap FDP.
Pengaruh KCl terhadap reaksi gliserol kinase Pengaruh garam lain terhadap reaksi gliserol kinase
2. Dilakukan mutasi
SEKIAN DANTERIMA KASIH