laporan skripsi
DESCRIPTION
Terimakasih telah mengunjungi postingan kamiTRANSCRIPT
PENGARUH PENAMBAHAN AIR REBUSAN KENTANG (Solanum tuberosum L.), BAP DAN NAA DALAM MEDIA WPM
TERHADAP INDUKSI TUNAS JATI EMAS (Cordia subcordata) SECARA IN VITRO
SKRIPSI
Oleh
Imanudin
20120210096
Program Studi Agroteknologi
FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH YOGYAKARTA
YOGYAKARTA 2016
Skripsi yang berjudul
PENGARUH PENAMBAHAN AIR REBUSAN KENTANG (Solanum tuberosum L.), BAP DAN NAA DALAM MEDIA WPM TERHADAP
INDUKSI TUNAS JATI EMAS (Cordia subcordata) SECARA IN VITRO
Yang dipersiapkan dan disusun oleh:
Imanudin 20120210096
Telah dipertahankan di depan Dewan Penguji
Pada tanggal ...../…./2016
Skripsi tersebut telah diterima sebagai bagian persyaratan yang diperlukan guna memperoleh derajat Sarjana Pertanian
Pembimbing/Penguji Utama Anggota Penguji
Dr. Innaka Ageng Rineksane, S.P, M.P (……………………………)NIK. 19721012200004133050
Pembimbing/Penguji Pendamping
Ir. Sukuriyati Susilo Dewi, M.S NIK. 19610125199409133019
Yogyakarta, …../…./20016Dekan
Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah Yogyakarta
Ir. Sarjiyah, MSNIP. 19610918.199103.2.001
i
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan:
1. Karya tulis saya, skripsi ini, adalah asli dan belum pernah diajukan untuk mendapatkan gelar akademik, baik di Universitas Muhammadiyah Yogyakarta maupun di perguruan tinggi lainnya.
2. Karya tulis ini murni gagasan, rumusan dan penelitian saya sendiri, tanpa bantuan bantuan pihak lain, kecuali arahan Tim Pembimbing.
3. Karya tulis ini ada gagasan, rumusan dan penilaian saya setelah mendapatkan arahan dan saran dari Tim Pembimbing. Oleh karena itu, saya menyetujui pemanfaatan karya tulis ini dalam berbagai forum ilmiah, maupun pengembangannya dalam bentuk karya ilmiah lain oleh Tim Pembimbing.
4. Dalam karya tulis ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau dipublikasikan orang lain, kecuali secara tertulis dengan jelas dicantumkan sebagai acuan dalam naskah dengan disebutkan nama pengarang dan dicantumkan dalam daftar pustaka
5. Pernyataan ini saya buat sesungguhnya dan apabila di kemudian hari terdapat penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini, maka saya bersedia menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar yang telah saya peroleh karena karya tulis ini, serta sanksi lainnya sesuai dengan norma yang berlaku di perguruan tinggi ini.
Yogyakarta, Yang membuat pernyataan
Imanudin20120210096
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb.
Alhamdulillahi rabbil’alamiin, segala puji bagi Allah SWT penguasa segala alam. Shalawat serta salam selalu tercurah kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW, Saiyyidil awwalin wal akhirin, sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi yang berjudul Pengaruh Penambahan Air Rebusan Kentang (Solanum Tuberosum L.), BAP dan NAA Dalam Media WPM Terhadap Induksi Tunas Jati Emas (Cordia subcordata) Secara In Vitro. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh derajat Sarjana Pertanian pada Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah Yogyakarta.
Dari awal hingga terselesaikannya skripsi ini, penulis banyak mendapat bantuan dari berbagai pihak. Oleh karenanya, penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada:
1. Dr. Innaka Ageng Rineksane, S.P, M.P selaku dosen pembimbing utama, dan Ketua Program Studi Agroteknologi yang telah memberikan ijin mengikuti proyek penelitian, kepercayaan, ilmu, masukan dan arahan kepada penulis
2. Ir. Sukuriyati Susilo Dewi, M.S selaku dosen pendamping, seng selalu memotivasi dan memberikan bimbingan, ilmu masukan dan arahan dalam terlaksananya penyusunan skripsi.
3. Bu Harini sebagai laboran lab kultur in vitro yang senantiasa membantu dan membimbing dalam kegiatan teknis demi berjalannya penelitian.
4. Ibu dan bapak yang senantiasa memberi dukungan dan motivasi dalam setiap urusan yang menyangkut akademik.
5. Siti safitri, Nurika, Dhanita dan teman-teman Agro C yang sampai saat ini menjaga kekompakan dalam memotivasi teman-teman.
Atas segala bantuan, doa dan dukungan yang telah diberikan semoga mendapat balasan dari Allah SWT. Penulis berharap semoga skripsi ini membawa manfaat yang besar baik bagi penulis maupun pembaca.
Wassalamu’alaikum Wr. Wb. Yogyakarta, Maret 2016
PenulisDAFTAR ISI
iii
Halaman
KATA PENGANTAR..........................................................................................iii
DAFTAR ISI.........................................................................................................iv
DAFTAR TABEL.................................................................................................vi
DAFTAR GAMBAR...........................................................................................vii
DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................viii
INTISARI..............................................................................................................ix
ABSTRACT............................................................................................................x
I. PENDAHULUAN..............................................................................................1
A. Latar Belakang................................................................................................1
B. Perumusan Masalah........................................................................................3
C. Tujuan Penelitian............................................................................................4
II.TINJAUAN PUSTAKA....................................................................................5
A. Jati Emas (Cordia subcordata).......................................................................5
B. Kultur In Vitro.................................................................................................8
C. Air Rebusan Kentang (Salonum tuberosum L).............................................10
D. Zat Pengatur Tumbuh (ZPT).........................................................................12
E. Hipotesis.......................................................................................................14
III. TATACARA PENELITIAN........................................................................15
A. Tempat dan Waktu Penelitian.......................................................................15
B. Bahan dan Alat Penelitian.............................................................................15
C. Metode Penelitian.........................................................................................15
D. Cara Penelitian..............................................................................................16
1. Tahapan Penelitian...................................................................................16
iv
2. Persiapan alat dan bahan..........................................................................17
3. Pembuatan media......................................................................................17
4. Persiapan eksplan.....................................................................................18
E. Parameter yang Diamati................................................................................19
1. Persentase eksplan kontaminasi (%)........................................................19
2. Persentase eksplan browning (%).............................................................19
3. Persentase eksplan hidup (%)...................................................................20
4. Primordia kalus Jati Emas........................................................................20
F. Analisis Data.................................................................................................20
IV. HASIL ANALISIS DAN PEMBAHASAN.................................................21
A. Persentase eksplan kontaminasi.................................................................22
B. Persentase browning..................................................................................25
C. Persentase Eksplan Hidup..........................................................................29
V. KESIMPULAN DAN SARAN.......................................................................38
A. Kesimpulan................................................................................................38
B. Saran..........................................................................................................38
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................39
LAMPIRAN..........................................................................................................43
DAFTAR TABEL
v
Halaman
Tabel 1. Pengaruh Air rebusan kentang, BAP dan NAA terhadap Persentasekontaminasi, Persentase browning, persentase eksplan hidup danrecovery stelah browning pada minggu ke-8 kalus Jati Emas.....................................................................22
Tabel 2. Pengaruh pemberian Air rebusan kentang + BAP dan NAA terhadap Primordia tunas 7-MST dan 8-MST...................................................................................32
DAFTAR GAMBAR
vi
Halaman
Gambar 1. Tahapan Pengujian Efektivitas Air Rebusan Kentang untuk induksi tunas Jati Emas Secara In Vitro..............................................................................16
Gambar 2. (a) Kontaminasi Bakteri, (b) Kontaminasi Jamur...........................................23Gambar 3. (a) Eksplan browning, (b) Eksplan Recovery..................................................27Gambar 4. Histogram pengaruh kombinasi BAP + NAA dan Air rebusan kentang.........34Gambar 5. Primordia tunas Jati emas...............................................................................36
DAFTAR LAMPIRAN
vii
HalamanLampiran 1. Layout Penelitian.........................................................................................43Lampiran 2. Komposisi Media.........................................................................................44Lampiran 3. Alur pembuatan media WPM 0....................................................................46Lampiran 4. Alur Pembuatan Media Perlakuan...............................................................47Lampiran 5. Hasil Analisis Anova...................................................................................48Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian...............................................................................49
INTISARI
viii
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh Air rebusan kentang dengan kombinasi BAP dan NAA, untuk menginduksi tunas Jati emas secara in vitro. Penelitian ini telah dilaksanakan di Laboratorium Kultur In Vitro, Fakultas Pertanian, Universitas Muhammadiyah Yogyakarta pada bulan Januari hingga Maret 2016.
Penelitian ini menggunakan metode percobaan faktor tunggal terdiri dari Lima perlakuan yang disusun dalam Rancangan Acak Lengkap. Masing – masing perlakuan diulang sebanyak sepuluh kali. Perlakuan yang digunakan adalah penambahan BAP (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 mg/L), NAA (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mg/L) dan Air Rebusan Kentang (100, 200, 300, 400, 500 ml/l) Variabel yang diamati antara lain persentase kontaminasi, persentase browning, persentase hidup, Primordia tunas.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa Penambahan Air Rebusan Kentang 300 ml/l + BAP 1,5 mg/l dan NAA 0,3 mg/l, merupakan perlakuan terbaik dan menghasilkan primordial tunas mencapai (53.33) pada minggu ke-8. Dengan persentasi eksplan hidup mencapai (90 %), persentasi eksplan kontaminasi (10 %), eksplan browning (30 %) dan recovery (30 %).
Kata kunci: Jati Emas (Cordia subcordata), BAP dan NAA, Air Rebusan Kentang
ABSTRACT
ix
x
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Tanaman Jati Emas (Cordia subcordata) merupakan salah satu tanaman
yang memberikan kontribusi nyata dalam menyediakan bahan baku kayu. Jati
Emas disebut juga Fast Growth Golden Teak (FGGT) yang artinya Jati Emas
berdaya tumbuh cepat. Jika jati biasa (lokal) baru bisa dipanen pada umur 45
tahun, maka Jati Emas ini bisa dipanen pada umur 10-15 tahun. Tanaman jati
emas pada umur 5 tahun ditebang untuk penjarangan hasil penebangan kayunya
juga sudah punya nilai ekonomi dan laku dijual. Kayu Jati Emas banyak dicari
untuk konstruksi dekoratif misalnya parquet flooring (lantai kayu), dinding,
mebel dan kusen kayu/jendela berkualitas tinggi, kayu yang berkualitas ekspori,
karena merupakan kebutuhan furniture dari bahan baku kayu jati, dilihat dari
kebutuhan menunjukkan peningkatan dari tahun ke tahun yaitu 120,111 m3 (2009),
147,563 m3(2010), 136,952 m3 (2011), 138,130 m3 (2012), 169,121 m3 (2013),
30,882 m3 (2014) (BPS Jateng, 2014).
Kebutuhan bahan baku kayu terutama jati yang semakin berkembang telah
meningkatkan kebutuhan bibit jati. Bibit Jati biasanya diproduksi
secara konvensional menggunakan biji (generatif) sehingga produksi bibit dengan
jumlah besar dalam waktu tertentu menjadi terbatas karena adanya lapisan luar
biji yang keras, selain itu pembibitan secara konvensional juga rentan terhadap
penyakit. Bibit yang baik merupakan bibit yang berkualitas tinggi artinya bebas
dari penyakit baik yang disebabkan patogen maupun sifat genetis, Tanaman Jati
dapat diperbanyak secara generatif tetapi hasil perbanyakan secara generatif
1
2
memiliki umur yang lebih panjang. Sementara, perbanyakan secara vegetatif
khususnya kultur in vitro dapat memberikan keunggulan dan keuntungan jauh
lebih besar .
Perbanyakan dengan metode kultur in vitro merupakan perbanyakan yang
dapat memperbanyak tanaman dengan waktu yang singkat, seragam dan
berkualitas dalam menghasilkan tanaman baru dan pemenuhan kebutuhan bibit
tanaman Jati dalam jumlah banyak. Penelitian kultur in vitro Jati (Tectona
grandis L) telah dilakukan oleh Lina, dkk (2013) yang menyatakan bahwa
penambahan 1 mg/l BAP dan 1 mg/l Kinetin ke dalam media MS menghasilkan
persentase pertumbuhan kalus sebesar 23,64% dan tunas sebesar 12,79% dari
eksplan ujung apikal tanaman jati. Sementara Yasodha et al. (2005) telah berhasil
memultiplikasi tunas jati dengan mengkulturkan eksplan biji jati dalam media MS
yang mengandung 22,2 µM BAP dan 11,62 µM Kinetin. Wattimena (1992)
menyatakan salah satu faktor yang menentukan keberhasilan kultur jaringan
adalah zat pengatur tumbuh. Benzyl Amino Purin (BAP) adalah zat pengatur
tumbuh golongan sitokinin yang jika dikombinasikan dengan Naphtalene Acetic
Acid (NAA) dari golongan auksin akan mendorong pembelahan sel dan
pembentukan morfogenesis tanaman. Media kultur jaringan yang dirancang untuk
tanaman berkayu seperti buah-buahan adalah Woody Plant Medium atau WPM,
hasil komposisi dari Lloyd dan McCown, 1981 (George dan Sherrington, 1984 cit
Rahayu, 1993).
Penelitian ini mencoba menggunakan air rebusan kentang yang
dikombinasikan dengan BAP dan NAA untuk menginduksi tunas Jati.
3
Air rebusan kentang digunakan sebagai zat organik kompleks yang ditambahkan
ke dalam media kultur in vitro, dimana air rebusan kentang ini dapat
meningkatkan pertumbuhan eksplan. Hal tersebut dikarenakan adanya kandungan
vitamin A, Tiamin (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2), piridoksin (vitamin B6),
asam askorbat (vitamin C), asam amino, protein, kalsium, magnesium, fosfor, dan
besi (Molnar et al., 2011).
Hasil penelitian Imanudin, dkk (2014) dengan penambahan air rebusan
kentang 300 ml/l pada media WPM dengan penambahan 1mg/l BAP dan 0,1mg/l
NAA mampu menginduksi kalus pada eksplan Jati Emas (Cordia subcordata)
23,60 HST dan diameter kalus mencapai 4.64 cm. Sementara hasil penelitian
Hadi, (2013) menyatakan penambahan air rebusan kentang dengan konsentrasi
300 ml/l kedalam media dapat meningkatkan jumlah akar planlet Pisang Ambon
mencapai 4,33 cm.
B. Perumusan Masalah
Kebutuhan kayu Jati Emas dari tahun ke tahun terus meningkat, sementara
Jati Emas dapat memberikan kontribusi nyata terhadap penyediaan bahan baku
kayu. Semakin tinggi kebutuhan kayu jati sejalan dengan kebutuhan bibit jati.
Perbanyakan bibit Jati Emas secara konvensional membutuhkan waktu yang lama
sehingga perlu adanya perbanyakan jati dengan cepat dan seragam, oleh karena itu
dibutuhkan kajian-kajian tentang perbanyakan jati emas dengan cara kultur in
vitro.
4
Faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan (morfogenesis) kultur dan
sintesis metabolit sekunder adalah komponen organik dan anorganik dari media,
media yang sering digunakan untuk sebagian besar spesies tanaman berkayu yaitu
WPM (Woody Plant medium), dimana dalam Air rebusan kentang mengandung
beberapa zat organik kompleks yang dapat meningkatkan pertumbuhan eksplan.
Hal tersebut dikarenakan adanya kandungan vitamin A, Tiamin (vitamin B1),
riboflavin (vitamin B2), piridoksin (vitamin B6), asam askorbat (vitamin C), asam
amino, protein, kalsium, fosfor dan besi. Oleh karena itu kajian mengenai
seberapa besar pengaruh air rebusan kentang untuk induksi tunas Jati Emas secara
in vitro perlu dilakukan.
C. Tujuan Penelitian
1. Mengetahui pengaruh air rebusan kentang (Solanum tuberosum L.) terhadap
pertumbuhan tunas Jati Emas (Cordia subcordata) secara in vitro.
2. Menentukan konsentrasi BAP dengan NAA yang dikombinasikan dengan air
rebusan kentang sebagai ZPT kultur yang efektif untuk pertumbuhan tunas
eksplan jati secara in vitro.
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Jati Emas (Cordia subcordata)
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Bangsa : Lamiales
Suku : Boraginaceae
Marga : Cordia
Jenis : Cordia subcordata
Nama Umum : Jati Emas
Jati Emas (Cordia subcordata) merupakan bibit unggul hasil teknologi
kultur jaringan dengan induk tanaman pada mulanya berasal dari Myanmar, Jati
Emas ini sudah sejak tahun 1980 ditanam secara luas di Myanmar dan Thailand,
Sementara itu penanaman Jati Emas di Malaysia secara meluas dilakukan pada
tahun 1990 dan di Indonesia dimulai pada tahun 1996 dengan penanaman Jati
Emas hingga 1 juta pohon di daerah Indramayu Jawa Barat. Untuk
perbandingan, tanaman Jati Emas berumur 5-7 tahun sudah mempunyai batang
dengan diameter 27 cm dan tinggi pohon mencapai 16 meter, pada umur yang
sama jati biasa (Konvensional) diameter batangnya baru sekitar 3,5 cm dan
tinggi pohonnya sekitar 4 meter (Maheldaswara 1994).
Jati Emas disebut juga Fast Growth Golden Teak (FGGT) yang artinya jati
emas berdaya tumbuh cepat, jika jati biasa (lokal) baru bisa dipanen pada umur 45
tahun, maka jati emas ini bisa dipanen pada umur 10-15 tahun. Pada umur 5 tahun
5
6
ditebang untuk penjarangan yang hasil penebangan kayunya juga sudah punya
nilai ekonomi dan sudah laku dijual. Jati Emas diklasifikasikan sebagai kayu keras
ringan 700 kg/m³. Tekstur serat kayu lurus, sehingga mudah dikerjakan dengan
alat-alat permesinan. Warna kayu putih kekuningan dan menjadi trend setter
warna furniture di Jepang dan Eropa. Kayu Jati Emas banyak dicari untuk
konstruksi dekoratif misalnya, parquet flooring (lantai kayu), dinding, mebel dan
kusen kayu/jendela berkualitas tinggi. Sebagai kayu yang berkualitas ekspor, jati
emas layak diusahakan sebagai tanaman industri (http://jatiemas.tripod.com).
Jati Emas cocok ditanam diperkebunan yang berada di daerah tropis,
sebagaimana umumnya tanaman jati, jati emas juga termasuk tanaman pioner
yang dapat tumbuh diberbagai jenis tanah, kecuali tanah gambut atau rawa.
Meskipun demikian, tanah yang ideal untuk penanaman jati emas adalah jenis
tanah aluvial dengan ph 5-8, ada juga literatur yang meyebutkan bahwa jati
emas sangat menyukai tanah yang banyak mengandung kapur, Topografi tanah
dengan kemiringan kurang dari 20 % (Maheldaswara 1994).
Jati Emas dapat tumbuh dengan baik jika ditanam di daerah dataran
rendah (50-80 m dari permukaan air laut) jati mas bisa ditanam di lokasi yang
berada di ketinggian 0-700 m di atas permukaan laut. Artinya lokasi yang dekat
pantaipun dapat dijadikan tempat penanaman Jati Emas (Maheldaswara 1994).
Perbanyakan Jati Emas biasanya di perbanyak dengan biji (generatif) perbanyakan
dengan biji membutuhkan waktu yang relatif lama, hal ini dikarenakan umur jati
untuk menghasilkan biji 7-10 tahun sedangkan untuk umur panen Jati Emas bias
di panen umur 5-7 tahun, dengan siklus umur panen Jati Emas lebih cepat
7
dibandingkan dengan jati biasa (lokal) oleh karena itu perlunya teknologi untuk
perbanyakan Jati Emas dalam waktu singkat dan seragam, teknologi kultur in
vitro telah terbukti dapat digunakan sebagai teknologi pilihan yang sangat
menjanjikan untuk pemenuhan kebutuhan bibit tanaman Jati Emas (Cordia
subcordata). Metode kultur jaringan dikembangkan untuk membantu
memperbanyak tanaman, khususnya untuk tanaman yang relatif lama untuk
dikembangbiakkan secara generatif. Bibit yang dihasilkan dari kultur jaringan
mempunyai beberapa keunggulan, antara lain: mempunyai sifat yang identik
dengan induknya, dapat diperbanyak dalam jumlah yang besar sehingga tidak
terlalu membutuhkan tempat yang luas, mampu menghasilkan bibit dengan
jumlah besar dalam waktu yang singkat, kesehatan dan mutu bibit lebih terjamin,
kecepatan tumbuh bibit lebih cepat dibandingkan dengan perbanyakan
konvensional.
Perbanyakan secara vegertatif menggunakan teknik kultur in vitro
dengan teknik kultur kalus atau kultur sel. Jika suatu eksplan ditanam pada
medium padat atau dalam medium cair yang seusuai, dalam waktu 2-4
minggu, tergantung spesiesnya, akan terbentuk massa kalus yaitu suatu massa
amorf yang tersusun atas sel-sel parenkim berdinding sel tipis yang
berkembang dari hasil proliferasi sel-sel jaringan induk. Kalus mempunyai
pertumbuhan yang abnormal dan berpotensi untuk berkembang menjadi akar,
tunas dan embrioid yang nantinya akan dapat membentuk plantlet. Plantlet
dapat disub-kultur dengan cara mengambil sebagian plantlet dan
memindahkannya pada medium baru, dengan sistem induksi yang tepat kalus
dapat berkembang menjadi tanaman utuh.
9
B. Kultur In Vitro
Kultur in vitro didefinisikan sebagai suatu teknik menumbuhkan
bagian tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi aseptik
secara in vitro, yang dicirikan oleh kondisi kultur yang aseptik, penggunaan
media kultur buatan dengan kandungan nutrisi lengkap dan ZPT (Zat
Pengatur Tumbuh) serta kondisi ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya
terkontrol menurut Yusnita (2004). Kebutuhan hara sel dan jaringan yang
dikulturkan akan mempengaruhi keberhasilan dalam teknologi serta
penggunaan metode in vitro. Hara yang terdapat dalam media terdiri atas
komponen utama meliputi garam mineral, sumber karbon (gula), vitamin dan
zat pengatur tumbuh (Wetter dan Constabel, 1991).
Perbanyakan tanaman melalui kultur in vitro menawarkan peluang besar
untuk menghasilkan jumlah bibit tanaman yang banyak dalam waktu relatif
singkat sehingga lebih ekonomis. Perbanyakan tanaman secara kultur in vitro
merupakan teknik alternatif yang tidak dapat dihindari bila penyediaan bibit
tanaman harus dilakukan dalam skala besar dan dalam waktu relatif singkat
(Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Menurut Wetter dan Constabel (1991) bahwa kultur jaringan tanaman
terdiri dari sejumlah teknik untuk menumbuhkan organ, jaringan dan sel tanaman.
Jaringan dapat dikulturkan pada agar padat atau dalam medium hara cair. Jika
ditanam dalam agar, jaringan akan membentuk kalus, yaitu massa sel atau sel-sel
yang tidak tertata. Kultur agar juga merupakan teknik untuk meristem dan juga
untuk mempelajari organogenesis. Untuk mengembangkan tanaman secara
10
in vitro sampai menjadi plantlet dan akhirnya menjadi tanaman lengkap yang siap
dipindah ke medium tanah, maka terdapat beberapa tahapan utama yang harus
dilakukan, yaitu: (1) pemilihan sumber tanaman yang akan digunakan sebagai
bahan awal (jaringan meristem, eksplan, dan lain-lain), (2) penanaman dalam
medium yang sesuai sampai terjadi perbanyakan (misalnya dalam bentuk kalus),
(3) pembentukan tunas dan akar sampai terbentuk plantlet, (4) aklimatisasi, yaitu
proses adaptasi di luar sistem in vitro, (5) penanaman pada medium biasa (tanah
atau media bukan artifisial lainnya) (Yuwono, 2006). Formulasi dasar dari garam
mineral buatan Murashige dan Skoog merupakan media kultur yang khas dan
biasa digunakan dalam propagasi tanaman secara in vitro. Nutrisi mineral dapat
dibagi dalam tiga kelas: garam mineral nutrisi makro, garam mineral nutrisi mikro
dan sumber besi (Wetherel, 1982).
Tunas–tunas yang terbentuk dari eksplan pada bagian yang bukan
merupakan tempat asal terbentuknya (bukan dari mata tunas atau buku).
Tunas-tunas ini dapat terbentuk langsung dari eksplan yang melalui proses
terbentuknya kalus terlebih dahulu. Teknik ini merupakan salah satu teknik
mikropropagasi yang juga banyak dilakukan dan dapat menghasilkan plantlet
dalam jumlah jauh lebih banyak dari teknik terdahulu pembentukan tunas
aksilar. Hasil penelitian dengan pemberian BAP dan NAA yang optimum
untuk pertumbuhan tunas anggrek pada perlakuan 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l
NAA waktu terbentuknya tunas dengan rerata 13,33 HST, jumalah tunas 2,33
buah daun jumlah daun 5,67 helai (Markal dkk, 2015).
11
Faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan (morfogenesis) kultur
dan sintesis metabolit sekunder adalah komponen organik dan anorganik dari
media, zat pengatur tumbuh, cahaya dan temperatur. Media merupakan faktor
yang sangat penting karena digunakan sebagai tempat tumbuhnya eksplan.
Media dalam kultur in vitro merupakan campuran air dan hara yang
mengandung garam-garam organik dan zat pengatur tumbuh. Garam-garam
anorganik menyediakan unsur makro seperti (N,P,K,Ca,Mg dan Na) dan
unsur hara mikro (B, Co, Mn, I, Fe, Zn dan Cu) (Umi, 2008).
Beberapa media yang digunakan dalam kultur in vitro antara lain, media
Nitsch and Nitsch, MS (Murashige and Skoog), media B5, media WPM (Woody
Plant medium). Media yang sering digunakan untuk sebagian besar spesies
tanaman berkayu yaitu WPM (Dixon, 1985). Zat-zat organik yang biasanya
ditambahkan dalam media kultur in vitro kentang, ekstrak ragi, air kelapa.
Penambahan air rebusan kentang dengan konsentrasi 200 ml/l memberikan
pengaruh nata terhadap pertumbuhan jumlah akar pisang ambon dengan rata-rata
jumlah tertinggi mencapai 4,333 cm ( Hadi, 2013).
C. Air Rebusan Kentang (Salonum tuberosum L)
Kentang ( Solanum tuberesum L) adalah tanaman dari suku Solanaceae
yang memiliki umbi batang dan merupakan salah satu sumber utama karbohidrat.
Tanaman ini merupakan herba (tanaman pendek tidak berkayu) semusim dan
hidup di iklim yang sejuk. Air rebusan kentang digunakan sebagai zat organik
12
ompleks yang ditambahkan ke dalam media kultur in vitro, dimana air rebusan
kentang ini dapat meningkatkan pertumbuhan eksplan. Hal tersebut dikarenakan
adanya kandungan vitamin A, Tiamin (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2),
piridoksin (vitamin B6), asam askorbat (vitamin C), asam amino, protein,
kalsium, fosfor dan besi yang terdapat dalam kentang (Hendaryono dan Wijayani,
1994; Storey (2007) cit. Molnar et al., (2011). Air rebusan kentang yang
dikombinasikan dengan zat pengatur tumbuh dalam media kultur diketahui
meningkatkan pertumbuhan kultur anther pada tanaman gandum, serealia dan
anggrek (Thorpe et al., 2008 cit Molnar et al., 2011).
Nutrisi yang terdapat pada air rebusan kentang dapat dimanfaatkan sebagai
sumber nutrisi pada media tumbuh karena mengandung unsur hara diantaranya
adalah asam amino dan fosfor. Asam amino berfungsi untuk pertumbuhan dan
diferensiasi kalus, selain itu unsur fosfor yang diberikan dalam jumlah tinggi
berpengaruh terhadap penambahan jumlah akar melebihi tunas (Salisbury dan
Ross, 1995).
Penggunaan media WPM sebagai media dasar dalam penelitian ini didasarkan
pada jenis tanaman yang dikulturkan. Tanaman berkayu sering mengeluarkan
ekskresi yang mungkin menyebabkan racun terhadap medium tanam, sehingga
mengganggu pertumbuhan dan perkembangan kultur. Penelitian multiplikasi jeruk
kacang (Citrus nobilis L.) yang dilakukan Miryam et al. (2008) menunjukkan
bahwa penggunaan media WPM dengan kombinasi Benzil Amino Purin (BAP)
dan Naphtalene Asetic Acid (NAA) menghasilkan persentase hidup eksplan
sebesar 82.42%. Sementara penelitian yang dilakukan oleh Qosim (2006)
13
elaporkan bahwa penggunaan WPM dengan penambahan BAP menghasilkan
regenerasi tunas pada kultur kalus nodular manggis (Garcinia mangostana L).
Berdasarkan hasil penelitian Mohammad W.D (2014) dengan kombinasi ZPT
terhadap tunas apikal terbanyak didapatkan pada pemberian BAP 1,0 mg/L dan
NAA 0,05 mg/L yakni 1 tunas per eksplan, hal tersebut berarti media WPM
dengan penambahan BAP 0,0 mg/L dan NAA 0,05 mg/L efektif diterapkan pada
tunas lateral dalam pertumbuhan tunas, sedangkan tunas apikal akan efektif
apabila dikulturkan pada media WPM dengan penambahan BAP 1,0 mg/L dan
NAA 0,05 mg/L. Sementara hasil penelitian Imanudin, dkk (2014) dengan
penambahan air rebusan kentang pada media WPM mampu mengiduksi kalus pada
eksplan Jati Emas (Cordia subcordata) 23.60 HST dan diameter kalus mencapai
4.640 cm dengan konsentrasi 300ml/l dengn penambahan 1mg/l BAP dan 0,1mg/l
NAA.
D. Zat Pengatur Tumbuh (ZPT)
Zat pengatur tumbuh adalah senyawa yang umumnya aktif pada
konsentrasi yang sangat rendah dan dihasilkan dalam tubuh tanaman, dan dewasa
ini bisa diproduksi secara buatan dengan fungsi yang sama. Ada beberapa
kelompok zat pengatur tumbuh yaitu: auksin, sitokinin, giberilin, ethylene dan
asam absisik. Auksin dan sitokinin adalah senyawa yang paling penting untuk
pertumbuhan kultur in vitro. George dan Sherrington (1984) menyatakan bahwa
untuk proses caulogenesis atau rhizogenesis, morfogenesis akar dan tunas dari
14
kultur kalus biasanya dibutuhkan imbangan taraf zat pengatur tumbuh auksin dan
sitokinin. Auksin yang paling sering digunakan untuk menginisiasi pembentukan
kalus adalah jenis NAA, sedang untuk jenis sitokinin bisa dipakai kinetin atau
BAP.
Pemilihan zat pengatur tumbuh dikaitkan dengan urutan tingkat pekerjaan
kultur jaringan. Zat pengatur tumbuh yang banyak digunakan adalah auksin dan
sitokinin. Pemilihan zat pengatur tumbuh dikaitkan dengan urutan tingkat
pekerjaan kultur jaringan. Zat pengatur tumbuh yang banyak digunakan adalah
auksin dan sitokinin. Golongan auksin dan sitokinin akan mempengaruhi respon
eksplan yang dikulturkan. Proporsi yang relatif tinggi dari auksin terhadap
sitokinin menyebabkan diferensiasi mengarah pada pertumbuhan akar dan jika
sitokinin lebih tinggi dari auksin maka jaringan akan terdiferensiasi kearah
pertumbuhan tunas, dalam percobaan kultur jaringan pada umumnya jenis auksin
dan sitokinin yang digunakan adalah NAA dan BAP karena kedua zat pengatur
tumbuh tersebut relatif tahan terhadap degradasi, sedangkan media yang banyak
dipakai adalah media MS (George and Sherrington, 1984).
Berdasarkan penelitian Rahayu (1993), menggunakan potongan kotiledon
yang berasal dari kultur in vitro sebagai eksplan pada media dasar MS. Kalus
terbentuk cukup banyak pada penambahan BAP 0, 1-1 mg/l dengan kombinasi 0,1
mg/l NAA, namun persentase tunas yang muncul adalah paling kecil. Sedangkan
kalus lebih sedikit muncul pada penambahan 10 mg/l BAP dan 1,0 mg/l NAA, tapi
inisiasi tunas adalah maksimum. Sedangkan perlakuan BAP 0,5 mg/l dan NAA 0,1
mg/l memberikan jumlah tunas total terbanyak pada media MS dengan
15
eksplan yang berasal dari epikotil jeruk Troyer Citrange yang dikecambahkan
secara in vitro.
Hasil penelitian kultur in vitro jati menunjukkan bahwa penambahan 1
mg/l BAP dan 1 mg/l Kinetin ke dalam media MS menghasilkan persentase
pertumbuhan kalus sebesar 23,64% dan tunas sebesar 12,79% dari eksplan ujung
apikal tanaman jati Lina, dkk (2013). Sementara multiplikasi tunas jati telah
berhasil dilakukan dengan mengkulturkan eksplan biji jati dalam media MS yang
mengandung 22,2 µM BAP dan 11,62 µM Kinetin (Yosadha et al. 2005).
E. Hipotesis
Dari rumusan di atas didapatkan hipotesis dengan penambahan Air rebusan
kentang ( Solanum tuberesum L) dengan kombinasi BAP 1,5 ml/l + NAA 0,3 ml/l
dan air rebusan kentang 300 ml/l dapat meningkatkan pertumbuhan tunas Jati
Emas (Cordia subcordata), dan adanya perbedaan pertumbuhan eksplan dengan
penambahan Air rebusan Kentang dalam kultur in vitro.
III. TATACARA PENELITIAN
A. Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur In Vitro Fakultas Pertanian
Universitas Muhammadiyah Yogyakarta pada bulan Januari-Februari 2016.
B. Bahan dan Alat Penelitian
Alat penelitan yang digunakan meliputi: alat sterilisasi seperti Laminar Air
Flow cabinet, lampu Bunsen, Autoklaf, alat inokulasi seperti pinset, plastik wrap,
lampu bunsen, alumunium foil. Alat pengukur yaitu pH stik, gelas ukur, pipet
ukur, timbangan analitik dan peralatan glassware. Bahan yang digunakan berupa
Air rebusan kentag, kalus jati dan media WPM.
C. Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan faktor
tunggal yaitu konsentrasi air rebusan kentang (K) dalam media WPM, BAP, 0,5;
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 mg/l dan NAA 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mg/l dengan 5 perlakuan.
Masing-masing perlakuan diulang sebanyak 10 kali, sehingga didapat 50 unit
percobaan. Adapun perlakuan yang diuji sebagai berikut :
A = BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/l.
B = BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/l.
C = BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/l.
D = BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/l.
E = BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l.
16
17
D. Cara Penelitian
1. Tahapan Penelitian
Tahapan yang digunakan dalam penelitian ini terdiri atas beberapa
tahapan yaitu: (1) Persiapan alat dan bahan penelitian, (2) Pembuatan media,
(3) Homogenisasi (4) Induksi tunas jati, (5) Inkubasi, (6) Analisis data.
Tahapan penelitian seperti pada bagan 1.
Gambar 1. Tahapan Pengujian Efektivitas Air Rebusan Kentang untuk induksi tunas Jati Emas Secara In Vitro.2. Persiapan alat dan bahan
PERSIAPAN ALAT DAN BAHAN PENELITIAN:1. Persiapan bahan dan sterilisasi alat
INDUKSI TUNAS JATI :1. Inokulasi tunas jati ke dalam media sesuai perlakuan
PEMBUATAN MEDIA:1. Penimbangan unsur makro, mikro dan Perebusan kentang2. Pembuatan media woody plant mendium (WPM)
a. Pembuatan media WPM0b. Pembuatan media WPM sesuai dengan perlakuan
INKUBASI 1. Pengamatan dan pengambilan data
ANALISIS DATA :1. Pembahasan dan kesimpulan hasil penelitian
HOMOGENISASI:1. Pemindahan kalus dari media WPM perlakuan ke media WPM0
selama 2 minggu
18
Bahan yang digunakan dalam penelitian terdiri dari : eksplan berupa
kalus jati dari hasil penelitian sebelumya ; media inokulasi berupa media
WPM, Air rebusan kentang, BAP, NAA. Alat-alat yang digunakan meliputi :
alat sterilisasi seperti Laminar Air Flow cabinet, lampu Bunsen, autoklaf; alat
inokulasi seperti pinset, plastik wrap, lampu bunsen, alumunium foil, pH stik,
gelas ukur, pipet ukur, timbangan analitik, dan peralatan glassware.
Sterilisasi alat-alat berupa glassware yang akan digunakan untuk
inokulasi eksplan dilakukan menggunakan autoklaf pada tekanan 1 atm dan
suhu 1210 C selama 20 menit sedangkan sterilisasi bakar dilakukan pada
peralatan dissecting kits (Pinset, gunting dan skalpel) di dalam LAF dengan
cara mencelupkan alat pada alkohol 70% dan membakarnya di atas bunsen
sebelum di gunakan. Sterilisasi LAF dilakukan sebelum sterilisasi basah dan
bakar dimulai, dengan menyalakan lampu UV selama 15 menit.
3. Pembuatan media
Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media WPM.
Pembuatan media diawali dengan penimbangan komposisi media Makro,
mikro, ZPT, agar, sukrosa dan perebusan kentang. Air rebusan kentang
didapatkan dengan merebus kentang yang telah dikupas terlebih dahulu dan di
potong-potong menjadi bagian kecil dengan perbandingan kentang yaitu 1:1
(1 Liter aquades, 1 kg kentang), kemudian kentang direbus dan diambil airnya
tanpa disaring. (lampiran 3).
Bahan yang digunakan terdiri dari unsur makro, mikro ZPT, Air
rebusan kentang, agar dan sukrosa untuk media WPM. Semua bahan tersebut
19
ditimbang terlebih dahulu sesuai takaran berdasarkan perlakuan. Bahan-bahan
tersebut dicampur dengan menambahkan zat pengatur tumbuh BAP dan NAA
sesuai perlakuan kemudian diencerkan dengan aquades sampai campuran
bahan-bahan mencapai 400 ml. Kemudian ditambahkan sukrosa sebanyak 30
g/l dan agar 3 g/l. Agar campuran tersebut merata, diaduk sampai homogen,
selanjutnya yaitu pengukuran pH larutan. pH larutan disesuaikan menjadi 6
yaitu dengan penambahan NaOH 1 N untuk menaikkan pH atau HCl 1 N untuk
menurunkan pH. Apabila pH telah sesuai, maka pada larutan ditambahkan
bahan pemadat media, yaitu agar-agar sebanyak 3g/l dan ditunggu sampai
mendidih. Setelah mendidih, larutan dituangkan ke botol-botol kultur, kurang
lebih 20 ml setiap botolnya.
Botol ditutup dengan plastik PP, kemudian dilakukan sterilisasi dengan
cara autoclave pada suhu 1210 C, pada tekanan 1 atm selama 30 menit.
Kemudian, botol diangkat dari autoclave, tutup dirapatkan dan didinginkan
agar media menjadi padat. Botol-botol kultur berisi media selanjutnya
disimpan pada rak-rak kultur.
4. Persiapan eksplan
Eksplan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kalus jati dari hasil
penelitian sebelumnya, persiapan yang dilakukan sebagai berikut:
a. Homogenisasi
Homogenisasi eksplan dilakukan dengan cara memindahkan eksplan
dari peneitian sebelumnya media perlakuan WPM0 dengan masa inkubasi
20
minimal dua (2) minggu sebelum di pindahkan ke media yang diberi
perlakuan.
b. Induksi kalus
Induksi kalus dilakukan dengan memacu pembelahan sel secara terus-
menerus menggunakan zat pengatur tumbuh, kalus selanjutnya akan
bergenerasi melalui organogenesis hingga menjadi tanaman baru, induksi
kalus dilakukan dengan memindahkan kalus dari media homogenisasi (WPM
0) ke dalam media perlakuan dengan berat kalus yang sama 0,5 gram per
botol kultur.
E. Parameter yang Diamati
1. Persentase eksplan kontaminasi (%)
Eksplan yang terkontaminasi dihitung setiap minggu. Eksplan
dikatakan terkontaminasi apabila ada jamur atau bakteri pada eksplan atau
media kultur tersebut.
Rumus:
%eksplan kontaminasi= ∑ eksplankontaminasi∑ totalekspantiap perlakuan
x100 %
2. Persentase eksplan browning (%)
Eksplan yang mengalami pencoklatan/browning dihitung setiap
minggu, kriteria eksplan browning apabila pencoklatan pada eksplan lebih
dari separuh eksplan.
Rumus :
21
% eksplan browning = ∑ eksplanbrowning
∑totalekspantiap perlakuanx100 %
3. Persentase eksplan hidup (%)
Jumlah eksplan yang hidup dihitung setiap minggu. Kriteria eksplan
hidup apabila warna hijau atau tumbuh tunas pada eksplan .
Rumus:
% eksplan hidup = ∑ eksplanhidup∑totalekspantiap perlakuan
x100 %
4. Primordia Tunas Jati Emas
Primordia kalus dihitung sejak terbentuknya organ atau bakal tunas
pada eksplan. Eksplan yang diamati yaitu eksplan telah terbantuk sempurna
dengan dicirikan eksplan berwarna hijau, pengamatan dilakukan dengan
menghitung jumlah esplan yang terbentuk dengan kaca pembesar (Lup).
F. Analisis Data
Setelah data hasil penelitian diperoleh, kemudian dilakukan
analisis menggunakan sidik ragam (Analysis of variance) dengan
software SAS, bila ada beda nyata antar perlakuan maka dilakukan
uji lanjut dengan menggunakan uji DMRT (Duncan’s Multiple
Range Test) dengan traf 5%. Hasil analisis data disajikan dalam
bentuk tabel dan gambar.
IV. HASIL ANALISIS DAN PEMBAHASAN
Perbanyakan tanaman secara vegetatif melalui kultur jaringan, zat pengatur
tumbuh mempunyai peran yang sangat penting dalam pertumbuhan dan
perkembangan eksplan dalam kultur in vitro. Pembentukan kalus dan organ-organ
ditentukan oleh penggunaan zat pengatur tumbuh yang tepat (Hendaryono dan
Wijayani, 1994). Organogenesis pada eksplan merujuk kepada proses
menginduksi pembentukan jaringan, sel atau kalus menjadi tunas dan tanaman
sempurna. Sedangkan menurut Gamborg (1981), auksin berperan merangsang
pembelahan dan pembesaran sel, pembentukan kalus dan akar, sedang sitokinin
akan memacu pembentukan tunas. Pertumbuhan serta morfogenesis jaringan yang
dikulturkan diatur oleh interaksi serta keseimbangan antara zat pengatur tumbuh
yang diberikan ke dalam media (eksogenous), serta hormon endogenous (Santoso,
2004).
Keberhasilan suatu penelitian kultur jaringan dipengaruhi oleh eksplan yang
terkontaminasi, browning, eksplan hidup. Gejala kontaminasi yang timbul dapat
dicirikan dengan adanya koloni-koloni bakteri maupun spora jamur pada
permukaan media atau permukaan eksplan dicirikan dengan warna putih abu-abu
atau kehitaman dan berwarna merah muda. Kontaminasi jamur umumnya baru
terlihat pada 1-2 minggu setelah tanam (MST). Pengamatan kontaminasi eksplan
kontaminasi meliputi bakteri dan jamur, sedangkan eksplan browning terjadinya
pencoklatan pada eksplan yang dipengaruhi oleh senyawa fenol yang dikeluarkan
oleh eksplan. Sedangkan jumlah eksplan yang hidup dicirikan eksplan berwarna
hijau atau terbentuknya kalus atau tunas (Tabel 1).
22
23
Tabel 1. Pengaruh Air rebusan kentang, BAP dan NAA terhadap Persentase kontaminasi, Persentase browning, persentase eksplan hidup dan recovery stelah browning pada minggu ke-8 kalus Jati Emas
Perlakuan Kontaminasi (%)
Browning (%)
Hidup (%)
Recovery (%)
A 10 50 80 40B 0 50 100 50C 10 30 90 30D 0 40 90 30E 0 30 100 30
Keterangan:A = BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/lB = BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/lC = BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/lD = BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/lE = BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l
Lama waktu induksi tunas dari kalus Jati Emas diamati secara visual
dengan mencatat atau menghitung waktu pertumbuhan. Penghitungan dimulai dari
hari pertama setelah inokulasi sampai terbentuk tunas pertama kali, data hasil
pengamatan mengenati persentase keberhasilan melalui parameter eksplan
kontaminasi, browning dan eksplan hidup dapat dilihat pada (tabel 1).
A. Persentase eksplan kontaminasi
Pengamatan eksplan terkontaminasi bertujuan untuk mengetahui tingkat
keberhasilan sterilan baik eksplan, alat maupun media, parameter pengamatan
persentase eksplan kontaminasi dapat dilihat dengan adanya bakteri dan jamur
yang tumbuh di permukaan eksplan maupun media. Mencegah dan menghindari
kontaminasi merupakan hal yang mutlak dilakukan pada seluruh rangkaian
percobaan kultur in vitro, karena lingkungan yang aseptik harus selalu dijaga.
24
Kontaminan dalam kultur in vitro adalah segala bentuk organisme atau
mikroorganisme lain yang tumbuh pada media biakan jaringan di lingkungan
aseptik. Sumber kontaminan bisa berasal dari mikroorgansime yang tumbuh pada
material tanaman yang dibiakkan, alat-alat yang digunakan, dan lingkungan
tempat penyimpanan biakan di ruang inkubasi.
Pertumbuhan jamur dan bakteri dapat mengakibatkan kematian pada
eksplan, pertumbuhan jamur pada media dicirikan dengan pertumbuhan miselium
pada media yang semakin lama akan menutupi permukaan eksplan dan
mengakibatkan kematian, sedangkan kontaminasi yang diakibatkan bakteri dengan
adanya lendir-lendir dengan ciri-ciri lendir berwarna kuning maupun merah muda
(Gambar 2).
(a) (b)
Gambar 2. (a) Kontaminasi Bakteri, (b) Kontaminasi Jamur
Hasil pengamatan yang didapatkan selama fase inisiasi ialah persentase
kontaminasi. Kontaminasi terhadap pada tiap-tiap perlakuan tidak menunjukan
persentase yang cukup besar hal ini dikarenakan bahan tanam yang digunakan
dalam tahap induksi tunas pada jati emas berupa eksplan yang steril, kontaminasi
25
yang di sebabkan oleh bakteri pada perlakuan BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K
100 ml/l mencapai 10 %, terjadinya kontaminasi bukan disebabkan oleh eksplan,
kontaminasi akibat bakteri ini muncul di permukaan media saat umur eksplan 2
minggu setelah tanam (MST), terjadinya kontamnasi bakteri ini bias terjadi karena
kurang sterilnya alat yang digunakan dalam inokulasi baik pinset maupun botol
kultur yang digunakan, kontaminasi juga bisa disebabkan oleh kontaminasi media.
Menurut Ermayanti (1997) Sumber kontaminan bisa berasal dari mikroorgansime
yang tumbuh pada material tanaman yang dibiakkan, alat-alat yang digunakan, dan
lingkungan tempat penyimpanan biakan di ruang inkubasi, ciri-ciri kontaminasi
yang disebabkan oleh bakteri dengan tumbuhnya diatas permukaan media dengan
warna kekuning-kuningan dan berlendir (Gambar 2.a).
Pengamatan terhadap sumber kontaminasi pada penelitian ini menunjukkan
bahwa sumber kontaminan pada media disebabkan oleh jamur maupun bakteri.
Kontaminasi berasal dari kontaminan eksternal baik berupa jamur maupun bakteri,
ataupun kontaminan internal yang pada umumnya berasal dari baktreri yang
tumbuh di dalam jaringan tanaman. Kontaminasi yang disebabkan oeh jamur
terjadi pada perlakuan 3 dengan kombinasi perlakuan BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3
mg/l + K 300 ml/l mencapai 10 %, tidak menunjukan kontaminasi yang tidak
begitu besar, kontaminasi jamur terjadi pada umur tanaman 1 minggu setelah
tanam (MST), kontaminasi jamur lebih cepat terjadi dibandingkan dengan bakteri,
Hal ini memunculkan dugaan bahwa kontaminasi yang terjadi saat proses
subkultur ke 2 karena masuknya kontaminan yang terbawa oleh udara atau pada
alat saat melakukan proses pemotongan, sedangkan cirri-ciri eksplan terkontainasi
26
oleh jamur yaitu dengan tumbuhnya miselium jamur pada permukaan media
maupun eksplan dengan warna putih keabu-abuan, sehingga miselium jamur
menyelimuti eksplan dan terjadi kematian pada eksplan (Gambar 2.b). Bidwell
(1979) mengungkapkan bahwa Sifat spora jamur yang kecil dan ringan
membuatnya mudah terbawa oleh aliran udara. Media kultur yang kaya akan
nutrisi merupakan lahan yang sangat baik untuk pertumbuhan bakteri dan jamur.
Bila spora melakukan kontak dengan media akan segera membentuk koloni dan
tumbuh sangat cepat sehingga mengganggu pertumbuhan kultur.
Hasil pengamatan persentase kontaminasi terendah pada masing-masing
perlakuan sebesar 0 % terdapat pada perlakuan BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K
200 ml/l; BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/l dan perlakuan BAP 2,5
mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l, sehigga eksplan yang tidak terkontaminasi
kemungkinan besar apat berkembang dan berorganogensis mencajadi bakal organ
baru dan membentuk individu baru.
B. Persentase browning
Pencoklatan atau browning merupakan suatu karakter munculnya warna
coklat atau hitam yang mengakibatkan tidak terjadinya pertumbuhan dan
perkembangan eksplan (Santoso dan Nursandi 2003). Peristiwa ini dapat terjadi
pada sistem biologis tanaman sebagai respon terhadap pengaruh fisik atau
biokimia seperti pengupasan, memar, pemotongan, serangan penyakit dan kondisi
yang tidak normal. Respon yang terjadi pada umumnya adalah pembentukan
senyawa golongan fenol oleh tanaman. Senyawa fenolik sering terkumpul sekitar
27
jaringan tumbuhan yang luka atau rusak. Dalam tumbuhan senyawa fenol dapat
menghambat pembelahan sel, pemanjangan sel, perkembangan jaringan dan organ
(Prawiranata dkk 1995). Menurut Denish (2007) Apabila pencoklatan dibiarkan
terus menerus maka penyerapan unsur hara oleh eksplan akan terhambat, sehingga
pertumbuhan eksplan juga terhambat, bahkan dapat menyebabkan kematian pada
eksplan akibat terserapnya senyawa fenolik yang terakumulasi pada media oleh
tanaman kultur.
Hasil pengamatan persentase browning menunjukan bahwa terjadinya
pencoklatan pada eksplan pada minggu ke 2 stelah inokulasi sebesr 50 % pada
perlakuan BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/l dan BAP 1,0 mg/l + NAA
0,2 mg/l + K 200 ml/l, besarnya persentase ekspan browning bisa terjadi
disebabkan oleh meningkatnya produksi senyawa fenol yang diikuti oleh aktivitas
oksidasi sehingga akibat proses teroksidasinya senyawa fenol menyebabkan
terjadinya pencoklatan pada eksplan , pada umumnya eksplan yang mengalami
pencolatan awalnya berwarna hijau ketuaan, setelah mengalami pencokalatan
eksplan berubah menjadi kecoklat-coklatan dan menjadi hitam, selain itu sebagian
besar eksplan mengalami kematian akibat pencoklatan, kematian pada eksplan
diakibatkan oleh senyawa fenol yang dikeluarkan oleh eksplan bersifat toksik.
Newton (2004) mengungkapkan bahwa pencoklatan jaringan sangat menurunkan
regenerasi secara in vitro dari kultur kalus pada beberapa tanaman berkayu,
khususnya regenerasi tanaman melalui jalur organogenesis sedangkan pencoklatan
pada perlakuan BAP 2,0 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 400 ml/l mencapai 40%
sementara persentase eksplan browning yang terrendah pada perlakuakn BAP 1,5
28
mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 300 ml/l dan BAP 2,5 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 500
ml/l sebesar 30 %, dalam penelitian ini eksplan yang browning adalah eksplan yag
sudah membentuk kalus, terjadinya pencoklatan pada eksplan terjadi akibat
terjadinya luka pada eksplan berkalus pada saat sub-kultur, karena saat sub kultur
kalus terlebih dahulu di pisahkan sehingga membentuk bagian kecil dengan rata-
rata berat kalus per botol kultur 0,5 gram. Sedangkan menurut (Lerch 1981)
pencoklatan jaringan terjadi karena aktivitas enzim oksidase yang mengandung
tembaga seperti polifenol oksidase dan tirosinase yang dilepaskan atau disintesis
dan tersedia pada kondisi oksidatif ketika jaringan dilukai.
(a) (b)
Gambar 3. (a) Eksplan browning, (b) Eksplan Recovery
Pencoklatan yang terjadi tidak selalu mengakibatkan kematian pada
tanaman. Beberapa eksplan ditemukan masih dapat bertahan setelah mengalami
pencoklatan, hal ini dibuktikan pada gambar (3.b) dari beberapa eksplan disetiap
perlakuan yang terdapat pada botol kultur hanya satu yang terserang pencoklatan
dan tidak mempengaruhi pertumbuhan kedua tanaman lainnya. Pencoklatan yang
terjadi hanya menghambat pembelahan sel, perkembangan sel, dan perkembangan
29
jaringan dan organ. Hasil pengamatan pada setiap perlakuan mengalami
penyembuhan kembali dari browning yaitu BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K
100 ml/l sebesar 40 % dan BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/l terjadi
penyembuhan kembali (recovery) sebesar 40 % dari eksplan yang browning,
sedangkan pada perlakuan BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/l dan BAP
2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l terdapat 30 % mengalami penyembuhan
kembali dari keseluruhan eksplan yang mengalami pencoklatan (browning).
Menurut Widayanto (2004) perubahan warna kalus menjadi coklat muda,
coklat atau coklat tua dapat disebabkan karena kalus sudah tidak lagi mengalami
pembengkakan. Kalus yang terus membelah tetap berwarna putih meskipun
terdapat pula bagian lain yang berwarna coklat muda, sedangkan kalus yang
ukurannya tetap pada akhir pengamatan akan berwarna coklat muda hingga coklat.
Andriyani (2005) mengungkapkan bahwa recovery terjadi karena eksplan telah
mampu beradaptasi dengan medium tumbuh dan ZPT yang cukup tinggi. Hal
tersebut didukung penelitian Andriyani (2005) yang terjadi recovery sebesar 21,67
% pada kalus biji manggis. Semenara pada perlakuan BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4
mg/l + K 400 ml/l dari 40 % eksplan yang browning, 30 % eksplan mengalami
penyembuhan kembali atau recovery (Gambar 2.a), 10 % dari eksplan yang
mengalami pencoklatan tidak mengalami penyembuhan kembali hal ini
disebabkan oleh kandungan senyawa fenol yang dikeluarkan eksplan
mengakibatkan kematian. Yunita (2003) mengungkapkan bahwa senyawa rfenol
bersifat toksis, menghambat pertumbuhan eksplan atau bahkan dapat mematikan
jaringan eksplan.
30
C. Persentase Eksplan Hidup
Hasil pengamatan terhadap persentase eksplan hidup kalus jati emas,
setelah dilakukan pengamatan selama 8 minggu menunjukan bahwa secara
interaksi penggunaan berbagai konsentrasi BAP dan NAA dengan penambahan air
rebusan kentang (solanum tuberosum L ) memberikan pengaruh yang nyata
terhadap persentase eksplan hidup, didukung dengan hasil penelitian Hadi (2013)
dengan penambahan air ebusan kentang dapat memacu pertumbuhan panjang akar
pisang ambon sebesar 3,683 cm.
Hasil penelitian dengan penambahan air rebusan kentan menunjukan pada
masing-masing perlakuan bahwa BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/l
eksplan hidup sebesar 80 % sedangkan pada perlakuan BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2
mg/l + K 200 ml/l persentase eksplan hidup mencapai 100 %, besarnya persentase
eksplan hidup diduga bahwa eksplan dari kalus jati emas mampu merespon nutrisi
yang terdapat pada media, sementara persentase eksplan hidup pada perlakuan
BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/l sebesar 90 % dan BAP 2,0 mg/l +
NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/l sebesar 90 %, pertumbuhan dalam suatu kultur
persentase eksplan hidup sangat menentukan keberhasilan suatu penelitian,
terjadinya penurunan jumlah eksplan yang hidup dikarenakan terjadinya
kontaminasi dan browning pada eksplan. Sementara persentase eksplan hidup
terbesar yaitu pada perlakuan BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l sebesar
100 %. Abidin (1993) menyatakan bahwa kemampuan hidup eksplan pada kultur
in vitro sangat tergantung dari eksplan itu sendiri, jenis dan komposisi media serta
kandungan zat pengatur tumbuh yang diberikan. Jenis dan komposisi media
31
sangat mempengaruhi besarnya ketersediaan zat makanan bagi eksplan sehingga
secara langsung dapat mempengaruhi besarnya daya tahan eksplan untuk hidup
pada media tersebut.
Eksplan yang hidup dicirikan dengan berkembangnya kalus secara terus
menrus, dalam penelitian ini pemberian Auksin yang cukup tinggi bertujuan untuk
memecu pertumbuhan tunas dari kalus Jati Emas, terbentuknya kalus merupakan
akibat dari perlakuan zat pengatur tumbuh pada medium kultur sehingga dapat
mendorong pertumbuhan kearah yang sesuai tergantung hormon yang diberikan
(Zulkarnain, 2009), selain itu penambahan zat organik kompleks juga dapat
mendorong pertumbuhan eksplan karena dalam kandungan zat organi kompleks
diperlukan oleh eksplan untuk proses metabolisme sehingga, kalus pada eksplan
dapat berkembang dan berdiferensiasi menjadi tunas dan akar tergantung dari zat
pengatur tumbuh yang ditambahkan. Didukung oleh penelituian Gunawan (1987)
menggunakan ekstrak kentang untuk kultur anthera padi, dengan hasil terbaik pada
konsentrasi 200 g/l.
Tingginya persentase hidup dalam penelitian ini menunjukkan keberhasilan
sterilisasi alat dan bahan penelitian, sehingga eksplan menjadi steril. Selain itu,
kebrhasilan persentase hidup juga dapat di pengaruhi oleh pemberian ZPT dan zat
organik kompleks yang di tambahkan kedalam media tumbuh mempunyai peran
yang sangat penting. Dari hasil pengamatan diatas, dapat dilihat bahwa pemberian
berbagai konsentrasi BAP (benzyl amino purin) dan Penambahan air rebusan
kentang dapat mempengaruhi persentase tumbuh eksplan Jati Emas, karena BAP
merupakan hormon gologan sitokinin yang paling aktif dalam proses pembelahan
32
sel dan memacu pertumbuhan tunas sehingga mempengaruhi persentase hidup
eksplan.
D. Pripordia Tunas Pada Kalus Jati Emas
Saat muncul tunas merupakan salah satu faktor penting di dalam
perbanyakan tanaman dengan metode kultur jaringan. Semakin cepat muncul tunas
maka semakin cepat dihasilkan bahan untuk perbanyakan tanaman. Tunas yang
terbentuk merupakan hasil diferensiasi dari eksplan. Kalus-kalus yang terbentuk
pada bagian potongan pada eksplan selama proses inkubasi. Semua eksplan
mempunyai kemampuan membentuk kalus, tapi tidak semua kalus berkembang
membentuk tunas. Menurut Santoso dan Nursandi (2003) peran zat pengatur
tumbuh sitokinin dalam kegiatan kultur jaringan dapat menstimulir terjadinya
pembelahan sel dan mendorong pembentukan klorofil pada kalus sehingga Kalus
terdorong untuk pembentukan organ (organogenesis) sehingga akan menghasilkan
atau membentuk primordial-primordia tunas.
Kemunculan tunas merupakan salah faktor penting dalam melakukan
multiplikasi tanaman secara in vitro, dengan tingkat kemunculan tunas yang cepat
maka tingkat multiplikasi tanaman akan semakin cepat pula. Kemunculan tunas
yang cepat akan berpengaruh pada jumlah tunas yang dihasilkan meskipun tidak
pada semua jenis tanaman. Pengamatan terhadap saat kemunculan tunas adalah
untuk mengetahui pengaruh efektifan BAP dan NAA yang dilkombinasikan
dengan air rebusan kentang secara in vitro. Pengaruh kombinasi Air rebusan
kentang + BAP dan NAA terhadap saat kemunculan tunas disajikan pada Tabel 2.
33
Tabel 2.Pengaruh pemberian Air rebusan kentang + BAP dan NAA terhadap Primordia tunas 7-MST dan 8-MST.
PerlakuanPrimordia Tunas
7 - MST 8 - MST
BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/l. 15.857 (b) 18.857 (b)
BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/l. 16.500 (b) 21.800 (b)
BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/l. 36.111 (a) 40.667 (a)
BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/l. 21.222 (b) 25.333 (b)
BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l. 18.900 (b) 22.900 (b)
Keterangan:Angka yang diikuti huruf sama dalam satu kolom menunjukkan tidak ada beda nyata berdasarkan uji F taraf α = 5 %K = Air rebusan kentang
Hasil pengamatan minggu ke-1-6 primordia tunas belum terlihat muncul
pada semua perlakuan. Dari hasil pengamatan, dapat diamati primordia tunas
mulai minggu ke-7 (MST), pemberian BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100
ml/l; BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/l; BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l
+ K 400 ml/l dan BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l pembentukan tunas
menunjukan adanya beda nyata antar perlakuan pada pembentukan tunas. Hal ini
didukung oleh George dan Sherrington (1984) menyatakan bahwa kemampuan
suatu eksplan untuk berdiferensisasi tidak hanya bergantung pada penambahan
auksin pada media pertumbuhan tetapi bergantung pula pada interaksi antara
auksin endogen dan eksogen. Tetapi terlihat bahwa diferensiasi pembentukan
tunas pada kalus Jati emas pada perlakuan BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l yaitu
pada umur 7 minggu menunjukan adanya beda nyata antar perlakuan. Pada
konsentrasi BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l+ K 300 ml/l menunjukan respon yang
34
terbaik dari semua perlakuan dengan rata-rata pertumbuhan mencapai 40.66 8-
MST (Tabel 2). Sementara untuk pertumbuhan primordia tunas dengan terlihat
jelas adanya benjolan-benjolan pada eksplan dengan cirri-ciri eksplan berwarna
kehijauan. Yunus (2007) mengungkapkan bahwa awal terbentuknya tunas pada
kultur jaringan dipengaruhi oleh hormon sitokinin, pertumbuhan tunas sebagai
akibat respon terhadap ZPT, sedangkan pernyataan Wattimena (1992) peran
fisiologis sitokinin adalah mendorong pembelahan sel , morfogenesis, pertunasan
dan pembentukan kroloplas. Didukung hasil penelitian sari (2006) yang
mengungkapkan bahwa penambahan BAP 1,5 mg/l dapat mendorong
terbentuknya tunas terbanyak pada tanaman tanaman Zodia (Evodia suavelones
sceff) .
Menurut Triatminingsih et al. (2003), pembentukan tunas pada kultur
dipengaruhi oleh adanya konsentrasi BAP dan NAA yang optimum. Diduga
penambahan Kombinasi BAP+NAA dan Air rebusan kentang dapat mendorong
pertumbuhan eksplan dalam kultur. Didukung oleh penelitian Hadi (2013), dengan
penambahan Air rebusan kentang pada media dapat memacu pertumbuhan akar
pisang ambon yaitu 4,333 cm. Sementara hasil penelitian Puspitaningtyas (2006)
dengan penambahan zat organik kompleks pada media menujukan interaksi antara
jenis media organik dan konsentrasi NAA berpengaruh nyata terhadap
pertumbuhan eksplan anggrek hitam (Coelogyne pandurata Lindl.) baik tinggi
eksplan, jumlah daun, jumlah tunas, jumlah akar dan panjang akar. Respon
eksplan terhadap pemberian zat organi kompeks dengan kombinasi BAP dan NAA
dapat dilihat pada (gambar .4).
35
A B C D E0
50100150200250300350400450
Primordia Tunas
7- MST
8- MST
Perlakuan
Gambar 4. Histogram pengaruh kombinasi BAP + NAA dan Air rebusan kentang
Hasil percobaan menunjukkan bahwa adanya berpengaruh nyata terhadap
pembentukan tunas pada kalus Jati pada 8 MST (Tabel 2). Hasil yang diperoleh
menunjukkan bahwa primordia tunas dari kalus Jati Emas pada berbagai
konsentrasi BAP + NAA dan Air rebusan kentang dalam medium WPM
menunjukan adanya beda nyata antar perlakuan (Tabel 2). Pada umur 8 minggu
tingkat konsentrasi yang diberikan berpengaruh nyata terhadap jumlah eksplan
pembentukan tunas. Perlakuan BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 + K 300 ml/l
memberikan jumlah pembentukan tunas tertinggi dibandingkan dengan perlakuan
lainnya dapat dilihat respon pemberian zat organik kompeks dengan kombinasi
BAP dan NAA dengan rata-rata waktu primordia tunas Jati Emas mencapai 40.667
8-MST. (Tabel 2). George dan Sherrington (1984) mengemukakan bahwa auksin
pada kadar yang relatif tinggi dideferensiasi cenderung membentuk primordia
akar, sebaliknya pemberian sitokinin yang relatif tinggi dideferensiasi kalus ke
arah pembentukan primordia tunas. Pengamatan pada minggu ke-8 lebih terlihat
36
jelas pada primordia tunas dengan meningkatnya jumlah primordia tunas pada
eksplan, saat primordia tunas ditandai dengan adanya tonjolan berwarna kehijauan
pada eksplan. Jadi, tunas yang pertama kali muncul pada eksplan merupakan hasil
dari diferensiasi kalus yang terus membelah dan berkembang sehingga dengan
adanya hormon auksin yang lebih tinggi dapat memecu dalam pembentukan
primordia tunas pada eksplan Jati emas.
Benzile Amino Purine (BAP) merupakan salah satu zat pengatur tumbuh
yang banyak digunakan untuk memacu pembentukan tunas dengan daya aktivitas
yang kuat, mendorong proses pembelahan sel (George dan Sherrington, 1984). Hal
ini diduga bahwa pemberian zat pengatur tumbuh (ZPT) yang seimbang dengan
penambahan zat organik kompleks dapat memacu pembentukan tunas pada kalus
jati emas. Sedangkan pemberian BAP dan NAA yang terlalu tinggi tidak
memberikan respon secara nyata terhaap pembentukan tunas, dapat dilihat pada
(tabel 2) dengan pemberian BAP 2,5 mg/l tidak menunjukan adanya respon yang
lebih tinggi untuk primordia tunas Jati emas. Hal ini kemungkinan telah adanya
sitokinin endogen pada eksplan tanaman dan dungannya sudah cukup untuk
memacu pembentukan tunas, sehingga tidak memerlukan zat pengatur tumbuh
dengan taraf konsentrasi yang lebih tinggi. Keadaan tersebut sesuai dengan yang
diungkapkan oleh George dan Sherrington (1984) bahwa sitokinin alami yang
terkandung di dalam tubuh eksplan dapat merangsang eksplan untuk membentuk
tunas. Selain itu dimungkinkan juga karena perbandingan antara auksin dengan
sitokinin yang rendah, yakni sitokinin lebih tinggi daripada auksin, sehingga
37
terjadi ketidak seimbangan pada eksplan dan menyebabkan pembentukan tunas
menjadi terhambat (Gambar 5).
(a) (b) (c)
(d) (e)
Gambar 5. Primordia tunas Jati emas
Keterangan: a = BAP 0,5 mg/l + NAA 0,1 mg/l + K 100 ml/l.b = BAP 1,0 mg/l + NAA 0,2 mg/l + K 200 ml/l.c = BAP 1,5 mg/l + NAA 0,3 mg/l + K 300 ml/l.d = BAP 2,0 mg/l + NAA 0,4 mg/l + K 400 ml/l.e = BAP 2,5 mg/l + NAA 0,5 mg/l + K 500 ml/l
Penambahan konsentrasi BAP lebih dari 2 mg/l dan NAA 0,5 mg/l ke
dalam media mengakibatkan terjadi penurunan terhadap primordia tunas. Menurut
Tripepi (1997) hal ini kemungkinan berhubungan dengan kemampuan sel dalam
mencapai batas optimum konsentrasi zat pengatur tumbuh untuk memacu
38
diferensiasi tunas sehingga eksplan mempunyai batas fisiologi untuk dapat
berdiferensiasi. Diduga eksplan Jati sudah mengandung auksin dan sitokinin
endogen yang cukup untuk pertumbuhan tunas, hal ini terbukti dengan perlakuan
sengan penambahan ZPT yang seimbang dapat memacu pembentukan tunas secara
signifikan, tunas dapat berkembang dengan baik.
Hasil penelitian Salisbury dan Ross (1995) menunjukkan bahwa pada
konsentrasi tinggi, auksin dapat memacu terbentuknya senyawa etilen. Etilen dapat
menyebabkan pemelaran sel ke arah samping, sel lebih terpacu sehingga dinding
sel lebih tebal. Tebalnya dinding sel menyebabkan pertumbuhan tunas pada
beberapa perlakuan dengan perbandingan auksin dengan sitokinin yang besar
menjadi terhambat. Jika perbandingan auksin dengan sitokinin kecil maka tunas
lebih cepat terbentuk. Tunas terbentuk karena aktivitas pembelahan sel oleh
sitokinin. Perbedaan jumlah tunas yang terbentuk pada tiap perlakuan
dipengaruhi oleh konsentrasi yang berbeda dari BAP dan NAA. Hal ini sesuai
dengan pendapat Wattimena et al., (1992) bahwa kecepatan sel membelah diri
dapat dipengaruhi oleh adanya kombinasi zat pengatur tumbuh tertentu dalam
konsentrasi tertentu. Satu molekul zat pengatur tumbuh saja dapat mempengaruhi
kerja enzim, maka beberapa molekul zat pengatur tumbuh dapat menyebabkan
perubahan-perubahan fisiologis tanaman, karena enzim memegang peranan
penting dalam setiap proses metabolisme (Wattimena, 1988).
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Pemberian Air Rebusan Kentang dengan kombinasi BAP dan NAA
berpengaruh terhadap parameter Primordia tunas dengan dicirikan
terbentuknya tonjolan-tonjolan berwarna kehijauan pada kalus.
2. Konsentrasi BAP 1,2 mg/l + NAA 0,3 mg/l dan 300 ml/l Air rebusan
kentang yang terbaik dalam menginduksi tunas ditunjukan dengan
primordia tunas mencapai 40.66 (8- MST).
3. Kombinasi BAP 0,1-2.5 mg/l + NAA 0,1 – 0,5 mg/l dan Air Rebusan
Kentang 100 – 500 ml/l, belum mampu menumbuhkan tunas secara
sempurna.
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai penambahan media
untuk mengurang tingkat Browning akibat senyawa fenol yang relatif
tinggi pada kalus Jati emas.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang tingkatan konsentrasi zat
pengatur tumbuh untuk meumbuhkan tunas pada kalus Jati Emas.
39
DAFTAR PUSTAKA
Abidin, Z. 1993. Dasar-dasar pengetahuan tentang zat pengatur tumbuh. Angkasa. Bandung. 85 hal.
Bidwell, R.G.S., 1979. Plant Physiology. Mac Millan Publishing Co. Inc., New York.
BPS Jateng. 2014. Volume Penjualan Dalam Negeri Beberapa Macam Produksi Hasil Hutan di Jawa Tengah Tahun 2009 - Maret 2014. http://jateng.bps.go.id/webbeta/frontend/linkTabelStatis/view/id/1026 . diakses 14 April 2015.
Daru, M. 1994. Budidaya Tanaman Jati Emas. Kanisus,Yogykarta.Hal 24-30.
Denish A. 2007. Percobaan Perbanyakan Vegetatif Kemaitan (Lunasia amara Blanco.) melalui Kultur Jaringan [skripsi]. Bogor: Fakultas Kehutanan. Institut Pertanian Bogor.
Dixon, R.A. 1985. Plant Cell Culture A Practical Approach. Washington DC: Department of Biochemistry, Royal Holloway College. IRL Press Oxford.
Ermayanti, T.M. 1997. Mengenal dan Mengatasi Kontaminan Pada Biak Jaring Tanaman. Warta Biotek tahun XI No.3.
Gamborg, O. L. & Shyluk, J. P., 1981, Nutrition, media and characteristics of plant cell and tissue cultures, 21-44, dalam Thorpe T.A., Plant Tissue Culture: Methods and Applications in Agriculture, Academic Press, New York, London, Toronto, Sydney
George, E. F. dan P. D. Sherrington. 1984. Plant Propagation by Tissue Culture. Exegetics Limited, England.
Gunawan, L.W. 1987. Teknik Kultur Jaringan. Laboratorium Bogor: Kultur Jaringan Tanaman, Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB,.
Hadi, S. 2013. Pengaruh Penambahan Air Rebusan kentang (Solanum Tuberosum L) Terhadap pertumbuhan Pisang Ambon ( Musa acuminate AAA) dalam teknik kultur in vitro. Program Serjana Pendidikan Biologi. Semarang.
40
41
Hendaryono, D. P. S dan A. Wijayani. 1994. Teknik Kultur Jaringan, Pengenalan dan Petunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif-Modern. Kanisius. Yogyakarta.
Imanudin,dkk. 2015. Efektivitas Air Rebusan Kentang (Solanum tuberosum L.) Untuk Konservasi Tanaman Jati (Tectona grandis) Secara In Vitro.
Lerch K. 1981. Tyrosinase kinetics: A semi-quantitative model of the mechanism of oxidation of monohydric and dihydric phenolic substrates. In Sigel, H. (Ed.). Metal Ions in Biology System. 13 Marcel Dekker Inc., New York, Basel. p. 143-186.
Lina, dkk.2013.Pengaruh BAP dan Kinetin pada Media MS terhadap Pertumbuhan Eksplan Ujung Apikal Tanaman Jati Secara In Vitro. LenteraBio Vol. 2(1):57-61.
Markal, A. Isda,M.N, Fatonah S. 2015. Perbanyakan Anggrek Grammatophyllum scriptum (Lindl.) Bl. Melalui Induksi Tunas Secara In Vitro Dengan Penambahan BAP dan NAA. JOM FMIPA Vol 2 (1):108- 114.
Miryam A, Suliansyah I, Djamaran A. 2008. Multiplikasi jeruk kacang (Citrus
nobilis L.) pada beberapa konsentrasi NAA dan BAP pada media WPM secara in vitro. Jurnal Agronomi Indonesia 1:97-104.
Mohammad ,W.D.2014. Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh BAP dan NAA Terhadap Pertumbuhan Ulin (Eusideroxylon zwageri T. et B.) Secara In Vitr.Depareen Silvikultur fakultas Kehutanan.IPB.
Molnar, Z., E. Virag dan V. Ordog. 2011. Natural substances in tissue culture media of higher plants. Acta Biologica Szegediensis 55(1):123-127. http://www.sci.u-szeged.hu/ABS .
Newton, R.J., W. Tang, L.C. Harris, and V. Outhavong. 2004b. Antioxidants enhance in vitro plant regeneration by inhibiting the accumulation of peroxidase in Virginia pine (Pinus virginiana Mill.). Plant Cell Rep. 22(12):871877.
Puspitanintyas, D,M. 2006. Pengaruh Bahan Organik dan NAA terhadap Pertumbuhan Anggrek Hitam (Coelogyne pandurata Lindl.) dalam Kultur in Vitro. Biodiversitas.7 (3):344348.
Prawiranata W, Said H, Pin T. 1995. Dasar-dasar Fisiologi Tumbuhan. Jilid 2. Departemen Botani Fakultas Matematika dan IPA IPB: Bogor
42
Qosim. 2006. Studi iradiasi sinar gamma pada kultur kalus nodular manggis untuk meningkatkan keragaman genetik dan morfologi regeneran. [disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Rahayu, M.S. 1993. Pengaruh media, auksin, dan sitokinin terhadap perbanyakan, perbanyakan tunas jeruk Troyer Citrange secara in vitro. Dalam Seminar Program Pascasarjana IPB. Bogor. 74 hal.
Sari YP. 2016. Pengaruh NAA dan BAP terhadap inisisasi tunas pada eksplan nodus tanaman zodia (Evodia suavelones sceff) secara invitro. Bioprospek, 6 (1): 1-11.
Salisbury,F.B. dan C.W. Ross. 1995. Fisiologi Tumbuhan Jilid Tiga Perkembangan Tumbuha dan Fisiologi Lingkungan .Bandung .ITB.
Santoso U, F Nursandi. 2003. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas Muhammadiyah Malang: Malang.
Santoso dan Nursandi. 2004. Kultur Jaringan Tanaman. Malang: UMM press.
Sutter, E.G., 1996. General laboratory requirements, media and sterilization methods. In: Trigiano, R.N., Gray, D.J. (Eds.), Plant Tissue Culture Concepts and Laboratory Exercises. CRC Press, New York, pp. 11 - 25.
Triatminingsih, R., Karsinah, H., Subakti, L., Fitrianingsih. 2003. Kultur in Vitro Biji Duku. J. Hort. 13 (2) : 77-81.
Tripod.com 2013. Prospek berkebun jati Emas. http://jatiemas. tripod. com/id21. htm. Diakses 6 Mei 2015.
Tripepi, R.R. 1997. Adventitious Shoot Regeneration. In R.I. Gereve (eds.) Biotechnology of ornaments plants. USA, CAB. International. p 112 – 121.
Umi. 2008. Ekstrak Pisang Sebagai Suplement Media MS salam Media Kultur Tunas Pisang Rajabulu (Musa Pradical L . AAB Group) in vitro.Program Studi Hortikultura Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor. Bogor.Hal.1 - 35.
Wattimena, G.A. 1992. Zat pengatur tumbuh tanaman. PAU Bioteknologi. IPB. Bogor. 247 hal.
Wetter, L.R. dan F. Constabel. 1991. Metode Kultur Jaringan Tanaman. ITB Press. Bandung.
43
Wetherel, D. F. 1982. Pengantar Propagasi Tanaman secara In vitro. Avery Publishing Group, Inc. New Jersey.
Wetter, L. R. dan F. Constabel. 1991. Metode Kultur Jaringan Tanaman. Edisi Kedua. ITB Press. Bandung.
Widayanto, W. 2004. Pengaruh 2,4-D dan Kinetin terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Eksplan serta Kandungan Metabolit Sekunder Kalus Jati Belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) secara In Vitro. Skripsi S1. Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret. Surakarta
Yunus, Ahmad. 2007. Pengaru IAA dan kinetin terhadap pertumbuhan eksplan bawang merah (Allium ascalonicioum l.) secara in vitro. Jurnal Akta Agrosia edisi khusus 1:53-58.
Yasodha, R., R. Sumathi dan K. Gurumurthi. 2005. Improved Micropropagation Methods for Teak. Journal of Tropical Forest Science 17(1): 63-75.
Yusnita. 2004. Kultur Jaringan. Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisisen. Cetakan Ketiga. Agro Media Pustaka. Jakarta.
Yuwono, T. 2006. Bioteknologi Pertanian. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Yusnita 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman secara Efisien. Agromedia Pustaka. Jakarta.
Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Jakarta: Bumi Aksara. 272 h
K1.5 K4.5 K1.3 K3.3 K3.5
K4.4 K2.3 K4.3 K3.2 K5.2
K2.1 K5.3 K3.1 K4.1 K5.4
K1.2 K4.2 K5.5 K3.4 K5.1
K1.4 K2.5 K2.2 K1.1 K2.4
K1.7 K2.9 K4.7 K3.6 K5.9
K4.6 K5.10 K5.7 K3.9 K4.8
K3.8 K2.7 K1.6 K5.8 K1.10
K1.8 K3.7 K4.10 K2.6 K4.7
K3.10 K5.6 K2.8 K4.9 K2.10
LAMPIRAN
Lampiran 1. Layout Penelitian
Keterangan:K1 = Perlakuan 100 ml/l Air rebusan kentangK2 = Perlakuan 200 ml/l Air rebusan kentangK3 = Perlakuan 300 ml/l Air rebusan kentangK4 = Perlakuan 500 ml/l Air rebusan kentangK5 = Perlakuan 500 ml/l Air rebusan kentang
44
45
Lampiran 2. Komposisi Media
a. Komposisi larutan stok media WPM
KOMPOSISI (Mg/l) (g/l) 5x Pelarut aquadest
KonsentrasiUnsur Makro
NH4NO3 400 0.4 2 100 ml 20 ml/lCaCl2 2H2O 96 0.096 0.48Ca(NO3)24H2O 556 0.556 2.78KH2 PO4 170 0.17 0.85MgSO47H2O 370 0.37 1.78Unsur MikroMnSO4.4H2O 29.4 0.0294 0.147ZnSO4.7H2O 8.6 0.0086 0.043H3BO3 6.2 0.0062 0.031CuSO4 5H2O 0.25 0.00025 0.00125NaMoO4.2H2O 0.25 0.00025 0.00125FeSO4 7H2O 27.8 0.0278 0.139Na2 EDTA 37.3 0.0373VitaminTiamin HCl 0.1 0.0001 0.0005Piridoksin HCl 0.5 0.0005 0.0025Asam nicotinat 0.5 0.0005 0.0025Glisin 2 0.002 0.01Mio-inositol 100 0.1 0.5Sukrosa 30 g/lAgar 3 g/l
Keterangan:
Larutan stok dengan konsentrasi 20 ml/l
b. Komposisi media WPM+ZPT+Air Rebusan kentang
Stok Perlkuan ZPT untuk 300 ml0.5 mg/l 1.0 mg/l 1.5 mg/l 2.0 mg/l 2.5 mg/l
BAP 1.5 ml 3 ml 4.5 ml 6 ml 7.5 ml
Stok Perlakuan ZPT untuk 300 ml0.1 mg/l 0.2 mg/l 0.3 mg/l 0.4 mg/l 0.5 mg/l
NAA 0.3 ml 0.6 ml 0,9 ml 1.2 ml 1.5 ml
46
Perlakuan ZPT untuk 300 ml100 ml/l 200 ml/l 300 ml/l 400 ml/l 500 ml/l
Kentang 30 ml 60 ml 90 ml 120 ml 150 ml
Keterangan:
300 ml Jumlah konsentrasi berdasarkan volume pelarut yang digunakan.
47
Lampiran 3. Alur pembuatan media WPM 0
Ambil larutan stok Makro 40 ml/l + stok Mikro 10 ml/l
Masukkan kedalam erlenmeyer dan tambahkan sukrosa 30 g/l
Gojog hingga larut atau homogen
Cek pH hingga 6
Tambahkan agr 3 g/l
Tambahkan aquadest hingga volume 1 L
Panaskan menggunakan micowave atau kompor hingga mendidih
Tuangkan dalam botol kultur 20 ml per-botol
Tutup dengan plasti dan diikat karet
Sterilisasi dengan autoklaf 1 atm 1210C selama 15-20 menit
Simpan dalam ruang inkubasi
48
Lampiran 4. Alur Pembuatan Media Perlakuan
Kupas Kentang sebanyak 1 kg dipotong-potong menjadi bagian kecil Rebus kentang dengan penambahan aquadest sebanyak 1 Liter (perbandingan
1:1), kemudian dinginkan.
Stok Makro 40 ml/l + Mikro 10 ml/l + vitamin 10 ml/l + BAP+NAA danAir rebusn kentang sesuai dengan masing-masing perlakuan
Masukkan kedalam erlenmeyer
Tambahkan 30 g sukrosa dan di gojog hingga larut
Masukkan kedalam erlenmeyer beri aquadest secukupnya Cek pH mencapai 6
Tambahkan agar 3 g/l, berikan aquadest sesuai dengan volume yang diinginkan Panaskan pada microwave atau kopor
Masukkan kedalam botol kultur sebanyak 20 ml, dibungkus plastik dan diikat karet
Sterilisasi dengan autoklaf 1 atm 1210C selama 15-20 menitSimpan di rak inkubasi
49
Lampiran 5. Hasil Analisis Anova
1. Primordia tunas 7 (Tujuh) Minggu Setelah Tanam (MST)
Sumbrer ragam db
Jumlah Kuadrat
Kuadrat tengah F hitung F tabel
Perlakuan 4 245.849.84161.462.460 2.99 0.0299
Galat 40 822.270.15920.556.754
Galat Total 441.068.120.000
2. Primordia tunas 8 (Delapan) Minggu Setelah Tanam (MST)
Sumbrer ragam db
Jumlah Kuadrat
Kuadrat tengah F hitung F tabel
Perlakuan 4 256.944.28664.236.071 3.23 0.0218
Galat 40 795.935.71419.898.393
Galat Total 441.052.880.000
Keterangan:
ns = Perlakuan tidak berpengaruh nyata secara signifikan terhadap primordia kalus Jati Emas pad mnggu ke- 8 dengan traf nyata 5%.
s = Perlakuan berpengaruh nyata secara signifikan terhadap primordia kalus Jati Emas pad mnggu ke- 8 dengan traf nyata 5%.
50
Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian
Sterilisasi Alat dan bahan Persiapan Air rebusan kentang
Persiapan ZPT dan air rebusan Kentang Pembuatan media WPM+Air rebusan kentang
Inokulasi Inkubasi