5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

1/14

Laporan Praktikum Hari/Tanggal : Jumat/ 29 November 2013

Struktur an !ung"i #iomolekul $aktu : 0%&00'11&00 $(#

PJP : (na Set)a*ati+ S&TP+ ,&Si

-"i"ten : Syahrul Mustofa

-nie"ti .*i !auia

Salmi

ASAM NUKLEAT

Penentuan Konsentrasi RNA dan DNA dalam Homogenat

Hati Tikus

elompok #

Lulu Atul !itriyah "#$%%&&''

ma Lina*ati 4%110010

.*i Nugraa !& 4%110056

-mellia 4%1100%7

DEPARTEMEN ()*K)M)A

!AKULTAS MATEMAT)KA DAN )LMU PEN"ETAHUAN ALAM

)NST)TUT PERTAN)AN (*"*R

(*"*R

+&%'

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

2/14

Pendahuluan

-"am nukleat aala makromolekul biokimia )ang komplek"+ berbobot

molekul tinggi+ an ter"u"un ata" rantai nukleotia )ang menganung in8orma"i

genetik& -"am nukleat )ang paling umum aala a"am eok"iribonukleat .N-

an a"am ribonukleat;N-& -"am nukleat itemukan paa "emua "eliup an

viru"& -"am nukleat beraa i alam inti nukleu" "elNgili 2009& -"am nukleat

merupakanbiopolimerengan monomerpen)u"unn)a aala nukleotia& Setiap

nukleotia teriri ata" tiga komponen )aitu "ebua ba"a nitrogen+ gulapento"a+

an gugu"8o"8at& #a"a nitrogen bera"al ari kolompok purin an pirimiin& Purin

utama a"am nukleat aala aenin an guanin+ "eangkan pirimiinn)a aala

"ito"in+ timin+ an ura"il& Nukleotia merupakan nukleo"ia )ang gugu" gula paa

po"i"i 5'n)a mengikat gugu" 8o"8at engan ikatan e"ter& Nukleo"ia teriri ata"

pento"a eok"iribo"a atau ribo"a )ang mengikat "uatu ba"a erivat purin atau

pirimiin melalui ikatan gliko"ia& Nukleo"ia merupakan nukleotia )ang tiak

ter8o"8orila"i tiak berikatan engan 8o"8at Ngili 2009&

-"am nukleat alam "el aa ua

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

3/14

t;N-& ,a"ing'ma"ing teriri ata" "atu untai ribonukleotia an mempun)ai

molekul urutan nukleotia "erta 8ung"i biologi" )ang ka" Poe

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

4/14

praktikum )aitu paa ari Jumat+ tanggal 22 an 29 November 2013 pukul 0%&00'

11&00 $(#&

#eberapa alat an baan igunakan alam praktikum ini& -lat'alat )ang

igunakan alam praktikum aala bak e"+ gela" piala+ tabung "entri8u"+

"entri8ugator+ pipet ,or+ bulb+ penanga" air+stopwatch+ lemari peningin+ pipet

tete"+ vorteA+ tabung mikro8u"+ mikro8ugator an "pektro8otometer+ "eangkan

baan'baan )ang igunakan alam praktikum meliputi omogenat ati+ e" batu+

larutan H?l@0&7 ,+ larutan @H 0&3 ,+ larutan H?l@ 1&2 ,+ akuae"+ larutan

H?l@ 0&2 ,+ pereak"i or"inol+ larutan "tanar ;N- 125 Bg/mL alam T?- 10C+

pereak"i i8enilamin+ larutan T?- 10C+ an larutan "tanar 500 Bg/mL&

Penentuan konsentrasi RNA dalam homogenat hati,Seban)ak 2&5 mL

omogenat ati "api ipipet an ima"ukkan ke alam tabung "entri8u" )ang tela

iinginkan+ kemuian itambakan 2&5 mL larutan H?l@0&7 , ingin& Setela

iko=ok "ampai rata+ i"impan i alam bak beri"i e" batu "elama 10 menit lalu

i"entri8u" paa ke=epatan 5000 rpm "elama 10 menit& Supernatan )ang terbentuk

ibuang+ lalu pelet )ang terbentuk i"u"pen"ikan engan mL @H 0&3 ,

kemuian ima"ukkan ke alam penanga" air paa "uu 0 o? "elama 0 menit&

Selan

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

5/14

larutan "tanar ;N-+ 3 mL pereak"i or"inol+ lalu ipana"kan paa "uu 100 o?

"elama 20 menit an itambakan akuae" "eban)ak 3&5 mL& emuian

iinginkan i alam e" "ebentar+ lalu iukur ab"orban"in)a engan menggunakan

"pektro8otometer paa pan

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

6/14

nukleatn)a+ 2memi"akan a"am nukleat ari komponen "el )ang lain+ an

3pemurnian a"am nukleat& ("ola"i 8ragmen .N- atau ;N- "pe"i8ik ari genom

"uatu organi"me apat igunakan untuk menentukan "ekuen" ba"a an mengetaui

8ung"in)a& Taapan pertama )ang aru" ilakukan untuk mengi"ola"i .N- aala

engan meru"ak "el terlebi aulu& Peru"akan "el ter"ebut apat ilakukan

engan =ara mekanik )aitu iblener atau menggunakan baan kimia untuk

menegraa"i an melarutkan komponen ining "el& .N- akan terpi"a menE #intang 2010&

Homogenat ati igunakan alam per=obaan a"am nukleat ini karena "el

ati menganung berbagai ma=am organel+ terutama inti "el& (inti "el ban)ak

menganung a"am nukleat )ang akan igunakan alm per=obaan "eingga akan

lebi mua untuk menapatkan i"olatn)a& Selain itu+ ati mempun)ai 8ung"i

penting alam pro"e" metaboli"me tubu )aitu ati memiliki peranan alam

men"inte"i" protein& Paa organ ati+ "inte"i" proteinn)a tinggi "eingga tingkat

;N-n)a

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

7/14

ber8ung"i untuk pengenapan a"am nukleat )ang merupakan makromolekul alam

per=obaan&

Per=obaan penentuan kon"entra"i ;N- illakukan pula penambaan

reagen or"inol )ang bertu

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

8/14

4ambar 1 urva "tanar kon"entra"i ;N-

Tabel 2 on"entra"i ;N- ati a)am

Eolume "ampelmL

- terukur - terkorek"i

G;N- Bg/mL

Penggunaan kurva"tanar

Penggunaan "tanartunggal

0&2 0&1%6 0&1%5 &0070 76&02%00&3 0&276 0&275 &036 97&015

?onto peritungan paa "ampel 0&2 mL:

a& on"entra"i ;N- engan penggunaan kurva "tanar

) I a bA

- terkorek"iI a bA

0&1%5 I ' 10&751 5&111 A

A I 0&2003

!P I I 20

G;N- I A &!P

G;N- I 0&2003&20 I &0070 Bg/mL

G;N- rata'rata I Bg/mLI &020 Bg/mL

b& on"entra"i ;N- engan penggunaan "tanar tunggal

I

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

9/14

I

G"ampelI I 3&351 Bg/mL

G;N- I on"entra"i "ampel A !P

I 3&351 A 20

I 76&02%0 Bg/mL

G;N- rata'rata I Bg/mLI %1&5213 Bg/mL

#era"arkan per=obaan+ kaar ;N- iitung engan per"amaan kurva

"tanar ) I 5&111A ' 10&751 engan nilai ;K "ebe"ar 0&%5% "eingga iperole

kaar ;N- ati paa "ampel 2 an "ampel 3 berturut'turut )aitu &0070 Bg/mL

an &036 Bg/mL "erta G;N-rata'ratan)a aala &020 Bg/mL "eangkan

a"il peritungan engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&015

Bg/mL engan G;N-rata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& Ha"il kurva "tanar

menun

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

10/14

0&% 0&129 0&12% 100&00

1&0 0&167 0&165 125&00

?onto peritungan:E1 A ,1 I E2A ,2

0&2 mL A 250 Bg/mL I mL A ,2

,2 I

,2 I 12&50 Bg/mL

Tabel on"entra"i .N- ati a)am

Eolume "ampel

mL

-terukur -terkorek"i

G.N- Bg/mL

Penggunaan kurva"tanar

Penggunaan "tanartunggal

0&5 0&195 0&192 37%0 1030&0291&0 0&323 0&320 720 1617&63%2

?onto peritungan paa "ampel 0&5 mL:

a& on"entra"i .N- engan penggunaan kurva "tanar

) I a bA

- terkorek"i I 0&00% 0&001 A

0&192 I 0&00% 0&001 A

A I 1%

!P I I 20

G.N- I A &!P

G.N- I 1% &20 I 37%0 Bg/mL

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

11/14

G.N- rata'rata I Bg/mLI 970 Bg/mL

b& on"entra"i .N- engan penggunaan "tanar tunggal

I

I

on"entra"i "ampel I I 51&5021

G.N- I on"entra"i "ampel A !P

I 51&5021 Bg/mL A 20

I 1030&029 Bg/mL

G.N- rata'rata I Bg/mLI 1363&3907 Bg/mL

;atio ;N-/.N- kurva "tanarI ;ata'rata ;N-/rata'rata .N- A 100C

I &020/970 g/mL A 100C

I 0&0%11 C

;atio ;N-/.N- "tanar tunggalI ;ata'rata ;N-/rata'rata .N- A 100C

I %1&5213/1363&3907 g/mL A 100C

I 5&935% C

#era"arkan per=obaan+ per"amaan kurva "tanar .N- aala ) I 0&001A

0&00% engan nilai ;K "ebe"ar 0&950 "eingga iperole kaar .N- ati paa

"ampel 0&5 mL an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala 37%0 Bg/mL an 720

Bg/mL sertaG.N-rata'ratan)a aala 970 Bg/mL "eangkan a"il peritungan

engan "tanar tunggal "ebe"ar 1030&029 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL serta

G.N-rata'ratan)a aala 1363&3907 Bg/mL& aar .N- alam ati lebi be"ar

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

12/14

aripaa kaar ;N-& on"entra"i .N- lebi be"ar aripaa ;N- karena i

alam "el kuran pori

agaro"e "e"uai untuk pemi"aan polimer a"am nukleat )ang ter"u"un ari ratu"an

nukleotia& Selain itu+ apat engan menggunakan pereak"i #ra8or& Si8at reagen

ini lebi prakti" an "en"iti8+ "elain itu

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

13/14

"erta G;N-rata'ratan)a aala &020 Bg/mL "eangkan a"il peritungan

engan "tanar tunggal "ebe"ar 76&02%0 Bg/mL an 97&015 Bg/mL engan

G;N-rata'ratan)a "ebe"ar %1&5213 Bg/mL& aar .N- ati paa "ampel 0&5 mL

an "ampel 1&0 mL berturut'turut aala 37%0 Bg/mL an 720 Bg/mL "erta

G.N-rata'ratan)a aala 970 Bg/mL "eangkan a"il peritungan engan

"tanar tunggal "ebe"ar 1030&029 Bg/mL an 1617&63%2 Bg/mL "erta G.N-rata'

ratan)a aala 1363&3907 Bg/mL "eingga kaar .N- lebi be"ar aripaa kaar

;N-& #era"arkan peritungan+ iketaui pula ra"io ;N- engan .N- alam

ati "ebe"ar 0&0%11 C paa peritungan kurva "tanar an 5&935% C engan

"tanar tunggal&

Daftar Pustaka

#intang& 2010&Biokimia: Teknik Penelitian& Jakarta: rlangga&

#ra8or ,,& 1967& - ;api an Sen"itive ,eto 8or te Muanti8i=ation o8

,i=rogram Muantitie" o8 Protein >tiliing te Prin=iple o8 Protein')e

#ining&Journalof Analytical Biochemistry 62: 2%'25&

?ampbell N-+ ;ee=e',it=ell&2002& Biologi disi !elima"Jilid #& Penerbit:

rlangga

oolman J an ;oem H& 2005& Colour Atlas of Biochemistry $nd

d& Ne* Dork:Tieme&

Leninger -L& 200& %asar"%asar Biokimia Jilid #& ,agg) Tena*i

5/19/2018 Laporan Praktikum asam nukleat.doc

14/14