laporan praktikum glukosa.docx

5/20/2018 Laporan Praktikum glukosa.docx

1/21

LAPORAN PRAKTIKUM

PENENTUAN KADAR GLUKOSA

NAMA : RESKY DWI CAHYATI

NIM : H311 12 015

HARI / TGL. PERC. : KAMIS / 03 APRIL 2014

KELOMPOK : II (DUA)

ASISTEN : NURUL AHDAN NISAA

LABORATORIUM BIOKIMIA

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR

2014


2/21

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pada umumnya bahan makanan mengandung tiga kelompok utama

senyawa kimia, yaitu karbohidrat, protein dan lipid atau lemak. Dari ketiga unsur

utama tersebut karbohidrat memegang peranan yang sangat penting karena

merupakan sumber tenaga bagi kegiatan kita sehari-hari. Tanpa karbohidrat

tersebut kemungkinan besar segala aktivitas yang kita lakukan ditiap harinya akan

terhambat.

Karbohidrat digolongkan menjadi monosakarida, disakarida dan

polisakarida. Salah satu contoh monosakarida ialah glukosa. Glukosa merupakan

senyawa penting di alam karena perannya yang penting dalam proses biologis.

Glukosa merupakan molekul paling sederhana hasil hidrolisis dari

semua karbohidrat dalam tubuh sebelum proses oksidasi. Glukosa dapat

mereduksi ion kupri menjadi kupro sehingga reaksi ini dapat digunakan

sebagai dasar di dalam penentuan glukosa dan dilakukan dengan berbagai metode

antara lain Luff Schrool, Munson-Walker, Lane-Eynon dan Somogy-Nelson.

Metode Somogy-Nelson didasarkan pada hasil reduksi ion kupri oleh

glukosa (gula reduksi) dalam suasana basa dengan arsenomolibdat yang

memberikan warna biru (molybdenum blue). Intensitas warna yang terbentuk

bergantung pada konsentrasi glukosa. Absorbansi diukur pada panjang gelombang

tertentu dengan spektrofotometer. Dengan menggunakan larutan standar maka

konsentrasi glukosa dapat diketahui. Berdasarkan teori di atas maka dilakukanlah

percobaan ini.


3/21

1.2Maksud dan Tujuan Percobaan

1.2.1 Maksud Percobaan

Maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui dan mempelajari

teknik penentuan kadar glukosa dalam suatu sampel dengan menggunakan metode

Somogy-Nelson.

1.2.2 Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui kadar glukosa yang

terkandung dalam sampel menggunakan spektrofotometer 20 D+ dengan metode

Somogy-Nelson.

1.3Prinsip Percobaan

Prinsip dari percobaan ini adalah penentuan kadar glukosa dalam sampel

melalui reduksi ion Cu2+ oleh glukosa yang memberikan warna biru dengan

penambahan arsenomolibdat akan membentuk warna biru yang kemudian akan

ditentukan kadarnya melalui spektrofotometer 20 D+ pada panjang gelombang

maksimal. Nilai Absorbansi berhubungan dengan kadar glukosa dalam sampel.

.


4/21

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Karbohidrat adalah kelompok senyawa yang mengandung unsure C, H,

dan O. Senyawa-senyawa karbohidrat memiliki sifat pereduksi karena adanya

gugus karbonil dalam bentuk aldehid atau keton. Senyawa ini juga memiliki

banyak gugus hidroksil (-OH). Senyawa karbohidrat yang memiliki tiga sampai

Sembilan atom karbon disebut monosakarida. Gabungan senyawa-senyawa

monosakarida akan membentuk senyawa karbohidrat yang lebih besar. Ikatan

penghubung antara dua buah monosakarida disebut ikatan glikosida (Ngili, 2009).

Dalam disakarida, terdapat satu ikatan glokosida yang menghubungkan

dua monosakarida. Sedangkan dalam trisakarida terdapat dua ikatan glikosida

yang menghubungkan tiga buah monosakarida. Karbohidrat yang memiliki

beberapa unit monosakarida disebut oligosakarida, sedangkan yang memiliki

banyak unit monosakarida disebut sebagai polisakarida (Ngili, 2009).

D-Glukosa adalah monosakarida yang paling banyak ditemukan.

Monomer D-glukosa terdapat dalam darah, sedangkan polimernya terdapat dalam

tepung maupun selulosa. Proyeksi Fischer molekul D-glukosa adalah sebagai

berikut (Ngili, 2009):

CHO

OHH

HHO

OHH

OHH

CH2OH Gambar 1. D - glukosa


5/21

Penulisan seperti di atas disebut juga sebagai struktur rantai terbuka atau

struktur rantai lurus. Struktur seperti ini hanya ada dalam larutan. D-glukosa dalam

struktur Kristal memiliki dua macam struktur ( dan ) yang juga berbeda aktivitas

optiknya ketika dilarutkan (Ngili , 2009).

Ketika -D-glukosa atau -D-glukosa dilarutkan dalam air, struktur lingkar

akan terbuka sehingga terbentuk struktur rantai terbuka . reaksi ini reversible, dan

kesetimbangan terjadi antara struktur terbuka dan kedua struktur lingkar. Pada

umumnya, aldehid bereaksi dengan alkohol untuk membentuk hemiasetal lalu dengan

adanya katalis asam akan membentuk asetal. Pembentukan lingkar dari struktur

terbuka D-glukosa terjadi ketika gugus hidroksil pada C-5 bereaksi dengan gugus

aldehid (Ngili, 2009).

Penentuan gula pereduksi dengan metode Nelson-Somogyi diawali dengan

terjadinya reduksi komponen pereaksi Nelson oleh glukosa. Ion tembaga(II) dari

pereaksi Nelson akan tereduksi oleh glukosa menjadi tembaga(I). Pemanasan

campuran sampel dengan pereaksi Nelson dimaksudkan untuk mempercepat reaksi

dan mempertegas warna yang menunjukkan adanya gula pereduksi, adanya gula

pereduksi teridentifikasi dengan adanya endapan merah bata yang berasal dari

tembaga(I) oksida (Cu2O) (Razak dkk., 2012).

Campuran antara pereaksi Nelson dan sampel yang diencerkan

memungkinkan terjadinya oksidasi fruktosa menghasilkan produk yang sama pada

oksidasi glukosa. Hal ini disebabkan sifat basa pereaksi Nelson hasil hidrolisis parsial

(anion) beberapa garam komponen pereaksi tersebut. Adanya sifat basa larutan

pereaksi Nelson memungkinkan fruktosa berada dalam kesetimbangan dengan

glukosa dan manosa. Oleh karena itu, fruktosa dalam gula invert juga diukur

sebagai gula pereduksi. Oksidasi gula invert oleh pereaksi Nelson secara keseluruhan

menghasilkan asam glukonat (Razak dkk., 2012).


6/21

Pendinginan campuran antara sampel dan pereaksi Nelson setelah pemanasan

dilakukan dengan merendam tabung reaksi dalam air dingin, selanjutnya ditambahkan

pereaksi Arsenomolibdat. Pada tahapan kedua, penambahan pereaksi Arsenomolibdat

mengakibatkan terjadinya oksidasi ion tembaga(I) menjadi tembaga(II) yang disertai

terbentuknya komplek molibdenum berwarna biru kehijauan, semakin tinggi kadar

gula invert semakin pekat intensitas warna hijau larutan (Razak dkk., 2012).

Sebuah spektrofotometer adalah suatu instrumen untuk mengukur

transmitans atau absorban suatu contoh sebagai fungsi panjang gelombang,

pengukuran terhadap sederetan sampel pada suatu panjang gelombang tunggal

dapat pula dilakukan. Instrument semacam itu dapat dikelompokkan secara

manual atau merekam atau pengelompokkan lain yakni berkas tunggal dan

berkas rangkap. Komponen yang penting sekali dari suatu spektrofotometer

adalah (1) suatu sumber energi cahaya yang berkesinambungan yang meliputi

daerah spektrum dalam instrumen itu, (2) suatu monokromator, yakni suatu

piranti untuk memecilkan pita sempit, (3) suatu wadah untuk sampel

(Day dan Underwood, 1999).

Kebanyakan spektrofotometer melibatkan larutan, dan karenanya

kebanyakan wadah sampel adalah sel untuk menaruh cairan ke dalam berkas

cahaya spektrofotometer. Sel itu haruslah meneruskan energi cahaya dalam daerah

spektral, jadi sel kaca untuk daerah tampak, sel kuarsa atau kaca silica

tinggi instimewa untuk daerah ultraviolet dan garam dapur alam untuk

inframerah. Sel tampak dan ultraviolet yang khas mempunyai panjang jalan

sebesar 1 cm, namun tersedia sel dengan ketebalan yang sangat beraneka, mulai

dari jalan yang sangat pendek, kurang dari 1 milimeter, sampai 10 cm atau bahkan

lebih (Day dan Underwood, 1999).


7/21

DAFTAR PUSTAKA

Day, R.A., dan Underwood, A.L., 1999,Analisis Kimia KuantitatifEdisi Kelima,Erlangga, Jakarta.

Ngili, Y., 2009, Biokimia Metabolisme dan Bioenergitika, Graha Ilmu,

Yogyakarta.

Razak, A.R., Sumarni, N.K., dan Rahmat, B., 2012, Optimalisasi Hidrolisis

Sukrosa Menggunakan Resin Penukar Kation Tipe Sulfonat, Jurnal

Natural Science, 1(1): 119-131.


8/21

BAB III

METODE PERCOBAAN

3.1Bahan Percobaan

Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah larutan sampel

yang mengandung glukosa, akuades, reagen Nelson, dan reagen warna

arsenomolibdat.

3.2 Alat Percobaan

[

Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah tabung reaksi, rak

tabung reaksi, pipet ukur dengan skala 1 mL; 2 mL; 5 mL, bulb, pipet tetes

panjang, gelas kimia 500 mL, hotplate, buret, statif, botol semprot, kuvet, dan

spektofotometer 20 D+.

3.3 Prosedur Percobaan

3.3.1 Pembuatan Larutan Induk 1 mg/mL

Sebanyak 0,01 gram glukosa monohidrat ditimbang ke dalam labu ukur 10

mL. Glukosa monohidrat dilarutkan dengan akuades hingga tanda batas dan

dihomogen.

3.3.2 Pembuatan Larutan Standar

Pembuatan larutan standar ini dilakukan melalui proses pengenceran dari larutan

induk. Dalam pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 0,002 mg/mL; 0,004 mg/mL;

0,006 mg/mL; 0,008 mg/mL; 0,010 mg/mL, dan 0,012 mg/mL.Larutan induk dipipet ke

dalam masing-masing tabung reaksi sebanyak 0,01 mL; 0,02 mL; 0,03 mL; 0,04 mL;

0,05 mL dan 0, 06 mL. Lalu diencerkan dengan akuades dalam ukuran tertentu hingga


9/21

masing-masing larutan mencapai volume 5 mL, yaitu dengan ditambahkan akuades

masing-masing 4,99 mL; 4,98 mL; 4,97 mL; 4,96 mL; 4,95 mL; dan 4,94 mL. Tiap larutan

dalam tabung dihomogenkan.

Tabel 1. Pembuatan Larutan Standar

No.

Konsentrasi

larutan standar

(mg/mL)

V larutan

induk (mL)

V akuades

(mL)

V total

(mL)

1. 0,002 0,01 4,99 5

2. 0,004 0,02 4,98 5

3. 0,006 0,03 4,97 5

4. 0,008 0,04 4,96 5

5. 0,010 0,05 4,95 5

6. 0,012 0,06 4,94 5

3.3.3 Pembuatan Reagen Nelson

Reagen dibuat dengan cara mencampurkan larutan Nelson A dengan larutan Nelson

B dengan perbandingan 25 : 1, sebanyak 16 mL larutan Nelson A dipipet ke dalam gelas

kimia kemudian ditambahkan dengan 0,64 mL larutan Nelson B, kemudian

dihomogenkan.

3.3.4 Pembuatan Sampel

Sebanyak 1 mL larutan yang mengandung glukosa monohidrat

dimasukkan dalam tabung reaksi. Kemudian dilarutkan dengan akuades sebanyak

9 mL lalu dihomogenkan. Selanjutnya dipipet sebanyak 1 mL ke dalam tabung

reaksi yang lain dan dilarutkan lagi dengan akuades sebanyak 9 mL. Begitu

seterusnya sampai pengenceran 10.000 kali.


10/21

3.3.5 Penentuan Kadar Glukosa

Sebanyak 1 mL larutan standar, sampel, dan blanko dipipet ke dalam

tabung reaksi. Masing-masing reagen Nelson sebanyak 1 mL ditambahkan ke

dalam larutan standar, sampel dan blanko kemudian dihomogenkan. Tabung

reaksi dipanaskan selamat 20 menit, lalu didinginkan dalam air es. Selanjutnya

larutan arsenomolibdat ditambahkan ke dalam larutan sampel, strandar dan contoh

masing-masing Sebanyak 1 mL, kemudian dihomogenkan serta ditambahkan

7 mL akuades lalu diukur absorbansi larutan sampel, stantar dan blanko pada

panjang gelombang maksimum.


11/21

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Percobaan penentuan kadar glukosa ini dilakukan dengan menggunakan

metode Somogy-Nelson. Metode ini didasarkan pada hasil reduksi ion kupri oleh

glukosa (gula reduksi) dalam suasana basa dengan reagen arsenomolibdat yang

memberikan warna biru (molybdenum blue). Selanjutnya diukur absorbansinya

pada panjang gelombang tertentu dengan menggunakan spektrofotometer 20 D+.

Pada percobaan ini absorban yang diukur yaitu pada larutan sampel, blanko, dan

larutan standar. Adapun hasil pengamatan dari percobaan ini adalah:

4.1 Hasil Pengamatan

Tabel 2. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

Panjang Gelombang Maksimum (nm) Absorban

600 0,268

650 0,275

700 0,270

Grafik 1. Grafik Penentuan Panjang Gelombang

0.267

0.268

0.269

0.27

0.271

0.272

0.273

0.274

0.275

0.276

580 600 620 640 660 680 700 720

Absorbansi

Panjang Gelombang ()


12/21

Grafik penentuan panjang gelombang menunjukkan bahwa panjang

gelombang maksimum larutan adalah 650 nm. Selanjutnya dilakukan penentuan

kadar glukosa dengan mengukur larutan standar terlebih dahulu yang memiliki

konsentrasi 0,002 mg/mL, 0,004 mg/mL, 0,006 mg/mL, 0,008 mg/mL,

0,010 mg/mL, dan 0,012 mg/mL pada panjang gelombang 650 nm, setelah itu

dilanjutkan dengan mengukur larutan standar A dan didapatkan hasil seperti pada

tabel dibawah ini:

Tabel 3. Data Pengamatan Penetapan Kadar Glukosa pada PanjangGelombang Maksimum 650 nm

Konsentrasi (mg/mL) Absorbansi

0,002 0,020

0,004 0,112

0,006 0,146

0,008 0,275

0,010 0,428

0,012 0,359

Sampel 0,340

Grafik 2. Grafik Penentuan Kadar Glukosa

y = 38.243x - 0.0475

R = 0.8689

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

0.45

0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014

Absorbansi

Konsentrasi


13/21

Perhitungan kadar untuk sampel :

y = 38,24x0,047

0,340 = 38,24x0,047

38,24x = 0,340 + 0,047

x =

x = 0,0101 mg/mL

Jadi, kadar glukosa dalam sampel adalah 0,0101 mg/mL.

4.2 Reaksi

OHH

HOH

OHH

OHH

CH2OH

H O

+ CuO Cu2O +

OHH

HOH

OHH

OHH

CH2OH

H O

Cu+

Cu+2

+ 1e-

MoO42-

+ 8H+

+ 3e- Mo3+

+ 4H2O

x 3

x 1

3 Cu+ 3Cu

2+ + 3e

-

MoO42-

+ 8H+

+ 3e-

3Cu++ MoO4

2-+ 8H

+3Cu

2++ Mo

3++ 4H2O

Mo3+

+ 4 H2O

4.3 Pembahasan

Percobaan ini dilakukan dengan menggunakan Metode Nelson-Somogy

yang didasarkan pada hasil reduksi ion kupri oleh glukosa (gula reduksi) dalam

suasana basa dengan reagen arsenomolibdat yang memberikan warna biru

(molybdenum blue). Intensitas warna yang terbentuk bergantung pada konsentrasi

glukosa. Absorbansi diukur pada panjang gelombang tertentu (650 nm) dengan


14/21

spektrofotometer 20 D+. Dengan menggunakan larutan standar maka kosentrasi glukosa

dapat diketahui. Pada percobaan ini dilakukan tiga persiapan utama sebelum sampel

diukur yakni mempersiapkan larutan induk, larutan standar dan larutan sampel.

Larutan induk yang digunakan pada percobaan ini berasal dari glukosa

monohidrat sehingga perlu adanya penyetaraan dengan glukosa anhidrat. Pada

pembuatan larutan induk ini yakni sebanyak 0,01 gram glukosa monohidrat

ditimbang dan dilarutkan di dalam labu ukur 10 mL dengan akuades sampai tanda

batas. Dari larutan induk inilah kemudian dibuat larutan standar dengan berbagai

konsentrasi yaitu 0,002 mg/mL, 0,004 mg/mL, 0,006 mg/mL, 0,008 mg/mL,

0,010 mg/mL, dan 0,012 mg/ mL. Pelarut yang digunakan adalah air karena air

merupakan pelarut yang bersifat sangat polar sehingga dapat menjadi pelarut yang sangat

baik dan dapat tembus cahaya. Sedangkan pada pembuatan larutan sampel diambil

sebanyak 1 mL larutan yang mengandung glukosa monohidrat dimasukkan dalam

tabung reaksi yang dilarutkan dengan akuades sebanyak 9 mL lalu dihomogenkan

sampai pengenceran 10.000 kali.

Pembuatan reagen Nelson terdiri atas reagen Nelson A dan reagen Nelson B

dengan perbandingan 25 : 1 artinya reagen Nelson A yang digunakan sebanyak 16 mL dan

reagen Nelson B yang digunakan adalah 0,64 mL. Setelah pembuatan reagen Nelson,

kemudian reagen tersebut dicampurkan pada larutan sampel, larutan standar dan

blanko kemudian dikocok agar bercampur dengan baik dan dipanaskan. Larutan

Nelson disini ditambahkan agar terjadi reduksi ion Cu2+ oleh glukosa (glukosa

mengalami oksidasi) sedangkan pemanasan disini dilakukan agar reaksi berjalan

dengan lebih cepat atau sempurna. Penambahan arsenomolibdat disini berfungsi

untuk memberikan warna biru pada sampel agar mempermudah pembacaan pada

spektrofotometer. Setelah itu, diukur dengan menggunakan spektrofotometer


15/21

dengan panjang gelombang 650 nm yang ditujukan untuk mengetahui absorban

dari glukosa. Intensitas warna yang terbentuk bergantung pada konsentrasi

glukosa. Semakin pekat warna larutan, semakin tinggi kadar glukosa yang

terkandung di dalam larutan tersebut. Begitu juga sebaliknya, kadar glukosa yang

terkandung dalam larutan rendah apabila warnanya makin memudar. Namun, pada

percobaan yang dilakukan terdapat kesalahan pengukuran absorbansi pada konsentrasi

glukosa 0,012 mg/mL. Nilai absorbansi yang didapatkan menurun. Hal ini mungkin

disebabkan kesalahan pemipetan atau kesalahan saat penambahan akuades. Kadar

glukosa dalam sampel cair yang diperoleh dari perhitungan yaitu 0,0101 mg/mL.


16/21

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil percobaan yang dilakukan diperoleh kesimpulan bahwa

kadar glukosa yang terdapat dalam sampel adalah 0,0101 mg/mL.

5.2 Saran

5.2.1 Saran untuk laboratorium

Sebaiknya penyediaan alat-alat praktikum terutama bulbdisediakan dalam

jumlah yang cukup agar praktikum dapat berjalan dengan lancar dan tidak

memakan waktu yang cukup lama.

5.2.2 Saran untuk Percobaan

Sebaiknya percobaan dilakukan lebih teliti agar hasil yang diperoleh tidak

menyimpang dari teori yang ada.

5.2.2 Saran untuk asisten

Kinerjanya sudah sangat baik dan penjelasannya juga jelas, saya harap

dapat dipertahankan.


17/21

LEMBAR PENGESAHAN

Makassar, 10 April 2014

Asisten Praktikan

NURUL AHDAN NISAA RESKY DWI CAHYATI


18/21

Lampiran 1

Bagan Kerja

1.

Pembuatan Larutan Induk

Sebanyak 0,01 gram ditimbang ke dalam labu ukur 10 ml

Dilarutkan dengan akuades hingga tanda batas

Dihomogenkan

2. Pembuatan Larutan Standar

Dipipet masing-masing sebanyak 0,01 mL; 0,02 mL; 0,03 mL;

0,04 mL; 0,05 mL; 0,06 mL ke dalam tabung reaksi.

Ditambahkan akuades hingga 5 mL.

Dihomogenkan.

Diberi label pada tiap tabung sesuai dengan konsentrasinya.

3. Pembuatan Pereaksi Nelson

Dipipet sebanyak 16 mL Dipipet sebanyak 0,64 mL

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi.

Dihomogenkan.

Larutan Glukosa

Hasil

Larutan Induk

Hasil

Larutan Nelson A

Hasil

Larutan Nelson B


19/21

4. Pembuatan Larutan Sampel

sebanyak 1 mL dimasukkan dalam tabung reaksi

dilarutkan dengan akuades sebanyak 9 mL

dihomogenkan

dilakukan pengenceran 10.000 kali

5. Penentuan Kadar Glukosa

Dipipet masing-masing sebanyak 1 mL.

Ditambahkan reagen Nelson sebanyak 1 mL.

Dihomogenkan

Dipanaskan selama 20 menit, lalu didinginkan dalam air es

Ditambahkan larutan arsenomolibdat sebanyak 1 mL

Dihomogenkan kembali

Diukur absorbansinya

Larutan Standar, Sampel, dan Blanko

Hasil

Larutan Glukosa

Hasil


20/21

Lampiran 2.

Perhitungan

1.

Pembuatan Larutan Standar

a. Konsentrasi 0,002 mg/mL

mL01,0

mLmg1

mLmg0,002mL5

V

mL5mL

mg002,0V

mLmg1

VCVC

1

1

2211

b. Konsentrasi 0,004 mg/mL

mL02,0

mLmg1

mLmg0,004mL5

V

mL5mL

mg004,0V

mLmg1

VCVC

1

1

2211

c. Konsentrasi 0,006 mg/mL

mL03,0

mLmg1

mLmg0,006mL5

V

mL5mL

mg006,0V

mLmg1

VCVC

1

1

2211

d. Konsentrasi 0,008 mg/mL

mL04,0

mLmg1

mLmg0,008mL5

V

mL5mL

mg008,0V

mLmg1

VCVC

1

1

2211


21/21

e. Konsentrasi 0,010 mg/mL

mL05,0

mLmg1

mLmg0,010mL5

V

mL5mL

mg010,0V

mL

mg1

VCVC

1

1

2211

f. Konsentrasi 0,012 mg/mL

mL06,0

mLmg1

mLmg0,012mL5

V

mL5mL

mg

012,0VmL

mg

1

VCVC

1

1

2211

2. Pembuatan Larutan Induk 1 mg/mL

gram0,01mg10x

mL10

mgxmg/mL1

mL

mgmg/mL

laporan praktikum glukosa.docx

Documents