uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul … · uji aktivitas antioksidan ekstrak...
TRANSCRIPT
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL 96% BEKATUL
(Rice bran) DAN PENGARUH TERAPINYA TERHADAP GAMBARAN
HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) DIABETES
MELLITUS
SKRIPSI
Oleh:
KHALIMATUL ULYAH
NIM. 14630014
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM
MALANG
2019
i
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL 96% BEKATUL
(Rice bran) DAN PENGARUH TERAPINYA TERHADAP GAMBARAN
HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) DIABETES
MELLITUS
SKRIPSI
Oleh:
KHALIMATUL ULYAH
NIM. 14630014
Diajukan Kepada:
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang
Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan dalam
Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM
MALANG
2019
v
PERNYATAAN KEASLIAN TULISAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama : Khalimatul Ulyah
NIM : 14630014
Jurusan : Kimia
Fakultas : Sains dan Teknologi
Judul penelitian : Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 96% Bekatul
(Rice bran) dan Pengaruh Terapinya Terhadap Gambaran
Histologi Pankreas Mencit (Mus musculus) Diabetes
Mellitus
menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi yang saya tulis ini benar-benar
merupakan hasil karya saya sendiri, bukan merupakan pengambilan data, tulisan
atau pikiran orang lain yang saya akui sebagai hasil tulisan atau pikiran saya sendiri,
kecuali dengan mencantumkan sumber cuplikan pada daftar pustaka. Apabila
dikemudian hari terbukti atau dapat dibuktikan skripsi ini hasil jiplakan, maka saya
bersedia menerima sanksi atas perbuatan tersebut.
Malang, 14 Januari 2019
Yang membuat pernyataan,
Khalimatul Ulyah
v
MOTTO
ومن جاهد فإنما يجاهد لن فسه“Barang siapa yang bersungguh-sungguh, maka sesungguhnya
kesungguhan itu untuk dirinya sendiri”
(QS. Al-ankabut: 6)
“GOOD SCIENCE STARTS WITH GOOD ETHICS”
Ilmu yang baik dimulai dengan etika yang baik
vi
HALAMAN PERSEMBAHAN
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT, sujud syukurku kusembahkan
kepadaMu tuhan yang Maha Agung. Curahan cinta, kasih sayang serta
hidayahMu, telah memberikanku kekuatan dan pelita dalam kegelapan. Atas
ridhoMu pula, telah memberikanku kemudahan dalam menimba ilmu dan
menyelesaikan skripsi yang sederhana ini. Semoga keberhasilan dalam
menyelesaikan skripsi yang sederhana ini menjadi satu langkah awal bagiku untuk
meraih cita-cita besarku.
Sholawat serta salam semoga tetap tercurah untuk sang revolusioner sejati, nabi
agung Muhammad SAW yang telah menunjukkan kepada kita dari jalan yang
gelap menuju jalan yang terang benderang yakni agama islam.
Sebuah karya sederhana dari perjuangan selama 4,5 tahun ini kupersembahkan
kepada orang-orang istimewa yang ku cinta dan sayangi.
Teruntuk Bapak Alm. Sopan dan Ibu Marliyan, yang tiada hentinya selama ini
memberiku semangat, do’a, motivasi, nasehat dan kasih sayang serta pengorbanan
yang tak tergantikan hingga aku selalu kuat menjalani setiap rintangan yang ada
dalam proses pendewasaan diri. Aku bersyukur bahwa Allah telah
menempatkanku diantara kedua malaikatNya yang setiap waktu ikhlas menjaga,
mendidik dan membimbingku dengan baik tanpa mengenal lelah. Terima kasih
Pak, Bu, semoga lembaran kertas yang kususun menjadi sebuah karya sederhana
ini menjadi sebuah kebahagiaan tersendiri untuk kalian dan menjadi langkah awal
ku untuk mencapai cita-cita ku.
Kepada Ibu Diana Candra Dewi, Ibu Akyunul Jannah, Ibu Hafidatul Hasanah dan
Bapak Ahmad Hanapi sebagai dosen pembimbing. Terima kasih atas dukungan,
motivasi, arahan, nasehat, kesabaran serta waktu yang Ibu Bapak luangkan untuk
mengajarkan saya menyelesaikan skripsi ini. Terima kasih juga saya ucapkan
kepada seluruh dosen jurusan kimia, seluruh laboran jurusan kimia dan laboran
biologi (Bapak M.Basyaruddin) atas seluruh bekal ilmu, jasa dan bantuan yang
telah diberikan. Semoga Allah SWT senantiasa memberikan rahmat, kesehatan
dan umur yang panjang.
Untuk kakak-kakakku (Mat Nafik, Nurgianto dan Mulyadi). Terima kasih untuk
segala bantuan baik secara moril maupun materiil, do’a dan semangat yang
diberikan. Semoga ini menjadi awal bagi saya untuk membanggakan kalian.
Terima kasih kepada teman-teman tim DM (Nafis dan Marsya) yang telah
bersedia menjadi teman penelitian, diskusi, berjuang bersama, tangis, canda dan
tawa. Teman-teman Kimia A yang selalu memberikan kritik dan saran yang
membangun serta Kimia Angkatan 2014 yang luar biasa.
Terima kasih kepada Ustadz Abu dan Ustadzah Nur Chanifah yang telah banyak
memberikan ilmu serta do’a dan semangat. Keluarga PPTQ Oemah Al-Qur’an
yang senantiasa memberikan semangat baik dalam hal agar rajin mengaji dan
menyelesaikan kuliah.
vii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb.
Puji sykur penulis ucapkan kehadirat Allah SWT, karena atas limpahan
rahmat dan hidayah-Nya, penulis dapat menyelesaikan proposal penelitian ini
dengan judul “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 96% Bekatul (Rice
bran) dan Pengaruh Terapinya Terhadap Gambaran Histologi Pankreas
Mencit (Mus musculus) Diabetes Mellitus”.
Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada semua pihak yang telah
memberikan kontribusi baik dukungan moral maupun spiritual demi suksesnya
penyusunan proposal peneitian ini. Seiring terselesaikannya skripsi ini, dengan
penuh kesungguhan dan kerendahan hati, penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
1. Bapak dan Ibu tercinta yang telah banyak memberikan perhatian, nasehat,
do’a dan dukungan baik moral maupun materil yang tidak mungkin
terbalaskan.
2. Bapak Prof. Abdul Haris, M.Ag selaku Rektor Universitas Islam Negeri
Maullana Malik Ibrahim Malang.
3. Ibu Dr. Sri Harini, M.Si selaku Dekan Fakultas Sains Dan Tekonlogi
Universitas Islam Negeri Maulana Maik Ibrahim Malang.
4. Ibu Elok Kamilah Hayati, M.Si, selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas Sains
dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.
5. Ibu Diana Candra Dewi, M.Si, selaku dosen pembimbing penelitian yang
telah memberikan bimbingan, pengarahan, dan nasehat kepada penyusun
dalam menyelesaikan laporan hasil penelitian ini.
6. Ibu Akyunul Jannah, S.Si, M.P, selaku dosen konsultan yang telah
memberikan pengarahan, bimbingan, dan nasehat kepada penyusun dalam
menyelesaikan laporan hasil penelitian ini.
7. Bapak Ahmad Hanapi, M.Sc, selaku dosen pembimbing agama yang telah
memberikan pengarahan, bimbingan, dan nasehat kepada penyusun dalam
menyelesaikan laporan hasil penelitian ini.
viii
8. Seluruh dosen Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana
Malik Ibrahim Malang yang telah memberikan ilmu, pengetahuan,
pengalaman, wacana dan wawasannya, sebagai pedoman dan bekal bagi
penyusun.
9. Teman-teman kelompok DM (Marsya dan Nafis) dan semua mahasiswa
kimia angkatan 2014 Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik
Ibrahim Malang yang telah memberikan motivasi dan informasi kepada
penulis.
Penulis menyadari banyak kekurangan dalam penulisan laporan hasil
penelitian ini. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati penulis
mengharapkan kritikan dan saran yang bersifat membangun dari semua pihak demi
penyempurnaan Skripsi ini.
Wassalamu’alaikum Wr.Wb
Malang, 11 Januari 2019
Penulis,
Khalimatul Ulyah
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL...............................................................................................i
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................. ii
HALAMAN PERSETUJUAN ............................................................................iii
LEMBAR ORISINALITAS ................................................................................iv
MOTTO .................................................................................................................v
HALAMAN PERSEMBAHAN ..........................................................................vi
KATA PENGANTAR ........................................................................................vii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii
ABSTRAK .......................................................................................................... xiv
ABSTRACT ......................................................................................................... xv
xvi .......................................................................................................... الملخص البحث
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 7
1.3 Tujuan Penelitian.................................................................................. 7
1.4 Batasan Masalah ................................................................................... 7
1.5 Manfaat Penelitian................................................................................ 8
1.6 Hipotesis ............................................................................................... 8
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 9
2.1 Bekatul (Rice Bran) ............................................................................. 9
2.2 Diabetes Mellitus................................................................................ 11
2.3 Antioksidan ........................................................................................ 12
2.3.1 Klasifikasi Antioksidan .......................................................... 13
2.3.2 Mekanisme Antioksidatif ....................................................... 14
2.3.3 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH .................. 16
2.4 Aloksan............................................................................................... 18
2.5 Hewan Coba Mencit (Mus musculus L.) ............................................ 19
2.6 Histologi Pankreas.............................................................................. 21
2.7 Metode Ekstraksi dengan Maserasi .................................................... 22
2.8 Pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE) ................................................. 23
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ......................................................... 27
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ............................................................ 27
3.2 Alat dan Bahan Penelitian .................................................................. 27
3.2.1 Alat-alat .................................................................................. 27
3.2.2 Bahan ...................................................................................... 27
3.3 Rancangan Penelitian ......................................................................... 28
3.4 Tahapan Penelitian ............................................................................. 29
3.5 Prosedur Penelitian ............................................................................. 30
3.5.1 Preparasi Sampel .................................................................... 30
x
3.5.2 Penentuan Kadar Air secara Thermogravimetri ..................... 30
3.5.3 Ekstraksi bekatul .................................................................... 31
3.5.4 Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH (1,1-
difenil-2-pikrilhidrazil) ........................................................... 31
3.5.5 Persiapan Hewan Coba dan Pengkondisian Mencit Diabetes
mellitus ................................................................................... 33
3.5.6 Terapi Hewan Coba ................................................................ 35
3.5.7 Pengambilan Pankreas dan Pewarnaan Hematoxylin Eosin
(HE) ........................................................................................ 35
3.5.8 Analisis Data .......................................................................... 37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 38
4.1 Preparasi Sampel ................................................................................ 38
4.2 Analisis Kadar Air .............................................................................. 39
4.3 Ekstraksi Bekatul................................................................................ 40
4.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan Pada Sampel .................................. 42
4.4.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ........................... 42
4.4.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pada Sampel ................... 43
4.5 Potensi Ekstrak Etanol 96% Bekatul Sebagai Antidiabetes Terhadap
Mencit (Mus Musculus, L.) Diabetes Mellitus ................................... 48
4.5.1 Pengkondisian Mencit Diabetes Mellitus ............................... 48
4.5.2 Pengaruh Esktrak Etanol 96% Bekatul Terhadap Histologi
Pankreas Mencit (Mus Musculus L.) Diabetes Mellitus ........ 50
4.6 Pemanfaatan Tanaman Bekatul Sebagai Antidiabetes dalam Perspektif
Islam....................................................................................................59
BAB V PENUTUP ............................................................................................... 61
5.1 Kesimpulan......................................................................................... 61
5.2 Saran....................................................................................................61
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 62
LAMPIRAN ......................................................................................................... 69
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Kandungan zat gizi bekatul beras putih .................................................. 9
Tabel 2.2 Klasifikasi diabetes mellitus ................................................................. 11
Tabel 2.3 Hasil pemeriksaan glukosa darah .......................................................... 12
Tabel 2.4 Ketentuan kekuatan antioksidan ........................................................... 17
Tabel 2.5 Aktivitas antioksidan berbagai jenis beras ............................................ 17
Tabel 4.1 Nilai IC50 aktivitas antioksidan ekstrak bekatul dan pembanding ........ 47
Tabel 4.2 Jumlah sel pankreas mencit sesudah terapi ekstrak etanol 96% bekatul
.............................................................................................................. 54
Tabel 4.3 Hasil perhitungan ANOVA jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus)
setelah perlakuan terapi ekstrak etanol 96% bekatul beras pada α
0,5%.........................................................................................................57
Tabel 4.4 Ringkasan uji duncan α 5% pengaruh ekstrak etanol 96% bekatul beras
terhadap jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus L.) yang diinduksi
aloksan .................................................................................................... 58
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Skema morfologi gabah kering ........................................................... 9
Gambar 2.2 Struktur vitamin C ............................................................................. 13
Gambar 2.3 Mekanisme reaksi antioksidan menghambat radikal bebas .............. 15
Gambar 2.4 Reaksi antara radikal bebas membentuk kompleks bukan radikal .... 15
Gambar 2.5 Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan ...................................... 16
Gambar 2.6 Struktur Aloksan ............................................................................... 18
Gambar 2.7 Reaksi hormon glukagon dan insulin ................................................ 18
Gambar 2.8 Hewan Coba Mencit (Mus musculus) ............................................... 20
Gambar 2.9 Organ Pankreas ................................................................................. 21
Gambar 2.10 Histologi Pankreas........................................................................... 24
Gambar 4.1 Sampel Bekatul ................................................................................. 39
Gambar 4.2 Ekstrak etanol 96% bekatul ............................................................... 42
Gambar 4.3 Spektra UV-Vis larutan DPPH 0,2 mM ............................................ 43
Gambar 4.4 Mekanisme reaksi DPPH dengan antioksidan .................................. 45
Gambar 4.5 Grafik aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul .................. 46
Gambar 4.6 Histologi organ pankreas mencit hasil pewarnaan HE (400x). ......... 52
Gambar 4.7 Grafik rata-rata kadar glukosa darah dan jumlah sel pankreas ......... 55
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Rancangan Penelitian ....................................................................... 70
Lampiran 2. Diagram Alir ..................................................................................... 70
Lampiran 3. Perhitungan Pembuatan Larutan ....................................................... 76
Lampiran 4. Perhitungan Dosis ............................................................................. 79
Lampiran 5. Perhitungan Uji Kadar Air ................................................................ 81
Lampiran 6. Perhitungan Rendemen ..................................................................... 83
Lampiran 7. Pengujian Antioksidan ...................................................................... 84
Lampiran 8. Data Kadar Glukosa Darah dan Uji Gambaran Histologi Pankreas
Mencit .............................................................................................. 89
Lampiran 9. Dokumentasi Penelitian ................................................................... 94
xiv
ABSTRAK
Ulyah, Khalimatul. 2019. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 96% Bekatul
(Rice Bran) dan Pengaruh Terapinya Terhadap Gambaran Histologi
Pankreas Mencit (Mus musculus) Diabetes Mellitus. Skripsi. Jurusan
Kimia Fakultas Sanis dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana
Malik Ibrahim Malang. Pembimbing I: Diana Candra Dewi, M.Si.;
Pembimbing II: Ahmad Hanapi, M.Sc.; Konsultan: Akyunul Jannah, S.Si,
M.P.
Kata Kunci: Diabetes mellitus, bekatul beras padi, maserasi, antioksidan,
gambaran histologi organ pankreas
Diabetes mellitus merupakan sindrom metabolik paling umum yang
ditandai dengan hiperglikemia (peningkatan kadar gula darah) yang disebabkan
oleh kegagalan sekresi insulin. Bekatul (Rice Bran) merupakan salah satu alternatif
yang berpotensi sebagai antidiabetes dan diduga mengandung senyawa antioksidan
yang dapat meningkatkan sensitivitas insulin. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul (rice bran) dan
pengaruh terapinya terhadap gambaran histologi pankreas mencit diabetes mellitus.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan hewan
coba mencit jantan putih galur BALB/C yang berumur 2-3 bulan dengan berat 20-
30 gram dengan 5 perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan yang digunakan adalah
kontrol normal (tanpa perlakuan), kontrol positif (diinduksi aloksan dengan dosis
200 mg/KgBB) secara intraperitonial, kontrol dosis 1 (terapi dosis ekstrak 350
mg/KgBB), kontrol dosis 2 (dosis ekstrak 400 mg/KgBB), kontrol dosis 3 (dosis
ekstrak 500 mg/KgBB). Ekstrak etanol 96% bekatul diberikan secara oral selama
14 hari. Parameter yang diukur adalah aktivitas antioksidan, IC50, glukosa darah
dan jumlah sel pankreas secara mikroskopik.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol 96% bekatul
memiliki aktivitas antioksidan sebesar 81,830% pada konsentrasi 800 ppm dan nilai
IC50 185,7 mg/L. Hasil terapi ekstrak etanol 96% bekatul secara oral mampu
menurunkan kadar glukosa darah dan berpengaruh terhadap peningkatan jumlah sel
pankreas mencit diabetes mellitus pada dosis terbaik 400 mg/KgBB.
xv
ABSTRACT
Ulyah, Khalimatul. 2019. Test of Antioxidant Activity of Ethanol Extract 96% Bran
(Rice Bran) and Effect of Treatment on Histology of Pancreas Diabetes
Mellitus Mice (Mus musculus). Essay. Department of Chemistry, Faculty
of Science and Technology, State Islamic University of Maulana Malik
Ibrahim Malang. Supervisor I: Diana Candra Dewi, M.Si.; Supervisor II:
Ahmad Hanapi, M.Sc.; Consultant: Akyunul Jannah, S.Si, M.P.
Keywords: Diabetes mellitus, rice rice bran, maceration, antioxidants, histology of
pancreatic organs
Diabetes mellitus is the commonest metabolic syndrome characterized by
hyperglycemia (increased blood sugar levels) caused by failure of insulin secretion.
Rice bran is one alternative that has the potential to be antidiabetic and is thought
to contain antioxidant compounds that can increase insulin sensitivity. This study
aims to determine the antioxidant activity of ethanol extract 96% rice bran and the
effect of its treatment on the histology of pancreas diabetes mellitus mice.
This study an experimental study using animals that tried to mice 2-3 years
old BALB / C strain white males weighing 20-30 grams with 5 treatments and 4
replications. The treatment used was normal control (without treatment), positive
control (induced by alloxan at a dose of 200 mg/KgBB) intraperitonially, control
dose 1 (therapy extract 350 mg/KgBB), control dose 2 (extract dose 400 mg/KgBB)
, control dose 3 (extract dose 500 mg/KgBB). Ethanol extract 96% bran was given
orally for 14 days. The parameters measured were antioxidant activity, IC50, blood
glucose and pancreatic cell count microscopically.
The results showed that 96% ethanol extract of bran had an antioxidant
activity of 81.830% at a concentration of 800 ppm and an IC50 value of 185.7 mg/L.
Treatment results of 96% ethanol extract of bran orally can reduce blood glucose
levels and affect increase in the number of pancreatic cells in diabetes mellitus mice
at a dose of 400 mg / KgBB.
xvi
البحث الملخص
النخالة )نخالة ٢٩٪اختبار مضادات األكسدة لمستخلص اإليثانول .٩١٠٢العليا ، حليمة. ( داء Mus musculusعلى األنسجة البنكرياس نظرة عامة على الفئران )االرز( وتأثير العالج
. بحث جامعى.قسم الكيمياء,كليةالعلوم والتكنولوجيافي جامعة اإلسالمية الحكومية السكري اعين المشرفة الثانية: ,ندرا ديوي الماجستير ماالنج المشرفة األولى: ديانا جموالنامالك إبراهيم أحمد حنفي الماجستير.: المشرف الثالث الجنة الماجستير ,
، والتنعيم ، ومضادات األكسدة ، واألنسجة من مرض السكري ، نخالة األرز: المفتاحكلمات ا أعضاء البنكرياس
شيوعا التي تتميز ارتفاع السكر في الدم )ارتفاع المراضداء السكري هو أكثر متالزمة فراز األنسولين. نخالة األرز هي أحد البدائل التي مستويات السكر في الدم( الناجمة عن فشل إ
لديها القدرة على أن تكون مضادات السكر ، ويعتقد أنها تحتوي على مركبات مضادة لألكسدة إلى تحديد نشاط مضادات البحثالتي يمكن أن تزيد من حساسية االنسولين. تهدف هذه
ير عالجه على نسيج البنكرياس الفئران الناجم نخالة األرز وتأث ٢٩٪اإليثانول استخراجاألكسدة في عن اللوكسان.
باستخدام الحيوانات التي اختبرت ذكور الفئران البيضاء تجريب بحثهذا البحث (BALB / C) مكررات ٤معامالت و ٥جراما مع ٣١-٩١أشهر وزنها ٣-٩من العمر بالغ.
كان العالج المستخدم هو السيطرة الطبيعية )دون معالجة( ، والتحكم اإليجابي )الناجم عن )استخراج عالجي ٠ملغم / كلغ ب ب( داخل الصفاق ، جرعة السيطرة ٩١١آلوكسان بجرعة
مجم / كلغ ب ب( ، جرعة ٤١١)جرعة استخراج ٩مجم / كلغ ب ب( ، جرعة التحكم ٣٥١نخالة ٪ ٢٩ملغ / كلغ ب ب(.استخراج اإليثانول أعطيت ٥١١الجرعة )استخراج ٣السيطرة
، والجلوكوز 50IC، ات قياس النشاط المضادة لألكسدة يوما. المعلم ٠٤عن طريق الفم لمدة .مجهريا في الدم وعدد خاليا البنكرياس
كان لديه نشاط مضاد لألكسدة بنسبة ٪٢٩أظهرت النتائج أن استخراج اإليثانول بنسبة من ٪٢٩ملغم / لتر. نتائج معالجة استخراج االيثانول بنسبة ٠.٥81 50IC وقيمة ٪٣١.٠8.
ى الزيادة في الدم والتأثير علخفض مستويات الجلوكوز في قادرة على النخالة عن طريق الفم بجرعة.ملغم / كغ ب ٤١١في الفئران المصابة بداء السكري بأفضل جرعة من عدد خاليا البنكرياس
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Diabetes mellitus merupakan sindrom metabolik paling umum yang
menjadi ancaman utama bagi kesehatan manusia di abad 21. Berdasarkan data
International Diabetes Federation (IDF) jumlah penderita Diabetes Mellitus di
dunia pada tahun 2011 telah mencapai 366 juta orang dan diperkirakan akan
meningkat dua kali lipat pada tahun 2030 (IDF, 2011). Diabetes mellitus merupakan
kelompok penyakit metabolisme yang ditandai dengan peningkatan kadar gula
darah (hiperglikemia) akibat kegagalan sekresi insulin serta terjadi perubahan
progresif terhadap struktur sel beta pankreas. Diabetes Mellitus dapat terjadi ketika
pankreas tidak mampu memproduksi insulin yang cukup, atau ketika tubuh tidak
dapat menggunakan insulin yang diproduksi secara efektif. Secara garis besar
diabetes mellitus dibagi menjadi dua kelompok, yaitu diabetes mellitus tipe I dan
diabetes mellitus tipe II (Rudy, 2003).
Penyakit diabetes mellitus merupakan salah satu penyakit kronik yang tidak
dapat disembuhkan, oleh karena itu beberapa penanganan telah dilakukan.
Pengobatan diabetes mellitus yang telah dilakukan yaitu injeksi insulin dan
pemberian obat oral antidiabetes (OAD) yang diketahui memiliki efek samping dan
membutuhkan biaya yang besar. Mahalnya biaya pengobatan bagi penderita
penyakit diabetes mellitus memicu para ahli untuk mencari obat alternatif dari
bahan alami yang dapat dijangkau oleh masyarakat serta meminimalkan efek
samping yang diperoleh dibandingkan dengan pengobatan kimia. Sebagai seorang
hamba Allah SWT yang beriman, senantiasa diperintahkan untuk berfikir dan
2
mencari manfaat dari apa-apa yang diciptakan oleh Allah di muka bumi untuk
pengobatan. Sebagaimana Allah SWT berfirman dalam Al-Qur’an pada surat Qaf
ayat 9:
“Dan Kami turunkan dari langit air yang banyak manfaatnya lalu Kami tumbuhkan
dengan air itu pohon-pohon dan biji-biji tanaman yang diketam” (QS. Qaf: 9).
Berdasarkan surat Qaf ayat 9, Allah SWT memberikan rahmatnya kepada
manusia di muka bumi yakni dengan diturunkannya air dari langit yang membawa
kebaikan dan manfaat serta ditumbuhkannya dengan air itu, kebun-kebun yang
mempunyai pohon-pohonan, bunga-bungaan, buah-buahan, dan biji tumbuhan
yang dituai (Shihab, 2002). Tujuan diturunkan dan ditumbuhkan pula aneka
tumbuhan adalah agar manusia senantiasa mencari dan mengambil manfaat dari
setiap sesuatu yang diciptakan oleh Allah SWT. Salah satu pemanfaatan tumbuhan
adalah sebagai obat dari suatu penyakit (Handayani, 2015).
Setiap manusia yang hidup pasti akan diuji oleh Allah SWT misalnya berupa
sebuah penyakit. Maka sebagai hambanya yang beriman juga dibekali sebuah akal
oleh Allah SWT mempunyai kewajiban untuk senantiasa berfikir dan mencari
sebuah pengobatan untuk mengobatinya misalnya dengan memanfaatkan tumbuhan
sebagai pengobatan alternatif karena sesungguhnya Allah SWT menciptakan segala
sesuatu yang ada di bumi tiadalah yang sia-sia. Allah SWT memberikan suatu
penyakit tentu ada penawarnya (obat), hal ini diperkuat dengan hadits yang
diriwayatkan oleh imam Bukhari, Rasulullah bersabda:
3
ن زل له عن أبى هري رة رضي الله عنه عن النبي صلى الله عليه وسلم ما أن زل الله داء إال أ شفاء
“Tidaklah Allah turunkan penyakit kecuali Allah turunkan pula obatnya.” (HR.
Imam Bukhari No.5678) (Al-albani, 2008).
Sebuah usaha untuk senantiasa berfikir dan mencari manfaat tersebut adalah
pemanfaatan bekatul. Bekatul (Rice bran) merupakan lapisan terluar dari beras
yang terlepas dari proses penggilingan gabah (padi) atau hasil samping
penggilingan padi. Beras sebagai makanan utama masyarakat indonesia, jumlah
padi yang dipanen di seluruh dunia kurang lebih sekitar 600 juta ton setiap tahun
(Esa, dkk., 2013). Hasil dari penggilingan padi yang melimpah menyebabkan
kelimpahan bekatul tinggi. Ketidaktahuan masyarakat tentang bekatul yang
memiliki banyak manfaat bagi kesehatan, sehingga selama ini hanya dimanfaatkan
sebagai pakan ternak. Oleh karena itu, sehingga perlu adanya pemanfaatan bekatul
lebih luas.
Beberapa peneliti telah melaporkan bahwa bekatul memiliki kandungan
antioksidan yang dapat menurunkan kadar gula darah di dalam tubuh atau bahkan
hampir normal. Adom K dan Liu R (2002) melaporkan bahwa bekatul beras
mengandung total fenol 5,56 µmol/g, asam ferulat total 153,39 µmol/100g,
Flavonoid total 0,92 µmol/g dan aktivitas antioksidan total 71%. Penelitian lain dari
Xu, Z., Hua, N., dan Godber, J (2002) menunjukkan bahwa bekatul beras dari
penggilingan riviana memiliki senyawa antioksidan γ-oryzanol (cycloartenyl
ferulate, 24-methylenecycloartanyl ferulate, dan campesteryl ferulate) yang
memiliki aktivitas antioksidan 4 kali lebih efektif dibandingkan vitamin E (α-
tocopherol, α-tocotrienol, γ-tocopherol, dan γ-tocotrienol), dan lemak tidak
jenuhnya mampu menurunkan kolesterol.
4
Bekatul yang digunakan untuk uji coba merupakan ekstrak bekatul. Untuk
mendapatkan ekstrak bekatul digunakan metode ekstraksi dengan cara maserasi.
Maserasi menggunakan prinsip like dissolve like, yakni zat yang bersifat polar akan
larut dalam pelarut polar dan zat yang bersifat non polar akan larut dalam pelarut
non polar (Khopkar, 2008). Maserasi dilakukan menggunakan pelarut etanol 96%
karena etanol mempunyai titik didih yang rendah (78,5ºC), tidak beracun dan tidak
berbahaya serta mempunyai polaritas yang tinggi sehingga dapat mengekstrak
senyawa antioksidan lebih banyak dibandingkan jenis pelarut organik yang lain.
Widarta dkk (2013) telah melakukan ekstraksi maserasi pada bekatul beras putih
dengan berbagai pelarut yakni metanol pa, etanol 96% dan aqua DM, diperoleh
rendemen aqua DM sebesar 6,42%, etanol 96% sebesar 5% dan metanol pa sebesar
3,91%. Rima dkk (2014) telah melakukan ekstraksi dengan cara maserasi
menggunakan pelarut etanol 96% selama 3 × 24 jam dengan bantuan shaker dan
diperoleh rendemen ekstrak tertinggi yakni 38,55 (%b/b) dibandingkan etanol 70%,
80%, dan 95%. Kelebihan dari metode maserasi adalah biayanya yang murah,
mudah untuk dilakukan dan tanpa pemanasan sehingga tidak merusak senyawa
antioksidan (Kemit, dkk., 2017).
Ekstrak bekatul akan diterapikan ke hewan coba berupa mencit (Mus
Musculus) putih jantan yang diinduksi agen diabetagonik. Pada penelitian ini
menggunakan agen diabetagonik aloksan. Kelebihan aloksan menurut Ratimanjari
(2011) aloksan dapat meningkatkan kadar glukosa darah dalam waktu 2-3 hari
tanpa menimbulkan kematian pada dosis 32 mg/200g BB. Pasaribu (2015)
menginjeksikan mencit dengan dosis aloksan 5,04 mg/ 20gBB secara intraperitonial
dan rata-rata kadar gula darah (KGD) pada hari ke-4 menunjukkan terjadinya
5
peningkatan KGD mencit sebesar 300 mg/dL. Sinata dan Arifin (2016) juga
melakukan perlakuan induksi aloksan terhadap mencit putih jantan diabetes dengan
dosis 200 mg/KgBB secara intraperitonial dan tidak menyebabkan kematian.
Akibat dari pemberian aloksan menyebabkan meningkatnya radikal bebas
di dalam tubuh sehingga menimbulkan kerusakan pada sel β pankreas dan karena
jumlah antioksidan tubuh yang mengikat radikal bebas tidak seimbang sehingga
membutuhkan antioksidan sekunder untuk memperbaiki kerusakan sel.
Antioksidan sekunder diperoleh melalui terapi ekstrak etanol 96% bekatul beras.
Metode yang digunakan untuk mengidentifikasi aktivitas antioksidan pada
penelitian ini adalah dengan DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Keuntungan
menggunakan metode DPPH merupakan metode yang sederhana, cepat dan mudah
untuk screening aktivitas penangkap radikal beberapa senyawa. Pengukuran
aktivitas antioksidan dengan DPPH diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm (Hanani, 2005).
Penentuan aktivitas antioksidan mengunakan Asam Askorbat (vitamin C)
sebagai pembanding. Parameter lain untuk mengetahui kekuatan antioksidan ialah
IC50 (Inhibition Concentration 50 Value). IC50 merupakan konsentrasi yang dapat
menghambat aktivitas radikal bebas DPPH sebanyak 50%. Berdasarkan penelitian
Widarta dkk (2013) aktivitas antioksidan bekatul beras putih pada berbagai pelarut
yang sudah diasamkan dengan HCl 37% pH 1 diperoleh pada pelarut aqua DM
53,11%, etanol 96% 49,14% dan metanol pa 78,61%. Berdasarkan penelitian
Widarta dkk (2013) melaporkan bahwa ekstraksi bekatul beras merah
menggunakan pelarut etanol 96% yang diasamkan dengan HCl 37% pH 1 dengan
waktu maserasi 36 jam memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan
6
dengan pelarut yang tidak diasamkan sebesar 88,10%. Ulfa, S.M (2016) juga
melaporkan telah melakukan pengujian aktivitas antioksidan bekatul beras putih
dengan pelarut etanol 99%, kloroform dan petroleum eter dan menunjukkan bahwa
pada pelarut etanol 99% memiliki aktivitas antioksidan tertinggi dibanding pelarut
kloroform dan petroleum eter sebesar 61,17% pada konsentrasi maksimum 800
ppm. Adanya potensi bekatul sebagai antidiabetes maka pada penelitian ini
dilakukan terapi ekstrak bekatul dengan dosis terapi dikembangkan dari penelitian
Dwinani (2014) dan Arifah (2015) dengan dosis 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan
500 mg/KgBB.
Adanya kerusakan struktur organ pankreas yang tidak tampak oleh
pengamatan makroskopik pada mencit yang menderita diabetes mellitus maka
dilakukan uji gambaran histologi melalui pemeriksaan histopatologi dengan cara
pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE). Pewarnaan menggunakan Hematoxylin-Eosin
(HE) dapat mengetahui Gambaran kerusakan jaringan yang diakibatkan oleh benda
toksik yang masuk dalam tubuh, yakni meningkatnya radikal bebas. Penelitian ini
akan dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul
dan pengaruh terapinya terhadap Gambaran histologi organ pankreas mencit
diabetes mellitus.
Berdasarkan uraian diatas, maka akan dilakukan penelitian tentang aktivitas
antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul dengan metode DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil dan pengaruh terapinya terhadap Gambaran histologi pankreas mencit
diabetes mellitus dan hasil penelitian akan dapat dijadikan sebagai obat alternatif
bagi penderita diabetes mellitus.
7
1.2 Rumusan Masalah
1. Bagaimana aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul dengan metode
DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)?
2. Bagaimana pengaruh terapi ekstrak bekatul terhadap gambaran histologi
organ pankreas mencit diabetes mellitus?
1.3 Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul dengan
metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).
2. Untuk mengetahui terapi ekstrak bekatul terhadap gambaran histologi organ
pankreas mencit diabetes mellitus.
1.4 Batasan Masalah
1. Bahan yang digunakan adalah bekatul hasil dari proses penggilingan beras
putih yang berasal dari Desa Lasem Kabupaten Gresik.
2. Hewan coba yang digunakan adalah mencit (Mus Musculus) putih jantan
galur BALB/C.
3. Hewan Coba diinduksi aloksan dengan dosis 200 mg/KgBB mencit.
4. Variasi dosis terapi ekstrak etanol 96% bekatul yang digunakan dalam
penelitian ini adalah 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB.
5. Gambaran histologi organ pankreas mencit menggunakan pewarnaan
Hematoxylin-Eosin (HE).
8
1.5 Manfaat Penelitian
1. Memperoleh informasi tentang aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96%
bekatul dan pengaruh terapinya terhadap gambaran histologi organ pankreas
mencit diabetes mellitus.
2. Pemanfaatan limbah penggilingan padi yang tersedia di masyarakat untuk
mencegah dan terapi alternatif khususnya bagi penderita diabetes mellitus.
3. Meningkatkan nilai guna limbah penggilingan padi sebagai obat herbal
alternatif penyakit diabetes mellitus.
1.6 Hipotesis
H0 = Terapi ekstrak etanol 96% bekatul tidak berpengaruh terhadap Gambaran
histologi organ pankreas mencit diabetes mellitus.
H1 = Terapi ekstrak etanol 96% bekatul berpengaruh terhadap Gambaran
histologi organ pankreas mencit diabetes mellitus.
9
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Bekatul (Rice Bran)
Bekatul merupakan limbah dari proses penggilingan padi yang jarang
dimanfaatkan sebagai produk pangan oleh masyarakat. Mayoritas masyarakat
memanfaatkan bekatul sebagai pakan ternak. Bekatul diperoleh dari proses
penggilingan padi yang berasal dari lapisan terluar beras yaitu antara butir beras dan
kulit padi berwarna cokelat (Sukma, 2010). Bekatul merupakan produk samping
penggilingan beras jumlahnya mencapai 8-12%, sekam 15-20% dan menir 5%
(Damardjati, dkk., 1990 dalam Wirawati dan Nirmagustina, 2009).
Gambar 2.1 Skema morfologi gabah kering (Champagne, 1994 dalam Swastika,
2009)
Menurut Susanto (2010) berikut kandungan zat gizi bekatul beras putih yang
dapat dilihat pada Tabel 2.1:
Tabel 2.1 Kandungan zat gizi bekatul beras putih Protein (%) Lemak (%) Karbohidrat (%) Abu (%) Serat kasar (%) Air (%)
15,34 14,85 56,33
9,15 10,76 4,33
10
Penelitian Chen dan Bergman (2005) menyatakan bahwa bekatul beras
mengandung komponen bioaktif seperti tokoferol, tokotrienol, γ-oryzanol.
Antioksidan fenolik dan β-karoten (Chanprom, 2007). Beberapa peneliti telah
melaporkan bahwa bekatul memiliki banyak manfaat. Hal ini telah dijelaskan dalam
Al-Qur’an surat An-Nahl ayat 11 :
Artinya: “Dia menumbuhkan bagi kamu dengan air hujan itu tanam-tanaman;
zaitun, korma, anggur dan segala macam buah-buahan. Sesungguhnya pada yang
demikian itu benar-benar ada tanda (kekuasaan) Allah bagi yang mau
memikirkan” (Q.S. An-Nahl: 11).
Allah SWT menciptakan segala sesuatu yang ada di muka bumi ini tidak
ada yang sia-sia. Berdasarkan Q.S. An-Nahl: 11 menjelaskan bahwa hanya Allah
SWT yang mampu menumbuhkan tanam-tanaman seperti zaitun, kurma, anggur
dan segala macam buah-buahan dengan air yang diturunkan dari langit sebagai rizki
dan makanan pokok bagi manusia dengan maksud agar menjadi nikmat dan tanda
kekuasaan-Nya bagi hamba-Nya yang mempergunakan akalnya dan
memikirkannya (Shihab, 2002). Salah satu manfaat dari bekatul adalah dapat
dimanfaatkan sebagai salah satu obat alternatif untuk penyakit diabetes mellitus dan
hal tersebut merupakan salah satu wujud bahwa kita mampu mengambil dan
memikirkan tentang kekuasaan Allah SWT.
Menurut Mas’ud dan Pabbenteng (2016) kandungan bekatul padi yakni
tokoferol, γ-oryzanol dan ß-karoten yang merupakan golongan antioksidan non
polar mampu menghambat proses peroksidasi lemak dan mencegah stres oksidatif.
11
Penelitian lain juga telah dilakukan oleh Chen dan Cheng (2006) pada tikus yang
menderita diabetes dengan perlakuan diet minyak bekatul selama 4 minggu
menujukkan bahwa bekatul beras mengandung γ-oryzanol dan γ-tokotrienol
mampu meningkatkan sensitivitas insulin sebesar 78,5%, menurunkan plasma
trigliserida, LDL kolesterol dan hepatik trigliserida.
2.2 Diabetes Mellitus
Diabetes Mellitus (DM) adalah gangguan metabolisme yang ditandai degan
hiperglikemia yang berhubungan dengan abnormalitas metabolisme karbohidrat,
lemak, dan protein yang disebabkan oleh penurunan sekresi insulin atau penurunan
sensitivitas insulin, atau keduanya dan menyebabkan komplikasi kronis
mikrovaskular dan makrovaskular (Sukandar, dkk., 2008). Klasifikasi diabetes
mellitus dapat dilihat pada Tabel 2.2 berikut:
Tabel 2.2 Klasifikasi diabetes mellitus
No Diabetes Mellitus Keterangan
1 Tipe 1 Disebabkan gangguan produksi insulin akibat penyakit
autoimun. Pasien mutlak membutuhkan insulin
2 Tipe 2 Terjadinya resistensi insulin, sehingga cukup ditangani
dengan diet dan antidiabetik oral
3 Tipe Lain Diabetes yang terjadi akibat adanya infeksi obat atau zat
zat kimia, penyakit eksokrin pankreas dan endokrinopati
4 Gestasional Muncul pada masa kehamilan, bersifat sementara,
merupakan faktor resiko untuk diabetes mellitus tipe 2
[Sumber: Departemen Kesehatan RI, 2005]
Diabetes mellitus tipe I atau Insulin Dependent Diabetes Mellitus (IDDM)
merupakan jenis diabetes yang mengalami kerusakan pankreas berat yang memiliki
ketergantungan pada asupan hormon insulin dari luar. Sedangkan diabetes mellitus
12
tipe II atau Insulin Non-Dependent Diabetes Mellitus (INDDM) merupakan jenis
diabetes yang tidak memiliki ketergantungan asupan hormon insulin dari luar,
namun jumlah insulin yang disekresikan berkurang, dan pada organ pankreas tidak
mengalami kerusakan yang berat (Widowati, 2008). Ketentuan glukosa darah
diabetes mellitus dapat dilihat pada Tabel 2.3 berikut:
Tabel 2.3 Hasil pemeriksaan glukosa darah
Kelompok Glukosa darah puasa Glukosa darah postprandial
(mg/dL) (mmol/L) (mg/dL) (mmol/L)
Normal < 100 < 5,6 < 140 < 7,8
Pradiabetes 100-125 5,6-6,9 140-199 7,8-11,1
Diabetes Mellitus ≥ 126 ≥ 7,0 ≥ 200 ≥ 11.1
(Departemen Kesehatan RI, 2005).
Apabila penderita telah menunjukkan gejala diabetes mellitus yang khas,
hasil pemeriksaan kadar glukosa darah sewaktu 200 mg/dL. Hasil pemeriksaan
kadar glukosa darah puasa 126 mg/dL juga dapat digunakan sebagai patokan
diagnosis diabetes mellitus (Departemen Kesehatan RI, 2005).
2.3 Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa donor elektron atau reduktan. Senyawa
antioksidan memiliki berat molekul kecil, tetapi mampu menghambat dan
menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan
molekul yang sangat raktif sehingga mencegah terbentuknya radikal (Winarsi,
2007).
13
2.3.1 Klasifikasi Antioksidan
a) Antioksidan Alami
Antioksidan alami adalah antioksidan yang umumnya diisolasi dari sumber
alami yang mayoritas berasal dari tumbuh-tumbuhan dan buah-buahan. Senyawa
antioksidan alami diantaranya vitamin A, vitamin C, vitamin E, Antosianin,
Isoflavon, Selenium, Karotenoid. Menurut Madhavi, dkk (1996) antioksidan alami
secara toksikologi lebih aman untuk dikonsumsi dan lebih mudah diserap oleh
tubuh daripada antioksidan sintesis. Salah satu antioksidan alami yang sering
digunakan sebagai pembanding untuk uji aktivitas antioksidan adalah vitamin C.
Vitamin C (asam askorbat) merupakan antioksidan alami yang mudah dan murah
apabila dikonsumsi dari alam. Vitamin C sebagai atioksidan berfungsi untuk
mengikat O2 sehingga tidak terjadi reaksi oksidasi. Vitamin C mempunyai berat
molekul 178 gr/mol dengan rumus molekul C6H8O6, dalam bentuk kristal tidak
berwarna, memiliki titik leleh 190-192ºC, bersifat larut dalam air, sedikit larut
dalam aseton/alkohol dan sukar larut dalam kloroform, eter, dan benzen. Berikut
struktur senyawa vitamin C (Sayuti dan Yenrina, 2015):
Gambar 2. 2 Struktur vitamin C
14
b) Antioksidan Sintetis
Beberapa antioksidan sintetik yang lebih populer digunakan adalah senyawa
fenolik seperti BHA (butylated hydroxy anisole), BHT (butylated hydroxy toluene),
TBHQ (tersier butylhydroquinone) dan ester dari asam galat, misalnya propil
gallate ( PG ). Antioksidan sintetik utama yang digunakan mempunyai batas
penggunaan yaitu 0,2% dari kandungan lemak atau minyak. Penambahan
antioksidan sintetik ini harus memenuhi beberapa syarat, misalnya tidak berbahaya
bagi kesehatan, tidak menimbulkan warna yang tidak diinginkan, efektif pada
konsentrasi rendah, mudah didapat, dan ekonomis (Winarno, 2008).
2.3.2 Mekanisme Antioksidatif
Radikal bebas (free radical) adalah suatu senyawa atau molekul yang
mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya.
Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat
reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul
yang berada disekitarnya (Soematmadji, 1998). Dampak reaktifitas senyawa radikal
bebas bermacam-macam, mulai dari kerusakan sel atau jaringan, penyakit
autoimun, penyakit degeneratif seperti kanker, asterosklerosis, penyakit jantung
koroner (PJK), dan diabetes Mellitus.
Mekanisme kerja antioksidan secara umum adalah menghambat oksidasi
lemak. Oksidasi lemak terdiri dari tiga tahap utama yaitu inisiasi, propagasi, dan
terminasi. Pada reaksi 1 atau tahap inisiasi terjadi pembentukan radikal asam lemak
yang bersifat tidak stabil dan sangat reaktif yang disebabkan oleh hilangnya satu
atom hidrogen. Pada tahap selanjutnya yaitu propagasi (reaksi 2 dan 3), radikal
asam (R∙) lemak yang telah terbentuk pada reaksi 1 akan bereaksi dengan oksigen
15
sehingga membentuk radikal peroksi (ROO∙). Radikal peroksi tersebut selanjutnya
akan menyerang asam lemak sehingga menghasilkan hidroperoksida dan radikal
asam lemak baru (reaksi 3) (Nugroho, 2007).
Inisiasi : RH →R∙ + H∙ (1)
Propagasi : R∙ + O2 → ROO∙ (2)
ROO∙ + RH → ROOH + R∙ (3)
Gambar 2.3 Mekanisme reaksi antioksidan menghambat radikal bebas
Hidroperoksida yang terbentuk bersifat tidak stabil dan akan terdegradasi
lebih lanjut menghasilkan senyawa-senyawa karbonil rantai pendek seperti
aldehida dan keton yang bertanggung jawab atas flavor makanan berlemak. Tanpa
adanya antioksioksidan, reaksi oksidasi lemak akan mengalami terminasi melalui
reaksi antara radikal bebas membentuk kompleks bukan radikal (reaksi 4)
(Nugroho, 2007).
Terminasi: ROO∙ + ROO∙ →Non Radikal (4)
R∙ + ROO∙ →Non Radikal
R∙ + R∙ →Non Radikal
Gambar 2.4 Reaksi antara radikal bebas membentuk kompleks bukan radikal
16
Gambar 2. 5 Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan (Windono, dkk., 2001).
2.3.3 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Analisis aktivitas antioksidan dapat diukur berdasakan kemampuannya
untuk menangkap radikal bebas. Salah satu metode yang digunakan untuk
pengukuran yaitu metode DPPH, karena merupakan metode yang sederhana,
mudah, cepat dan membutuhkan sedikit sampel. DPPH merupakan radikal bebas
sintetik berwarna ungu. Aktivitas peredaman DPPH dari zat antioksidan didasarkan
pada kemampuan zat antioksidan dalam menetralkan radikal DPPH dengan cara
menyumbangkan protonnya sehingga membentuk radikal yang lebih stabil.
Penambahan zat yang bersifat antioksidan akan menyebabkan berkurangnya warna
ungu dari larutan DPPH dan semakin aktif zat yang ditambahkan maka larutan
DPPH akan berubah menjadi warna semakin kuning (Muharni, dkk., 2013).
Aktivitas tersebut dinyatakan dalam konsentrasi efektif (effective concentration),
EC50 (inhibitory concentration), IC50. Parameter IC50 menunjukkan bahwa
konsentrasi ekstrak uji yang mampu menangkap radikal bebas sebanyak 50% yang
diperoleh melalui persamaan regresi. Pengukuran aktivitas antioksidan
N
N*
NO2
O2N NO2
N
N
NO2
O2N NO2
H
A H A
17
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm (Dewi,
dkk., 2007).
Aktivitas penangkapan radikal bebas dapat dinyatakan dalam satuan persen
(%) aktivitas antioksidan. Nilai ini diperoleh dengan persamaan berikut (Molyneux,
2004):
% Aktivitas Antioksidan = 𝐴0−𝐴1
𝐴0 x 100%
Keterangan: A0 = Abs kontrol
A1 = Abs Perlakuan
Nilai IC50 berbanding terbalik dengan kemampuan antioksidan suatu
senyawa yang terkandung dalam ekstrak uji. Semakin kecil nilai IC50 maka
kemampuan senyawa sebagai penangkal radikal bebas semakin besar (Indranila dan
Ulfah, 2015). Ketentuan kekuatan antioksidan dapat dilihat pada Tabel 2.4 berikut:
Tabel 2.4 Ketentuan kekuatan antioksidan (Afriani, dkk., 2014) Nilai IC50 Kekuatan
˂50 ppm Sangat Kuat
50-100 ppm Kuat
100-150 ppm Sedang
150-200 ppm Lemah
˃200 Sangat Lemah
Berdasarkan penelitian Wanti (2008) menyatakan bahwa aktivitas
antioksidan beras putih lebih rendah dibandingkan dengan beras hitam dan beras
merah, dapat dilihat pada Tabel 2.5 berikut:
Tabel 2.5 Aktivitas antioksidan berbagai jenis beras Sampel Aktivitas Antioksidan (%)
Beras Putih 18,40
Beras Merah 39,50
Beras Hitam 46,20
18
2.4 Aloksan
Aloksan (2,4,5,6-tetraoksipirimidin; 5,6-dioksiurasil) merupakan senyawa
hidrofilik dan tidak stabil (Gambar 2.6). Sebagai agen diabetogenik, aloksan dapat
digunakan baik secara intravena, intraperitoneal maupun subkutan. Dosis intravena
yang digunakan biasanya adalah 65 mg/kg BB, sedangkan intraperitoneal dan
subkutan adalah 2-3 kalinya. Memiliki waktu paro pada suhu 37ºC dan pH netral
adalah 1,5 menit dan bisa lebih lama pada suhu yang rendah (Szkudelski, 2001;
Rees dan Alcolado, 2005 dalam Nugroho, 2006). Aloksan memiliki struktur yang
dapat dilihat pada Gambar 2.6 berikut:
NH
O
NH
O
O
O
alloxan
Gambar 2.6 Struktur Aloksan
Gambar 2.7 Reaksi hormon glukagon dan insulin
19
Mekanisme toksisitas aloksan diawali dengan masuknya aloksan ke dalam
sel-sel β pankreas sehingga menghasilkan radikal superoksida (H2O2) dan radikal
hidroksil. Aloksan secara cepat dapat mencapai pankreas dan kecepatan
pengambilan tersebut akan menentukan sifat diabetogenik aloksan. Peningkatan
radikal superoksida pada sel β pankreas menyebabkan peningkatan hidrogen
peroksida dan radikal hidroksil yang menyebabkan kerusakan sel β pankreas.
Kerusakan pada sel β terjadi melalui beberapa proses secara bersamaan, yaitu
melalui oksidasi gugus sulfidril dan pembentukan radikal bebas. Mekanisme
kerusakan pada sel-sel β pankreas terutama menyerang senyawa-senyawa seluler
yang mengandung gugus sulfidril, asam-asam amino sistein, dan protein yang
bereaksi dengan gugus SH. Aloksan bereaksi dengan dua gugus SH yang berikatan
pada bagian sisi dari protein atau asam amino membentuk ikatan disulfida sehingga
menginaktifkan protein yang berakibat pada gangguan fungsi protein tersebut
(Szkuldelski, 2001).
Aloksan memiliki efek yang selektif sitotoksik terhadap β pankreas karena
dapat terakumulasi di sel-sel β sebagai analog yang masuk ke dalam sel melalui
transporter glukosa GLUT2, sehingga menyebabkan tidak berfungsinya pankreas.
Karena kerusakan pada jaringan pankreas menyebabkan terhambatnya sinntesis dan
sekresi insulin sehingga menyebabkan peningkatan kadar glukosa dalam tubuh atau
keadaan hiperglikemia (Lenzen, 2008).
2.5 Hewan Coba Mencit (Mus musculus L.)
Menurut Arrington 1972 dalam Wardani (2016) Taksonomi mencit adalah
sebagai berikut:
20
Kingdom: Animalia
Filum: Chordota
Kelas: Mamalia
Ordo:Rodentia
Famili: Muridae
Genus: Mus
Spesies: Mus musculus L.
Gambar 2.8 Hewan coba mencit (Mus musculus L.)
Mencit (Mus musculus L.) merupakan hewan pengerat yang memiliki
rambut berwarna keabu-abuan atau putih, warna perut sedikit lebih pucat, mata
berwarna hitam, dan kulit berpigmen. Berat badan bervariasi, tetapi umumnya pada
umur empat minggu berat badan mencapai 18-20 gram. Makanan yang diberikan
untuk Mus musculus biasanya berbentuk pelet secara tanpa batas (ad libitum). Air
minum dapat diberikan dengan botol-botol gelas atau plastik dan Mus musculus
dapat minum air dari botol tersebut melalui pipa gelas. Kandang Mus musculus
berupa kotak sebesar kotak sepatu yang terbuat dari bahan plastik (propilen atau
polikarbonat), alumunium atau baja tahan karat. Syarat kandang mudah
dibersihkan, tahan lama, tahan gigitan dan aman (Smith dan Mangkoewidjojo,
1988).
21
Mencit merupakan hewan percobaan yang efisien karena mudah dipelihara
dan tidak memerlukan tempat yang luas. Keuntungan mencit yang tinggi membuat
hewan ini memiliki banyak fungsi diantaranya dimanfaatkan sebagai hewan
percobaan dalam model penelitian penyakit pada manusia seperti diabetes mellitus
(Rakhmadi, dkk., 2009).
2.6 Histologi Pankreas
Gambar 2.9 Organ Pankreas
Organ pankreas terdiri atas eksokrin dan endokrin. Bagian sel-sel endokrin
membentuk pulau Langerhans (Gambar 2.9). Pulau Langerhans dikelilingi oleh
jaringan ikat retikulum dan berada tersebar diantara asini, yaitu bagian eksokrin
pankreas. Diameter pulau Langerhans sebesar 0,1-0,2 mm dan di dalamnya berisi
ribuan sel. Pulau Langerhans tampak lebih pucat dibandingkan dengan area
eksokrin karena tidak memiliki granul zimogen (Gartner, 2012).
Penentukan adanya kerusakan organ pankreas yang tidak tampak oleh
pengamatan makroskopik pada mencit yang terserang diabetes mellitus maka
22
dilakukan pemerksaan histopatologi dengan cara pewarnaan Hematoxylin-Eosin
(HE). Kondisi hiperglikemia menurut Robertson, dkk (2003) dapat menghasilkan
pembentukan spesies oksigen relatif (ROS= reactive oxygen spesies). ROS yang
terbentuk secara berlebihan dapat menyebabkan stres oksidatif dan dapat
memperparah kerusakan sel beta pankreas. Kerusakan sel beta pankreas
menyebabkan tubuh tidak bisa menghasilkan insulin sehingga menyebabkan kadar
glukosa darah meningkat (terjadi keadaan hiperglikemia) (Suarsana, dkk., 2010).
Laju kerusakan sel beta pankreas dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti
konsumsi diet tinggi karbohidrat dan diet tinggi lemak yang akan menyebabkan
peningkatan glukosa darah dan plasma insulin, dislipidemia serta resisten insulin.
Adanya perubahan konsentrasi glukosa akan menyebabkan perubahan pada
metabolisme karbohidrat dan lemak, sehingga memicu terjadinya stress oksidatif,
dan banyak sel mengalami apoptosis termasuk sel beta pankreas. Sel beta pankreas
mempunyai resiko yang paling tinggi terjadinya kerusakan oksidatif serta
meningkatkan sensitifitas terjadinya kematian sel (apoptosis) karena sel beta
pankreas mempunyai kadar enzim antioksidan yang relatif lebih rendah
dibandingkan dengan sel-sel yang lainnya, seperti katalase, gluthation peroksidase
dan superoxide dismutase (Mutiyani, dkk., 2014).
2.7 Metode Ekstraksi dengan Maserasi
Ekstraksi merupakan proses pemisahan suatu zat berdasarkan perbedaan
kelarutannya terhadap dua cairan yang tidak saling larut. Prinsip dari ekstraksi
adalah Like Dissolve Like, bahwa sebuah senyawa polar hanya dapat larut pada
pelarut yang polar dan senyawa non polar larut dalam pelarut non polar. Faktor-
faktor yang berpengaruh terhadap proses ekstraksi adalah lama ekstraksi, suhu,
23
jenis pelarut, titik didih, sifat toksik, dan sifat korosif terhadap peralatan ekstraksi
(Khopkar, 2008).
Maserasi merupakan proses perendaman sampel dalam pelarut organik yang
digunakan pada temperatur ruangan. Penekanan utama pada maserasi adalah
tersedianya waktu kontak yang cukup antara pelarut dan jaringan yang akan
diekstraksi. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi bahan alam karena
dalam perendaman sampel metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan
terlarut dalam pelarut, sehingga senyawa akan terekstrak sempurna (Guenther,
2006).
2.8 Pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE)
Pewamaan Hematoksilin clan Eosin (H&E) adalah jenis pewarnaan rutin
yang paling umum dipakai . Prosedur ini digunakan dalam proses pembuatan
preparat histopatologi dari berbagai spesies hewan sakit atau mati clan memerlukan
pemeriksaan histopatologi untuk peneguhan diagnosis hewan yang bersangkutan
(Muntiha, 2001). Prinsip pewarnaan jaringan adalah berdasarkan pada afinitas
antara bahan cat (zat warna) dengan bahan yang diwarnai (sel/jaringan).
Hematoksilin merupakan zat yang diambil dari ekstrak getah pohon haematoxylon
compechianus yang memiliki afinitas sangat kecil yang perlu dikombinasikan
dengan bahan lain agar dapat mempercepat proses pewarnaan, yaitu mewarnai inti
sel. Eosin merupakan zat warna pembanding (counter stain) yang digunakan untuk
mewarnai sitoplasma sel, agar pengamatan inti nampak dengan jelas (Sudiana, 2004
dalam Putra 2012).
Hasil penampakan pewarnaan menggunakan hematoxylin eosin (HE) dapat
mengetahui Gambaran kerusakan jaringan, diakibatkan oleh benda toksik yang
24
masuk dalam tubuh, meningkatnya radikal bebas. Prinsip pewarnaan hematoxylin
eosin (HE) adalah inti yang bersifat akan menarik zat/larutan yang bersifat basa
sehingga berwarna biru. Sedangkan sitoplasma yang bersifat basa akan menarik
zat/larutan yang bersifat asam sehingga berwarna merah.
Organ pankreas mencit yang normal dapat dilihat pada Gambar 2.10 berikut
(Nubatonis, 2017):
Gambar 2.10 Histologi Pankreas ; A. Pankreas mencit kontrol negatif (normal)
perbesaran 400X; B. Perbesaran 1000X; C. Pankreas mencit kontrol
Positif perbesaran 400X; D. Perbesaran 1000X (Walvekar, dkk.,
2016 dalam Nubatonis, 2017).
Berdasarkan Gambar 2.10 diatas dapat diketahui bahwa dengan metode
pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE), terlihat pulau Langerhans tersebar diseluruh
organ pankreas, berbentuk seperti pulau dan banyak dilalui oleh kapiler kapiler
25
darah yang terlihat lebih pucat dibandingkan dengan sel-sel kelenjar asinar yang
berada disekelilingnya. Secara mikroskopikmorfologi pankreas mencit normal
terdiri dari duktus kelenjar, bagian eksokron dan bagian endokrin. Kelenjar
eksokrin terdiri atas kumpulan-kumpulan sel-sel serous yang berbentuk piramid
dengan sel-sel asinarnya. Bagian sitoplasma dari sel-sel di pulau Langerhans yang
mengambil warna bersifat eosinofilik lemah dan lebih muda pada pewarnaan HE
sehingga sangat mudah untuk dibedakan dengan bagian eksokrin sel-sel asinar serta
daerah pulau Langerhans menunjukkan batas yang jelas. Sel-sel yang terdapat di
dalam pulau Langerhans ada;ah sel alfa dan sel beta. Sel beta berperan dalam proses
sekresi insulin 70% dari sel-sel endokrin pulau langerhans dan terletak di tengah
pulau Langerhans serta mempunyai inti besar dan bulat, sedangkan sel alfa berperan
dalam proses sekresi glukagon (Nubatonis, 2017).
Sel alfa merupakan 15% dari sel-sel endokrin pulau Langerhans dan terletak
sepanjang bagian perifer pulau Langerhans serta mempunyai inti yang berbentuk
tidak teratur dan granula sekretori yang mengandung glukagon. Berdasarkan
Gambar 2.10 bagian C dan D pada kontrol positif yang dinduksi aloksan secara
intraperitonial mampu merusak pulau langerhans, hal tersebut dapat diketahui
melalui histopatologi dari pulau Langerhans yang menunjukkan bahwa sebagian
sel-sel atau hampir seluruhnya di dalam pulau Langerhans mengalami nekrosis
(kematian dini sel sebagai akibat adanya kerusakan sel akut atau trauma), selain itu
batas dari pulau Langerhans yang tidak jelas lagi, sel alfa dan sel beta terlihat tidak
jelas sehinggga sulit untuk membedakan antara sel alfa dan sel beta, warna tampak
pucak atau keruh dan ukuran pulau Langerhans yang mengecil (atrofi) (Nubatonis,
2017).
26
Sandberg dan Philip (2008) menyatakan bahwa pada penderita diabetes
mellitus tipe I ditemukan perubahan-perubahan pada pankreas berupa pengecilan
ukuran pankreas, atrofi pada bagian eksokrin pankreas, dan atrofi sel-sel asinar di
sekitar pulau Langerhans yang mengalami degenerasi. Sedangkan pada diabetes
mellitus tipe II yang terjadi adalah ketidakseimbangan dari sekresi endokrin dan
gangguan kontrol glukosa darah.
27
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini akan dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi hewan Jurusan
Biologi dan Laboratorium Biokimia Jurusan Kimia Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim Malang pada bulan Februari sampai Agustus 2018.
3.2 Alat dan Bahan Penelitian
3.2.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian adalah seperangkat alat gelas,
ayakan 40 mesh, oven, cawan porselen, neraca analitik, kertas saring Whatman,
penangas air, desikator, batang pengaduk, spatula, bola hisap, pipet tetes, tabung
reaksi, rak tabung reaksi, penjepit kayu, shaker, aluminium foil, penyaring Buchner,
rotary evaporator, kandang pemeliharaan mencit berupa kotak berukuran 20 × 30
× 40 cm, sarung tangan, tempat air minum, tempat makan, spuit 1 mL, sonde
lambung, jarum suntik, meja preparat, pisau bedah, gunting, pinset, lemari freezer,
neraca analitik, mikropipet, incubator, spektrofotometer UV-Vis, dan mikroskop.
3.2.2 Bahan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bekatul dari hasil
penggilingan padi beras putih yang diperoleh dari mesin penggilling padi di Desa
Lasem Kab. Gresik Jawa Timur. Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades,
etanol 96%, DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), asam askorbat (Vitamin C),
aloksan, ekstrak bekatul, gas N2, NaCl 0,9%, CMC-Na 0,5%, larutan Netral buffer
28
Formalin 10%, plastik, alkohol 70%, 80%, 90%, alkohol absolut I, absolut II, xylol
dan air hangat.
3.3 Rancangan Penelitian
Penelitian ini dilakukan melalui pengujian eksperimental di laboratorium
untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul beras putih dan
pengaruh terapinya terhadap Gambaran histologi organ pankreas hewan coba
mencit (Mus musculus L.) diabetes mellitus. Sampel bekatul diayak dengan ayakan
40 mesh dan diuji kadar air. Serbuk yang diperoleh dimaserasi menggunakan
pelarut etanol 96% selama 3x24 jam. Ekstrak yang diperoleh dipisahkan dari
pelarutnya menggunakan rotary evaporator dan dialiri dengan gas N2. Ekstrak
pekat yang diperoleh dimasukkan ke dalam gelas vial yang dilapisi alumunium dan
disimpan pada suhu 4°C. Ekstrak selanjutnya, diuji aktivitas antioksidan dengan
DPPH (1,1-difenil-hidrazil) pada konsentrasi ekstrak bekatul sebesar 10, 50, 100,
150, 200, 400 dan 800 ppm. Pembanding yang digunakan adalah asam askorbat
(vitamin C). Selain itu, penentuan nilai aktivitas antioksidan menggunakan
parameter lain yaitu nilai IC50.
Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap
(RAL) dengan menggunakan subjek uji sebanyak 20 ekor mencit (Mus musculus
L.) putih jantan galur BALB/C yang memiliki berat rata-rata 20-30 gram, dibagi
secara acak sederhana menjadi 5 kelompok. Mencit putih jantan galur BALB/C
sebagai hewan coba diinduksi dengan senyawa diabetagonik aloksan 200 mg/kgBB
untuk menjadikan hewan tersebut menderita penyakit diabetes mellitus (Sinata dan
Arifin, 2016). Variasi dosis terapi yang digunakan dikembangkan dari penelitian
Dwinani (2014) yakni 350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB. Pada hari
29
ke-15 dilakukan pembedahan terhadap mencit (Mus Musculus L.) putih jantan galur
BALB/C diabetes, dan dilakukan pengambilan organ pankreas dengan cara satu
irisan kelenjar pankreas pada tiap ulangan dalam satu perlakuan dan untuk
mengetahui gambaran histologinya dilakukan pengamatan menggunakan
mikroskop olympus dengan pembesaran 400x per lapang pandang. Perolehan data
dari beberapa perlakuan tersebut kemudian diolah menggunakan uji statistik one
way ANOVA (Analysis Of Variance) pada tingkat kepercayaan 5% yang
selanjutnya dapat diketahui pengaruh perlakuan terhadap gambaran histologinya.
3.4 Tahapan Penelitian
Penelitian ini dirancang dengan tahapan sebagai berikut:
1. Preparasi Sampel
2. Penentuan Kadar Air
3. Ekstraksi Bekatul menggunakan Metode Maserasi
4. Uji Aktivitas Antioksidan menggunakan Metode DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil)
5. Persiapan Hewan Coba dan Pengkondisian Mencit Diabetes Mellitus
6. Terapi variasi dosis terhadap hewan coba (350 mg/KgBB, 400 mg/KgBB
dan 500 mg/KgBB)
7. Pengambilan Organ Pankreas untuk mengetahui Gambaran Histologi
Pankreas
8. Analisis data
30
3.5 Prosedur Penelitian
3.5.1 Preparasi Sampel
Bekatul yang digunakan dalam penelitian ini adalah bekatul dari jenis beras
putih hasil penggilingan padi. Bekatul sebanyak 250 gram diayak dengan ayakan
ukuran 40 mesh dan dibungkus dengan alumunium foil. Setelah itu, sampel
diinkubasi menggunakan oven selama 3 menit pada suhu 102 °C, kemudian
didinginkan pada suhu ruang. Sampel kering disimpan pada suhu 4 °C untuk
analisis lebih lanjut (Moko, dkk., 2014).
3.5.2 Penentuan Kadar Air secara Thermogravimetri
Sampel yang telah dipreparasi, selanjutnya dilakukan penetapan kadar air
pada sampel bekatul. Disiapkan cawan porselen kemudian di oven pada suhu 100-
105 °C sekitar 15 menit untuk menghilangkan kadar air yang terdapat pada cawan
porselen. Kemudian, cawan porselen kering disimpan dalam desikator selama 10
menit, kemudian ditimbang berat cawan porselen kosong hingga diperoleh berat
cawan yang konstan. Selanjutnya, ditimbang dan dimasukkan 5 gram sampel
bekatul ke dalam cawan porselen dan di oven pada suhu 100-105 °C sekitar 15
menit untuk menghilangkan kadar air yang terdapat pada sampel. Kemudian sampel
didinginkan dalam desikator selama 10 menit dan ditimbang. Selanjutnya sampel
dipanaskan kembali dalam oven sekitar 15 menit dan didinginkan dalam desikator
selama 10 menit dan ditimbang kembali hingga diperoleh berat konstan. Diulang
perlakuan ini hingga diperoleh berat konstan. Kadar air dalam bekatul dapat
dihitung menggunakan persamaan (3.1) dengan keterangan a = bobot cawan
kosong, b = bobot sampel + cawan sebelum dikeringkan, c=bobot cawan + sampel
setelah dikeringkan (AOAC, 1984):
31
Kadar air = (𝑏−𝑐)
(𝑏−𝑎)𝑥 100%
3.5.3 Ekstraksi bekatul
Ekstraksi bekatul menggunakan metode maserasi. Masing-masing 40 gram
bekatul direndam menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 240 mL.
Perbandingan bahan dengan pelarut adalah 1:6 b/v (Widarta, 2013). Kemudian di-
shaker selama 24 jam dan disaring menggunakan penyaring vacum. Ampas yang
diperoleh dimaserasi kembali sebanyak dua kali dengan perlakuan yang sama.
Filtrat bekatul dipekatkan dengan rotary evaporator. Kemudian, dialiri dengan gas
N2 untuk menghilangkan pelarut yang masih tersisa pada filtrat etanol. Ekstrak
pekat dimasukkan ke dalam gelas vial yang dilapisi aluminium dan disimpan pada
suhu 4°C (Moko dkk., 2014). Kemudian dihitung rendemen dari ekstrak bekatul
dengan rumus berikut (Harborne, 1987).
%Rendemen =𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙× 100% ........................................................3.2
3.5.4 Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil)
3.5.4.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Dimasukkan etanol 96% sebanyak 3 mL ke dalam kuvet, kemudian
ditambahkan larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1 mL. Selanjutnya dicari λmaks larutan
pada rentangan panjang gelombang 500-600 nm dan dicatat hasil pengukuran untuk
digunakan pada tahap selanjutnya (Dewi, dkk., 2007).
3.5.4.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pada Sampel
Absorbansi kontrol: larutan DPPH dengan konsentrasi 0,2 mM dipipet
sebanyak 1 mL, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan
32
etanol 96% sebanyak 3 mL. Tabung reaksi ditutup dengan alumunium foil, lalu
diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit (Dewi, dkk., 2007). Setelah itu larutan
dimasukkan ke dalam kuvet hinga penuh dan diukur absorbansinya dengan
menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada λmaks yang didapatkan pada tahap
sebelumnya.
Absorbansi sampel: Sampel ekstrak kasar dilarutkan dalam etanol 95%
dengan konsentrasi 10, 50, 100, 150, 200, 400 dan 800 ppm. Disiapkan tabung
reaksi untuk masing-masing ekstrak kasar dan diisi dengan 3 mL ekstrak dan
ditambahkan DPPH 0,2 mM sebanyak 1 mL (perbandingan larutan DPPH : ekstrak
yang dilarutkan dengan konsentrasi tertentu 1:3). Setelah itu larutan ditutup dengan
alumunium foil dan diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit, kemudian
dimasukkan ke dalam kuvet hingga penuh dan diukur absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis pada λmaks yang telah didapatkan sebelumnya (Dewi,
dkk., 2007). Perlakuan tersebut diulangi sebanyak tiga kali. Pembanding asam
askorbat (vitamin C) diperlakukan seperti sampel.
Data absorbansi yang diperoleh dari masing-masing konsentrasi ekstrak
dihitung nilai persen (%) aktivitas antioksidannya. Persentase aktivitas antioksidan
dihitung dengan menggunakan rumus (Indranila dan Ulfah, 2015):
% Aktivitas Antioksidan = 𝐴𝑏𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙−𝐴𝑏𝑠 𝑃𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛
𝐴𝑏𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 x 100%……….(3.3)
Keterangan: Abs kontrol = Absorbansi larutan DPPH 0,2 mM
Abs perlakuan = Absorbansi konsentrasi ekstrak etanol bekatul atau
baku pembanding vitamin C
33
3.5.5 Persiapan Hewan Coba dan Pengkondisian Mencit Diabetes mellitus
Mencit diaklimatisasi di laboratorium selama 1 minggu dalam kandang
khusus untuk menyeragamkan cara hidup, makan dan kondisi kandang percobaan,
seluruh mencit diberi pakan komersial dan air secara ad libitum. Sebelum diinduksi
dengan diabetogenik aloksan, mencit terlebih dahulu diukur kadar glukosa dalam
darah dengan pengambilan sampel melalui ujung ekor yang dipotong sedikit,
diteteskan pada kapiler trip dan diukur dengan alat glukometer.
Penentuan jumlah mencit pada setiap kelompok dihitung berdasarkan rumur
federer: (n-1)(t-1) ≥ 15, dimana n menunjukkan jumlah ulangan minimal dari tiap
perlakuan dan t menunjukkan jumlah perlakuan (Jusman & Halim, 2009).
Penelitian ini menggunakan 5 kelompok. Penentuan jumlah hewan uji dan
pembagian kelompok adalah sebagai berikut (yayasan pengembangan obat bahan
alam phyto medica, 1993):
(n-1)(t-1) ≥ 15
(n-1)(6-1) ≥ 15
5n ≥ 20
n ≥ 4
Berdasarkan perhitungan tersebut maka jumah ulangan minimal yang
diperlukan adalah 4 ekor mencit untuk setiap kelompok perlakuan. Sehingga jumlah
minimal seluruh sampel yang digunakan adalah 20 ekor mencit. Ketentuan dari
tiap-tiap kelompok adalah sebagai berikut:
1. Kelompok kontrol normal, yaitu kelompok tanpa induksi aloksan
dengan pemberian CMC-Na 0,5% secara peroral.
34
2. Kelompok kontrol positif, yaitu diperlakukan dengan pemberian
aloksan 200 mg/KgBB + NaCl 0,9% tanpa terapi ekstrak bekatul.
3. Kelompok perlakuan dosis 1, yaitu mencit diabetes mellitus dan
diterapi dengan ekstrak bekatul dosis 350 mg/KgBB + CMC-Na 0,5%
secara peroral.
4. Kelompok perlakuan dosis 2, yaitu mencit diabetes mellitus dan
diterapi dengan ekstrak bekatul dosis 400 mg/KgBB + CMC-Na 0,5%
secara peroral.
5. Kelompok perlakuan dosis 3, yaitu mencit diabetes mellitus dan
diterapi dengan ekstrak bekatul dosis 500 mg/KgBB + CMC-Na 0,5%
secara peroral.
Sebelum pemberian aloksan, mencit dipuasakan selama 18 jam. Kemudian
aloksan yang akan diinjeksikan diambil dari larutan stok. Volume yang diambil
disesuaikan dengan berat badan mencit yang akan diinjeksi. Digunakan dosis 200
mg/KgBB yang dilarutkan dalam 1 mL NaCl 0,9% untuk 1 kali injeksi (Sinata dan
Arifin, 2016). Cara penginjeksian aloksan menggunakan langkah injeksi
interpritonial, yaitu mencit diposisikan menghadap kearah frontal hingga terlihat
bagian abdomennya. Pada bagian atas abdomen, mencit disemprotkan dengan
alkohol 70%, kulit dicubit hingga terasa bagian ototnya. Kemudian spuit
dimasukkan pada bagian abdomen dan dicoba digerakkan, apabila terasa berat,
berarti sudah masuk pada daerah intraperitonial. Setelah yakin pada daerah
intraperitonial maka segera diinjeksikan aloksan secara perlahan dan abdomen
mencit disemprot dengan alkohol 70% kembali (Nahari, 2015).
35
3.5.6 Terapi Hewan Coba
Mencit diabetes mellitus hasil induksi aloksan selanjutnya diterapi dengan
variasi dosis ekstrak bekatul. Perlakuan kelompok D1, D2 dan D3 diberikan ekstak
etanol bekatul dengan dosis yang berbeda yaitu 350 mg/KgBB (KD1), 400
mg/KgBB (KD2) dan 500 mg/KgBB (KD3) yang diberi perlakuan secara oral
menggunakan sonde lambung dengan pencekokan 1 kali sehari selama 14 hari
berturut-turut. Sedangkan untuk kelompok kontrol negatif hanya diberikan suspensi
CMC-Na 0,5% tanpa ekstrak etanol bekatul.
3.5.7 Pengambilan Pankreas dan Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE)
3.5.7.1 Pengambilan Organ Pankreas
Mencit terlebih dahulu dilakukan dislokasi leher dengan cara bagian pundak
mencit ditekan menggunakan benda tumpul dan tarik bagian ekor mencit, pastikan
saat melakukan penarikan hanya satu kali agar tidak menyakiti mencit. Skalpel dan
alat bedah disiapkan untuk membantu mengambil organ pankreas. Setelah mati,
mencit diletakkan pada papan fiksasi dan ditata pada posisi ventral diatas. Organ
pankreas diambil masing-masing 1 irisan kelenjar pankreas tiap ulangan dalam satu
perlakuan selanjutnya direndam dengan larutan buffer formalin 10% sebagai tahap
fiksasi pembuatan preparat histopatologi (Pasaribu, dkk., 2015).
3.5.7.2 Pembuatan Preparat Histopatologi dan Pewarnaan Hematoxylin Eosin
(HE) (Pasaribu dkk., 2015)
Mencit kelompok kontrol negatif, kontrol positif, dan hasil terapi ekstrak
bekatul masing-masing dibedah setelah terap terakhir yaitu pada hari ke-15.
Langkah-langkah pembuatan preparat histopatologi adalah dilakukan dengan cara
organ pankreas difiksasi dengan menggunakan larutan buffer formalin 10% selama
36
24 jam, kemudian dipotong dan dimasukkan ke dalam tempat spesimen yang
terbuat dari plastik. Selanjutnya dilakukan proses dehidrasi. Jaringan pankreas
dimasukkan ke dalam alkohol konsentrasi bertingkat yaitu alkohol 70%, 80%, 90%,
alkohol absolut I, absolut II masing-masing 2 jam. Kemudian jaringan pankreas
dimasukkan ke dalam paraffin cair dengan suhu 56ºC selama 2 jam sebanyak 2 kali.
Jaringan kemudian diambil menggunakan pinset dan dilakukan pemblokan
menggunakan paraffin blok. Blok-blok paraffin tersebut kemudian dipotong tipis
menggunakan mikrotom dengan ketebalan 4-5μm. Hasil potongan diapungkan
dalam air hangat bersuhu 60°C untuk meregangkan agar jaringan tidak berlipat.
Sediaan kemudian diangkat dan diletakkan dalam gelas objek untuk dilakukan
pewarnaan Hematoxylin dan Eosin (HE).
Tahapan pewarnaan HE adalah sebagai berikut, preparat dalam gelas objek
direndam dalam larutan xylol dengan konsentrasi bertingkat yaitu xylol I, xylol II,
dan xylol III masing-masing selama 5 menit. Kemudian preparat direndam dalam
alkohol 100% I dan II masing-masing selama 5 menit, selanjutnya dicelupkan
dalam aquades dengan cara mengangkat dan menurunkannya. Kemudian direndam
dalam larutan Hematoxylin selama 15 menit. Preparat kemudian dicelupkan ke
dalam acid alkohol 1% selama 7-10 celupan lalu direndam dalam aquades seama
15 menit, kemudian direndam dalam larutan eosin selama 2 menit. Selanjutnya
preparat direndam dengan alkohol absolut I dan II masing-masing selama 3 menit
dan dalam xylol IV dan V masing-masing selama 5 menit. Preparat selanjutnya
dikeringkan dan dilakukan mounting menggunakan entelan. Preparat siap
dilakukan pengamatan.
37
Pengamatan terhadap setiap preparat dilakukan menggunakan mikroskop
olympus. Pada setiap pulau langerhans yang dipilih dihitung jumlah sel yang berada
didalamnya tanpa melihat tipe sel yang ada didalamnya karena teknik pewarnaan
HE tidak dapat membedakkan jenis sel yang ada secara spesifik (Sumarsono, dkk.,
2014). Penghitungan sel-sel pankreas dilakukan per lapang pandang pada
pembesaran 400x (Suarsana, dkk., 2010).
3.5.8 Analisis Data
Metode analisis yang digunakan adalah dengan menginterpretasikan data
baik berupa Gambar, Tabel, dan grafik. Data analisis antioksidan yang diperoleh
berupa absorbansi-absorbansi dari kontrol, sampel, dan pembanding asam askorbat
(Vitamin C). Setelah didapatkan data persen (%) aktivitas antioksidan pada masing-
masing konsentrasi sampel dan pembanding. Selanjutnya, data persen (%) aktivitas
antioksidan diolah menggunakan GraphPad Prism8 untuk mengetahui nilai IC50
sampel dan pembanding. Sedangkan data gambaran histologi pankreas dianalisis
menggunakan program Statistical Analysis Software (SPSS) secara statistik
menggunakan one way ANOVA pada tingkat kepercayaan 5% dan apabila terdapat
perbedaan nyata antar perlakuan dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan.
38
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Preparasi Sampel
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah bekatul beras putih
lokal sebesar 250 gram yang diperoleh dari penggilingan di daerah Lasem, Gresik
Jawa Timur. Proses preparasi diawali dengan pengayakan sampel bekatul
menggunakan ayakan berukuran 40 mesh. Hal tersebut bertujuan untuk
menyeragamkan ukuran sampel, memperluas permukaan sampel sehingga interaksi
antara sampel dan pelarut menjadi lebih efektif serta mempermudah kelarutan
komponen bioaktif dan meningkatkan rendemen ekstraksi. Kemudian sampel
diinkubasi dengan menggunakan oven selama 3 menit pada suhu 102 ºC. Hal
tersebut merupakan bentuk stabilisasi bekatul yang bertujuan untuk inaktivasi
enzim lipase agar sampel tidak mengalami kerusakan dan dapat bertahan lama.
Menurut Siswanti, dkk (2018) kandungan lemak pada bekatul yang cukup tinggi
menyebabkan bekatul mudah mengalami kerusakan yang disebabkan oleh adanya
aktivitas mikroba maupun enzim lipase yang dapat menghidrolisa trigliserida
sehingga menghasilkan asam lemak dan gliserol yang sangat mudah dioksidasi.
Bekatul kering diperoleh dengan karakteristik warna coklat kekuning-kuningan.
Hasil preparasi bekatul dapat dilihat pada Gambar 4.1.
39
Gambar 4. 1 Sampel Bekatul
4.2 Analisis Kadar Air
Penentuan kadar air merupakan salah satu analisis penting dan paling luas
dilakukan dalam pengolahan dan pengujian bahan, karena kadar air berkaitan
dengan kualitas dan stabilitas bahan. Analisis kadar air pada sampel bekatul
dilakukan dengan menggunakan metode Thermogravimetri. Prinsip metode
thermogravimetri yaitu dengan menguapkan air yang terdapat dalam bahan melalui
proses pemanasan. Penguapan air yang terdapat dalam sampel bekatul dilakukan
pada suhu 100-105ºC hingga diperoleh berat konstan. Selisih kadar air sebelum dan
setelah pengeringan merupakan kadar air yang menguap. Menurut Indah, dkk
(2017) apabila kadar air masih tinggi maka hal tersebut merupakan media yang baik
untuk pertumbuhan mikroba utamanya jenis kapang, sehingga perlu dilakukan
stabilisasi pada sebuah bahan. Berdasarkan hasil penelitian, kadar air sampel
bekatul diperoleh sebesar 1,211% (b/b) (lampiran 5). Kadar air yang diperoleh telah
memenuhi kriteria menurut BPOM (2014) tentang persyaratan mutu obat
tradisional bahwa kadar serbuk simplisia adalah ≤ 10%. Menurut Ketaren (1986)
semakin rendah kandungan kadar air pada simplisia maka semakin tinggi nilai
rendemen ekstrak yang berarti bahwa interaksi pelarut dan sampel bekerja
maksimal. Sedangkan menurut Winarno (1997) dalam Fauziyah (2011) kadar air
umumnya berbanding lurus dengan aktivitas air (aw), yaitu semakin kecil kadar air,
40
maka semakin kecil aw sehingga semakin awet bahan pangan tersebut. Nilai aw yang
rendah akan menghambat pertumbuhan mikroba pada bahan pangan sehingga
bahan pangan menjadi lebih awet.
4.3 Ekstraksi Bekatul
Ekstraksi adalah proses pemisahan suatu zat berdasarkan perbedaan
kelarutannya terhadap dua cairan yang tidak saling larut yang berbeda, biasanya air
dan yang lainnya pelarut organik. Pada penelitian ini, metode ekstraksi yang
digunakan adalah maserasi karena metode maserasi dapat menghindari rusaknya
senyawa-senyawa yang bersifat termolabil (Mukhriani, 2014). Maserasi dilakukan
dengan cara merendam sampel uji dalam cairan pada temperatur ruang.
Ekstraksi maserasi bekatul dilakukan menggunakan pelarut etanol 96%
dengan perbandingan 1:6 (b/v). Ulfa (2016) dan Syafitri (2016) melaporkan bahwa
bekatul mengandung senyawa alkaloid, tanin, saponin, steroid, triterpenoid dan
flavonoid. Oleh karena senyawa flavonoid dan tanin bersifat polar, alkaloid bersifat
semi polar, sedangkan steroid dan triterpenoid bersifat non polar. Sehingga etanol
merupakan pelarut yang cocok digunakan sebagai pelarut untuk proses ekstraksi
bekatul. Hal ini sesuai menurut Sa’adah (2015) bahwa etanol merupakan pelarut
yang bersifat semi polar, dapat membentuk ikatan hidrogen antara molekul-
molekulnya. Sehingga dapat menarik seluruh senyawa aktif yang terdapat dalam
bekatul, baik senyawa polar, semi polar maupun non polar. Dalam maserasi, pelarut
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel, zat aktif dalam rongga
sel karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan di
luar sel, maka larutan dengan konsentrasi lebih tinggi akan terdesak keluar.
Peristiwa ini berulang sehingga terjadi kesetimbangan antara konsentrasi senyawa
41
dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman (Hargono, 1986 dalam
Sundaryono, dkk, 2016).
Ekstraksi maserasi dilakukan dengan merendam sampel selama 24 jam dan
dibantu proses pengadukan menggunakan shaker dengan kecepatan 120 rpm
(rotation per minutes) untuk memaksimalkan interaksi antara pelarut dengan
senyawa yang terdapat dalam sampel, sehingga pelarut mampu menembus dinding
sel dan masuk ke dalam rongga sel dan zat aktif dalam sampel dapat terdesak keluar
dan menghasilkan ekstrak yang optimum. Proses perendaman dapat meluruhkan
susunan sel dalam tanaman sehingga zat aktif yang terkandung di dalam sampel
akan terlarut dalam pelarut. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel
menggunakan corong Buchner karena proses penyaringan menjadi lebih cepat
karena memisahkan endapan dari pelarutnya dari residunya dengan cara menyedot
udara di dalam corong dengan pump Buchner atau pompa vakum sehingga tekanan
didalamnya lebih kecil daripada yang didalamnya sehingga filtrat dapat mengalir
dengan cepat. Filtrat yang diperoleh berwarna coklat kekuningan. Ampas hasil
penyaringan pertama dilakukan remaserasi selama 48 jam (±2 hari) dengan
pengadukan menggunakan shaker pada kecepatan 120 rpm dan disaring
menggunakan corong Buchner. Filtrat kedua diperoleh berwarna kekuningan.
Filtrat hasil ekstraksi dipekatkan dengan rotary evaporator vacum yang
bertujuan untuk memisahkan antara zat pelarut dengan minyak bekatul berdasarkan
perbedaan titik didih. Prinsip utama dari rotary evaporator terletak pada penurunan
tekanan pada labu alas bulat dan pemutaran labu alas bulat hingga berguna agar
pelarut dapat menguap lebih cepat dengan ketentuan bahwa pelarut yang memiliki
titik didih lebih rendah dibandingkan minyak bekatul akan menguap terlebih dahulu
42
karena pemanasan dan akan diembunkan oleh kondensor yang selanjutnya akan
dialirkan ke wadah penampung limbah, dari proses pemisahan ini akan didapat
ekstrak pekat dari minyak bekatul beserta zat-zat pengotor. Proses evaporasi
dilakukan hingga didapatkan ekstrak etanol 96% bekatul kental. Hasil rendemen
ekstraksi maserasi diperoleh sebesar 14,65% (lampiran 6) dan berwarna hijau
kecoklatan. Hasil ekstraksi maserasi etanol 96% bekatul dapat dilihat pada Gambar
4.2.
Gambar 4.2 Ekstrak etanol 96% bekatul
4.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan Pada Sampel
4.4.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan untuk mengetahui
besarnya panjang gelombang yang dibutuhkan oleh larutan DPPH untuk mencapai
serapan maksimal. Menurut Rohman dan Gandjar (2007) pengukuran sampel harus
dilakukan pada panjang gelombang maksimum agar kepekaannya lebih dan
meminimalkan kesalahan. Hasil penentuan panjang gelombang maksimum larutan
DPPH 0,2 mM dapat ditunjukkan pada Gambar 4.3:
43
Gambar 4.3 Spektra UV-Vis larutan DPPH 0,2 mM
Berdasarkan spektra pada Gambar 4.3, panjang gelombang (λ) maks DPPH
0,2 mM pada penelitian ini adalah 514,9 nm dengan absorbansi 0,241 yang
memiliki warna ungu. Panjang gelombang maksimum yang diperoleh tidak jauh
berbeda dengan penelitian yang telah dilakukan oleh Kuntorini dkk (2010) dan
Hartati dkk (2015) bahwa panjang gelombang maksimum DPPH adalah 515 nm.
Hal ini sesuai menurut Prakash (2001) bahwa panjang gelombang maksimum
DPPH dengan menggunakan pelarut etanol adalah 515 – 520 nm. Panjang
gelombang maksimum yang diperoleh akan digunakan untuk uji aktivitas
antioksidan pada ekstrak etanol 96% bekatul.
4.4.2 Pengukuran Aktivitas Antioksidan Pada Sampel
Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan pada ekstrak etanol 96%
bekatul. Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode DPPH.
Metode ini menggunakan radikal DPPH sebagai radikal yang akan bereaksi dengan
senyawa antioksidan. Kontrol yang digunakan pada pengukuran aktivitas
antioksidan yaitu larutan DPPH 0,2 mM yang dilarutkan pada pelarut etanol 95%.
44
Kontrol digunakan sebagai pembanding pada saat pengukuran kapasitas
antioksidan pada sampel dan mengetahui absorbansi radikal DPPH pada saat
sebelum direduksi oleh sampel. DPPH memiliki warna komplementer ungu karena
memiliki elektron yang tidak berpasangan.
Sampel ekstrak etanol 96% bekatul dengan variasi konsentrasi yang diuji
yaitu 10, 50, 100, 150, 200, 400 dan 800 ppm, ditambahkan larutan DPPH dan
diinkubasi pada suhu 37ºC selama 30 menit untuk mengoptimalkan terjadinya
pengikatan antara senyawa antioksidan dalam menangkap elektron yang tidak
berpasangan dari radikal bebas. Berdasarkan penelitian Irianti, dkk (2016)
menyatakan bahwa DPPH memiliki kestabilan absorbansi pada menit ke-30 sampai
40. Pada waktu tersebut merupakan waktu yang dibutuhkan oleh radikal DPPH
untuk bereaksi dengan senyawa antioksidan. Setelah dilakukan inkubasi selama 30
menit diketahui ekstrak etanol 96% bekatul mengalami perubahan warna.
Perubahan warna yang terjadi yaitu dari warna ungu menjadi kekuningan. Hal ini
sesuai menurut Molyneux (2004) DPPH yang bereaksi dengan antioksidan akan
mengalami perubahan warna dari ungu menjadi kuning yang disebabkan oleh
antioksidan akan bereaksi dengan DPPH yang menstabilkan radikal bebas dan
mereduksi DPPH. Kemudian DPPH bereaksi dengan atom hidrogen dari senyawa
peredam radikal bebas membentuk DPPH-H yang lebih stabil.
Perubahan warna DPPH dari ungu menjadi kuning juga disebabkan karena
atom N pada radikal DPPH memiliki elektron tidak berpasangan menyebabkan
terjadinya transisi n-π*. Keadaan dasar pada transisi ini lebih bersifat polar
dibandingkan keadaan tereksitasi sehingga ketika DPPH direaksikan dengan
senyawa antioksidan maka akan membentuk ikatan hidrogen antara elektron dari
45
atom N dan atom H dari antioksidan. Ikatan hidrogen pada transisi n-π* akan
mempunyai energi yang lebih besar sehingga menyebabkan pergeseran ke arah
panjang gelombang yang lebih pendek (pergeseran hipsokromik). Hal ini
meyebabkan warna DPPH yang awalnya berwarna ungu menjadi DPPH-H
yang berwarna kuning. Berdasarkan hal tersebut, berubahnya warna dari larutan
esktrak etanol 96% bekatul dari ungu menjadi kuning menunjukkan bahwa ekstrak
etanol 96% bekatul memiliki potensi sebagai antioksidan yang ditunjukkan dengan
perubahan warna menjadi kekuningan.
Selanjutnya pengujian antioksidan sampel dilakukan menggunakan
spektrofotometri UV-Vis dan diukur pada panjang gelombang 514,9 nm. Selisih
absorbansi kontrol dengan absorbansi sampel yang telah direduksi oleh DPPH
merupakan sisa radikal DPPH. Mekanisme reaksi DPPH dengan senyawa
antioksidan ditunjukkan pada Gambar 4.4.
N
N*
NO2
O2N NO2
RH
N
N
NO2
O2N NO2
H
R*
Gambar 4.4 Mekanisme reaksi DPPH dengan antioksidan (Prakash, dkk., 2001)
Hasil pengukuran antioksidan menggunakan spektrofotometri UV-Vis
diperoleh berupa absorbansi dari kontrol dan sampel yang selanjutnya digunakan
46
untuk menentukan persen (%) aktivitas antioksidan. Hasil persentase ekstrak etanol
96% bekatul ditunjukkan pada Gambar 4.5.
Gambar 4.5 Grafik aktivitas antioksidan ekstrak etanol 96% bekatul
Berdasarkan Gambar 4.5 dapat diketahui bahwa semakin besar konsentrasi
ekstrak maka semakin besar pula nilai % aktivitas antioksidannya. Menurut Rahayu
dkk (2010) persen (%) aktivitas antioksidan menunjukkan kemampuan suatu
senyawa antioksidan dalam menghambat radikal bebas yaitu banyaknya atom
hidrogen dari suatu senyawa antioksidan menangkap radikal DPPH sehingga
tereduksi menjadi DPPH-H yang lebih stabil.
Sampel pembanding yang digunakan yaitu vitamin C. Pada penelitian ini
diperoleh hasil persentase aktivitas antioksidan vitamin C pada konsentrasi 800
ppm sangat aktif dalam meredam radikal DPPH yaitu sebesar 96,098% lebih besar
dibandingkan ekstrak etanol bekatul yaitu 81,830%. Selain persen (%) aktivitas
antioksidan, parameter lain yang digunakan adalah IC50 (Inhibitation Concentration
0
20
40
60
80
100
120
10 50 100 150 200 400 800
% A
kti
vit
as
An
tio
ksi
da
n
Konsentrasi (ppm)
Pembanding (Vitamin C)
Ekstrak Etanol 96%
Bekatul
47
50%) merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi ekstrak (mg/ml) yang
mampu menghambat proses oksidasi sebesar 50%. Persen (%) aktivitas antioksidan
yang diperoleh dianalisis menggunakan persamaan regresi non linier dengan
GraphPad Prism 8 software sehingga didapatkan nilai IC50. Data nilai IC50
ditunjukkan pada Tabel 4.1.
Tabel 4. 1Nilai IC50 aktivitas antioksidan ekstrak bekatul dan pembanding
No Sampel IC50 (ppm)
1 Ekstrak Etanol Bekatul 185,7
2 Asam Askorbat (Vitamin C) 0,6100
Berdasarkan Tabel 4.1 diketahui bahwa nilai IC50 ekstrak etanol bekatul
lebih besar daripada nilai IC50 asam askorbat. Hal tersebut menunjukkan bahwa
ekstrak etanol 96% bekatul memliki kemampuan yang lebih rendah dibandingkan
dengan asam askorbat dalam menghambat aktivitas radikal bebas DPPH. Menurut
Molyneux (2004) jika nilai IC50 suatu ekstrak berada dibawah 50 ppm maka
aktivitas antioksidannya kategori sangat kuat, nilai IC50 berada diantara 50-100 ppm
berarti aktivitas antioksidannya kategori kuat, nilai IC50 berada di antara 100-150
ppm berarti aktivitas antioksidannya kategori sedang, nilai IC50 berada di antara
150-200 ppm berarti aktivitas antioksidannya kategori lemah, sedangkan apabila
nilai IC50 berada diatas 200 ppm maka aktivitas antioksidannya dikategorikan
sangat lemah. Sehingga dapat diketahui bahwa ekstrak etanol 96% bekatul memiliki
aktivitas antioksidan yang termasuk dalam kategori lemah.
Hasil aktivitas antioksidan yang diperoleh berbeda dan lebih baik
dibandingkan dengan hasil penelitian dari Ulfa (2016) yang melaporkan bahwa
48
nilai IC50 bekatul beras dengan pelarut etanol 99% sebesar 437 mg/L dan positif
mengandung senyawa steroid dan triterpenoid. Syafitri (2016) juga melaporkan
bahwa aktivitas antioksidan ekstrak etanol bekatul memiliki nilai IC50 sebesar 29,27
µg/mL dan positif mengandung senyawa alkaloid, tanin, saponin, steroid dan
flavonoid. Diketahui pada hasil penelitian ini menghasilkan nilai IC50 bekatul beras
putih lokal dengan pelarut etanol 96% sebesar 185,7 ppm (lampiran 7) dan positif
mengandung saponin, tanin, steroid dan alkaloid.
4.5 Potensi Ekstrak Etanol 96% Bekatul Sebagai Antidiabetes Terhadap
Mencit (Mus Musculus, L.) Diabetes Mellitus
4.5.1 Pengkondisian Mencit Diabetes Mellitus
Penelitian ini dilakukan secara in-vivo menggunakan hewan coba mencit
putih jantan (Mus musculus L.) galur BALB/C yang berumur 2-3 bulan dengan
berat badan 20-30 gram, yang sebelumnya diaklimitisasi selama satu minggu agar
dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan baru. Pada penelitian ini mencit yang
digunakan sebanyak 20 ekor yang dibagi menjadi 5 kelompok dengan masing-
masing kelompok terdiri dari 4 ekor mencit. Masing-masing diberi makan dan
minum setiap hari secara ad libitum, dan mengganti sekam setiap alas sekam basah
(± 2 hari).
Penelitian ini terdiri dari 5 kelompok diantaranya, kelompok kontrol Normal
(KN) adalah kelompok yang tidak diberikan perlakuan (hanya aquades), kelompok
kontrol positif (KP) adalah kelompok mencit yang diinduksi aloksan, kelompok
kontrol dosis (KD 1-3) adalah kelompok mencit yang diinduksi aloksan dan diterapi
dengan ekstrak etanol 96% bekatul dengan variasi dosis 350 mg/KgBB; 400
mg/KgBB; 500 mg/ KgBB. Kelompok kontrol positif dan semua kelompok kontrol
49
dosis diberikan agen diabetagonik untuk induksi diabetes mellitus. Agen
diabetagonik yang digunakan adalah aloksan.
Aloksan termasuk bahan kimia yang digunakan sebagai agen diabetagonik
pada binatang percobaan. Pembuatan larutan aloksan dilakukan dalam keadaan
fresh karena aloksan termasuk dalam bahan yang mudah teroksidasi dan tidak stabil
sehingga perlakuan induksi terhadap mencit dengan warna larutan berwarna merah
jambu dilakukan sesegera mungkin. Apabila larutan aloksan telah teroksidasi maka
larutan aloksan akan mengalami perubahan warna dari merah jambu menjadi
bening. Dosis aloksan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 200 mg/kgBB
dan mencit dikategorikan diabetes apabila kadar glukosa ≥ 200 mg/dL. Pemilihan
dosis induksi aloksan sesuai dengan penelitian Sinata dan Arifin (2016) yang telah
melakukan perlakuan induksi aloksan monohidrat terhadap mencit putih jantan
secara intraperitonial dengan dosis 200 mg/kgBB dan tidak menyebabkan kematian
terhadap mencit.
Mekanisme aloksan merusak jaringan sel didahului dengan penyerapan oleh
sel β Langerhans yang menyebabkan pembentukan oksigen reaktif. Diawali dengan
reduksi aloksan menjadi asam dialurat, yang kemudian mengalami reoksidasi
menjadi aloksan, menentukan siklus redoks untuk membangkitkan radikal
superoksida. Pembentukan ROS (reactive oxygen spesies) dimulai dengan
penyerapan cepat oleh oksigen, aktivasi NADPH oksidase dan produksi radikal
anion superoksida.
2O2 + NADPH oksidase 2O2•− + NADP+ + H+
50
Kemudian radikal anion superoksida (O2•−) dengan cepat dikonversi
menjadi hidrogen peroksida (H2O2) oleh SOD (super okside dismutase) (Nimse dan
Pal, 2015).
2O2•−+ 2H+ SOD H2O2 + O2
Radikal superoksida yang terbentuk dapat membebaskan ion ferri dari
ferinitin, dan mereduksi menjadi ion ferro. Adanya ion ferro dan hidrogen peroksida
membentuk radikal hidroksil yang sangat reaktif melalui reaksi fenton (szkuldezki,
2001).
Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH− + OH•
Radikal hidroksil (OH•) merupakan suatu molekul yang sangat reaktif
dalam upaya untuk mendapatkan pasangan elektron. Radikal hidroksil
menyebabkan fragmentasi DNA nukleus, kemudian terjadi aktivasi poli (ADP-
Ribosa) sintetase, penyusutan nikotinamid adenine dinukleotida (NAD) intrasel,
dan menimbulkan kematian sel (Takasu, dkk., 1991 dalam Widowati, dkk., 2004).
Kerusakan dan kematian sel pada pankreas menyebabkan sel mengalami disfungsi
sehingga menyebabkan sekresi dan sensitivitas insulin mengalami penurunan
mengakibatkan kadar glukosa darah meningkat (hiperglikemia).
4.5.2 Pengaruh Esktrak Etanol 96% Bekatul Terhadap Histologi Pankreas
Mencit (Mus Musculus L.) Diabetes Mellitus
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh dari ekstrak etanol 96%
bekatul (Rice Bran) terhadap pankreas mencit dalam berbagai variasi dosis yaitu
350 mg/KgBB; 400 mg/KgBB; 500 mg/KgBB. Pankreas merupakan sebuah organ
yang memiliki 2 fungsi utama menjalankan fungsi eksokrin dan endokrin. Eksokrin
adalah kelenjar yang mengeluarkan cairan berupa enzim. Sedangkan endokrin
51
berperan dalam menghasilkan hormon insulin, glukagon dan somatostatin. Insulin
mengubah glukosa (gula) menjadi sumber energi. Pankreas mencit diambil setelah
14 hari terapi (hari ke-15). Preparat histologi dibuat dengan metode blok paraffin
dengan pewarnaan Hematoxylin-Eosin dan untuk mengetahui kerusakan setiap
preparat dapat diamati dengan mikroskop. Hasil pengamatan histologi pankreas
mencit kontrol normal, kontrol positif, dan kontrol dosis 350 mg/KgBB; 400
mg/KgBB; 500 mg/KgBB. Parameter histologi pankreas mencit yang diamati
adalah jumlah sel pankreas secara umum. Data pengamatan histologi dapat dilihat
pada Gambar 4.6.
52
Gambar 4. 6 Histologi organ pankreas mencit hasil pewarnaan HE (400x). A (Kontrol
Normal), B (Kontrol Positif), C (Terapi dosis 350 mg/KgBB), D (Terapi 400
mg/KgBB) dan E (Terapi dosis 500 mg/KgBB). Keterangan: →
Nekrosis adanya area kosong
Sel yang terdapat dalam pulau Langerhans ada empat jenis sel (alfa, beta,
delta dan F). Oleh karena hasil pengamatan pulau Langerhans menggunakan
53
mikroskop sel-sel hasil penelitian tersebut tidak dapat dibedakan, sehingga pada
penelitian ini hanya fokus terhadap jumlah sel pankreas. Berdasarkan hasil
penelitian yang terdapat pada Gambar 4.6 diketahui bahwa pada Gambar A
(Kontrol Normal) yakni tanpa diberi perlakuan menunjukkan kondisi sel pankreas
yang normal, terlihat bahwa susunan sel teratur menyebar di dalam pulau
langerhans dan bentuk sel yang seragam. Menurut Zubaidah (2014) pulau
langerhans dikatakan normal apabila terdapat susunan sel endokrin yang teratur
yang menyebar di pulau langerhans dengan bentuk sel yang seragam, bentuk bulat
dan inti sel nampak jelas serta sel-sel tidak mengalami edema (pembengkakan).
Pada Gambar B (Kontrol Positif) yang telah diinduksi aloksan terjadi perubahan sel
dengan susunan sel tidak teratur menyebar di pulau langerhans, bentuk sel tidak
seragam dan adanya ruang kosong pada islet langerhans disebabkan oleh sel telah
mengalami nekrosis. Hal ini menunjukkan bahwa mencit mengalami gangguan
sekresi insulin sehingga tidak mampu bekerja dengan baik, sehingga mencit
menderita penyakit yaitu diabetes mellitus.
Sedangkan pada Gambar (C), (D) dan (E) masih nampak ruang kosong akan
tetapi lebih baik dibandingkan dengan perlakuan kontrol positif, akan tetapi kondisi
islet langerhans masih belum seperti kondisi sel pankreas normal. Hal tersebut
dapat terlihat dengan luas area kosong relatif berkurang dan terlihat adanya
perbaikan jaringan yang ditandai dengan adanya pertambahan jumlah inti sel islet
langerhans. Namun pada Gambar (D) yaitu hasil terapi dosis 400 mg/KgBB terlihat
lebih baik dibandingkan Gambar (C) dan (E) ditandai dengan jumlah sel pankreas
lebih padat dan area kosong relatif kecil. Data tersebut dapat dilihat pada Tabel 4.2.
54
Tabel 4.2 Jumlah sel pankreas mencit sesudah terapi ekstrak etanol 96% bekatul
Perlakuan Rata-rata ± SD
Kontrol Normal 86 ± 15.77
Kontrol Positif 36,75 ± 13.60
Kontrol Dosis 1 36 ± 7.11
Kontrol Dosis 2 52 ± 5.16
Kontrol Dosis 3 50,5 ± 18.50
Berdasarkan Tabel 4.2 diketahui bahwa rata-rata jumlah sel pankreas mencit
kontrol normal yaitu 86 buah sel, lebih banyak dibandingkan dengan jumlah sel
pankreas mencit kontrol positif dan kontrol dosis. Pada kontrol positif hanya
terdapat 36,75 buah sel, tidak jauh berbeda dengan jumlah sel dari kontrol dosis 1
yaitu 36 buah sel. Sedangkan pada kontrol dosis 2 dan 3 juga tidak jauh berbeda
yaitu 52 dan 50,5 buah sel. Namun rata-rata jumlah sel pankreas pada kontrol dosis
2 lebih baik dibandingkan kontrol dosis 1 dan 3. Terapi ekstrak etanol 96% bekatul
dilakukan selama 14 hari sehingga diperoleh data kadar glukosa darah dan jumlah
sel pankreas hasil pengamatan menggunakan mikroskop. Data tersebut dapat dilihat
pada Gambar 4.7 berikut.
55
Gambar 4. 7 Diagram batang rata-rata kadar glukosa darah dan jumlah sel
pankreas
Keterangan: KN : Kontrol Normal
KP : Kontrol Positif
KD1 : Kontrol Dosis 1 (350 mg/KgBB)
KD2 : Kontrol Dosis 2 (400 mg/KgBB)
KD3 : Kontrol Dosis 3 (500 mg/KgBB)
Berdasarkan Gambar 4.7, terlihat bahwa jumlah sel pankreas dengan kadar
glukosa darah memiliki diagram yang sama, yang menunjukkan bahwa pada
perlakuan dosis 2 memiliki grafik lebih baik namun belum seperti keadaan pada
perlakuan kontrol normal. Namun, secara keseluruhan dapat diketahui bahwa
terdapat penurunan kadar glukosa darah setelah terapi ekstrak etanol 96% bekatul
beras padi selama 14 hari dan kenaikan jumlah sel pankreas. Hal tersebut
menunjukkan bahwa terdapat senyawa dalam ekstrak etanol 96% bekatul yang
dapat membantu memperbaiki jaringan pankreas yang rusak sehingga sel-sel
pankreas yang mati dapat beregenerasi kembali yang ditunjukkan dengan jumlah
sel pankreas yang bertambah dan penurunan kadar glukosa darah. Akan tetapi, hasil
penelitian yang telah diperoleh tidak sesuai menurut Rizkayanti, dkk (2017) yang
0
50
100
150
200
250
300
KN KP KD1 KD2 KD3
84,4
278,5299,75
177,75
266,75
86
36,75 3652 50,5
Kad
ar G
luko
sa D
arah
(m
g/d
L)
dan
Sel
Pan
kre
as (
Buah
)
Perlakuan
Rata-rata Kadar Glukosa Darah
dan Jumlah Sel Pankreas
Kadar glukosa darah jumlah sel pankreas
56
mengatakan bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak maka partikel-partikel
senyawa antioksidan yang terkandung akan semakin banyak, sehingga semakin
besar pula kemampuan untuk meredam radikal bebas. Hal ini disebabkan oleh
metabolisme masing-masing hewan coba yang berbeda, serta terdapat
kemungkinan bahwa pada perlakuan dosis 3, senyawa sudah berubah menjadi
senyawa prooksidan karena menurut Gordon (1993) pada konsentrasi tinggi,
aktivitas antioksidan grup fenolik sering lenyap bahkan berubah menjadi
prooksidan karena besar konsentrasi antioksidan yang ditambahkan dapat
berpengaruh terhadap laju oksidasi.
Adanya perbaikan jaringan sel pankreas yang ditunjukkan dengan
penurunan kadar glukosa darah dan peningkatan jumlah sel pankreas oleh ekstrak
etanol 96% bekatul disebabkan oleh adanya kandungan antioksidan yang terdapat
dalam ekstrak tersebut. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, diketahui
bahwa ekstrak etanol 96% bekatul memiliki aktivitas antioksidan pada konsentrasi
800 ppm sebesar 81,830% dan nilai IC50 sebesar 185,7 ppm dan positif
mengandung senyawa aktif saponin, tanin, steroid dan alkaloid. Adanya kandungan
senyawa alkaloid pada ekstrak etanol 96% bekatul termasuk dalam senyawa yang
berpotensi sebagai antioksidan yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen.
Sebagaimana menurut Rohim (2016) yang menyatakan bahwa senyawa berbasis
nitrogen dari bahan alam dapat menghambat proses oksidatif. Karena senyawa
radikal turunan dari senyawa amina memiliki tahap terminasi yang sangat lama,
sehingga mampu menghentikan reaksi rantai radikal secara efisien. Menurut Zahra,
dkk (2017) menyebutkan bahwa tanin dan alkaloid berpotensi menurunkan kadar
glukosa darah dengan cara mengurangi resistensi insulin sehingga meningkatkan
57
sekresi insulin oleh adanya protein kinase C-dependent up-regulation pada
reseptor insulin, namun bukan hanya itu senyawa fitokimia tersebut dapat memiliki
kemampuan untuk meningkatkan regenerasi sel β pankreas.
Selain alkaloid, bekatul pada penelitian ini juga positif mengandung
senyawa saponin dan tanin. Saponin bekerja dengan cara menghambat kerja
enzim α-glukosidase yaitu enzim yang ada di dalam usus yang berfungsi untuk
mengubah karbohidrat menjadi glukosa. Enzim α-glukosidase inhibitor ini
menghambat absorpsi glukosa pada usus halus, sehingga berfungsi sebagai anti
hiperglikemi (penurun kadar glukosa darah). Selain saponin, tanin juga memiliki
peranan dalam menurunkan kadar glukosa darah. Tanin bersifat astringen (zat
yang menyebabkan pengerutan jaringan sehingga dapat mengurangi sekresi) yang
bekerja dalam membentuk lapisan dari protein selaput lendir yang melindungi
usus sehingga dapat menghambat penyerapan glukosa (Fiana dan Oktaria, 2016).
Data pengamatan yang diperoleh selanjutnya diuji normalitas dan
homogenitasnya. Hasilnya menunjukkan bahwa data penelitian yang diperoleh
terdistribusi normal dan homogen. Setelah itu data diuji menggunakan analisis
variansi (ANOVA) satu arah dengan taraf signifikansi 5%. Hasil analisis ANOVA
dilakukan untuk mengetahui pengaruh terapi ekstrak etanol 96% bekatul terhadap
jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus) dapat dilihat pada Tabel 4.3 berikut:
Tabel 4. 3 Hasil perhitungan ANOVA jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus
L.) setelah perlakuan terapi ekstrak etanol 96% bekatul beras pada α
0,5%
SK Db JK KT Fhitung Ftabel Sig.
Perlakuan 4 6586.000 1646.500 9.648 3.06 .000
Galat 15 2559.750 170.650
Total 19 9145.750
58
Berdasarkan Tabel 4.3 hasil yang diperoleh dari uji ANOVA dengan taraf
signifikansi α 5%, didapatkan silai signifikansi 0,000 < 0,05 dan nilai Fhitung (9.648)
> FTabel 3,06, sehingga H0 ditolak. Berdasarkan hal tersebut menunjukkan bahwa
terdapat pengaruh terapi ekstrak etanol 96% bekatul terhadap jumlah sel pankreas
mencit (Mus musculus L.) (Lampiran 8).
Selanjutnya untuk mengetahui perbedaan pengaruh pada setiap perlakuan,
maka dilakukan uji lanjut dengan uji jarak duncan pada α 5% sebagaimana
pernyataan oleh Hanafiah (2014), bahwa jika KK bernilai besar (minimal 10% pada
kondisi homogen atau minimal 20% pada kondisi heterogen) karena data yang
diperoleh yakni data jumlah sel pankreas memiliki koefisien keragaman 25%.
Berdasarkan uji duncan 5% maka didapatkan notasi seperti pada Tabel 4.4 berikut:
Tabel 4. 4 Ringkasan uji duncan α 5% pengaruh ekstrak etanol 96% bekatul beras
terhadap jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus) yang diinduksi
aloksan Perlakuan Jumlah sel dan notasi pada α 5%
KN 86a
K+ 36,75b
KD1 36 b
KD2 52 b
KD3 50,5 b
Keterangan: KN = kontrol normal
K+ = kontrol positif
KD1 = Kontrol dosis 1
KD2 = Kontrol dosis 2
KD3 = Kontrol dosis 3
Notasi yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata
Hasil uji duncan pada Tabel 4.4 diatas menunjukkan bahwa terdapat perbedaan
pengaruh yang tidak nyata pada jumlah sel pankreas mencit (Mus musculus L.)
kelompok K+ dengan 3 kelompok perlakuan terapi ekstrak etanol 96% bekatul
59
beras yakni dosis 1, 2 dan 3. Namun pada dosis 2 dan 3 memiliki peningkatan
jumlah sel pankreas yang lebih baik dibandingkan dengan dosis 1. Berdasarkan hal
tersebut, ekstrak etanol 96% bekatul beras memiliki pengaruh terhadap jumlah sel
pankreas mencit (Mus musculus) namun 3 dosis perlakuan memiliki pengaruh yang
tidak berbeda nyata.
4.6 Pemanfaatan Tanaman Bekatul Sebagai Antidiabetes dalam Perspektif
Islam
Allah SWT menciptakan segala sesuatu yang ada di dunia ini tidak ada yang
sia-sia. Allah menghamparkan bumi dan menurunkan air hujan dari langit sehingga
tumbuh bermacam-macam tumbuhan. Menurut Shihab (2002) Allah
menganugerahkan nikmat kehidupan dan pemeliharaan kepada hamba-hamba-Nya.
Dengan kekuasaan-Nya, Allah telah menjadikan bumi sebagai hamparan untuk
manusia, membuka jalan-jalan untuk dapat dilalui dan menurunkan hujan diatas
bumi sehingga terciptalah sungai-sungai dan dengan air itu Allah menumbuhkan
tumbuh-tumbuhan yang berbeda-beda warna, rasa dan manfaatnya. Ada yang
berwarna putih dan hitam, ada pula yang rasanya manis dan pahit.
Kekuasaan Allah SWT yang tidak berbatas bagi makhluk hidup yang ada di
bumi merupakan suatu tanda bagi mereka yang dibekali oleh Allah sebuah
pemikiran, serta nikmat kehidupan dan pemeliharaan tentang adanya sang pencipta.
Salah satu nikmat terbesar Allah SWT yang seringkali terlupakan adalah berupa
nikmat sehat. Allah juga akan menguji hamba-Nya melalui nikmat sehat dengan
dicabutlah nikmat sehat tersebut dari manusia dan diuji dengan sebuah penyakit,
misalnya menderita diabetes mellitus. Namun, sebagai hamba-Nya, kita harus tetap
bertawakkal kepada Allah SWT. Karena Allah SWT dalam firmannnya yang
terdapat dalam surat Asy-Syuaraa ayat 80.
60
“dan apabila aku sakit, Dialah Yang menyembuhkan aku”
Berdasarkan firman Allah SWT diatas, menunjukkan bahwa sesungguhnya
Allah yang memberikan ujian sebuah penyakit juga yang akan menyembuhkan.
Allah SWT menganjurkan kepada hambanya untuk selalu berserah diri dan
berusaha apabila sedang ditimpa ujian ketika sakit. Salah satu bentuk usaha yang
dapat dilakukan adalah dengan mencari obat yang terdapat di alam. Salah satunya
menggunakan tanaman sebagai obat. Pada penelitian ini digunakan tanaman
bekatul yang dimanfaatkan sebagai obat alternatif untuk penyakit diabetes mellitus.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, menunjukkan hasil bahwa ekstrak
etanol bekatul memiliki kemampuan sebagai antioksidan yang ditunjukkan dengan
nilai aktivitas antioksidan pada konsentrasi maksimum yaitu 800 ppm sebesar
81,830 % dan nilai IC50 sebesar 185,7 ppm. Pada penelitian ini juga dilakukan
secara in-vivo dengan menggunakan mencit sebagai hewan coba. Berdasarkan hasil
terapi terhadap mencit dengan variasi dosis yaitu 350 mg/KgBB; 400 mg/KgBB;
500 mg/KgBB, menunjukkan bahwa ekstrak etanol bekatul mampu memperbaiki
jaringan sel pankreas mencit yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan jumlah
sel pankreas mencit (Tabel 4.2).
61
BAB V
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak etanol 96% bekatul mempunyai kemampuan sebagai antioksidan
dengan nilai aktivitas antioksidan sebesar 81,830 % pada konsentrasi 800
ppm dan nilai IC50 185,7 mg/L.
2. Terapi ekstrak etanol 96% bekatul berpengaruh terhadap jumlah sel
pankreas mencit diabetes mellitus dan pada dosis 400 mg/KgBB merupakan
dosis terbaik.
5.2 Saran
1. Perlu dilakukan proses fermentasi, fraksinasi, isolasi senyawa aktif untuk
meningkatkan aktitivas antioksidan.
2. Perlu dilakukan pewarnaan jaringan menggunakan pewarnaan
imunohistokimia agar mengetahui perbedaan sel beta dan sel alfa.
62
DAFTAR PUSTAKA
Adom, K.K dan Liu, R.H. 2002. Antioxidant Activity Of Grains. Journal of
Agricultural and Food Chemistry. 50(21):6182-6187.
Afriani, S., Idiawati, N., Destianti, L. Arianie, L. 2014. Uji Aktivitas Antioksidan
Daging Buah Asam Paya (Eleiodoxa conferta Burret) dengan Metode
DPPH dan Tiosianat. JKK, 3 (1): 49 –56.
Al-albani, M.N. 2008. Ringkasan Shahih Bukhari 3 & 4. Depok: Gema Insani.
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. 2014. Peraturan Kepala
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor 12 Tahun
2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.
Chanphrom, P. 2007. Antioxidants and Antioxidant Activities Of Pigmented Rice
Varieties and Rice Bran. [Thesis]. Thailand: Faculty of Gratuated Studies,
Mahidol University.
Chen, C.W and Cheng, H.H. 2006. A Rice Bran Oil Diet Increases LDL-Receptor
and HMGCoA Reductase mRNA Expressions and Insulin Sensitivity in
Rats with Streptozotocin/Nicotinamide-Induced Type 2 Diabetes. Journal
of Nutrition. 136:1472-1476.
Chen, M.H. dan Bergman, C.J. 2005. A Rapid Procedure for Analysing Rice Bran
tocopherol, Tocotrienol and ϒ-Oryzanol Contents. Journal Food Compos
Analysis. 18: 139-151.
Damardjati, D.S., santosa, B.A., dan Munarso, J. 1990. Studi Kelayakan dan
Rekomendasi Teknologi PabrikPengolahan Bekatul. Laporan akhir. Balai
penelitian Tanaman Pangan Sukamandi.
Departemen Kesehatan RI. 2005. Pharmaceutical care untuk penyakit diabetes
mellitus. Jakarta: Departemen kesehatan RI, 85 hlm.
Dewi, D. 2007. Aktivitas Antioksidan Dedak Sorgum Lokal Varietas Coklat
(Sorghum Bicolor) Hasil Ekstraksi Berbagai Pelarut. Jurnal teknologi
penelitian. 8(3):188-197.
Esa, N.M., Ling, T.B., dan Peng, L.S. 2013. By-Products Of Rice Processing. An
Overview Of Health Benefits And Applications. Journal Of Rice
Research, 1(1): 107-117.
Fauziyah, A. 2011. Analisis Potensi Dan Gizi Pemanfaatan Bekatul dalam
Pembuatan Cookies. Bogor: Departemen Gizi Masyarakat Fakultas
Ekologi Manusia Institut Pertanian Bogor.
63
Fiana, Z dan Oktaria, D. Pengaruh Kandungan Saponin dalam Daging Buah
Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) terhadap Penurunan Kadar
Glukosa Darah. Majority, 5 (4).
Gordon, M.H. 1993. The Mechanism Of Antioxidant Action In Vitro. Food
Antioxidants.
Guenther, E. 2006. Minyak Atsiri. Jilid I. Terjemahan Ketaren S. Jakarta:
Universitas Jakarta.
Hanani, E. 2005. Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia Sp
dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian. II (3).
Handayani, A. 2015. Pemanfaatan Tumbuhan Berkhasiat Obat Oleh Masyarakat
Sekitar Cagar Alam Gunung Simpang Jawa Barat. Pros Sem Nas Masy
Biodiv Indo. 1 (6).
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan, Terbitan Ke-2, Terjemahan K. Padmawinata dan I. Soediro.
Bandung: ITB.
Hartati, S., Marsono, Y., Suparmo dan Santoso, S. 2015. Komposisi Kimia Serta
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Hidrofilik Bekatul Beberapa Varietas Padi.
Agritech, 35 (1).
Indah., Mappiratu dan Musafira. 2017. Produksi Enzim Lipase Dari Aspergillus
Niger Isolat Kapang Kopra dengan Menggunakan Medium Kelapa Parut.
Kovalen, 3 (3):269-276.
Indranila dan Ulfah, M. 2015. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun
Karika (Carica Pubescens) Dengan Metode DPPH Beserta Identifikasi
Senyawa Alkaloid, Fenol dan Flavonoid. Prosiding seminar nasional
peluang sebagai alternatif medicine.
International Diabetes Federation. 2011. One Adult In Ten Will Have Diabetes By
2030. http://www.idf.org/media-events/press-releases/2011/diabetes-
atlas-8thedition. Diakses 6 Mei 2017.
Irianti,T., Murti,Y.B., Kanistri,D.N., Pratiwi, D.R., Kuswandi dan
Kusumaningtyas, R.A. 2016. DPPH Radical Scavenging Activity Of
Aqueous Fraction From Ethanolic Extract Of Talok Fruit (Muntingia
calabura L.). Traditional Medicine Journal, 21 (1).
Jusman, S. W., & Halim, A. 2009. Oxidative Stress In Liver Tissue Of Rat Induced
By Chronic Systemic Hypoxia. Makara kesehatan, 13(1):34-38.
Kemit, N., Widarta, W.R., Nocianitri, K.A. Pengaruh Jenis Pelarut Dan Waktu
Maserasi Terhadap Kandungan Senyawa Flavonoid Dan Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Daun Alpukat. Jurnal Online. Diakses pada tanggal
7 November 2017.
64
Khopkar, S.M. 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: UI Press.
Kuntorini, E.M dan Astuti, M.D. 2010. Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine Americana Merr.). Sains dan
Terapan Kimia, 4 (1).
Lu, F.C. 1995. Toksikologi Dasar. Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko.
Edisi ke 2. Jakarta: UI Press.
Mas’ud, F dan Pabbenteng. 2016. Rasio Bekatul Padi Dengan Pelarut Pada
Ekstraksi Minayk Bekatul Padi. Journal INTEK. 3(2): 82-86.
Moko, E. M., Purnomo, H., Kusnadi, J. Dan ijong, F.G. 2014. Phytochemical
Content And Antioxidant Properties of Colored and non Colored Varieties
ff Rice Bran Form Minahasa, North Sulawesi, Indonesia. International
Food Research Journal 21(3): 1053-1059.
Molyneux, P. 2004. The Use Of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) For Estimating Antioxidant Activity. Original
Article:Songklanakarin J. Sci. Technol. 26(2).
Muharni, Elfita dan Amanda. 2013. Aktivitas Antioksidan Senyawa (+)
Morelloflavon dari Kulit Batang Tumbuhan Gamboge (Garcinia
Xanthochymus). Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung.
Mukhriani. 2014. Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif.
Jurnal Kesehatan, 7(2).
Mutiyani, M., Soeatmadji, D.W., Sunindya, B.R. 2014. Efek Diet Tinggi
Karbohidrat dan Diet Tinggi Lemak Terhadap Kadar Glukosa Darah Dan
Kepadatan Sel Beta Pankreas Pada Tikus Wistar. Indonesian Journal Of
Human Nutrition 1(2): 106-113.
Muntiha, M. 2001. Teknik Pembuatan Preparat Histopatologi Dari Jaringan
Hewan Dengan Pewarnaan Hematoksilin Dan Eosin (H&E). Temu teknis
fungsional non peneliti
Nahari, D.S. 2014. Pemisahan Golongan Senyawa Aktif Dan Penentuan
Kandungan Fenolik Total Umbi Binahong (Anredera Cordfolia (Ten.)
Steens) Serta Efek Terapinya Terhadap Aktivitas Seperoksida Dismutase
Hati Tikus Diabetes. Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia
Fakultas Sains Dan Teknologi Universitas Islam Maulana Malik Ibrahim
Malang.
Nanggiang, D. 2016. Pengaruh Perbandingan Bubur Rumput Laut (Eucheuma
Cottonii) dengan Bubur Sawi (Brassica Juncea) dan Konsentrasi Ekstrak
Daun Suji Terhadap Karakteristik Mix Vegetable Leather Panggang.
Artikel.
65
Nimse, S.B dan Pal, D. 2015. Free Radicals, Natural Antioxidants, and Their
Reaction Mechanisms. Royal society of chemistry Advances, (5).
Nubatonis, D. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Sambiloto (Andrographis
paniculata Nees) Terhadap Histopatologi Pankreas Mencit (Mus
musculus) Diabetes Melitus (DM) Tipe I. Jurnal Kajian Veteriner. 3 (1) :
31-40.
Nugroho, A.E. 2006. Review Hewan Percobaan Diabetes Mellitus : Patologi dan
Mekanisme Aksi Diabetogenik. Biodiversitas. ISSN: 1412-033X.
7(4):378-382.
Nugroho.2007.Antioksidan.https://nugrohob.wordpress.com/2007/12/03/antioksid
an/ diakses pada tanggal 24 Desember 2017.
Prakash, A. 2001. Antioxidant Activity. Journal of analytical chemistry. Medallion
laboratories: analytical progress. 10 (2).
Putra, D.A.D. 2012. Identifikasi Komponen Kimia Minyak Atsiri Daun Bunga Tahi
Ayam (Tagetes Erecta L.) Serta Uji Aktivitas Antibakteri Dan
Antioksidan. Skripsi. Tidak diterbitkan. Universitas Sumatera Utara.
Putrawan IDG, Maryana R, Rosmayanti I. 2009. Ekstraksi minyak Dedak Padi
menggunakan Isopropil Alkohol. Seminar Nasional Teknik Kimia
Indonesia. Bandung.
Rahayu, D.R., Kusrini, D dan Fachriyah, E. 2010. Penentuan Aktivitas Antioksidan
dari Ekstrak Etanol Daun Ketapang (Terminalia catappa L) dengan
Metode 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH). Diponegoro: Jurusan Kimia
FMIPA Universitas Diponegoro.
Rakhmadi, I., Muladno., Siregar, H.C.H dan Siagian, P.H. 2009. Performa Mecit
Jantan (Mus musculus) Umur 28-63 Hari Pada Alas Kandang Sekam, Pasir
Dan Zeolit Dengan Dan Tanpa Sekat Alas. Jurnal Zeolit Indonesia,
8(2):1411-6723.
Ratimanjari, D.A. 2011. Pengaruh Pemberian Infusa Herba sambiloto
(Andrographis Paniculata Ness) Terhadap Glibenklamid dalam
menurunkan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan yang dibuat
Diabetes. Skripsi. Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengertahuan Alam.
Universitas Indonesia. 1-17.
Rima, Y.S. 2014. Perbandingan Metode Ekstraksi Dan Variasi Pelarut Terhadap
Rendemen Dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kubis Ungu (Brassica
oleracea L. Var. Capitata f. Rubra).
Rizkayanti, Anang, W.M., Diah dan Jura, M.R. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Air Dan Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa Oleifera LAM).
Jurnal Akademika Kimia, 6 (2): 125-131.
66
Robertson, R.P., Harmon, P.O.T, Tanaka, Y., dan Takahashi, H. 2003. Glucose
Toxicity In Beta-Cells: Type 2 Diabetes, Good Radicals Gone Bad, And
The Glutathione Connection. Diabetes 52: 581-587.
Rohim, A. 2016. Uji Fitokimia, Toksisitas Serta Antioksidan Ekstrak Propolis
Pembungkus Madu Lebah Trigona Incisa Dengan Metode 2,2-Diphenyl-
1-Picrylhidrazyl (DPPH). Jurnal Kimia Mulawarman, 14 (1).
Rohman, A dan Gandjar, I.G. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka
Pelajar.
Rudy, W.B. 2003. Seri kesehatan bimbingan dokter pada diabetes. Jakarta: Dian
Rakyat.
Sa`adah, H dan Nurhasnawati, H. 2015. Perbandingan Pelarut Etanol Dan Air Pada
Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine Americana Merr)
Menggunakan Metode Maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1(2):149-153.
Sandberg, A.A dan Philip, D.H. 2008. Interactions Of Exocrine And Endocrine
Pancreatic Diseases. J. Pancreas, 9(4): 541-575.
Sayuti, K dan Yenrina, R. 2015. Antioksidan, Alami dan Sintetik. Padang: Andalas
University Press.
Shihab. 2002. Tafsir Al-Misbah Pesan, Kesan, dan Keserasian Al-Qur’an Volume
10. Jakarta: Lentera Hati.
Sinata, N dan Arifin, H. 2016. Antidiabetes Dari Fraksi Air Daun Karaunting
(Rhodomytrus Tomentosa (Ait.) Hassk.) Terhadap Kadar Glukosa Darah
Mencit Diabetes. Jurnal Sains Farmasi & Klinis, 03 (01).
Siswanti., Nurhartadi, E., Anandito, R.B.K dan Setyaningrum, E.A. 2018.
Karakterisasi Sifat Fisik dan Kimia Bekatul Beras Hitam (Oryza sativa L.)
Kultivar Melik dengan Berbagai Teknik Stabilisasi. Seminar Nasional
dalam Rangka Dies Natalis UNS ke-42 Tahun 2018, 02 (01).
Smith, J.B. dan S. Mangkoewidjojo. 1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan
Penggunaan Hewan Percobaan Di Daerah Tropis. Jakarta: UI Press.
Soematmadji, D.W. 1998. Peran Stress Oksidatif dalam Patogenesis Angiopati
Mikro dan Makro DM. Medica. 5 (24): 318-325.
Sompong, R., Siebenhandl-Ehn, S., Linsberger-Martin, G. dan Berghofer, E. 2011.
Physichemical And Antioxidative Propertise Of Red And Black Rice
Varieties From Thailand, China And Sri Lanka. Food Chemistry. 124:
132-140.
Suarsana, I-N., B.P. Priosoeryanto, M. Bintang dan T. Wresdiyati. 2010. Profil
Glukosa Darah Dan Ultrastruktur Sel Beta Pankreas Tikus Yang Diinduksi
Senyawa Aloksan. JITV 15(2): 118-123.
67
Sukandar,Y.E., Andrajati, R., Sigit, I.P., Adyana, K.I., Setiadi, P., Adji, A.,
Kusnandar. 2008. ISO Farmakoterapi. Jakarta: PT. ISFI Penerbitan, 26-8.
Sukma, L.N., Zackiyah, dan Gumilar, G.G. 2010. Pengkayaan Asam Lemak Tak
Jenuh Pada Bekatul dengan Cara Fermentasi Padat Menggunakan
Aspergillus terreus. Jurnal Sains dan Teknologi Kimia. 1(1): 66-72.
Sumarsono, P., Wdjiati, dan Madyawati.S.P. 2014. Pengaruh Pemberian Ekstrak
Daun Sambiloto (Andrographis Paniculata Ness) Terhadap Gambaran
Histopatologi Sel Dalam Pulau Langerhans Pankreas Pada Tikus Putih
(Rattus Novergicus) Model Sistik Ovarium. Veterinaria Medika 7(2).
Sundaryono, A., Firdaus, M.L. Firdaus, S., Karyadi, B. 2016. Potensi Ekstrak Daun
Tanaman Betadin Untuk Meningkatkan Jumlah Trombosit Penderita DBD
Melalui Uji Terhadap Mus Musculus. Prosiding Seminar Nasional
Pendidikan Sains (SNPS) 2016.
Susanto, D. 2011. Potensi Bekatul Sebagai Sumber Antioksidan Dalam Produk
Selai Kacang. Artikel penelitian.
Swastika, N. D. 2009. Stabilisasi Tepung Bekatul melalui Metode Pengukusan dan
Pengeringsan RAK Serta Pendugaan Umur Simpannya. Skripsi.
Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor. Jawa Barat.
Syafitri, S. 2016. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Fraksi Bekatul Dengan
Metode 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil. Bogor: Biokimia Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
Szkudelski, T. 2001, The Mechanism Of Alloxan And Streptozotocin Action In β
Cells Of The Rat Pancreas. Physiology Research, 50: 536-54.
Tazakori Z, Dehghan MH, Iranparvar M, Zare M, Foladi N, Mohmmadi R. 2007.
Effect Of Rice Brand Powder On B Glucose Levels And Serum Lipid
Parameters In Diabetes Patient II. Res J Biol Sci 2: 252-255.
Ulfa, S.M. 2016. Identifikasi Dan Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan Dalam
Bekatul Dengan Menggunakan Variasi Pelarut. Skripsi. Malang:
Universitas Islam Negeri Malang.
Wanti, S. 2008. Pengaruh Berbagai Jenis Beras Terhadap Aktivitas Antioksidan
Pada Angkak Oleh monascues porporues. Skripsi.
Wardani, N.P. 2016. Uji Aktivias Antidiabtes Ekstrak Kering Biji Mahoni
Terstandar (Swietenia Mahagoni Jacq) Pada Mencit Yang Diinduksi
Aloksan. Skripsi. Surabaya: Universitas Airlangga.
Widarta, I.W.R, Nocianitri K. A. Sari L.P.I.P. 2013. Ekstraksi Komponen Bioaktif
Bekatul Beras Lokal dengan Beberapa Jenis Pelarut. Jurnal Aplikasi
Teknologi Pangan. 2 (2).
68
Widowati, W. 2008. Potensi Antioksidan sebagai Antidiabetes. JKM, 7 (2): 1-9.
Widowati, L. Sadikin, M dan Wahjoedi, B. 2004. Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Bijiklabet (Trigonellla Foenum-Graeucum L,): Pengukuran Kadar
Glutation Tkus Diabetes. Media Litbang Kesehatan, 14 (4).
Winarsi. 2007. Antioksidan Alami Dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisisus.
Windono, T., Soedirman, S., Yudawati, U., Ermawati, E., Srielia, Erowati, T.I.
2001. Uji Peredam Radikal Bebas Terhadap 1,1-Diphenyl-2-
Picrylhydrazyl (DPPH) Dari Ekstrak Kulit Buah dan Biji Anggur (Vitis
Vinfera L.) Probolinggo Biru Dan Bali. Artocarpus. 1: 34-44.
Wirawati, C.U dan Nirmagustina, D.E. Studi In Vivo Produk Sereal Dari Tepung
Bekatul dan Tepung Ubi Jalak Sebagai Pangan Fungsional. Jurnal
teknologi industri dan hasi pertanian. 14 (2).
Xu, Z., Hua, N., dan Godber, J. 2002. Rice And Rice Bran Oil In Functional Foods
Development. Louisiana Agriculture. 45(4):9-10.
Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alam. 1993. Penapisan farmakologi,
pengujian fiokimia dan pengujian klinik. Jakarta: Yayasan Pengembangan
Obat Bahan Alam.
Zahra, F., Budhiarta, A.A.G dan Pangkahila, W. 2017. Pemberian Ekstrak Daun
Cincau (Mesona Palustris BL) Oral Meningkatkan Jumlah Sel Β Pankreas
dan Menurunkan Gula Darah Puasa Pada Tikus Putih (Rattus Norvegicus)
Jantan Galur Wistar Diabetes. Jurnal e-Biomedik (eBm), 5 (1).
Zubaidah, E dan Izzati, N.F. 2014. Efek Cuka Apel dan Cuka Salak terhadap
Penurunan Glukosa Darah dan Histopatologi Pankreas Tikus Wistar
Diabetes. Jurnal Kedokteran Brawijaya, 28 (4).
69
LAMPIRAN
Lampiran 1. Rancangan Penelitian
Bekatul Preparasi Sampel Uji Kadar Air
Ekstraksi Sampel
Pengkondisian lingkungan
Randomisasi mencit 5 kelompok
Dosis 3
(D3)
Mencit
Diabetes +
ekstrak
bekatul 500
mg/KgBB/
mencit/hari
Dosis 2
(D2)
Mencit
Diabetes +
ekstrak
bekatul 400
mg/KgBB/
mencit/hari
Dosis 1
(D1)
Mencit
Diabetes +
ekstrak
bekatul 350
mg/KgBB/
mencit/hari
Kontrol
Positif (KP)
Aloksan
200 mg/Kg
BB
Kontrol
Normal
(KN)
CMC-Na
0,5%
Pengukuran kadar glukosa darah mencit pada hari
ke-0, 4,8, dan 15.
Pewarnaan HE (Hematoxylin-Eosin) dan
pengamatan histologi organ pankreas mencit
Analisis Data
Uji Aktivitas Antioksidan
70
Lampiran 2. Diagram Alir
2.1 Preparasi Sampel
- Ditimbang 40 gram sampel bekatul
- Diayak dengan ayakan 40 mesh
- Dibungkus dengan alumunium foil
- Diinkubasi menggunakan oven selama 3 menit pada suhu 102°C
- Didinginkan pada suhu ruang
- Disimpan pada suhu 4°C
2.2 Penentuan Kadar Air
- Disiapkan cawan porselen dan di oven pada suhu 100-105 °C
sekitar 15 menit
- Disimpan cawan porselen dalam desikator selama 10 menit
- Ditimbang berat cawan porselen kosong hingga diperoleh
berat cawan yang konstan
- Ditimbang dan dimasukkan 5 gram sampel bekatul ke dalam
cawan porselen dan di oven pada suhu 100-105 °C sekitar 15
menit
- Didinginkan sampel dalam desikator selama 10 menit dan
ditimbang
- Diulang perlakuan ini hingga diperoleh berat konstan dan
kadar air ≤ 10%
Sampel bekatul
Hasil
Sampel bekatul
Hasil
71
2.2 Ekstraksi Bekatul
- Direndam setiap 40 gram bekatul menggunakan pelarut etanol 96%
sebanyak 240 mL
- Dishaker selama 3 jam dan disaring menggunakan penyaring
vakum
- Ampas yang diperoleh dimaserasi kembali sebanyak dua kali
dengan perlakuan yang sama
- Diambil filtrat
- Filtrat bekatul dipekatkan dengan rotary evaporator dan dialiri
dengan gas N2
- Ekstrak pekat disimpan pada suhu 4°C
- Dihitung rendemen
2.3 Uji Aktivitas Antioksidan
a. Penentuan panjang gelombang maksimum
- Diambil sebanyak 1 mL
- Ditambahkan etanol 95% 3 mL
- Dimasukkan dalam kuvet
- Diukur panjang gelombang maksimum dengan
spektrofotometer UV-Vis
Sampel bekatul 250 gram
Hasil
Larutan DPPH 0,2 mM
Hasil
72
b. Pengukuran DPPH 0,2 mM
- Diambil 1 mL
- Dimasukkan ke dalam tabung reaksi
- Ditambahkan etanol 95% 3 mL
- Diinkubasi pada suhu selama waktu kestabilan yang telah
didapatkan
- Dimasukkan ke dalam kuvet hingga penuh
- Diukur pada yang didapatkan dengan spektrofotometer UV-Vis
- Disiapkan tabung reaksi
- Dimasukkan 3 mL larutan sampel ke dalam tabung reaksi
- Ditambahkan DPPH 0,2mM sebanyak 1 mL
- Diinkubasi pada suhu selama waktu kestabilan yang telah
didapatkan
- Dimasukkan ke dalam kuvet hingga penuh
- Diukur pada yang didapatkan dengan spektrofotometer UV-Vis
- Dilakukan cara yang sama untuk vitamin C
- Dihitung nilai persen (%) aktivitas antioksidannya dengan
persamaan:
% Aktivitas Antioksidan
= 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 −𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙× 100%
2.4 Persiapan hewan coba
- Digunakan mencit (Mus Musculus L. ) BALB/C jantan umur
2-3 bulan dengan berat 20-30 g
- Dipelihara dalam kandang berukuran 20 x 30 x 40 cm yang
diberi allas serbuk kayu dan anyaman kawat sebagai penutup
- Diberikan makan dan minum setiap hari secara ad libitum
Hewan Coba
Hasil
Larutan DPPH 0,2 mM
Ekstrak Bekatul
Hasil
73
2.5 Perlakuan Hewan Coba
- Dipelihara dalam animal house Laboratorium Biologi UIN
Maulana Malik Ibrahim Malang
- Disamakan berat badannya
- Dibagi menjadi 5 kelompok
Ketentuan dari tiap-tiap kelompok adalah sebagai berikut:
a. Kelompok kontrol Normal (KN) kelompok tanpa induksi
aloksan dengan pemberian CMC-Na 0,5% secara peroral
b. Kelompok kontrol positif yang diinduksi aloksan dengan dosis
200 mg/KgBB dengan Pelarut NaCl 0,9% (KDM)
c. Kelompok kontrol ekstrak, yaitu mencit diabetes mellitus yang
diterapi ekstrak etanol bekatul dosis 350 mg/KgBB + CMC-
Na 0,5% secara peroral (KD1)
d. Kelompok kontrol ekstrak, yaitu mencit diabetes mellitus yang
diterapi ekstrak etanol bekatul dosis 400 mg/KgBB + CMC-
Na 0,5% secara peroral (KD2)
e. Kelompok kontrol estrak, yaitu mencit diabetes mellitus yang
diterapi ekstrak etanol bekatul dosis 500 mg/KgBB + CMC-
Na 0,5% secara peroral (KD3)
2.6 Pengkondisian Mencit Diabetes Melitus
- Diukur kadar glukosa darah dalam dalam darah sebagai kadar
glukosa awal
- Disemprotkan alkohol 70% pada bagian abdomen mencit
- Dicubit hingga terasa bagian ototnya
- Diinjeksidengan aloksan (200 mg/Kg BB) dibagian abdomennya
- Diinkubasi selama 3 hari
- Dipantau kadar glukosa darah mencit selama 5 hari menggunakan
glucometer untuk mengetahui kadar glukosa darah mencit diabetes
- Mencit sudah menjadi diabetes mellitus apabbila kadar glukosa
darahnya lebih dari 200 mg/dL
20 ekor Hewan Coba
Hasil
Mencit
Hasil
74
2.7 Perlakuan Eksperimen
- Dijepit kepala mencit diantara jari telunjuk dan jari tengah tangan kiri
dan diangkat
- Diposisikan dalam keadaan terlentang dan mulut terbuka
- Diambil ekstrak etanol bekatul dengan variasi dosis 350 mg/KgBB,
400 mg/KgBB dan 500 mg/KgBB menggunakan alat sonde
- Diterapikan ekstrak secara oral
- Dilakukan terapi setiap hari selama 14 hari
2.8 Pengukuran Kadar Glukosa Darah
- Diletakkan pada sungkup, ekor mencit dipegang dan diurut
- Dibersihkan dengan alkohol
- Dipotong ujung ekor
- Diambil darah dan diteteskan pada strip glukotest
2.9 Pengambilan sampel dan pengujian Hematoxylin Eosin (HE)
2.9.1 Pengambilan sampel
- Diambil organ pankreas dan dicuci
- Direndam dengan larutan formalin 10%
- Disimpan dalam wadah tertutup
Mencit DM terapi
Hasil
Hasil
Mencit
Hasil
Organ Pankreas
75
2.9.2 Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE)
- Difiksasi dengan menggunakan larutan netral buffer formalin 10%
- Dipotong dan dimasukkan ke daam tempat spesimen yang terbuat dari
plastik
- Dilakukan proses dehdrasi pada alkohol konsentrasi bertingkat yaitu
alkohol 70%, 80%, 90% alkohol absolut I, absolut II masing-masing
2 jam
- Dilakukan penjernihan dengan xylol
- Dicetak menggunkan paraffin sehingga sediaan tercetak di dalam blok-
blok praffin dan disimpan dalam lemari es
- Dipotong tipis blok-blok paraffin setebal 4-5μm mengunakan
mikrotom
- Diapungkkan hasil potongan dalam air hangat bersuhu 40-50ºC untuk
meregangkan agar jaringan tidak berlipat
- Diangkat dan diletakan dalam geas objek untuk dilakukan pewarnaan
- Diperiksa dibawah mikroskop Hematoxylin Eosin (HE)
Hasil
Organ pankreas
76
Lampiran 3. Perhitungan Pembuatan Larutan
3.1 Pembuatan Larutan
3.1.1 Larutan NaCl 0,5%
Kristal NaCl ditimbang sebanyak 0,9 g menggunakan neraca analitik dalam
gelas arloji, dimasukkan ke dalam beaker glass 50 mL untuk dilarutkan dengan ± 3
mL aquades. Aquades dialirkan pada gelas arloji (untuk mengambil sisa NaCl yang
terdapat pada gelas arloji). Dilakukan pengadukan dengan gelas pengaduk sampai
larut sempurna. Setelah larut sempurna, dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL
dengan menggunakan corong gelas dan ditambahkan aquades dengan
menggunakan pipet tetes hingga tanda batas dan dikocok hingga homogen.
3.1.2 Larutan Aloksan
Aloksan sebanyak 112 mg dilarutkan pada NaCl 0,9% sampai volumenya 20 mL,
selanjutnya divortex hingga homogen.
Dosis aloksan yang digunakan = 5,6 mg/20 gr BB
Jumlah aloksan yang dibutuhkan tiap injeksi: 5,6 mg x 20 = 112 mg
Keterangan: Angka 20 = jumlah volume larutan
Jadi, volume injeksi untuk tiap tikus adalah 1 mL.
3.1.3 Larutan CMC-Na 0,5%
Serbuk CMC-Na ditimbang sebanyak 0,25 g dengan menggunakan neraca analitik,
dimasukkan ke dalam beaker glass 50 mL dan dilarutkan dengan aquades hangat ± 25 mL
(dilarutkan pengadukan dengan spatula hingga larut sempurna). Setelah larut
semua, dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL dan ditandabataskan. Sehingga
diperoleh larutan CMC-Na 0,5% sebanyak 50 mL.
77
3.1.4 Larutan alkohol 70%, 80%, dan 90%
3.1.4.1 Pembuatan alkohol 70%
M1 x V1 = M2 x V2
96% x V1 = 70% x 100 mL
V1 = 72,9 mL
V1 = 73 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 73 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
batas dan dikocok hingga homogen.
3.1.4.2 Pembuatan alkohol 80%
M1 x V1 = M2 x V2
96% x V1 = 80% x 100 mL
V1 = 83 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 83 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
batas dan dikocok hingga homogen.
3.1.4.3 Pembuatan alkohol 90%
M1 x V1 = M2 x V2
96% x V1 = 90% x 100 mL
V1 = 93,7 mL
V1 = 94 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan alkohol 96% sebanyak 94 mL, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades sampai tanda
batas dan dikocok hingga homogen.
78
3.1.4.4 Pembuatan Larutan Formalin 10%
M1 x V1 = M2 x V2
37% x V1 = 10% x 100 mL
V1 = 13,513 mL
V1 = 13,52 mL
Cara pembuatannya adalah diambil larutan formalin 37% sebanyak 13,52 mL,
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL. Selanjutnya ditambahkan aquades
sampai tanda batas dan dikocok hingga homogen.
3.1.5 Pembuatan Larutan DPPH 0,2 mM
DPPH 0,2 mM dalam 10 mL etanol 95%
Mr DPPH = 394,33 g/mol
Mol DPPH = 10 mL x 0,2 mM = 10 x 0,2 𝑀
1000 𝑚𝐿
= 0,002 mmol
Mg DPPH = 0,002 mmol x Mr DPPH
= 0,002 mmol x 394,33 g/mol
= 0,78866 mg
= 0,8 mg
Cara pembuatannya adalah ditimbang DPPH 0,8 mg, kemudian dilarutkan dan
ditandabataskan dengan etanol 95% dalam labu takar 10 mL dan dikocok hingga homogen.
79
Lampiran 4. Perhitungan Dosis
Tabel L.4.1 Konversi perhitungan dosis untuk hewan dan manusia berdasarkan
konversi Laurence & Bacharach (1964):
Hewan
dan BB
rata-rata
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmut
400 g
Kelinci
1,5 Kg
Kucing
4 Kg
Kera
4 Kg
Anjing
12 Kg
Manusia
70 Kg
Mencit
20 g
1,0 7,0 12,29 27,8 28,7 64,1 124,2 387,9
Tikus
200 g
0,14 1,0 1,79 3,9 4,2 9,2 17,8 60,5
Marmut
400 g
0,06 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5
Kelinci
1,5 Kg
0,04 0,25 0,44 1,0 2,25 2,4 4,5 14,2
Kucing 4
Kg
0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0
Kera 4
Kg
0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1
Anjing
12 Kg
0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1
Manusia
70 Kg
0,0026 0,018 0,031 0,07 0,76 0,16 0,32 1,0
4.1 Dosis aloksan
Berdasarkan penelitian Sinata dan Arifin (2016) dosis aloksan yang digunakan
adalah 200 mg/KgBB yang merupakan konversi dari dosis aloksan untuk tikus
menjadi dosis aloksan untuk mencit.
Dosis aloksan untuk tikus adalah 200 mg/kgBB.
Pada tikus 200 g = 200 𝑚𝑔
𝑘𝑔𝐵𝐵𝑥
200 𝑔
1000 𝑔=
40 𝑚𝑔
200 𝑔𝐵𝐵
Faktor konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g adalah 0,14. Sehingga dosisnya
menjadi:
40 mg x 0,14 = 5,6 mg
80
4.2 Dosis Terapi
Dosis terapi yang digunakan mengacu pada penelitian Dwinani (2014)
yakni 350 mg/kgBB, 400 mg/kgBB dan 500 mg/kgBB. Namun Dwinani
menggunakan hewan coba tikus, sehingga dosis yang digunakan harus dikonversi
terlebih dahulu. Setiap variasi dosis terapi dilarutkan dalam 1 mL CMC-Na 0,5%
untuk 1x terapi terhadap 1 mencit.
4.2.1 Dosis 350 mg/KgBB
Pada tikus 200 g= 350 𝑚𝑔
𝑘𝑔𝐵𝐵𝑥
200 𝑔
1000 𝑔=
75 𝑚𝑔
200 𝑔𝐵𝐵
Faktor konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g adalah 0,14.
Sehingga dosisnya menjadi: 70 mg x 0,14 = 9,8 mg.
4.2.2 Dosis 400 mg/KgBB
Pada tikus 200 g= 400 𝑚𝑔
𝑘𝑔𝐵𝐵𝑥
200 𝑔
1000 𝑔=
80 𝑚𝑔
200 𝑔𝐵𝐵
Faktor konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g adalah 0,14.
Sehingga dosisnya menjadi: 80 mg x 0,14 = 11,2 mg.
4.2.3 Dosis 500 mg/KgBB
Pada tikus 200 g= 500 𝑚𝑔
𝑘𝑔𝐵𝐵𝑥
200 𝑔
1000 𝑔=
100 𝑚𝑔
200 𝑔𝐵𝐵
Faktor konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g adalah 0,14.
Sehingga dosisnya menjadi: 100 mg x 0,14 = 14 mg.
81
Lampiran 5. Perhitungan Uji Kadar Air
Berikut rumus perhitungan kadar air, yaitu:
Kadar air = (b-c)
(b-a) x 100 %.
Keterangan : a = berat konstan cawan kosong
b = berat cawan + sampel sebelum dioven
c = berat konstan cawan + sampel setelah dikeringkan
Data Pengukuran Kadar Air Sampel Bekatul
1. Pengukuran berat cawan kosong
Cawan Berat cawan kosong (gram)
Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-rata
1 54.259 54.259 54.259 54.259
2 49.822 49.822 49.822 49.822
3 55.769 55.769 55.769 55.769
2. Pengukuran berat cawan + sampel sebelum dioven
Sampel Berat cawan + sampel sebelum dioven (gram)
Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-rata
1 58.850 58.853 58.856 58.853
2 54.404 54.393 54.399 54.398
3 60.358 60.361 60.364 60.361
3. Pengukuran berat cawan + sampel setelah dioven
Sampel Berat cawan + sampel setelah dioven (gram)
Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Rata-rata
1 58.789 58.792 58.794 58.792
2 54.342 54.344 54.347 54.344
3 60.307 60.309 60.312 60.309
82
a. Kadar air ulangan ke 1
Kadar air = (b-c)
(b-a) x 100 %
=58.853 − 58.792
58.853 − 54.259× 100%
=0.061
4.594× 100%
= 1.323 %
b. Kadar air ulangan ke 2
Kadar air = (b-c)
(b-a) x 100 %.
=54.398 − 54.344
54.398 − 49.822× 100%
=0.054
4.576× 100%
= 1.18 %
c. Kadar air ulangan ke 3
Kadar air = (b-c)
(b-a) x 100 %.
=60.361 − 60.309
60.361 − 55.769× 100%
=0.052
4.592× 100%
= 1.132 %
Kadar air rata-rata dari ulangan ke 1 sampai ulangan ke 3 adalah sebagai berikut:
Rata-rata kadar air = 1.323 % + 1.18 % + 1.132 %
3
= 1.211
83
Lampiran 6. Perhitungan Rendemen
Ekstrak etanol 96% Bekatul
Berat ekstrak pekat = 36,6335 gram
Berat sampel = 250 gram
Rendemen = berat ekstrak pekat
berat sampel× 100%
= 36,6335 gram
250 gram× 100%
= 14,6534 %
84
Lampiran 7. Pengujian Antioksidan
7.1 Hasil uji aktivitas antioksidan
Ekstrak Etanol 96% Bekatul
Asam Askorbat (Vitamin C)
Konsentrasi
sampel (ppm)
Absorbansi %
Antioksidan Kontrol Asam askorbat
10 0.6556 0.1309 80.033
50 0.4656 0.0513 88.982
100 0.4645 0.0315 93.218
150 0.4650 0.025 94.624
200 0.4640 0.0217 95.323
400 0.4637 0.0198 95.730
800 0.4639 0.0181 96.098
7.2 Hasil nilai IC50 menggunakan GraphPad Prism8
Ekstrak etanol 96% bekatul
% Aktivitas
Antioksidan Global (shared)
Comparison of Fits Can't calculate
Null hypothesis Different curve for each data set
Alternative hypothesis One curve for all data sets
P value
Conclusion (alpha = 0.05) Models have the same DF
Preferred model Different curve for each data set
F (DFn, DFd)
Different curve for each data set
Best-fit values
Bottom = 0.000
Konsentrasi
Sampel
(ppm)
Absorbansi %
Antioksidan Kontrol 1 2 3 Rata-rata
10 0.6031 0.4685 0.4768 0.4658 0.4703 22.016
50 0.606 0.4239 0.4097 0.4255 0.4197 30.742
100 0.6044 0.3849 0.3950 0.3919 0.3906 35.374
150 0.6040 0.3640 0.3518 0.3481 0.3546 41.291
200 0.6050 0.3296 0.3271 0.3389 0.3318 45.140
400 0.6035 0.2102 0.2086 0.2040 0.2076 65.606
800 0.6032 0.0767 0.1241 0.1280 0.1096 81.830
85
Top = 100.0
LogIC50 2.269
HillSlope 0.6923
IC50 185.7
Span = 100.0
95% CI (profile likelihood)
LogIC50 2.046 to 2.499
HillSlope 0.3746 to 1.173
IC50 111.1 to 315.5
Goodness of Fit
Degrees of Freedom 5
R squared 0.8968
Sum of Squares 269.6
Sy.x 7.343
Constraints
Bottom Bottom = 0
Top Top = 100
One curve for all data sets
Best-fit values
Bottom = 0.000
Top = 100.0
LogIC50 2.269 2.269
HillSlope 0.6923 0.6923
IC50 185.7 185.7
Span = 100.0
95% CI (profile likelihood)
LogIC50 2.046 to 2.499 2.046 to 2.499
HillSlope 0.3746 to 1.173 0.3746 to 1.173
IC50 111.1 to 315.5 111.1 to 315.5
Goodness of Fit
Degrees of Freedom 5
R squared 0.8968 0.8968
Sum of Squares 269.6 269.6
Sy.x 7.343
Constraints
Bottom Bottom = 0
Top Top = 100
LogIC50 LogIC50 is shared
HillSlope HillSlope is shared
Number of points
# of X values 7
# Y values analyzed 7
86
0 1 2 3 4
0
20
40
60
80
100
Ekstrak Etanol 96% Bekatul
Log ppm
% A
kti
vit
as A
nti
oksid
an
Asam askorbat (Vitamin C)
% Aktivitas
antioksidan Global (shared)
Comparison of Fits Can't calculate
Null hypothesis Different curve for each data set
Alternative hypothesis One curve for all data sets
P value
Conclusion (alpha = 0.05) Models have the same DF
Preferred model Different curve for each data set
F (DFn, DFd)
Different curve for each data set
Best-fit values
Bottom = 0.000
Top = 100.0
LogIC50 -0.2147
HillSlope 0.4955
IC50 0.6100
Span = 100.0
95% CI (profile likelihood)
LogIC50 -0.5572 to 0.03474
HillSlope 0.4167 to 0.5805
IC50 0.2772 to 1.083
Goodness of Fit
Degrees of Freedom 5
R squared 0.9819
87
Sum of Squares 3.668
Sy.x 0.8565
Constraints
Bottom Bottom = 0
Top Top = 100
One curve for all data sets
Best-fit values
Bottom = 0.000
Top = 100.0
LogIC50 -0.2147 -0.2147
HillSlope 0.4955 0.4955
IC50 0.6100 0.6100
Span = 100.0
95% CI (profile likelihood)
LogIC50 -0.5572 to 0.03474 -0.5572 to 0.03474
HillSlope 0.4167 to 0.5805 0.4167 to 0.5805
IC50 0.2772 to 1.083 0.2772 to 1.083
Goodness of Fit
Degrees of Freedom 5
R squared 0.9819 0.9819
Sum of Squares 3.668 3.668
Sy.x 0.8565
Constraints
Bottom Bottom = 0
Top Top = 100
LogIC50 LogIC50 is shared
HillSlope HillSlope is shared
Number of points
# of X values 7
# Y values analyzed 7
88
0 1 2 3 4
75
80
85
90
95
100
Asam Askorbat
log ppm
% A
kti
vit
as a
nti
oksid
an
89
Lampiran 8. Data Kadar Glukosa Darah dan Uji Gambaran Histologi
Pankreas Mencit
8.1 Data Kadar Glukosa Darah
Kelompok
Ulangan
H0
H1
H15
Rata-rata H15
1 105 103 100
84.4
KN 2 117 120 108
3 83 79 74
4 64 64 56
1 72 600 470
278,5 KP 2 40 409 111
3 56 600 261
4 68 570 272
1 52 581 476
299,75 KD1 2 67 247 424
3 87 264 221
4 96 597 320
1 82 210 141
177,75 KD2 2 101 600 192
3 125 600 217
4 74 394 161
1 70 317 120
266,75 KD3 2 115 528 418
3 66 395 377
4 67 284 152
8.2 Jumlah Sel Pankreas
Perlakuan Mencit ke-
Total Rata-rata ± SD
1 2 3 4
Kontrol Normal 83 65 96 100 344 86 ± 15.77
Kontrol Positif 17 48 42 40 147 36,75 ± 13.60
Kontrol Dosis 1 30 30 40 44 144 36 ± 7.11
Kontrol Dosis 2 54 50 46 58 208 52 ± 5.16
Kontrol Dosis 3 78 38 42 44 202 50,5 ± 18.50
90
8.3 Hasil Uji Normalitas (Saphiro-wilk) Jumlah Sel Pankreas Mencit Dengan
Menggunakan SPSS 16.00
Tujuan : Untuk mengetahui apakah data terdistribusi normal
Hipotesis : H0 : Data tidak terdistribusi normal
H1 : Data terdistribusi normal
α : 0,05
Penarikan kesimpulan: H0 diterima apabila nilai signifikansi ≤ 0,05
H0 ditolak apabila nilai signifikansi ≥ 0,05
Tests of Normality
Perlakuan
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
Jumlah_Sel_Pankreas Kontrol Normal .237 4 . .921 4 .544
Kontrol Positif .344 4 . .844 4 .207
Dosis 1 .300 4 . .838 4 .189
Dosis 2 .151 4 . .993 4 .972
Dosis 3 .387 4 . .754 4 .042
a. Lilliefors Significance Correction
Kesimpulan : Perlakuan 3 memiliki nilai signifikansi ≤ 0,05 sehingga H0 diterima
dan data tidak terdistribusi secara normal. Namun, pada perlakuan
yang lain memiliki nilai signifikansi ≥ 0,05 sehingga data terdistribusi
secara normal.
91
8.4 Hasil Uji Homogenitas Jumlah Sel Pankreas Mencit dengan Menggunakan
SPSS 16.00
Tujuan : Untuk mengetahui apakah kelima perlakuan mempunyai varian yang
sama
Hipotesis : H0 : Kelima perlakuan adalah sama
H1 : Kelima perlakuan adalah tidak sama
α : 0,05
Penarikan kesimpulan: H0 diterima apabila nilai signifikansi ≥ 0,05
H0 ditolak apabila nilai signifikansi ≤ 0,05
Test of Homogeneity of Variances
Jumlah_Sel_Pankreas
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.579 4 15 .231
Kesimpulan : Nilai signifikansi > 0,05 sehingga H0 diterima dan kelima perlakuan
adalah sama.
8.5 Hasil Uji ANOVA Jumlah Sel Pankreas Mencit Dengan Menggunakan
SPSS 16.00
Tujuan : Untuk mengetahui apakah kelima perlakuan mempunyai rata-rata
yang sama
Hipotesis : H0 : Tidak ada pengaruh perlakuan terhadap jumlah sel pankreas
H1 : Ada pengaruh perlakuan terhadap jumlah sel pankreas
α : 0,05
Penarikan kesimpulan:
92
H0 diterima apabila nilai signifikansi ≥ 0,05 dan Fhitung ≤ FTabel
H0 ditolak apabila nilai signifikansi ≤ 0,05 dan Fhitung ≥ FTabel
ANOVA
Jumlah_Sel_Pankreas
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 6586.000 4 1646.500 9.648 .000
Within Groups 2559.750 15 170.650
Total 9145.750 19
Kesimpulan: Nilai signifikansi ≤ 0,05 dan nilai Fhitung (9.648) ≥ FTabel 3,06. Sehingga
H0 ditolak dan terdapat pengaruh perlakuan terhadap jumlah sel pankreas.
Post Hoc Test
Jumlah_Sel_Pankreas
Duncan
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2
Dosis 1 4 36.0000
Kontrol Positif 4 36.7500
Dosis 3 4 50.5000
Dosis 2 4 52.0000
Kontrol Normal 4
86.0000
Sig. .130 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Berdasarkan data yang diperoleh, dapat diketahui bahwa:
Perlakuan kontrol positif, dosis 1,2 dan 3 memiliki pengaruh namun tidak memiliki
perbedaan yang nyata. Namun, terlihat bahwa dosis 2 memiliki jumlah sel pankreas
yang lebih tinggi dibandingkan dosis 3 dan 1.
93
8.6 Koefisien Keragaman
KK = √𝑲𝑻𝒈𝒂𝒍𝒂𝒕
𝒀× 100%
= √𝟏𝟕𝟎,𝟔𝟓𝟎
𝟓𝟐,𝟐𝟓× 100%
= 25 %
8.7 Hubungan Rata-rata Kadar Glukosa Darah dengan Jumlah Sel Pankreas
Kelompok
Perlakuan
Kadar Glukosa
Darah
Jumlah Sel
Pankreas
KN 84.4 86
KP 278.5 36.75
KD1 299.75 36
KD2 177.75 52
KD3 266.75 50.5
0
50
100
150
200
250
300
KN KP KD1 KD2 KD3
84,4
278,5299,75
177,75
266,75
86
36,75 3652 50,5
Kad
ar G
luko
sa D
arah
(m
g/d
L)
dan
Sel
Pan
kre
as (
Buah
)
Perlakuan
Rata-rata Kadar Glukosa Darah
dan Jumlah Sel Pankreas
Kadar glukosa darah jumlah sel pankreas
SK Db JK KT F Sig.
Perlakuan 4 6586.000 1646.500 9.648 .000
Galat 15 2559.750 170.650
Total 19 9145.750
94
Lampiran 9. Dokumentasi Penelitian
9.1 Dokumentasi Penelitian
Bekatul Kasar Bekatul Halus Bekatul Kering
Preparasi Ekstraksi Ekstraksi Penyaringan
Filtrat Bekatul Rotary Evaporator Ekstrak Bekatul
95
Larutan DPPH 0,2 mM Mencit Putih Terapi Ekstrak Bekatul
Pengukuran KGD Dislokasi Leher Preparasi pembedahan
Organ Mencit Pewarnaan HE Preparat dan Pengamatan Histologi
96
9.2 Dokumentasi Hasil penelitian
9.2.1 Uji Antioksidan
Blanko dan Kontrol Asam Askorbat (Vit.C) Sampel 10 dan 50 ppm
Sampel 100 dan 150 ppm Sampel 200 dan 400 ppm Sampel 800 ppm
9.2.2 Hasil Pengamatan Histologi
Normal U1 Normal U2
97
Normal U3 Normal U4
Positif U1 Positif U2
Positif U3 Positif U4
98
Dosis 1 U1 Dosis 1 U2
Dosis 1 U3 Dosis 1 U4
Dosis 2 U1 Dosis 2 U2
99
Dosis 2 U3 Dosis 2 U4
Dosis 3 U1 Dosis 3 U2
Dosis 3 U3 Dosis 3 U4
100
Lamdha Maks DPPH
Tanggal Analisa : 06 Juni 2018
Scan Analysis Report
Report Time : Wed 06 Jun 02:05:20 PM 2018
Method:
Batch: D:\Khalimatul Ulyah\Lamdha Maks DPPH (06-06-2018).DSW
Software version: 3.00(339)
Operator: Rika
Sample Name: DPPH
Collection Time 6/6/2018 2:05:55 PM
Peak Table
Peak Style Peaks
Peak Threshold 0.0100
Range 800.0nm to 400.0nm
Wavelength (nm) Abs
________________________________
514.9 0.241
101
Absorbansi DPPH Sampel Vitamin C
Tanggal Analisa : 07 Agustus 2018
Advanced Reads Report
Report time 8/7/2018 3:44:26 PM
Method
Batch name D:\Khalimatul Ulyah\Absorbansi DPPH Sampel
Vitamin C (07-08-2018).BAB
Application Advanced Reads 3.00(339)
Operator Rika
Instrument Settings
Instrument Cary 50
Instrument version no. 3.00
Wavelength (nm) 514.9
Ordinate Mode Abs
Ave Time (sec) 0.1000
Replicates 3
Sample averaging OFF
Comments:
Zero Report
Read Abs nm
________________________________________________
Zero (0.0957) 514.9
Analysis
Collection time 8/7/2018 3:44:26 PM
102
Sample F Mean SD %RSD Readings
____________________________________________________________
Kontrol 0.6560
0.6561
0.6556 0.0007 0.11 0.6548
10 ppm 0.1302
0.1310
0.1309 0.0006 0.46 0.1314
Kontrol 0.4651
0.4658
0.4656 0.0005 0.10 0.4660
50 ppm 0.0511
0.0515
0.0513 0.0002 0.41 0.0514
Kontrol 0.4646
0.4646
0.4645 0.0001 0.03 0.4643
100 ppm 0.0315
0.0315
0.0315 0.0000 0.11 0.0316
Kontrol 0.4646
0.4653
0.4650 0.0003 0.07 0.4650
150 ppm 0.0251
0.0248
0.0250 0.0002 0.70 0.0251
Kontrol 0.4639
0.4639
0.4640 0.0002 0.03 0.4641
103
200 ppm 0.0217
0.0218
0.0217 0.0000 0.08 0.0217
Kontrol 0.4639
0.4636
0.4637 0.0001 0.03 0.4636
400 ppm 0.0197
0.0199
0.0198 0.0001 0.41 0.0198
Kontrol 0.4640
0.4639
0.4639 0.0001 0.01 0.4639
800 ppm 0.0181
0.0181
0.0181 0.0000 0.19 0.0181
Results Flags Legend
R = Repeat reading
104
Absorbansi DPPH Sampel Ekstrak Bekatul
Tanggal Analisa : 31 Agustus 2018
Advanced Reads Report
Report time 8/31/2018 1:39:57 PM
Method
Batch name D:\Khalimatul Ulyah\Absorbansi DPPH Sampel
Ekstrak Bekatul (31-08-2018).BAB
Application Advanced Reads 3.00(339)
Operator Rika
Instrument Settings
Instrument Cary 50
Instrument version no. 3.00
Wavelength (nm) 514.9
Ordinate Mode Abs
Ave Time (sec) 0.1000
Replicates 3
Sample averaging OFF
Comments:
Zero Report
Read Abs nm
________________________________________________
Zero (0.1091) 514.9
Analysis
Collection time 8/31/2018 1:39:57 PM
Sample F Mean SD %RSD Readings
105
____________________________________________________________
Kontrol 0.6065
0.6002
0.6031 0.0032 0.53 0.6025
10 ppm U1 0.4681
0.4685
0.4685 0.0004 0.08 0.4688
Kontrol 0.6044
0.6038
0.6038 0.0005 0.09 0.6033
10 ppm U2 0.4780
0.4765
0.4768 0.0010 0.22 0.4760
Kontrol 0.6027
0.6026
0.6026 0.0001 0.02 0.6025
10 ppm U3 0.4659
0.4662
0.4658 0.0005 0.10 0.4653
Kontrol 0.6088
0.6094
0.6092 0.0003 0.05 0.6094
50 ppm U1 0.4241
0.4241
0.4239 0.0003 0.08 0.4235
Kontrol 0.6043
0.6042
0.6045 0.0004 0.07 0.6049
106
50 ppm U2 0.4096
0.4098
0.4097 0.0001 0.03 0.4098
Kontrol 0.6047
0.6043
0.6044 0.0003 0.04 0.6043
50 ppm U3 0.4252
0.4255
0.4255 0.0003 0.06 0.4257
Kontrol 0.6050
0.6054
0.6053 0.0002 0.04 0.6055
100 ppm U1 0.3850
0.3847
0.3849 0.0002 0.04 0.3850
Kontrol 0.6041
0.6037
0.6041 0.0005 0.08 0.6046
100 ppm U2 0.3947
0.3942
0.3950 0.0010 0.24 0.3960
Kontrol 0.6035
0.6039
0.6039 0.0004 0.07 0.6043
100 ppm U3 0.3923
0.3916
0.3919 0.0004 0.10 0.3917
Kontrol 0.6031
107
0.6026
0.6030 0.0003 0.05 0.6032
150 ppm U1 0.3643
0.3640
0.3640 0.0003 0.09 0.3637
Kontrol 0.6038
0.6044
0.6043 0.0004 0.07 0.6047
150 ppm U2 0.3518
0.3519
0.3518 0.0001 0.03 0.3518
Kontrol 0.6044
0.6048
0.6048 0.0004 0.07 0.6052
150 ppm U3 0.3483
0.3478
0.3481 0.0003 0.08 0.3483
Kontrol 0.6045
0.6046
0.6045 0.0001 0.01 0.6044
200 ppm U1 0.3298
0.3295
0.3296 0.0001 0.04 0.3296
Kontrol 0.6041
0.6037
0.6037 0.0004 0.06 0.6033
200 ppm U2 0.3269
0.3272
108
0.3271 0.0002 0.06 0.3273
Kontrol 0.6072
0.6070
0.6068 0.0005 0.08 0.6063
200 ppm U3 0.3371
0.3381
0.3389 0.0022 0.66 0.3414
Kontrol 0.6040
0.6042
0.6041 0.0001 0.01 0.6041
400 ppm U1 0.2102
0.2101
0.2102 0.0002 0.09 0.2104
Kontrol 0.6036
0.6032
0.6034 0.0002 0.03 0.6033
400 ppm U2 0.2086
0.2084
0.2086 0.0001 0.06 0.2087
Kontrol 0.6032
0.6030
0.6032 0.0003 0.05 0.6035
400 ppm U3 0.2043
0.2033
0.2040 0.0006 0.31 0.2045
Kontrol 0.6035
0.6034
0.6033 0.0003 0.05 0.6029
109
800 ppm U1 0.0762
0.0773
0.0767 0.0006 0.72 0.0766
Kontrol 0.6032
0.6037
0.6033 0.0003 0.05 0.6031
800 ppm U2 0.1239
0.1243
0.1241 0.0002 0.17 0.1242
Kontrol 0.6029
0.6031
0.6030 0.0001 0.02 0.6030
800 ppm U3 0.1282
0.1276
0.1280 0.0003 0.25 0.1282
Results Flags Legend
R = Repeat reading
110