Praktikum 5 :

A. TreponemaB. Cytomegalovirus C. Rubella virus, Herpes virus

MEDICAL MICROBIOLOGY third edition (2004)Cedric Mims

Diagnosa Laboratorium

Deteksi langsung

- Mikroskop lapang gelap (dark field examination)

Spesimen diambil secara aspirasi, kemudian teteskan pada gelas alas, tutup, segera dilihat dengan mikroskop lapang gelap, dengan perbesaran 400 x, amati gerakan.

Treponema :- berbentuk spiral- ukuran panjang 8 – 10 um- terdiri dari 8 - 14 lekukan

Pemeriksaan dengan mikroskop lapang gelap

Pewarnaan Impregmentasi Perak

-Pemeriksaan dengan cara immunofluoresens

Spesimen dapat diambil dari lesi kulit, rekatkan pada gelas alas. Tambahkan antibodi Treponema yang dilabel dengan fluorescein.

FITC (Fluorescein Isothiocyanate)

Antigen Treponema

Antibodi Treponema/FITC (Mouse IgG/FITC)

Lihat dengan mikroskop Fluoresens

Hasil positif: Berfluoresensi hijau

Pewarnaan Immunofluoresens

Reaksi serologi terhadap penyakit sifilis

-Non spesifik :

-VDRL (Venereal Deseases Reference Laboratory)-RPR (Rapid Plasma Reagin)

-Spesifik :

-TPHA (Treponema Pallidum Haemagglutination Test)-FTA-ABS (Fluorescent Treponemal Antibody Absorption)

Reaksi Flokulasi

Partikel antigen (berupa lipid) dicampur dengan antibodi (Reagin) Flokulasi.Digunakan pada STS (Serology Test for Syphilis).Tes non-spesifik pada sifilis.

1. Tes VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)

Antigen Serum pasien NaCl

P KP K

2. Tes RPR (Rapid Plasma Reagin).

Antigen diikatkan dengan charcoal + serum/plasma pasiencharcoal menggumpal (warna hitam).

Antigen Serum pasien NaCl

P KP K

Pengenceran serum :

1 : 2 1 : 4 1 : 8 1 : 16

K + K -

Titer antibodi : ………

RPR secara kwantitatif

sdm

sdm

sdm

sdm

Ag Treponema

Sel darah merah dilapisi antigen Treponema

Antibodi Treponema

+

Hemaglutinasi

Sel kontrol (sel darah merahtanpa antigen Treponema)

Sel test (sel darah merahdengan antigen Treponema)

Serum kontrol positif(ada antibodi Treponema)

Serum kontrol negatif(tanpa antibodi Treponema)

-

KIT TERDIRI DARI :

1

4

2

3

DiluentBuffer 100 ul

Serum 25 ul

25 ul 25ul 25 ul 25 ul25 ul 25 ul 25 ul

Buang25 ul

Control Cell 75 ul

Test cell75 ul

1 2 3 4 5 6 7 8

1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560

25 ul25 ul 25 ul 25 ul 25 ul25 ul 25 ul

Serum kontrol negatif Serum kontrol positif

25 ul 25 ul 25 ul 25 ul

Control Cell 75 ul

Control Cell 75 ul

Testcell 75 ul

Testcell 75 ul

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Kontrol serum ( - )

Kontrol serum ( + )1/

40

1/80

1/16

0

1/32

0

1/64

0

1/12

80

1/25

60

Penipisan serum

Titer antibodi : ………..

Kuman Treponemapada slide

Tambahkan Serum pasien(VDRL & RPRPositif)

Permukaan kumanTreponema

Teknik FTA-ABS (fluorescent treponemal antibody absorption)

Tambahkan anti human antibody (anti human IgG)yang dilabel dGN fluoresein

Pemeriksaan infeksi CMV (Cytomegalovirus)

Metoda:

1. Immunofluorescene, untuk mendeteksi antigenemia2. Biakan virus dan imunoperoksidasa, untuk mendeteksi viremia.

1. Deteksi antigenemia dengan Immunofluoresens

Caranya :

- Ambil darah dengan EDTA (antikoagulan)- Pisahkan sel leukosit- Buat preparat dengan jumlah sel 200.000- Keringkan dan rekatkan- Lakukan pewarnaan immunofluoresens:

- Tambahkan antibodi monoklonal (anti CMV)- Inkubasi 30’, kemudian cuci- Tambahkan antibodi sekunder (anti-antibodi pertama) yang dilabel dengan fluoresein.- Inkubasi 30’ (tempat gelap). Cuci.- Keringkan, dan tutup dengan cover glass- Periksa dengan mikroskop fluorescen.

Hasil: Positif bila terlihat fluoresen hijau kekuningan. Negatif, sel berwarna kemerahan

IMMUNOFLUORESCENS

FITC (Fluorescein Isothiocyanate)

Antigen CMV

Monoklonal antibodi CMV

Anti mouse IgG/FITC

Lihat dengan mikroskop Fluoresens

Hasil positif: Fuoresens hijau kekuningan.

Immunofluorescen dari biakan CMV pada sel-sel fibroblast

Imunofluoresen cmv dari darah penderita

Imunofluoresen dari darah penderita

Biakan virus dengan immunoperoksidase

Caranya :

- Sediakan biakan sel HEL (Human Embryonic Lung)- Darah yang hendak diperiksa, diolah seperti pada cara antigenemia (lakukan secara aseptis).- Lakukan inkulasi pada biakan sel HEL - Inkubasi 37°C, 5% CO2, selama 2-4 hari

Lakukan pewarnaan peroksidase:- Buang medium kultur- Tambahkan anti-CMV- Inkubasi 37°C, 30’- Tambahkan rabbit anti-mouse IgG peroxidase- Inkubasi 37°C, 30’, kemudian cuci- Tambahkan substrat (DAB + H2O2)- Inkubasi 10’, amati dibawah mikroskop inverted.

Hasil : Positif, ditemukan sel fibroblast dengan inti warna coklat.

IMMUNOPEROXIDASE

POD

Substrat(DAB + H2O2)

+

Hasil Positif : warna coklat

Antigen CMV

Monoklonal antibodi CMV

Anti mouse IgG/POD

Pewarnaan Immunoperoksidase