Pra Kata

Seiring dengan perkembangan zaman, pendidikan akan terus

mengalami perubahan, penyempurnaan, dan penyesuaian. Mata kuliah

Pengoperasian dan Pemeliharaan Alat sebagai pendukung utama untuk

meningkatkan sumber daya manusia yang berkualitas , tentunya harus

sesuai dengan kondisi yang dibutuhkan.

Penyajian makalah ini manggunakan pendekatan komunikatif dan

mengarah pada keterampilan proses. Selain itu, diperhatikan pula tahap

– tahap perkembangan mahasiswa dan kesesuaiannya dengan

lingkungan, kebutuhan pembangunan nasional, serta perkembangan

ilmu dan teknologi. Penguraian materi menggunakan bahasa yang

mudah dimengerti dan dipahami. Hal tersebut dimaksudkan agar apa

yang telah dipelajari oleh mahasiswa tidak hilang dari ingatan.

Dengan segala kerendahan hati, penulis menerima saran dan

kritik konstruktif dari semua pihak. Penulis mengucapkan terima kasih

kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan makalah

ini. Semoga makalah ini memenuhi harapan kita semua.

Bogor, Desember 2009

Penulis

Bab 1 Teori Singkat

Nama instrumen Asam Amino L-8900 Analyzer, Alat ini berasal dari

Negara Jepang dengan merk Hitachi, model L 8900. Analisis asam amino

lengkap-VWR menawarkan solusi dari instrumen canggih, berbagai dipak

kolom, baik yang dikembangkan sebuah metode gradien dikombinasikan

dengan dioptimalkan siap-di-gunakan buffer, menciptakan jawaban yang

tepat untuk setiap analisis laboratorium yang berhubungan dengan

analisis asam amino. Sistem ini sepenuhnya dikendalikan oleh FDA

compliant terbukti dan Elite ™ Kromatografi EZChrom sistem data.

Fleksibel baru otomatis Asam Amino L-8900 Analyzer

mengkombinasikan keuntungan pertukaran ion klasik metode

pemisahan dengan teknik HPLC modern. Batas deteksi tak tertandingi

dapat dicapai - 3 pmol dari asam aspartat dengan menggunakan metode

reaksi ninhydrin. Penentuan asam amino standar membutuhkan waktu

hanya 30 menit (bersih) dan penentuan cairan fisiologis dapat

dilaksanakan sepenuhnya secara otomatis hanya dalam 110 menit.

Asam Amino L-8900 Analyzer yang mampu menganalisis fisiologis

cairan dan protein hydrolysates. L-8900 dikendalikan oleh Elite untuk

Hitachi EZChrom AAA (dikembangkan oleh Hitachi berdasarkan data

kromatografi EZChrom EliteTM sistem) dan mendukung sistem

kromatografi dari berbagai produsen.

Bab 2 Bagian-Bagian Alat dan Spesifikasi

Bagian-bagian dari alat meliputi :

Gambar 1 Instrumen Analisis Asam Amino

a f

e

g

b

c

d h

Gambar 2 Komponen Instrumen Analisis Asam Amino

Keterangan :

a Autosempel

Dua contoh rak disediakan selama 2 x 60 sampel botol (1.5 ml

standar). Rak sampel dengan sampel termasuk didinginkan

dengan suhu konstan 10 ° C. Ekstraksi sampel akan dilakukan

melalui pompa suntik diprogram bebas 1 μL langkah-langkah

dalam kisaran 1-50 μL. Contoh ekstraksi dan injeksi bebas dari

kerugian. Seluruh volume sampel dipindahkan ke bagian atas

kolom pemisahan melalui katup injeksi motor. Setelah pembilasan

injeksi otomatis memastikan langkah pencegahan kontaminasi

silang. Ini didedikasikan xzy-drived autosampler menyuntikkan

hingga 120 sampel dengan variabel volume injeksi antara 1 dan

40 μL. Reproduktifitas tinggi dan integrasi sistem penuh menjamin

kinerja yang sangat bagus.

Gambar 3 Autosempler

b Pompa

Double-piston. Pompa menjamin rasio pencampuran reagen dan

buffer. Reaksi kinetik konstan untuk proses derivatization. Pompa

bekerja sampai dengan maksimum tekanan balik dari 400 bar.

Laju aliran programmable bebas 0,01-9,9 ml / menit. Laju aliran

standar adalah 0,2 ml / minwith sebuah reproduktifitas sebesar

0,1% (RSD).

c Degasser

Degassing dari semua diperlukan buffer dan reagen.

d Pembuangan Limbah

Tampungan dari limbah atau sisa-sisa hasil produk yang tidak

terpakai.

e Oven kolom

Menstabilkan dan memperoleh respon yang cepat karena adanya

efek pemanasan.

f Fotometer

Kolom sebagai pengiriman campuran. Fotometer mikro bekerja

sama dengan panjang gelombang 440nm dan 570 nm. Sistem

optik langsung terintegrasi ke dalam cara cairan. Sensitivitas

adalah empat kali lebih baik daripada fotometer lainnya. Volume

aliran melalui sel adalah 10 μL. Analog output dari kurang lebih 5

volts. Mengukur jarak dapat dipilih dalam dua tingkat, tinggi dan

rendah. dua atau lebih reagen ninhydrin tepat sebelum

derivatization asam amino.

g Reaktor

Tempat terjadinya reaksi kolom dengan berlian khusus

pengepakan.

h Botol buffer dan eluen

Buffer telah diisi dalam botol steril 500 mL. Sebuah flowthrough

steril untuk mencegah kontaminasi, yang dijamin melalui steril-

filter. Setiap botol dikendalikan melalui sistem elektro-optik dan

memperingatkan jika volume buffer habis.

Spesifikasi

Tabel 1 Spesifikasi Instrumen

Kinerja( Hasil pengukuran 5 sampel oleh hydrolyzate protein assay (standar) method)

Waktu analisis Approx. 30 menit (bersih)Reproduktifitas puncak waktu retensi

CV 0.3% (Arg), 0.5% (Ala)

Reproduktifitas dari daerah puncak

CV 1.0% (Gly, His)

Batas deteksi 3 pmol (S/N = 2, Asp)Analyzer

Kolom4.6 mm ID ' 60 mm L * ,dilengkapi dengan resin penukar ion

Pompapengiriman tekanan : 0-30 Mpa (0-3006 kgf/cm2), Rentang arus 0.000-0.999 mL/menit

Autusempler

Injeksi : langsung metode injeksi, Kapasitas botol sampel 1500 mL, Jumlah yang ditampung : 200 (200 ketika opsional pendingin diinstal), Volume injeksi sampel : 1-100 mL

Oven kolomSistem : Peltier, Rentang pengaturan suhu 20-85 (dalam 1 langkah)

Unit reaksiSistem pemanas elektronik (reaksi kolom), Pengaturan suhu : 50-140(dalam 1 langkah)

Fotometer Spektrofotometer : Aplantic cekung kisi difraksiElite untuk HITACHI EZChrom Amino Acid Analyzer

CPU 32 bit OS, Windows XP ®*CRT Layar warna 43.2 cmDimensi (termasuk PC) 900 (W) '650 (D)' 1050 (H) mmBerat (termasuk PC) Approx. 250 kgOperating temperatur range 15-35

Listrik115 V AC/220 240 V AC, 800 V A dan di atas, w/dalam 50/60, 0.5 Hz

Gas N2 N2 sumber gas harus siap

Bab 3 Standar Prosedur Pengoperasian dan Pemeliharaan

Cara pengoperasian

1. Hubungkan alat, computer dan printer ke sumber arus 220 V

2. Nyalakna computer dan printer terlebih dahulu setelah itu

nyalakan alat dengan menekan tombol on/off pada main unit

spektrofotometer.

3. Klik tombol start dan pilih program “EZ Chrom EliteTM”

4. Tampilan program akan muncul dan memberitahukan bahwa

proses inisialisasi sedang berlangsung. Pada proses ini terjadi

pemeriksaan secara self diagnostic dan apabila terjadi kesalahan

aka nada pesan yang muncul.

5. Tunggu hingga proses inisialisasi selesai ditandai dengan

munculnya tulisan ready

6. Masukkan sempel pada auto sempler

7. Setelah itu, keluarkan kuvet dan bersihkan dari pelarutnya

kemudian keringkan.

Klik tanda silang pada bagian kanan atas kemudian tekan tombol on/off

pada main menu alat

Pemeliharaan

1. Sumber arus yang digunakan harus sesuai, standarnya memiliki

tegangan

220 volt.

2. Usahakan memekai stabilizer agar arus yang mengalir pada alat

stabil dan

mengantisipasi akan kerusakan yang cepat apabila arus turun

naik.

3. Kuvet atau botol sempel yang digunakan harus kering dan bersih.

4. Penyimpanan kuvet yang benar (dengan alkohol).

5. Satu perangkat alat satu computer dan printer dalam

pengoperasiannya.

6. Buffer dan reagen yang digunakan harus murni, tanpa pengotor

karena dapat

merusak kolom ataupun alat.

Bab 4 Cara Preparasi Sampel, Pengolahan Data, dan

Aplikasi

Analisis asam amino adalah suatu proses untuk menentukan

jumlah asam amino yang masing-masing individu dalam suatu protein

atau peptida. Ada empat langkah dalam analisis asam amino:

1. Hidrolisis

2. Derivatisation

3. Pemisahan asam amino derivatised

4. Interpretasi data dan perhitungan

1. Hidrolisis

Sebuah jumlah yang dikenal (2nmols) standar internal

(norleucine) ditambahkan ke sampel. Norleucine karena tidak

secara alami terjadi dalam protein, stabil terhadap hidrolisis asam

dan dapat dipisahkan dari asam amino protein lain, itu membuat

standar internal yang sangat baik. Sampel, mengandung paling

sedikit 1 nmoles dari masing-masing asam amino (yaitu 2 ug

protein) kemudian ditransfer ke khusus hidrolisis furnaced

dibersihkan dan tabung dan dikeringkan dibawah vakum. Tabung

ditempatkan dalam sebuah botol berisi 5,7 N HCl dan sejumlah

kecil fenol dan protein dihidrolisis oleh uap HCl di bawah kondisi

vakum. Hidrolisis dilakukan selama 22-24 jam pada 110 deg. C.

Setelah hidrolisis, sampel ini dilarutkan dalam air suling yang

mengandung EDTA (untuk chelate ion logam) dan 20-40% dari

setiap sampel diletakkan di atas kaca asam amino analisa sampel

slide. Hidrolisis dapat memiliki berbagai efek pada asam amino

yang berbeda.

2. Derivatisation

Asam amino bebas tidak dapat dihidrolisis dpt dideteksi oleh HPLC

kecuali jika mereka telah derivatised. Proses ini memakan waktu

sekitar 30 menit per sampel. Larutan standar yang mengandung

jumlah yang diketahui (100 pmol) dari 17 Common asam amino

bebas juga dimuat di 3 atau 6 terpisah analisa asam amino bintik-

bintik dan derivatised sampel. Ini digunakan untuk menghasilkan

file kalibrasi yang dapat digunakan untuk menentukan kandungan

asam amino sampel. Setelah derivatisation, suatu larutan yang

mengandung metanol-asam amino PTC ditransfer ke sistem HPLC

bosan sempit untuk pemisahan.

3. Pemisahan

Asam amino dipisahkan pada fase terbalik C18 dan kolom silika

Kromofor PTC terdeteksi pada 254 nm. Semua asam amino akan

elute kira-kira 25 menit. Sistem buffer yang digunakan untuk

pemisahan adalah 120 mM sodium asetat pH 5.50 sebagai

penyangga A dan 70% asetonitril sebagai penyangga B. Program

ini dilaksanakan dengan menggunakan gradient buffer A dan B.

4. Interpretasi data dan perhitungan

Daerah puncak kromatografi diidentifikas menggunakan

Chromeleon ® Dionex analisis data sistem yang melekat pada

sistem analyzer asam amino. Sebuah file kalibrasi yang disediakan

digunakan dari nilai-nilai rata-rata retensi kali (dalam menit) dan

daerah (di (Au) dari asam amino pada standar 3-6 berjalan. Jumlah

masing-masing asam amino karena diketahui di-load ke analyzer,

faktor respons ((Au / pmol) dapat dihitung. faktor respons ini

digunakan untuk menghitung jumlah asam amino (dalam pmols)

dalam sampel. Jumlah setiap asam amino dalam sampel dihitung

dengan membagi puncak daerah masing-masing (dikoreksi untuk

absorptivitas molar yang berbeda dari berbagai asam amino)

dengan standar internal dalam kromatogram dan mengalikannya

dengan jumlah total standar internal ditambah kesampel asli.

Perangkat lunak yang kromatografi meramalkan kemungkinan

akan kembali ke Internal 2nmoles Standar (Nor Leu) dan dengan

demikian memberikan hasil untuk total jumlah yang Anda telah

pipetted ke tabung hidrolisis awalnya.

5. Mol persen mewakili jumlah masing-masing asam amino hadir

sebagai persentase dari total asam amino ditemukan dalam

sampel. Mol persen dapat bermanfaat untuk contoh dimana tidak

ada diketahui komposisi atau berat molekul, tidak spesifik berat

molekul, atau sampel mengandung campuran dari protein, asam

amino bebas da komponen lainnya.

[pmol individu asam amino] / [total pmol dari semua asam amino

dalam sampel] x 100 = mol persen dari masing-masing asam

amino.

Gambar 4 Langkah analis

Gambar 5 Diagram Kerja Alat

Gambar 6 Contoh Hydrolysate Analisis Protein - 50 Komponen Analisis

Asam amino dalam urin

Gambar 7 Contoh Hydrolisate Analisis Protein - 50 Asam Amino dalam Urine

Kondisi analisis Kolom : Transgenomic Lithium Amino Acid Column (for 63/7300

Systems) Flow Rate : 0.333 mL/min

Suhu : 32.5-63-80°C

Tekanan : 1200 PSIG

Detektor : Fluorescence

Injeksi : 20 µL

Contoh sampel yang terkandung meliputi PER, TAU, PETN, THR, GLU, GLY, LYS, HIS, LEU, TYR, PHE, NH3,BALA, BABA dan ALA.

Status analyzer screen (L-8900 Tab)

Mementau dan mengendalikan performmanual saat melihat status data.

Status analyzer screen (Option Tab)

Memonitor dan melakukan kontrol manual sementara status viewingthe

data.

Daftar Pustaka

Hitachi. 2009. Hitachi High Tech.[terhubung berkala].http://www.hitachi-hitec.com/global/science/lc/l8900.html. [ 26 Desember 2009]

Uci Davis Proteomics Core. Analisis Asam Amino. 2009. [terhubung berkala]. http://proteomics.ucdavis.edu/index.php?option=com_k2&id=58:aaa&view=item&Itemid=3. [ 26 Desember 2009]

VWR International Gmbh. 2009. Amino Acid Analyzer L-8900.[ terhubung berkala ]. http://www.linklab.gr/Uploads/VWR_AAA.Altar_GBfinal.pdf. [ 24 Desember 2009]

Anonim. 2009. Amino Acid Analyzer L-8900 [terhubung berkal]. http://www.hitachi-hhta.com/products/life-sciences-chemical-

analysis/amino-acid-analyzer/l-8900-dedicated-amino-acid-analyzer.[23 Desember 2009]