pengaruh perendaman j. agardh dalam larutan...

66
i PENGARUH PERENDAMAN Eucheuma spinosum J. Agardh DALAM LARUTAN PUPUK PROVASOLI’S ENRICH SEAWATER TERHADAP LAJU PERTUMBUHAN SECARA IN VITRO Oleh : YULIANA H411 09 012 Skripsi ini dibuat untuk melengkapi Tugas Akhir dan memenuhi syarat untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains pada Jurusan Biologi JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2013

Upload: others

Post on 03-Jan-2020

16 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

i

PENGARUH PERENDAMAN Eucheuma spinosum J. Agardh

DALAM LARUTAN PUPUK PROVASOLI’S ENRICH SEAWATER

TERHADAP LAJU PERTUMBUHAN

SECARA IN VITRO

Oleh :

YULIANA

H411 09 012

Skripsi ini dibuat untuk melengkapi Tugas Akhir dan memenuhi syarat untuk

Memperoleh Gelar Sarjana Sains pada

Jurusan Biologi

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR

2013

ii

LEMBAR PENGESAHAN

PENGARUH PERENDAMAN Eucheuma spinosum J. Agardh

DALAM LARUTAN PUPUK PROVASOLI’S ENRICH SEAWATER

TERHADAP LAJU PERTUMBUHAN

SECARA IN VITRO

Disetujui Oleh :

Pembimbing Utama

Drs. Muhtadin Asnady S, M.Si

NIP. 19621207 198803 1 003

Pembimbing Pertama Pembimbing Kedua

Dr. Elis Tambaru, M.Si Dr. Irma Andriani, M.Si

NIP. 19630102 199002 2 001 NIP. 19710809 199902 2 002

Makassar, 14 Agustus 2013

iii

KATA PENGANTAR

Tiada kata dan kalimat yang pantas terucap selain dari Alhamdulillah

Rabbil Alamin, kalimat yang mampu mengungkapkan rasa syukur penulis Kepada

Sang Pencipta atas segala karunia yang dilimpahkan kepada penulis, sehingga

penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul “Pengaruh Perendaman

Eucheuma Spinosum J. Agardh Dalam Larutan Pupuk Provasoli’s Enrich

Seawater (PES) Terhadap Laju Pertumbuhan Secara In vitro”.

Skripsi ini dapat terselesaikan dengan bantuan semua pihak yang telah

memberikan partisipasi, semangat dan dorongan kepada penulis. Oleh karena itu,

dalam kesempatan ini, penulis ingin menyampaikan rasa hormat dan terima kasih

kepada :

- Bapak Rektor Universitas Hasanuddin dan seluruh Staf di kampus merah.

- Bapak Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Hasanuddin, beserta seluruh Staf akademik yang telah

memberikan kemudahan dalam pengurusan berkas selama penulis

menempuh pendidikan di kampus.

- Bapak Dr. Eddy Soekandarsi, M.Sc selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Hasanuddin, dan

selaku Penasehat Akademik penulis, yang senantiasa membimbing dan

memberikan motivasi kepada penulis selama menjalani pendidikan di

Jurusan Biologi.

iv

- Bapak Sugeng Raharjho, A.Pi. selaku Kepala Balai yang telah

mengizinkan dan menfasilitasi penulis untuk melakukan penelitian di

Balai Budidaya Air Payau Takalar.

- Kepada Bapak Drs. Muhtadin Asnady Salam, M.Si selaku pembimbing

utama, dan Ibu Dr. Elis Tambaru, M.Si selaku pembimbing pertama. Serta

Ibu Dr. Irma Andriani, M.Si selaku pembimbing kedua. Kepada Bapak

Dr. Lideman, S.Pi, M.Sc selaku pembimbing lapangan, yang selama ini

telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk membimbing penulis

dalam melakukan penelitian di Balai Budidaya Air Payau Takalar.

- Kepada Dosen Tim Penguji, Bapak Dr. Fahruddin, M.Si selaku ketua

penguji, Ibu Dr. Rosana Agus, M.Si selaku Sekretaris penguji, serta Bapak

Drs. Munif S. Hassan, MS, Ibu Dr. Syahribulan, M.Si selaku anggota dari

tim penguji.

- Seluruh Dosen di Jurusan Biologi FMIPA UNHAS. Atas segala

pengorbanan waktu, pikiran serta tenaga dalam mendidik dan

membimbing penulis selama menjadi mahasiswa di Jurusan Biologi.

- Kepada kedua orang tuaku, atas segala ketulusan dan pengorbanannya

selama ini.

- Kepada seluruh saudara-saudaraku, di Jurusan Biologi, terspesial untuk

saudara se angkatanku.

- Kakak Syam, Kakak Helman, Bapak Akmal, Bapak Ilham, Bapak Suaib

dan seluruh Staf di Laboratorium Kultur Jaringan Rumput Laut BBAP

v

Takalar, atas segala bantuannya dan rasa kekeluargaan selama penulis

melakukan penelitian.

- Semua pihak yang tidak dapat penulis cantumkan satu persatu, semoga

Allah subuhana wa taala memberikan balasan yang lebih baik dan indah

atas semua keiklasan yang diberikan.

Harapan penulis, skripsi ini dapat bermanfaat sebagai acuan

dimasa yang akan datang. Demikianlah skripsi ini disusun untuk

menambah ilmu pengetahuan dalam bidang Biologi. Semoga Allah SWT

senantiasa menilai aktivitas kita sebagai amalan yang bernilai ibadah.

Amin.

Makassar, Juni 2013

Penulis

vi

ABSTRAK

Penelitian mengenai Pengaruh Perendaman Eucheuma spinosum J. Agardh

dalam Larutan Pupuk Provasoli’s Enrich seawater. Penelitian ini bertujuan untuk

1) mengetahui pengaruh lama waktu perendaman Eucheuma spinosum J. Agardh

dalam larutan pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES) terhadap laju

pertumbuhan secara In Vitro dan 2) untuk mengetahui perbandingan antara berat

dan panjang thallus Eucheuma spinosum J. Agardh pada waktu perendaman

berbeda. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Rumput Laut,

Balai Budidaya Air Payau Takalar, Kabupaten Takalar. Penelitian dirancang

menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan, A (0

jam/kontrol), B (6 jam), C (12 jam), D (18 jam), E (24 jam). Masing-masing

perlakuan diulang sebanyak 4 kali. Variabel yang diamati adalah laju

pertambahan berat eksplan dan laju pertambahan panjang eksplan. Panjang dan

berat eksplan diukur setiap 7 hari untuk menghitung laju pertumbuhan. Data

dianalisis menggunakan analisis satu arah ANOVA dan dilanjutkan dengan Uji

Beda Nyata Terkecil (BNT) untuk mengetahui beda nyata antar perlakuan. Hasil

penelitian menunjukkan bahwa perendaman dalam Pupuk Provasoli’s Enrich

seawater (PES) dapat mempengaruhi laju pertumbuhan rumput laut Eucheuma

spinosum J. Agardh, dengan waktu perendaman yang paling baik adalah 24 jam.

Kata kunci : Eucheuma spinosum, Media PES, Perendaman, Laju pertumbuhan

vii

ABSTRACT

The research of the effect of dipping time in Provasoli’s Enrich Seawater

(PES) medium on the in vitro growth of Eucheuma spinosum (E. spinosum)

J. Agardh. The research are aimed to 1) investigate the effect of dipping time in

PES medium on the in vitro growth of E. spinosum J. Agardh and 2) define the

ratio between weight and length of the thallus of E. spinosum J. Agardh under a

variety of dipping time in PES medium. The research had been conducted at

Seaweed Tissue Culture Laboratory, Research Centre of Brackishwater

Aquaculture, Takalar. The research was designed by using a Completely

Randomized Design (CRD) with 5 treatments of dipping time, those were 0 hour

(A,control),6 hours (B), 12 hours (C), 18 hours (D), 24 hours (E). Each treatment

was repeated 4 times. The observed variable was the rate of weight and long

explants. The weight and length of the explant were measured every 7 days in

order to calculate their growth rate. Data were analyzed using a one-way

ANOVA continued with Least Significant Different (LSD) to identify significant

different of the means. The result showed that the dipping time of PES medium

could affect the growth rate of E. spinosum J. Agardh with the optimum dipping

time was 24 hours.

Key words: Euchema spinosum, PES medium, dipping time, Growth rate

.

viii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................... ii

KATA PENGANTAR .................................................................................. iii

ABSTRAK ................................................................................................... vi

ABSTRACT ................................................................................................. vii

DAFTAR ISI ................................................................................................ viii

DAFTAR TABEL ........................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xiii

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1

I.1 Latar Belakang ................................................................................ 1

I.2 Tujuan Penelitian ............................................................................ 3

I.3 Manfaat Penelitian .......................................................................... 3

I.4 Waktu dan Tempat Penelitian.......................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 4

II.1 Biologi Rumput laut Eucheuma spinosum ...................................... 4

II.1.1 Morfologi E. Spinosum ............................................................... 5

II.1.2 Habitat E. Spinosum ................................................................... 6

II.1.3 Reproduksi E. Spinosum ............................................................. 7

II.1.4 Kandungan E. Spinosum .............................................................. 8

II.1.4 Potensi Pemanfaatan Eucheuma spinosum .................................. 8

ix

II.1.5 Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan

E. Spinosum ................................................................................ 9

II.2 Kultur Rumput Laut ...................................................................... 14

II.2.1 Kelebihan dan Kelemahan Perbanyakan Secara

In Vitro ...................................................................................... 15

II.3 Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES) .................................... 17

BAB III METODE PENELITIAN ................................................................ 18

III.1 Bahan dan Alat............................................................................. 18

III.2 Metode Penelitian ........................................................................ 18

III.3 Variable yang diamati .................................................................. 19

III.4 Tahapan Penelitian ....................................................................... 20

III.4.1 Pengambilan Sampel ................................................................. 20

III.4.2 Pemeliharaan untuk adaptasi ..................................................... 21

III.4.3 Persiapan Wadah dan Sterilisasi Alat......................................... 21

III.4.4 Sterilisasi Air Laut .................................................................... 22

III.4.5 Pemotongan dan Sterilisasi Eksplan .......................................... 22

III.4.6 Pembuatan Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES)... .......... 22

III.4.7 Perendaman dan Pemeliharaan Eksplan ..................................... 23

III.4.8 Analisis Data ............................................................................. 23

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 25

IV.1 Laju Pertambahan Berat Eksplan.................................................. 25

IV.2 Laju Pertambahan Panjang Eksplan ............................................. 30

x

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN......................................................... 38

V.1 Kesimpulan .................................................................................. 38

V.2 Saran ............................................................................................ 38

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 39

xi

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Komposisi kimia rumput laut jenis Eucheuma spinosum ................. 8

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. Morfologi Eucheuma spinosum J. Agardh ............................................. 5

2. Lokasi pengambilan sampel Eucheuma spinosum J. Agardh ................. 21

3. Perbandingan laju pertambahan berat eksplan selama 42 hari ................ 25

4. Pertambahan berat mutlak eksplan selama perendaman 42 hari ............. 26

5. Hubungan lama perendaman terhadap laju pertambahan bobot relative

(RGR) ................................................................................................... 28

6. Laju pertambahan panjang eksplan selama 42 hari ................................ 31

7. Pertambahan panjang mutlak eksplan selama 42 hari ........................... 32

8. Hubungan antara lama perendaman dengan laju pertambahan panjang

eksplan perhari (RLR) ........................................................................... 33

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Komposisi pupuk Provaoli’s Enrich Seawater (PES) ........................ 44

2. Laju pertumbuhan berat eksplan ........................................................ 45

3. Laju pertumbuhan panjang eksplan .................................................... 47

4. Denah Penelitian ............................................................................... 49

5. Pengolahan data dengan Program SPSS 16,0 ..................................... 50

6. Dokumentasi Kegiatan Penelitian ...................................................... 52

7. Kualitas air pada media pemeliharaan eksplan Eucheuma spinosum

untuk setiap perlakuan ....................................................................... 53

1

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Indonesia memiliki hampir 70 % wilayah berupa lautan, tetapi sampai saat

ini belum banyak dimanfaatkan. Salah satu potensi lautan adalah rumput laut

seperti Eucheuma, Gracilaria, Gelidium, Gelidiopsis, Sargassum dan Hypnea

(Sulistijo et al. 1980). Rumput laut merupakan salah satu sumber devisa negara

dan sumber pendapatan bagi masyarakat pesisir dan merupakan salah satu

komoditi laut yang sangat populer dalam perdagangan dunia. Pemanfaatannya

sangat banyak dalam kehidupan sehari-hari, baik sebagai sumber pangan, obat-

obatan dan bahan baku industri (Indriani dan Sumiarsih, 1992). Salah satu jenis

rumput laut yang dibudidayakan di Sulawesi Selatan adalah Eucheuma spinosum

(E. spinosum). Jenis ini mempunyai nilai ekonomis penting karena sebagai

penghasil karaginan, dalam dunia industri dan perdagangan. Karaginan

mempunyai manfaat yang sama dengan agar-agar dan alginat yaitu karaginan

dapat digunakan sebagai bahan baku untuk industri farmasi, kosmetik dan

makanan (Mubarak, 1978).

Faktor-faktor lingkungan yang berpengaruh di alam terhadap pertumbuhan

E.spinosum adalah cahaya, suhu, salinitas, pergerakan air, dan ketersediaan

nutrien. Faktor-faktor biologi yang berpengaruh meliputi epiphytic, bakteria,

jamur, algae, dan binatang yang menempel (Loban dan Harisson, 1997). Cahaya

diperlukan untuk proses fotosintesis, sedangkan suhu diperlukan untuk proses

2

reaksi biokimia. Pengembangan budidaya E.spinosum dapat dilakukan dengan

cara meneliti faktor-faktor pertumbuhannya. Beberapa studi menunjukkan bahwa

Eucheuma serra memerlukan suhu 24-28 oC untuk pertumbuhan in vitro-nya

(Lideman et al. 2011), dan Kappaphycus sp. (strain sumba) memerlukan suhu

22-23 oC dan intensitas cahaya matahari antara 122-167 µmol photons m

-2 s

-1

(Lideman et al. 2013), sedangkan mikroalga subtropis memerlukan suhu antara

18-28 0C untuk mempertahankan aktifitas fotosintesis yang optimal

(Lideman et al, 2012).

Rumput laut berbeda dengan sebagian tumbuhan darat, rumput laut tidak

memiliki akar untuk menyerap nutrien, sehingga ketersediaan/dosis nutrien yang

yang ada di sekitar thallus akan sangat memengaruhi pertumbuhan. Kekurangan

nutrien biasanya akan menyebabkan rumput laut yang dipelihara akan kerdil,

sehingga upaya-upaya untuk melakukan penambahan nutrien melalui pemupukan

perlu dilakukan. Pupuk yang sudah umum untuk makroalga adalah Provasoli’s

Enrich Seawater (PES).

Budidaya rumput laut dilakukan di laut, sehingga pemupukan di laut

sangat sulit dilakukan, maka salah satu cara yang akan dilakukan adalah melalui

perendaman rumput laut sebelum pemeliharaan. Beberapa penelitian tentang

pengaruh lama perendaman rumput laut telah dilakukan baik dengan

menggunakan pupuk bionik (Silea dan Mashita, 2009), pupuk NPK (Rukmi et al.

2012), fospat (Sari et al. 2012), dan menggunakan berbagai aplikasi pupuk

(Madeali et al. 2012). Penelitian ini akan menggunakan pupuk PES, dimana

pupuk PES ini merupakan pupuk buatan dengan komposisi yang lengkap, yang

3

memiliki sumber fosfat serta nitrogen, sehingga mengurangi aplikasi pupuk yang

digunakan. Adanya permasalahan diatas maka akan dilakukan penelitian berapa

lama waktu perendaman yang baik untuk pertumbuhan E.spinosum dengan

menggunakan larutan pupuk PES. Penelitian ini dilakukan secara In vitro, untuk

menguji kemampuan dari pupuk PES dalam memengaruhi laju pertumbuhan pada

E. spinosum J. Agardh.

I.2 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan dari penelitian ini yaitu:

1. Untuk mengetahui pengaruh lama perendaman E. spinosum J. Agardh dalam

larutan pupuk PES terhadap laju pertumbuhan secara In vitro.

2. Untuk mengetahui perbandingan antara berat dan panjang thallus E. spinosum

J. Agardh dari perbedaan perlakuan lama perendaman.

I.3 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi baru kepada

masyarakat, terutama petani rumput laut tentang pengaruh pupuk PES terhadap

pertumbuhan E. spinosum, khususnya pada kegiatan budidaya rumput laut.

I.4 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April-Mei 2013. Pengambilan

sampel dilakukan di perairan Desa Punaga, Kecamatan Mangngara Bombang,

Kabupaten Takalar. Perlakukan secara In vitro dan analisis data akan dilakukan di

Laboratorium Kultur Jaringan BBAP Takalar, Desa Mappakalompo, Kecamatan

Galesong Selatan, Kabupaten Takalar.

4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II. 1 Biologi Rumput Laut Eucheuma spinosum

Rumput laut merupakan bagian terbesar dari tumbuhan laut. Rumput laut

terdiri atas tiga classis yaitu Chlorophyceaea (ganggang hijau), Phaeophyceae

(ganggang coklat), dan Rhodophyceae (ganggang merah). Ketiga kelas ganggang

tersebut merupakan sumber produk bahan alam hayati lautan yang sangat

potensial dan dapat dimanfaatkan sebagai bahan mentah maupun bahan hasil

olahan (Aslan, 1998).

Eucheuma spinosum merupakan salah satu jenis rumput laut dari kelas

Rhodophyceae (ganggang merah). Klasifikasi rumput laut jenis ini menurut

(Tjitrosoepomo, 1989) adalah sebagai berikut:

Regnum : Plantae

Divisio : Thallophyta

Sub Divisio : Algae

Classis : Rhodophyceae

Ordo : Nemastomales

Familia : Rhodophyllidaceae

Genus : Eucheuma

Species : Eucheuma spinosum J. Agardh

5

Gambar 1. Morfologi Eucheuma spinosum J. Agardh (Sumber : Mubarak, 1978).

II.1.1 Morfologi Eucheuma Spinosum

Rumput laut ini dikenal dengan nama daerah agar-agar. Dalam dunia

perdagangan, rumput laut ini dikenal dengan istilah spinosum yang berarti duri

yang tajam. Rumput laut ini berwarna cokelat tua, hijau cokelat, hijau kuning,

atau merah ungu (Sudradjat, 2008 dalam Alam, 2011).

Ciri-ciri rumput laut jenis E.spinosum yaitu thallus silindris, percabangan

thallus berujung runcing atau tumpul, dan ditumbuhi nodulus (tonjolan-tonjolan)

berupa duri lunak yang tersusun berputar teratur mengelilingi cabang, lebih

banyak dari yang terdapat pada Eucheuma cottonii. Ciri-ciri lainnya mirip seperti

E. cottoni. Jaringan tengah terdiri dari filamen tidak berwarna serta dikelilingi

oleh sel-sel besar, lapisan korteks, dan lapisan epidermis (luar). Pembelahan sel

terjadi pada bagian apikal thallus (Anggadiredja et al. 2006).

6

II.1.2. Habitat Eucheuma spinosum

Eucheuma spinosum tumbuh pada tempat-tempat yang sesuai dengan

persyaratan tumbuhnya, antara lain tumbuh pada perairan yang jernih, dasar

perairannya berpasir atau berlumpur dan hidupnya menempel pada karang yang

mati. Persyaratan hidup lainnya yaitu ada arus atau terkena gerakan air. Kadar

garamnya antara 28-36 %. Dari beberapa persyaratan, yang terpenting adalah

E. spinosum memerlukan sinar matahari untuk dapat melakukan fotosintesis

(Aslan, 1998).

Eucheuma spinosum tumbuh melekat pada rataan terumbu karang, batu

karang, batuan, benda keras, dan cangkang kerang. E. spinosum memerlukan sinar

matahari untuk proses fotosintesis sehingga hanya hidup pada lapisan fotik.

Habitat khas dari Eucheuma adalah daerah yang memperoleh aliran air laut yang

tetap, lebih menyukai variasi suhu harian yang kecil dan substrat batu karang mati

(Aslan, 1998).

Rumput laut tumbuh hampir diseluruh bagian hidrosfir sampai batas

kedalaman 200 meter. Jenis rumput laut ada yang hidup di perairan tropis,

subtropis, dan di perairan dingin. Rumput laut hidup dengan cara menyerap zat

makanan dari perairan dan melakukan fotosintesis. Jadi pertumbuhannya

membutuhkan faktor-faktor fisika dan kimia perairan seperti gerakan air, suhu,

kadar garam, nitrat, dan fosfat serta pencahayaan sinar matahari (Puncomulyo,

dkk, 2006).

Kadi dan Atmaja (1988), menambahkan bahwa pemanenan rumput laut

dapat dilakukan sekitar 1-3 bulan dari saat penanaman. Selanjutnya dikatakan

7

bahwa persyaratan lingkungan yang harus dipenuhi bagi budidaya Eucheuma

adalah:

a. Substrat stabil, terlindung dari ombak yang kuat dan umumnya di daerah

terumbu karang.

b. Tempat dan lingkungan perairan tidak mengalami pencemaran.

c. Kedalaman air pada waktu surut terendah 1- 30 cm.

d. Perairan dilalui arus tetap dari laut lepas sepanjang tahun.

e. Kecepatan arus antara 20 - 40 m/menit.

f. Jauh dari muara sungai.

g. Perairan tidak mengandung lumpur dan airnya jernih.

II.1.3. Reproduksi Eucheuma spinosum

Perkembangbiakan rumput laut pada dasarnya ada dua macam yaitu secara

kawin dan tidak kawin. Pada perkembangbiakan secara kawin, gametofit jantan

melalui pori spermatogonia akan menghasilkan sel jantan yang disebut spermatia.

Spermatia ini akan membuahi sel betina pada cabang carpogonia dari gametofit

betina. Hasil pembuahan ini akan keluar sebagai carpospora. Setelah terjadi

proses germinasi akan tumbuh menjadi tanaman yang tidak beralat kelamin atau

disebut sporofit (Poncomulyo dkk, 2006).

Perkembangbiakan secara tidak kawin terdiri dari penyebaran tetraspora,

vegetatif dan konjugatif. Sporofit dewasa menghasilkan spora yang disebut

tetraspora yang sesudah proses germinasi tumbuh menjadi tanaman beralat

kelamin, yaitu gametofit jantan dan gametofit betina. Perkembangbiakan secara

vegetatif adalah dengan cara setek. Potongan dari seluruh bagian thallus akan

8

membentuk percabangan baru dan tumbuh berkembang menjadi tanaman biasa.

Konjugasi merupakan proses peleburan dinding sel dan percampuran protoplasma

antara dua thally (Poncomulyo dkk, 2006).

II.1.4. Kandungan Eucheuma spinosum

Kandungan kimia dari rumput laut E. spinosum adalah iota keraginan

(65%), protein, karbohidrat, lemak, serat kasar, air, dan abu. Iota keraginan

merupakan polisakarida tersulfatkan dimana kandungan ester sulfatnya adalah

28-35%. Komposisi kimia yang dimiliki rumput laut E. spinosum dapat dilihat

pada Tabel 1 (Mubarak, 1982).

Tabel 1. Komposisi kimia rumput laut jenis Eucheuma spinosum.

Komponen Jumlah

Kadar air (%)

Karbohidrat (%)

Protein (%)

Lemak (%)

Serat kasar (%)

Abu (%)

Mineral : Ca (ppm)

Fe (ppm)

Cu (ppm)

Pb (ppm)

Vitamin B1 (Thiamin) (mg/100 g)

Vitamin B2 (Riboflavin) (mg/100g)

Vitamin C (mg/100 g)

Karaginan (%)

12,90

5,12

0,13

13,38

1,39

14,21

52,820

0,0108

0,768

-

0,21

2,26

43,00

65,75

Sumber : Mubarak, 1982.

II.1.5. Potensi Pemanfaatan Eucheuma spinosum

Pemanfaatan E. spinosum adalah sebagai salah satu jenis rumput laut

penghasil karagenan (carragenophytes). E. spinosum jenis rumput laut penghasil

iota karaginan. Karaginan merupakan senyawa hidrokoloid yang terdiri atas ester

9

kalium, natrium, magnesium, dan kalium sulfat dengan galaktosa

3,6 anhidrogalaktosa kopolimer. (Winarno, 1996).

Karaginan berfungsi sebagai penstabil, pensuspensi, pengikat, protective

(melindungi kolid), film former (mengikat suatu bahan), syneresis inhibitor

(mencegah terjadinya pelepasan air), dan flocculating agent (mengikat bahan-

bahan). Selain itu keraginan juga berperan sebagai stabilizer (penstabil), thickener

(bahan pengentalan), pembentuk gel, dan pengemulsi. Sifat ini banyak

dimanfaatkan dalam indukstri makanan, obat-obatan, kosmetik, tekstil, cat, pasta

gigi, dan industri (Winarno, 1996).

Rumput laut telah digunakan untuk memenuhi berbagai kebutuhan hidup

manusia, dan secara ekonomi telah memberikan sumbangan devisa bagi negara

atau meningkatkan pendapatan nasional. Secara ekologis manfaat rumput laut

adalah menyediakan makanan bagi berbagai ikan dan invertebrate, terutama pada

bagian thallus muda rumput laut (Mann, 1982). Penelitian terbaru menemukan

bahwa ekstrak rumput laut K. alvarezii dan E. spinosum menunjukkan daya

antibakteri. Ekstrak metanol E. spinosum memiliki spektrum penghambatan

paling luas yang mana menunjukkan daya antibakteri tehadap Aeromonas

hydrophila dan Vibrio harveyii (Wiyanto, 2010).

II.1.6. Faktor-faktor yang memengaruhi pertumbuhan Eucheuma spinosum

Faktor-faktor lingkungan yang memengaruhi pertumbuhan rumput laut

antara lain adalah: suhu, cahaya, salinitas, arus, gerakan air, kekeruhan, pH

perairan, dan Nutrien.

10

1. Suhu

Menurut Mubarak dan Wahyuni (1981) temperatur merupakan faktor

sekunder bagi kehidupan rumput laut. Crebs (1972) dalam Apriyana (2006)

menyatakan, bahwa rumput laut akan dapat tumbuh dengan subur pada daerah

yang sesuai dengan temperatur di laut. Alga laut mempunyai kisaran suhu yang

spesifik karena adanya kandungan enzim pada alga laut. Alga laut akan tumbuh

dengan subur pada daerah yang sesuai dengan suhu pertumbuhannya.

Dawes (1981) menyatakan, bahwa E. isoforme, Eucheuma sp, Gelidium

masing-masing mencapai nilai optimum pada suhu 21-240C dan 21-27

0C yang

berada pada kondisi intensitas cahaya yang sama. Selanjutnya dikatakan pada

kondisi intensitas cahaya yang berbeda, laju fotosintesis dipengaruhi juga oleh

suhu perairan.

Menurut Sulistijo dan Atmadja (1996) kisaran suhu perairan yang baik

untuk rumput laut Eucheuma sp. adalah 27-300C, suhu akan naik dengan

meningkatkan kecepatan fotosintesis sampai pada radiasi tertentu. Rumput laut

hidup dan tumbuh pada perairan dengan kisaran suhu air antara 20–2800C, namun

masih ditemukan tumbuh pada suhu 3100C (Direktorat Jenderal Perikanan, 1990).

2. Salinitas

Makroalgae umumnya hidup di laut dengan salinitas antara 30‰–35‰.

Namun banyak jenis makroalgae mampu hidup pada kisaran salinitas yang

besar. Salinitas yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan menyebabkan

gangguan pada proses fisiologisnya (Luning, 1990).

11

Rumput laut Eucheuma sp. tumbuh berkembang dengan baik pada

salinitas yang tinggi. Penurunan salinitas akibat masuknya air tawar dari sungai

dapat menyebabkan pertumbuhan rumput laut Eucheuma sp. menurun. Menurut

Dawes (1981), kisaran salinitas yang baik bagi pertumbuhan Eucheuma sp. adalah

30-35 ppt. Menurut Zatnika dan Angkasa (1994) menyatakan bahwa salinitas

perairan untuk budidaya rumput laut jenis Eucheuma sp. berkisar antar 28-34 ppt.

Sedangkan menurut Soegiarto et al. (1978), kisaran salinitas yang baik untuk

Eucheuma sp. adalah 32-35 ppt. Apabila salinitas berada dibawah 30 ppt maka

akan merusak rumput laut yang ditandai dengan timbulnya warna putih diujung

tanaman (Collina, 1976 dalam Iksan, 2005).

3. Cahaya Matahari

Cahaya matahari dibutuhkan oleh alga laut untuk proses fotosintesis

dimana hasilnya adalah fiksasi CO2. Selain itu ultraviolet juga dibutuhkan untuk

pertumbuhan thallusnya. Kemampuan cahaya menembus perairan akan berkurang

dengan bertambahnya kedalaman. Zona ini disebut zona photic. Perubahan pada

intensitas dan kualitas cahaya yang menembus perairan dengan bertambahnya

kedalaman menggambarkan kemampuan alga laut untuk tumbuh. Eucheuma sp.

termasuk dalam golongan Rhodophyceae yang dapat hidup pada perairan yang

lebih dalam dari golongan Chlorophyceae maupun Phaeophyceae (Dawes, 1981).

4. Arus

Arus dapat terjadi karena pasang dan angin. Arus pasang lebih mudah

diramalkan dibanding dengan arus karena angin. Arus tidak terlalu banyak

menyebabkan kerusakan pada tanaman dibandingkan dengan ombak, kisaran

12

kecepatan arus yang cukup untuk pertumbuhan rumput laut antara 20–40 cm/detik

(Direktorat Jenderal perikanan, 1990).

Arus merupakan faktor yang harus diutamakan dalam pemilihan lokasi,

karena biasanya arus akan mempengaruhi sedimentasi dalam perairan yang pada

akhirnya akan memengaruhi cahaya (Doty, 1973). Menurut Sidjabat (1973),

proses pertukaran oksigen antara udara yang terjadi pada saat turbelensi karena

adanya arus. Adanya ketersediaan oksigen yang cukup dalam perairan, maka

respirasi rumput laut dapat berlangsung pada malam hari, sehingga pertumbuhan

akan berlangsung secara optimal.

5. Pergerakan Air

Pergerakan air adalah faktor ekologi utama yang mengontrol kondisi

komunitas alga laut. Arus dan gelombang memiliki pengaruh yang besar terhadap

aerasi, transportasi nutrien dan pengadukan air. Pengadukan air berperan untuk

menghindari fluktuasi suhu yang besar (Trono dan Fortes, 1988). Peranan lain

dari arus adalah menghindarkan akumulasi epifit yang melekat pada thallus yang

dapat menghalangi pertumbuhan alga laut. Soegiarto (1978) dalam Sinaga (1999),

mengemukakan bahwa semakin kuat arus suatu perairan maka pertumbuhan alga

laut akan semakin cepat karena difusi nutrien ke dalam sel thallus semakin

banyak, sehingga metabolisme dipercepat.

6. Substrat

Nontji (1993), menyatakan bahwa sedikitnya alga laut yang terdapat pada

perairan dengan dasar pasir atau berlumpur, disebabkan karena terbatasnya benda

keras yang cukup kokoh untuk tempat melekatnya. Susunan kimia dari substrat

13

tidak mempengaruhi kehidupan alga laut, hanya sebagai tempat melekatnya alga

laut pada dasar perairan. Alga laut Eucheuma sp. paling baik pertumbuhannya

adalah pada dasar perairan berkarang.

7. Nutrien

Nitrogen dan fosfat dalam bentuk senyawa organik dimanfaatkan oleh

tumbuhan menjadi protein nabati yang selanjutnya dimanfaatkan oleh organisme

hewani sebagai pakan. Kadar nitrat dan fosfat mempengaruhi stadia reproduksi

alga bila zat tersebut melimpah di perairan. Kadar nitrat dan fosfat di perairan

akan berpengaruh positif terhadap kesuburan gametofit alga cokelat

(Aslan, 1998),

a. Nitrat (NO3)

Nitrat merupakan salah satu senyawa nitrogen yang ada di perairan. Nitrat

(NO3) adalah bentuk senyawa nitrogen yang merupakan sebuah senyawa yang

stabil. Nitrat merupakan salah satu unsur yang penting untuk sintesa protein

tumbuh-tumbuhan dan hewan. Riani (1994) dalam Alam (2011), menjelaskan

bahwa kandungan nitrat dalam kadar yang berbeda dibutuhkan oleh setiap jenis

alga untuk keperluan pertumbuhannya, sedangkan kadar nitrat utnuk mikroalga

dapat tumbuh dan optimal diperlukan kandungan nitrat 0,9-3,5 mg/l. Apabila

kadar nitrat dibawah 0,1 atau diatas 4,5 mg/l, merupakan faktor pembatas. Kisaran

nitrat terendah untuk pertumbuahan alga adalah 0,3-0,9 mg/l, sedangkan untuk

pertumbuhan optimal adalah 0,9-3,5 mg/l (Sulistijo, 2002). Menurut Boyd dan

Lichtkoppler (1982) batas toleransi nitrat terendah untuk pertumbuhan alga adalah

14

0,1 ppm sedangkan batas tertingginya adalah 3 ppm. Apabila kadar nitrat

dibawah 0,1 atau di atas 3 ppm maka nitrat merupakan faktor pembatas.

b. Fosfat (PO4)

Fosfat (PO4) dapat menjadi faktor pembatas baik secara temporal maupun

spasial karena sumber Fosfat yang lebih sedikit di perairan. Kisaran fosfat yang

optimal untuk pertumbuhan rumput laut adalah 0,051-1,00 ppm (Indriani dan

Sumiarsih, 1992). Ernanto (1994) dalam Alam (2011) mengemukakan pembagian

tipe perairan berdasarkan kandungan fosfat di perairan yaitu:

a. Perairan dengan tingkat kesuburan rendah memilki kandungan fosfat kurang

dari 2 ppm.

b. Perairan dengan tingkat kesuburan cukup subur memiliki kandungan fosfat

0,021 sampai 0,05 ppm.

c. Perairan dengan tingkat kesuburan yang baik memiliki kandungan fosfat

0,015 sampai 1,00 ppm.

II.2. Kultur Rumput Laut

Kultur jaringan atau tissue culture berasal dari dua kata yaitu kultur atau

culture dan jaringan atau tissue. Kultur adalah budidaya, sedangkan jaringan

adalah sekelompok sel yang mempunyai bentuk dan fungsi yang sama (Nugroho

dan Sugito, 2005). Sehingga kultur jaringan berarti membudidayakan suatu

jaringan tanaman menjadi tanaman kecil yang mempunyai sifat sama seperti

induknya. Kultur jaringan tanaman yang juga disebut weefsel cultuss atau gewebe

kultur merupakan teknik menumbuh-kembangkan bagian tanaman, baik berupa

sel, jaringan atau organ dalam kondisi aseptik secara in vitro. (Hendaryono dan

15

Wijayani, 1994). Pengertian In vitro secarah harfiah berarti di dalam kaca, di

dalam tabung reaksi, botol, dan sebagainya (Zulkarnain, 2009). Untuk

menghasilkan thalus rumput laut sebagai bibit dalam jumlah besar dengan tetap

mempertahankan kualitasnya serta mencapai produksi yang maksimal dari alga

tersebut, perlu diperhatikan beberapa hal yaitu jenis alga yang bermutu, teknik

budidaya yang intensif, pasca panen yang tepat dan kelancaran hasil produksi.

Salah satu teknik yang optimal dalam produksi tersebut adalah teknik kultur

in-vitro. Kultur in vitro adalah suatu teknik mengisolasi bagian tanaman seperti

protoplas, sel, jaringan dan organ kemudian menumbuhkannya dalam media

buatan dengan kondisi aseptik dan terkendali (Gunawan, l988).

Teknik kultur in vitro pada rumput laut ini dipergunakan untuk untuk

mendapatkan suatu keturunan baru yang mempunyai sifat genetik asli sesuai sifat

induknya yang mempunyai sifat-sifat keunggulan tersendiri, misalnya dapat

menghasilkan kandungan agar-agar atau karaginan yang tinggi. Selain itu teknik

ini juga dapat dimanfaatkan sebagai alternatif penyediaan bibit dalam jumlah yang

besar tanpa memerlukan jumlah induk yang banyak dan bibit yang dihasilkan

bebas patogen (Susanto, 2008).

II.2.1. Kelebihan dan Kelemahan Perbanyakan Secara In Vitro

Kelebihan dari perbanyakan tanaman secara kultur jaringan dibandingkan

dengan perbanyakan tanaman secara konvesional (Yusnita, 2005) adalah sebagai

berikut:

a. Mampu menghasilkan bibit tanaman dalam jumlah lebih banyak dalam waktu

yang relatif singkat sehingga lebih ekonomis.

16

b. Tidak tergantung pada iklim atau cuaca.

c. Bisa menghasilkan tanaman sehat yang bebas cendawan, bakteri, virus, dan

hama penyakit.

d. Mampu mempertahankan sifat baik tanaman induk dan menekan genetic

erosian dan memungkinkan dilakukan manipulasi genetik.

e. Tidak merusak percabangan tanaman yang dipotong karena menggunakan

setek batang.

f. Tidak membutuhkan lahan yang luas untuk pembibitan.

g. Hanya membutuhkan sedikit tenaga kerja.

h. Dapat digunakan untuk memperbanyak tanaman tertentu yang sulit atau

sangat lambat diperbanyak secara konvesional.

Adapun kelemahan dari perbanyakan tanaman secara kultur jaringan

(Yusnita, 2005) adalah:

a. Dibutuhkan biaya awal yang relatif tinggi untuk laboratorium dan bahan

kimia.

b. Dibutuhkan keahlian khusus untuk melaksanakannya.

c. Tanaman yang dihasilkan berukuran kecil, aseptik dan terbiasa hidup di

tempat yang berkelembaban tinggi sehingga memerlukan aklimatisasi ke

lingkungan eksternal. Aklimatisasi planlet merupakan salah satu tahap kritis

yang sering menjadi kendala dalam produksi bibit secara massal.

d. Masih dinilai mahal bagi kalangan peneliti atau pengusaha di Indonesia

karena menggunakan bahan kimia yang sebagian besar di impor.

17

e. Biaya yang dikeluarkan untuk mikropropagasi (penggunaan lampu sebagai

pengganti sinar matahari dan AC untuk mengatur suhu) cukup besar. Namun,

biaya mahal untuk in vitro dapat ditekan dengan cara melakukan propagasi

ex vitro dengan perlakuan bioteknologi.

II.3. Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES)

Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES), merupakan pupuk makroalga

yang sudah dikembangkan dalam budidaya rumput laut, pupuk PES digunakan

karena banyaknya kandungan nutrien yang dibutuhkan oleh rumput laut dalam

pertumbuhannya. Pemberian pupuk ini, dilakukan sebelum dibudidayakan di

lingkungan alamianya. Pupuk PES memiliki sumber nitrogen dan fosfat yang

merupakan unsur utama yang dibutuhkan oleh rumput laut dalam

pertumbuhannya. Pembuatan stock pupuk PES 20 ml. Enrich Stock Solution

di tambahkan dengan air laut steril hingga volume mencapai 1000 ml

(Nursyam, 2013).

Media PES merupakan media kultur untuk alga yang kaya dengan

senyawa yang dibutuhkan untuk memenuhi kebutuhan nutrient pada rumput laut.

Beberapa unsur pada media ini dapat melengkapi kekurangan yang ada pada

Serilized Sea Water (SSW). Enrich seawater medium diperkenalkan oleh

provasoli sekitar tahun 1960 an dan telah dilakukan banyak modifikasi tahun-

tahun berikutnya baik oleh media kultur maupun oleh beberapa ahli tentang media

kultur alga (Andersen, 2005).

18

BAB III

METODE PENELITIAN

III.1 Alat dan Bahan Penelitian

III. 1. 1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian adalah: ruang kultur jaringan, lux

meter, perlengkapan aerasi, akuarium, multiwel chamber, autoclave,

thermometer, timbangan analitik, aerator, selang aerator, silet, pinset, sponge,

keranjang, lap tangan, gayung, cawan petri, sikat pembersih, erlenmeyer, pipet

ukur, karet gelang, pompa vacum, kamera, dan alat tulis.

III.1. 2. Bahan

Bahan yang digunakan pada penelitian adalah: rumput laut E. spinosum, air

laut steril, air tawar, akuades, pupuk PES (Komposisi dapat dilihat pada

lampiran 1), sabun sunlight, betadine 1 %, aluminium foil, kertas saring, tissue,

dan kertas label.

III.2 Metode Penelitian

Penelitian ini digunakan metode eksperimental, desain menggunakan

Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan perbedaan lama perendaman

E. spinosum di dalam larutan pupuk PES sebagai perlakuan. Perlakuan yang

digunakan yaitu lima perlakuan perbedaan lama perendaman dalam media PES

(A. Kontrol, B. 6 jam, C. 12 jam, D. 18 jam, E. 24 jam) dan masing-masing

dilakukan 4 (empat) ulangan.

19

III.2.1 Variabel yang diamati

Adapun variabel yang diamati dalam penelitian ini adalah

1. Pertambahan Berat Eksplan

Pertambahan berat eksplan, dilakukan dengan cara menimbang eksplan

setiap seminggu sekali dengan menggunakan timbangan elektrik 4 digit.

Adapun rumus WG dan RGR (Effendie, 1979) yang digunakan dalam

penelitian ini yaitu :

WG = [ (W1-Wo) / Wo ] x 100%

RGR = [ (ln W1-ln Wo) / ( t1-to) ] x 100%

Ket:

WG : Weight Gain

RGR : Relative Growth Rate

Wo : berat awal

W1 : berat akhir

t1 : umur penimbangan terakhir

to : umur awal penimbangan

2. Pertambahan Panjang Eksplan

Didalam menghitung pertambahan panjang eksplan, dilakukan pengukuran

setiap seminggu sekali, dengan menggunakan Jangka sorong.

Adapun rumus LG dan RLR (Effendie, 1979) yang digunakan dalam

penelitian ini yaitu:

LG = [ (L1-Lo) / Lo ] x 100%

RLR = [ (ln L1-ln Lo) / ( t1-to) ] x 100%

Ket:

LG : Lenght Gain

RLR : Relative Lenght Rate

Lo : berat awal

L1 : berat akhir

t1 : umur penimbangan terakhir

to : umur awal penimbangan

III. 3. Tahapan Kerja merujuk pada penelitian Nursyam, (2013).

20

III.3.1 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel E. Spinosum dilakukan di Perairan Desa Punaga,

Kec. Mangngara Bombang, Kab. Takalar. Jenis E. Spinosum yang digunakan

untuk penelitian ini adalah E. Spinosum yang memiliki kriteria yaitu, memiliki

ukuran yang besar, bersih, segar dan bebas dari penyakit yang menyerang rumput

laut pada umumnya.

Sumber : dicopy dari propil Desa Punaga 2008.

Gambar 4. Peta lokasi pengambilan sampel.

21

III.3.2 Pemeliharaan untuk adaptasi

Pemeliharaan sementara merupakan tahap awal penelitian, dimana sampel

E. Spinosum yang diperoleh dari Perairan Desa Punaga, Kecamatan Mangngara

Bombang, Kabupaten Takalar. dipelihara sementara dalam akuarium yang

dilengkapi dengan aerasi selama ± 2 minggu. Tujuannya sebagai bentuk adaptasi

rumput laut dari lingkuknagn alaminya di lautan dengan lingkungan barunya di

laboratotium dimana akan dilakukan penelitian secara in vitro.

Bibit yang telah tiba di Laboratorium dicuci atau dibersihkan dengan

digunakan air laut sampai kotoran yang melekat pada rumput laut hilang dan

selanjutnya dibilas sampai bersih. Bibit yang telah dibersihkan, dimasukkan

kedalam akuarium dan diberi aerasi. Proses ini berlangsung selama ± 2 minggu.

III.3 3 Persiapan Wadah dan Sterilisasi Alat

Wadah yang digunakan berupa cawan petri, erlenmeyer dan multiwel

chamber. Selanjutnya wadah disterilisasi dengan cara dicuci dengan

menggunakan sabun sunlight dan dibilas dengan air tawar mengalir, wadah yang

sudah bersih dibilas 3x dengan akuades. Kemudian disterilsasi secara basah

dengan menggunakan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit dengan tekanan

20 psi. Setelah itu dimasukkan kedalam ruang kultur dengan suhu 250C.

Sedangkan alat-alat lain yang akan digunakan seperti selang, pipet, pinset dan

batu aerasi dicuci bersih dengan menggunakan sabun kemudian dibilas dengan air

tawar mengalir sampai bersih kemudian dibilas kembali dengan akuades dan

dikeringkan, setelah kering dibungkus dengan aluminium foil dan dimasukkan

kedalam autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit dengan tekanan 20 psi.

22

III.3.4 Sterilisasi Air Laut

Air laut yang digunakan adalah air laut yang telah disaring dengan

menggunakan saringan/filter bag. Air tersebut dimasukkan ke dalam erlenmeyer

dengan ukuran 1 Liter. Kemudian air laut disaring kembali menggunakan pompa

vacum, pompa vacum tersebut dilengkapi dengan erlenmeyer sebagai wadah

penampungan air laut yang steril dan kertas saring dengan ukuran 0.45 µm. Air

laut yang telah disaring dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang berukuran 1 Liter

dan ditutup dengan aluminium foil serta diikat dengan karet gelang. Air dalam

erlenmeyer dimasukkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit dengan

tekanan 20 psi.

III.3.5 Pemotongan dan Sterilisasi Eksplan

Eksplan dipotong-potong dengan menggunakan silet atau pisau bedah

dengan ukuran ± 2 cm. Kemudian dengan menggunakan pinset, eksplan

dimasukkan ke dalam wadah erlenmeyer yang berisi air laut steril dengan salinitas

30 0/00. Setelah pemotongan selesai, eksplan dibilas dengan betadine 1% dengan

cara mengojok-gojok selama ± 3-5 menit, sampai kotoran yang menempel pada

rumput laut hilang dan dilanjutkan dengan pembilasan menggunakan air laut steril

secara berulang –ulang.

III.3.6 Pembuatan Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES) (Andersen,

2005).

Untuk membuat Enrich Stock Solution, masukkan air destilasi (dH2O)

sebanyak 900 ml, tambahkan bahan-bahan Enrich Stock Solution seperti yang

terterah pada lampiran 1, tambahkan air destilasi (dH2O) sehingga volume

menjadi 1000 ml, dan disterilkan melalui proses pasteurisasi. Pupuk PES

23

diperoleh dengan cara menambahkan 20 ml atau dengan konsentrasi 2 % dari

Enrich Stock Solution kedalam 980 ml air laut steril, lalu dipasteurisasi dan

simpan di refrigirator.

III.3.7 Perendaman dan Pemeliharaan Eksplan

Ekplan-eksplan yang telah disterilkan, ditimbang sebagai berat awal.

Kemudian dengan menggunakan pinset, eksplan dimasukkan kedalam wadah

perendaman yaitu wadah multiwel chamber. Perendaman pada media PES

dilakukan selama 0, 6, 12, 18, 24 jam perendaman. Sebagai kontrol adalah

perlakuan 0 jam. Dimana pada perlakuan ini ekplan rumput laut langsung

dipelihara dengan media air laut steril tampa perendaman dengan pupuk PES.

Setelah perendaman selama 0, 6, 12, 18, 24 jam, tiap-tiap eksplan dimasukkan

kedalam wadah perendaman yang berisi air laut yang telah disterilkan. Setelah

perendaman, setiap tujuh hari sekali dilakukan penimbangan eksplan, pengukuran

panjang dan pergantian media pemeliharaan. Waktu yang dibutuhkan untuk

pemeliharaan eksplan yaitu selama 42 hari (6 minggu).

III.3.8 Analisis Data

Analisis data pada penelitian ini, dilakukan dengan cara mendeskripsikan

data-data yang diperoleh dalam bentuk tabel dan grafik untuk mengetahui

perbandingan berat dan panjang dari eksplan, yang menunjukan laju pertumbuhan

dari perbedaan lama perendaman E. spinosum pada Pupuk PES. Data yang

dimasukkan yaitu lama perendaman (waktu), berat setiap eksplan dan

pertambahan panjang tunas eksplan E. spinosum. Data-data yang diperoleh dalam

penelitian ini akan dianalisis dengan analisis variansi (ANOVA) Gasperz (1991).

24

Jika terdapat perbedaan maka dilakukan uji lanjutan BNT (Beda Nyata Terkecil).

Adapun proses perhitungannya dilakukan dengan bantuan program SPSS 16,0.

25

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

25,00

30,00

35,00

40,00

0 7 14 21 28 35 42

ber

at

(mg)

Lama Pemeliharaan (Hari)

A=0 jam (kontrol)

B=6 jam

C=12 jam

D=18 jam

E=24 jam

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV. 1 Laju Pertambahan Berat Eksplan

Data yang diperoleh dari penimbangan dan pengkuran eksplan setiap

minggu selama 42 hari, diuji dengan menggunakan uji sidik ragam atau ANOVA

untuk mengetahui pengaruh perendaman E. spinosum dalam larutan pupuk PES

terhadap parameter pengamatan laju pertumbuhan berat eksplan. Hasil

pengamatan pada laju pertumbuhan berat eksplan, disajikan pada Gambar 4.

Gambar 4. Perbandingan laju pertambahan berat eksplan selama 42 hari.

Berdasarkan Gambar 4, terlihat bahwa terjadi pertumbuhan pada eksplan

pada tiap minggunya, dengan berbagai perlakuan yang diberikan. Data pada

gambar 4, memperlihatkan nilai rata-rata pada pertambahan berat eksplan.

Dimana pertambahan berat rata-rata yang menunjukkan pertumbuhan paling baik

diantara semua perlakuan adalah pada perlakuan B (6 jam), dilanjutkan dengan

perlakuan E (24 jam). Hasil penelitian dari pertambahan berat rata-rata eksplan

26

belum dapat menyimpulkan, bahwa perlakuan B (6 jam) lebih baik dari perlakuan

yang lain. Hasil analisis statistik uji sidik ragam menunjukkan perlakuan

perendaman yang diberikan tidak terdapat perbedaan pengaruh perlakuan terhadap

pertambahan berat, hal ini dikarenakan besarnya nilai signifikansi pada tabel

ANOVA sebesar 0.435 yang berarti lebih besar dari taraf α 0.05. Setiap perlakuan

yang diberikan pada eksplan menunjukkan nilai yang berbeda, untuk lebih

memahami pertambahan berat mutlak, ditunjukkan pada Gambar 5.

Gambar 5. Pertambahan berat mutlak eksplan selama perendaman 42 hari.

Hasil penelitian pada Gambar 5 menunjukkan pertambahan presentase

berat mutlak eksplan setiap minggu. Perlakuan yang menunjukkan pertambahan

berat yang paling baik adalah pada perlakuan E (24 jam) dengan nilai 21,59 %.

Sama halnya dengan analisis sidik ragam pada penelitian Nursyam (2013) yang

menunjukkan bahwa lama perendaman eksplan Kappaphycus alvarezii di dalam

media pupuk berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap laju pertumbuhan K. alvarezii.

Penelitian Nursyam (2013) menunjukkan bahwa pada perlakuan B (24 jam

perendaman) memperoleh pertambahan bobot tertinggi sebesar 27,14%, dalam

0 6 12 18 24

WG 16,08 20,88 16,88 16,67 21,59

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

25,00

ber

at (%

)

Lama Perendaman (Jam)

27

penelitian ini menghasilkan pertumbuhan terbaik. Hal ini sesuai dengan hasil

penelitian yang didapatkan pada lama perendaman tersebut, kebutuhan nutrien

dapat tercukupi dengan baik.

Penelitian ini sejalan dengan pendapat Sulistijo (1985) dalam Silea dan

Masitha (2006) di dalam penelitiannya menyatakan, bahwa pertumbuhan rumput

laut pada jenis Gellidium verrucosa, waktu yang efektif untuk penyerapan nutrien

(60 menit perendaman) dengan laju pertumbuhan spesifik 2% per hari selama 35

hari penanaman.

Pertambahan berat pada perlakuan B (24 jam) memperoleh data tertinggi

yang menujukkan, bahwa pada perlakuan perendaman 24 jam terjadi pertumbuhan

eksplan yang optimal dibandingkan dengan perlakuan dengan 0 jam, 6 jam, 12

jam dan 18 jam. Perlakuan E (24 jam) memperoleh hasil tertinggi yaitu 21.59 %.

Nilai terendah pada perlakuan A (0 jam) sebagai kontrol, kemudian nilai terendah

berikutnya pada perlakuan D (18 jam) dengan nilai 18.87 %.

Setiap laju pertumbuhan yang terjadi tidak terlepas dari berbagai faktor,

baik faktor internal maupun faktor eksternal terhadap eksplan yang dipelihara.

Kamla (2006) dalam Nursyam (2013) menyatakan bahwa faktor internal yang

berpengaruh antara lain jenis rumput laut, bagian tubuh (thalus) dan umur rumput

laut, sedangkan faktor eksternal yang berpengaruh antara lain keadaan fisika dan

kimia perairan. Bird et al. (1997) dalam Ilknur dan Cirik (2004) menyatakan

bahwa faktor fisika dan kimia perairan yang berpengaruh antara lain gerakan

air, suhu, salinitas, nutrient, dan cahaya. Selain itu faktor-faktor parameter

oseonagrafi dari rumput laut pun ikut berpengaruh (Alam, 2011). Selanjutnya,

28

untuk melihat perbandingan laju pertumbuhan berat relatif eksplan selama

pemeliharaan, disajikan pada Gambar 6.

Gambar 6. Hubungan lama perendaman terhadap laju pertambahan bobot relative

(RGR).

Berdasarkan Gambar 6, menunjukkan laju pertumbuhan relatif pada setiap

perlakuan. Pada perlakuan A (0 jam) sebagai kontrol, mengalami pertambahan

berat relatif 0,35% per hari, perlakuan B (6 jam) dengan laju pertumbuhan 0,45%,

pada perlakuan C (12 jam) memperoleh laju pertumbuhan 0,37% perhari,

sedangkan pada perlakuan D (18 jam), dengan laju pertumbuhan 0,37% per hari,

dan terakhir pada perlakuan E (24 jam) memperoleh laju pertumbuhan 0,46% per

hari. Hasil penelitian menunjukkan, bahwa pada laju pertambahan berat relatif,

pada perlakuan E (24 jam) mengalami pertumbuhan terbaik, dengan nilai tertinggi

dibandingkan dengan perlakuan yang lain, dilanjutkan dengan perlakuan

C (6 jam) yang memiliki laju pertumbuhan terbaik selanjutnya. Perlakuan yang

mengalami laju pertumbuhan terendah pada perlakuan A (0 jam) dengan nilai

0,35 % per hari. Pada perlakuan A (0 jam) sebagai kontrol, tidak ada perlakuan

0 6 12 18 24

RGR 0,35 0,45 0,37 0,37 0,46

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

ber

at (%

/har

i)

Lama Perendaman (Jam)

29

perendaman eksplan dalam larutan pupuk PES, sehingga pertumbuhannya rendah

dibandingkan dengan eksplan yang diberikan perlakuan perendaman dalam

larutan pupuk PES.

Pertumbuhan rumput laut memerlukan nutrien untuk pembentukan

jaringan baru atau dalam hal ini pembentukan tunas agar tetap dapat

mempertahankan kelangsungan hidupnya. Menurut Nursyam (2013), eksplan

yang hidup pada media yang memiliki kandungan nutrien yang cukup akan tetap

memiliki potensi untuk melakukan regenerasi sel pada setiap eksplan, sehingga

membentuk thallus yang utuh (plantlet). Riani (1994) dalam Alam (2011)

menjelaskan bahwa kandungan nitrat dalam kadar yang berbeda dibutuhkan oleh

setiap jenis alga untuk keperluan pertumbuhannya sedangkan kadar nitrat untuk

mikroalga dapat tumbuh dan optimal pada kandungan nitrat 0,9-3,5 mg/l. Jika

kadar nitrat di bawah 0,1 atau diatas 4,5 mg/l, merupakan faktor pembatas

pertumbuhan.

Nutrien yang dibutuhkan oleh rumput laut tidak cukup dari media asalnya,

yaitu air laut. maka perlakuan dengan penambahan pupuk untuk pertumbuhannya

akan memberikan hasil yang baik. Hal ini didukung oleh Aslan (1998) bahwa

salah satu faktor yang memengaruhi pertumbuhan rumput laut adalah nutrien yang

dapat diperoleh dari pupuk. Sejalan dengan pendapat Liao et al. (1983) dalam

Suryati et al. (2010) menyatakan bahwa kelangsungan hidup embrio rumput laut

K. alvarezii yang ditumbuhkan pada media padat yang diperkaya dengan beberapa

macam pupuk memperlihatkan bahwa media padat yang diperkaya dengan pupuk

PES 1/20 dan Conwy tingkat kelangsungan hidup berkisar 45-80%.

30

Media kultur yang diperkaya dengan pupuk PES 1/20 memperlihatkan

pertumbuhan dan pembentukan embrio yang lebih kompak dengan filamen yang

lebih pendek dibandingkan dengan embrio yang dihasilkan dari media Conwy.

Hal ini didukung dengan adanya kebutuhan nutrient dari eksplan dapat dipenuhi

dan dapat memacu pertumbuhan rumput laut tersebut walaupun ditumbuhkan

pada media semi padat (suryati et al. 2010). Oleh karena itu, larutan PES dalam

kegiatan penelitian ini memiliki peranan yang cukup penting dalam proses

pemanjangan tunas eksplan dan pertambahan berat eksplan rumput laut

E. spinosum.

IV. 1. 1 Laju Pertambahan Panjang Eksplan

Laju pertambahan panjang pada eksplan dilakukan dengan mengukur

pertambahan panjang eksplan setiap minggu dengan menggunakan jangka sorong.

Sebelum dilakukan pemeliharaan selama 42 hari, eksplan diukur terlebih dahulu.

Data tersebut adalah data awal. Data awal ini yang akan menjadi acuan untuk

pengukuran selanjutnya. Kemudian data hasil penelitian diuji dengan uji sidik

ragam untuk mengetahui perlakuan perendaman yang diberikan kepada eksplan

E. spinosum berpengaruh nyata terhadap pertambahan panjang eksplan sampai

42 hari perendaman dalam pupuk PES. Laju pertumbuhan panjang rata-rata dapat

dilihat pada Gambar 7.

31

Gambar 7. Laju pertambahan panjang eksplan selama 42 hari.

Berdasarkan hasil analisis variansi pada Lampiran 5, tidak terdapat

perbedaan pengaruh perlakuan terhadap pertambahan panjang, hal ini dikarenakan

besarnya nilai signifikansi pada tabel ANOVA sebesar 0.09 yang berarti lebih

besar dari taraf α 0.05, tidak berpengaruh nyata. Hasil penelitian pada Gambar 7

mununjukkan pertambahan panjang pada setiap perlakuan perendaman dalam

pupuk PES.

Pertambahan panjang eksplan meningkat selama pemeliharaan 42 hari,

untuk membandingkan tingkat pertambahan bobot maka dilakukan penghitungan

laju pertambahan panjang eksplan, untuk mengetahui lebih jelas pertumbuhan

mutlak pada eksplan, dapat dilihat pada Gambar 8.

00,20,40,60,8

11,21,41,61,8

0 7 14 21 28 35 42

Pan

jan

g (c

m)

Lama Pemeliharaan (Hari)

0 jam (kontrol)

6 jam

12 jam

18 jam

24 jam

32

Gambar 8. Pertambahan panjang mutlak eksplan selama 42 hari.

Berdasarkan hasil analisis sidik ragam menunjukkan, bahwa pupuk PES

dan waktu perendaman tidak memberikan pengaruh nyata terhadap laju

pertambahan panjang mutlak. Hasil penelitian pada Gambar 8, menunjukkan

bahwa pada perlakuan E (24 jam) menunjukkan nilai tertinggi yaitu 54,67%,

selanjutnya perlakuan yang menunjukkan nilai tinggi berikunya setelah perlakuan

E (24 jam) yaitu perlakuan B (6 jam), sedangkan perlakuan D (18 jam)

menunjukkan nilai terendah dari semua perlakuan dengan nilai 22,65%. Perlakuan

A (0 jam) dan perlakuan C (12 jam) memiliki nilai yang sama yaitu 24,03%.

Pernyataan ini dikuatkan dengan penelitian Nursyam (2013), menyatakan bahwa

dengan perendaman 24 jam eksplan sangat efektif dalam menyerap nutrisi pada

larutan pupuk, hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan. Hasil

penelitian menunjukkan bahwa pupuk PES dengan lama perendaman 24 jam

dapat memberikan laju pertumbuhan yang terbaik.

Berdasarkan hasil uji statistik terhadap pertambahan panjang mutlak

menunjukkan, bahwa lama perendaman dalam larutan PES tidak berpengaruh

nyata (p>0,05) terhadap pertambahan panjang eksplan (Fhit<Ftab).

0 6 12 18 24

LG 25,48 40,36 24,03 22,65 54,67

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00Le

ngt

h G

ain

(%)

Lama Perendaman (Jam)

33

Gambar 9. Hubungan antara lama perendaman dengan laju pertambahan panjang

eksplan perhari (RLR).

Berdasarkan histogram pada Gambar 9, menunjukkan bahwa panjang

eksplan yang dihasilkan setelah perendaman, berbeda untuk setiap perlakuan.

Laju pertumbuhan tertinggi didapatkan pada perlakuan E (24 jam) dengan

pertambahan panjang relatif 2,73% per hari, sedangkan pada perlakuan D (18 jam)

memiliki nilai pertumbuhan terendah yaitu 0,46% per hari selama 42 hari

pemeliharaan.

Pertambahan panjang eksplan dapat terlihat jelas dari tunas yang mulai

tumbuh pada ujung thallus. Pada penelitian ini, pertumbuhan tunas dapat

mencapai panjang rata-rata 1,03-1,29 cm, nilai rata-rata ini diperoleh dari

perlakuan kontrol, berbeda lagi dengan perlakuan yang lain. Tunas rumput laut,

Eucheuma cotonii dapat mencapai panjang rata-rata 1,80- 6,56 mm selama 2

bulan (Amini dan Parengrengi, 1995).

Efektivitas penggunaan teknik kultur jaringan dalam melakukan seleksi

in vitro tergantung dari tersedianya metode yang efesien untuk menginduksi

terbentuknya kalus serta dapat meregenerasikannya menjadi tanaman lengkap

(planlet) (Mythli et al. 1997 dalam Kadir, 2007). Apa bila dibandingkan dengan

0 6 12 18 24

RLR 0,53 1,13 0,51 0,46 2,73

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00p

anja

ng

(%/h

ari)

Lama Perendaman (Jam)

34

kultur in vitro rumput laut, Gracillaria verrucosa, maka pertumbuhan tunas E.

cotonii lebih panjang dibandingkan G. verrucosa yang hanya dapat mencapai

tunas rata-rata 1,09-2,92 mm selama 2 bulan kultur in vitro di laboratorium

(Amini dan Parengrengi, 1994). Terbentuknya tunas tidak terlepas dari

pembelahan sel. Menurut Wahidah (2011), jaringan tumbuhan pada umumnya

terbentuk karena adanya aktifitas pembelahan sel. Satu sel mengalami proses

pembelahan terus-menerus, dari satu sel kemudian menjadi dua sel

anakan,demikian seterusnya peristiwa tersebut berulang-ulang. Dari proses

tersebut didapatkan sekumpulan sel yang terus membelah yang disebut kallus.

Sel-sel ini apabila kemudian mengalami proses morfogenesis (perubahan bentuk)

dan proses deferensiasi (perubahan bentuk dan fungsi), sehingga diperlukan

penambahan media untuk pertumbuhan rumput laut, berupa pupuk, zat pengatur

tumbuh, ataupun media tumbuh lainnya yang memiliki kandungan nutrient

penting bagi pertumbuhan rumput laut.

Menurut Trigiano (2000), Asam Indol Asetat (IAA) merupakan salah satu

jenis auksin yang secara alami digunakan untuk pembentukan kalus. IAA

memiliki sifat kimia lebih stabil dan mobilitasnya di dalam tanaman rendah. Sifat-

sifat ini yang menyebabkan IAA dapat lebih berhasil karena sifat kimianya yang

stabil dan pengaruhnya yang lebih lama (Hendaryono dan Wijayani 1994).

Komposisi auksin dan sitokinin dalam media kultur in vitro memainkan peranan

penting dalam induksi dan regenerasi kalus menjadi tunas (Zheng et al. 1999;

dalam Kadir, 2007).

35

George dan Sherrington (1984) dalam Aslamyah (2002) menyebutkan

bahwa sitokinin adalah kelompok zat pengatur tumbuh yang sangat penting dalam

pengaturan pertumbuhan dan morfogenesis pada kultur in vitro. Hal ini didukung

oleh pernyataan Wattimena et al. (1992) dalam Wahidah (2011) bahwa sitokinin

menyebabkan peningkatan pembelahan sel.

Penelitian ini dilakukan dengan memberikan perlakuan yang berbeda pada

ekplan E. spinosum terdiri dari Perlakuan A (0 jam), B (6 jam), C (12 jam), D (18

jam) dan perlakuan E (24 jam), setelah eksplan direndam dengan semua

perlakuan, selanjutnya eksplan dipelihara pada media air laut steril. Penggunaan

air laut steril, bertujuan agar tidak ada senyawa atau unsur lain yang

mempengaruhi pertumbuhan eksplan selain dari kandungan yang ada pada pupuk

PES, sehingga akan terlihat jelas pengaruh pupuk PES terhadap laju pertumbuhan

eksplan. Pada perlakuan A (0 jam) sebagai kontrol, hasilnya tidak begitu buruk

meskipun tidak diberikan perlakuan perendaman pada pupuk PES. Eksplan tetap

bisa bertoleransi dengan perlakuan yang diberikan. laju pertumbuhan eksplan

selama 42 hari tidak terlepas dari berbagai faktor eksternal, diantaranya suhu,

salinitas, dan cahaya. Meskipun banyak faktor yang memengaruhi pertumbuhan

rumput laut, seperti arus, kekeruhan, kedalaman dan substrat. Peelitian ini

dilakukan dalam skala laboratorium atau secara in vitro, sehingga faktor yang

sangat berpengaruh yaitu, suhu, salinitas, cahaya, nutrient, dan kualitas air.

Suhu merupakan salah satu faktor yang penting bagi pertumbuhan rumput

laut (Raikar et al. 2001 dalam Nursyam, 2013). Hasil pengukuran suhu selama

penelitian yaitu berkisar antara 26–30ºC. Hal ini didukung oleh Aslan (1998)

36

menyatakan bahwa suhu merupakan faktor penting untuk pertumbuhan dan

reproduksi, suhu yang optimum untuk pertumbuhan antara 20-28ºC. Rumput laut

hidup dan tumbuh pada perairan dengan kisaran suhu air antara 20–280C, namun

masih ditemukan tumbuh pada suhu 310C (Direktorat Jenderal perikanan, 1990).

Salinitas juga memengaruhi penyebaran makroalgae di lautan. Makroalgae

yang mempunyai toleransi besar terhadap salinitas eurihalin akan tersebar lebih

luas dibandingkan dengan makroalgae yang mempunyai toleransi yang kecil

terhadap salinitas stenohalin. Makroalgae umumnya hidup di laut dengan salinitas

antara 30‰–32‰. Jenis makroalgae mampu hidup pada kisaran salinitas yang

besar. Genus Fucus misalnya, mampu hidup pada kisaran salinitas antara

28‰-34‰. Salinitas berperan penting dalam kehidupan makroalgae. Salinitas

yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan menyebabkan gangguan pada proses

fisiologis makroalga (Luning, 1990). Salinitas selama penelitian berkisar antara

30-37 ppt.

Intensitas cahaya dibutuhkan dalam pertumbuhan dan kelangsungan hidup

dari eksplan rumput (Amini dan Parengrengi, 1995), terutama dalam proses

fotosintesis dan induksi thallus sampai membentuk embrio. Hasil pengamatan dari

intensitas cahaya mulai dari 570,5-1.119,5 lux dengan interval 500 lux

memperlihatkan pertumbuhan dan kelangsungan hidup yang baik.

Suryati et al. (2008), menyatakan bahwa intensitas cahaya yang baik dalam

pertumbuahan dan induksi thallus rumput laut yang baik adalah 1500 lux. Artinya

intensitas cahaya yang didapatkan dari hasil pengamatan penelitian 1500 lux tidak

berbeda dengan yang dikemukakan oleh (Suryati, 2008).

37

Beberapa studi menunjukkan bahwa E. serra memerlukan suhu 24-280C

untuk pertumbuhan invitro-nya (Lideman et al. 2011), sedangkan Kappaphycus

sp. (strain sumba) memerlukan suhu 22-23 oC dan intensitas cahaya matahari

antara 122-167 µmol photons m-2

s-1

(Lideman et al. 2012). Selanjutnya menurut

Prihantini et al.(2007) dalam Fadilah et al. (2010) menyatakan bahwa upaya

untuk meningkatkan pertumbuhan dari produksi biomassa E. spinosum dapat

dilakukan dengan memanipulasi faktor lingkungan seperti cahaya, kadar C02,

suhu, pH, salinitas, bentuk wadah kultur, dan medium.

38

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

V.1 Kesimpulan

Kesimpulan yang dapat diperoleh dari penelitian ini yaitu:

1. Perendaman dalam larutan Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES)

memengaruhi laju pertumbuhan secara In vitro Eucheuma spinosum

J. Agardh.

2. Ada perbedaan berat dan panjang thallus Eucheuma spinosum J. Agardh

dengan perlakuan lama perendaman. Lama perendaman yang paling

berpengaruh terhadap laju pertumbuhan Eucheuma spinosum J. Agardh

adalah perlakuan E (24 jam) dengan nilai berat mutlak 21,59 % dan berat

relatif 0,46 %, nilai panjang mutlak 0,7 % dan panjang relatif 2,73 %.

V.2 Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian selanjutnya dengan menggunakan aplikasi

pupuk baru yang memiliki kandungan lengkap untuk pertumbuhan rumput laut,

dengan menggunakan sampel percobaan dari strain rumput laut yang berbeda.

39

DAFTAR PUSTAKA

Alam, A.A., 2011. Kualitas Keraginan Rumput Laut Euheuma spinosum di

Perairan Desa Punaga Kabupaten Takalar. Skripsi. FIKP. Universitas

Hasanuddin. Makassar. 40 hal.

Amini, S dan A. Parengrengi, 1995. Perbanyakan Budidaya Graccilaria

Verrucosa In Vitro Dengan Perlakuan Pupuk Yang Berbeda. Jurnal

Penelitian Budidaya pantai Maros. 10(2):19-28.

Amini, S dan A. Parengrengi, 1995. Pengaruh Variansi Komposisi Pupuk

Terhadap Pertumbuhan Rumput Laut Eucheuma Cotonii Pada

Kultur In Vitro. Jurnal perikanan Indonesia 1(3). 8 hal.

Anggadiredja, J.T., A. Zatnika, H. Purwoto, dan S. Istini, 2006. Rumput Laut.

Penebar Swadaya. Jakarta. Hal 40-47.

Andersen, R. A., 2005. Algal Culturing Techniques. Elsevier Academic Press,

Burlington. Hal 501.

Apriyana, D., 2006. Studi Hubungan Karakteristik Habitat Terhadap

Kelayakan Pertumbuhan dan Kandungan Karagenan Alga

Eucheuma spinosum di Perairan Kecamatan Bluto Kabupaten

Sumenep. Tesis. Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Aslamyah, S., 2002. Peranan Hormon Tumbuh dalam Memacu Pertumbuhan

Alga. <URL: http://tumoutou.net/702_05123/siti_aslamyah.htm>. Diakses

pada tanggal 5 Juni 2013. Pukul 09:24:57 WITA.

Aslan, L. M., 1998. Budidaya Rumput Laut. PT. Kanisius. Yogyakarta. 96 Hal.

Boyd, C.E. and Lichtkopper, 1982. Water Quality Management Inpond For

Aquaculture Experiment Station. Auburn University-Alabania.

Dawes, C.J., 1981 Marine Botany. John Wiley and Sons. University of South

Florida. New York.

Direktoral Jendral Perikanan, 1990. Petunjuk Teknis Budidaya Rumput laut.

Maros.

Doty, M.S., 1973. Eucheuma Farming for Carrageenan. Univ. Hawaii. Sea

Grant Report. Unihi Seagrant. United States of Amerika.

40

Effendie, M.I., 1979. Biologi Perikanan Bagian I. Study Natural Histology,

Fakultas Perikanan. Institut Pertanian Bogor, Bogor. 105 Hal.

Fadilah, S., Rosmiati, E. Suryati, 2010. Perbanyakan Rumput Laut (Gracilaria

verrucosa) dengan Kultur Jaringan Menggunakan Wadah yang

Berbeda. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur. Balai Riset

Perikanan Budidaya Air Payau, Maros, Sulawesi Selatan. Hal 611.

Gasperz, V., 1991. Metode Perancangan Percobaan untuk Ilmu Pertanian,

Ilmu Teknik dan Ilmu Biologi. Armico. Bandung

Gunawan, L.W., 1988. Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan. Bogor:

Laboratrium Kultur Jaringan PAU Bioteknologi, IPB. 253 p.

Hendaryono, D.P. dan A. Wijayani, 1994. Teknik Kultur Jaringan. Penerbit

Kanisius. Yogyakarta. hal.139.

Iksan, K.H., 2005. Kajian Pertumbuhan Produksi Rumput Laut dan

Kandungan Keraginan Pada Berbagai Bobot Bibit Dan Asal Thallus

di Perairan Desa Guraping, Oba Maluku Utara. Institut Pertanian

Bogor. Bogor. 45 hal.

Indriani, H. dan E. Sumiarsih, 1992. Budidaya, Pengolahan dan Pemasaran

Rumput Laut. Penebar Swadaya. Jakarta.

Ilknur, A and S. Cirik, 2004. Distribution of Gracilaria verrucosa (Hudson)

Papenfuss (Rhodophyta) in Izmir Bay (Eastern Aegean Sea). Pakistan

Journal of Bological Sciences. 7 (11) : 2022-2023.

Kadi, A. dan A. Wanda, 1988. Rumput Laut (Algae) Jenis, Reproduksi,

Produksi, Budidaya dan Pasca Panen. Pusat Penelitian dan

Pengembangan Oseanologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. Jakarta.

71 hal.

Kadir, A., 2007. Induksi dan Perbanyakan Populasi kalus, Regenerasi

Tanaman serta Uji Respon Kalus Terhadap Konsentrasi PEG dan

Dosis Iradiasi Sinar Gamma. Jurnal-jurnal Ilmu Pertanian Indonesia,

volume 9, No 1.

Kantor Desa Punaga, 2008. Propil Desa Punaga. Takalar.

Lideman, G.N. Nishihara, T. Noro, dan R. Terada, 2011. In Vitro Growth and

Photosynthesis of Three Edible Seaweeds, Betaphycus gelatinus,

Eucheuma serra, and Meristotheca papulosa (Solieriaceae,

Rhodophyta). Aquaculture Sci, Vol. 59 (4): 563-571.

41

, 2012. Effect of

Temperature and Light on the Photosyntetik Performance of Two

Edible Seaweeds: Meristotheca coacta Okamura and Meristotheca

papulosa J.Agardh (Soliareaceae, Rhodophyta). Aquaculture Sci. Vol.

60 (3): 377-388.

, 2013. Effect of

Temperature and Light on the Photosynthesis as Measured by

Chlorophyll Fluorescence of Cultured Eucheuma denticulatum,

Kappaphycus sp.(sumba strain) From Indonesia. Jurnal of Applied

Phycology. Vol 25 (2): 399-406.

Loban, C.S. and P.J Harrison, 1997. Seaweeds Ecology and Physiology.

Cambridge University Press. Cambridge. UK. 384 pp.

Luning, K., 1990. Seaweed Their Environment, Biogeography and

Ecophysiology. John Wiley and Sons. New York. Hal 334.

Madeali, M.I., E. Susiahningsih, dan P. R. Pong-Masak, 2012. Pencegahan

Penyakit Ice-ice pada Budidaya Rumput Laut Kappaphykus alvarezii

Melalui Aplikasi Pupuk dengan Sistem Perendaman. Balai Riset

Perikanan Budidaya Air payau. Maros Sulawesi Selatan. Hal 63.

Mann, K. H., 1982. Ecology of Coastal Water. Blackwell Scientific Publications.

Oxford University. London.

Silea, L. M. J dan L. Maslitha, 2009. Penggunaan Pupuk Bionik Pada

Tanaman Rumput Laut. Fakultas Matematika dan Ilmu Kelautan.

Unidayan. Bau-Bau.hal 31.

Mubarak, H., 1978. Rumput Laut (Algae), Manfaat, Potensi dan Usaha

Budidayanya. Lembaga Oseanologi Nasional – LIPI. Jakarta. 61 hal.

dan I. S. Wahyuni, 1981. Percobaan Budidaya Rumput Laut

Eucheuma spinosum di Perairan Lorok Pacitan dan Kemungkinan

Pengembangannya. Bul. Panel. Perikanan. Badan Litbang Pertanian

Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan. Vol. 1. Hal : 157-166.

,1982. Teknik Budidaya Rumput Laut. Sub Balai Penelitian

Perikanan Laut. Jakarta.

Nontji, A., 1993. Laut Nusantara. Penerbit Djambatan. Jakarta. Hal 145.

Nugroho, A. dan H. Sugito, 2005. Teknik Kultur Jaringan. Penebar Swadaya.

Jakarta. Hal.71.

42

Nursyam, 2013. Pengaruh Lama Perendaman Pupuk Provasoli’s enrich

Seawater (PES) Terahadap Laju pertumbuhan In Vitro Kappaphycus

alvarezii. Skripsi. Universitas 45. Makassar. 45 hal.

Poncomulyo, T.,H. Maryani. dan K. Litha, 2006., Budidaya dan Pengolahan

Rumput Laut. Agro Media Pustaka. Jakarta. Hal 5,18.

Rukmi, A.S., Sunaryo, dan A. Djunaedi, 2012. Sistem Budidaya Rumput Laut

Gracilaria verrecosa di Pertambakan dengan Perbedaan Waktu

Perendaman di Dalam Larutan NPK. Journal of Marine Research.

Program Studi Ilmu Kelautan. Fakultas Perikanan dan Ilmu kelautan.

Universitas Diponegoro Kampus Tembalang. Semarang. Vol 1. Hal 90.

Sari, A.P., Sunaryo, dan A. Djunaedi, 2012. Pengaruh Lama Perendaman

Pupuk Fosfat Terhadap Pertumbuhan Rumput Laut Gracillaria

verrucosa (Hudson) Papenfuss di Pertambakan Desa Wonorejo,

Kaliwungu-Kendal. Journal of Marine Research, Program Studi Ilmu

Kelautan. Fakultas Perikanan dan Ilmu Pengetahuan, Universitas

Diponegoro Kampus Tembalang, Semarang. Vol 1. Hal 98.

Sidjabat, M. M., 1973. Pengantar Oseanografi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Sinaga, T., 1999. Sturuktur Komunitas Rumput Laut di Perairan Rataan

Terumbu Pulau Pari, Kepulauan Seribu, Jakarta Utara. Skripsi.

Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Hal 11.

Soegiarto, A. W., Sulistijo dan H. Mubarak, 1978. Rumput laut (Algae)

Manfaat. Potensi dan Usaha Budidayanya. Lembaga Oseanologi

Nasional. LIPI. Jakarta. 61 hal.

Sulistijo, A. Nontji dan A. Sugiarto, 1980. Potensi Usaha Pengebangan

Budidaya Perairan diIndonesia. Proyek Penelitian Potensi

Sumberdaya Ekonomi. Lembaga Oseanologi Nasional. LIPI. Jakarta.

dan W. S. Atmadja, 1996. Perkembangan Budidaya Rumput Laut di

Indonesia. Puslitbang Oseanografi LIPI. Jakarta.

, 2002. Penelitian Budidaya Rumput Laut (Algae Makro/Seaweed) di

Indonesia. Pidato Pengukuhan Ahli Penelitian Utama Bidang Akuakultur.

Pusat Penelitian Oseanografi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.

Suryati, E, Rosmiati dan A Tenriulo, 2008. Kultur Jaringan Rumput Laut

(Gracillaria sp) dari Sumber Thallus yang Berbeda Sentra. Jurnal

Riset Akuakultur.

43

Suryati, E., A. Tenriolu dan B.R Tampangalo, 2010. Laporan Penelitian.

Pelestarian Plasma Nutfah Rumput Laut Kappaphycus alvarezi (Doty).

Melalui Induksi Kalus dan Embriogenesis Secara In vitro.pdf. Balai

riset perikanan budidaya air payau pusat riset perikanan budidaya

kementrian kelautan dan perikanan. 25 hal.

Susanto, A.B., 2008. Cloning Makroalga. UKM Seaweed, Jurusan Ilmu

Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,

UNDIP.<URL:http://www.rumputlaut.org. Diakses pada tanggal 26 Mei

2013. Pukul 12:38:52 WITA.

Tjitrosoepomo, G, 1989. Taksonomi Tumbuhan (Schizophyta, Thallophyta,

Bryophyta, Pteridophyta). Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.

Trigiano, R. N., 2000. Plant Tissue Culture Concepts and Laboratory

Exercises. New York: CRC Press.

Trono, G. C., Ganzon dan F. Fortes, 1988. Philippine Seaweeds. National Book

Store Inc. Philippines.

Wahida, S., 2011. Pengaruh Hormon Kinetin Terhadap Pertumbuhan Kalus

Rumput Laut Kappaphycus alvarezii Melalui Kultur In Vitro. Jurusan

Budidaya Perikanan, Politeknik Pertanian Negeri Pangkep. Jurnal vokasi.

Vol. 7 no. 2. 192-197..

Winarno, 2008. Kimia Pangan dan Gizi. Bogor : M-Brio Press.

, 1996. Teknologi Pengolahan Rumput Laut. Pustaka Sinar Harapan.

Jakarta.

Wiyanto, D. B., 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Rumput Laut

Kappaphycus alvarezii dan Eucheuma denticullatum Terhadap Bakteri

Aeromonas hydrophila dan Vibrio harveyii. Jurnal Kelautan. Vol 3.No. 1.

Universitas Islam Madura.

Yusnita, 2005. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara

Efisien. PT. Agromedia Pustaka. Jakarta. Hal.103.

Zatnika, A. dan W. I. Angkasa, 1994. Teknologi Budidaya Rumput Laut,

Makalah pada Seminar Pekan Akuakultur V. Tim Rumput Laut BPPT.

Jakarta. 12 hal.

Zulkarnain, 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Bumi aksara. Jakarta. Hal 45.

44

LAMPIRAN

45

Lampiran 1. Tabel komposisi Pupuk Provasoli’s Enrich Seawater (PES)

(Andersen, 2005)

Bahan Satuan

Enrich Stock Solution

1. NaNO3

2. Tris base

3. Na2 β-glicerophospat

4. Thamin (Vitamin B1)

5. Biotin (Vitamin H)

6. Vitamin B12

7. Trace Metal Solution

Na2EDTA 2H2O

FeCl3 6H2O

H3BO3

MnSO4 4H2

CoSO4 7H2O

c. ZnSO4 7H2O

8. Iron-EDTA Solution

Na2 EDTA 2H2O

Fe (NH4)2 (SO4)2, 6H2O

5,0 g

3,0 g

0,5 g

0,500 mg

1 ml

1 ml

25 ml

12,74 g

0,484 g

11,439 g

1,624 g

0,220 g

0,048 g

250 ml

0,841 g

0,702 g

46

Lampiran 2 . Laju Pertambahan Berat Eksplan selama 42 hari

Perlakuan Umur (hari)

WG RGR (Waktu

Perendaman) 0 7 14 21 28 35 42

Bobot Bobot Bobot Bobot Bobot Bobot Bobot

A1

0 Jam

17,60 18,40 18,90 20,20 20,40 20,70 20,80 18,18 0,40

A2 18,90 20,00 20,70 21,10 21,20 21,40 21,80 15,34 0,34

A3 18,80 20,30 20,80 21,70 21,90 21,90 21,90 16,49 0,36

A4 18,20 18,90 19,50 19,60 19,80 20,60 20,80 14,29 0,32

Avearge 18,38 19,40 19,98 20,65 20,83 21,15 21,33 16,08 0,35

Stdv 0,60 0,90 0,93 0,93 0,92 0,61 0,61 1,67 0,03

B1

6 jam

35,00 37,60 39,30 39,90 40,00 40,70 41,10 17,43 0,38

B2 30,90 33,20 34,70 34,90 35,10 35,30 35,50 14,89 0,33

B3 20,40 22,70 24,50 25,40 25,40 26,20 26,30 28,92 0,60

B4 25,60 28,10 29,60 30,10 30,40 31,10 31,30 22,27 0,48

Avearge 27,98 30,40 32,03 32,58 32,73 33,33 33,55 20,88 0,45

Stdv 6,35 6,44 6,39 6,24 6,26 6,16 6,28 6,18 0,12

C1

12

Jam

23,00 24,90 26,10 26,60 26,80 27,50 27,90 21,30 0,46

C2 23,50 24,90 25,50 26,20 26,00 26,20 26,80 14,04 0,31

C3 21,60 23,20 24,20 24,70 24,30 24,90 25,40 17,59 0,39

C4 23,30 24,60 25,20 25,60 25,80 25,90 26,70 14,59 0,32

Avearge 22,85 24,40 25,25 25,78 25,73 26,13 26,70 16,88 0,37

Stdv 0,86 0,81 0,79 0,83 1,04 1,07 1,02 3,34 0,07

D1

18

Jam

18,80 20,80 19,90 21,10 21,10 22,00 21,90 16,49 0,36

D2 19,00 20,40 21,50 22,20 22,20 22,90 23,10 21,58 0,47

D3 27,60 28,90 29,90 30,70 30,60 31,00 32,40 17,39 0,38

D4 21,40 21,90 22,60 23,50 23,20 23,00 23,80 11,21 0,25

Avearge 21,70 23,00 23,48 24,38 24,28 24,73 25,30 16,67 0,37

Stdv 4,11 3,98 4,42 4,33 4,30 4,21 4,80 4,26 0,09

E1

24

Jam

27,10 29,90 31,50 32,50 32,70 33,40 33,90 25,09 0,53

E2 20,50 22,80 23,90 24,40 24,70 25,50 26,90 31,22 0,65

E3 15,80 10,30 17,20 17,30 17,30 17,80 18,30 15,82 0,35

E4 21,10 23,70 25,00 25,90 26,20 26,70 24,10 14,22 0,32

Avearge 21,13 21,68 24,40 25,03 25,23 25,85 25,80 21,59 0,46

Stdv 9,91 10,70 11,07 11,47 11,43 11,66 11,89 7,74 0,17

Keterangan : A = 0 jam, B = 6 jam, C = 12 jam, D = 18 jam, E = 24 jam

WG (Weight Gain) = Berat mutlak

RGR (Relative Growth Rate) = Laju Pertumbuhan Relatif

47

Lampiran 3. Laju Pertambahan Panjang Eksplan Selama 42 hari

Perlakuan Umur (hari)

LG RLR (Lama

Perendaman) 0 7 14 21 28 35 42

Panjang Panjang Panjang Panjang Panjang Panjang Panjang

A1

0

Jam

1,02 1,08 1,12 1,12 1,13 1,34 1,34 31,37 0,65

A2 0,90 1,12 1,15 1,18 1,12 1,26 1,28 42,22 0,84

A3 1,08 1,17 1,19 1,18 1,21 1,28 1,30 20,37 0,44

A4 1,13 1,13 1,15 1,18 1,18 1,21 1,22 7,96 0,18

Average 1,03 1,13 1,15 1,17 1,16 1,27 1,29 25,48 0,53

Stdev 0,10 0,04 0,03 0,03 0,04 0,05 0,05 14,70 0,28

B1

6

Jam

0,82 1,03 1,09 1,18 1,24 1,25 1,36 65,85 1,20

B2 1,01 1,04 1,12 1,24 1,21 1,30 1,32 30,69 0,64

B3 1,16 1,24 1,27 1,29 1,34 1,38 1,40 20,69 0,45

B4 0,95 0,99 1,16 1,36 1,22 1,34 1,37 44,21 0,87

Average 0,99 1,08 1,16 1,27 1,25 1,32 1,36 40,36 0,79

Stdev 0,14 0,11 0,08 0,08 0,06 0,06 0,03 19,54 0,33

C1

12

Jam

1,05 1,19 1,25 1,36 1,36 1,31 1,45 38,10 0,77

C2 1,04 1,13 1,20 1,35 1,21 1,29 1,29 24,04 0,51

C3 1,18 1,22 1,35 1,23 1,25 1,35 1,37 16,10 0,36

C4 0,95 1,01 1,11 1,12 1,16 1,19 1,12 17,89 0,39

Average 1,06 1,14 1,23 1,27 1,25 1,29 1,31 24,03 0,51

Stdev 0,09 0,09 0,10 0,11 0,09 0,07 0,14 9,97 0,19

D1

18

Jam

1,06 1,07 1,08 1,27 1,12 1,12 1,23 16,04 0,35

D2 0,96 0,99 1,16 1,16 1,17 1,16 1,02 6,25 0,14

D3 1,03 1,18 1,27 1,42 1,42 1,59 1,62 57,28 1,08

D4 1,18 1,22 1,24 1,22 1,29 1,38 1,31 11,02 0,25

Average 1,06 1,12 1,19 1,27 1,25 1,31 1,30 22,65 0,46

Stdev 0,09 0,10 0,09 0,11 0,13 0,22 0,25 23,43 0,42

E1

24

Jam

1,12 1,24 1,45 1,50 1,65 1,75 1,73 54,46 1,04

E2 0,81 0,92 1,15 1,28 1,35 1,49 1,51 86,42 1,48

E3 0,94 1,13 1,14 1,15 1,24 1,28 1,29 37,23 0,75

E4 1,06 1,19 1,23 1,31 1,35 1,45 1,49 40,57 0,81

Average 0,98 1,12 1,24 1,31 1,40 1,49 1,51 54,67 1,02

Stdev 0,14 0,14 0,14 0,14 0,18 0,19 0,18 22,44 0,33

Keterangan : A = 0 jam, B = 6 jam, C = 12 jam, D = 18 jam, E = 24 jam

LG (Lenght Gain) = Panjang mutlak

RLR (Relative Lenght Rate) = Laju Pertumbuhan Relatif

48

Lampiran 4. Denah Penelitian

A4 E3 D2 B4 D3 A2 B1

A1 D1 C4 C2 C1 C3 E2

A3 B2 B3 E1 E4 D4

Perlakuan waktu perendaman eksplan E. spinosum Pada

Pupuk PES.

A : 0 jam (kontrol)

B : 6 jam

C : 12 jam

D : 18 jam

E : 24 jam

49

Lampiran 5. Pengolahan data dengan program SPSS 16,0.

Analisis data untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan pengaruh waktu

perandaman dalam larutan pupuk PES terhadap laju pertumbuhan Eucheuma

spinosum J. Agardh, maka akan di analisis dengan menggunakan uji F

(ANOVA), dan jika hasilnya menunjukkan signifikan berbeda maka akan

dilakukan dengan uji lanjutan BNT (LSD). Analisis laju pertumbuhan dilakukan

berdasarkan pertambahan panjang dan pertambahan berat. Dengan masa

pengamatan selama 42 hari, maka analisis laju pertumbuhan dilakukan dengan

cara sebagai berikut :

1. Pertambahan Panjang

Ada tidaknya perbedaan pengaruh perlakuan maka dapat disusun hipotesis

sebagai berikut :

H0 : Tidak terdapat perbedaan pengaruh perlakuan terhadap pertambahan

panjang

H1 : Terdapat perbedaan pengaruh perlakuan terhadap pertambahan panjang

ANOVA

Pertambahan_Panjang

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 6.428 4 1.607 1.467 .261

Within Groups 16.432 15 1.095

Total 22.860 19

50

Adapun kriteria pengujian ialah :

Tolak H0 dan terima H1 jika Sig.F < Sig.α, dan

Tolak H1 dan terima H0 jika Sig.F > Sig.α.

Berdasarkan hasil analisis variansi pada tabel di bawah, maka dapat

disimpulkan untuk menerima H0, yang berarti tidak terdapat perbedaan pengaruh

perlakuan terhadap pertambahan panjang, hal ini dikarenakan besarnya nilai

signifikansi pada tabel ANOVA sebesar 0,261 yang berarti lebih besar dari taraf

alpha 0.05. Karena tidak terdapat perbedaan pengaruh perlakuan, maka tidak perlu

untuk dilakukan uji lanjutan.

2. Pertambahan Berat

Ada tidaknya perbedaan pengaruh perlakuan maka dapat disusun hipotesis

sebagai berikut :

H0 : Tidak terdapat perbedaan pengaruh perlakuan terhadap pertambahan

berat

H1 : Terdapat perbedaan pengaruh perlakuan terhadap pertambahan berat

ANOVA

Pertambahan_Berat

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 10809.965 4 2702.491 2.645 .075

Within Groups 15327.805 15 1021.854

Total 26137.770 19

51

Adapun kriteria pengujian ialah :

Tolak H0 dan terima H1 jika Sig.F < Sig.α, dan

Tolak H1 dan terima H0 jika Sig.F > Sig.α.

Berdasarkan hasil analisis variansi pada table dibawah, maka dapat

disimpulkan untuk menerima H0, yang berarti tidak terdapat perbedaan pengaruh

perlakuan terhadap pertambahan berat, hal ini dikarenakan besarnya nilai

signifikansi pada table ANOVA sebesar 0.075 yang berarti lebih besar dari taraf

alpha 0.05.

52

Lampiran 6. Dokumentasi Kegiatan penelitian

Sebelum perendaman Sesudah perendaman Sesudah perendaman (eksplan

Pada (perlakuan E=24 jam) (umur 6 minggu,ekspalan pada pada perlakuan E=24 jam)

perlakuan B=6 jam )

Ekplan yang telah dipotong Pemilihan eksplan dibantu Sterilisasi eksplan

oleh pembimbing lapangan

z

Eksplan dalam larutan Pemeliharaan eksplan dalam Pengukuran panjang eksplan dengan

betadine 1 % wadah multiwel chember menggunakan jangka sorong.

53

Penimbangan eksplan dengan Kegiatan analisis data.

menggunakan timbangan analitik

Lampian 7. Kualitas air pada media pemeliharaan eskplan Eucheuma spinosum untuk

setiap perlakuan

No Perlakuan Salinitas (ppt) Suhu (oC)

1 0 jam 32 25

2 6 jam 32 27

3 12 jam 32 27

4 18 jam 32 27

5 24 jam 32 27