penentuan kadar protein dalam albumin telur dengan metode

Upload: ayu-sukerti

Post on 03-Mar-2018

240 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    1/14

    PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI

    METODE LOWRY

    LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

    Oleh

    Ni PutuCandraMahayani NIM !!"!"#

    Ni Made Willy Lara$hati Ana$ta$ia NIM !!"!"%

    I &u$tiAyuDe'iA(riyanti NIM !!"!"))

    I Putu Pandu Setia'an NIM !!"!")*

    +URUSAN PENDIDIKAN KIMIA

    ,AKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PEN&ETAHUAN ALAM

    UNI-ERSITAS PENDIDIKAN &ANESHA

    SIN&ARA+A

    )"%

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    2/14

    PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI

    METODE LOWRY

    I. TU+UAN

    1. Membuat kurva hubungan antara konsentrasi protein standar dengan absorbansinya.

    2. Menentukan kadar protein yang terdapat dalam putih telur dengan menggunakan

    metode Lowry.

    II. DASAR TEORI

    Protein tersusun atas asam-asam amino yang dihubungkan dengan ikatan peptida.

    Asam amino merupakan molekul organik dengan massa molekul rendah (antara 100-200

    a! yang mengandung setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-"##$! dan satu gugus

    amino (-%$2!. (&ika'2010!. &elur merupakan salah satu sumber protein hewani yang

    banyak dikonsumsi masyarakat. alam protein (albumin! telur ini terkandung beberapa

    asam amino seperti tirosin dan triptoan ()irahadikusumah' 1*+*!.

    ,omposisiputihtelurkandungan total protein 10-11 dasarbasah' ovalbulmin 0 dari

    total protein' /analbumin * dari total protein' ovoummu/oid 1 dari total protein.

    edangkankuningtelurterdiriatashipovitelindanhipotellenin.

    Penentuan konsentrasi proteinasam amino merupakan proses rutin yang digunakan

    dalam analisis kimia. alah satu tu3uan dari penentuan konsentrasi proteinasam amino ini

    adalah untuk mengetahui nilai gi4i dari suatu bahan makanan. Ada beberapa metode yang

    biasa digunakan dalam rangka menentukan konsentrasi protein' salah satunya adalah

    metode Lowry. Pemilihan metode yang baik dan tepat untuk suatu pengukuran tergantung

    pada beberapa aktor' seperti banyaknya material atau sampel yang tersedia' waktu yang

    tersedia untuk melakukan pengukuran' alat spektrootometer yang tersedia untuk

    melakukan pengukuran (5edhana' 2006!.5eagen pendeteksi gugus-gugus enolik' seperti reagen 7olin-"io/alteu telah

    digunakan dalam penentuan konsentrasi protein oleh Lowry (1*81! yang kemudian

    dikenal dengan metode Lowry. alam bentuk yang paling sederhana' reagen 7olin-

    "io/alteu dapat mendeteksi residu tirosin (dalam protein! karena kandungan enolik dalam

    residu tirosin yang mampu mereduksi reagen osotungstat dan osomolibdat men3adi

    tungstat dan molibdenum yang berwarna biru.5eagen osotungstat dan osomolibdat ini

    merupakan konstituen utama reagen 7olin-"io/alteu. $asil reduksi ini menun3ukkan

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    3/14

    pun/ak absorpsi yang lebar pada daerah merah dari spektrum sinar tampak (900-+00 nm!

    (&ika' 2010!.

    ensitivitas dari metode 7olin-"io/alteu ini mengalami perubahan yang /ukup

    signiikan apabila digabung dengan ion-ion "u2: (metode ;iuret!. ,ompleks "u-protein

    yang dihasilkan oleh reagen ;iuret akan menyebabkan reduksi pula pada osotungstat dan

    osomolibdat dalam reagen 7olin-"io/alteu. ,ira-kira 8 dari reduksi yang ter3adi

    diakibatkan oleh adanya kompleks "u-protein tersebut' sementara residu-residu tirosin dan

    triptoan mereduksi 28 sisanya (&ika' 2010!. 5eagen 7olin-"io/alteu merupakan suatu

    komposisi kompleks yang diperoleh dengan /ara pemanasan reluks dari %a-tungstat dan

    %a-molibdat dengan asam ortoosat. elain itu' disertakan pula komponen-komponen lain

    untuk meningkatkan kestabilan reagen yang dalam kondisi normal berwarna kuning pu/at

    (&ika' 2010!.

    Pada saat menentukan konsentrasi protein dalam suatu sampel' harus dilakukan

    pula pengukuran terhadap beberapa larutan protein standar yang memiliki rentang

    konsentrasi tertentu di mana konsentrasi sampel protein berada di dalam rentang tersebut

    (&ika' 2010!. Protein dimasukkan pertama kali ke dalam tabung reaksi' kemudian

    ditambahkan air. eluruh tabung harus mempunyai volume akhir yang sama dan dilakukan

    pengadukan atau pen/ampuran yang baik setelah penambahan 4at atau reagen. 5eagen

    penghasil warna selalu ditambahkan terakhir dan biasanya diperlukan selang waktu

    tertentu untuk ter3adinya reaksi yang sempurna (5edhana' 2010!.

    Pengukuran yang dilakukan terhadap larutan protein standar dan sampel

    menggunakanspektrootometer. Melalui pengukuran ini akan diperoleh absorbansi dari

    larutan standar dan sampel. pektrosotometri merupakan salah satu metode analisis

    instrumental yang didasarkan pada interaksi energi dan materi. pektrootometri

    mempunyai aplikasi yang /ukup luas pada analisis se/ara kuantitati. $asil pengukuran

    se/ara kuantitati menggunakan metode ini mempunyai akurasi yang tinggi' walaupun

    tidak seakurat metode instrumentasi serapan atom atau sinar gamma. Prinsip dasar

    pengukuran se/ara kuantitati adalah menggunakan hukum Lambert-;eer (&ika' 2010!.

    Langkah-langkah umum dalam analisis dengan spetrootometer adalah< 1! pembentukan

    molekul yang dapat menyerap /ahaya pada daerah => atau tampak? 2! pembuatan

    spektrum dan pemilihan pan3ang gelombang? ! pembuatan kurva kalibrasi? dan 6!

    pengukuran absorbansi /uplikan (Muderawan' 200*!.

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    4/14

    $ukum Lambert-;eer men3abarkan pengurangan eksponensial dari intensitas

    radiasi yang diteruskan karena peningkatan aritmatik dari kadar 4at penyerap' sehingga

    diperoleh persamaan berikut (&ika' 2010!.

    === TTA

    I

    I

    1logloglog 0

    @o@ disebut optical density (#! atau absorbansi (A!' sedangkan @@o disebut

    transmitan (&!' yaitu proporsi radiasi yang diteruskan. ;ila & dikalikan dengan 100

    disebut persen transmitansi (&!. engan menggunakan notasi-notasi yang merupakan

    penggabungan $ukum ;eer dengan $ukum ;ouguer' maka $ukum ;eer dapat dituliskan

    sebagai berikut2M2

    ,eterangan < >1 volume putih telur sebelum pengen/eran

    M1 konsentrasi putih telur sebelum pengen/eran

    >2 volume putih telur setelah pengen/eran

    M2 konsentrasi putih telur setelah pengen/eran

    ,onsentrasi dari masing-masing tabung dapat dihitungdengan persamaan berikut1M1 >2M2

    ,eterangan < >1 volume putih telur sebelum pengen/eran

    M1 konsentrasi putih telur sebelum pengen/eran

    >2 volume putih telur setelah pengen/eran

    M2 konsentrasi putih telur setelah pengen/eran

    ,onsentrasi larutan standar protein putih telur adalah 00 GgmL

    Tabung 1 : M2 =V1 M1

    V2=

    0 mL x 300 g/mL

    1,0 mL= 0 g/mL

    0GgmLmL1'0

    GgmL00CmL0'1

    >

    M>M

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    8/14

    90GgmLmL1'0

    GgmL00CmL0'2

    >

    M>M

    M>M

    M>M

    M>M

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    9/14

    tua. 5eagen 7olin-"iao/alteu dapat mendeteksi residu tirosin dalam larutan protein

    karena kandungan enolik dalam residu tirosin mampu mereduksi reagen 7olin-

    "iao/alteu yang terdiri dari osotungstat dan osomolibdat men3adi tungstat dan

    molibdenum yang berwarnabiru.)arna ini dapat menyerap /ahaya pada daerah sinar

    tampak' sehingga transmitansi dan absorbansinya dapat diukur. )arna yang

    ditimbulkansetelahpenambahanreagen7olin-"io/alteumengindikasikan terbentuknya

    tungstat dan molibdenum.engan reaksi yang ter3adi adalah sebagai berikut2.M2' dimana

    >1 >olume sampel sebelum pengen/eran

    M1 ,adar sampel sebelum pengen/eran

    >2 >olume sampel setelah pengen/eran

    M2 ,adar sampel setelah pengen/eran

    >1.M1 >2.M2

    0'1 mL C M1 1'0 mL C*6'+9 GgmL

    M1 mL1'0

    GgmL*6'+9mL0'1 x

    *6+'9 GgmL

    '*6+ mgmL

    ,onsentrasi tersebut adalah hasil pengen/eran 10 kali' sehingga kadar protein pada

    sampel putih telur awal adalah

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    12/14

    mgmL+'*6M

    mL1

    mL100GgmL'*6+M

    =

    =

    ehingga kadar protein dalam sampel albumin telur tersebut adalah *6'+ mgmL.

    -I. SIMPULAN

    ;erdasarkan data hasil pengamatan dan pembahasan di atas' maka dapat

    disimpulkan sebagai berikut.

    1. ,urva hubungan antara absorbansi (A! dengan konsentrasi (G

    gmL! adalah

    mendekati linear dengan 52 0'+29*' dengan persamaan garis dari kurva adalah y

    -0'000C : 0.8196.

    2. ,adar protein dalam sampel albumin telur adalah sebesar *6'+ mgmL.

    -II. DA,TAR PUSTAKA

    Muderawan' @ )ayan. 200*. Analisis @nstrumen. ingara3a

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    13/14

    LAMP@5A% 1. DAM;A5

    Dambar 1. 5eagen ; Dambar 2. 5eagen ;iuret

  • 7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode

    14/14

    Dambar . Larutan tandar ;A Dambar 6. Proses @nkubasi

    Dambar 8. pektrootometer Dambar 9. Larutan Albumin &elur