penentuan kadar protein dalam albumin telur dengan metode
TRANSCRIPT
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
1/14
PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI
METODE LOWRY
LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA
Oleh
Ni PutuCandraMahayani NIM !!"!"#
Ni Made Willy Lara$hati Ana$ta$ia NIM !!"!"%
I &u$tiAyuDe'iA(riyanti NIM !!"!"))
I Putu Pandu Setia'an NIM !!"!")*
+URUSAN PENDIDIKAN KIMIA
,AKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PEN&ETAHUAN ALAM
UNI-ERSITAS PENDIDIKAN &ANESHA
SIN&ARA+A
)"%
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
2/14
PENENTUAN KADAR PROTEIN DALAM SAMPEL PUTIH TELUR MELALUI
METODE LOWRY
I. TU+UAN
1. Membuat kurva hubungan antara konsentrasi protein standar dengan absorbansinya.
2. Menentukan kadar protein yang terdapat dalam putih telur dengan menggunakan
metode Lowry.
II. DASAR TEORI
Protein tersusun atas asam-asam amino yang dihubungkan dengan ikatan peptida.
Asam amino merupakan molekul organik dengan massa molekul rendah (antara 100-200
a! yang mengandung setidak-tidaknya satu gugus karboksil (-"##$! dan satu gugus
amino (-%$2!. (&ika'2010!. &elur merupakan salah satu sumber protein hewani yang
banyak dikonsumsi masyarakat. alam protein (albumin! telur ini terkandung beberapa
asam amino seperti tirosin dan triptoan ()irahadikusumah' 1*+*!.
,omposisiputihtelurkandungan total protein 10-11 dasarbasah' ovalbulmin 0 dari
total protein' /analbumin * dari total protein' ovoummu/oid 1 dari total protein.
edangkankuningtelurterdiriatashipovitelindanhipotellenin.
Penentuan konsentrasi proteinasam amino merupakan proses rutin yang digunakan
dalam analisis kimia. alah satu tu3uan dari penentuan konsentrasi proteinasam amino ini
adalah untuk mengetahui nilai gi4i dari suatu bahan makanan. Ada beberapa metode yang
biasa digunakan dalam rangka menentukan konsentrasi protein' salah satunya adalah
metode Lowry. Pemilihan metode yang baik dan tepat untuk suatu pengukuran tergantung
pada beberapa aktor' seperti banyaknya material atau sampel yang tersedia' waktu yang
tersedia untuk melakukan pengukuran' alat spektrootometer yang tersedia untuk
melakukan pengukuran (5edhana' 2006!.5eagen pendeteksi gugus-gugus enolik' seperti reagen 7olin-"io/alteu telah
digunakan dalam penentuan konsentrasi protein oleh Lowry (1*81! yang kemudian
dikenal dengan metode Lowry. alam bentuk yang paling sederhana' reagen 7olin-
"io/alteu dapat mendeteksi residu tirosin (dalam protein! karena kandungan enolik dalam
residu tirosin yang mampu mereduksi reagen osotungstat dan osomolibdat men3adi
tungstat dan molibdenum yang berwarna biru.5eagen osotungstat dan osomolibdat ini
merupakan konstituen utama reagen 7olin-"io/alteu. $asil reduksi ini menun3ukkan
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
3/14
pun/ak absorpsi yang lebar pada daerah merah dari spektrum sinar tampak (900-+00 nm!
(&ika' 2010!.
ensitivitas dari metode 7olin-"io/alteu ini mengalami perubahan yang /ukup
signiikan apabila digabung dengan ion-ion "u2: (metode ;iuret!. ,ompleks "u-protein
yang dihasilkan oleh reagen ;iuret akan menyebabkan reduksi pula pada osotungstat dan
osomolibdat dalam reagen 7olin-"io/alteu. ,ira-kira 8 dari reduksi yang ter3adi
diakibatkan oleh adanya kompleks "u-protein tersebut' sementara residu-residu tirosin dan
triptoan mereduksi 28 sisanya (&ika' 2010!. 5eagen 7olin-"io/alteu merupakan suatu
komposisi kompleks yang diperoleh dengan /ara pemanasan reluks dari %a-tungstat dan
%a-molibdat dengan asam ortoosat. elain itu' disertakan pula komponen-komponen lain
untuk meningkatkan kestabilan reagen yang dalam kondisi normal berwarna kuning pu/at
(&ika' 2010!.
Pada saat menentukan konsentrasi protein dalam suatu sampel' harus dilakukan
pula pengukuran terhadap beberapa larutan protein standar yang memiliki rentang
konsentrasi tertentu di mana konsentrasi sampel protein berada di dalam rentang tersebut
(&ika' 2010!. Protein dimasukkan pertama kali ke dalam tabung reaksi' kemudian
ditambahkan air. eluruh tabung harus mempunyai volume akhir yang sama dan dilakukan
pengadukan atau pen/ampuran yang baik setelah penambahan 4at atau reagen. 5eagen
penghasil warna selalu ditambahkan terakhir dan biasanya diperlukan selang waktu
tertentu untuk ter3adinya reaksi yang sempurna (5edhana' 2010!.
Pengukuran yang dilakukan terhadap larutan protein standar dan sampel
menggunakanspektrootometer. Melalui pengukuran ini akan diperoleh absorbansi dari
larutan standar dan sampel. pektrosotometri merupakan salah satu metode analisis
instrumental yang didasarkan pada interaksi energi dan materi. pektrootometri
mempunyai aplikasi yang /ukup luas pada analisis se/ara kuantitati. $asil pengukuran
se/ara kuantitati menggunakan metode ini mempunyai akurasi yang tinggi' walaupun
tidak seakurat metode instrumentasi serapan atom atau sinar gamma. Prinsip dasar
pengukuran se/ara kuantitati adalah menggunakan hukum Lambert-;eer (&ika' 2010!.
Langkah-langkah umum dalam analisis dengan spetrootometer adalah< 1! pembentukan
molekul yang dapat menyerap /ahaya pada daerah => atau tampak? 2! pembuatan
spektrum dan pemilihan pan3ang gelombang? ! pembuatan kurva kalibrasi? dan 6!
pengukuran absorbansi /uplikan (Muderawan' 200*!.
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
4/14
$ukum Lambert-;eer men3abarkan pengurangan eksponensial dari intensitas
radiasi yang diteruskan karena peningkatan aritmatik dari kadar 4at penyerap' sehingga
diperoleh persamaan berikut (&ika' 2010!.
=== TTA
I
I
1logloglog 0
@o@ disebut optical density (#! atau absorbansi (A!' sedangkan @@o disebut
transmitan (&!' yaitu proporsi radiasi yang diteruskan. ;ila & dikalikan dengan 100
disebut persen transmitansi (&!. engan menggunakan notasi-notasi yang merupakan
penggabungan $ukum ;eer dengan $ukum ;ouguer' maka $ukum ;eer dapat dituliskan
sebagai berikut2M2
,eterangan < >1 volume putih telur sebelum pengen/eran
M1 konsentrasi putih telur sebelum pengen/eran
>2 volume putih telur setelah pengen/eran
M2 konsentrasi putih telur setelah pengen/eran
,onsentrasi dari masing-masing tabung dapat dihitungdengan persamaan berikut1M1 >2M2
,eterangan < >1 volume putih telur sebelum pengen/eran
M1 konsentrasi putih telur sebelum pengen/eran
>2 volume putih telur setelah pengen/eran
M2 konsentrasi putih telur setelah pengen/eran
,onsentrasi larutan standar protein putih telur adalah 00 GgmL
Tabung 1 : M2 =V1 M1
V2=
0 mL x 300 g/mL
1,0 mL= 0 g/mL
0GgmLmL1'0
GgmL00CmL0'1
>
M>M
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
8/14
90GgmLmL1'0
GgmL00CmL0'2
>
M>M
M>M
M>M
M>M
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
9/14
tua. 5eagen 7olin-"iao/alteu dapat mendeteksi residu tirosin dalam larutan protein
karena kandungan enolik dalam residu tirosin mampu mereduksi reagen 7olin-
"iao/alteu yang terdiri dari osotungstat dan osomolibdat men3adi tungstat dan
molibdenum yang berwarnabiru.)arna ini dapat menyerap /ahaya pada daerah sinar
tampak' sehingga transmitansi dan absorbansinya dapat diukur. )arna yang
ditimbulkansetelahpenambahanreagen7olin-"io/alteumengindikasikan terbentuknya
tungstat dan molibdenum.engan reaksi yang ter3adi adalah sebagai berikut2.M2' dimana
>1 >olume sampel sebelum pengen/eran
M1 ,adar sampel sebelum pengen/eran
>2 >olume sampel setelah pengen/eran
M2 ,adar sampel setelah pengen/eran
>1.M1 >2.M2
0'1 mL C M1 1'0 mL C*6'+9 GgmL
M1 mL1'0
GgmL*6'+9mL0'1 x
*6+'9 GgmL
'*6+ mgmL
,onsentrasi tersebut adalah hasil pengen/eran 10 kali' sehingga kadar protein pada
sampel putih telur awal adalah
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
12/14
mgmL+'*6M
mL1
mL100GgmL'*6+M
=
=
ehingga kadar protein dalam sampel albumin telur tersebut adalah *6'+ mgmL.
-I. SIMPULAN
;erdasarkan data hasil pengamatan dan pembahasan di atas' maka dapat
disimpulkan sebagai berikut.
1. ,urva hubungan antara absorbansi (A! dengan konsentrasi (G
gmL! adalah
mendekati linear dengan 52 0'+29*' dengan persamaan garis dari kurva adalah y
-0'000C : 0.8196.
2. ,adar protein dalam sampel albumin telur adalah sebesar *6'+ mgmL.
-II. DA,TAR PUSTAKA
Muderawan' @ )ayan. 200*. Analisis @nstrumen. ingara3a
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
13/14
LAMP@5A% 1. DAM;A5
Dambar 1. 5eagen ; Dambar 2. 5eagen ;iuret
-
7/26/2019 Penentuan Kadar Protein Dalam Albumin Telur Dengan Metode
14/14
Dambar . Larutan tandar ;A Dambar 6. Proses @nkubasi
Dambar 8. pektrootometer Dambar 9. Larutan Albumin &elur