PEMBUATAN ISOLAT MURNI Paramita Koriston

(J111 14 517)

1. Pengertian kultur murni

Kultur murni adalah pengkulturan yang murni hanya terdapat satu jenis koloni.

Bakteri umumnya hidup berbaur dengan spesies-spesies lain dalam suatu populasi.

Akan sulit untuk mempelajari secara spesifik mengenai karakteristik dari suatu spesies

mikroorganisme apabila bercampur dengan spesies-spesies lain; untuk itu kultur murni

diperlukan.1,2

Untuk membuat kultur murni dari organisme tertentu, perlu dilakukan

pengeliminasian mikroorganisme yang tidak diinginkan. Ini dapat dilakukan dengan

pengeksposan pada temperatur yang tinggi, menggunakan zat kimia yang bersifat

toksik atau menggunakan radiasi untuk membunuh mikroorganisme, serta dapat juga

dengan menggunakan metode filtrasi untuk membuang mikroorganisme tersebut dari

cairan. Teknik aseptik yang meliputi pencegahan terhadap segala kontak dengan kultur

murni, menggunakan medium yang steril dan permukaan wadah (cawan petri) yang

steril harus diperhatikan. Perlu juga dilakukan pembersihan dan desinfeksi pada area

kerja untuk mengurangi jumlah kontaminasi yang potensial; melakukan sterilisasi

dengan panas pada medium yang akan digunakan saat inokulasi atau memanaskan

jarum dengan api sebelum dan sesudah pemindahan bakteri; dengan bekerja secara

cepat dan efisien untuk meminimalisir waktu terpaparnya kultur pada udara bebas

dimana kontaminasi dapat terjadi.3

2. Metode isolasi murni

a. Metode cawan gores

Metode cawan gores adalah metode yang paling praktis untuk mendapatkan

koloni yang terpisah-pisah dan kultur yang murni. Awalnya metode ini

dikembangkan oleh dua orang bakteriologis, Loffler dan Gaffkey di Laboratorium

Robert Koch. Dalam metode ini, loop yang steril atau jarum pindah dicelupkan ke

dalam suspensi yang telah diencerkan dari suatu organisme dan kemudian digores

pada permukaan agar yang telah mengeras untuk membuat serangkaian goresan

yang pararel dan tidak tumpang tindih. Target dari metode ini yaitu untuk

mendapatkan koloni yang murni dari satu jenis mikroorganisme, atau yang

bertumbuh dari sel spora yang sama.4

Hasil dari metode ini yaitu didapatkan pertumbuhan mikroorganisme yang

terlihat membentuk suatu jalur menyerupai anak sungai sesuai dengan goresan

yang dibuat pada permukaan agar, semakin jauh dari goresan awal semakin kurang.

Semua koloni yang tumbuh tidak pada jalur goresan dianggap sebagai

kontaminan.4

b. Metode agar tuang

Pelopor dari metode agar tuang ini dikembangkan di laboratorium milik

seorang bakteriologis terkenal, Robert Koch. Dalam teknik ini, sampel yang sudah

diencerkan secara bersambung ditambahkan ke dalam cawan petri yang steril

dimana kemudian dituangkan agar cair (yang akan memadat pada suhu 40-45C)

dan dicampurkan hingga homogen dengan menggerakkan cawan petri dengan

gerakan rotasi dan kemudian dibiarkan hingga memadat. Setelah diinkubasi, cawan

petri lalu diamati untuk melihat adanya koloni individual yang tumbuh pada

medium. Koloni-koloni murni dengan ukuran, bentuk dan warna berbeda dapat

diisolasi atau dipindahkan ke media kultur dalam tabung reaksi untuk membuat

kultur murni.4

Metode agar tuang juga digunakan untuk menentukan jumlah organisme yang

mampu bertahan hidup dalam cairan seperti air, susu, urin atau media cair tertentu,

juga untuk menentukan aktivitas hemolitik koloni tertentu, seperti pada

streptococci, dengan menggunakan medium agar yang mengandung darah.4

c. Metode cawan sebar

Teknik cawan sebar digunakan untuk memisahkan sampel yang telah

diencerkan dari populasi campuran beberapa mikroorganisme, sehingga koloni

individual yang diinginkan dapat diisolasi. Dalam teknik ini mikroorganisme

disebarkan ke seluruh permukaan agar yang telah memadat dengan L-shaped glass

rod yang telah disterilkan, sementara cawan petri diputar di atas meja putar. Teori

dibalik metode ini yaitu seiring dengan diputarnya cawan petri, pada beberapa

tahap, sel-sel mikroorganisme akan didepositkan dari L-shaped glass rod ke

permukaan agar secara merata. Beberapa dari sel-sel ini akan dipisahkan dari

yang lainnya dengan jarak yang cukup untuk membiarkan koloni berkembang

secara terpisah-pisah.4

Daftar Pustaka

1. Stevenson A. Oxford dictionary of English. New York: Oxford University Press;

2010. P.1442.

2. Pommerville JC. Alcamos laboratory fundamentals of microbiology.

Massachusetts: Jones and Bartlett Publisher; 2007. P.11.

3. Sumbali G, Mehrotra RS. Principles of microbiology, 1ed. New Delhi: Tata

McGraw Hill Education; 2009. P.107.

4. Aneja KR. Experiments in microbiology, plant pathology and biotechnology, 4ed.

New Delhi: New Age International Publishers; 2011. P.190-195.