laporan praktikum mikrobiologi akuatik

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI AKUATIK

(Pemeriksaan Bakteri Koliform dalam Air)

Oleh :

Nama

: Adi Imam Wahyudi

Stambuk

: I1A1 08008

Kelompok

: V (Lima)

Asisten Pembimbing : Zulfathri RandiPROGRAM STUDI MANAJEMEN SUMBERDAYA PERAIRAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS HALUOLEO

KENDARI

2009I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Air merupakan habitat utama yang paling baik untuk setiap kehidupan organisme, baik organisme yang bersifat patogen maupun non patogen. Air berfungsi sebagai bahan untuk kehidupan organisme yang paling utama.

Berbagai media patogen sering kali ditularkan melalui air yang tercemar sehingga sering kali ditularkan penyakit pada hewan maupun manusia. Mikroba ini biasanya terdapat saluran pencernaan dan mencemari air melalui tinja atau kotoran manusia. Mikroba ini biasanya karena telah tercemar oleh mikroba maka harus diperiksa terlebih dahulu agar dapat diperiksa kualitasnya sebelum digunakan oleh manusia.

Bakteri coli tidak dipakai sebagai indikator untuk mengetahui adanya pencemaran air buangan rumah tangga. Jumlah bakteri tersebut merupakan kriteria penentu kualitas air atau makanan yang diperiksa. Makin banyak jumlah coli menunjukkan bahwa air atau makanan mempunyai kualitas air yang makin jelek.

Untuk dapat mengetahui kualitas air dari perairan yang ada, apakah telah tercemar oleh mikroba atau tidak maka dilakukan suatu penelitian untuk memeriksa mikroba pada suatu perairan. Untuk itu dilakukan beberapa cara untuk mendeteksi bakteri coli yaitu dengan uji duga, uji kemantapan dan uji lengkap.

B. Tujuan dan Manfaat

Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mempelajari tekhnik pemeriksaan bakteri coli dalam berbagai jenis perairan.

Sedangkan manfaat dari praktikum ini adalah agar praktikan dapat melihat secara langsung bakteri coli yang nampak pada media percobaan.

II. TINJAUAN PUSTAKA

Metode uji duga merupakan metode tahap awal yang digunakan untuk mengamati bakteri yang ada dalam suatu perairan. Hasil dari metode ini akan didapatkan bakteri coli yang ditandai dengan adanya gelembung gas. Tetapi disamping bakteri coli ada juga mikroorganisme lain yang ada didalamnya. Untuk menghilangkan mikroorganisme tersebut maka digunakan tahap kedua pembuktian tentang adanya bakteri coli dalam perairan yaitu uji kemantapan. Untuk menghilangkan semua mikroorganisme tersebut maka dilakukan tahap akhir yaitu uji kelengkapan. Dengan menggunakan uji lengkap ini maka akan diketahui berapa banyak bakteri coli yang ada dalam suatu perairan (Hadioetomo, 1985).

Pada metode uji lengkap pemeriksaan bakteri coli dari berbagai jenis perairan menggunakan laktosa cair karena larutan ini merupakan reaksi kunci dari prosedur laboratorium untuk menentukan potabolitas air (aman tidaknya air untuk diminum). Metode ini juga menggunakan media NA miring karena perubahan warna dan bentuk bakteri coli ada yang dapat diketahui. Selain itu media NA miring tadi dapat digunakan untuk menyimpan kultur air dalam jangka waktu pendek. Air sumur yang biasanya berasal dari mata air mempunyai bakteri coli paling sedikit jika dibandingkan dengan jenis air lain karena telah mengalami penyaringan selama perjalanannya menembus suspensi didalamnya termasuk mikroorganisme lain menjadi tersingkirkan (Pelczer, 1988).

Pada air laut terdapat berbagai bakteri coli. Bakteri coli ini mungkin berasal dari sampah-sampah yang dibuang oleh manusia. Mungkin juga berasal dari hewan-hewan laut yang telah mati, atau juga berasal dari kotoran manusia. Mungkin juga berasal dari pencemaran udara yang terbuka. Pada air comberan terdapat paling banyak bakteri colinya. Ini disebabkan karena semua kotoran yang berupa makanan busuk hasil air cucian masyarakat dan semua bentuk kotoran lainnya yang ada di tempat itu (Djida, 1990).

III. METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat Praktikum ini dilaksanakan pada hari Jumat, 24 November 2006 pada pukul 09.00 WITA sampai selesai di Laboratorium Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Haluoleo, Kendari.

B. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah sebagai berikut :

a. Pipet steril

b. Jarum ose

c. Lampu Bunsen

d. Inkubator

e. Tabung reaksi

Sedangkan bahan yang digunakan adalah sebagai berikut :

a. Sampel air

b. Media laktosa cair

c. Media NA miring

d. Media Endo agar atau EMBA

C. Prosedur Kerja

Prosedur kerja dari praktikum ini adalah sebagai berikut :

1. Uji duga

a. Mengocok sampel air hingga homogen.

b. Memindahkan sampel air ke dalam tabung laktosa cair dengan menggunakan pipet steril sebagai berikut :

3 tabung berisi 10 ml sampel air

3 tabung berisi 1 ml sampel air

3 tabung berisi 0,1 ml sampel air

c. Menginkubasi selama 2 x 24 jam.

d. Mengamati terbentuknya gas setelah diinkubasikan.

2. Uji kemantapan

a. Menyiapkan media EMBA.

b. Mengambil jarum ose kemudian mensterilkannya di atas lampu Bunsen.

c. Mencelupkan jarum ose ke dalam tabung reaksi dan membuat cawan gores pada media EMBA dari setiap tabung uji duga.

d. Menginkubasi selama 2 x 24 jam.

e. Mengamati koloni yang terbentuk dari bakteri coli.

3. Uji lengkap

a. Memindahkan semua koloni tersangka dari semua cawan Petri agar (EMBA) dengan menggunakan jarum ose ke laktosa cair dan media agar miring.

b. Menginkubasikan selama 24 jam dan mengamati pada media agar miring dengan pewarnaan gram.

c. Mengamati berapa banyak bakteri coli yang ada.

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan

Hasil pengamatan dari praktikum ini adalah sebagai berikut :

1. Uji duga

Tabel Pengamatan Media Laktosa Brouth

Sampel air10 ml10 ml10 ml1 ml0,1 ml

Air tawar(((((

Air laut(((((

2. Uji kemantapan

Gambar air laut

Air tawar

Media EMBA

Mikroba tumbuh, tapi koloni dibentuk karena media terlalu cair.

3. Uji lengkap

Media Laktosa Brouth

Media Laktosa Brouth

Media NA

Media NA

Sumber airLaktosa BrouthMedia NA

Air laut(koloni

Air tawar(koloni

B. Pembahasan

Bakteri coli merupakan bakteri yang tidak patogenik dan biasanya terdapat di dalam tanah, air, padi dan juga pada saluran pencernaan manusia dan hewan.

Dari hasil pengamatan uji duga dengan menggunakan air sungai, sebelum diinkubasikan larutan laktosa yang dicampurkan dengan air sungai tersebut sebanyak 10 ml, 1 ml dan 0,1 ml berwarna kuninh dimana tabung yang berisi 10 ml air sungai lebih encer. Tetapi setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam warna menjadi lebih keruh dari semula. Hal ini disebabkan pada jenis air yang digunakan telah tumbuh dan berkembang biak bakteri coli dan mikroorganisme lainnya. Pada semua tabung terdapat gas yang menandakan bahwa bakteri coli ada pada masing-masing tabung. Menurut Hadioetomo (1985) menyatakan bahwa di dalam tabung yang berisi masing-masing jenis air yang digunakan disamping ada bakteri coli juga ada mikroorganisme lain yang berkembang di dalamnya. Hal ini terjadi karena perpadatan yang terjadi berbeda-beda, yang mana pada waktu memasukkan sampel air ke dalam tabung reaksi mikroorganisme yang terdapat di udara ikut masuk dan berkembang biak di dalamnya.

Pada uji kemantapan, hasil pengamatan yang diperoleh yaitu berupa mikroba yang sudah tumbuh tetapi tidak membentuk suatu koloni karena media terlalu cair. Bakteri coli tersebut tidak dapat dipastikan bentuknya, apakah basil, cocus atau bentuk lainnya. Pada masing-masing tabung reaksi terdapat tabung kecil yang disebut tabung durham. Setelah diinkubasi, di dalam tabung durham tersebut akan muncul gelembung gas yang menandakan ada bakteri coli yang tumbuh.

Pada metode terakhir yaitu uji lengkap, pada tabung reaksi yang berisi laktosa cair ditambahkan dengan media EMBA yang sudah diinkubasi selama 2 x 24 jam menjadi berwarna kuning. Ini disebabkan pengaruh dari bakteri coli tersebut. Bakteri coli tersebut telah mencemari air dan berkembang biak dalam tabung reaksi tersebut. Pada masing-masing tabung terdapat gelembung gas yang menandakan ada bakteri coli pada larutan tersebut. Pada media NA yang tampak pada masing-masing tabung reaksi dari jenis air sungai adalah koloni yang berwarna hitam yang merupakan bakteri coli yang sesungguhnya.

V. PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai berikut :

1. Dari ketiga uji yang dilakukan diperoleh hasil yang positif, yaitu adanya bakteri coli di dalam tabung.

2. Dengan adanya gelembung gas yang timbul membuktikan bakteri memfermentasi laktosa.

B. Saran

Adapun saran saya adalah agar selama praktikum berlangsung para asisten harus hadir mengingat praktek ini membutuhkan pengamatan yang teliti.

DAFTAR PUTAKA

Djida, N., 1990. Metode Instrumental dalam Mikrobiologi Umum. UNHAS Press. Ujung Pandang.

Hadioetomo, R. S., 1985. Mikrobiologi dalam Praktek. PT Gramedia. Jakarta.

Pelczar, M. J., 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta.


(Pengecatan Bakteri)

Oleh :

Nama

: Adi Imam Wahyudi

Stambuk

: I1A1 08008

Kelompok

: V (Lima)




KENDARI

2009I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Pada umumnya sel-sel bakteri memperlihatkan sifat yang transparansi atau tembus pandang, sehingga menyebabkan timbul kesulitan dalam mengamati bagian-bagian yang menyusun tubuh bakteri. Untuk memperjelas pengamatan tersebut, maka digunakan metode pewarnaan terhadap bakteri (protoplasma).

Pewarnaan terhadap bakteri dikenal dua macam yang secara umum disebut pewarnaan sederhana dan pewarnaan majemuk. Pewarnaan sederhana seperti yang telah diketahui merupakan suatu metode pewarnaan yang menggunakan zat-zat warna, sedang pewarnaan majemuk menggunakan zat warna lebih dari satu. Pada pewarnaan majemuk dikenal tipe pewarnaan gram, yang merupakan prosedur pewarnaan yang lebih jelas dan sangat spesifik dalam mengklasifikasikan bakteri bila dibandingkan dengan pewarnaan sederhana.

Banyak spesies bakteri yang memberikan pola penyebaran warna yang berbeda-beda antara satu dengan yang lainnya sehingga metode pewarnaan digunakan untuk mengklasifikasikan bakteri dalam satu kelompok tertentu.

Dari uraian di atas, untuk dapat melakukan pengecatan terhadap bakteri dengan baik dan benar, maka perlu dilakukan suatu pengecatan atau praktikum yang sifatnya dapat menunjang pengetahuan tentang pengecatan bakteri.


Tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut :

a. Untuk melihat bentuk bakteri dan mempelajari cara pewarnaan.

b. Untuk mengenal cara pewarnaan dan mempelajari bentuk bakteri gram.

Sedangkan manfaat dari praktikum ini adalah praktikan dapat melihat bentuk bakteri dan melakukan cara pewarnaan baik pewarnaan sederhana maupun pewarnaan gram.


Pewarnaan tunggal atau sederhana adalah salah satu pewarnaan yang hanya menggunakan satu macam zat pewarna. Zat pewarna yang digunakan adalah methylen blue, gentien violet, basic fuchsin atau safranin. Walaupun ketiga zat warna ini termasuk dalam zat warna basa tetapi kecepatan dan tingkat pewarnaan sel dari zat-zat warna ini berbeda. Methylen blue akan bereaksi dengan muatan negatif tetapi sel dengan kecepatan paling lambat, membutuhkan waktu 30 sampai 60 detik untuk mewarnai bakteri (Sutedja, 1991).

Pemberian warna pada bakteri atau jasad renik lainnya dengan menggunakan larutan tunggal suatu pewarnaan pada lapisan tipis, atau olesan yang sudah difiksasi dinamakan perwarnaan sederhana. Lapisan tadi disirami dengan larutan warna dalam jangka waktu tertentu, kemudian larutan zat warna dicuci dengan air murni dan kaca obyeknya dikeringkan dengan kertas hisap. Pada beberapa jenis mikroorganisme terutama yang menggunakan zat warna methylen blue, beberapa granula dalam sel lainnya, namun biasanya sel-sel bakteri ditemui akan terwarna secara keseluruhan atau merata (Pelczar, 1986).

Pewarnaan majemuk dikenal pula dengan pewarnaan gram, merupakan metode pewarnaan yang menggunakan zat warna labih dari satu. Zat warna yang digunakan dikenal dua tipe secara umum yaitu zat warna primer dan zat warna sekunder atau zat warna tandingan. Zat warna primer biasanya digunakan untuk zat warna kristal violet atau methylen blue. Sedangkan zat warna tandingan digunakan zat warna safranin (Winarno, 1985).

III. METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Selasa, 5 Desember 2006 pada pukul 09.00 WITA sampai selesai di Laboratorium Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Haluoleo, Kendari.

B. Alat dan Bahan


a. Mikroskop

b. Jarum ose

c. Kaca benda

d. Pipet tetes

e. Cawan Petri

Sedangkan bahan yang digunakan adalah sebagai berikut :

a. Biakan murni

b. Zat warna (methylen blue, amonium oksalat, kristal, larutan yodium, larutan safranin atau karbol fuchsin)

c. Air aquades

d. Alkohol aseton

C. Prosedur Kerja

Prosedur keja praktikum kali ini adalah sebagai berikut :

1. Pewarnaan sederhana

a. Membuat olesan bakteri pada kaca benda.

b. Memfiksasi.

c. Memberi pewarnaan biakan selama 2 menit.

d. Mencuci dengan air.

e. Mengering anginkan.

f. Mengamati di bawah mikroskop.

g. Menggambar bentuk bakteri dengan warna yang timbul.

2. Pewarnaan gram

a. Membuat olesan bakteri pada kaca benda.

b. Memfiksasi.

c. Membuat zat warna utama yaitu amonium oksalat kristal ungu (berupa larutan) selama 1-2 menit, kemudian mencuci dengan air mengalir.

d. Memberi mordan yaitu larutan yodium dalam KJ (yodium lugol) selama 1-2 menit kemudian mencuci dengan air mengalir.

e. Meneteskan larutan alkohol asetat sedikit demi sedikit sehingga noda yang berwarna menjadi tidak berwarna.

f. Meneteskan zat warna penutup yaitu larutan safranin berwarna merah atau karbol fuchsin selam 2-3 menit.

g. Mengamati di bawah mikroskop kemudian menggambar bentuk dengan warnanya.


A. Hasil PengamatanHasil pengamatan praktikum ini adalah sebagai berikut :

1. Pewarnaan sederhana

2. Pewarnaan gram

Keterangan :

Warna ungu : gram ( ( )

Warna lain : gram ( ( )

B. Pembahasan

Pewarnaan atau pengecatan mikroba banyak dilakukan baik secara langsung (bersama bahan yang ada) ataupun secara tidak langsung (melalui biakan murni). Pengenalan bantuk atau morfologi mikroba, terutama yang tidak mempunyai butir warna harus dilakukan melalui pewarnaan, maka bentuk tersebut tidak akan teramati dengan jelas.

Pada pengamatan terhadap pewarnaan sederhana yang dilakukan untuk mengamati bentuk bakteri, menggunakan biakan murni Escherichia coli. Setelah melalui pengecatan, bakteri tersebut tidak terlihat bentuk, hanya terlihat dari warna yang digunakan yaitu warna biru. Warna biru tersebut adalah methylen blue sehingga bakteri nampak berwarna biru.

Pada pengamatan terhadap pewarnaan gram yang dilakukan terhadap mikroba, juga menggunakan mikroba biakan murni yaitu dari bakteri coli. Dari hasil pengamatan terlihat bahwa bakteri yang tampak terdiri atas dua macam yaitu dari jenis gram positif dan gram negatif. Hal ini diketahui dari warna yang ditimbulkan oleh kedua pengamatan tersebut, dimana pada gram positif warna yang ditimbulkan adalah warna merah, sedangkan pada gram negatif warna yang ditimbulkan adalah warna ungu. Pada gram positif terlihat adanya warna hitam yang disebabkan oleh tebaran bakteri yang tidak merata.

Hasil dari gram positif dan gram negatif ini disebabkan oleh perbedaan kandungan dinding sel bakteri, yaitu bahwa kandungan senyawa pepti doblikan pada dinding sel gram positif lebih tebal bila dibandingkan dengan gram negatif sehingga warna dari gram negatif dan bakteri pada gram positif berbeda.

Dalam proses pewarnaan, ada faktor-faktor penentu di dalam keberhasilan pewarnaan mikroba yaitu fiksasi, peluntur warna, sifat substrat, intensifikasi pewarnaan dan zat warna penutup. Hal ini patut mendapat perhatian ketika akan melakukan pewarnaan guna berhasilnya pengecatan terhadap mikroba yang akan diidentifikasi.

V. PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai berikut :

1. Pewarnaan sederhana hanya menggunakan satu jenis zat warna dan bakteri yang terlihat berwarna biru.

2. Pewarnaan gram terdiri dari gram positif yang berwarna ungu dan gram negatif berwarna merah.

B. Saran

Adapun saran saya yaitu agar asisten lebih memperhatikan praktikan dalam melakukan pengamatan agar kami memperoleh hasil yang lebih baik.

DAFTAR PUSTAKA

Pelczar, M. J., 1986. Mikrobiologi Kedokteran untuk Laboratorium dan Klinik. Gramedia. Jakarta.

Sutedja, M., 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta. Jakarta.

Winarno, F. G., 1985. Mikrobiologi. Angkasa. Bandung.


(Kultur Mikroba dan Tekhnik Isolasi )

Oleh :

Nama

: Adi Imam Wahyudi

Stambuk

: I1A1 08008

Kelompok

: V (Lima)




KENDARI

2009I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Pada umumnya mikroba yang hidup di alam terdapat dalam populasi campuran. Sangat jarang mikroba di alam dijumpai sebagai spesies yang tunggal. Dengan demikian, agar mikroba tersebut dapat diidentifikasikan, langkah pertama yang harus dilakukan yaitu spesies tersebut dipisahkan dari organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, kemudian ditumbuhkan menjadi biakan murni.

Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara lain digunakan dalam mengidentifikasikan mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu spesies.

Proses mendapatkan biakan murni dari suatu biakan campuran dengan cara memisahkan satu spesies dari spesies yang lain disebut isolasi. Pada dasarnya metode-metode pemisahan menjadi satu spesies mempunyai prinsip sama yaitu mengencerkan mikroba tersebut sehingga diperoleh satu spesies yang terpisah. Setiap koloni yang terpisah yang tampak dalam cawan Petri berasal dari satu sel, metode yang biasa dilakukan untuk memperoleh biakan murni adalah tekhnik cawan gores (Streak plate) dan cawan tuang (Pour plate).


Tujuan dari praktikum kali ini adalah untuk mendapatkan biakan murni dari suatu campuran mikroba.

Sedangkan manfaat dari praktikum ini adalah kita dapat mengetahui proses biakan murni dari suatu biakan campuran atau disebut dengan tekhnik isolasi.


Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Sutedjo, 1991).

Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode cawan gores dan metode cawan tuang. Yang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu. Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat diamati (Hadioetomo, 1985).

Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara lain digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu spesies (Tim Pengasuh Mata Kuliah, 2006).

Bakteri yang memiliki flagella sering kali membentuk koloni yang menyebar terutama jika menggunakan lempengan agar basah, untuk mencegah menyebarnya koloni maka harus digunakan agar benar-benar kering (Dwijoseputro, 1994).

II. METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Jumat, 10 November 2006 pada pukul 09.00 WITA sampai selesai. Kemudian dilanjutkan pada hari Selasa, 14 November 2006 pukul 14.00 WITA sampai selesai dan pada hari Rabu, 15 November 2006 pukul 14.00 WITA sampai selesai, bertempat di Laboratorium Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Haluoleo, Kendari.

B. Alat dan Bahan


1. Cawan Petri

2. Lampu Bunsen

3. Jarum ose

4. Gelas aqua

5. Mikroskop

Sedangkan bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah sebagai berikut:

1. Media NA

2. Media PDA

3. Air kolam

C. Prosedur Kerja

Prosedur kerja praktikum kali ini adalah sebagai berikut :

a. Metode Cawan Gores (Streak plate)

1. Mencairkan media NA dan PDA dengan penangas air.

2. Menuangkan ke dalam cawan petri steril secara aseptik.

3. Membuat suspensi dari bahan yang diamati.

4. Mengambil satu ose suspensi dan menggoreskannya pada cawan petri yang sudah berisi media.

5. Memberikan etiket (dengan cara menuliskan nomor kelompok, nomor kegiatan dan tanggal pelaksanaan praktikum dan menginkubasikan pada temperatur yang sesuai).

6. Memilih satu koloni yang berbeda, baik warna maupun strukturnya.

7. Mengambilkan sedikit dari koloni-koloni tersebut dengan jarum ose dan mensuspensikan ke dalam air steril dan melakukan pengamatan mikroskopik.

8. Memindahkan masing-masing koloni pada agar miring, menginkubasikan pada temperatur yang sesuai selama 24-28 jam.

9. Melakukan kembali sseperti nomor 7.

10. Isolasi telah berhasil, apabila didalam suatu tabung hanya terdapat satu mikroba.

11. Melakukan pekarjaan secara aseptik.

b. Metode Cawan Tuang (Pour plate)

1. Mencairkan media NA atau PDA dengan penangas air dan mendinginkannya sampai 40-500 C.

2. Menginokulasikan 1 ml suspensi bahan yang akan diamati.

3. Melakukannya seperti diatas (pada prosedur cawan gores) pada nomor 5 sampai 11.

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Pengamatan

Adapun hasil pengamatan pada praktikum kali ini adalah sebagai berikut:

1. Penanaman I

2. Pengamatan

3. Pengamatan Mikroskop

Air tawar

Air laut

B. Pembahasan

Pada pengamatan tekhnik isolasi mikroba dengan menggunakan cawan gores, cawan petri yang berisi media NA dan PDA, disterilkan di atas lampu bunsen, begitu pula dengan jarum ose. Setelah jarum ose terlihat merah membara, kemudian dicelupkan ke dalam sampel air kolam dan digoreskan pada media NA dan PDA secara zig-zag. Hal ini dilakukan agar mikroba yang tumbuh pada media tersebut tidak hanya pada satu tempat saja. Cara penggoresannya tidak boleh terlalu dalam karena akan susah untuk mengambil mikroba yang sudah tumbuh pada media tersebut. Setelah itu, jarum ose disterilkan kembali di atas lampu bunsen. Kemudian media yang sudah digores tadi dimasukkan ke dalam oven, dan dibiarkan selam 24 jam agar mikrobanya tumbuh.

Setelah 24 jam, maka diadakan pengamatan dan dari pengamatan tersebut dapat kita lihat bahwa pada media yang telah digores tadi berwarna putih kapas dan putih susu. Ini menandakan bahwa pada media tersebut telah tumbuh koloni mikroba.

Kemudian pada pengamatan selanjutnya, kita mengambil koloni mikroba pada media tersebut dengan menggunakan jarum ose yang sudah disterilkan di atas lampu bunsen, dan melakukan pengamatan di bawah mikroskop.

Dari pengamatan yang dilakukan di bawah mikroskop, kita temukan beberapa jenis mikroba. Ada yang berbentuk seperti benang, batang bahkan ada yang mempunyai flagel.

Berdasarkan hasil pengamatan diperoleh jumlah koloni yang berbeda-beda. Hal ini disebabkan banyak faktor diantaranya masalah perbedaan cara penggoresan media. Media cawan gores ini dapat dikatakan berhasil karena sel-sel bakteri saling terpisahkan satu sama lainnya. Hal ini didukung oleh pernyataan Hadioetomo (1985) yang mengatakan bahwa bila menggunakan tekhnik penggoresan yang baik maka pada suatu area tertentu pada permukaan medium yang digores sel-sel bakteri akan terpisahkan satu dengan yang lainnya.

IV. PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa jenis mikroba yang didapat dari pengamatan di bawah mikroskop berbeda-beda bentuknya, dimana kita mendapatkan mikroba dengan bentuk seperti benang, batang bahkan ada yang mempunyai flagel.

B. Saran

Saran saya kiranya pada praktikum selanjutnya kita dapat menjaga ketertiban di dalam laboratorium dan pelaksanaan praktikum harus tepat waktu.

DAFTAR PUSTAKA

Dwijoseputro. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta.

Hadioetomo, R. S., 1985. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Gramedia. Jakarta.

Sutedjo. 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta. Jakarta.

Tim Pengasuh Mata Kuliah. 2009. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Akuatik. Jurusan Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Haluoleo. Kendari.

I. PENDAHULUAN

A. Latar BelakangSterilisasi adalah suatu proses dimana kegiatan ini bertujuan untuk membebaskan alat ataupun bahan dari berbagai macam mikroorganisme. Suatu bahan bisa dikatakan steril apabila bebas dari mikroorganisme hidup yang patogen maupun tidak baik dalam bentuk vegetatif walaupun bentuk nonvegetatif (spora). Cara aseptik adalah suatu cara kerja untuk mencegah terjadinya kontaminasi oleh mikroba atau unsur lain yang tidak dikehendaki.

Teknik aseptik dilaboratorium akan mempengaruhi keberhasilan percobaan dalam praktikum mikrobiologi terutama dalam hal mencegah tercemarnya suatu biakan sekaligus melindungi diri dari pencemaran mikroba terutama mikroba penyebab penyakit.

Sterilisasi yang umum digunakan ada tiga cara yaitu secara fisik, mekanik dan kimia. Sterilisasi fisik adalah sterilisasi dengan penggunaan panas basah dan panas kering. Sterilisasi mekanik adalah sterilisasi yang dilakukan pada suhu kamar dengan cara penyulingan. Streilisasi kimia adalah sterilisasi dengan menggunakan bahan kimia, bahan-bahan yang tidak dapat disterilkan pada suhu tinggi misalnya alkohol.B. Tujuan dan Kegunaan

Tujuan dari praktikum ini adalah memahami cara sterilisasi dan pekerjaan aseptik di labolatorium dan melatih mengerjakanproses sterilisasi dan aseptik dalam labolatorium.

Kegunaan dari praktikum ini adalah agar praktikan dapat mengetahui dan memahami serta menambah wawasan sehubungan dengan mikroskop

II. TINJAUAN PUSTAKASterilisasi adalah suatu proses dimana bertujuan untuk membebaskan alat ataupun bahan dari berbagai macam mikroorganisme. Suatu bahan bisa dikatakan steril apabila bebas dari mikroorganisme hidup yang patogen maupun tidak baik dalam bentuk vegetatif walaupun bentuk nonvegetatif (spora). Caracara sterilisasi adalah sebagai Secara fisis pemanasan basah, Secara mekanis dengan penyaringan, Secara fisis pemanasan kering, Secara kimia , Teknik aseptik. Teknik aseptik merupakan penyeterilan dengan teknik yang dapat memperkecil pencemaran bakteri pada alat dan bahan (Prayetno, 2008).Alat sterilisasi baik media maupun peralatan yang digunakan untuk proses isolasi dan penanaman eksplan yang sering digunakan adalah autoklaf. Tipe autoklaf yang dapat digunakan untuk sterilisasi ada bermacam-macam, mulai dari yang sederhana sampai digital (terprogram). Autoklaf yang sederhana menggunakan sumber uap dari pemanasan air yang ditambahkan ke dalam autoklaf. Pemanasan air dapat menggunakan kompor atau api Bunsen. Dengan autoklaf sederhana ini, tekanan dan temperatur diatur dengan jumlah panas dari api. Kelemahan autoklaf ini adalah bahwa perlu penjagaan dan pengaturan panas secara manual, selama masa sterilisasi dilakukan. Tetapi autoklaf ini mempunyai keuntungan: sederhana, harga relatif murah, tidak tergantung dari aliran listrik yang sering merupakan problema untuk negara-negara yang sedang berkembang, serta lebih cepat dari autoklaf listrik yang seukuran dan setaraf. Autoklaf yang lebih komplit menggunakan sumber energi dari listrik. Alatnya dilengkapi dengan timer dan thermostat. Bila pengatur automatis ini berjalan dengan baik. Maka autoklaf dapat dijalankan sambil mengerjakan pekerjaan lain. Kelemahannya adalah bila salah satu pengatur tidak bekerja, maka pekerjaan persiapan media menjadi sia-sia dan kemungkinan menyebabkan kerusakkan total pada autoklaf. Sebagai sumber uap, juga berasal dari air yang ditambahkan ke dalam autoklaf dan didihkan. Autoklaf gas atau listrik portable pada umumnya mempergunakan sumber uap dari pemanasan air yang ditambahkan ke dalam autoklaf, sedangkan autoklaf besar pada laboratorium komersil pada umumnya menggunakan uap dari boiler sentral (Anonim, 2008).

Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses pembebasan alat, bahan kimia dari semua organisme baik yang bersifat patogen maupun yang bersifat non patogen. Sedangkan cara aseptik adalah suatu kerja untuk mencegah terjadinya kontaminasi oleh mikroba atau unsur lain yang tidak dikehendaki. Sterilisasi yang umum digunakan ada tiga cara yaitu secara fisik, mekanik dan kimia. Sterilisasi fisik adalah sterilisasi dengan penggunaan panas basah yaitu apabila panas yang digunakan bersama-sama dengan uap air dan alat yang umum digunakan dengan autoclave dan panas kering yaitu apabila panas yang digunakan tanpa kelembaban dan yang umum digunkan adalah oven dan lampu bunsen. Sterilisasi mekanik adalah sterilisasi yang dilakukan pada suhu kamar dengan cara penyulingan. Streilisasi kimia adalah sterilisasi dengan menggunakan bahan kimia, bahan-bahan yang tidak dapat disterilkan pada suhu tinggi misalnya alkohol (Nur, dkk., 2007).

Sterilisasi adalah proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan. Suatu benda yang steril dipandang dari sudut mikrobiologi artinya bebas dari mikroorganisme hidup. Suatu benda atau substansi hanya dapat steril atau tidak steril tidak akan pernah setengah steril atau hampir steril (Michael, 1988).III. METODE PRAKTIKUM

A. Waktu dan Tempat

Praktikum ini dilaksanakan pada hari Jumat tanggal 24 oktober 2008 pada pukul 13.30-15.30 WITA, bertempat di Laboratorium A Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Haluoleo Kendari.

B. Alat dan Bahan

Alat dan bahan yang digunakan pada praktikum ini dapat dilihat pada tabel 2 berikut ini :

Tabel 2. Alat dan Bahan beserta kegunaannya pada praktikum sterilisasi dan teknik aseptikNo. Alat dan Bahan Fungsinya

A.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

B.

1

2Alat :

Kaca penutup

Kaca objek

Buku gambar

Pensil

Jarum ose

Lap halus

Lampu bunsen

Tabung reaksi

Cawan petri

Autoklaf

Bahan :

Alkohol

AquadesUntuk menutup objek yang diamati

Untuk menyimpan objek yang diamati

Untuk menggambar

Untuk menulis

Untuk penanaman jamur dan bakteri

Untuk membersihkan alat

Untuk memanaskan alat yang berisi jamur dan bakteri

Untuk tempat memanaskan jamur dan mikroba

Untuk menyimpan penanaman jamur dan bakteri

Untuk mensterilkan benda yang berisi jamur dan bakteri.

Untuk membersihkan tangan dari jamur dan bakteri

Untuk mencuci alat sterilisasi

C.Prosedur Kerja

Prosedur kerja yang dilakukan pada praktikum ini adalah sebagai berikut :

Membersihkan alat sterilisasi dari debu

Menggambar alat sterilisasi (autokalaf)

Menulis bagian-bagian autoklaf beserta kegunaannya

Menggambar lampu Bunsen, cawan petri, tabung reaksi dan jarum ose.


A. Hasil Pengamatan

Gambar 2. Autoklaf

Keterangan :

1. Tombol on/off

2. Skrup penguapan

3. Pengunci tutup

4. Penutup

5. Wadah

6. Pengukur tekanan

7. Pegangan penutupGambar 3. Cawan Perti

Gambar 4. Jarum Ose

Gambar 5. Lampu Bunsen

Gambar 6. Tabung Reaksi

Gambar 7. Kaca Objek

B. Pembahasan

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membebaskan alat ataupun bahan dari berbagai macam mikroorganisme. Suatu bahan bisa dikatakan steril apabila bebas dari mikroorganisme hidup yang patogen maupun tidak baik dalam bentuk vegetatif walaupun bentuk nonvegetatif (spora). Cara-cara sterilisasi terdiri atas cara fisis pemanasan basah, cara mekanis dengan penyaringan, cara fisis pemanasan kering, cara kimia , teknik aseptik.

Cara fisis pemanasan basah terbagi dua yaitu pemanasan dengan autoclave dan pemanasan bakterisida. Pemanasan dengan autoklaf yaitu alat ini terdiri dari suatu tempat yang tahan terhadap tekanan tinggi yang dilengkapi dengan barometer termometer dan klep. Cara menggunakan autoclave isilah tempat air dengan air sampai angsang kemudian dimasukan alat atau bahan kedalam autoclave. Atur kran pengatur tempat keluar air ditutup sehingga tekanan uap didalam otoklaf mencapai 2 atm dan suhu 121C dan biarkan sterilisasi berlangsung 1530 menit. Untuk sediaan obat steril yang volumenya kurang dari 100ml dilakukan sterilisasi 115-116C selama 30 menit sedangkan untuk sediaan yang volumenya lebih dari 100 ml dilakukan sterilisasi dilakukan sampai seluruh isi berada dalam suhu 115-116C dengan waktu 30 menit. Setelah sterilisasi selesai biarkan otoklaf sampai dingin sampai tekanan menunjukan angka 0 kemudian kran pengatur dibuka dan terakhir tutup bejana dibuka. Sedangkan Pemanasan bakterisida yaitu cara ini dilakukan dengan cara melarutkan atau mensuspensi bahan obat dalam air proinjeksi dan ditambah Klorkresol 0,2% b/v atau larutan bakterisida yang lain lalu diisikan dalam wadah kedap. Untuk volume kurang dari 30 ml dipanasi pada suhu 98C sampai 100C selama 30 menit.Cara mekanik dengan penyaringan yaitu larutan disaring dengan penyaring bakteri steril dan diisikan ke dalam wadah yang steril dan tertutup kedap. Macammacam penyaring bakteri adalah Filter gelas G5, Filter asbes, Filter Seitz, Filter berkefeld, Filter MandlerCara fisis pemanasan kering yaitu alat yang digunakan berupa oven. Suhu yang digunakan pada sterilisasi adalah 170o180oC paling sedikit selama 2 jam.Cara kimia dengan menggunakan formaldehida dalam bentuk gas dan menggunakan etilen oksida dalam bentuk gas dalam bentuk campuran 10% etilen oksida dengan 90% gas Co2. Sedangkan cara teknik aseptik merupakan cara penyeterilan dengan teknik yang dapat memperkecil pencemara bakteri pada alat dan bahan. Hal ini sesuai dengan pernyataan Nur (2007) yang menyatakan bahwa sterilisasi yang umum digunakan ada tiga cara yaitu secara fisik, mekanik dan kimia. Sterilisasi fisik adalah sterilissi dengan menggunakan panas yang dibadakan atas panas basah dan panas kering. Sterilissi mekanik adalah sterilisasi yang dilakukan pada suhu kamar dengan cara penyulingan. Sterilisasi kimia adalah sterilisasi dengan menggunakan bahan kimia dimana sterilisasi ini menggunakan untuk bhan-bahan yang tidak dapat disterilkan pada suhu tinggi mislnya alkohol.

Alat yang sering digunakan dalam sterilisasi adalah autoclave. Tipe autoklaf yang dapat digunakan untuk sterilisasi ada bermacam-macam, mulai dari yang sederhana sampai digital (terprogram). Autoklaf yang sederhana menggunakan sumber uap dari pemanasan air yang ditambahkan ke dalam autoklaf. Pemanasan air dapat menggunakan kompor atau api Bunsen. Dengan autoklaf sederhana ini, tekanan dan temperatur diatur dengan jumlah panas dari api. Kelemahan autoklaf ini adalah bahwa perlu penjagaan dan pengaturan panas secara manual, selama masa sterilisasi dilakukan. Tetapi autoklaf ini mempunyai keuntungan: sederhana, harga relatif murah, tidak tergantung dari aliran listrik yang sering merupakan problema untuk negara-negara yang sedang berkembang, serta lebih cepat dari autoklaf listrik yang seukuran dan setaraf. Bagian-bagian dari autoclave adalah panci luar, panci dalam tempat meletakkan botol dengan alur tempat saluran uap, tutup beserta penunjuk tekanan dan saluran uap, katup pengeluaran uap, pengunci atau klem.

V. SIMPULAN DAN SARANA. Simpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan di atas maka dapat ditarik simpulan sebagai berikut :

Sterilisasi adalah suatu proses pembebasan alat, bahan kimia atau makanan dari semua organisme baik yang bersifat patogen maupun yang non patogen. Sedangkan cara aseptik adalah suatu cara kerja untuk mencegah terjadinya kontaminasi oleh mikroba atau unsur lain yang tidak dikehendaki.

B. SaranSebagai praktikan mengharapkan agar saat praktikum berlangsung diharapkan untuk tertib dalam melakukan praktek.

DAFTAR PUSTAKAAnonim,2008.Sterilisasi.http://elearning.unram.ac.id/KulJar/BAB%20IV%20STERILISASI/IV2%20Sterilisasi%20Alat.htm. Diakses pada tanggal (28-10-2008) Pukul 14.00 hari Selasa.

Nur dan Asnani., 2007. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Akuatik. Universitas Haluoleo. Kendari.Michael, 1988, Dasar-Dasar Mikrobiologi, Universitas Indonesia, Jakarta.

Prayetno,2008.http://dprayetno.wordpress.com/sterilisasi/.Diakses pada tanggal (28-10-2008) Pukul 14.00 hari Selasa.

laporan praktikum mikrobiologi akuatik

Documents