laporan mikro koefisien fenol dan alt

5/19/2018 Laporan Mikro Koefisien Fenol Dan Alt

1/14

LAPORAN

MIKROBIOLOGI

KOEFISIEN FENOL

DANANGKA LEMPENG TOTAL BAKTERI

Dwi juliansyah 31112076

Elis Mustikawati 31112077Endang Ferawati 31112078

Eva Jayanti 31112079

Erlinda asmarani 31112080

Farmasi 3 B

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

STIKes BAKTI TUNAS HUSADA

2014

KOEFISIEN FENOL

I. Tujuan : untuk mengevaluasi daya anti mikroba suatu antiseptik dengan memperkirakan

potensi dan efektifitas antiseptik berdasarkan konsentrasi dan lamanya kontak

terhadap kuman dan membandingkannya terhadap fenol standar


2/14

II. Prinsip percobaan: terjadi kekeruhan dalam tabung yang menunjukan adanya pertumbuhan

bakteri, dihubungkan dengan waktu kontak bakteri dengan zat dan konsentrasi

zat melaui serangkaian pengenceran

III. Dasar teori

3.1 Definisi koefisien fenol

Koefisien fenol atau angka fenol adalah suatu angka yang menunjukan aktivitas

larutan disinfektan dalam membunuh mikroorganisme jika dibandingkan dengan fenol

sebagai standar.

Koefisien fenol dinyatakan sebagai suatu bilangan, yang dihitung dengan cara

membandingkan aktivitas larutan bahan disinfektan dengan pengenceran tertentu

dan aktifitas larutan fenol dengan pengenceran baku.

Koefisien fenol adalah perbandingan tingkat pengenceran setiap bahan yang diuji

(fenol dan bahan disinfektan uji) yang tidak mematikan bakteri uji dalam waktu 5

menit, tetapi mematikan bakteri uji dalam waktu 10 menit.

3.2

Disinfektan atau antiseptik

Desinfektan didefinisikan sebagai bahan kimia atau pengaruh fisika yang

digunakan untuk mencegah terjadinya infeksi atau pencemaran jasad renik seperti

bakteri dan virus, juga untuk membunuh atau menurunkan jumlah mikroorganisme

atau kuman penyakit lainnya. Sedangkan antiseptik didefinisikan sebagai bahan kimia

yang dapat menghambat atau membunuh pertumbuhan jasad renik seperti bakteri,

jamur dan lain-lain pada jaringan hidup. Bahan desinfektan dapat digunakan untuk

proses desinfeksi tangan, lantai, ruangan, peralatan dan pakaian (Rismana, 2008).

Pada dasarnya ada persamaan jenis bahan kimia yang digunakan sebagai antiseptik

dan desinfektan. Tapi tidak semua bahan desinfektan adalah bahan antiseptik karena

adanya batasan dalam penggunaan antiseptik. Antiseptik tersebut harus memilikisifat tidak merusak jaringan tubuh atau tidak bersifat keras. Terkadang penambahan

bahan desinfektan juga dijadikan sebagai salah satu cara dalam proses sterilisasi,

yaitu proses pembebasan kuman. Tetapi pada kenyataannya tidak semua bahan

desinfektan dapat berfungsi sebagai bahan dalam proses sterilisasi.Walaupun kita

sering menggunakan produk desinfektan, sebagian besar konsumen tentunya belum

mengenal jenis bahan kimia apa yang ada dalam produk tersebut. Padahal bahan kimia

tertentu merupakan zat aktif dalam proses desinfeksi dan sangat menentukan

efektivitas dan fungsi serta target mikroorganime yang akan dimatikan (Rismana,

2008).

Beberapa jenis disinfektan yang dapat digunakan adalah:

a.

Fenol dan senyawa fenolikb. Bis fenol

c. Golongan biguaniida

d. Golongan halogen

e. Golongan alkohol

f.

Logam berat dan campuranya

g. Surfaktan

h. Quat

i. Bahan pengawet

j. Golongan aldehid

k.

Gas khemostrerilisator danl. Golongan pengoksigen


3/14

3.3 Fenol

Fenol memiliki kelarutan terbatas dalam air, yakni 8,3 gram/100 ml. Fenol

memiliki sifat yang cenderung asam, artinya dapat melepaskan ion H+ dari gugus

hidroksilnya. Pengeluaran ion tersebut menjadikan anion fenoksida C6H5O yang

dapat dilarutkan dalam air (Aditya, 2009).

Fenol sekarang jarang digunakan sebagai disinfektan karena mengiritasi kulit danmemiliki bau yangtidak disukai, fenol terkadang digunakan sebagi antiseptik lokal

utuk pelega teggorokan, tetapi sedikit mempunyai efek sebagai antimikroba

padakonsistensi rendah. Pada konsentrasi 1% fenol mempunyai efek antibakteri yang

signifikan.

Disinfektan yang mengandung derivat fenol disebut fenolik, yaitu disinfektan

yang mengandung molekul fenol yang telah dimodifikasi sedemikian rupa secara kimia

untuk menurunkan efek iritasinya atau menambah efek antibakterinya dikombinasi

dengan sabun atau detergen. Fenolik memiliki efek anti mikroba dengan cara merusak

membran plasma yang mengandung lipid sehingga terjadi lisis sel yang berakibat isi

sel keluar. Dinding sel mikobakteri, penyebab tuberkulosis dan lepra, mengandung

lipid yang tinggi sehingga bakteri ini sangat sensitif terhadap fenolik. Selain itu

laruta fenlik tetap aktif dalam bahan organik serta stabil dan bertahan lama setelah

penggunaan. Slah satu fenolik yang sering digunakan adalah kresol, yaitu bahan utama

formula lisol.

Bisfenol

Bisfenol adalah derivat fenol yang mengandung dua fenolik. Salah satu contoh

bisfenol adalah heksaklorofen. Bis fenol lain yang sering digunakan adalah triklosan

yangmerupakan bahan yang terkandung adalam sabun antiseptik dan pasta gigi.

Trikklosan menghambat enzimeyang dibuthkan untuk biosintesis asam lemak sehingga

menunjukan efek terhadap keutuhn membran plasma. Triklosan efektif terutama

terhadap bakteri gram positif, tetapi juga bekerja dengan baik untuk jamur danbakteri gram negatif

Dengan perrsetujuan para ahli dan penelitian, fenol dijadikan standar pembanding

untuk menentukan aktivitas suatu disinfektan.

Golongan alkohol

Golongan alkohol merupakan bahan yang banyak digunakan selain golongan aldehid.

Beberapa bahan di antaranya adalah etanol, propanol dan isopropanol. Golongan

alkohol bekerja dengan mekanisme denaturasi serta berdaya aksi dalam rentang

detik hingga menit dan untuk virus diperlukan waktu di atas 30 menit. Umum dibuat

dalam campuran air pada konsentrasi 70-90 %. Golongan alkohol ini tidak efektif

untuk bakteri berspora serta kurang efektif bagi virus non-lipoid. Penggunaan pada

proses desinfeksi adalah untuk permukaan yang kecil, tangan dan kulit. Adapunkeunggulan golongan alkohol ini adalah sifatnya yangn stabil, tidak merusak material,

dapat dibiodegradasi, kadang cocok untuk kulit dan hanya sedikit menurun aktivasinya

bila berinteraksi dengan protein. Sedangkan beberapa kerugiannya adalah berisiko

tinggi terhadap api/ledakan dan sangat cepat menguap (Rismana, 2008).

3.4 Median Nutrient Broth

Komposisi Nutrient Broth 13 gram-1L

- Lab lem-co powder 1

-

Yeast extract 2- Pepton 5

- Sodium chloride 5


4/14

3.5 Bakteri Streptococcus aureus

Staphylococcus aureus(S. aureus) adalahbakteri gram positifyang menghasilkan

pigmen kuning, bersifat aerob fakultatif, tidak menghasilkanspora dan tidak motil,

umumnya tumbuh berpasangan maupun berkelompok, dengan diameter sekitar 0,8-1,0

m. S. aureus tumbuh dengan optimum pada suhu 37oC dengan waktu pembelahan

0,47 jam. S. aureusmerupakanmikroflora normal manusia. Bakteri ini biasanya

terdapat pada saluran pernapasan atas dan kulit. Keberadaan S. aureuspada saluran

pernapasan atas dan kulit pada individu jarang menyebabkan penyakit, individu sehatbiasanya hanya berperan sebagai karier. Infeksi serius akan terjadi ketika resistensi

inang melemah karena adanya perubahan hormon; adanya penyakit, luka, atau

perlakuan menggunakansteroid atau obat lain yang memengaruhi imunitas sehingga

terjadi pelemahan inang.

Infeksi S. aureusdiasosiasikan dengan beberapa kondisi patologi, diantaranya

bisul,jerawat,pneumonia,meningitis, danarthritits. Sebagian besar penyakit yang

disebabkan oleh bakteri ini memproduksi nanah, oleh karena itu bakteri ini disebut

piogenik. S. aureus juga menghasilkankatalase, yaitu enzim yang mengkonversi

H2O2menjadi H2O dan O2, dankoagulase, enzim yang

menyebabkanfibrinberkoagulasi dan menggumpal. Koagulase diasosiasikan denganpatogenitas karena penggumpalan fibrin yang disebabkan oleh enzim ini terakumulasi

di sekitar bakteri sehingga agen pelindung inang kesulitan mencapai bakteri

danfagositosis terhambat.

IV. Alat dan bahan

Bahan

Median Nutrient Broth

Bakteri Streptococcus aureus

NaCl fisiologis

Sampel Antiseptik ( Dettol)

Fenol

Alat

Domain: Bacteria

Kerajaan: Eubacteria

Filum: Firmicutes

Kelas: Bacilli

Ordo: Bacillales

Famili: Staphylococcaceae

Genus: Staphylococcus

Spesies: S. aureus
http://id.wikipedia.org/wiki/Bakteri_gram_positifhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sporahttp://id.wikipedia.org/wiki/Mikroflora_normal_manusiahttp://id.wikipedia.org/wiki/Steroidhttp://id.wikipedia.org/wiki/Jerawathttp://id.wikipedia.org/wiki/Pneumoniahttp://id.wikipedia.org/wiki/Meningitishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Arthritits&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Katalase&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Koagulase&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Fibrinhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fagositosishttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Firmicutes&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Firmicutes&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacilli&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacilli&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacillales&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacillales&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Staphylococcaceae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Staphylococcaceae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Staphylococcushttp://id.wikipedia.org/wiki/Staphylococcushttp://id.wikipedia.org/wiki/Staphylococcushttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Staphylococcaceae&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacillales&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bacilli&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Firmicutes&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttp://id.wikipedia.org/wiki/Fagositosishttp://id.wikipedia.org/wiki/Fibrinhttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Koagulase&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Katalase&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Arthritits&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Meningitishttp://id.wikipedia.org/wiki/Pneumoniahttp://id.wikipedia.org/wiki/Jerawathttp://id.wikipedia.org/wiki/Steroidhttp://id.wikipedia.org/wiki/Mikroflora_normal_manusiahttp://id.wikipedia.org/wiki/Sporahttp://id.wikipedia.org/wiki/Bakteri_gram_positif


5/14

Tabung reaksi

ose

kasa dan kapas

benang kasur

kertas payung

spirtus

mikropipet

labu ukur

V. Prosedur

VI. Data pengamatan dan perhitungan

No Perlakuan Lama kontak

5 10 15

1 Fenol 1:80 + - -

2 Antiseptik 1:80 + - -

3 Antiseptik 1:100 + - -

4 Antiseptik 1:150 + + -

Keterangan:

( + ) : tidak ada pertumbuhan bakteri( - ) : ada pertumbuhan bakteri

Pembuatan inkulum bakteri S. aureus dengan

2 mL NaCl dan distarakan dengan pembanding

McFarland

Innokulum bakteri di maukan ke dalam fenol 1:80, dan ke dalam masing masing

disinfektan hasil pengenceran, masing-masing sebanyak 0,5 mL. Kemudian diberitanda tiap tiap tabung tersebut.

Dan di pindahkan kedalam media setelah waktu kontak bakteri dengan

fenol da disinfektan mencapai 5 menit, 10 menit dan 15 menit.

Pembuatan laruta baku fenol 1:20 dan 1:80.

Dibuat larutan disinfektan dengan konsentrasi 1/10 dengan cara dipipet

sebanyak 1 mL disinfektan kemudian dimasukan kedalam tabung reaksi dan

ditambah aquades sebanyak 9 mL. Dan disinfektan 1:80 dipipet senyak 0,5

mL, disinfektan 1:100 dipipet sebanyak 0,5 mL dan 1:150 juga dipipet

senyak 0,5 mL


6/14

Perhitungan koefisien fenol:

Koefisien fenol =

=

= 1

VII. Pembahasan

Pada praktikum kali ini yaitu mengenai koefisien fenol dari suatu bahan antiseptik

yaitu Dettol handsanitizer gel. Zat-zat antimikroba yang dipergunakan untuk

disinfeksi/antiseptik harus diuji keefektifannya. Cara menentukan daya sterilisasi zat-zat

tersebut adalah dengan melakukan tes koefisien fenol. Uji ini dilakukan untuk

membandingkan aktivitas suatu produk (antiseptik) dengan daya bunuh fenol dalam kondisi

tes yang sama. Tujuan dari uji koefisien fenol adalah untuk mengevaluasi daya anti

mikroba suatu desinfektan dengan memperkirakan potensi dan efektifitas desinfektan

berdasarkan konsentrasi dan lamanya kontak terhadap kuman dan membandingkannya

terhadap fenol standard yang disebut koefisien fenol. Fenol dijadikan pembanding karena

fenol sering digunakan untuk mamatikan mikroorganisme.Dalam melakukan pengujian mikrobiologi dipastikan semua alat dan bahan sudah

disterilisasi terlebih dahulu. Sampel yang digunakan juga harus dijaga sterilannya dari

wadahnya sampai ketika akan digunakan. Bakteri yang digunakan yaitu Streptococcus

aureus. Media yang digunakan yaitu media cair Nutrient Broth.

Hal pertama yang dilakukan yaitu membuat inokulum bakteri, sebanyak 1 ose

koloni bakteri uji diinokulasi dalam larutan NaCl fisiologis 0,9 % sebanyak 2 mL.

Kekeruhan di seragamkan dengan menggunakan standar McFariand dibuat dengan cara

BaCl21 % ditambah dengan H2SO42 N dengan perbandingan 1:9.

Kemudian dibuat pengenceran fenol dengan aquades steril 1:80, dan pengenceran

antiseptik Dettol 1:80, 1:100, 1:150. Dan dimasukan bakteri masing-masing sebanyak 0,5

mL dan di hitung lamanya kontak pada menit ke 5, 10, dan 15, yang kemudian diambil 1 ose

pada media Nutrient Broth untuk diinkubasi dan dilihat pertumbuhan bakterinya.

Perbandingan pengenceran ini dibuat agar dapat diketahui pada menit keberapa sampel

antiseptik tersebut dapat membunuh bakteri Streptococcus aureus.

Berdasarkan hasil pengamatan pada pengenceran fenol 1:80 dan pada pengenceran

antiseptik 1:80, dan 1:100 mempunyai aktivitas yang sama yaitu dapat mematikan pada

waktu 5 menit dan tidak dapat mematikan pada waktu 10 dan 15 menit. Sehingga

efektivitas senyawa antiseptik sangat dipengaruhi oleh konsentrasi dan lama paparannya.

Semakin tinggi konsentrasi dan semakin lama paparan akan meningkatkan efektivitas

senyawa antiseptik.

Formula Dettol handsanitizer gel terdiri dari:

1. Alcohol 60% (Antiseptik),

2. Alcohol denat (Astringent)

3. PEG/PPG-17116 copolymer (Thickening agent)

4. Propylenglikol (Humektan)

5. Acrylates alkyl Acrylates (Emulifiying agent)

6. Cross Polymer Tetrahydroxypropyl ethylenediamme (Chelating agent)

7. Parfume (Pewangi)

8. Limunene (Flavoring agent)

9. Water (Pelarut)

Golongan alkohol bekerja dengan mekanisme denaturasi serta berdaya aksi dalamrentang detik hingga menit dan untuk virus diperlukan waktu di atas 30 menit. Umum


7/14

dibuat dalam campuran air pada konsentrasi 70-90 %. Namun golongan alkohol ini tidak

efektif untuk bakteri berspora serta kurang efektif bagi virus non-lipoid. Penggunaan

pada proses desinfeksi adalah untuk permukaan yang kecil, tangan dan kulit. Adapun

keunggulan golongan alkohol ini adalah sifatnya yangn stabil, tidak merusak material,

dapat dibiodegradasi, kadang cocok untuk kulit dan hanya sedikit menurun aktivasinya

bila berinteraksi dengan protein.Anthony, dkk. (2004), juga berpendapat bahwa hand sanitizer yang mengandung

alkohol lebih efektif dibandingkan dengan sabun antibakteri. Hernandes, dkk. (2004),

berpendapat bahwa hand sanitizer yang mengandung etanol lebih efektif dibandingkan

dengan sabun cair.

Sehingga dari hasil pengamatan ini diambil data yang aktivitasnya sama, dan

pengencerannya mendekati yaitu Fenol 1:80 dan Antiseptik 1:80, sehingga hasil

koefisien fenol yang didapat adalah 1. Maka sampel antiseptik dettol memiliki potensi

yang sama sebagai agen bakterisidal dengan fenol.

VIII. Kesimpulan

Hand sanitizer Dettol memiliki angka koefisien fenol sebesar 1. Maka sampel

antiseptik Dettol memiliki potensi yang sama sebagai agen bakterisidal dengan fenol

IX. Daftar Pustaka

http://bojanindonesia.wordpress.com/2012/05/11/hand-sanitizer/ [diakses pada tanggal

12 November 2014]Pratiwi, S. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta:Erlangga.

Elizabeth, Rosdiana dkk. Jurnal penelitian : Uji Efektivitas Pada Antiseptik Di Unit

Perinatologi Rumah Sakit Umum Abdul Moeloek Bandar Lampung

Radji, Maksum,2011. Mikrobiologi panduan mahasiswa farmasi dan kedokteran. Jakarta:

penerbit buku kedokteran EGC
http://bojanindonesia.wordpress.com/2012/05/11/hand-sanitizer/http://bojanindonesia.wordpress.com/2012/05/11/hand-sanitizer/


8/14

X. Dokumentasi

Penyetaraan inokulum

bakteri dengan

pembanding

McFarland

Pengenceran

fenol 1: 20 dan

1: 80

Sampel uji telah

ditanam di media

Nutrient broth

Disinfektan

pengenceran 1:80

Fenol pengenceran

1:80

disinfektan

pengenceran 1:100

disinfektan

pengenceran 1:150


9/14

ANGKA LEMPENG TOTAL

I. Tujuan : menetapkan bakteri pada sediaan farmasi obat loss Vitamin C IPI

II. Prinsip percobaan :pertumbuhan bakteri aerob setelah sampel diinokulasi pada medium agar

lempeng dengan cara cawan tuang atau cawan sebar diinkubasi pada suhu

yang sesuai

III. Dasar teori

3.1 Definisi Angka Lempeng Total

Metode kuantitatif digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba yang ada

pada suatu sampel, umumnya dikenal dengan Angka Lempeng Total (ALT). Uji Angka

Lempeng Total (ALT) dan lebih tepatnya ALT aerob mesofil atau anaerob mesofil

menggunakan media padat dengan hasil akhir berupa koloni yang dapat diamati secara

visual berupa angka dalam koloni(cfu) per ml/gram atau koloni/100ml. Cara yang

digunakan antara lain dengan cara tuang, cara tetes, dan cara sebar (BPOM, 2008).

Prinsip pengujian Angka Lempeng Total menurut Metode Analisis

Mikrobiologi (MA PPOM 61/MIK/06) yaitu pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil

setelah cuplikan diinokulasikan pada media lempeng agar dengan cara tuang dan

diinkubasi pada suhu yang sesuai. Pada pengujan Angka Lempeng Total digunakan PDF

(Pepton Dilution Fluid) sebagai pengencer sampel dan menggunakan PCA (Plate Count

Agar) sebagai media padatnya. Digunakan juga memperoleh sekurang-kurangnya satu

cawan yang mengandung koloni dalam jumlah yang memenuhi syarat tersebut maka

harus dilakukan sederatan pengenceran dan pencawanan. Jumlah organisme yang

terdapat dalam sampel asal ditentukan dengan mengalikan jumlah koloni yang

terbentuk dengan faktor pengenceran pada cawan yang bersangkutan. Cara ini yang

paling umum digunakan untuk perhitungan jumlah mikrobia. Dasarnya ialah membuatsuatu seri pengenceran bahan dengan kelipatan 10 dari masing-masing pengenceran

diambil 1 cc dan dibuat taburan dalam petridish (pour plate) dengan medium agar

yang macam caranya tergantung pada macamnya mikrobia. Setelah diinkubasikan

dihitung jumlah koloni tiap petridish dapat ditentukan jumlah bakteri tiap cc atau

gram contoh, yaitu dengan mengalikan jumlah koloni dengan kebalikan

pengencerannya, misalnya untuk pengenceran 1:10.000 terdapat 45 koloni bakteri

maka tiap cc atau gram bahan mengandung 450.000 bakteri. Untuk membantu

menghitung jumlah koloni dalam petridish dapat digunakan colony counter yang

biasanya dilengkapi electronic register. Menurut Jutono, dkk., (1973), perhitungan

dengan cara ini diperlukan beberapa syarat yang harus dipenuhi yaitu:

1. Jumlah bakteri tiap petridish antara 30-300 koloni, jika memang tidak ada yangmemenuhi syarat dipilih yang jumlahnya mendekati 300.

2. Tidak ada koloni yang menutup lebih besar dari setengah luas petridish, koloni

tersebut dikenal sebagai spreader.

3. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka pertama didepan koma

dan angka kedua dibelakang koma.

4. Jika semua pengenceran yang dibuat menghasilkan angka kurang 30 koloni pada cawan

petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran terendah yang dihitung. Hasil dilaporkan

sebagai kurang dari 30 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang

sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung.


10/14

5. Jika semua pengenceran yang dibuat menghasilkan lebih dari 300 koloni pada cawan

petri, hanya koloni pada pengenceran tertinggi yang dihitung. Hasilnya dilaporkan

sebagai lebih besar dari 300 dikalikan dengan besarnya pengenceran, jumlah yang

sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung.

6. Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan jumlah antara30 dan 300, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua

pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan 2 maka tentukan rata-rata dari

kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan pengencerannya. Jika perbandingan

antara hasil tertinggi dan terendah lebih besar dari 2, yang dilaporkan hanya hasil

yang terkecil.

3.2 Keuntungan dan Kelemahan Uji Angka Lempeng Total

Keuntungan dari metode pertumbuhan agar atau metode uji Angka Lempeng Total

adalah dapat mengetahui jumlah mikroba yang dominan. Keuntungan lainnya dapat

diketahui adanya mikroba jenis lain yang terdapat alam contoh. Adapun kelemahan

dari metode ini menurut Buckle (1987), adalah:1. Kemungkinan terjadinya koloni yang berasal lebih dari satu sel mikroba,seperti

pada mikroba yang berpasangan, rantai atau kelompok sel. Kemungkinan ini akan

memperkecil jumlah sel mikroba yang sebenarnya.

2. Kemungkinan adanya jenis mikroba yang tidak dapat tumbuh karena penggunaan

jenis media agar, suhu, pH, atau kandungan oksigen selama masa inkubasi.

3. Koloni dari beberapa mikroorganisme terutama dari contoh bahan pangan, kadang-

kadang menyebar di permukaan media agar, sehingga menutupi pertumbuhan dan

perhitungan jenis mikroba lainnya .

4. Penghitungan dilakukan pada media agar yang jumlah populasi mikrobanya antara

30300 koloni. Bila jumlah populasi kurang dari 30 koloni akan menghasilkan

penghitungan yang kurang teliti secara statistik, namun bila lebih dari 300 koloni

akan menghasilkan hal yang sama karena terjadi persaingan diantara koloni.

5. Penghitungan populasi mikroba dapat dilakukan setelah masa inkubasi yang

umumnya membutuhkan waktu 24 jam atau lebih.

IV. Alat dan Bahan

cawan petri

vialgelas ukur 10 ml

labu ukur

tabung reaksi

rak tabungsprirtus

pipet

Nutrient Broth

Obat loss : vitamin C

V. Prosedur

Disiapkan 5 tabung

reaksi atau lebih

masing-masing telah diisi

dengan 9 ml larutan

pengencer NaCl

fisiologis

Dari hasil homogenisasi sampel pada

persiapan sampel yang merupakan

pengenceran 10-1dipipet 1 ml kedalam

tabung yang pertama dikocok sampai

homogeny hingga diperoleh pengenceran

10-1


11/14

VI. Hasil pengamatan

10-1 = 300 x 10

10-2= 300 x 100

10-3= -

10-4 = 2 x 10.000

10-5 = -

= 17.666,6= 17,666 x 103 cfu/gram

VII.

Pembahasan

Cawan petri Jumlah koloni

Cawan 1 ( 10-2) >300

Cawan 2 ( 10-3) >300

Cawan 3 ( 10-4) -

Cawan 4 ( 10-5) 2

Cawan 5 ( 10-6) -

Dibuat pengenceran

selanjutnya hingga 10-6

atau sesuai dengan yang

diperlukan

Dari setiap pengenceran

dipipet 1 ml kedalam

cawan petri dan dibuat

duplo. Kedalam cawan

petri dituangkan 10-20

ml media AN

Untuk mengetahui

sterilisasi media dan

larutan pengenceran

dibuat blanko

Setelah media memedat,

cawan petri diinkubasi 370C

selama 24 jam dengan posisi

dibalik. Jumlah koloni yang

tumbuh diamati dan dihitung

Cawan petri

segera digoyang

dan diputar

sedemikian rupa

sehingga suspensi

tersebar merata


12/14

Prinsip pengujian Angka Lempeng Total menurut Metode Analisis Mikrobiologi (MA PPOM

61/MIK/06) yaitu pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil setelah cuplikan diinokulasikan

pada media lempeng agar dengan cara tuang dan diinkubasi pada suhu yang sesuai.

Adanya mikroba di dalam obat-obatan non steril tidak dikehendaki karena dapat

menyebabkan perubahan-perubahan dalam karakter organoleptis, perubahan atau

kemunduran, dan bahkan aktivitas di dalam obat yang bersangkutan. Selain itu mikroba yangtumbuh dapat berbahaya, baik yang patogen ataupun dari jenis yang tidak patogen, tetapi

bila jumlahnya sangat banyak dapat menimbulkan hal-hal yang merugikan. Penyakit-penyakit

yang dapat timbul karena adanya mikroba didalam obat-obatan non steril, dapat

mengakibatkan terjadinya infeksi dari bakteri patogen atau keracunan oleh bakteri

penghasil racun (Djide , 2003).

Pada pengujian mikrobiologi semua alat yang akan digunakan haruslah dalam keadaan

steril, aquades yang digunakan juga harus disterilisasi terlebih dahulu. Semua obatSampel

yang digunakan kali ini yaitu obat Loss Vit C IPI CPL.

Sampel yang akan diuji di buat pengenceran terlebih dahulu dengan aquades steril 1:10.

kemudian dibuat pengenceran bertingkat 10-2 - 10-6, guna untuk melihat pada pengenceran

keberapa bakteri tumbuh.

Pada pengujan ini, media yang diguanakan yaitu NA ( Nutrient Agar ) sebab medium ini

mengandung karbon dan nitrogen yang dapat digunakan oleh bakteri untuk melakukan

metabolisme, dan metode yang digunakan metode tuang dengan cara media NA di tuangkan

terlebih dahulu pada cawa petri kemudian sampel hasil pengenceran dituangkan dan

dihomogenkan, setelah memadat media siap untuk di inkubasi selama 24 jam pada suhu 37

dan dihitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh dengan menggunakan alat colony counter.

Berdasarkan hasil pengamatan diperoleh hasil hasil pengenceran pertama dan kedua

jumlah kolni yang tumbuh > dari 300 koloni, hal ini sangat terlihat jelas dengan kekeruhan

yang terbentuk. Pengenceran ketiga tidak terdapat koloni, dan terlihat bening sama halnya

dengan pengenceran kelima,namun pada pengenceran keempat didapat jumlah kolonisebanyak 2 koloni, jumlah bakteri sebanyak 2 koloni.

Semakin besar konsentrasi sempel semakin besar pula koloni yang tumbuh, dan

sebaliknya semakin kecil konsentrasi sampel maka semakin sedikit pula koloni bakteri yang

timbuh bahkan tidak tumbuh sama sekali. Dan berdasarkan jumlah koloni dari masing-masing

pengenceran maka nilai bakteriologis pada obat loss tersebut sebesar 17,666 x 103

cfu/gram. Berdasarkan Standar Nasional Indonesia ( SNI ) untuk produk obat tradisional

standar kontaminasi bakteri yang memenuhi syarat dibawah 10 bakteri koloni. Dalam hal ini

sediaan obat loss yang diuji tidak memenuhi standar SNI artinya jumlah bakteriologis yang

tumbuh pada sediaan tersebut diata standar yang tlah ditetapkan

VIII. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan dan pembahasan didapa simpulan bahwa:

Jumlah koloni dari masing-masing pengenceran maka nilai bakteriologis pada obat loss

tersebut sebesar 17,666 x 103 cfu/gram. Berdasarkan Standar Nasional Indonesia ( SNI )

untuk produk obat tradisional standar kontaminasi bakteri yang memenuhi syarat dibawah 10

bakteri koloni. Sehingga sediaan obat loss yang diuji tidak memenuhi standar SNI (jumlah

bakteriologis yang tumbuh pada sediaan tersebut diata standar yang tlah ditetapkan)

IX. Daftar Pustaka


13/14

Djide, Natsir. 2008.Analisis Mikrobiologi Farmasi, Makasar: Universitas Hasanuddin

Radji, Maksum,2011. Mikrobiologi panduan mahasiswa farmasi dankedokteran. Jakarta:

penerbit buku kedokteran EGC

X. Dokumentasi

Alat penghitung

kolonibakteri Colony

Counter

Alat penghitung

kolonibakteri Colony

Counter

Pengenceran sampel

obat loss

Penuangan media NA

pada cawan petri

Penuangan sampel, metode

tuang

Media yang sudah memadat

dibungkus

Siap diinkubasi

Cawan petri 1 Cawan petri 2


14/14

Cawan petri 3 Cawan petri 4

Cawan petri 5

laporan mikro koefisien fenol dan alt

Documents