laporan kadar protein rdc

8/10/2019 Laporan Kadar Protein RDC

1/25

LAPORAN PRAKTIKUM

PENENTUAN KADAR PROTEIN

NAMA : RESKY DWI CAHYATI

NIM : H311 12 015

KELOMPOK : II (DUA)

HARI/ TGL. PERC. : KAMIS/27 FEBRUARI 2014

ASISTEN : SARTIKA

LABORATORIUM BIOKIMIA

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR2014


2/25

BAB I

PENDAHULUAN

1.1Latar belakang

Protein merupakan zat yang berguna bagi kebutuhan manusia. Protein

memiliki fungsi yang sangat peting bagi kehidupan manusia yaitu untuk

membangun sel tubuh baru dan mengganti sel lama yang telah rusak. Pengukuran

kadar protein suatu bahan sangat diperlukan karena kandungan protein yang dimiliki

setiap bahan makanan berbeda-beda (Poedjiadi, 1994).

Protein ialah biopolimer yang terdiri atas banyak asam amino yang

berhubungan satu dengan lainnya lewat ikatan amida (peptida). Protein memainkan

beberapa peran dalam sistem biologis. Beberapa protein merupakan komponen

utama dari jaringan struktur (otot, kulit, kuku, rambut). Protein lain mengangkut

molekul dari satu bagian ke bagian lain dalam makhluk hidup. Masih ada lagi yang

bertindak sebagai katalis dalam banyak rekasi biologis yang diperlukan untuk

mempertahankan hidup (Day dan Underwood, 2002).

Kadar protein yang terkandung dalam setiap bahan berbeda-beda. Karena itu,

pengukuran kadar protein suatu bahan sangat diperlukan. Untuk dapat menghitng

kadar protein, maka diperlukan spektrofotometer dengan cara penembakan sampel.

Untuk itulah maka pada praktikum kali ini dilakukan percobaan untuk menentukan

kadar protein dari berbagai sampel (Day dan Underwood, 2002).

Untuk berbagai keperluan, kadar suatu protein dapat ditentukan. Penentuan

kadar dalam bahan makanan pada umumnya dilakukan berdasarkan penerapan

empiris atau secara tidak langsung, karena pembentukan kadar protein secara absolut

sukar dilakukan sehingga metode tersebut hanya dilakukan untuk keperluan yang


3/25

mendasar saja. Penentuan kadar protein dapat dilakukan dengan berbagai metode

bergantung pada jenis sampel dan ketersediaan alat serta bahan (pereaksi). Metode

yang paling umum digunakan adalah metode Kjeldahl, Lowry dan Biuret.

Berdasarkan teori di atas, maka dilakukanlah percobaan kali ini, yakni

penentuan kadar protein dengan menggunakan metode Lowry.

1.2 Maksud dan Tujuan Percobaan

1.2.1 Maksud Percobaan

Maksud dari percobaan ini adalah untuk memahami dan mempelajari cara

penentuan kadar protein dalam suatu sampel dengan menggunakan metode Lowry.

1.2.2 Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk menentukan kadar protein dalam

suatu sampel dengan metode Lowry menggunakan spektrofotometer.

1.3 Prinsip Percobaan

Prinsip dari percobaan ini adalah menentukan kadar protein dalam beberapa

sampel cair yang telah dibuat terlebih dahulu dengan menggunakan metode Lowry

dimana pada sampel tersebut akan ditambahkan Lowry A dan Lowry B kemudian

diukur absorbansinya pada panjang gelombang maksimum menggunakan

spektrofotometer UV-VIS.


4/25

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Protein merupakan suatu zat makanan yang sangat penting bagi tubuh karena

zat ini berfungsi sebagai sumber energi dalam tubuh serta sebagai zat pembangun

dan pengatur. Protein adalah polimer dari asam amino yang dihubungkan dengan

ikatan peptida. Molekul protein mengandung unsur-unsur C, H, O, N, P, S, dan

terkadang mengandung unsur logam seperti besi dan tembaga (Katili, 2009).

Protein merupakan senyawa organik pembangunan dasar makhluk hidup.

Oleh karena itu, protein memiliki daya tarik bagi para biokimiawan. Protein

merupakan konstituen utama dari kulit jaringan syaraf, tendon, otot rambut dan

darah, serta protein eksis dalam semua sel yang hidup (Stevens, 2001).

H2N CH

R

C

O

NH CH COOH

R'

Gambar 1. Struktur umum protein dengan 2 asam amino

Protein adalah biopolimer yang terdiri atas banyak asam amino yang

berhubungan satu dengan lainnya melalui ikatan amida (peptida). Protein

memainkan berbagai peranan dalam sistim biologis. Beberapa protein merupakan

komponen utama dari jaringan struktur (otot, kulit, kuku, rambut). Protein lain

mengangkut molekul dari satu bagian ke bagian lain dalam makhluk hidup, juga ada

yang bertindak sebagai katalis dalam banyak reaksi biologis yang diperlukan untuk

mempertahankan hidup (Hart dkk., 2003).

Protein mempunyai peranan kunci dalam proses biologis dalam semua tingkat

organisme, baik organisme tingkat rendah sampai dengan organisme tingkat tinggi.


5/25

Peran biologis tersebut mempunyai cakupan yang sangat luas, antara lain seperti

transport dan penyimpanan, pengaturan dan koordinasi gerak, penunjang mekanik,

proteksi terhadap imun, rangsangan, intergrasi metabolisme, kontrol pertumbuhan

dan diferensiasi. Antibodi merupakan protein yang sangat spesifik dan dapat

mengenal serta berkombinasi dengan benda asing seperti virus, bakteri dan sel yang

berasal dari organisme lain, membangkitkan dan menghantar imfuls saraf

(Katili, 2009).

Molekul protein sendiri merupakan rantai panjang yang tersusun oleh

matarantai asam-asam amino. Asam amino adalah senyawa yang memiliki satu atau

lebih gugus karboksil (-COOH) dan satu atau lebih gugus amino (-NH2) yang salah

satunya terletak pada atom C tepat sebelah gugus karboksil (atau atom C alpha).

Asam-asam amino yang berbeda-beda (ada 20 jenis asam amino dalam protein

alamiah) bersambung melalui ikatan peptida yaitu ikatan antara gugus karboksil

suatu asam amino dengan gugus amino dari asam amino yang di sampingnya

(Sudarmadji, 1989).

Biosintesis protein alami sama dengan ekspresi genetik. Kode genetik yang

dibawa DNA ditranskripsi menjadi RNA, yang berperan sebagai cetakan bagi

translasi yang dilakukan ribosom. Sampai tahap ini, protein masih mentah, hanya

tersusun dari asam amino proteinogenik. Melalui mekanisme pascatranslasi,

terbentuklah protein yang memiliki fungsi penuh secara biologi (Stevens, 2001).

Ada empat struktur dasar dari protein, yaitu struktur primer, sekunder, tersier

dan kuarterner. Struktur primer menunjukkan jumlah jenis dan urutan sama amino

dalam molekul protein. Oleh karena ikatan antar asam amino ialah ikatan peptida

maka struktur primer protein juga menunjukkan ikatan peptida yang urutannya

diketahui. Untuk mengetahui jumlah, jenis dan urutan asam amino dalam protein


6/25

dilakukan analisis yang terdiri dari beberapa tahap yaitu (Poedjiadi, 1994):

1. Penentuan jumlah rantai polipeptida yang berdiri sendiri

2.

Pemecahan ikatan antara rantai polipeptida

3. Pemecahan masing-masing rantai polipeptida

4. Analisis urutan asam amino pada rantai polipeptida.

Ditinjau dari strukturnya, protein dapat dibagi dalam dua golongan besar

yaitu golongan protein sederhana dan protein gabungan. Yang dimaksud dengan

protein sederhana adalah protein yang hanya terdiri atas molekul-molekul asam

amino, sedangkan protein gabungan adalah protein yang terdiri atas protein dan

gugus bukan protein. Gugus ini disebut gugus prostetik dan terdiri atas karbohidrat,

lipid atau asam nukleat. Protein sederhana dapat dibagi dalam dua bagian menurut

bentuk molekulnya yaitu protein fiber dan protein globular. Protein fiber

mempunyai bentuk molekul panjang seperti serat atau serabut sedangkan protein

globularberbentuk bulat (Poedjiadi, 1994).

Penentuan kadar protein dapat dilakukan dengan berbagai metode,

bergantung pada jenis sampel dan ketersediaan alat serta bahan (pereaksi). Metode

yang umum digunakan adalah metode Kjedahl, Lowry dan Biuret. Penentuan kadar

protein dengan metode biuret didasarkan atas pengukuran absorban dari senyawa

kompleks antara protein dengan pereaksi biuret yang berwarna ungu. Hal ini terjadi

apabila protein bereaksi dengan tembaga (salah satu komponen dari biuret) dalam

suasana basa. Prinsip kerja metode Lowry adalah reduksi Cu2+dari CuSO4(Reagen

Lowry B) menjadi Cu+ oleh tirosin, triptofan dan sistein yang terdapat dalam

protein. Ion Cu+bersama dengan fosfomolibdat dan fosfotungstat yang terkandung

dalam reagen Folin membentuk warna biru yang dapat ditera oleh spektrofotometer

(Septiani dkk., 2004).


7/25

Beberapa metode yang sering digunakan antara lain (Sudarmadji, 1996):

1. Metode Spektrofotometer UV

Kebanyakan protein mengabsorbsi sinar ultraviolet maksimum pada 280 nm.

Hal ini terutama untuk mengidentifikasi adanya asam amino tirosin, triptofan,

dan fenilalanin yang ada pada protein tersebut. Pengukuran protein berdasarkan

absorbsi sinar UV adalah cepat, mudah dan tidak merusak bahan. Untuk

keperluan perhitungan digunakan pula kurva standar.

2. Metode Turbidimetri atau Kekeruhan

Metode ini didasarkan pada kekeruhan yang terbentuk pada larutan yang

mengandung protein apabila ditambahkan bahan pengendap protein misalnya

Tri Chloro Acetic Acid (TCA), kalium ferri sianida [K4Fe(CN)6] atau asam

sulfosalisilat.

3. Metode Pengecatan

Beberapa bahan pewarna misalnya Orange G. Orange 12 dan Amido Black

dapat membentuk senyawaan berwarna dengan protein dan menjadi tidak larut.

Dengan mengukur sisa bahan pewarna yang tidak bereaksi dalam larutan

(dengan kolorimeter), maka jumlah protein dapat ditentukan dengan cepat.

Metode Spektrofotokopi dengan untraviolet yang yang diserap bukan cahaya

tampak cahaya ultra ungu (Ultraviolet). Dalam Spektrofotokopi ultra ungu energi

cahaya tampak terserap digunakan untuk transfuse electron. Karena energi Cahaya

Ultraviolet dapat menyebabkan transfuse elektron (Hendayana, 1994).

Spektrofotometri menyiratkan pengukuran jauhnya pengabsorpsian energi

cahaya oleh suatu system kimia itu sebagai fungsi dari panjang gelombang radiasi.

Spektrofotometer iltraviolet-cahaya tampak (UV-VIS) adalah salah satu jenis

spektrofotometri. Semua molekul yang dapat mengabsorpsi radiasi dalam daerah


8/25

UV-tampak karena mereka mengandung elektron, baik berpasangan maupun tidak

berpasangan, yang dapat dieksitasikan ketingkat energi yang lebih tinggi. Panjang

gelombang dimana absorpsi itu terjadi, bergantung pada berapa kuat elektron itu

terikat dalam molekul itu. Electron dalam suatu ikatan kovalen tunggal terikat

dengan kuat dan doperlikan radiasi berenergi tinggi atau panjang gelombang pendek

untuk eksitasinya (Day dan Underwood, 2002).


9/25

BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

3.1 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah larutan induk

(BSA 1 mg/mL), Lowry B (Na2CO3 2 % dalam NaOH 0,1 N, larutan

Na-K Tartrat 2 % dan larutan CuSO4.5H2O), Lowry A (larutan Follin Clocalteus dan

akuades), larutan standar (0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,12) M, larutan sampel,

blanko, akuades, tissue rolldan kertas label.

3.2 Alat

Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah rak tabung, tabung

reaksi, gelas kimia 100 mL, gelas kimia 400 mL, pipet skala 0,2 mL, pipet skala

1 mL, pipet skala 5 mL, filler pipet, corong, labu semprot, neraca analitik, sendok

tanduk, batang pengaduk, labu takar 25 mL, pipet tetes, spektrofotometer 20 D+ dan

bulb.

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1 Pembuatan Larutan Induk

Dalam percobaan ini tidak ada pembuatan larutan induk, karena larutan

induk BSA telah tersedia di laboratorium.

3.3.2Pembuatan Larutan Standar

Larutan standar dibuat dengan cara melakukan pengenceran terhadap larutan

induk BSA. Terlebih dahulu dihitung banyaknya volume yang ingin dipipet dan

volume yang ingin ditambahkan yang telah diketahui konsentrasinya dan volume


10/25

totalnya. Setelah diketahui disediakan 6 buah tabung reaksi yang bersih dan kering.

Kemudian dengan menggunakan pipet skala 0,2 mL, larutan induk dipipet sesuai

dengan volume yang telah dihitung masing-masing dengan konsentrasinya. Lalu

ditambahkan akuades dengan volume yang telah dihitung seperti pada tabel di

berikut ini:

Tabel 1. Pembuatan larutan standar

Konsentrasi (M)Volume larutan

induk (mL)

Volume aquades

(mL)

Volume Total

(mL)

0,02 0,04 1,96 2,00

0,04 0,08 1,92 2,00

0,06 0,12 1,88 2,00

0,08 0,16 1,84 2,00

0,10 0,20 1,80 2,00

0,12 0,24 1,76 2,00

3.3.3Pembuatan Reagen Lowry

Pada pembuatan pereaksi Lowry A yaitu dengan pencampuran antara follin

dengan akuades dengan perbandingan 1 : 1, digunakan follin sebanyak 2 mL dan

akuades 2 mL. Kemudian dengan menggunakan pipet skala 5 mL, follin dan

akuades dipipet lalu dimasukkan ke dalam gelas kimia 10 mL. Lalu larutan

dihomogenkan.

Pembuatan Lowry B dilakukan dengan mencampurkan Na2CO3 dalam NaOH

0,1 N, larutan CuSO4.5H2O 1 %, dan larutan Na-K-Tartrat 2 % dengan

perbandingan 100 : 1 : 1. Diambil larutan Na2CO3 dalam NaOH 0,1 N sebanyak

25 mL, ditambahkan dengan 0,25 mL larutan CuSO4.5H2O 1 % dan ditambahkan

lagi dengan 0,25 mL Na-K-Tartrat 2 %, lalu dihomogenkan.


11/25

3.3.4 Preparasi Sampel

Larutan sampel dilakukan dengan pengenceran 100 kali, yaitu dengan

memipet sampel sebanyak 0,02 mL, lalu diencerken dengan cara ditambahkan

akuades sebanyak 1,98 mL sehingga volume total menjadi 2 mL. Kemudian

dihomogenkan.

3.3.5 Penentuan Kadar Protein

Disediakan 6 buah tabung reaksi yang telah berisi 2 mL larutan standar pada

konsentrasi berturut-turut 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0 dan 1,2 mg/mL, 1 buah tabung reaksi

yang diisi blanko sebanyak 2 mL dan 1 buah tabung reaksi yang diisi 2 mL larutan

sampel, masing-masing ditambah dengan 2,75 mL reagen Lowry B, kemudian

dikocok dan didiamkan selama 15 menit. Setelah itu ditambah lagi dengan 0,25 mL

larutan Lowry A, dikocok dan didiamkan pada suhu kamar selama 30 menit. Lalu

diukur absorbansinya dengan spektrofotometer 20D+ pada panjang gelombang

maksimum tertentu (ditentukan terlebih dahulu).


12/25

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Pengamatan

Pada percobaan ini digunakan spektrofotometer untuk menentukan kadar

protein yaitu dengan cara mengukur absorbansinya. Sebelum mengukur absorban

dari masing-masing larutan, terlebih dahulu dilakukan pengukuran panjang

gelombang maksimum. Konsentrasi yang digunakan untuk menentukan panjang

gelombang maksimum adalah 0,06 M. Data panjang gelombang dapat dilihat pada

tabel di bawah ini :

Tabel 2.Data Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

(nm) Absorban

610 0.044

620 0.057

630 0.055

Grafik 1. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

600 610 620 630 640

Absorbansi

Panjang Gelombang


13/25

Setelah didapatkan panjang gelombang maksimum, dengan menggunakan

panjang gelombang ini kita dapat menentukan kadar protein pada masing-masing

konsentrasi dengan menggunakan spektrofotometer. Sehingga didapatkan data di

bawah ini.

Tabel 2.Data Hasil Pengamatan Penentuan Kadar Protein

Konsentrasi Absorban

0,02 -0.009

0,04 0,009

0,06 0,057

0,08 0,065

0,10 0,097

0,12 0,073

Sampel 0,041

Blanko 0

Grafik 2. Hasil Pengamatan Penentuan Kadar Protein

y = 0.9743x - 0.0195

R = 0.814

-0.02

0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14

absorbansi

Konsentrasi


14/25

NH2 CH

R

C

O

O

NH2CH

R

C

O

ONHCH

R

C

O

HO

NH CH

R

C

O

OH

Cu2+

NH2 CH

R

C

O

NH CH

R

C

O

NH CH

R

C

O

ONa + CuSO4

NH2 CH

R

C

O

NH CH

R

C

O

NH CH

R

C

O

OH + NaOH

Berdasarkan grafik di atas, diperoleh persamaan y = 0,974x - 0,019.

Data absorbansi yang diperoleh disubstitusikan ke dalam persamaan standar

y = 0,974x - 0,019. Dimana y adalah absorbansi dan x adalah kadar protein.

Diketahui : y = 0,041

0,041 = 0,974x - 0,019

0,974x = 0,06

x =

x = 0,062 mg/mL

Selanjutnya dikalikan dengan faktor pengenceran sehingga didapatkan :

Kadar protein = 0,062 mg/mL x 100

= 100,06 mg/mL

Jadi, kadar protein dalam sampel adalah 100,06 mg/mL.

4.2 Reaksi

Adapun reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:


15/25

H2N CHC

CH2

OH

O

OH

H3PO4(MoO3)13 + + H2OH2N CHC

CH

OH

O

O

+ atau

H2(PMo13O40)

H3(PMo13O40)

4.3 Pembahasan

Pada percobaan ini ditentukan kadar protein dalam suatu sampel dengan

menggunakan metode Lowry. Penentuan kadar protein ini didasarkan pada reaksi

protein dengan asam fosfotungstat-fosfomolibdat pada suasana alkalis akan

memberikan warna biru yang mana intensitas dari warnanya bergantung pada

konsentrasi dari protein tersebut. Berdasarkan hal inilah sehingga kita dapat

mengukur absorbannya dengan menggunakan spektrofotometer.

Prinsip metode Lowry adalah reaksi antara Cu2+dengan ikatan peptida dan

reduksi asam fosfomolibdat dan asam fosfotungstat oleh tirosin dan triptofan akan

menghasilkan warna biru. Warna yang terbentuk terutama dari hasil fosfomolibdat

dan fosfotungstat. Oleh karena itu warna yang terbentuk tergantung dari tirosin dan

triptofan yang terdapat dalam protein.

Larutan Lowry yang digunakan pada percobaan ini ada dua macam yaitu

Lowry A dan Lowry B. Asam fosfotungstat dan fosfomolibdat dari larutan Lowry A

berfungsi memberikan warna pada larutan yaitu warna biru, dimana intensitas

warnanya bergantung pada konsentrasi dari protein itu sendiri. Sedangkan pada

pembuatan pereaksi Lowry B, bahan-bahan dalam pereaksi Lowry ini memiliki

fungsi yang berbeda-beda. CuSO4 berfungsi untuk mereduksi fosfomolibdat dan

fosfotungstat, Na-K-Tartrat berfungsi untuk mencegah terjadinya pengendapan

kupro oksida dalam pereaksi Lowry B, sedangkan Na2CO3digunakan sebagai garam


16/25

yang mengkoordinasikan reaksi dalam suasana basa bersama dengan NaOH.

Pereaksi Lowry B diteteskan pada larutan sampel, larutan sampel dan blanko

kemudian dikocok perlahan agar bercampur dengan baik dan didiamkan selama 10

menit agar reaksi berlangsung sempurna. Setelah itu ditambahkan pereaksi Lowry

A, dihomogenkan lalu didiamkan selama 20 menit pada suhu kamar. Hal ini

dilakukan agar reaksi berlangsung sempurna. Reagen Lowry B ditambahkan terlebih

dahulu agar larutan CuSO4dapat mereduksi asam fosfotungstat dan fosfomolibdat

yang terdapat pada Lowry A. Asam fosfotungstat dan fosfomolibdat inilah yang

memberikan warna biru pada larutan ini. Setelah itu diukur absorbansinya

menggunakan spektrofotometer.

Pada percobaan ini dilakukan pengenceran 100 kali agar larutan tidak pekat

sehingga absorbannya dapat diukur pada spektrofotometer karena konsentrasi

larutan dan tebal media dapat mempengaruhi pengukuran absorbansi.

Dari percobaan yang telah dilakukan didapatkan persamaan standar

y = 0,974x - 0,019. Dari persamaan tersebut dapat diketahui kadar protein dalam

sampel, yaitu sebesar x = 0,0616 mg/mL, kemudian nilai tersebut dikalikan dengan

faktor pengenceran yang digunakan yaitu 100, sehingga didapatkan kadar protein

dalam sampel adalah 100,061 mg/mL.


17/25

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil percobaan yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa

dengan menggunakan metode Lowry diperoleh kadar protein dalam sampel adalah

100,06 mg/mL.

5.2 Saran

5.2.1 Saran Untuk Percobaan

Sebaiknya menggunakan metode yang tidak memerlukan waktu yang lama.

5.2.1 Saran Untuk Laboratorium

Sebaiknya alat laboratorium diperbanyak, terutama bulp. Agar tidak ada

hambatan dalam percobaan serta waktu yang digunakan lebih efisien.

5.2.2 Saran Untuk Asisten

Sebaiknya menjelaskan prosedur percobaan secara menyeluruh dan jelas

sebelum dilakukan percobaan, agar praktikan tidak bingung.


18/25

DAFTAR PUSTAKA

Day, R.A., dan Underwood, A.L., 2002, Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam,diterjemahkan oleh Iis Sopyan, Erlangga, Jakarta.

Hart, H., Craine, L.E., dan Hart, J.D., 2003, Kimia Organik Edisi Kesebelas,

diterjemahkan oleh Suminar Setiati Achmadi, Erlangga, Jakarta.

Hendayana, 1994, Kimia Analitik Instrumen Edisi I, IKIP Semarang Press.

Semarang.

Katili, A.S., 2009, Struktur dan Fungsi Protein Kalogen, Jurnal Pelangi Ilmu,

2(5) : 197-1000.

Poedjadi, A., 1994,Dasar-dasar Biokimia, UI-Press, Jakarta.

Septiani, Y., Tjahjadi, P., dan Artini, P., 2004, Kadar Karbohidrat, Lemak, dan

Protein pada Kecap dari Tempe,Bioteknologi, 1 (2) : 48-53,

Stevens, M.P., 2001, Kimia Polimer, Pradnya Paramita, Jakarta.

Sudarmadji, S., 1989, Analisa Bahan Makanan dan Pertanian, Liberty Yogyakarta,

Yogyakarta.

Tim Penyusun, 2014, Penuntun Praktikum Biokimia, Laboratorium Biokimia

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Hasanuddin,

Makassar.


19/25

LEMBAR PENGESAHAN

Makassar, 4 Maret 2014

ASISTEN PRAKTIKAN

SARTIKA RESKY DWI CAHYATI


20/25

Lampiran I

Bagan Kerja

1.

Pembuatan Larutan Induk BSA 1 mg/mL

2. Pembuatan Larutan Standar

a. Larutan Standar 0,02 mg/mL

Dipipet sebanyak 0,04 mL ke dalam tabung reaksi

Ditambahkan akuades sebanyak 1,96 mL

Dihomogenkan

Diberi label

b. Larutan Standar 0,04 mg/mL



Dihomogenkan

Diberi label

10 mg BSA

-

Dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL

-Dilarutkan dengan akuades hingga tanda garis

-Dihomogenkan

Hasil

Larutan BSA 1 m /mL

Hasil

Larutan BSA 1 mg/mL

Hasil


21/25

c. Larutan Standar 0,06 mg/mL



Dihomogenkan

Diberi label

d.

Larutan Standar 0,08 mg/mL



Dihomogenkan

Diberi label

e. Larutan Standar 0,10 mg/mL



Dihomogenkan

Diberi label

Larutan BSA 1 mg/mL

Hasil

Larutan BSA 1 mg/mL

Hasil

Larutan BSA 1 m /mL

Hasil


22/25

f. Larutan Standar 0,12 mg/mL



Dihomogenkan

Diberi label

3.

Pembuatan Reagen Lowry

a. Pembuatan Reagen Lowry A

Ditambahkan akuades sebanyak 2 mL

Dihomogenkan

b. Pembuatan Reagen Lowry B

Ditambahkan 2,5 mL CuSO4

Ditambahkan 2,5 mL K-Na-Tartrat

Dihomogenkan

Larutan BSA 1 mg/mL

Hasil

2 mL follin

Hasil

Hasil

25 mL Na2CO3dalam NaOH


23/25

4. Preparasi Sampel

Dipipet 0,02 mL ke dalam tabung reaksi

Dilarutkan dengan akuades hingga 2 mL

Dihomogenkan

5.

Preparasi Kadar Protein

Dimasukkan ke dalam masing-masing tabung reaksi

Ditambahkan dengan 2,75 mL larutan Lowry B

Didiamkan selama 15 menit

Ditambahkan dengan 0,25 mL larutan Lowry A

Didiamkan selama 30 menit

Diukur absorbannya dengan menggunakan

spektrofotometer 20 D+

Larutan Sampel

Hasil

2 mL blanko 2 mL larutan standar 2 mL larutan sampel

Data


24/25

Lampiran II

Perhitungan

1.

Perhitungan Larutan Standar

Pembuatan larutan standar ini didasarkan pada rumus:

V1 M1= V2 M2

a. Untuk konsentrasi 0,02 mg/mL

b.Untuk konsentrasi 0,04 mg/mL

c. Untuk konsentrasi 0,06 mg/mL

d.Untuk konsentrasi 0,08 mg/mL


25/25

e. Untuk konsentrasi 0,1 mg/mL

f. Untuk konsentrasi 0,12 ppm

2. Perhitungan Kadar Protein Dalam Sampel

Slope = a = 0,974

Intercept = b = -0,019

Dari grafik, didapatkan persamaan y = 0,974x0,019, dimana y = 0,041

0,041 = 0,974x0,019

0,06 = 0,974x

x = 0,062

maka konsentrasi kadar protein = x . FP

= 0,062

x 100

= 100,06

mg/mL

laporan kadar protein rdc

Documents