adln - perpustakaan...

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang Penelitian

Perkembangan populasi kuda di Indonesia belum mencapai keadaan yang

menggembirakan bahkan Di Jawa Timur pada tahun 2001 terjadi penurunan

populasi ternak kuda sebesar 5,66 % (Anonimous, 2001). Kendala yang sering

dihadapi peternak kuda adalah menyangkut bidang reproduksi, seperti panjangnya

calving interval dan rendahnya tingkat kebuntingan sehingga upaya untuk

mencapai tingkat reproduktivitas yang tinggi sulit dicapai. Upaya yang dilakukan

agar target reproduktivitas yang tinggi dapat tercapai adalah dengan melakukan

perbaikan pengelolaan reproduksi yang rneliputi deteksi birahi, perkawinan yang

tepat dan diagnosa kebuntingan yang tepat. Diagnosa kebuntingan dini diperlukan

setelah terjadinya perkawinan untuk identifikasi lebih awal sehingga kehilangan

waktu produksi sebagai akibat infertilitas dapat dikurangi.

Diagnosa kebuntingan dapat dilakukan dengan berbagai cara. Pada kuda

cara yang paling praktis dan dapat diandalkan adalah diagnosa melalui palpasi

rektal, selain itu dapat juga dilakukan secara uji biologis (Toelihere, 1985; Hunter,

1995), uji imunologis atau secara ultrasonografi (USG).

Pemeriksaan kebuntingan pada kuda dengan cara palpasi rektal beresiko

tinggi terhadap keselamatan si pemeriksa. Uji biologis untuk deteksi kebuntingan

pada kuda seperti Ascheim Zondek atau Cuboni pelaksanaannya kurang praktis

dan mernbutuhkan waktu yang relatif lama. Demikian pula uji imunologis seperti

pemeriksaan substansi spesifik atau uji lainnya dengan memeriksa substansi non

spesifik (estrogen atau progesteron) dengan cara radioimmunoassay (RIA) atau

enzyme linked immunosorbentassay (ELIS A) masih bersi fat laborator is dan be1 um

dapat dilaksanakan secara cepat di lapangan karena beberapa faktor seperti

sulitnya pelaksanaan, mahalnya harga kit dan sulitnya mendapatkan bahan-bahan

untuk keperluan RIA maupun ELlSA (Anonimous, 1984).

Berdasarkan ha1 tersebut diatas maka perlu diupayakan untuk

mendapatkan suatu cara deteksi kebuntingan pada kuda yang lebih praktis dan

dapat dengan mudah dilakukan di lapangan. Pada penelitian ini dilakukan deteksi

adanya hormon equine chorionic gonadotrpin (eCG) pada serum yang secara

teoritis terdapat didalarn semum darah kuda pada kebuntingan umur 40 s.d 150

hari.

1.2. Su byek Penelitian

Subyek penelitian ini adalah eCG serum darah kuda bunting 7 - 19

minggu dan anti eCG yang diperoleh serum darah kelinci yang mendapat suntikan

berulang dengan eCG serum darah kuda bunting 7 - 19 minggu. Titer anti eCG

yang ada dalam serum darah diukur dengan menggunakan ELISA indirect.

Penelitian ini meliputi aspek :

lsolasi dan identifikasi eCG serum darah kuda bunting 7 s/d 19

minggu dengan menggunakan SDS-PAGE dan Elusi

Pembuatan poliklonal anti eCG

Pembuatan kit diagnostik kebuntingan dini eCG Microtitre Strip

1.3. Lokasi Penelitian

Peternakan Kuda di Surabaya

Laboratorium Fertilisasi in Vitro Fakultas Kedokteran Hewan Unair

Laboratoroium Biologi Molekular Fakultas Kedokteran Hewan Unair

1.4. Hasil Yang Diharapkan

Produksi eCG dari serum darah kuda bunting 7-19 minggu

Produksi antibodi poliklonal anti- eCG

Produksi kit diagnostik kebuntingan dini dengan eCG

Microtitre Strip

1.5.Rumusan Masalah

Apakah Equine Chorionic Gonadotropin dapat dideteksi pada umur

kebuntingan kuda 7-1 9 minggu ?

Apakah Equine Chorionic Gonadotropin microtitre strip dapat digunakan

untuk deteksi kebuntingan dini pada kuda ?

1.6. Hipotesis

Equine Chorionic Gonadotropin dapat dideteksi pada umur kebuntingan

kuda 7-1 9 minggu.

Equine Chorionic Gonadotropirr microtitre strip dapat digunakan untuk

deteksi kebuntingan dini pada kuda.

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

BAB 111

TLNJAUAN PUSTAKA

3.1. Siklus Reproduksi

Siklus reproduksi adalah suatu rangkaian kejadian biologis hewan betina

yang telah mencapai dewasa kelamin sejak hewan tersebut melahirkan sarnpai

melahirkan kembali. Sedangkan siklus birahi adalah perubahan-perubahan

fisiologis sistem reproduksi hewan betina secara teratur yang dikendalikan oleh

kerja hormon hipofisa dan ovarium. Periode birahi merupakan perubahan

terpenting di dalam siklus birahi, yaitu pada saat hewan betina bersedia

dikawini oleh hewan jantan dan segera sesudah itu terjadi pelepasan telur dari

indung telur. Sepanjang siklus birahi beberapa bagian dari saluran reproduksi

betina mengalami perubahan-perubahan yang dikendalikan oleh hormon

hipofisa dan hormon-honnon yang berasal dari ovarium. Selain hormon sebagai

penyebab diawalinya periode perkawinan, hormon juga mempersiapkan alat

reproduksi untuk menerima spermatozoa, menghasilkan ova dan membantu

terjadinya kebuntingan, implantasi dan pemberian makanan pada embrio serta

fetus (Patodiharrdjo, 1992).

3.1.1. Pubertas

Bila ternak jantan atau betina telah mampu memproduksi benih untuk yang

pertarna kalinya dan mampu berkopulasi, maka temak mulai memasuki masa

pubertas atau dewasa kelamin yang mana pada periode ini proses-proses

reproduksi mulai terjadi- (Partodihardjo, 1992). Di Indonesia kuda mengalami

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di peternakan kuda di wilayah Surabaya,

penelitian dilakukan pada bulan Juni sampai dengan Nopember 2005.

4.2. Materi Penelitian

4.2.1. Bahan Penelitian

Bahan-bahan penelitian yang digunakan adalah serum darah kuda bunting,

methanol, PBS, running gel, butanol, whatman paper, stacking gel, e bufler, laimli

bufler, pewarna silver, BSA, pereaksi biuret, aquades, complete ji-eund adiuvant

(CFA), incomplete ji-eund a4uvant (IFA), membran nitrocellulose , konjugat

goat-anti-rabbit, enzim alkal in fosfatase, bufler blocking, buffer blocking, NaC I-

Triton, bufer coating, Substrat 4-NPP (Nitro Phenyl Phosphate), bufler substrat,

larutan stopper (NaOH) dan anti-eCG.

4.2.2. Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian adalah disposable ~yringe,

tabung reaksi, sentrifige, miliphore, vial, freezer, SDS PAGE, comb, kuvet

spektrofotometer, spektrofotometer Bausch-Lombs, mikroplat, ELISA reader,

4.3. Metode Penelitian

4.3.1. Pengambilan dan Pemisahan eCG Serum Darah Kuda Bunting

Sebanyak 5 ekor kuda bunting muda (2-5 bulan) digunakan dalam penelitian

ini. Darah diambil dari vena jugularis dengan menggunakan disposable syringe

50 ml, kemudian ditampung dalam tabung reaksi dan ditutup. Tabung

dimiringkan 45' dan didiamkan selama 24 jam pada suhu kamar. Kemudian

disentrihse dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Serum yang didapat

lalu disaring rnenggunakan miliphore 0,22 pm. Serum yang didapat ditampung

pada vial dan disimpan dalam freezer dengan suhu - 20 OC atau dimasukkan

dalam tabung reaksi dan ditambahkan methanol dengan perbandingan 1:5 clan

dikocok selama 3 menit kemudian didiamkan 15-20 menit sampai terdapat 2

lapisan cairan. Supernatan diambil dengan disposable syringe sebanyak 5 ml dan

dimasukkan dalam vial 113 ml untuk dibuat sediaan kering beku. Sebelum

digunakan untuk uji selanjutnya perlu ditambahkan PBS sebanyak 5 ml.

4.3.2. Preparasi eCG dengan SDSPAGE

Identifikasi eCG di dalam serum darah kuda bunting dilakukan dengan

metode SDS-PAGE, dimana eCG mempunyai BM antara 45 s/d 65 KD. Cara

kerja SDS-PAGE dapat dilihat pada Lampiran 6 - --

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi

ADLN - Perpustakaan Unair

Laporan Penelitian Produksi kit diagnostik equine chorionic ... Mas'ud Hariadi