3. isolasi mikroorganisme(1)

7/23/2019 3. Isolasi Mikroorganisme(1)

1/20

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikrobiologi ialah ilmu yang lebih ditentukan oleh teknik-teknik yang

digunakannya daripada oleh subjek yang ditelaahnya. Teknik-teknik ini banyak

jumlahnya dan digunakan bermacam-macam peralatan laboratorium untuk

menerapkannya.

Mikroorganisme dipelajari di laboratorium untuk banyak tujuan. Derajat

perincian untuk mempelajarinya itu bergantung kepada maksud pemeriksaan

laboratoris tersebut. Sebagai contoh, seorang ahli mikrobiologi mungkin hanya

mau menentukan tipe utama atau tipe-tipe jasad renik yang terdapat dalam suatu

spesimen katakanlah cendawan, bakteri atau keduanya. Atau mikrobiologiwan itu

boleh jadi harus mengidentifikasi setiap spesies dalam spesimen yang diambil dari

seorang pasien agar dapat menyediakan keterangan untuk membantu dalam

diagnosis suatu penyakit dalam kasus ini mikrobiologiwan itu harus memeriksa

ciri-ciri mikroorganismenya secara amat terperinci. Atau mengambil contoh yang

lain lagi, ahli mikrobiologi itu boleh jadi ingin memastikan dengan tepat

bagaimana proses hayati hakiki yang tertentu, misalnya sintesis suatu protein yang

dilaksanakan oleh suatu sel mikroba.

Tersedia teknik untuk menentukan ukuran, bentuk dan struktur sel indiidu,

juga bagaimana sel-sel itu dikelompokkan. Ada prosedur utnuk menumbuhkan

!membiakkan" mikroorganisme di laboratorium. #eberapa diantaranya

memerlukan keadaan yang sangat khusus, misalnya ketiadaan oksigen sama

sekali. #anyak kemajuan telah dicapai dalam peralatan untuk laboratorium


2/20

mikrobiologi sejak tahun $%&&-an. 'nstrumen masa kini misalnya dapat

mengidentifikasi secara amat terperinci komposisi kimiawi suatu sel mikroba,

demikian pula senyawa-senyawa kimia yang dihasilkan oleh suatu sel.

B. Tujuan

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut(

$. Mengetahui metode-metode dan teknik dari isolasi mikrobiologi.

). Memahami fungsi dari isolasi biakan murni.

*. Dapat membedakan jamur dan bakteri serta mengetahui karakteristiknya.

BAB II

2


3/20

TINJAUAN PUSTAKA

A. Isolasi Mikroorganisme

Mikroorganisme !bakteri, kapang dan khamir" terdapat dalam populasi yang

besar dan beragam di alam ini. Mikroorganisme juga dapat dijumpai pada setiap

bagian tubuh kita seperti di rambut, tangan, kaki, kulit dan lain-lain. Semua

sember tersebut merupakan sumber kontaminasi pada medium pertumbuhan

mikroorganisme. +ontaminasi adalah tumbuhnya mikroorganisme yang tidak kita

inginkan. +ontaminasi dapat dihindari apabila kita melakukan tindakan aseptis.

'solasi mikroba berarti memisahkan satu jenis mikroba dari biakkan

campuran menjadi biakan murni !populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel

indiidu" !im, $%%". rinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis

mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam

mikroba. /al ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat,

sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya. Tujuan

isolasi adalah mendapat biakan murni. #iakan murni merupakan biakan yang sel-

selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal. #iakan murni diperlukan dalam

berbagai metode mikrobiologis, antara lain digunakan dalam mengidentifikasi

mikroba.

B. Teknik Pengamilan Sam!el

Sebelum melakukan isolasi terlebih dahulu dilakukan pengambilan sampel.

#erikut merupakan prosedur pengambilan sampel.

3


4/20

$. Sampel tanah

Mikroorganisme yang diinginkan kemungkinan berada di dalam tanah,

maka cara pengambilannya disesuaikan dengan tujuan dan kebutuhan. Misal jika

yang diinginkan mikroorganisme rhi0osfer maka sampel diambil dari sekitar

perakaran dekat permukaan hingga ujung perakaran.

). Sampel air

engambilan sampel air bergntung kepada keadaan air itu sendiri. 1ika

berasal dari air sungai yang mengalir maka botol dicelupkan miring dengan bibir

botol melawan arus air. #ila pengambilan sampel dilakukan pada air yang tenang,

botol dapat dicelupkan dengan tali, jika ingin mengambil sampel dari air keran

maka sebelumnya keran dialirkan dulu beberapa saat dan mulut kran dibakar.

". Isolasi #engan "ara Pengen$eran %Dilution&

2ara ini dilakukan pertama kali oleh ister pada tahun $34. 'a berhasil

memelihara Streptococcus lactisdalam piraan murni yang diisolasi dari sampel

susu yang sudah masam. Suatu sampel dari suatu suspensi yang berupa campuran

bermacam- macam spesies diencerkan dalam suatu tabung tersendiri. Dari hasil

pengenceran ini kemudian di ambil kira- kira $ m untuk diencerkan lebih lanjut.

1ika dari pengenceran yang ketiga ini diambil &,$ m untuk disebarkan pada suatu

medium padat, kemungkinan besar akan didapatkan beberapa koloni yang akan

tumbuh dalam medium tersebut, akan tetapi ada juga kemungkinan hanya akan

memperoleh satu koloni saja. Dalam hal ini dapat kita jadikan piaraan murni. 1ika

kita belum yakin, #ahwa koloni tunggal yang kita peroleh tersebut merupakan

4


5/20

koloni yang murni, maka kita dapat mengulang pengenceran dengan

menggunakan koloni ini sebagai sampel.

'. Teknik Pre!arasi Sus!ensi

Sampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril.

Tujuan dari teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan

mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya.

Macam-macam preparasi bergantung kepada bentuk sampel.

a. 5las !swab"

Dilakukan menggunakan cotton bud steril pada sampel yang memiliki

permukaan luas dan pada umumnya sulit dipindahkan atau sesuatu pada benda

tersebut. 2ontohnya adalah meja, batu, batang kayu dll. 2aranya dengan

mengusapkan cotton bud memutar sehingga seluruh permukaan kapas dari cotton

bud kontak dengan permukaan sampel. Swab akan lebih baik jika cotton bud

dicelupkan terlebih dahulu ke dalam larutan atraktan semisalpepton water.

b. #ilas !rinse"

Ditujukan untuk melarutkan sel-sel mikroba yang menempel pada

permukaan substrat yang luas tapi relatif berukuran kecil, misalnya daun bunga

dll. 6inse merupakan prosedur kerja dengan mencelupkan sampel ke dalam

akuades dengan perbandingan $ ( % !w7". 2ontohnya sampel daun diambil dan

ditimbang 4 g kemudian dibilas dengan akuades 84 ml yang terdapat dalam

beaker glass.

5


6/20

c. engancuran !maseration"

Sampel yang berbentuk padat dapat ditumbuk dengan mortar dan pestle

sehingga mikroba yang ada dipermukaan atau di dalam dapat terlepas kemudian

dilarutkan ke dalam air. 2ontoh sampelnya antara lain bakso, biji, buah dll.

erbandingan antar berat sampel dengan pengenceran pertama adalah $ ( % !w7".

5ntuk sampel dari tanah tak perlu dimaserasi.

(. Teknik Pengen$eran Bertingkat

Tujuan dari pengenceran bertingkat yaitu memperkecil atau mengurangi

jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan. enentuan besarnya atau

banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba

dalam sampel. Digunakan perbandingan $ ( % untuk sampel dan pengenceran

pertama dan selanjutnya, sehingga pengenceran berikutnya mengandung $7$& sel

mikroorganisma dari pengenceran sebelumnya.

). Teknik Penanaman

a. Metode 9ores !streak plate methode"

Teknik ini menggoreskan inokolum pada medium padat dengan

menggunakan alat transfer !jarum tanam tajam atau ose". Metode ini dapat dibagi

menjadi * yaitu(

$" 9oresan sinambung

)" 9oresan T

*" 9oresan +uadran

6


7/20

b. Metode Tuang !pour plate methode"

Teknik ini memerlukan agar yang belum padat !:84&2" untuk dituang

bersama suspensi bakteri ke dalam cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan

dibiarkan memadat. /al ini akan menyebarkan sel-sel bakteri tidak hanya pada

permukaan agar saja melainkan sel terendam agar !di dalam agar" sehingga

terdapat sel yang tumbuh dipermukaan agar yang kaya ;)dan ada yang tumbuh di

dalam agar yang tidak banyak begitu banyak mengandung oksigen.

c. Metode Sebar !spread plate methode"

Spread plateadalah teknik menanam dengan menyebarkan suspensi bakteri

di permukaan agar diperoleh kultur murni. Misalnya menggunakan alat spatel

drugalsky.

D. Parameter Pengamatan Mor*ologi Koloni Bakteri

#eberapa hal yang harus diperhatikan dalam pengamatan morfologi bakteri

adalah(

'. #entuk koloni, diamati apakah berbentuk bulat sempurna, bulat lonjong

!oal", atau tidak beraturan.

(. 5kuran koloni, diukur diameter koloni dengan menggunakan jangka sorong.

). +romogenesis !pigmentasi", hasil metabolit sekunder dari bakteri yang

diekskresikan ke medium, warnanya beragam( putih, coklat, merah, ungu.

+.


8/20

3. ermukaan koloni( halus, kasar, bergelombang, glistening rough, dull

(opposite of glistening), rugose (whinkled).

=. +onsistensi, butyrous !buttery", viscid !lengket dan susah untuk

dilepaskan", brittle/friable !kering dan remah", mucoid !berlendir".

. 1ika koloni berbau, seperti apa

baunya>

8


9/20

BAB III

MET-D-L-I P/AKTIKUM

A. 0aktu #an Tem!at

raktikum isolasi mikrobiologi ini di lakukan di aboratorim Mikrobiologi-

?irologi 5niersitas Muhammadiyah rof. Dr. /amka @akultas @armasi dan

Sains di lantai dua. ada hari 1umat tanggal ) ;ktober )&$4 pukul $*.&$-$4.*&

'#.

B. Alat #an Ba1an

2awan petri steril

Tabung reaksi

ipet olume

?orteB

ampu bunsen

Medium agar tegak

2otton bud steril

Tanah steril

". Prose#ur Kerja

'. Isolasi Mikroorganisme #ari U#ara #an Lingkungan

a. 2airkan medium agar tegak dalam penangas air.

9


10/20

b. Dinginkan sampai suhu 4&&2, hal ini dapat diperkirakan dengan menyetuh

pada telapak tangan kita.

c. Tuang agar cair tersebut dalam cawan petri steril secara aseptis !buka cawan

petri secukupnya, panaskan dulu mulu tabung reaksi dan pinggir cawan

sebelum dibuka".

d. 6atakan agar dengan memutar cawan petri membentuk propil angka delapan

dan jangan tunggu sampai agar mengental.

e. Dinginkan, setelah padat inolulasi dengan sumber mikroorganisme yang kita

inginkan.

f. Dari lingkungan udara, buka tutup cawan petri selama 4 menit kemudian

tutup kembali. Dari nafas, buka tutup cawan petri secukupnya kemudian

hembuskan aliran udara ke dalamnya.

g. Dari lingkungan, ambil cotton bud secara aseptis, celupkan pada akuades

steril selama $ menit, gosokkan pada setiap sumber lingkungan !rambut,

kulit, tangan, kaki, meja, tas dan lain-lain" yang kita inginkan, kemudian

goreskan cotton bud tersebut di atas permukaan agar secara aseptis

!inkubasi )8-8 jam".

h. engamatan terhadap pertumbuhan mikroorganisme dilakukan dengan

melihat ada tidaknya koloni yang tumbuh di atas medium.

(. Isolasi Bakteri #ari Sam!el Tana1

a. Timbang tanah seberat $ gram.

10


11/20

b. Tanah seberat $ g dimasukan ke dalam akuades steril % ml !tabung

pengenceran $&-$" secara aseptis dan diorteB, lalu ambil $ ml larutan

masukan dalam % ml ACua dest steril !pengenceran $&-)" dan selanjutnya

dilakukan pengenceran bertingkat sampai $&-=.

c. Dari masing-masing * pengenceran terakhir !pengenceran $&-4, $&-3, $&-="

diambil &,$ ml untuk ditanam secaraspread platepada medium petri DA

dan A.

d. 'nkubasi pada suhu *=&2 selama )8-8 jam.

e. +oloni akan tumbuh pada ketiga cawan tersebut kemudian dipilih koloni

yang relatif terpisah dari koloni lain dan koloni yang mudah dikenali.

f. +oloni yang terpilih kemudian ditumbuhkan atau dimurnikan ke A dan

DA baru dengan teknikstreak methode.

g. 'nkubasi selama )8-8 jam pada suhu *=&2.

). Mor*ologi Koloni Bakteri

a. 9unakan kultur cawan yang mempunyai koloni tunggal yang terpisah dari

kelompoknya. ilih koloni terbesar !yang terlihat oleh mata telanjang" untuk

menentukan bentuk, kromogenesis dan bau koloni.

b. 9unakan mikroskop stereoskopik untuk melihat detailnya. etakkan cawan

di meja preparat dengan coer masih tertutup !untuk mencegah

kontaminasi". 9unakan perbesar yang paling baik untuk mengamati

eleansi, permukaan, kekeruhan, ukuran dan tepi koloni.

11


12/20

c. 5ntuk menentukan konsistensi koloni, diperlukan jarum inokulum atau

tusuk gigi steril untuk mengambil koloni dan diamati konsistensi koloni saat

jarum terangkat dari medium agar.

d. 5ntuk menentukan emulsifiability, koloni disuspensikan dalam air atau

larutan garam fisiologis dalam sebuah tabung reaksi. Diamati bagaimana

koloni tersebut bercampur dalam air atau garam fisiologis, apakah mudah

larut, menjadi emulsi, menjadi suspensi atau tidak sama sekali. Atau dapat

juga dengan cara( ambil koloni dengan jarum, celupkan ke dalam tabung

mengandung air atau garam fisiologis, kemudian sebarkan di permukaan

gelas. Amati apakah koloni akan menjadi suspensi atau menjadi massa

bakteri yang tidak larut dan akan mengapung di air.

12


13/20

BAB I2

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

'. Isolasi Mikroorganisme #ari U#ara #an Lingkungan

No. Sumer Bakteri Jamur Keterangan

$ ingkungan udara $ koloni jamur dan

* koloni bakteri

) afas manusia - - -

* ingkungan !rambut" - $$ koloni bakteri

(. Isolasi Bakteri #ari Sam!el Tana1

Sumer IsolatIntensitas

Pertumu1an

Jenis

MikroorganismeKeterangan

2awan $&-4 * B )8 jam bakteri )4& koloni bakteri

2awan $&-3 $ B )8 jam bakteri $ koloni bakteri

2awan $&-= $ B )8 jam bakteri $ koloni bakteri

). Mor*ologi Koloni Bakteri

No. Pengamatan Bakteri Jamur

$ #entuk koloni irregular filamentous

) igmentasi koloni putih jingga

*


14/20

4 ermukaan koloni bergelombang halus

B. Pema1asan

ada praktikum ini pengambilan mikroba didapat dari lingkungan udara,

nafas dan lingkungan rambut. Mikroba yang diisolasi dari sampel tanah dilakukan

pengenceran sampai $&-4, $&-3dan $&-=, didapatkan jumlah koloni secara berturut-

turut )4& koloni, $ koloni dan $ koloni bakteri. /al ini membuktikan semakin

encer7banyak pengenceran maka koloni bakteri yang terbentuk akan semakin

banyak.

Mikroba tersebut dibiakan di dalam cawan perti dan dilihat pertumbuhannya

setiap )8 jam sampai terdapat koloni bakteri, kapang dan khamir yang tumbuh.

Setelah ditemukan mikroba maka mikroba tersebut diisolasi dengan memindahkan

ke medium yang sesuai. Potato Detrose !gar!DA" dalam cawan petri untuk

media pertumbuhan 1amur dan "utrient !gar !A" dalam agar slant untuk

pertumbuhan bakteri. emindahan bakteri menggunakan jarum ose steril dan

pemindahan jamur menggunakan jarum tanam tajam.

engambilan mikroba cukup dengan menyentuhkan ose ke mikroba yang

akan dimurnikan dan celupkan ke dalam tabung reaksi yang sudah berisi $ ml air

aCuades. Sentuhan dilakukan pada koloni mikroba yang terlihat sejenis, biasanya

berbentuk lingkaran dan memiliki warna yang sama. Dan cara pengambilan

dilakukan dengan sentuhan karena untuk memperkecil kemungkinan mikroba yg

14


15/20

tidak sejenis terikut. Setelah cawan petri disimpan dalam inkubator dan dilakukan

inkubasi selama )8 jam pada suhu *=E 2.

/asil dari praktikum pemurnian mikroba didapatkan hasilnya murni, karena

didapatkan warna hasil dalam cawan petri yang memliki warna kuning jingga

keseluruhan, jadi dapat disimpulkan bahwa mikroba yang didapat murni sejenis

atau homogen. Dalam media agar slant juga didapatkan warna putih keseluruhan.

Morfologi koloni bakteri dan jamur yang didapat sesuai dengan parameter

pengamatan morfologi koloni mikroorganisme. Dari hasil praktikum, singkatnya

kelompok kami mendapatkan hasil sejenis karena dalam prosedur praktikum yang

teratur dan menjaga kesterilan. Dan intinya pemurnian mikroba dapat terwujud

apabila dalam prosedur yang teratur dan menjaga kesterilan. emurnian mikroba

adalah suatu cara atau mekanisme dimana dengan maksud untuk mendapatkan

mikroba yang dibutuhkan atau diinginkan.

15


16/20

BAB 2

KESIMPULAN

$. Teknik penanaman mikroorganisma dapat dilakukan dengan metode gores

!streak plate methode", metode tuang !pour plate methode" dan metode

sebar !spread plate methode".

). 'solasi bakteri dari sempel tanah didapatkan hasil semakin banyak tingkat

pengenceran maka bakteri yang dihasilkan akan semakin sedikit dan

sebaliknya.

*. engamatan morfologi bakteri didapatkan bentuk koloni irregular,

pigmentasi koloni putih, eleasi koloni flat, tepi koloni irregular undulate

dan permukaan koloni bergelombang. Sedangkan pengamatan morfologi

jamur didapatkan bentuk koloni filamentous, pigmentasi koloni jingga,

eleasi raised, tepi koloni filamentous dan permukaan koloni halus.

16


17/20

DA3TA/ PUSTAKA

im, D. $%%.#icrobiology. 2# Mc9raw-/ill. Missouri.

ahyudi, .,


18/20

LAMPI/AN

9ambar $. Metode engenceran #eringkat

18


19/20

9ambar ). Metode 9ores

9ambar *. Metode Sebar dan Tuang

9ambar 8. #eberapa tipe morfologi koloni bakteri berdasarkan bentuk, tepi, dan

eleasi koloni

19


20/20

9ambar 4. #eberapa hasil pengamatan praktikum isolasi bakteri dan jamur

20

3. isolasi mikroorganisme(1)

Documents